DE19818843A1 - Radio-immuno conjugate comprising an antibody and a radioactive component with short half-life and limited radiation radius, useful for treating of hepatitis C virus infections - Google Patents

Radio-immuno conjugate comprising an antibody and a radioactive component with short half-life and limited radiation radius, useful for treating of hepatitis C virus infections

Info

Publication number
DE19818843A1
DE19818843A1 DE1998118843 DE19818843A DE19818843A1 DE 19818843 A1 DE19818843 A1 DE 19818843A1 DE 1998118843 DE1998118843 DE 1998118843 DE 19818843 A DE19818843 A DE 19818843A DE 19818843 A1 DE19818843 A1 DE 19818843A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
hcv
virus
hepatitis
therapy
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
DE1998118843
Other languages
German (de)
Inventor
Wolfgang Bergter
Ingrid Corina Bergter
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE1998109785 external-priority patent/DE19809785C2/en
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to DE1998118843 priority Critical patent/DE19818843A1/en
Priority to DE19980730T priority patent/DE19980730D2/en
Priority to PCT/DE1999/001237 priority patent/WO1999055385A2/en
Priority to AU44979/99A priority patent/AU4497999A/en
Publication of DE19818843A1 publication Critical patent/DE19818843A1/en
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1006—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody the antibody being against or targeting material from viruses

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Radio-immunoconjugate (I) comprising a monoclonal anti-hepatitis C virus (HCV)-infected cell antibody (or its antigen-binding fragment), a radioactive component with short half-life and limited radiation radius, and either a receptor molecule (or its fragment) with an affinity for surface glycoproteins E1 and/or E2, or a mutated receptor molecule fragment specific for E1 and/or E2, is new.- DETAILED DESCRIPTION - Radio-immunoconjugate (I) for the in vivo elimination of virus replicating cells, comprising a monoclonal antibody (or its antigen-binding fragment) specific for the expressed viral or virus-inducing antigens on plasma membranes of hepatitis C virus (HCV)-infected cells, a radioactive component with short half-life and limited radiation radius (e.g. 131 J, 32P, 90Y or 89Sr), and either a receptor molecule (or its fragment) with an affinity for surface glycoproteins E1 and/or E2, or a a random or specifically mutated receptor molecule fragment specific for E1 and/or E2.- ACTIVITY - Anti-viral.- MECHANISM OF ACTION - None given

Description

Radioimmunpharmaka zur Therapie der Hepatitis CRadioimmunopharmaceuticals for the treatment of hepatitis C. Das Problem HCV-InfektionThe problem of HCV infection

Über 1% der Weltbevölkerung sind mit dem Hepatitis C Virus (HCV) infiziert (Böker und Manns 1997). Die akute HCV-Infektion heilt in 80% der Fälle nicht spontan, sondern nimmt einen chronischen Verlauf. Ohne Therapie kommt es bei ca. 30% der Patienten mit chronischer Hepatitis C innerhalb von 20-30 Jahren zur Ausbildung einer Leberzirrhose mit all ihren hepatischen und extrahepatischen Komplikationen: neben portaler Hypertension, Aszitesbildung, Ösophagusvarizenblutung, hepatischer Enzepha­ lopathie und hepatozellulärem Karzinom treten Kryoglobulinämien mit Arthalgien, Pruritus, Purpura, Neuropathie und Glomerulonephritis, kryoglobulinunabhängige Glomerulonephritiden, eine Sicca-Symptomatik, verschiedene Autoimmunerkrankungen und möglicherweise sogar Lymphome auf (Maier 1997, Manns und Rambusch 1997, Petry et al. 1997). Tatsächlich sterben an den Folgen der Hepatitis C-Infektion derzeit weltweit mehr Menschen als an den Folgen der HIV-Epidemie. Die Hepatitis C stellt daher ein riesiges ungelöstes soziales und gesellschaftliches Problem dar.Over 1% of the world's population is infected with the hepatitis C virus (HCV) (Boker and Manns 1997). Acute HCV infection does not heal spontaneously in 80% of cases, but takes a chronic course. Without therapy, about 30% of the Patients with chronic hepatitis C within 20-30 years to develop one Liver cirrhosis with all its hepatic and extrahepatic complications: besides portal hypertension, ascites formation, esophageal variceal bleeding, hepatic encepha lopathy and hepatocellular carcinoma occur cryoglobulinemia with arthalgia, Pruritus, purpura, neuropathy and glomerulonephritis, cryoglobulin independent Glomerulonephritis, a Sicca symptomatology, various autoimmune diseases and possibly even lymphomas (Maier 1997, Manns and Rambusch 1997, Petry et al. 1997). In fact, the consequences of hepatitis C infection are currently dying more people worldwide than the consequences of the HIV epidemic. The hepatitis C represents therefore represents a huge unsolved social and societal problem.

Als Ursache der bereits seit 1978 als Non-A-Non-B-Hepatitis bekannten Hepatitis C (Alter et al. 1978) konnte 1989 erstmals das Hepatitis C Virus (HCV) identifiziert werden (Choo et al. 1989). Das der Familie der Flaviviren zugeordnete, ca. 30-65 nm große Partikel, enthält als Genom eine einzelsträngige RNA, die für ein Polyprotein von ca. 3000 Aminosäuren Länge kodiert. Dieses wird in einem komplexen Vorgang in die drei Strukturproteine C, E1 und E2, sowie die funktionellen Proteine NS1 bis NS5 gespalten und prozessiert (Shimotohno et al. 1995). Die Reifung der Virionen erfolgt im Lumen des endoplasmatischen Retikulums und Golgi-Apparat. Von dort werden sie zur Zelloberfläche transportiert, wo sie aus der Plasmamembran aussprossen (Pozzetto et al. 1996). As the cause of hepatitis C, which has been known as non-A-non-B hepatitis since 1978 (Alter et al. 1978) was able to identify the hepatitis C virus (HCV) for the first time in 1989 (Choo et al. 1989). The 30-65 nm assigned to the flavivirus family large particles, contains a single-stranded RNA as the genome, which is responsible for a polyprotein of encoded approx. 3000 amino acids in length. This is done in a complex process three structural proteins C, E1 and E2, and the functional proteins NS1 to NS5 split and processed (Shimotohno et al. 1995). The maturation of the virions takes place in the Lumen of the endoplasmic reticulum and Golgi apparatus. From there they become Cell surface transported where they sprout from the plasma membrane (Pozzetto et al. 1996).  

Über die Integration viraler oder virus-induzierter Proteine in die Zellmembran HCV- infizierter Zellen ist bislang wenig bekannt (Selby et al. 1993). Es ist aber davon auszugehen, daß Strukturproteine wie E1 und E2, aber möglicherweise auch andere virale und virusinduzierte Proteine an der Oberfläche HCV-infizierter Zellen ausgebildet sind. Dies soll weiter unten (Seite 5 der Beschreibung) anhand zahlreicher analoger Befunde in der Literatur begründet werden.By integrating viral or virus-induced proteins into the cell membrane HCV- little is known about infected cells (Selby et al. 1993). But it is from it assume that structural proteins like E1 and E2, but possibly also others viral and virus-induced proteins are formed on the surface of HCV-infected cells are. This should be further below (page 5 of the description) using numerous analog Findings in the literature are justified.

Die virale RNA ist durch ein Nukleokapsid aus core-Proteinen (C) geschützt und von einer Lipidhülle mit den darin integrierten Oberflächenproteinen (E1 und E2) umhüllt (Zilpert und Roggendorf 1997). Mit Hilfe dieser Oberflächenmoleküle erfolgt die Adsorption des Virus vermutlich über ein von den hypervariablen Regionen teilweise unabhängiges Epitop (Rosa et al. 1996) gezielt an einen Rezeptor der Wirtszelle, möglicherweise an den LDL-Rezeptor (Seipp et al. 1997).The viral RNA is protected by a nucleocapsid from core proteins (C) and from a lipid envelope with the integrated surface proteins (E1 and E2) (Zilpert and Roggendorf 1997). With the help of these surface molecules the Adsorption of the virus presumably partially over one of the hypervariable regions independent epitope (Rosa et al. 1996) targeted to a receptor of the host cell, possibly to the LDL receptor (Seipp et al. 1997).

Der Vorgang der Adsorption kann durch Antikörper im Serum HCV-Infizierter verhindert werden. Die sogenannten neutralisierenden Epitope unterliegen aber einer lebhaften Mutationstätigkeit des Virus und sind daher derart variabel, daß ein wirksamer Schutz gegen alle Isolaten einer Quasispezies nicht aufgebaut werden kann (Farci et al. 1996). Diese ausgeprägte Variabilität erschwert unter anderem derzeit noch erheblich die Entwicklung einer HCV-Vakzine (Pozzetto et al. 1996).The process of adsorption can be infected by antibodies in serum HCV be prevented. However, the so-called neutralizing epitopes are subject to one lively mutation activity of the virus and are therefore so variable that an effective one Protection against all isolates of a quasi-species cannot be built up (Farci et al. 1996). This pronounced variability currently makes things even more difficult Development of an HCV vaccine (Pozzetto et al. 1996).

Stand der Technik: die InterferontherapieState of the art: interferon therapy

Als einzige Standardtherapie der chronischen Hepatitis C hat sich in den vergangenen Jahren die Behandlung mit Interferon-alpha (IFN-α) etabliert.The only standard therapy for chronic hepatitis C has been in the past Years of treatment with interferon-alpha (IFN-α) established.

IFN-α ist ein körpereigenes Protein, das den Zytokinen zugerechnet wird und von Monozyten und aktivierten B-Lymphozyten als Reaktion auf eine Virusinfektion gebildet wird. Rationale der HCV-Therapie sind die replikationshemmenden und immunmodula­ torischen Eigenschaften von IFN-α. Einerseits kann dieses Zytokin den viralen Replikationszyklus hemmen, andererseits kann es zytotoxische T-Zellen aktivieren, die wiederum HCV-infizierte Zellen selektiv abtöten. IFN-α is an endogenous protein that is assigned to the cytokines and by Monocytes and activated B lymphocytes formed in response to a viral infection becomes. Rationale for HCV therapy are the replication-inhibiting and immunomodulas toric properties of IFN-α. On the one hand, this cytokine can be viral Inhibit replication cycle, on the other hand, it can activate cytotoxic T cells that again selectively kill HCV infected cells.  

Derzeit werden Schemata mit 3 × 6 Mio. Einheiten IFN-α/Woche als subcutane Injektion über 3-4 Monate und bei Ansprechen für weitere 8 bis 9 Monate empfohlen (Böker und Manns 1997).Currently, schemes with 3 × 6 million units of IFN-α / week are considered subcutaneous Injection over 3-4 months and recommended for a further 8 to 9 months if responded (Böker and Manns 1997).

Probleme der InterferontherapieInterferon Therapy Problems

Nur ca. 20% der mit IFN-α behandelten, chronisch HCV-Infizierten spricht anhaltend auf die Therapie an (Zilbert und Roggendorf 1997). 80% der Patienten bleiben infiziert und müssen mit den schwerwiegenden Komplikationen der Erkrankung rechnen. Besonders schlecht reagiert der in westlichen Ländern prädominante HCV-Genotyp 1b auf eine IFN-α-Therapie. Der Grund hierfür ist bis heute nicht bekannt.Only about 20% of those chronically HCV infected with IFN-α speak persistently on therapy (Zilbert and Roggendorf 1997). 80% of the patients remain infected and face the serious complications of the disease. The HCV genotype 1b, which is predominant in western countries, responds particularly poorly for IFN-α therapy. The reason for this is still unknown.

Die Behandlungskosten für jeden der nach 3 Monaten erfolglos abgebrochenen IFN-α- Therapieversuche (< 50% der Fälle) belaufen sich derzeit auf ca. 5000 DM und in allen anderen Fällen auf ca. 20 000 DM, eingeschlossen weitere 25% Therapieversager, sog. relapser. Eine erfolgreiche IFN-α-Therapie kostet somit mehr als 50 000 DM (umge­ rechnet nach Berg und Hopf 1997).Treatment costs for each of the IFN-α- Therapy attempts (<50% of cases) are currently around 5000 DM and in all other cases to approx. DM 20,000, including another 25% treatment failure, so-called relapser. Successful IFN-α therapy therefore costs more than DM 50,000 (vice versa) based on Berg and Hopf 1997).

