DE19828732A1

DE19828732A1 - Antiviral and anti-retroviral radio-immuno conjugates, for the treatment of viral infections

Info

Publication number: DE19828732A1
Application number: DE1998128732
Authority: DE
Inventors: Wolfgang Bergter; W H Knapp; Ingrid-Corina Bergter
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1998-03-08
Filing date: 1998-06-29
Publication date: 2000-01-05

Abstract

New composition (A) comprises a radio-immuno conjugate (RIC) to eliminate virus replicating cells caused by HIV-1, HIV-2, HIV-3, HTLV-1, HTLV-2, hepatitis B, C and D virus, cytomegalo virus, Epstein Barr virus, HHV8 and other chronic virus infections. (A) comprises a radio-immuno conjugate (RIC) to eliminate virus replicating cells caused by HIV-1, HIV-2, HIV-3, HTLV-1, HTLV-2, hepatitis B, C and D virus, cytomegalo virus, Epstein Barr virus, HHV8 and other chronic virus infections. The immunologically active component is: (i) monoclonal antibodies or their antigen-binding fragments specific for expressed viral or virus-induced antigen on the plasma membrane of virus infected cells; (ii) a receptor molecule or its fragment specific for an epitope of viral structure proteins expressed on the plasma membrane of virus infected cells, or (iii) a mutated receptor molecule fragment specific for an epitope of viral structure proteins expressed on the plasma membrane of virus infected cells, and (iv) a radioactive component comprising an alpha - or a beta -emitter, optionally with other help substances and/or carriers. Independent claims are also included for the following: (1) a composition comprising (A) and interferon- alpha , \- 1 anti-retroviral nucleoside analogues, e.g. ribavirin or zidovudine, and/or and/or unlabelled monoclonal antibodies, receptors or their fragments, and (2) a kit comprising at least 1 (A).

Description

field of use

Der vorliegende Zusatzantrag betrifft weitere Radioimmunkonjugate, die mit therapeu tischem Ziel in der Virologie eingesetzt werden sollen.This additional application concerns further radioimmunoconjugates with therapeu tical goal in virology.

State of the art

Die Behandlung der meisten viralen Infektionen - besonders der HIV-, HCV- und HBV- Infektionen - ist bis heute nicht befriedigend gelöst. Im Hauptantrag vom 07.03.1998 (Az Nr. 198 09 785.9-41), sowie in den Zusatzanträgen vom 15.04.1998 (Az Nr. 198 26 307.4) und 28.04.1998 (Az Nr. 198 18 843.9) wurde die Bedeutung dieser Infektio nen, der jeweilige Stand der Technik, d. h. die gängigen Therapien, sowie deren Grenzen und Probleme detailliert dargelegt. Den genannten Infektionen ist gemeinsam, daß sie chronisch verlaufen und mit einer hohen Morbidität und Mortalität verknüpft sind. Die Virusreplikation läßt sich inzwischen mit antiviralen bzw. antiretroviralen Pharmaka mehr oder weniger gut supprimieren. Eine Heilung wird derzeit aber bei der Hepatitis B und C nur in einem begrenzten Teil der Fälle erreicht und eine HIV-Infektion kann durch Hemmung der Virusreplikation allein vermutlich überhaupt nicht eliminiert werden.Treatment of most viral infections - especially HIV, HCV and HBV Infections - has not yet been satisfactorily resolved. In the main application dated March 7, 1998 (Az No. 198 09 785.9-41), as well as in the additional applications dated April 15, 1998 (Az No. 198 26 307.4) and 28.04.1998 (Az No. 198 18 843.9) became the meaning of this infection NEN, the respective prior art, d. H. the current therapies and their limits and detailed problems. The infections mentioned have in common that they are chronic and are associated with high morbidity and mortality. The Virus replication can now be done more with antiviral or antiretroviral drugs or less suppress. A cure is currently in hepatitis B and C. only achieved in a limited part of the cases and HIV infection can be caused by Inhibition of virus replication alone may not be eliminated at all.

Ziel einer effektiven antiviralen bzw. antiretroviralen Therapie muß daher die infizierte Zelle selbst sein. Eine solche gezielte Elimination Virus-infizierter Zellen ist gemäß o.g. Patentanträgen mit Radioimmunpharmaka möglich, die als radioaktive Komponente einen β-Strahler enthalten. Die Reichweite der β-Strahlung liegt allerdings im Bereich von mehreren Millimetern. Das Problem besteht somit darin, daß eine Schädigung umlie gender, nicht infizierter Zellen nicht auszuschließen ist. Günstiger wäre daher der Einsatz von Radioisotopen, die einen höheren linearen Energietransfer bewirken und deren Strahlung eine noch geringere Reichweite als die der β-Strahler aufweisen.An effective antiviral or antiretroviral therapy must therefore target the infected Cell itself. Such targeted elimination of virus-infected cells is according to the above. Patent applications with radioimmunopharmaceuticals possible as a radioactive component contain a beta emitter. However, the range of the β radiation is in the range of several millimeters. The problem is, therefore, that there is damage gender, not infected cells cannot be excluded. The use would therefore be cheaper of radioisotopes that cause a higher linear energy transfer and their Radiation have an even shorter range than that of the β emitter.

solution

Das beschriebene Problem wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß immunologisch wirksame Moleküle wie monoklonale Antikörper (mAk) oder zelluläre Rezeptoren für die Virusbindung mit einem Alpha-Strahler konjugiert werden.The problem described is solved according to the invention in that immunologically effective molecules such as monoclonal antibodies (mAb) or cellular receptors for the virus binding can be conjugated with an alpha emitter.

Für die erfindungsgemäßen Radioimmunkonjugate können Verbindungen folgender allgemeiner Formel eingesetzt werden:
Compounds of the following general formula can be used for the radioimmunoconjugates according to the invention:

a) Binding molecule - alpha emitter.

Bevorzugt werden im Rahmen der o.g. Formel insbesondere Verbindungen der Formel
In the context of the above formula, particular preference is given to compounds of the formula

a) mAk - alpha emitter
b) mAb fragment - alpha emitter
c) Virus receptor - alpha emitter
d) Virus receptor fragment - alpha emitter.

Die Spezifität der mAk soll sich insbesondere gegen Epitope richten auf virale, in die Plasmamembran infizierter Zellen integrierte Proteine, wie
The specificity of the mAb is said to be directed in particular against epitopes on viral proteins integrated into the plasma membrane of infected cells, such as

a) surface or transmembrane glycoproteins of HIV-1 or -2,
b) HBV surface glycoproteins,
c) surface glycoproteins of the HCV,
d) surface glycoproteins of HHV8,
e) surface or transmembrane glycoproteins of other retroviruses, such as for example HTLV-1 or -2,

oder gegen in die Plasmamembran infizierter Zellen integrierte spezifische, virusindu zierte Proteine.or against specific virus-induced cells integrated into the plasma membrane of infected cells graced proteins.