Ein breites Spektrum von Nebenwirkungen kann durch IFN-α ausgelöst werden (Berg und Hopf 1997). Fast immer leiden die Patienten wenigstens initial unter zum Teil schweren grippeähnliche Beschwerden, die einige Patienten sogar zum Therapieabbruch veranlassen. Nicht selten werden auch Blutbildveränderungen, Autoimmunerkrankungen, sowie neurologische und psychische Erkrankungen ausgelöst, die häufig von Seiten des Therapeuten einen Behandlungsabbruch erforderlich werden lassen.A wide range of side effects can be triggered by IFN-α (Berg and Hopf 1997). The patients almost always suffer from at least initially severe flu-like symptoms that some patients even stop therapy cause. Blood count changes, autoimmune diseases, as well as neurological and mental illnesses, which are often caused by the Therapists may need to stop treatment.

Neben der IFN-α-Monotherapie beginnt sich die Kombinationsbehandlung von IFN-α mit Ribavirin zu etablieren, die nach Berichten anderer Arbeitsgruppen (z. B. Schvarcz et al. 1995) und unseren eigenen Erfahrungen (Fetzer et al. 1997) eine höhere Ansprechrate aufweist. Grundsätzliches Problem auch dieser Therapiestrategie bleibt jedoch, daß mit einem Nukleosidanalogon wie Ribavirin nur eine geringe Hemmung der viralen Replika­ tion erzielt wird und keine Elimination des viralen Genoms (Reichard et al. 1993). In addition to IFN-α monotherapy, the combination treatment of IFN-α begins with ribavirin, which according to reports from other working groups (e.g. Schvarcz et al. 1995) and our own experience (Fetzer et al. 1997) a higher response rate having. The fundamental problem of this therapy strategy remains, however, that with a nucleoside analogue such as ribavirin has only a slight inhibition of the viral replica tion and no elimination of the viral genome (Reichard et al. 1993).  

Inzwischen zeigte sich, daß eine zunächst erfolgreich therapierte Hepatitis C auch noch nach Jahren wieder aufflammen kann (Vento et al. 1996). Das bedeutet, daß die HCV- Infektion ungeachtet des Einsatzes von IFN-α und Kombinationstherapie mit Ribavirin bislang in den meisten Fällen unheilbar ist.In the meantime it has been shown that hepatitis C, which was initially successfully treated, is also still can flare up again after years (Vento et al. 1996). This means that the HCV Infection regardless of the use of IFN-α and combination therapy with ribavirin has so far been incurable in most cases.

Die Probleme der ImpfstoffentwicklungThe problems of vaccine development

Ein wirksamer Impfstoff ist auf absehbare Zeit nicht in Sicht. HCV ist wie das humane Immundefizienzvirus HIV durch eine starke Mutagenität im Bereich seiner Oberflächen­ proteine E1 und E2 gekennzeichnet, besonders im Bereich neutralisierender Epitope. Dies ermöglicht es dem Virus als Quasispezies immer wieder den Angriffen des Immun­ systems zu entkommen. Die spontane oder therapeutisch erzielte Elimination eines HCV- Isolats geht auch nicht mit einem wirksamen immunologischen Schutz gegenüber einer Infektion mit einem anderen HCV-Isolat einher (Purcell 1997).An effective vaccine is not in sight for the foreseeable future. HCV is like the human Immunodeficiency virus HIV due to a strong mutagenicity in the area of its surfaces Proteins E1 and E2 marked, especially in the area of neutralizing epitopes. This enables the virus as a quasi-species to repeatedly attack the immune system systems to escape. The spontaneous or therapeutic elimination of an HCV Isolates also do not work with effective immunological protection against one Infection with another HCV isolate (Purcell 1997).

Die klinische Prüfung einer potentiellen Vaccine ist zudem schwierig und zeitaufwendig. Zum einen steht mit der HCV-Infektion von Schimpansen nur ein einziges, schwierig handhabbares Tiermodel zur Verfügung. Zum anderen ist die Prüfung am Menschen nicht risikolos und beansprucht zudem noch Jahre, bevor zuverlässige Aussagen zur Effizienz der Vaccinierung getroffen werden können.Clinical testing of a potential vaccine is also difficult and time consuming. For one thing, there is only one difficult problem with HCV infection in chimpanzees manageable animal model available. On the other hand, the human test not risk-free and also takes years before reliable statements about Efficiency of vaccination can be taken.

Schließlich würde selbst ein bereits heute in den Markt eingeführter HCV-Impfstoff nichts an der Tatsache ändern, daß schätzungsweise 40 Millionen Menschen weltweit HCV-infiziert blieben und einer effektiven antiviralen Therapie bedürften.After all, even an HCV vaccine that is already on the market today would not change the fact that an estimated 40 million people worldwide HCV remained infected and needed effective antiviral therapy.

Ziele neuer StrategienGoals of new strategies

Da molekularbiologische Methoden zur gezielten Elimination des HCV-Genoms in infizierten Zellen nicht in absehbarer Zeit zur Verfügung stehen werden, muß die Therapie der HCV-Infektion die Eliminierung HCV-replizierender Zellen mit zum gegenwärtigen Zeitpunkt praktikablen therapeutischen Methoden zum Ziel haben. Because molecular biological methods for the targeted elimination of the HCV genome in infected cells will not be available in the foreseeable future, the Therapy of HCV infection with the elimination of HCV replicating cells aim at practicable therapeutic methods at the present time.  

Die LösungThe solution

Erfindungsgemäß wird dieses Problem in Analogie zu dem im Hauptantrag vom 08.03.1998 beschriebenen Radioimmunpharmakon zur Behandlung der HIV-1-Infektion (Aktenzeichen 198 09 785.9) und zu den im Zusatzantrag vom 15.04.1998 beschriebe­ nen CD4-Radioimmunpaharmaka durch die in den Patentansprüchen 1 und 2 aufgeführten Konjugate aus einem monoklonalen Antikörper oder dessen Antigen­ bindendes Fragment, bzw. dem Rezeptormolekül des HCV oder einem Fragment dessen und den genannten Radioisotopen gelöst.According to the invention, this problem is analogous to that in the main application of 08.03.1998 described radioimmuno-pharmaceutical for the treatment of HIV-1 infection (File number 198 09 785.9) and to those described in the additional application of April 15, 1998 NEN CD4 radioimmunopharmaceuticals by the in claims 1 and 2 conjugates listed from a monoclonal antibody or its antigen binding fragment, or the receptor molecule of the HCV or a fragment thereof and the radioisotopes mentioned.

Rationale der RadioimmuntherapieRationale for radioimmunotherapy 1. Radioimmunpharmaka auf der Basis von Immunglobulinen1. Radio immunopharmaceuticals based on immunoglobulins

Grundlage einer Radioimmuntherapie der Hepatitis C mit Immunglobulin-Konjugaten ist, daß HCV-Antigene oder HCV-induzierte Antigene in die äußere Membran infizierter Zellen integriert werden. Dies ist eine Eigenschaft, die auch für andere Flaviviren (Westaway und Goodman 1987, Ng et al. 1992), sowie HSV (Schlehofer et al. 1979), Influenza-Viren (Boulan et al. 1980, Ciampor et al. 1981, Kohama et al. 1981, Hughey et al. 1992), Rabies-Viren (Revilla-Monsalve et al. 1985), EBV (Liebowitz et al. 1986), HBV (Saito et al. 1992, Gerber et al. 1988, Chu et al. 1997) und HIV (Timar et al. 1986, Rusche et al. 1987, Feremans et al. 1988, Desportes et al. 1989, Ikuta et al. 1989, Dennin et al. 1991, Dudhane et al. 1996) belegt ist.The basis of radioimmunotherapy for hepatitis C with immunoglobulin conjugates is that HCV antigens or HCV-induced antigens are infected in the outer membrane Cells are integrated. This is a property that is common to other flaviviruses (Westaway and Goodman 1987, Ng et al. 1992), and HSV (Schlehofer et al. 1979), Influenza viruses (Boulan et al. 1980, Ciampor et al. 1981, Kohama et al. 1981, Hughey et al. 1992), Rabies viruses (Revilla-Monsalve et al. 1985), EBV (Liebowitz et al. 1986), HBV (Saito et al. 1992, Gerber et al. 1988, Chu et al. 1997) and HIV (Timar et al. 1986, Rusche et al. 1987, Feremans et al. 1988, Desportes et al. 1989, Ikuta et al. 1989, Dennin et al. 1991, Dudhane et al. 1996) is documented.

Die immunologisch wirksame Komponente des Radioimmunkonjugats - ein monoklo­ naler Antikörper oder dessen Antigen-bindendes Fragment - soll nun ein Epitop der postulierten viralen bzw. virusinduzierten Antigenen auf der Plasmamembran HCV exprimierender Zellen erkennen und daran binden.The immunologically active component of the radioimmunoconjugate - a monoclo nal antibody or its antigen-binding fragment - is now an epitope of the postulated viral or virus-induced antigens on the plasma membrane HCV recognize and bind to expressing cells.

Besonders geeignet sind Antikörper gegen ein möglichst stark konserviertes Epitop auf den Proteinen E1 oder E2, oder gegen das von der NS2-Region kodierte Transmem­ branprotein des HCV (Santolini et al. 1995). Das an den monoklonalen Antikörper bzw. dessen Fab-Fragment konjugierte Radioisotop - vorzugsweise ein Beta-Strahler mit geringer Reichweite und kurzer Halbwertszeit schädigt dann gezielt die HCV-replizie­ rende Zelle.Antibodies against a highly preserved epitope are particularly suitable the proteins E1 or E2, or against the transmeme encoded by the NS2 region HCV branch protein (Santolini et al. 1995). The monoclonal antibody or  whose Fab fragment conjugated radioisotope - preferably a beta emitter Short range and short half-life then specifically damage HCV replication cell.

2. Radioimmunpharmaka auf der Basis von Rezeptormolekülen der Wirtszelle2. Radioimmunopharmaka based on receptor molecules of the host cell

Hintergrund einer Radioimmuntherapie der Hepatitis mit Zellrezeptor-Konjugaten ist neben der postulierten Exprimierung virale Proteine auf der Oberfläche HCV-infizierter Zellen auch, daß die Adsorption von HCV an die Wirtszellen gezielt über einen Rezeptor auf der Zellmembran vermittelt wird. Dies ist naheliegend, da HCV offensichtlich sehr selektiv Hepatozyten infiziert. Außerdem ist eine Rezeptor-vermittelte Adsorption bereits für zahlreiche andere Viren, beispielsweise bei HIV (Dalgleish et al. 1984), EBV (Fingeroth et al. 1984), Polioviren (Leon-Monzon et al. 1995), Rabiesviren (Lentz et al. 1986), Influenza-C-Viren (Nishimura et al. 1988), Masern-Viren (Dorig et al. 1993) HAV (Kaplan et al. 1996), HSV (Whitbeck et al. 1997), HBV (Treichel et al. 1997), Coxsackie B3 (Shafren et al. 1997) und Adenoviren (Bergelson et al. 1998), um nur einige zu nennen.Background of a radioimmunotherapy of hepatitis with cell receptor conjugates is in addition to the postulated expression of viral proteins on the surface of HCV-infected Cells also target the adsorption of HCV to the host cells through a receptor is mediated on the cell membrane. This is obvious since HCV is obviously very selectively infected hepatocytes. It is also a receptor-mediated adsorption already for numerous other viruses, for example with HIV (Dalgleish et al. 1984), EBV (Fingeroth et al. 1984), polioviruses (Leon-Monzon et al. 1995), rabies viruses (Lentz et al. 1986), influenza C viruses (Nishimura et al. 1988), measles viruses (Dorig et al. 1993) HAV (Kaplan et al. 1996), HSV (Whitbeck et al. 1997), HBV (Treichel et al. 1997), Coxsackie B3 (Shafren et al. 1997) and adenoviruses (Bergelson et al. 1998) to only to name a few.

Das zelluläre Rezeptormolekül für HCV könnte der LDL-Rezeptor sein (Seipp et al. 1997). Rekombinante Rezeptormoleküle würden an die auf der Oberfläche infizierter Zellen exprimierten viralen Antigene binden und in der oben geschilderten Weise Radioisotope an die infizierte Zelle koppeln.The cellular receptor molecule for HCV could be the LDL receptor (Seipp et al. 1997). Recombinant receptor molecules would become infected on the surface Cells express and bind viral antigens in the manner described above Couple radioisotopes to the infected cell.

3. Therapeutischer Einsatz von Radioisotopen3. Therapeutic use of radioisotopes

Die Wirkungen radioaktiver Strahlung auf Zellen und genetisches Material sind hinreichend belegt (Übersichten in: Kauffmann et al. 1996, Sauer 1998). Die Grundlage der strahlenbiologischen Wirkungen stellt die strukturelle Schädigung der genetischen Information dar, in diesem Fall die Schädigung der hepatozellulären DNA. Derart veränderte zelluläre DNA kodiert fehlerhafte Proteine, die ihre Funktion einbüßen. So verlieren nicht nur Enzyme, die für die HCV-Replikation unentbehrlich sind, ihre Funktion, sondern es kommt darüber hinaus auch zu Stoffwechselveränderungen in der HCV-infizierten Zelle. Dies führt zur Eliminierung der HIV-infizierten Zellen durch reproduktiven Zelltod oder Apoptose. Darüber hinaus können Viren durch ionisierende Strahlung auch direkt inaktiviert werden (Follea et al. 1996).The effects of radioactive radiation on cells and genetic material are adequately documented (reviews in: Kauffmann et al. 1996, Sauer 1998). The basis of the radiation biological effects represents the structural damage to the genetic Information, in this case the damage to the hepatocellular DNA. Such Modified cellular DNA encodes faulty proteins that lose their function. So Not only do enzymes that are essential for HCV replication lose theirs Function, but there are also metabolic changes in the  HCV infected cell. This leads to the elimination of the HIV-infected cells reproductive cell death or apoptosis. Viruses can also be caused by ionizing Radiation can also be directly inactivated (Follea et al. 1996).

Die Behandlung mit Radioisotopen ist bereits als Radiojodtherapie aus der Behandlung benigner und maligner Schilddrüsenerkrankungen in Deutschland seit über 50 Jahren bekannt. Diese stellt das bedeutendste Verfahren der nuklearmedizinischen Therapie dar und hat sich als überraschend nebenwirkungsarm erwiesen. Spätkomplikationen, insbesondere eine Malignominduktion, konnten bis heute nicht nachgewiesen werden (Moser 1996, Reiners 1997).Treatment with radioisotopes is already out of treatment as radioiodine therapy Benign and malignant thyroid diseases in Germany for over 50 years known. This is the most important method of nuclear medicine therapy and has proven to be surprisingly low in side effects. Late complications, Malignancy induction in particular has not been demonstrated to date (Moser 1996, Reiners 1997).

Neuere Therapiemöglichkeiten mit Radioisotopen ergeben sich inzwischen außerdem mit 131J-markiertem Meta-Jodo-Benzyl-Guanidin (MIBG) bei der Behandlung metastasierter Phäochromozytome und Neuroblastome, durch die Radiosynoviorthese bei der rheumati­ schen Arthritis, durch intrakavitäre Instillation von 90Y-Silikat bei Pleura- oder Perito­ nealkarzinose, bei der palliativen Schmerztherapie von Skelettmetastasen mit knochen­ affinen Substanzen wie 89Sr, oder durch die Radiophosphorbehandlung der Polycythae­ mia vera (Moser 1996).Newer therapeutic options with radioisotopes are now also available with 131 J-labeled meta-iodo-benzyl-guanidine (MIBG) in the treatment of metastatic pheochromocytomas and neuroblastomas, through the radiosynoviorthesis in rheumatoid arthritis, through intracavitary instillation of 90 Y silicate in pleura - or peritoneal cancer, in the palliative pain therapy of skeletal metastases with bone-affine substances such as 89 Sr, or by the radiophosphorus treatment of polycythae mia vera (Moser 1996).

In der klinischen Prüfung befindet sich derzeit eine Therapie mit 131J-markiertem anti- CEA IgG beim kolorektalen Karzinom (Blumenthal et al. 1992, Blumenthal 1994), beim B-Zell-Lymphom (Kaminski et al 1993, Press et al. 1993, Press et al. 1995, Press et al. 1995).Clinical testing is currently on therapy with 131 J-labeled anti-CEA IgG for colorectal carcinoma (Blumenthal et al. 1992, Blumenthal 1994), for B-cell lymphoma (Kaminski et al 1993, Press et al. 1993, Press et al. 1995, Press et al. 1995).

Unter onkologischen Gesichtspunkten wird Bestrahlung auch erfolgreich zur Therapie des AIDS-assoziierten Kaposi-Sarkoms eingesetzt, das durch das Humane Herpes-Virus 8 (HHV 8) induziert wird (Conill et al. 1997).From an oncological point of view, radiation is also a successful therapy of AIDS-related Kaposi's sarcoma, caused by the human herpes virus 8 (HHV 8) is induced (Conill et al. 1997).

Der gezielte Einsatz von freien Radioisotopen zur Behandlung von Infektionen ist hingegen bislang nicht erprobt worden. Er findet seine Legitimation aber in der Therapie solcher Infektionskrankheiten, die durch ihren chronischen Verlauf, die Häufigkeit und Schwere ihrer Folgeerkrankungen und eine mangelhafte konventionelle Therapierbarkeit charakterisiert sind. The targeted use of free radioisotopes for the treatment of infections is however, has not been tried so far. He finds his legitimation in therapy of such infectious diseases, characterized by their chronic course, frequency and Severity of their complications and poor conventional therapies are characterized.  

Herstellungsverfahrenproduction method 1. Radioimmunpharmaka auf der Basis von monoklonalen Antikörpern1. Radioimmunopharmaka based on monoclonal antibodies

Identifizierung und Reinigung zellmembrangebundener viraler Proteine oder Peptide sind Stand der Technik (Eckert und Kartenbeck 1997) Die Methoden zur Herstellung muriner, humanisierter und humaner monoklonaler Antikörper sowie die Präparation Antigen-bindender mAk-Fragmente sind bekannt (Peters und Baumgarten 1990, Lidell und Weeks 1996). Die Entwicklung virusspezifischer monoklonaler Antikörper und die Überprüfung ihrer Kreuzreagibilitäten sind Grundlagen virologischer Forschungsarbeiten (Bergter 1990).Identification and purification of cell membrane bound viral proteins or peptides State of the art (Eckert and Kartenbeck 1997) The methods of manufacture murine, humanized and human monoclonal antibodies and the preparation Antigen-binding mAb fragments are known (Peters and Baumgarten 1990, Lidell and Weeks 1996). The development of virus-specific monoclonal antibodies and the Checking their cross-sensitivities is the basis of virological research (Bergter 1990).

Identifizierung und Isolierung viraler und virusinduzierter Antigene aus der Plasmamem­ bran infizierter Zellen und die Erzeugung monoklonaler Antikörper sollen im Beispiel 1 skizziert werden.Identification and isolation of viral and virus-induced antigens from the plasma membrane Bran infected cells and the generation of monoclonal antibodies are described in Example 1 be outlined.

Beispiel 1example 1

Durch immunhistologische und elektronenmikroskopische Voruntersuchungen kann zunächst geklärt werden, ob prinzipiell HCV-Proteine in die Zellmembran infizierter Zellen integriert sind, die einer Radioimmuntherapie zugänglich wären. Dazu wird beispielsweise die Bindung von virusspezifischen Antikörpern an HCV-infizierten Hepatozyten durch Inkubation mit markierten murinen monoklonalen Antikörpern fluoresazenzmikroskopisch oder elektronenmikroskopisch nachgewiesen (Payne et al. 1990, Stirling 1990, Kaito et al. 1994, Sabri et al. 1997).Through preliminary immunohistological and electron microscopic examinations First of all, it should be clarified whether HCV proteins are principally infected in the cell membrane Cells are integrated that would be accessible to radioimmunotherapy. This will for example the binding of virus-specific antibodies to HCV-infected Hepatocytes by incubation with labeled murine monoclonal antibodies detected by fluorescence microscopy or electron microscopy (Payne et al. 1990, Stirling 1990, Kaito et al. 1994, Sabri et al. 1997).

Lassen sich derartige Antigene in der Zytoplasmamembran nachweisen, muß geklärt werden, um welche Antigene es sich im einzelnen handelt. Hierzu müssen HCV-infizierte Zellen lysiert werden und die Membranproteine gelelektrophoretisch aufgetrennt, auf Nitrozellulose geblottet und mit Antiseren oder murinen monoklonalen Antikörpern analysiert werden. If such antigens can be detected in the cytoplasmic membrane, this has to be clarified which antigens are involved. For this, HCV infected Cells are lysed and the membrane proteins separated by gel electrophoresis Blotted nitrocellulose and with antisera or murine monoclonal antibodies to be analyzed.  

Für die Immunisierung und Gewinnung monoklonaler Antikörper ist die Reinigung der gefundenen, in die Zellmembran integrierten, viralen oder virusinduzierten Antigene erforderlich. Dazu kann HCV z. B. in DAUDI-Zellen (Nakajima et al. 1996) kultiviert und aus dem Zellkulturüberstand isoliert werden. Im folgenden Schritt werden die Zellen und Zelltrümmer abzentrifugiert. Anschließend kann HCV aus dem gereinigten Überstand durch Zentrifugation bei 27 000 × g sedimentiert werden. Das Viruspellet kann dann in Probenpuffer resuspendiert und gelelektrophoretisch aufgetrennt werden. Schließlich kann die Antigenfraktion isoliert werden, die dem gesuchten Antigen auf der Plasmamembran entspricht. Dieses Antigen kann zur Immunisierung von Mäusen und Herstellung monoklonaler Antikörper verwendet werden.For the immunization and production of monoclonal antibodies, the cleaning of the found, integrated into the cell membrane, viral or virus-induced antigens required. For this HCV z. B. cultivated in DAUDI cells (Nakajima et al. 1996) and isolated from the cell culture supernatant. In the next step, the cells and centrifuged cell debris. HCV can then be purified from the The supernatant can be sedimented by centrifugation at 27,000 × g. The virus pellet can then be resuspended in sample buffer and separated by gel electrophoresis. Finally, the antigen fraction can be isolated that the antigen sought on the Corresponds to plasma membrane. This antigen can be used to immunize mice and Production of monoclonal antibodies can be used.

Die erzeugten monoklonalen Antikörper sollten im ELISA, Immunoblot und RIPA auf Kreuzreaktivitäten mit verschiedenen HCV-Isolaten überprüft werden. Der geeignete monoklonale Antikörper würde idealerweise eine breite Kreuzreaktivität und damit die gesamte Quasispezies eines HCV-Infizierten sicher erfassen.The monoclonal antibodies generated should be on in ELISA, immunoblot and RIPA Cross reactivities with different HCV isolates are checked. The right one monoclonal antibodies would ideally have a broad cross-reactivity and thus the Detect the entire quasi-species of an HCV infected person.

Kann ein derartiger monoklonaler Antikörper nicht gewonnen werden, müssen Genotyp­ spezifische monoklonale Antikörper hergestellt werden, die dann gezielt zur Therapie des im Einzelfall nachgewiesenen HCV-Genotyps eingesetzt werden könnten.If such a monoclonal antibody cannot be obtained, the genotype must be obtained specific monoclonal antibodies are produced, which are then used specifically for the therapy of proven HCV genotype could be used in individual cases.

Für die Radioimmuntherapie kommen sowohl murine, als auch humane bzw. humani­ sierte monoklonale Antikörper und ggf. deren Antigen-bindende Fab-Fragmente in Frage.For radioimmunotherapy, both murine and human or humanized monoclonal antibodies and, where appropriate, their antigen-binding F ab fragments are suitable.

2. Herstellung von Radioimmunpharmaka auf der Basis von Wirtsrezeptormolekulen2. Production of radioimmunopharmaceuticals based on host receptor molecules

Für eine ganze Reihe von Viren wurden inzwischen zelluläre Rezeptormoleküle identifi­ ziert, die die Adsorption der Viren an die Oberfläche von Wirtszellen vermitteln. Der zelluläre Rezeptor für HCV ist möglicherweise der LDL-Rezeptor (Seipp et al. 1997).Cellular receptor molecules have now been identified for a whole range of viruses adorned, which mediate the adsorption of viruses on the surface of host cells. Of the cellular receptor for HCV may be the LDL receptor (Seipp et al. 1997).