Als monoklonale Antikörper kommen in Betracht:
Possible monoclonal antibodies are:

a) murine monoclonal antibodies,
b) human or humanized monoclonal antibodies,
c) Antigen-binding fragments (Fab, Fab 'or F (ab) 2 ) murine or human or humanized monoclonal antibodies.

Als Virusrezeptoren konnten verschiedene Moleküle identifiziert werden. Derartige Moleküle sollen daher Verwendung finden, unter anderem:
Various molecules have been identified as virus receptors. Such molecules should therefore be used, among others:

a) CD4 receptors (for HIV infection)
b) LDL receptors (for HCV infection)
c) ASGPR and others (for HBV infection).

Weitere Rezeptoren sollen bei anderen viralen Infektionen identifiziert werden und in gleicher Weise therapeutisch eingesetzt werden. Gegebenenfalls sollen auch geeignete Antigen-bindende Fragmente (Peptide) der Bindungsproteine mit verbesserten pharma kodynamischen und pharmakokinetischen Eigenschaften hergestellt werden und das jeweilige Bindungsmolekül (oder ein Fragment davon) durch ungezielte oder gezielte Mutagenese so modifiziert werden, daß verbesserte Bindungseigenschaften für das Radioimmunpharmakon resultieren.Additional receptors are to be identified in other viral infections and in can be used therapeutically in the same way. If necessary, suitable ones should also Antigen-binding fragments (peptides) of the binding proteins with improved pharma dynamic and pharmacokinetic properties are manufactured and that respective binding molecule (or a fragment thereof) by untargeted or targeted Mutagenesis are modified so that improved binding properties for the Radioimmune pharmaceuticals result.

Mehr als 100 Radionuklide emittieren Alpha-Teilchen. Als Alpha-Teilchen-Emitter sollen unter anderem folgende Radionuklide eingesetzt werden:
More than 100 radionuclides emit alpha particles. The following radionuclides are to be used as alpha particle emitters:

a) bismuth-213 ( 213 Bi),
b) Astatin-211 ( 211 At),
c) and others.

Rationale for radioimmunotherapy of viral infections 1. Rational use of alpha emitters

Alpha-Strahlung ist eine Korpuskularstrahlung. Durch Emission eines Alpha-Teilchens verliert der Kern eines Alpha-Strahlers eine positive Ladung von +2e und eine Masse von etwa 4 amu. Die emittierten Alpha-Teilchen besitzen eine mit weniger als 100 µm deutlich geringere Reichweite als Elektronen von Beta-Strahlern. Sie weisen aber eine höhere Energie auf und bewirken eine wesentlich dichtere Ionisation als Beta-Strahler (Zalutzky und Bigner 1996). Dies führt zu einer intensiveren Schädigung der Plasma membranen infizierter Zellen und einer deutlich gesteigerten Zytotoxizität, während nicht-infizierte Zellen einer geringeren unspezifischen Strahlenwirkung ausgesetzt sind. Dies ist wichtig, wenn sich beispielsweise HIV-infizierte Zellen disseminiert im gesamten Körper des Patienten verteilen.Alpha radiation is corpuscular radiation. By emission of an alpha particle The core of an alpha emitter loses a positive charge of + 2e and a mass of about 4 amu. The emitted alpha particles are less than 100 µm significantly shorter range than electrons from beta emitters. But they have one higher energy and cause a much denser ionization than beta emitters (Zalutzky and Bigner 1996). This leads to more intensive damage to the plasma membranes of infected cells and a significantly increased cytotoxicity, while non-infected cells are exposed to less non-specific radiation effects. This is important if, for example, HIV-infected cells disseminate throughout Distribute the patient's body.

Von den über 100 Radionukliden, die Alpha-Teilchen emittieren eignen sich die meisten wegen ihrer langen Halbwertszeit nicht für eine Radioimmuntherapie. Viele können zudem nur schwer und in zu geringer Quantität hergestellt werden, so daß bislang nur wenige Alpha-Strahler für die klinische Erprobung in Betracht gezogen worden sind. Die meisten Erfahrungen liegen mit der Anwendung von Astatin-211 (²¹¹At) und Wismut-212 (²¹²Bi) vor (Zweit 1996).Of the over 100 radionuclides that emit alpha particles, most are unsuitable for radioimmunotherapy due to their long half-life. In addition, many can only be produced with difficulty and in too little quantity, so that only a few alpha emitters have so far been considered for clinical trials. Most experience is with the use of Astatin-211 ( ²¹¹ At) and Bismuth-212 ( ²¹² Bi) (second 1996).

Astatin-211 erscheint für therapeutische Zwecke geeignet, weil es auf zwei Wegen zerfällt, die beide zur Emission von Alpha-Teilchen führen und weil es Röntgenstrahlung aussendet, die eine ausreichende Intensität aufweist, um Blut- oder Gewebsproben mit einem Gamma-Zähler zu untersuchen, oder um das therapeutische Verfahren mit bildge bende Verfahren wie der Single-Photon-Emissions-Comutertomographie (SPECT) zu analysieren (Turkington et al. 1993).Astatin-211 appears suitable for therapeutic purposes because it works in two ways decays, both of which lead to the emission of alpha particles and because it is x-rays emits that is of sufficient intensity to have blood or tissue samples to examine a gamma counter, or in order to image the therapeutic method procedures such as single photon emission computer tomography (SPECT) analyze (Turkington et al. 1993).

Wismut-212 wurde bereits mit monoklonalen Antikörpern konjugiert und im Tiermodell erfolgreich zur Elimination maligner Zellen eingesetzt (Kozak et a. 1986, Macklis et al. 1988).Bismuth-212 has already been conjugated to monoclonal antibodies and in animal models successfully used to eliminate malignant cells (Kozak et a. 1986, Macklis et al. 1988).

Ein anderer Alpha-Strahler mit einer Halbwertszeit von 46 Minuten, Wismut-213 (²¹³BI), kann von den Erfindern vor Ort im Generator aus dem Mutternuklid Actinium (²²⁵Ac) erzeugt werden und soll daher in erster Linie als Komponente antiviral wirksamer Radioimmunkonjugate verwendet werden.Another alpha emitter with a half-life of 46 minutes, bismuth-213 ( ²¹³ BI), can be generated by the inventors on site in the generator from the mother nuclide Actinium ( ²²⁵ Ac) and should therefore primarily be used as a component of antiviral radioimmune conjugates become.

Die Wirkungen radioaktiver Strahlung auf Zellen und genetisches Material sind hinrei chend belegt (Übersichten in: Kauffmann et al. 1996, Sauer 1998). Die Grundlage der strahlenbiologischen Wirkungen stellt die strukturelle Schädigung der genetischen Infor mation (DNA) Virus-infizierter Zellen dar. Derart veränderte zelluläre DNA kodiert fehlerhafte Proteine, die ihre Funktion einbüßen. So verlieren nicht nur Enzyme, die für die Virus-Replikation unentbehrlich sind, ihre Funktion, sondern es kommt darüber hinaus auch zu Stoffwechselveränderungen in der Virus-infizierten Zelle. Dies rührt zur Eliminierung der Virus-infizierten Zellen durch reproduktiven Zelltod oder Apoptose. Darüber hinaus können Viren durch ionisierende Strahlung auch direkt inaktiviert werden (Follea et al. 1996).The effects of radioactive radiation on cells and genetic material are overwhelming appropriately documented (reviews in: Kauffmann et al. 1996, Sauer 1998). The basis of the radiation biological effects represents the structural damage of the genetic information mation (DNA) virus-infected cells. Such modified cellular DNA encodes defective proteins that lose their function. So not only lose enzymes that are responsible for Virus replication is essential to its function, but it comes down to it in addition to metabolic changes in the virus-infected cell. This is due to Elimination of virus-infected cells through reproductive cell death or apoptosis. Viruses can also be directly inactivated by ionizing radiation (Follea et al. 1996).

Die Behandlung mit Radioisotopen ist in Deutschland bereits seit über 50 Jahren als Radiojodtherapie aus der Behandlung benigner und maligner Schilddrüsenerkrankungen bekannt. Diese stellt das bedeutendste Verfahren der nuklearmedizinischen Therapie dar und hat sich als überraschend nebenwirkungsarm erwiesen. Spätkomplikationen, insbe sondere eine Malignominduktion, konnten bis heute nicht nachgewiesen werden (Moser 1996, Reiners 1997).Treatment with radioisotopes has been in Germany for over 50 years Radioiodine therapy from the treatment of benign and malignant thyroid diseases known. This is the most important method of nuclear medicine therapy and has proven to be surprisingly low in side effects. Late complications, esp malignancy induction in particular has not been demonstrated to date (Moser 1996, Reiners 1997).

Neuere Therapiemöglichkeiten mit Radioisotopen ergeben sich inzwischen außerdem mit ¹³¹J-markiertem Meta-Iodo-Benzyl-Guanidin (MIBG) bei der Behandlung metastasierter Phäochromozytome und Neuroblastome, durch die Radiosynoviorthese bei der rheumati schen Arthritis, durch intrakavitäre Instillation von ⁹⁰Y-Silikat bei Pleura- oder Perito nealkarzinose, bei der palliativen Schmerztherapie von Skelettmetastasen mit knochen affinen Substanzen wie ⁸⁹Sr, oder durch die Radiophosphorbehandlung der Polycythae mia vera (Moser 1996).Newer therapy options with radioisotopes are now also available with ¹³¹ J-labeled meta-iodo-benzyl-guanidine (MIBG) in the treatment of metastatic pheochromocytomas and neuroblastomas, through the radiosynoviothesis in rheumatoid arthritis, through intracavitary instillation of ⁹⁰ Y-silicate in pleura - or peritoneal cancer, in the palliative pain therapy of skeletal metastases with bone-affine substances such as ⁸⁹ Sr, or by the radiophosphorus treatment of polycythae mia vera (Moser 1996).

In der klinischen Prüfung befindet sich derzeit eine Therapie mit ¹³¹J-markiertem anti- CEA IgG beim kolorektalen Karzinom (Blumenthal et al. 1992, Blumenthal 1994), beim B-Zell-Lymphom (Kaminski et al 1993, Press et al. 1993, Press et al. 1995, Press et al. 1995).Clinical testing is currently on therapy with ¹³¹ J-labeled anti-CEA IgG for colorectal carcinoma (Blumenthal et al. 1992, Blumenthal 1994), for B-cell lymphoma (Kaminski et al 1993, Press et al. 1993, Press et al. 1995, Press et al. 1995).

Unter onkologischen Gesichtspunkten wird Bestrahlung auch erfolgreich zur Therapie des AIDS-assoziierten Kaposi-Sarkoms eingesetzt, das durch das Humane Herpes-Virus 8 (HHV 8) induziert wird (Conill et al. 1997).From an oncological point of view, radiation is also a successful therapy of AIDS-related Kaposi's sarcoma, caused by the human herpes virus 8 (HHV 8) is induced (Conill et al. 1997).

Der gezielte Einsatz von freien Radioisotopen zur Behandlung von Infektionen ist hinge gen bislang nicht erprobt worden. Er findet seine Legitimation aber in der Therapie solcher Infektionskrankheiten, die durch ihren chronischen Verlauf, die Häufigkeit und Schwere ihrer Folgeerkrankungen und eine mangelhafte konventionelle Therapierbarkeit charakterisiert sind.The targeted use of free radioisotopes for the treatment of infections is dependent have not yet been tested. He finds his legitimation in therapy of such infectious diseases, characterized by their chronic course, frequency and Severity of their complications and poor conventional therapies are characterized.

2. Radio immunopharmaceuticals based on immunoglobulins

Grundlage einer Radioimmuntherapie von viralen Infektionen mit Immunglobulin-Konju gaten ist, daß virale Antigene oder Virus-induzierte Antigene in die äußere Membran infizierter Zellen integriert werden. Dies ist eine Eigenschaft, die für viele Viren bereits belegt wurde, so für die Flaviviren (Westaway und Goodman 1987, Ng et al. 1992), HSV (Schlehofer et al. 1979), Influenza-Viren (Boulan et al. 1980, Ciampor et al. 1981, Kohama et al. 1981, Hughey et al. 1992), Rabies-Viren (Revilla-Monsalve et al. 1985), EBV (Liebowitz et al. 1986), HBV (Saito et al. 1992, Gerber et al. 1988, Chu et al. 1997) und HIV (Timar et al. 1986, Rusche et al. 1987, Feremans et al. 1988, Desportes et al. 1989, Ikuta ct a1. 1989, Dennin et al. 1991, Dudhane et al. 1996).Basis for radioimmunotherapy of viral infections with immunoglobulin conjunctiva gaten is that viral antigens or virus-induced antigens in the outer membrane infected cells. This is a property that many viruses already have was documented, for example for the flaviviruses (Westaway and Goodman 1987, Ng et al. 1992), HSV (Schlehofer et al. 1979), influenza viruses (Boulan et al. 1980, Ciampor et al. 1981, Kohama et al. 1981, Hughey et al. 1992), Rabies virus (Revilla-Monsalve et al. 1985), EBV (Liebowitz et al. 1986), HBV (Saito et al. 1992, Gerber et al. 1988, Chu et al. 1997) and HIV (Timar et al. 1986, Rusche et al. 1987, Feremans et al. 1988, Desportes et al. 1989, Ikuta ct a1. 1989, Dennin et al. 1991, Dudhane et al. 1996).