Die Methoden zur Identifizierung und Gewinnung solcher Rezeptormoloküle gehört zum Stand der Technik. Das Vorgehen soll im Beispiel 2 beschrieben werden. The methods for identifying and obtaining such receptor molecules are part of State of the art. The procedure is to be described in Example 2.  

Beispiel 2Example 2

HCV wird gelelektrophoretisch aufgetrennt, so daß die viralen Antigene isoliert werden können. An Lebergewebe und Zellkultursystemen können dann Bindungsstudien durchgeführt werden und der gesuchte, für die Adsorption von HCV an Hepatozyyten verantwortliche zelluläre Rezeptor identifiziert werden (Dorig et al. 1993, Treichel et al. 1997). Dieser Rezeptor kann mit etablierten Methoden isoliert (Suzuki et al. 1983) und das Bindungsepitop eingehender analysiert werden, indem die Bindung des Antigens an einzelnen Spaltprodukten analysiert wird. Das Rezeptormolekül kann schließlich kloniert werden (Bergelson et al. 1998) und so in großem Maßstab für die Konjugation mit einem Radioisotop und den therapeutischen Einsatz weiter verarbeitet werden.HCV is separated by gel electrophoresis so that the viral antigens are isolated can. Binding studies can then be carried out on liver tissue and cell culture systems be carried out and the searched for the adsorption of HCV on hepatocytes responsible cellular receptor can be identified (Dorig et al. 1993, Treichel et al. 1997). This receptor can be isolated using established methods (Suzuki et al. 1983) and The binding epitope can be analyzed in more detail by binding the antigen individual fission products is analyzed. The receptor molecule can finally be cloned (Bergelson et al. 1998) and thus on a large scale for conjugation with a Radioisotope and therapeutic use can be processed further.

3. Konjugation geeigneter Radioisotope3. Conjugation of suitable radioisotopes

Die monoklonalen Antikörper oder Wirtsrezeptormoleküle sollen mit einem Radioisotop konjugiert werden. Geeignet erscheinen Radioisotope, die bereits erfolgreich in die nuklearmedizinische Therapie eingeführten wurden, d. h. kurzlebigen β-Strahler wie 131J, 32P, 90Y und 89Sr. Die Konjugation solcher Isotope an Proteine ist hinreichend beschrie­ ben und Stand der Technik (Übersicht in: Eckert und Kartenbeck 1996). Das Vorgehen soll im Beispiel 3 exemplarisch dargestellt werden.The monoclonal antibodies or host receptor molecules are to be conjugated to a radioisotope. Radioisotopes that have already been successfully introduced into nuclear medicine therapy, ie short-lived β-emitters such as 131 J, 32 P, 90 Y and 89 Sr, appear suitable. The conjugation of such isotopes to proteins is adequately described and the state of the art (overview in: Eckert and Kartenbeck 1996). The procedure is to be exemplified in Example 3.

Beispiel 3Example 3

Geeignete monoklonale Antikörper oder Rezeptormoleküle können zu therapeutischen Zwecken mit Hilfe der Chloramin T-Methode (Hunter und Greenwood 1962) nach der Anleitung von Eckert und Kartenbeck 1997 radioaktiv konjugiert werden. Hierzu wird ein Radioisotop wie 131J kurzzeitig durch das von Chloramin T (N-Chlor-p-Toluen-4- sulfonamid, Na-Salz) in wässrigem Medium freigesetzte Hypochlorit oxidiert wird. Das stark elektrophile Radioisotop bindet dann in diesem Zustand vorzugsweise an die Benzolringe des im Protein enthaltenen Tyrosins. Zur Schonung der monoklonalen Anti­ körper bzw. Rezeptormoleküle wird diese Reaktion nach kurzer Inkubationszeit mit einem Überschuß an Bisulfit beendet, wobei sowohl das restliche Chloramin T als auch oxidierte, aber noch ungebundene Radioisotope reduziert und damit inaktiviert werden. Gelelektrophoretisch kann das mAk-Radioisotop-Konjugat schließlich isoliert und zur intravenösen Verwendung mit entsprechenden Hilfsstoffen weiter aufgearbeitet werden.Suitable monoclonal antibodies or receptor molecules can be radioactively conjugated for therapeutic purposes using the chloramine T method (Hunter and Greenwood 1962) according to the instructions of Eckert and Kartenbeck 1997. For this purpose, a radioisotope such as 131 J is briefly oxidized by the hypochlorite released by chloramine T (N-chloro-p-toluen-4-sulfonamide, Na salt) in an aqueous medium. In this state, the strongly electrophilic radioisotope then binds preferably to the benzene rings of the tyrosine contained in the protein. To protect the monoclonal antibodies or receptor molecules, this reaction is ended after a short incubation period with an excess of bisulfite, with both the remaining chloramine T and oxidized but still unbound radioisotopes being reduced and thus inactivated. The mAb-radioisotope conjugate can finally be isolated by gel electrophoresis and further processed for intravenous use with appropriate auxiliaries.

Präklinische UntersuchungenPreclinical examinations

Zunächst sollen in-vitro-Untersuchungen zeigen, ob und mit welcher Affinität die Radioimmunkonjugate über die Antigenbindungsstelle der monoklonalen Antikörper oder Wirtsrezeptormoleküle an die entsprechenden Epitope viraler, in die Zellmembran integrierter Proteine HCV-replizierender Zellen binden und ob die Zellen durch die Radioisotop-vermittelte Bestrahlung geschädigt werden. Diese Untersuchungen können mit Antigen-exprimierenden Zellen durchgeführt werden.First of all, in vitro investigations should show whether and with what affinity the Radioimmunoconjugates via the antigen binding site of the monoclonal antibodies or host receptor molecules to the corresponding viral epitopes, in the cell membrane integrated proteins bind HCV-replicating cells and whether the cells through the Radioisotope-mediated radiation can be damaged. These examinations can with antigen-expressing cells.

Bei HCV-infizierten Schimpansen (Tabor et al. 1978, Walker et al. 1997) könnten im nächsten Schritt präklinische in-vivo-Untersuchungen zur Wirksamkeit der Radio­ immuntherapie erfolgen, bevor die klinische Anwendung bei HCV-infizierten Patienten geprüft wird.In HCV-infected chimpanzees (Tabor et al. 1978, Walker et al. 1997) next step preclinical in vivo studies on the effectiveness of radio Immunotherapy is done before clinical use in HCV infected patients is checked.

Anwendung am Patienten: Therapeutische VoraussetzungenUse on patients: therapeutic requirements

Die kurze Halbwertszeit der Radionuklide 131J, 32P, 90Y und 89Sr macht eine zen­ trumsnahe Präparation bzw. schnellen Transport des Radioimmunkonjugats erforderlich. Voraussetzung für die Therapie von Patienten mit viralen Hepatitiden durch kurzlebige Radionuklide ist daher die Einrichtung spezialisierter interdisziplinärer Zentren, in denen neben einer fachgerechten Therapie HCV-Infizierter auch die zeitgerechte Applikation des Radioimmunkonjugates unter strahlenschutzrechtlichen Aspekten gewährleistet ist.The short half-life of the radionuclides 131 J, 32 P, 90 Y and 89 Sr requires preparation close to the center or rapid transport of the radioimmunoconjugate. The prerequisite for the therapy of patients with viral hepatitis by short-lived radionuclides is the establishment of specialized interdisciplinary centers, in which, in addition to professional therapy for HCV-infected people, the timely application of the radioimmuno-conjugate is also guaranteed under radiation protection aspects.

Mögliche Voraussetzung einer erfolgreichen Therapie kann auch die prätherapeutische Verminderung der Viruslast sein, die durch Vorbehandlung des Patienten mit IFN-α oder einer antiviralen Substanz, wie dem Nukleosidanalogon Ribavirin, als Monotherapie, ggf. auch eine Kombinationstherapie mit diesen Präparaten erreicht werden kann. Dadurch gelangt eine höhere Dosis des Radioimmunpharmakons an die Virus-replizierenden Zellen, wodurch der therapeutische Effekt verbessert wird. Anderenfalls würde das Radioimmunpharmakon möglicherweise von freien Viruspartikeln abgefangen und die zytotoxische Wirkung vermindert werden.A possible prerequisite for successful therapy can also be pre-therapeutic Reduction in viral load may be due to patient pretreatment with IFN-α or an antiviral substance, such as the nucleoside analogue ribavirin, as monotherapy, if necessary combination therapy with these preparations can also be achieved. Thereby  a higher dose of the radioimmune drug reaches the virus-replicating Cells, which improves the therapeutic effect. Otherwise it would Radioimmune drug may be intercepted by free virus particles and that cytotoxic effect can be reduced.

Vor Applikation eines auf 131J basierenden Präparats muß außerdem eine Schilddrüsen­ diagnostik und Schilddrüsenblockade nach üblichem Schema erfolgen.Before applying a 131 J-based preparation, thyroid diagnosis and thyroid blockage must also be carried out according to the usual scheme.

Für die Radioimmuntherapie ist voraussichtlich eine mehrtägige stationäre Unterbringung erforderlich, um den Patienten bis zum Abklingen der Strahlung von der Umgebung abzuschirmen. Das Radioimmunpharmakon kann peripher- oder zentralvenös als Bolus, Kurzinfusion oder Dauertherapie über mehrerer Tage mit einer Dosis von voraussichtlich 100-300 mCi appliziert werden. Die Gabe erfolgt einmalig oder in Form von Zyklen im mehrwöchigen Abstand. Gegebenenfalls ist bei bestehender Überempfindlichkeit gegen­ über dem monoklonalen Antikörper oder das Rezeptormolekül unmittelbar vor Applika­ tion des Präparates eine Vorbehandlung mit einem Glukokortikoid, einem Antihistamini­ kum und einem H2-Antagonisten erforderlich Lorenz 1994).Radioimmunotherapy is likely to require hospitalization over several days to shield the patient from the environment until the radiation has decayed. The radioimmuno-pharmaceutical can be administered peripherally or centrally as a bolus, short infusion or continuous therapy over several days with a dose of probably 100-300 mCi. The dose is given once or in the form of cycles at intervals of several weeks. If there is hypersensitivity to the monoclonal antibody or the receptor molecule, pretreatment with a glucocorticoid, an antihistamine and an H 2 antagonist is required immediately before application of the preparation (Lorenz 1994).

Nach Applikation des Radioimmunpharmakons muß vorübergehend theoretisch mit hepatischen und hämatologischen Nebenwirkungen sowie einem erhöhtem Risiko für opportunistische Infektionen gerechnet werden. Gegebenenfalls ist aus diesem Grund die in diesem Patentantrag beschriebene Radioimmuntherapie mit einer Stammzelltransplan­ tation zu verbinden.After application of the radioimmunopharmaceutical, theoretically, temporarily hepatic and haematological side effects and an increased risk of opportunistic infections can be expected. For this reason, if necessary radioimmunotherapy with a stem cell transplant described in this patent application tation to connect.

Die mit diesen Radioimmunkonjugaten erzielte VorteileThe advantages achieved with these radioimmuno-conjugates

Der bedeutendste Vorteil einer Therapie mit den diesem Patentantrag beschriebenen Radioimmunkonjugaten gegenüber der aktuellen IFN-α-Therapie besteht darin, daß HCV-infizierte Zellen direkt geschädigt und eliminiert werden, wodurch die Chance auf eine komplette Heilung deutlich steigt. Dies dürfte auch dem durch die HCV-Rezidiv­ problematik belasteten Verfahren der Lebertransplantation bei HCV-bedingter Leber­ zirrhose neue Impulse geben. The most important advantage of therapy with the described in this patent application Radioimmunoconjugates compared to current IFN-α therapy is that HCV-infected cells are directly damaged and eliminated, giving the chance of a complete healing increases significantly. This is also likely to be due to the HCV relapse Liver transplantation procedures for HCV-related liver cirrhosis give new impulses.  

Ein zweiter Vorteil ist, daß die HCV-infizierten Zellen weitgehend selektiv geschädigt werden. Die Radioimmunkonjugate binden spezifisch mit Hilfe des mAk-Anteils an ein auf der HCV-infizierten Zelle exponiertes virales Protein und geben ihre Strahlung direkt an die Zelle ab.A second advantage is that the HCV-infected cells are largely selectively damaged become. The radioimmunoconjugates bind specifically with the help of the mAb component Exposed viral protein on the HCV-infected cell and give their radiation directly to the cell.