Für Radioirnmunpharmaka auf der Basis von Immunglobulinen sollen daher als immu nologisch wirksame Komponenten der Radioimmunkonjugate monoklonale Antikörper oder deren Antigen-bindende Fragmente, die jeweils ein Epitop der viralen bzw. virusin duzierten Antigene auf der Plasmamembran infizierter Zellen erkennen und binden, Einsatz finden. Besonders geeignet erscheinen monoklonale Antikörper gegen ein möglichst stark konserviertes Epitop eines viralen Antigens. Der an den monoklonalen Antikörper bzw. dessen Antigen-bindendes Fragment konjugierte Alpha-Strahler schädigt dann gezielt die Virus-replizierende Zelle.For radio-immune drugs based on immunoglobulins are therefore said to be immu Ecologically active components of the radioimmuno-conjugates monoclonal antibodies or their antigen-binding fragments, each of which is an epitope of the viral or virusin recognize and bind the induced antigens on the plasma membrane of infected cells, Find use. Monoclonal antibodies against a appear particularly suitable as much preserved epitope of a viral antigen as possible. The one on the monoclonal Antibodies or its antigen-binding fragment conjugated alpha emitters then specifically damages the virus-replicating cell.

3. Radioimmunopharmaka based on receptor molecules of the host cell

Hintergrund einer Radioimmuntherapie viraler Infektionen mit Zellrezeptor-Konjugaten ist neben der Exprimierung viraler Proteine auf der Oberfläche infizierter Zeilen auch, daß die Adsorption der Viren an die Wirtszellen gezielt über einen Rezeptor auf der Zellmembran vermittelt wird. Eine derartige Rezeptor-vermittelte Adsorption wurde bereits für zahlreiche Viren belegt, beispielsweise für HIV (Dalgleish et al. 1984), EBV (Fingeroth et al. 1984), Polioviren (Leon-Monzon et al. 1995), Rabiesviren (Lentz et al. 1986), Influenza-C-Viren (Nishlmura et al. 1988), Masern-Viren (Dorig et al. 1993) HAV (Kaplan et al. 1996), HSV (Whitbeck et al. 1997), HBV (Treichel et al. 1997), HCV (Seipp et al. 1997), Coxsackie B3 (Shafren et al. 1997) und Adenoviren (Bergelson et al. 1998), um nur einige zu nennen.Background of radioimmunotherapy of viral infections with cell receptor conjugates is next to the expression of viral proteins on the surface of infected lines, that the adsorption of the viruses to the host cells via a receptor on the Cell membrane is mediated. Such a receptor-mediated adsorption was already proven for numerous viruses, for example for HIV (Dalgleish et al. 1984), EBV (Fingeroth et al. 1984), polioviruses (Leon-Monzon et al. 1995), rabies viruses (Lentz et al. 1986), influenza C viruses (Nishlmura et al. 1988), measles viruses (Dorig et al. 1993) HAV (Kaplan et al. 1996), HSV (Whitbeck et al. 1997), HBV (Treichel et al. 1997), HCV (Seipp et al. 1997), Coxsackie B3 (Shafren et al. 1997) and adenoviruses (Bergelson et al. 1998), to name just a few.

Entsprechende rekombinante Rezeptormoleküle würden an die auf der Oberfläche infizierter Zellen exprimierten viralen Antigene binden und in der oben geschilderten Weise Radioisotope an die infizierte Zelle koppeln.Appropriate recombinant receptor molecules would be attached to those on the surface infected cells expressed viral antigens and bind in the above Pair wise radioisotopes with the infected cell.

production method 1. Radioimmunopharmaka based on monoclonal antibodies

Die Entwicklung virusspezifischer monoklonaler Antikörper und die Überprüfung ihrer Kreuzreagibilitäten sind Grundlagen virologischer Forschungsarbeiten (Bergter 1990).Developing and testing virus-specific monoclonal antibodies Cross-sensitivities are the basis of virological research (Bergter 1990).

Identifizierung und Reinigung zellmembrangebundener viraler Proteine oder Peptide sind Stand der Technik (Eckert und Kartenbeck 1997). Ebenso sind die Methoden zur Herstellung muriner, humanisierter und humaner monoklonaler Antikörper sowie die Präparation Antigen-bindender mAk-Fragmente sind bekannt (Peters und Baumgarten 1990, Lidell und Weeks 1996).Identification and purification of cell membrane bound viral proteins or peptides State of the art (Eckert and Kartenbeck 1997). The methods for Production of murine, humanized and human monoclonal antibodies and the Preparation of antigen-binding mAb fragments are known (Peters and Baumgarten 1990, Lidell and Weeks 1996).

Identifizierung und Isolierung viraler und virusinduzierter Antigene aus der Plasmamem bran infizierter Zellen und die Erzeugung monoklonaler Antikörper sollen im Beispiel 1 skizziert werden.Identification and isolation of viral and virus-induced antigens from the plasma membrane Bran infected cells and the generation of monoclonal antibodies are described in Example 1 be outlined.

example 1

Durch immunhistologische und elektronenmikroskopische Voruntersuchungen kann zunächst geklärt werden, ob prinzipiell virale Proteine in die Zellmembran infizierter Zellen integriert sind, die einer Radioimmuntherapie zugänglich wären. Dazu wird beispielsweise die Bindung von virusspezifischen Antikörpern an infizierten Zellen durch Inkubation mit markierten murinen monoklonalen Antikörpern fluoreszenzmikioskopisch oder elektronenmikroskopisch nachgewiesen (Payne et al. 1990, Stirling 1990, Kaito et al. 1994, Sabri et al. 1997).Through preliminary immunohistological and electron microscopic examinations First of all, it should be clarified whether viral proteins are principally infected in the cell membrane Cells are integrated that would be accessible to radioimmunotherapy. This will for example, the binding of virus-specific antibodies to infected cells Incubation with labeled murine monoclonal antibodies using fluorescence microscopy or detected by electron microscopy (Payne et al. 1990, Stirling 1990, Kaito et al. 1994, Sabri et al. 1997).

Lassen sich derartige Antigene in der Zytoplasmamembran nachweisen, muß geklärt werden, um welche Antigene es sich im einzelnen handelt. Hierzu können Virus-infizierte Zellen lysiert und die Membranproteine gelelektrophoretisch aufgetrennt werden. Auf Nitrozellulose geblottet können sie dann mit Antiseren oder murinen monoldonalen Antikörpern analysiert werden.If such antigens can be detected in the cytoplasmic membrane, this has to be clarified which antigens are involved. This can be virus-infected Cells are lysed and the membrane proteins are separated by gel electrophoresis. On You can then blot nitrocellulose with antisera or murine monoldonals Antibodies are analyzed.