Ein weiterer Vorteil der hier beschriebenen Konjugate ist, daß es bei Spezifität für das postulierte, die Infektiosität determinierende, hoch konservierte Epitop des HCV zur Behandlung eines breiten Spektrums von HCV-Isolaten geeignet wäre. Dies ist angesichts der Mutationsfreudigkeit der Hepatitis C Viren sehr wichtig.Another advantage of the conjugates described here is that it is specific for the postulated that the infectivity determining, highly conserved epitope of the HCV Treatment of a wide range of HCV isolates would be suitable. This is very important given the willingness to mutate the hepatitis C virus.

Vorteilhaft ist auch, daß die Wirksamkeit des Präparats nicht von einer Virus neutrali­ sierenden Wirkung des verwendeten mAk abhängig ist, wenngleich diese Eigenschaft zusätzlich wünschenswert wäre.It is also advantageous that the effectiveness of the preparation is not neutralized by a virus dependent effect of the mAb used, although this property would also be desirable.

Schließlich liegt ein großer Vorteil in der zur üblichen antiviralen Therapie vergleichs­ weise guten subjektiven Verträglichkeit und der bekannten Nebenwirkungsarmut radioimmunologischer Therapien. Die Strahlungsenergie eines α- oder β-Strahlers wie 131J besitzt eine Reichweite von einem bis zu 40 Zelldurchmessern hat. Maligne Trans­ formationen gesunder Zellen als Folge einer Strahlenschädigung sind aber extrem selten und statistisch kaum zu erfassen. Wird eine gesunde Zelle geschädigt, so verliert sie ebenfalls in den meisten Fällen ihre Teilungsfähigkeit und es tritt der reproduktive oder der programmierte Zelltod (Apoptose) ein. Die Bestrahlung umliegender gesunder Zellen spielt bei der Radioimmuntherapie HIV-infizierter T-Lymphozyten auch deswegen eine untergeordnete Rolle, weil sich diese Zellen überwiegend in der Zirkulation befinden und gesunde Zellen daher nur kurzzeitig einer Strahlenbelastung ausgesetzt sind.Finally, there is a great advantage in the subjective tolerance, which is comparatively good compared to the usual antiviral therapy, and the known low side effects of radioimmunological therapies. The radiation energy of an α or β emitter such as 131 J has a range of up to 40 cell diameters. Malignant transformations of healthy cells as a result of radiation damage are extremely rare and can hardly be recorded statistically. If a healthy cell is damaged, it also loses its ability to divide in most cases and reproductive or programmed cell death (apoptosis) occurs. The radiation of surrounding healthy cells also plays a subordinate role in the radioimmunotherapy of HIV-infected T-lymphocytes because these cells are mainly in the circulation and healthy cells are therefore only briefly exposed to radiation.

Als vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung kann sich die Verwendung humanisierter bzw. humaner monoklonaler Antikörper erweisen, wodurch die Immunogenität muriner mAk-Konjugate umgangen werden kann. Diese kann sich andererseits aber auch als sinnvoll erweisen, wenn es gilt, das Immunsystem zusätzlich gegenüber der HCV-Infek­ tion zu sensibilisieren. An advantageous embodiment of the invention can be the use of humanized or human monoclonal antibodies prove, whereby the immunogenicity murine mAb conjugates can be avoided. On the other hand, this can also be seen as prove sensible when it comes to the immune system in addition to the HCV infection to raise awareness.  

Eine andere vorteilhafte Ausgestaltung betrifft die Verwendung Antigen-bindender mAk- Fragmente als immunologisch wirksame Komponente der Radioimmunkonjugate, um durch die geringere Molekülgröße eine bessere Gewebegängigkeit zu erzielen.Another advantageous embodiment relates to the use of antigen-binding mAb Fragments as an immunologically active component of the radioimmuno-conjugates in order to achieve better tissue mobility due to the smaller molecular size.

Neuartig im Sinne der Erfindung sind der Einsatz von Radioisotopen und die Herstellung von Radioimmunpharmaka durch Konjugation mit HCV-spezifischen monoklonalen Antikörpern zur Identifizierung und selektiven Elimination HCV-replizierender Zellen bei der chronischen HCV-Infektion.Novel in the sense of the invention are the use of radioisotopes and the production of radioimmune drugs by conjugation with HCV-specific monoclonals Antibodies to identify and selectively eliminate HCV replicating cells chronic HCV infection.

Der Gegenstand dieses Patentantrags beruht insofern auf einer erfinderischen Tätigkeit, als nach bester Kenntnis des Erfinders seit der Entdeckung des HCV (Choo et al. 1989) der therapeutische Einsatz radioaktiv konjugierter mAk nicht erwogen wurde. Dies bedeutet insbesondere auch, daß sich die Idee zu dieser Erfindung keineswegs in nahelie­ gender Weise aus dem Stand der Technik ergibt. Letztendlich handelt es sich bei der nuklearmedizinischen Behandlung einer Infektionskrankheit wie bereits im Hauptantrag ausgeführt um ein bislang unbekanntes und nicht zum Stand der Technik gehörendes Verfahren. Der Nutzen einer nuklearmedizinischen Therapie von HCV-Infektionen ergibt sich allein daraus, daß es sich bei dieser Virusinfektion um eine chronische, mit schwer­ wiegenden Folgeschäden verbundene virale Infektion handelt, und dadurch eine nicht unbeträchtlichen Mortalität zur Folge hat. Da sich durch Dosismodifikationen bei IFN-α- Mono- und Kombinationstherapien in den vergangenen Jahren keine Verbesserung der Heilungsraten erzielen lassen, sind grundsätzlich neuartige Therapiekonzepte von größter Bedeutung.The subject of this patent application is based on an inventive step, as the best knowledge of the inventor since the discovery of the HCV (Choo et al. 1989) the therapeutic use of radioactive conjugated mAbs has not been considered. This in particular also means that the idea of this invention is by no means obvious gender manner from the prior art. Ultimately, it is the Nuclear medical treatment of an infectious disease as in the main application executed around a previously unknown and not belonging to the prior art Method. The benefits of nuclear medicine therapy for HCV infections result only from the fact that this virus infection is chronic, with severe related viral infection, and thereby not a viral infection incidental mortality. Since dose modifications in IFN-α- Monotherapy and combination therapies have not improved in recent years To achieve healing rates are fundamentally new types of therapy concepts Meaning.

Der Gegenstand des Patents ist als Pharmazeutikum gewerblich anwendbar. Die Konju­ gate lassen sich mit den in diesem Patentantrag beschriebenen Verfahren herstellen und nach in-vitro Untersuchung an HCV-replizierenden Zellkulturen und erfolgreicher tierex­ perimenteller Überprüfung bei HCV-infizierten Schimpansen in absehbarer Zeit für die Therapie von HCV-Infizierten zum Einsatz bringen. Dadurch könnte den weltweit schät­ zungsweise 40 Millionen HCV-Infizierten eine zusätzliche Chance auf Heilung geboten werden. The subject of the patent is industrially applicable as a pharmaceutical. The Konju gates can be manufactured using the methods described in this patent application and after in vitro investigation on HCV replicating cell cultures and successful tierex Experimental review of chimpanzees infected with HCV in the foreseeable future Use therapy for HCV infected people. This could make the world estimate 40 million people with HCV have an additional chance of recovery become.  

Literaturliterature

1. Alter HJ, Purcell RH, Holland PV et al.: Transmissible agent in non-A, non-B hepa­ titis. Lancet 1978; 1: 459-463.
2. Berg T und Hopf U: Interferontherapie der HCV-Infektion: In: Häussinger D, Niederau C: Hepatitis C. Blackwell Wissenschafts-Verlag Berlin 1997: 229-267.
3. Bergelson JM, Krithivas A, Celi L, et al.: The murine CAR homolog is a receptor for coxsackie B viruses and adenoviruses. J Virol 1998; 72 (1): 415-419.
4. Bergter W: Herstellung zehn monoklonaler Antikörper gegen das Affen-Immundefi­ zienzvirus SIVagmTYO-7 aus der Familie der Retroviren. Dissertation, Hannover 1990.
5. Blumenthal RD, Sharkey RM, Haywood L, et al.: Targeted therapy of athymic mice bearing GW-39 human colonic cancer micrometastases with 131 1. Alter HJ, Purcell RH, Holland PV et al .: Transmissible agent in non-A, non-B hepa titis. Lancet 1978; 1: 459-463.
2. Berg T and Hopf U: Interferon therapy for HCV infection: In: Häussinger D, Niederau C: Hepatitis C. Blackwell Wissenschafts-Verlag Berlin 1997: 229-267.
3. Bergelson JM, Krithivas A, Celi L, et al .: The murine CAR homolog is a receptor for coxsackie B viruses and adenoviruses. J Virol 1998; 72 (1): 415-419.
4. Bergter W: Production of ten monoclonal antibodies against the monkey immunodeficiency virus SIVagmTYO-7 from the family of retroviruses. Dissertation, Hanover 1990.
5. Blumenthal RD, Sharkey RM, Haywood L, et al .: Targeted therapy of athymic mice bearing GW-39 human colonic cancer micrometastases with 131