Für die Immunisierung und Gewinnung monoklonaler Antikörper ist die Reinigung der gefundenen, in die Zellmembran integrierten, viralen oder virusinduzierten Antigene erforderlich. Dazu können Viren in geeigneten Zellkultursystemen , beispielsweise HIV in H9-Zellen, MT-4-Zellen, MOLT-4-Zellen, HUT-78-Zellen u. a. (Bergter 1990) und HCV in DAUDI-Zellen (Nakajima et al. 1996), kultiviert und aus dem Zellkulturüber stand isoliert werden. Zunächst werden die Zellen und Zelltrümmer abzentrifugiert. Anschließend kann das Virus aus dem gereinigten Überstand durch Zentrifugation bei 27 000 × g sedimentiert werden. Das Viruspellet kann dann in Probenpuffer resuspen diert und gelelektrophoretisch aufgetrennt werden. Schließlich kann die Antigenfraktion isoliert werden, die dem gesuchten Antigen auf der Plasmamembran entspricht. Dieses Antigen kann zur Immunisierung von Mäusen und Herstellung monoklonaler Antikörper verwendet werden.For the immunization and production of monoclonal antibodies, the cleaning of the found, integrated into the cell membrane, viral or virus-induced antigens required. Viruses can do this in suitable cell culture systems, for example HIV in H9 cells, MT-4 cells, MOLT-4 cells, HUT-78 cells and the like. a. (Bergter 1990) and HCV in DAUDI cells (Nakajima et al. 1996), cultured and from cell culture stand to be isolated. First the cells and cell debris are centrifuged off. The virus can then be extracted from the purified supernatant by centrifugation 27,000 × g are sedimented. The virus pellet can then resuspend in sample buffer dated and separated by gel electrophoresis. Finally, the antigen fraction are isolated, which corresponds to the antigen sought on the plasma membrane. This Antigen can be used to immunize mice and produce monoclonal antibodies be used.

Die erzeugten monoklonalen Antikörper sollten im ELISA, Immunoblot und RIPA auf Kreuzreaktivitäten mit verschiedenen Virus-Isolaten überprüft werden. Der geeignete monoklonale Antikörper besitzt idealerweise eine breite Kreuzreaktivität und erfaßt dadurch die gesamte Quasispezies eines Infizierten.The monoclonal antibodies generated should be on in ELISA, immunoblot and RIPA Cross reactivities with different virus isolates are checked. The right one ideally, monoclonal antibodies are broadly cross-reactive and detected thereby the entire quasi-species of an infected person.

Kann kein monoklonaler Antikörper gewonnen werden, der alle Virusisolate erkennt, so müssen Isolat-spezifische monoklonale Antikörper hergestellt werden, die dann gezielt zur Therapie des im Einzelfall nachgewiesenen Isolats eingesetzt werden könnten. If a monoclonal antibody that recognizes all virus isolates cannot be obtained, so isolate-specific monoclonal antibodies must be produced, which are then targeted could be used to treat the isolate detected in individual cases.

Für die Radioimmuntherapie kommen wie bereits dargelegt sowohl murine, als auch humane bzw. humanisierte monoklonale Antikörper und ggf. deren Antigen-bindende Fragmente in Frage.For the radioimmunotherapy both murine as well as come human or humanized monoclonal antibodies and possibly their antigen-binding Fragments in question.

2. Production of radioimmunopharmaceuticals based on host receptor molecules

Wie ebenfalls bereits oben belegt, wurden inzwischen für eine ganze Reihe von Viren zelluläre Rezeptormoleküle identifiziert, die die Adsorption der Viren an die Oberfläche von Wirtszellen vermitteln. Die Methoden zur Identifizierung und Gewinnung solcher Rezeptormoloküle gehört zum Stand der Technik. Das Vorgehen soll im Beispiel 2 beschrieben werden.As also demonstrated above, a number of viruses have now been identified Cellular receptor molecules identified the adsorption of the virus to the surface mediate from host cells. The methods for identifying and extracting such Receptor molecules are part of the state of the art. The procedure is described in example 2 to be discribed.

Example 2

Das betreffende Virus wird gelelektrophoretisch aufgetrennt, so daß die viralen Antigene isoliert werden können. An Gewebeproben und Zellkultursystemen können dann Bindungsstudien durchgeführt werden und der gesuchte, für die Adsorption des Virus verantwortliche zelluläre Rezeptor identifiziert werden (Dorig et al. 1993, Treichel et al. 1997). Dieser Rezeptor kann mit etablierten Methoden isoliert (Suzuki et al. 1983) und das Bindungsepitop eingehender analysiert werden, indem die Bindung des Antigens an einzelnen Spaltprodukten analysiert wird. Das Rezeptormolekül kann schließlich kloniert werden (Bergelson et al. 1998) und so in großem Maßstab für die Konjugation mit einem Radioisotop und den therapeutischen Einsatz weiter verarbeitet werden.The virus in question is separated by gel electrophoresis so that the viral antigens can be isolated. Then on tissue samples and cell culture systems Binding studies are carried out and the one sought for the adsorption of the virus responsible cellular receptor can be identified (Dorig et al. 1993, Treichel et al. 1997). This receptor can be isolated using established methods (Suzuki et al. 1983) and The binding epitope can be analyzed in more detail by binding the antigen individual fission products is analyzed. The receptor molecule can finally be cloned (Bergelson et al. 1998) and thus on a large scale for conjugation with a Radioisotope and therapeutic use can be processed further.

3. Conjugation of suitable radionuclides

Die monoklonalen Antikörper oder Wirtsrezeptormoleküle sollen mit einem Alpha- Emitter konjugiert werden. Die Konjugation von Radionukliden an Proteine ist hinrei chend beschrieben und Stand der Technik (Übersicht in: Eckert und Kartenbeck 1996).The monoclonal antibodies or host receptor molecules should be identified with an alpha Be emitter conjugated. The conjugation of radionuclides to proteins is fine accordingly described and state of the art (overview in: Eckert and Kartenbeck 1996).

Das Vorgehen soll im Beispiel 3 exemplarisch dargestellt werden, wenngleich verschie dene Methoden (z. B. Zalutzky et al. 1989) für bestimmte Konjugatkonstrukte mehr oder weniger geeignet sein können, so daß die methodischen Vorgehensweisen dem Einzelfall angepaßt und optimiert werden sollen.The procedure is to be exemplified in Example 3, although different methods (e.g. Zalutzky et al. 1989) more or more for certain conjugate constructs may be less suitable, so that the methodological approaches to the individual case should be adapted and optimized.