J-labeled monoclonal antibodies. Cancer Res 1992; 52: 6036-6044.
6. Blumenthal RD, Sharkey RM, Natale AM, et al.: Comparison of equitoxic radio­ immunotherapy and chemotherapy in the treatment of human colonic cancer xeno­ grafts. CancerRes 1994; 54: 142-151.
7. Böker, KHW und Manns MP: Was bringt die Interferontherapie bei der chronischen Hepatitis. Internist 1997; 38: 1191-1203.
8. Boulan ER, Pendergast M: Polarized distribution of viral envelope proteins in the plasma membrane of infected epithelial cells. Cell 1980; 20 (1): 45-54.
9. Choo QL, Kuo G, Weiner M, et al.: Isolation of a cDNA clone derived from a blood­ borne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science 1989; 244: 359-362.
10. Ciampor F, Sidorenko EV, Taikova NV: Ultrastructural localization by immunoper­ oxidase techniques of infiuenza virus antigens in abortive infection of L cells. Acta Virol 1981; 25 (6): 381-389.
11. Conill C, Alsina M, Verger E, et al.: Radiation therapy in All)S-related cutaneous Kaposi's sarcoma. Dermatology 1997;195 (1): 40-42.
12. Chu CM, Liaw YF: Natural history of chronic hepatitis B virus infection: an immuno­ pathological study. J Gastroenterol Hepatol 1997; 12 (9-10): 5218-222.
13. Dalgleish AG, Beverly PC, Clapham PR et al.: The CD4 (T4) antigen is an essential component of the receptor for the AIDS retrovirus. Nature 1984; 312 (5996): 763-­ 767.
14. Dennin RH, Beyer A: Application of scanning electron microscopy (SEM) and microbead techniques to study the localization of p24 and p18 antigens of HIV-1 on the surface of HIV-1-infected H9-lymphocytes. J Microsc 1991; 164 (Pt 1): 53-60.
15. Dorig RE, Marcil A, Chopra A, et al.: The human CD46 molecule is a receptor for measles virus (Edmonstron strain). Cell 1993; 75 (2): 295-305.
16. Desportes I, Bonnet D, Nicol I, et al.: Expression of HIV antigens at the surface of infected T4 cells: immunoelectron microscopic evidence of an immunogenic phase prior to the viral release. AIDS Res Hum Retroviruses 1989; 5 (1): 107-114.
17. Dudhane A, Wang ZQ, Orlikowsky T, et al.: AIDS patient monocytes target CD4 T cells for cellular conjugate formation and deletion through the membrane expression of HIV-1 envelope molecules. AIDS Res Hum Retroviruses 1996; 12 (10): 893-899.
18. Eckert WA und Kartenberg J: Proteine: Standardmethoden der Molekular- und Zell­ biologie. Springer, Heidelberg 1997: 237-240.
19. Farci P, Shimoda A, Wong D, et al.: Prevention of hepatitis C virus infection in chimpanzees by hyperimmune serum against the hypervariable region 1 of the enve­ lope 2 protein. Proc Natl Acad Sci USA 1996; 93 (26): 15 394-15 399.
20. Feremans WW, Huygen K, Menu R' et al.: Fifty cases of human immunodeficiency virus (HIV) infection: immunoultrastructüral study of circulating lymphocytes. J Clin Pathol 1988; 41(1): 62-71.
21. Fetzer I.C., Bergter W, Ramadori G: Kombinationstherapie mit INF-α2a und Riba­ virin nach erfolgloser IFN-α2a-Monotherapie bei Patienten mit chronischer HCV- Infektion. Göttinger Erfahrung. Z Gastroenterol 1997; 35: 419-433.
22. Fingeroth JD; Weis JJ; Tedder TF et al.: Epstein-Barr virus receptor of human B lymphocytes is the C3d receptor CR2. Proc Natl Acad Sci USA 1984; 81(14): 4510-4514.
23. Follea G, Herve P, Andreu G, et al.: Viral attenuation of labile blood products. Transfus Clin Biol 1996; 3 (2): 113-123.
24. Gerber MA, Sells MA, Chen ML, et al.: Morphologic, immunohistochemical, and ultrastructuraI studies of the production of hepatitis B virns in vitro. Lab Invest 1988; 59(2): 173-180.
25. Hughey PG, Compans RW, Zebedee SL, et al.: Expression of the infiuenza A virus M2 protein is restricted to apical surfaces of polarized epithelial cells. J Virol 1992; 66 (9): 5542-5552.
26. Hunter WM, Greenwood FC: Preparation of iodine-131 labeled human growth hormone of high specific activity. Nature 1962; 194: 495-496.
27. Ikuta K, Morita C, Miyake S, et al.: Expression of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) gag antigens on the surface of a cell line persistently infected with HIV-1 that highly expresses HIV-1 antigens. Virology 1989; 170 (2): 408-417.
28. Kaito M, Watanabe S, Tsukiyama-Kohara K, et al.: Hepatitis C virus particle detected by immunoelectron microscopic study. J Gen Virol 1994; 75 (Pt 7): 1755-1760.
29. Kaminski MS, Zasadny KR, Francis IR, et al.: Radioimmunotherapy of B-cell lymphoma with [131 J-labeled monoclonal antibodies. Cancer Res 1992; 52: 6036-6044.
6. Blumenthal RD, Sharkey RM, Natale AM, et al .: Comparison of equitoxic radio immunotherapy and chemotherapy in the treatment of human colonic cancer xeno grafts. CancerRes 1994; 54: 142-151.
7. Böker, KHW and Manns MP: What does interferon therapy do for chronic hepatitis. Internist 1997; 38: 1191-1203.
8. Boulan ER, Pendergast M: Polarized distribution of viral envelope proteins in the plasma membrane of infected epithelial cells. Cell 1980; 20 (1): 45-54.
9. Choo QL, Kuo G, Weiner M, et al .: Isolation of a cDNA clone derived from a blood borne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science 1989; 244: 359-362.
10. Ciampor F, Sidorenko EV, Taikova NV: Ultrastructural localization by immunoper oxidase techniques of infiuenza virus antigens in abortive infection of L cells. Acta Virol 1981; 25 (6): 381-389.
11. Conill C, Alsina M, Verger E, et al .: Radiation therapy in All) S-related cutaneous Kaposi's sarcoma. Dermatology 1997; 195 (1): 40-42.
12. Chu CM, Liaw YF: Natural history of chronic hepatitis B virus infection: an immuno pathological study. J Gastroenterol Hepatol 1997; 12 (9-10): 5218-222.
13. Dalgleish AG, Beverly PC, Clapham PR et al .: The CD4 (T4) antigen is an essential component of the receptor for the AIDS retrovirus. Nature 1984; 312 (5996): 763-767.
14. Dennin RH, Beyer A: Application of scanning electron microscopy (SEM) and microbead techniques to study the localization of p24 and p18 antigens of HIV-1 on the surface of HIV-1 infected H9 lymphocytes. J Microsc 1991; 164 (Pt 1): 53-60.
15. Dorig RE, Marcil A, Chopra A, et al .: The human CD46 molecule is a receptor for measles virus (Edmonstron strain). Cell 1993; 75 (2): 295-305.
16. Desportes I, Bonnet D, Nicol I, et al .: Expression of HIV antigens at the surface of infected T4 cells: immunoelectron microscopic evidence of an immunogenic phase prior to the viral release. AIDS Res Hum Retroviruses 1989; 5 (1): 107-114.
17. Dudhane A, Wang ZQ, Orlikowsky T, et al .: AIDS patient monocytes target CD4 T cells for cellular conjugate formation and deletion through the membrane expression of HIV-1 envelope molecules. AIDS Res Hum Retroviruses 1996; 12 (10): 893-899.
18. Eckert WA and Kartenberg J: Proteins: standard methods of molecular and cell biology. Springer, Heidelberg 1997: 237-240.
19. Farci P, Shimoda A, Wong D, et al .: Prevention of hepatitis C virus infection in chimpanzees by hyperimmune serum against the hypervariable region 1 of the enve lope 2 protein. Proc Natl Acad Sci USA 1996; 93 (26): 15 394-15 399.
20. Feremans WW, Huygen K, Menu R 'et al .: Fifty cases of human immunodeficiency virus (HIV) infection: immunoultrastructüral study of circulating lymphocytes. J Clin Pathol 1988; 41 (1): 62-71.
21. Fetzer IC, Bergter W, Ramadori G: combination therapy with INF-α2a and Riba virin after unsuccessful IFN-α2a monotherapy in patients with chronic HCV infection. Göttingen experience. Z Gastroenterol 1997; 35: 419-433.
22. Fingeroth JD; Weis JJ; Tedder TF et al .: Epstein-Barr virus receptor of human B lymphocytes is the C3d receptor CR2. Proc Natl Acad Sci USA 1984; 81 (14): 4510-4514.
23. Follea G, Herve P, Andreu G, et al .: Viral attenuation of labile blood products. Transfus Clin Biol 1996; 3 (2): 113-123.
24. Gerber MA, Sells MA, Chen ML, et al .: Morphologic, immunohistochemical, and ultrastructuraI studies of the production of hepatitis B virns in vitro. Lab Invest 1988; 59 (2): 173-180.
25. Hughey PG, Compans RW, Zebedee SL, et al .: Expression of the infiuenza A virus M2 protein is restricted to apical surfaces of polarized epithelial cells. J Virol 1992; 66 (9): 5542-5552.
26. Hunter WM, Greenwood FC: Preparation of iodine-131 labeled human growth hormone of high specific activity. Nature 1962; 194: 495-496.
27. Ikuta K, Morita C, Miyake S, et al .: Expression of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) gag antigens on the surface of a cell line persistently infected with HIV-1 that highly expresses HIV-1 antigens. Virology 1989; 170 (2): 408-417.
28. Kaito M, Watanabe S, Tsukiyama-Kohara K, et al .: Hepatitis C virus particle detected by immunoelectron microscopic study. J Gen Virol 1994; 75 (Pt 7): 1755-1760.
29. Kaminski MS, Zasadny KR, Francis IR, et al .: Radioimmunotherapy of B-cell lymphoma with [ 131

J]anti-B1 (anti-CD20) antibody. N Engl J Med 1993; 329 : 459- 465.
30. Kaplan G, Totsuka A, Thompson P, et al.: Identification of a surface glycoprotein on African green monkey kidney cells as a receptor for hepatitis A virus. EMBO J 1996; 15 (16): 4282-4296.
31. Kauffmann G, Moser E, Sauer R: Radiologie. Grundlagen der Radiodiagnostik, Radiotherapie und Nuklearmedizin. Urban und Schwarzenberg München 1996.
32. Kohama MT, Cardenas JM, Seto JT: Immunoelectron microscopic study of the detection of the glycoproteins of influenza and Sendai viruses in infected cells by the immunoperoxidase method. J Virol Methods 1981 ;3 (5): 293-301.
33. Lentz TL, Benson RJ, Klimowicz D, et al.: Binding of rabies virus to purified Torpedo acetylcholine receptor. Brain Res. 1986; 387 (3): 211-219.
34. Leon-Monzon ME, IIIa I, Dalakas MC: Expression of poliovirus receptor in human spinal cord and muscle. Ann N Y Acad Sci 1995; 753: 48-57.
35. Liddell E und Weeks I: Antikörper-Techniken. Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg 1996.
36. Liebowitz D, Wang D, Kieff E: Orientation and patching of the latent infection membrane protein encoded by Epstein-Barr virus. J Virol 1986; 58 (1): 233-237.
37. Lorenz R: Bildgebende Verfahren. In: Classen M, Diehl V, Kochsiek K: Innere Medizin. Urban & Schwarzenbeck München 1994 (3. Auflage): 39-63.
38. Maier KP: Pathologie der Hepatitis C. In: Häussinger D, Niederau C: Hepatitis C. Blackwell Wissenschafts-Verlag Berlin 1997: 149-163.
39. Manns MP und Rambusch EG: Extrahepatische Manifestationen und Autoimmunität bei HCV-Infektion. In: Häussinger D, Niederau C: Hepatitis C. Blackwell Wissen­ schafts-Verlag Berlin 1997: 165-182.
40. Moser E: Nuklearmedizin. In Kauffinann G, Moser E und Sauer R: Radiologie. Urban und Schwarzenberg, München 1996.
41. Nakajima A, Hijikata M, Yoshikura H, et al.: Charakterization of long-term cultures of hepatitis C virus. J Virol 1996; 70: 3325-3329.
42. Ng Ml, Choo Wk, Ho Y1: Detection of flavivirus antigens in purified infected Vero cell plasma membranes. J Virol Methods 1992; 39 (1-2): 125-138.
43. Nishimura H, Sugawara K, Kitame F, et al.: Attachment of influenza C virus to human erythrocytes. J Gen Virol 1988; 69 (Pt 10): 2545-2553.
44. Payne HR; Storz J; Henk WG: Bovine coronavirus antigen in the host cell plasma­ lemma. Exp Mol Pathol 1990; 53 (2): 152-159.
45. Peters JH und Baumgarten H: Monoklonale Antikörper. Herstellung und Charakteri­ sierung. Springer, Berlin 1990 (2. Auflage).
46. Petry et al.: Hepatozelluläres Karzinom bei HCV-Infektion. In: Häussinger D, Niederau C: Hepatitis C. Blackwell Wissenschafts-Verlag Berlin 1997 : 183-219.
47. Pozzetto B, Bourlet T, Grattard F et al.: Structure, genomic organization, replication and variability of hepatitis C virus. Nephrol Dial Transplant 1996; 11 (Suppl 4): 2-5.
48. Press OW, Eary JF, Appelbaum FR, et al.: Radiolabeled-antibody therapy of B-cell lymphoma with autologous bone marrow support. N Engl J Med 1993; 329: 1219-­ 1224.
49. Press OW, Eary JF, Appelbaum FR, et al.: Phase II trial of 131 J] anti-B1 (anti-CD20) antibody. N Engl J Med 1993; 329: 459-465.
30. Kaplan G, Totsuka A, Thompson P, et al .: Identification of a surface glycoprotein on African green monkey kidney cells as a receptor for hepatitis A virus. EMBO J 1996; 15 (16): 4282-4296.
31. Kauffmann G, Moser E, Sauer R: Radiology. Basics of radio diagnostics, radiotherapy and nuclear medicine. Urban and Schwarzenberg Munich 1996.
32. Kohama MT, Cardenas JM, Seto JT: Immunoelectron microscopic study of the detection of the glycoproteins of influenza and Sendai viruses in infected cells by the immunoperoxidase method. J Virol Methods 1981; 3 (5): 293-301.
33. Lentz TL, Benson RJ, Klimowicz D, et al .: Binding of rabies virus to purified Torpedo acetylcholine receptor. Brain Res. 1986; 387 (3): 211-219.
34. Leon-Monzon ME, IIIa I, Dalakas MC: Expression of poliovirus receptor in human spinal cord and muscle. Ann NY Acad Sci 1995; 753: 48-57.
35. Liddell E and Weeks I: Antibody Techniques. Spectrum Academic Publishing House, Heidelberg 1996.
36. Liebowitz D, Wang D, Kieff E: Orientation and patching of the latent infection membrane protein encoded by Epstein-Barr virus. J Virol 1986; 58 (1): 233-237.
37. Lorenz R: Imaging processes. In: Classen M, Diehl V, Kochsiek K: Internal Medicine. Urban & Schwarzenbeck Munich 1994 (3rd edition): 39-63.
38. Maier KP: Pathology of Hepatitis C. In: Häussinger D, Niederau C: Hepatitis C. Blackwell Wissenschafts-Verlag Berlin 1997: 149-163.
39. Manns MP and Rambusch EG: Extrahepatic manifestations and autoimmunity in HCV infection. In: Häussinger D, Niederau C: Hepatitis C. Blackwell Science Publishers Berlin 1997: 165-182.
40. Moser E: nuclear medicine. In Kauffinann G, Moser E and Sauer R: Radiology. Urban and Schwarzenberg, Munich 1996.
41. Nakajima A, Hijikata M, Yoshikura H, et al .: Characterization of long-term cultures of hepatitis C virus. J Virol 1996; 70: 3325-3329.
42. Ng Ml, Choo Wk, Ho Y1: Detection of flavivirus antigens in purified infected Vero cell plasma membranes. J Virol Methods 1992; 39 (1-2): 125-138.
43. Nishimura H, Sugawara K, Kitame F, et al .: Attachment of influenza C virus to human erythrocytes. J Gen Virol 1988; 69 (Pt 10): 2545-2553.
44. Payne HR; Storz J; Henk WG: Bovine coronavirus antigen in the host cell plasma lemma. Exp Mol Pathol 1990; 53 (2): 152-159.
45. Peters JH and Baumgarten H: monoclonal antibodies. Production and characterization. Springer, Berlin 1990 (2nd edition).
46. Petry et al .: Hepatocellular carcinoma in HCV infection. In: Häussinger D, Niederau C: Hepatitis C. Blackwell Wissenschafts-Verlag Berlin 1997: 183-219.
47. Pozzetto B, Bourlet T, Grattard F et al .: Structure, genomic organization, replication and variability of hepatitis C virus. Nephrol Dial Transplant 1996; 11 (Suppl 4): 2-5.
48. Press OW, Eary JF, Appelbaum FR, et al .: Radiolabeled-antibody therapy of B-cell lymphoma with autologous bone marrow support. N Engl J Med 1993; 329: 1219-1224.
49. Press OW, Eary JF, Appelbaum FR, et al .: Phase II trial of 131