Example 3

Geeignete monoklonale Antikörper oder Rezeptormoleküle können zu therapeutischen Zwecken mit Hilfe der Chloramin T-Methode (Hunter und Greenwood 1962) nach der Anleitung von Eckert und Kartenbeck 1997 radioaktiv konjugiert werden. Hierzu wird ein Radioisotop kurzzeitig durch das von Chloramin T (N-Chlor-p-Toluen-4-sulfonamid, Na-Salz) in wässrigem Medium freigesetzte Hypochlorit oxidiert wird. Das stark elektrophile Radioisotop bindet dann in diesem Zustand vorzugsweise an die Benzolringe des im Protein enthaltenen Tyrosins. Zur Schonung der monoklonalen Antikörper bzw. Rezeptormolekule wird diese Reaktion nach kurzer Inkubationszeit mit einem Überschuß an Bisulfit beendet, wobei sowohl das restliche Chloramin T als auch oxidierte, aber noch ungebundene Radioisotope reduziert und damit inaktiviert werden. Gelelektrophoretisch kann das mAk-Radioisotop-Konjugat schließlich isoliert und zur intravenösen Verwen dung mit entsprechenden Hilfsstoffen weiter aufgearbeitet werden. Weitere Verfahren stehen ebenfalls zur Verfügung (Harrison und Royle 1984, Zalutsky et al. 1989).Suitable monoclonal antibodies or receptor molecules can be therapeutic Purposes using the chloramine T method (Hunter and Greenwood 1962) according to the Instruction by Eckert and Kartenbeck 1997 radioactive conjugation. To do this a radioisotope is briefly caused by that of chloramine T (N-chloro-p-toluen-4-sulfonamide, Na salt) oxidized hypochlorite released in aqueous medium. That strong In this state, electrophilic radioisotope then preferably binds to the benzene rings of the tyrosine contained in the protein. To protect the monoclonal antibodies or This reaction becomes receptor molecules after a short incubation period with an excess ended on bisulfite, with both the remaining chloramine T and oxidized, but still unbound radioisotopes are reduced and thus inactivated. Gel electrophoretic the mAb radioisotope conjugate can finally be isolated and used for intravenous use be processed with appropriate auxiliary materials. Other procedures are also available (Harrison and Royle 1984, Zalutsky et al. 1989).

Preclinical examinations

Zunächst sollen in-vitro-Untersuchungen zeigen, ob und mit welcher Affinität die Radioimmunkonjugate über die Antigenbindungsstelle der monoklonalen Antikörper oder Wirtsrezeptormoleküle an die entsprechenden Epitope viraler, in die Zellmembran integrierter Proteine Virus-infizierter Zellen binden und ob die Zellen durch die Radio isotop-vermitteite Bestrahlung geschädigt werden. Diese Untersuchungen können in geeigneten Zellkultursystemen durchgeführt werden.First of all, in vitro investigations should show whether and with what affinity the Radioimmunoconjugates via the antigen binding site of the monoclonal antibodies or host receptor molecules to the corresponding viral epitopes, in the cell membrane integrated proteins bind virus-infected cells and whether the cells through the radio isotope-mediated radiation can be damaged. These studies can be done in suitable cell culture systems.

An Nacktmäusen und anderen Tiermodellen könnten in den folgenden Schritten praklinische in-vivo-Untersuchungen zur Wirksamkeit der Radioimmuntherapie erfolgen, bevor die klinische Anwendung bei infizierten Patienten geprüft wird. On nude mice and other animal models, you could do the following steps Preclinical in vivo studies on the effectiveness of radioimmunotherapy are carried out, before testing clinical use in infected patients.

Use on patients: therapeutic requirements

In verschiedenen Phase-I-Studien (Dosiseskalationsstudien) sollen die maximal tolerier baren Dosen (MTD) hinsichtlich Nebeneffekten, Pharmakokinetik und Immunogenität bestimmt werden. Durch die nachfolgenden klinische Untersuchungen (Phase-II- und -III-Studien) soll schließlich der Effekt einzelner Radioimmunpharmaka an kleinen Patientenkollektiven mit fortgeschrittener Erkrankung und an randomisierten Patienten kollektiven geprüft werden (Fiebig 1995).In various phase I studies (dose escalation studies), the maximum tolerated doses (MTD) regarding side effects, pharmacokinetics and immunogenicity be determined. Through the subsequent clinical examinations (phase II and III studies), the effect of individual radioimmunopharmaceuticals on small ones should ultimately be Patient groups with advanced disease and randomized patients collectively examined (Fiebig 1995).

Die kurze Halbwertszeit der Radionuklide macht eine zentrumsnahe Präparation bzw. schnellen Transport des Radioimmunkonjugats zum Therapeuten erforderlich. Voraus setzung für die Therapie von Patienten mit HIV, viralen Hepatitiden und ggf. anderen viralen Infektionen mit Hilfe von kurzlebigen Radionukliden ist daher die Einrichtung spezialisierter interdisziplinärer Zentren, in denen neben einer fachgerechten Therapie der Infizierten auch die zeitgerechte Applikation des Radioimmunkonjugates unter strahlen schutzrechtlichen Aspekten gewährleistet ist.The short half-life of the radionuclides makes preparation close to the center or rapid transport of the radioimmuno-conjugate to the therapist is required. Advance setting for the therapy of patients with HIV, viral hepatitis and possibly others Viral infections with the help of short-lived radionuclides is therefore the establishment specialized interdisciplinary centers in which, in addition to professional therapy, Infected the timely application of the radioimmuno-conjugate under radiation protection law aspects is guaranteed.

Mögliche Voraussetzung einer erfolgreichen Therapie kann auch die prätherapeutische Verminderung der Viruslast sein, die durch Vorbehandlung des Patienten mit antiviralen bzw. antiretroviralen Präparaten erzielt werden kann. Dadurch gelangt eine höhere Dosis des Radioimmunpharmakons an die Virus-replizierenden Zellen, wodurch der therapeuti sche Effekt verbessert wird. Anderenfalls würde das Radioimmunpharmakon möglicher weise von freien Viruspartikeln abgefangen und die zytotoxische Wirkung vermindert werden.A possible prerequisite for successful therapy can also be pre-therapeutic Reduce viral load by pretreating the patient with antiviral or antiretroviral preparations can be achieved. This gives a higher dose of the radioimmunopharmaceutical to the virus-replicating cells, whereby the therapeuti cal effect is improved. Otherwise the radioimmune drug would be more possible intercepted by free virus particles and reduced the cytotoxic effect become.

Für die Radioimmuntherapie ist voraussichtlich eine mehrtägige stationäre Unterbringung erforderlich, um den Patienten bis zum Abklingen der Strahlung von der Umgebung abzuschirmen. Das Radioimmunpharmakon kann peripher- oder zentralvenös als Bolus, Kurzinfusion oder Dauertherapie über mehrerer Tage mit einer Dosis von voraussichtlich 25-300 mCi appliziert werden. Die Gabe erfolgt einmalig oder in Form von Zyklen im mehrwöchigen Abstand. Gegebenenfalls ist bei bestehender Überempfindlichkeit gegen über dem monoklonalen Antikörper oder gegenüber dem Rezeptormolekül unmittelbar vor Applikation des Präparates eine Vorbehandlung mit einem Glukokortikoid, einem Antihistaminikum und einem H₂-Antagonisten erforderlich (Lorenz 1994).Radioimmunotherapy is likely to require hospitalization over several days to shield the patient from the environment until the radiation has decayed. The radioimmuno-pharmaceutical can be administered peripherally or centrally as a bolus, short infusion or continuous therapy over several days with a dose of probably 25-300 mCi. The dose is given once or in the form of cycles at intervals of several weeks. If there is hypersensitivity to the monoclonal antibody or to the receptor molecule, pretreatment with a glucocorticoid, an antihistamine and an H ₂ antagonist may be necessary immediately before application of the preparation (Lorenz 1994).

Nach Applikation des Radioimmunpharmakons muß vorübergehend theoretisch mit hepatischen und hämatologischen Nebenwirkungen sowie einem erhöhtem Risiko für opportunistische Infektionen gerechnet werden. Gegebenenfalls ist aus diesem Grund die in diesem Patentantrag beschriebene Radioimmuntherapie mit einer Stammzelltransplan tation zu verbinden.After application of the radioimmunopharmaceutical, theoretically, temporarily hepatic and haematological side effects and an increased risk of opportunistic infections can be expected. For this reason, if necessary radioimmunotherapy with a stem cell transplant described in this patent application tation to connect.

The advantages achieved with these radioimmuno-conjugates

Gegenüber dem Einsatz der in den o.g. Patentanträgen von dem Erfinder Dr. W. Bergter beschriebenen Radioimmunpharmaka besteht der Vorteil des Einsatzes von Alpha- Strahlern im höheren linearen Energietransfer (LET) und der geringeren Reichweite der emittierten Alpha-Teilchen.Compared to the use of the above Patent applications from the inventor Dr. W. Bergter described radioimmune pharmaceuticals there is the advantage of using alpha Emitters in the higher linear energy transfer (LET) and the shorter range of the emitted alpha particles.

Ein weiterer Vorteil ist, daß die Virus-infizierten Zellen noch selektiver geschädigt werden, als durch Beta-Strahler. Die Radioimmunkonjugate binden spezifisch mit Hilfe des mAk-Anteils an ein auf der infizierten Zelle exponiertes virales Protein und geben ihre Strahlung direkt an die Zelle ab, ohne umliegende gesunde Zellen wesentlich zu schädigen.Another advantage is that the virus-infected cells are damaged even more selectively than by beta emitters. The radioimmunoconjugates bind specifically with the help of the mAb portion to a viral protein exposed on the infected cell and give their radiation directly to the cell, without significantly surrounding healthy cells damage.

Der bedeutendste Vorteil einer Therapie schwerer chronischer Infektionskrankheiten mit den hier beschriebenen Radioimmunkonjugaten gegenüber derzeitigen antiviralen und antiretroviralen Therapien besteht darin, daß Virus-infizierte Zellen direkt geschädigt und eliminiert werden, wodurch die Möglichkeit einer komplette Heilung besteht.The most important advantage of having a therapy for severe chronic infectious diseases the radioimmunoconjugates described here compared to current antiviral and Antiretroviral therapies are that virus-infected cells are directly damaged and eliminated, which gives the possibility of complete healing.

Zudem ist es als Vorteil zu betrachten, daß die hier beschriebenen Pharmaka durch die Spezifität der monoklonalen Antikörper für bestimmte, jeweils die Infektiosität determi nierende, hoch konservierte Epitope verschiedener Viren zur Behandlung eines breiten Spektrums von Isolaten eines Virus geeignet sind. Dies ist angesichts der starken Muta tionsfreudigkeit verschiedener Viren sehr wichtig. Das gleiche gilt für den Einsatz von zellulären Rezeptormolekülen.In addition, it is to be considered an advantage that the pharmaceuticals described here by Specificity of the monoclonal antibodies for certain infectivity determi nating, highly conserved epitopes of various viruses for the treatment of a broad Spectrum of isolates of a virus are suitable. This is in view of the strong muta The willingness to use different viruses is very important. The same applies to the use of cellular receptor molecules.

Ein großer Vorteil liegt außerdem in der zur üblichen antiviralen Therapie vergleichs weise guten subjektiven Verträglichkeit und der bekannten Nebenwirkungsarmut radioimmunologischer Therapien begründet.Another big advantage is the comparison to the usual antiviral therapy as well as good subjective tolerance and the well-known lack of side effects radioimmunological therapies.

Als vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung kann sich die Verwendung humanisierter bzw. humaner monoklonaler Antikörper erweisen, wodurch die Immunogenität muriner mAk-Konjugate umgangen werden kann. Diese kann sich andererseits aber auch als sinnvoll erweisen, wenn es gilt, das Immunsystem zusätzlich gegenüber der HCV-Infek tion zu sensibilisieren.An advantageous embodiment of the invention can be the use of humanized or human monoclonal antibodies prove, whereby the immunogenicity murine mAb conjugates can be avoided. On the other hand, this can also be seen as prove sensible when it comes to the immune system in addition to the HCV infection to raise awareness.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung betrifft die Verwendung von Fragmente mono klonaler Antikörper oder Zellrezeptoren als immunologisch wirksame Komponente der Radioimmunkonjugate, da durch die geringere Molekülgröße eine bessere Gewebe gängigkeit und Penetrationsfähigkeit durch die Blut-Hirn-Schranke erzielt werden kann.A further advantageous embodiment relates to the use of mono fragments clonal antibody or cell receptors as an immunologically active component of the Radioimmunoconjugates, because of the smaller molecular size a better tissue frequency and penetration ability can be achieved through the blood-brain barrier.

Eine enorme präventivmedizinische Bedeutung kommt der Radioimmuntherapie viraler Infektionen insbesondere in den Fällen zu, in denen es darum geht, durch eine präventive Viruseliminierung onkologische Erkrankungen zu verhindern, wie sie beispielsweise als Folge von HIV-, HTLV-1, HTLV-2, HHV8-, HCV- und HBV-Infektionen bekannt sind.Viral radioimmunotherapy is of enormous importance in preventive medicine Infections especially in those cases where it comes through preventive To prevent virus elimination oncological diseases, such as as Sequence of HIV, HTLV-1, HTLV-2, HHV8, HCV and HBV infections are known.

Invention criteria

Neuartig im Sinne der im Hauptantrag beschriebenen Erfindung sind der Einsatz von Radioisotopen und die Herstellung von Radioimmunpharmaka durch Konjugation mit Virus-spezifischen monoklonalen Antikörpern zur Identifizierung und selektiven Elimi nation infizierter Zellen bei der chronischen Virus-Infektionen. Mit diesem Zusatzantrag werden die in den o.g. Patentanträgen beschriebenen Erfindungen um den Einsatz von Alpha-Strahlern als Komponente verschiedener Radioimmunpharmaka zur Therapie viraler Infektionen erweitert. Novel in the sense of the invention described in the main application are the use of Radioisotopes and the production of radioimmunopharmaceuticals by conjugation with Virus-specific monoclonal antibodies for identification and selective elimi nation infected cells in chronic virus infections. With this additional request are those in the above Inventions described about the use of patent applications Alpha emitters as a component of various radioimmunopharmaceuticals for therapy viral infections expanded.