J-B1(anti-CD20) anti­ body therapy with autologous stem cell transplantation for relapsed B-cell lymphoma. Lancet 1995; 346: 336-340.
50. Press OW, Eary JF, Appelbaum FR, et al.: Treatment of relapsed B-cell lymphomas with high dose radioimmunotherapy and bone marrow transplantation. In Goldenberg DM (ed.): Cancer Therapy with Radiolabeled Antibodies. Boca Raton, CRC Press 1995: pp229-237.
51. Purcell R: The hepatitis C virus: overview. Hepatology 1997; 26 (3 Suppl 1): 115-­ 145.
52. Reichard O, Yun ZB, Sönnerborg A, et al.: Hepatitis C viral RNA titers in serum prior to, during, and after oral treatment with ribavirin for chronic hepatitis C. J Med Virol 1993; 41: 99-102.
53. Reiners C: Zum Krebs- und genetischen Risiko nach Radioiodtherapie der Hyperthy­ reose. Der Nuklearmediziner 1997; 5 (20): 331-334.
54. Revilla-Monsalve C, Hernandez-Jauregui P, Silva-Lemoine E: Immunoperoxidase cell surface localization of rabies virus antigen in tissue cultures at a low viral multiplicity. Arch Invest Med (Mex) 1985; 16(1): 11-17.
55. Rosa D, Campagnoli S, Moretto C, et al.: A quantitative test to estimate neutralizing antibodies to the hepatitis C virus: cytofluorometric assessment of envelope glyco­ protein 2 binding to target cells. Proc Natl Acad Sci USA 1996; 93 (5): 1759-1763.
56. Rusche JR, Lynn DL, Robert-GuroflM, et al.: Humoral immune response to the entire human immunodeficiency virus envelope glycoprotein made in insect cells. Proc Natl Acad Sci USA 1987; 84 (19): 6924-6928.
57. Sabri S, Richelme F, Pierres A et al.: Interest of image processing in cell biology and immunology. J Immunol Methods 1997; 208 (1): 1-27.
58. Saito T, Kamimura T, Ishibashi M, et al.: Electron microscopic study of hepatitis B virus-associated antigens on the infected liver cell membrane in relation to analysis of immune target antigens in chronic hepatitis B. Gastroenterol Jpn 1992; 27 (6): 734-­ 744.
59. Santolini E, Pacini L, Fipaldini C, et al.: The NS2protein of hepatitis C virus is a transmembrane polypeptide. J Virol 1995; 69 (12): 7461-7471.
60. Sauer R: Strahlenbiologie. In: Kauffinann G, Moser E und Sauer R: Radiologie. Urban und Schwarzenberg, München 1996: 31-62.
61. Sauer R: Strahlentherapie und Onkologie für MTA-R. Urban und Schwarzenberg, München 1998.
62. Seipp S, Mueller HM, Pfaff E, et al.: Establishment of persistent hepatitis C virus infection and replication in vitro. J Gen Virol. 1997; 78 (Pt10): 2467-2476.
63. Selby MJ, Choo QL, Berger K,et al.: Expression, identification and subcellular loca­ lization of the proteins encoded by the hepatitis C viral genome. J Gen Virol 1993; 74 (Pt6): 1103-1113.
64. Schlehofer JR, Hampl H, Habermehl KO: Differences in the morphology of herpes simplex virus infected cells: I. Comparative scanning and transmission electron micro­ scopic studies on HSV-1 infected HEp-2 and chick embryo fibroblast cells. J Gen Virol 1979; 44 (2): 433-442.
65. Schvarcz R, Yun ZB, Sonnerborg A et al.: Combined treatment with interferon alpha- 2b and ribavirin for chronic hepatitis C in patients with a previous non-response or non-sustained responseto interferon alone. J Med Virol 1995; 46 (1): 43-47.
66. Shafren DR, Williams DT, Barry RD: A decay-accelerating factor-binding strain of coxsackievirus B3 requires the coxsackievirus-adenovirus receptor protein to mediate lytic infection of rhabdomyosarcoma cells. J Virol 1997; 71(12): 9844-9848.
67. Shimotohno K, Tanji Y, Hirowatari Y et al.: Processing of the hepatitis C virus precurser protein. J Hepatol 1995; 22 (Suppl. 1): 87-92.
68. Stirling JW: Immuno- and affinity probes for electron microscopy: a review of labe­ ling and preparation techniques. J Histochem Cytochem 1990; 38 (2): 145-157.
69. Suzuki Y, Suzuki T, Matsumoto M: Isolation and characterizationof receptor sialo­ glycoprotein for hemagglutinating virus of Japan (Sendai virus) from bovine erythrocyte membrane. J Biochem (Tokyo) 1983; 93 (6): 1621-1633.
70. Tabor E, Gerety RJ, Drucker JA: Transmission of non-A, non-B hepatitis from man to chimpanzee. Lancet 1978; 1: 463-466.
71. Timar J, Nagy K, Lapis K: Morphologic and immunoelectrohinicroscopic identifica­ tion of human T-cell lymphotropic virus type III (HTLV-III). Histol Histopathol 1986;1 (1): 43-47.
72. Treichel U, Meyer zum Büschenfelde, Dienes H-P et al.: Receptor-mediated entry of hepatitis B virus particles into liver cells. Arch Virol 1997; 142 : 493-498.
73. Vento S, Concia E, Ferraro T: Lack of sustained efficiacy of interferon in patients with chronic hepatitis C. N Engl J Med 1996; 334: 1479.
74. Walker CM: Comparative features of hepatitis C virus infection in humans and chim­ panzees. Springer Semin Immunopathol 1997;19 (1): 85-98.
75. Westaway EG, Goodman MR: Variation in distribution of the three flavivirus-specific glycoproteins detected by immunofluorescence in infected Vero cells. Arch Virol 1987; 94 (3-4): 215-228.
76. Whitbeck JC, Peng C, Lou H, et al.: Glycoprotein D of herpes simplex virus (HSV) binds directly to HVEM, a member of the tumor necrosis factor receptor superfamily and a mediator of HSV entry. J Virol 1997; 71(8): 6083-6093.
77. Zilpert A und Roggendorf M: Molekularbiologie des Hepatitis-C-Virus. In: Häussin­ ger D, Niederau C: Hepatitis C. Blackwell Wissenschafts-Verlag Berlin 1997: 13-51.J-B1 (anti-CD20) anti body therapy with autologous stem cell transplantation for relapsed B-cell lymphoma. Lancet 1995; 346: 336-340.
50. Press OW, Eary JF, Appelbaum FR, et al .: Treatment of relapsed B-cell lymphomas with high dose radioimmunotherapy and bone marrow transplantation. In Goldenberg DM (ed.): Cancer Therapy with Radiolabeled Antibodies. Boca Raton, CRC Press 1995: pp229-237.
51. Purcell R: The hepatitis C virus: overview. Hepatology 1997; 26 (3 Suppl 1): 115-145.
52. Reichard O, Yun ZB, Sönnerborg A, et al .: Hepatitis C viral RNA titers in serum prior to, during, and after oral treatment with ribavirin for chronic hepatitis C. J Med Virol 1993; 41: 99-102.
53. Reiners C: On cancer and genetic risk after radioiodine therapy for hyperthyroidism. The Nuclear Medic 1997; 5 (20): 331-334.
54. Revilla-Monsalve C, Hernandez-Jauregui P, Silva-Lemoine E: Immunoperoxidase cell surface localization of rabies virus antigen in tissue cultures at a low viral multiplicity. Arch Invest Med (Mex) 1985; 16 (1): 11-17.
55. Rosa D, Campagnoli S, Moretto C, et al .: A quantitative test to estimate neutralizing antibodies to the hepatitis C virus: cytofluorometric assessment of envelope glyco protein 2 binding to target cells. Proc Natl Acad Sci USA 1996; 93 (5): 1759-1763.
56. Rusche JR, Lynn DL, Robert-GuroflM, et al .: Humoral immune response to the entire human immunodeficiency virus envelope glycoprotein made in insect cells. Proc Natl Acad Sci USA 1987; 84 (19): 6924-6928.
57. Sabri S, Richelme F, Pierres A et al .: Interest of image processing in cell biology and immunology. J Immunol Methods 1997; 208 (1): 1-27.
58. Saito T, Kamimura T, Ishibashi M, et al .: Electron microscopic study of hepatitis B virus-associated antigens on the infected liver cell membrane in relation to analysis of immune target antigens in chronic hepatitis B. Gastroenterol Jpn 1992; 27 (6): 734-744.
59. Santolini E, Pacini L, Fipaldini C, et al .: The NS2protein of hepatitis C virus is a transmembrane polypeptide. J Virol 1995; 69 (12): 7461-7471.
60. Sauer R: Radiation biology. In: Kauffinann G, Moser E and Sauer R: Radiologie. Urban and Schwarzenberg, Munich 1996: 31-62.
61. Sauer R: Radiotherapy and oncology for MTA-R. Urban and Schwarzenberg, Munich 1998.
62. Seipp S, Mueller HM, Pfaff E, et al .: Establishment of persistent hepatitis C virus infection and replication in vitro. J Gen Virol. 1997; 78 (Pt10): 2467-2476.
63. Selby MJ, Choo QL, Berger K, et al .: Expression, identification and subcellular location of the proteins encoded by the hepatitis C viral genome. J Gen Virol 1993; 74 (Pt6): 1103-1113.
64. Schlehofer JR, Hampl H, Habermehl KO: Differences in the morphology of herpes simplex virus infected cells: I. Comparative scanning and transmission electron micro scopic studies on HSV-1 infected HEp-2 and chick embryo fibroblast cells. J Gen Virol 1979; 44 (2): 433-442.
65.Schvarcz R, Yun ZB, Sonnerborg A et al .: Combined treatment with interferon alpha- 2b and ribavirin for chronic hepatitis C in patients with a previous non-response or non-sustained responseto interferon alone. J Med Virol 1995; 46 (1): 43-47.
66. Shafren DR, Williams DT, Barry RD: A decay-accelerating factor-binding strain of coxsackievirus B3 requires the coxsackievirus-adenovirus receptor protein to mediate lytic infection of rhabdomyosarcoma cells. J Virol 1997; 71 (12): 9844-9848.
67. Shimotohno K, Tanji Y, Hirowatari Y et al .: Processing of the hepatitis C virus precurser protein. J Hepatol 1995; 22 (Suppl. 1): 87-92.
68. Stirling JW: Immuno- and affinity probes for electron microscopy: a review of labe ling and preparation techniques. J Histochem Cytochem 1990; 38 (2): 145-157.
69.Suzuki Y, Suzuki T, Matsumoto M: Isolation and characterization of receptor sialo glycoprotein for hemagglutinating virus of Japan (Sendai virus) from bovine erythrocyte membrane. J Biochem (Tokyo) 1983; 93 (6): 1621-1633.
70. Tabor E, Gerety RJ, Drucker JA: Transmission of non-A, non-B hepatitis from man to chimpanzee. Lancet 1978; 1: 463-466.
71. Timar J, Nagy K, Lapis K: Morphologic and immunoelectrohinicroscopic identification of human T-cell lymphotropic virus type III (HTLV-III). Histol Histopathol 1986; 1 (1): 43-47.
72. Treichel U, Meyer zum Büschenfelde, Dienes HP et al .: Receptor-mediated entry of hepatitis B virus particles into liver cells. Arch Virol 1997; 142: 493-498.
73. Vento S, Concia E, Ferraro T: Lack of sustained efficiacy of interferon in patients with chronic hepatitis C. N Engl J Med 1996; 334: 1479.
74. Walker CM: Comparative features of hepatitis C virus infection in humans and chim panzees. Springer Semin Immunopathol 1997; 19 (1): 85-98.
75. Westaway EG, Goodman MR: Variation in distribution of the three flavivirus-specific glycoproteins detected by immunofluorescence in infected Vero cells. Arch Virol 1987; 94 (3-4): 215-228.
76. Whitbeck JC, Peng C, Lou H, et al .: Glycoprotein D of herpes simplex virus (HSV) binds directly to HVEM, a member of the tumor necrosis factor receptor superfamily and a mediator of HSV entry. J Virol 1997; 71 (8): 6083-6093.
77. Zilpert A and Roggendorf M: Molecular biology of the hepatitis C virus. In: Häussin ger D, Niederau C: Hepatitis C. Blackwell Wissenschafts-Verlag Berlin 1997: 13-51.