Wenngleich Beta- und Alpha-Strahler bereits in die Radioimmuntherapie maligner Erkrankungen Eingang gefunden haben, so handelt es im Gegensatz dazu hier nicht nur um eine völlig neue Indikation für Radioimmunpharmaka allgemein, sondern um einen grundsätzlich anderen therapeutischen Ansatz und Anspruch für sehr spezifisch konstru ierte antivirale Präparate mit einem jeweils sehr genau definierten Einsatzgebiet. Während bei der Radioimmuntherapie maligner Erkrankungen monoklonale Antikörper gegen zelleigene, tumorspezifische Proteine verwendet werden, wurden bei den hier beschriebenen Radioimmunkonjugaten monoklonale Antikörper bzw. deren Fragmente oder andere Proteine bzw. Peptide mit therapeutischer Zielsetzung speziell gegen virale (d. h. nicht zelleigene!) und virusinduzierte (d. h. nicht Zelltyp-spezifische) Proteine beschrieben.Although beta and alpha emitters are already malignant in radioimmunotherapy Diseases have found their way, in contrast, it is not only here a completely new indication for radioimmune drugs in general, but one fundamentally different therapeutic approach and claim for very specific construct ized antiviral preparations with a very precisely defined area of application. While in radioimmunotherapy for malignant diseases, monoclonal antibodies against cell-specific, tumor-specific proteins were used in the here described radioimmunoconjugates monoclonal antibodies or fragments thereof or other proteins or peptides with a therapeutic objective, especially against viral ones (i.e. not cell-native!) and virus-induced (i.e. not cell-type specific) proteins described.

Der Gegenstand dieses Patentantrags beruht auch insofern auf einer erfinderischen Tätigkeit, als nach bester Kenntnis der Erfinder ein therapeutischer Einsatz von Radioimmunpharmaka, insbesondere als Konjugate mit Alpha-Strahlern, in der gesamten Virologie bisher nicht beschrieben wurde. Dies bedeutet insbesondere auch, daß sich die Idee zu dieser Erfindung keineswegs in naheliegender Weise aus dem Stand der Technik ergibt. Der Nutzen einer nuklearmedizinischen Therapie viraler Infektionen ergibt sich immer dann, wenn es sich um eine chronische, mit schwerwiegenden Folgeschäden verbundene virale Infektion handelt, die eine nicht unbeträchtlichen Mortalität zur Folge hat. Da sich durch antivirale und antiretrovirale Präparate in den vergangenen Jahren keine Verbesserung der Heilungsraten chronischer Virusinfektionen, wie HIV-Infektion, Hepatitis C und Hepatitis B erzielen ließen, sind grundsätzlich neuartige Therapie konzepte von größter Bedeutung.The subject of this patent application is also based on an inventive one Activity, as to the best knowledge of the inventors a therapeutic use of Radioimmune drugs, especially as conjugates with alpha emitters, throughout Virology has not been described so far. This means in particular that the Idea to this invention in no way obvious from the prior art results. The benefits of nuclear medicine therapy for viral infections are evident whenever it is chronic, with serious consequential damage associated viral infection, which results in not inconsiderable mortality Has. Because of antiviral and antiretroviral preparations in recent years no improvement in the cure rates of chronic viral infections such as HIV infection, Hepatitis C and hepatitis B are basically new types of therapy concepts of paramount importance.

Der Gegenstand des Patents ist als Pharmazeutikum gewerblich anwendbar. Die Konju gate lassen sich mit den in diesem Patentantrag beschriebenen Verfahren herstellen und nach in-vitro Untersuchung an Virus-replizierenden Zellkulturen und erfolgreicher tierex perimenteller Überprüfung an Tiermodellen (z. B. Nacktmäusen) in absehbarer Zeit für die Therapie von Infizierten zum Einsatz bringen. Dadurch könnte den weltweit schät zungsweise 100 Millionen HIV-, HBV- und HCV-Infizierten eine zusätzliche Chance auf Heilung geboten werden. The subject of the patent is industrially applicable as a pharmaceutical. The Konju gates can be manufactured using the methods described in this patent application and after in-vitro examination on virus-replicating cell cultures and successful tierex experimental review on animal models (e.g. nude mice) in the foreseeable future for use the therapy of infected people. This could make the world estimate 100 million people infected with HIV, HBV and HCV have an additional chance Healing be offered.

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Claims

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a) a monoclonal antibody or its antigen-binding fragment against a viral or virus-induced antigen expressed on the plasma membrane of virus-infected cells, or
b) a receptor molecule or a fragment of the receptor molecule with affinity for an epitope of the viral structural proteins expressed on the plasma membrane of infected cells, or
c) a fragment of the cellular receptor molecule modified by random or targeted mutagenesis with affinity for an epitope of the viral structural proteins expressed on the cell membrane of infected cells,
and that, as a radioactive component, it is an alpha emitter, preferably with a short half-life and a short range, such as, for example
d) bismuth-213 ( ²¹³ Bi),
e) Astatin-211 ( ²¹¹ At),
f) or others
contain together with pharmaceutical carriers and / or excipients.

2. A method for producing the radioimmunoconjugate according to claim 1, characterized in that

a) murine or humanized or human monoclonal antibodies are produced and conjugated with radioisotopes for therapeutic purposes,
b) fragments of these monoclonal antibodies are produced and conjugated with radioisotopes for therapeutic purposes,
c) cellular receptor molecules or their fragments are brought to expression in cell culture systems in order to then conjugate them with radioisotopes for therapeutic purposes, and
d) if necessary, targeted improvement of the antigen affinity, pharmaco dynamics, pharmacokinetics and tolerance on the receptor molecule or its synthetic fragments can be carried out using computer-aided molecular designs and molecular biological techniques.

3. Use of the radioimmunoconjugate according to claims 1 and 2 for the therapy of various viral infections, characterized in that

a) the radioimmunoconjugate specific for the respective virus isolate is administered intravenously under one to several days of stationary radiation shielding with a total body dose, preferably between 50 to 300 mCi, once or in several cycles.

4. Use of the radioimmunoconjugate according to claims 1, 2 and 3 for therapy, characterized in that

a) the treatment of an HIV infection is optionally carried out after or during standard antiretroviral therapy, or
b) the treatment of an HCV, HBV, or HDV, optionally after or during antiviral therapy with IFN-α, optionally in combination with another antiviral substance, such as ribavirin, and / or
c) that the treatment takes place before, during or after a surgical intervention (eg transplantation of a liver cirrhotically converted as a result of viral hepatitis, resection of a hepatocellular carcinoma induced by viral hepatitis, or similar interventions) and / or
d) is carried out under the protection of a stem cell transplant.