Claims (4)

1. Radioimmunkonjugate zur in-vivo-Elimination virus-replizierender Zellen bei HCV- infizierten Patienten, dadurch gekennzeichnet, daß sie als immunologisch wirksame Komponente
  • a) einen monoklonalen Antikörper bzw. dessen Antigen-bindendes Fragment gegen ein auf der Plasmamembran HCV-infizierter Zellen exprimiertes virales oder virusinduziertes Antigen, oder
  • b) ein Rezeptormolekül bzw. ein Fragment des Rezeptormoleküls mit Affinität zu einem Epitop der Oberflächenglykoproteine E1 und/oder E2, oder
  • c) ein durch zufällige bzw. gezielte Mutagenese modifiziertes Fragment des Rezeptormoleküls mit Affinität zu einem Epitop der Oberflächenglykoproteine E1 und/oder E2
    und daß sie als radioaktive Komponente ein Radioisotop mit kurzer Halbwertszeit und geringer Reichweite, zum Beispiel
  • d) 131J, oder
  • e) 32P, oder
  • f) 90Y, oder
  • g) 89Sr enthält,
    zusammen mit pharmazeutischen Trägern und/oder Hilfsstoffen enthalten.
1. Radioimmunoconjugates for the in vivo elimination of virus-replicating cells in HCV-infected patients, characterized in that they act as an immunologically active component
  • a) a monoclonal antibody or its antigen-binding fragment against a viral or virus-induced antigen expressed on the plasma membrane of HCV-infected cells, or
  • b) a receptor molecule or a fragment of the receptor molecule with affinity for an epitope of the surface glycoproteins E1 and / or E2, or
  • c) a fragment of the receptor molecule modified by random or targeted mutagenesis with affinity for an epitope of the surface glycoproteins E1 and / or E2
    and that as a radioactive component it is a radioisotope with a short half-life and a short range, for example
  • d) 131 J, or
  • e) 32 P, or
  • f) 90 Y, or
  • g) contains 89 Sr,
    contain together with pharmaceutical carriers and / or excipients.
2. Verfahren zur Herstellung des Radioimmunkonjugats nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
  • a) murine oder humanisierte bzw. humane monoklonale Antikörper hergestellt werden und in therapeutischer Absicht mit Radioisotopen konjugiert werden,
  • b) Fragmente dieser monoklonalen Antikörper hergestellt werden und in therapeutischer Absicht mit Radioisotopen konjugiert werden,
  • c) zelluläre Rezeptormoleküle bzw. deren Fragmente zur Expression in Zellkultursystemen gebracht werden um sie anschließend mit Radioisotopen in therapeutischer Absicht zu konjugieren, und
  • d) gegebenenfalls gezielten Verbesserung der Antigenaffinität, Pharmako­ dynamik, Pharmakokinetik und Verträglichkeit am Rezeptormolekül oder dessen synthetische Fragmente unter Verwendung rechnergestützten Moleküldesigns und molekularbiologischen Techniken vorgenommen werden.
2. A method for producing the radioimmunoconjugate according to claim 1, characterized in that
  • a) murine or humanized or human monoclonal antibodies are produced and conjugated with radioisotopes for therapeutic purposes,
  • b) fragments of these monoclonal antibodies are produced and conjugated with radioisotopes for therapeutic purposes,
  • c) cellular receptor molecules or their fragments are brought to expression in cell culture systems in order to then conjugate them with radioisotopes for therapeutic purposes, and
  • d) if necessary, targeted improvement of the antigen affinity, pharmaco dynamics, pharmacokinetics and tolerance on the receptor molecule or its synthetic fragments can be carried out using computer-aided molecular designs and molecular biological techniques.
3. Verwendung des Radioimmunkonjugats nach Ansprüchen 1 und 2 zur Therapie der HCV-Infektion, dadurch gekennzeichnet, daß
  • a) das Radioimmunkonjugat intravenös unter ein- bis mehrtägiger stationärer Strahlenabschirmung mit einer Gesamtkörperdosis vorzugsweise zwischen 50 bis 300 mCi einmalig oder in mehreren Zyklen appliziert wird.
3. Use of the radioimmunoconjugate according to claims 1 and 2 for the therapy of HCV infection, characterized in that
  • a) the radioimmunoconjugate is administered intravenously under one to several days of stationary radiation shielding with a total body dose, preferably between 50 to 300 mCi, once or in several cycles.
4. Verwendung des Radioimmunkonjugats nach Ansprüchen 1, 2 und 3 zur Therapie, dadurch gekennzeichnet, daß
  • a) die Behandlung gegebenenfalls im Anschluß an oder während einer antiviralen Therapie mit IFN-α, ggf. in Kombination mit einer anderen antiviralen Substanz, wie Ribavirin erfolgt, und/oder
  • b) unter dem Schutz einer Stammzelltransplantation erfolgt, und/oder
  • c) unter dem Schutz einer Schilddrüsenblockade erfolgt.
4. Use of the radioimmunoconjugate according to claims 1, 2 and 3 for therapy, characterized in that
  • a) the treatment is optionally carried out after or during antiviral therapy with IFN-α, if appropriate in combination with another antiviral substance, such as ribavirin, and / or
  • b) is carried out under the protection of a stem cell transplant, and / or
  • c) is done under the protection of a thyroid block.
DE1998118843 1998-03-08 1998-04-28 Radio-immuno conjugate comprising an antibody and a radioactive component with short half-life and limited radiation radius, useful for treating of hepatitis C virus infections Withdrawn DE19818843A1 (en)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE1998118843 DE19818843A1 (en) 1998-03-08 1998-04-28 Radio-immuno conjugate comprising an antibody and a radioactive component with short half-life and limited radiation radius, useful for treating of hepatitis C virus infections
DE19980730T DE19980730D2 (en) 1998-04-28 1999-04-27 Radioimmunopharmaceuticals for the treatment of hepatitis C
PCT/DE1999/001237 WO1999055385A2 (en) 1998-04-28 1999-04-27 Radioimmunopharmaca for treating hepatitis c
AU44979/99A AU4497999A (en) 1998-04-28 1999-04-27 Radioimmunopharmaca for treating hepatitis c

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE1998109785 DE19809785C2 (en) 1998-03-08 1998-03-08 Radioimmune drug for the treatment of HIV-1 infection
DE1998118843 DE19818843A1 (en) 1998-03-08 1998-04-28 Radio-immuno conjugate comprising an antibody and a radioactive component with short half-life and limited radiation radius, useful for treating of hepatitis C virus infections

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE19818843A1 true DE19818843A1 (en) 1999-11-18

Family

ID=26044428

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE1998118843 Withdrawn DE19818843A1 (en) 1998-03-08 1998-04-28 Radio-immuno conjugate comprising an antibody and a radioactive component with short half-life and limited radiation radius, useful for treating of hepatitis C virus infections

Country Status (1)

Country Link
DE (1) DE19818843A1 (en)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2139731C1 (en) Methods of treatment, antibodies, hybridoma
Scheinberg et al. Tumor imaging with radioactive metal chelates conjugated to monoclonal antibodies
AU2005269820B2 (en) Methods for diagnosis using anti-cytokine receptor antibodies
AU2011287292B2 (en) Combination pharmaceutical composition and methods of treating and preventing the infectious diseases
BG65690B1 (en) Radiolabeled kit and method of testing the conjugation
EP1387701B1 (en) Immunoconjugates made of egg-yolk antibodies (igy), production and use thereof in diagnoses and therapy
EP1091763B1 (en) Antiviral and antiretroviral radioimmunomedicaments based on alpha-emitters and beta-emitters
DE19818843A1 (en) Radio-immuno conjugate comprising an antibody and a radioactive component with short half-life and limited radiation radius, useful for treating of hepatitis C virus infections
WO1999055385A2 (en) Radioimmunopharmaca for treating hepatitis c
Britton et al. Radiolabelled monoclonal antibodies in oncology I. Technical aspects
Vriesendorp et al. Radiolabeled immunoglobulin therapy in patients with Hodgkin's disease
Riva et al. Locoregional immunotherapy of human ovarian cancer: preliminary results
US6743411B2 (en) Extracorporal system for treating disease with radionucleotides
DE19828732A1 (en) Antiviral and anti-retroviral radio-immuno conjugates, for the treatment of viral infections
DE19809785C2 (en) Radioimmune drug for the treatment of HIV-1 infection
EP1454137B1 (en) Use of a labeled ligand having human cd4 specificity for producing a diagnostic used in the analysis of migration and/or distribution patterns of cell populations
Cohen et al. STRAIN-SPECIFIC RENAL TOXICITY OF HETEROLOGOUS ANTILYMPHOCYTE γ-GLOBULIN IN MICE
US20040141999A1 (en) Antiviral and antiretroviral radioimmunomedicaments based on (alpha)-emitters and (beta)-emitters
DE69636434T2 (en) REAGENTS FOR TREATMENT AND DIAGNOSTIC PRESENTATION SPECIFIC TO CANCER
Weiden Pretargeted Radioimmunotherapy (PRIT™) Using an Antibody-Streptavidin Fusion Protein in Non-Hodgkin's Lymphoma
DE19826307A1 (en) CD4 radio immunological pharmaceuticals
Seybold In vivo labelling of granulocytes using 123I-tagged anti-granulocyte antibodies
Mittal et al. Role of pharmacoscintigraphy in evaluating the presence of bioactive compounds in natural products, with particular reference to honey
JPH06509102A (en) Tissue-specific contrast agent using in-vivo contrast anti-idiotype antibody
GAZET et al. HUMAN BREAST CARCINOMA LOCALIZATION WITH A RADIOLABELLED MONOCLONAL ANTIBODY

Legal Events

Date Code Title Description
AF Is addition to no.

Ref country code: DE

Ref document number: 19809785

Format of ref document f/p: P

OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
8122 Nonbinding interest in granting licenses declared
8123 Nonbinding interest in granting licenses withdrawn
AF Is addition to no.

Ref country code: DE

Ref document number: 19809785

Format of ref document f/p: P

8130 Withdrawal