DE1920423B2 - Prodn of pure human albumin from haemopigment-contng - Google Patents
Prodn of pure human albumin from haemopigment-contngInfo
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Abstract
Description
2020th
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf Verfahren zur Bereitung von stabiler Lösung der Plasmaeiweißkörper, des Albumins sowie der λ- und ^-Globuline, die in der medizinischen Praxis zur Verwendung gelangen.The present invention relates to a method for the preparation of stable solution of the plasma protein bodies, of albumin as well as λ- and ^ -globulins, which are used in medical practice.
Es sind bekannt Verfahren zur Bereitung von stabilen Lösungen der Eiweißkörper aus dem Blutplasma oder dem Blutserum, das keine Hämopigmente enthält, z. B. ein Verfahren zur Bereitung von stabiler Lösung der Eiweißkörper aus dem Plasma durch äthanolische Kaltfraktionierung, wo bei dem Hinzufügen von Äthanol dem Plasma bis zu einer Endkonzentration des Äthanols von 8% die Fraktion des Fiorinogens ausfällt. Der Niederschlag wird durch Zentrifugieren getrennt. In das Zentrifugat gibt man Äthanol bis zu einer Konzentration von 25% zu. Dabei fällt die Fraktion der Gamma-Globuline aus. Der Niederschlag wird getrennt und in das Zentrifugat Äthanol bis zu einer Konzentration von 40% bei einem pH-Wert von 4,8 zugegeben. Dabei fällt ein Niederschlag von Eiweißkörpern aus, der aus dem Albumin sowie den α- und /J-Globulinen besteht. Der Niederschlag wird lyophil getrocknet und zur Herstellung von Zielprodukt mit apyrogenem destilliertem Wasser unter Zugabe von Stabilisatoren verdünnt (H.W. Krijnen, G. G. A. Mastenbrock, »Vox Song« 2,6, p. 405,1957).There are known methods for the preparation of stable solutions of the protein bodies from the blood plasma or the blood serum that does not contain hemopigments, e.g. B. a process for the preparation of stable solution of the Protein bodies from the plasma by ethanolic cold fractionation, where when adding Ethanol precipitates the plasma up to a final concentration of the ethanol of 8%, the fraction of the fiorinogen. The precipitate is separated by centrifugation. In the centrifugate one gives ethanol up to one Concentration of 25% too. The fraction of gamma globulins falls out. The precipitate is separated and ethanol was added to the centrifugate to a concentration of 40% at a pH of 4.8. A precipitate of protein bodies precipitates out, that of the albumin as well as the α- and / J-globulins consists. The precipitate is dried lyophilically and for the production of target product with apyrogenic distilled water with the addition of stabilizers (H.W. Krijnen, G. G. A. Mastenbrock, "Vox Song" 2.6, p. 405, 1957).
Ein Nachteil des genannten Verfahrens ist die Notwendigkeit, einen Rohstoff zu verwenden, der keine Hämopigmente enthält.A disadvantage of the process mentioned is the need to use a raw material that does not have any Contains hemopigments.
Es sind bekannt Verfahren zur Herstellung von Albumin aus Lösungen, die Hämopigmente enthalten, durch das Ausfällen der Hämopigmente mit Ionen der Schwermetalle, insbesondere des Zinks (J. Amer. ehem. Soc. 72,465,1950; 75,5359,1953; 78,1353,1956).There are known processes for the production of albumin from solutions containing hemopigments, due to the precipitation of the hemopigments with ions of heavy metals, especially zinc (J. Amer. Soc. 72,465,1950; 75,5359,1953; 78,1353,1956).
Ein Nachteil der genannten Verfahren ist die Schwierigkeit der Reinigung des Zielproduktes von den Ionen der Schwermetalle, was deren Anwendung zu Produktionszwecken begrenzt.A disadvantage of the processes mentioned is the difficulty in purifying the target product from the Ions of heavy metals, which limits their use for production purposes.
Das Ziel der vorliegenden Erfindung ist die w) Beseitigung der genannten Nachteile.The aim of the present invention is the w) Elimination of the disadvantages mentioned.
In Übereinstimmung mit dem genannten Ziel wurde die Aufgabe gestellt, durch Wahl entsprechender Bedingungen für das Denaturieren der wärmelabilen Globuline und die Zerstörung der Hämopigmente eine 1,5 stabile Lösung der Plasmaeiweißkörper, die von den wärmelabilen Globulinen und Hämopigmenten frei ist, aus Lösungen herzustellen, die Hämopigmente enthalIn accordance with the stated goal, the task was set by choosing appropriate Conditions for the denaturation of the heat-labile globulins and the destruction of the hemopigments a 1.5 stable solution of plasma protein bodies, which is free from heat-labile globulins and hemopigments, from solutions containing hemopigments
Diese Aufgabe wurde dadurch gelöst, daß in den Verfahren zur Bereitung von stabiler Lösung de Plasmaeiweißkörper, des Albumins sowie der x- um /3-GIobulip.e durch Fraktionierung der Eiweißkörper de Blutplasmas und Blutserums unter anschließende Trennung der Fraktion, die Albumin sowie ac- um ^-Globuline enthält, zur erwärmten Lösung de Plasmaeiweißkörper genommen, die Hämopigmenti enthält, Wasserstoffperoxid bis zu dessen Endkonzen tration in der Lösung von 0,01—0,1% bei eine Temperatur nicht oberhalb 700C zugegeben und di< Lösung bei dieser Temperatur 2—10 Stunden stehenge lassen wird, und anschließend die denaturiertei wärmelabilen Globuline und Hämopigmente abge trennt werden.This object was achieved in that in the process for the preparation of stable solution de plasma protein bodies, albumin and x- um /3-GIobulip.e by fractionating the protein bodies de blood plasma and blood serum with subsequent separation of the fraction, the albumin and ac- To contain ^ -Globuline, taken to the heated solution of the plasma protein, which contains haemopigmenti, hydrogen peroxide is added up to its final concentration in the solution of 0.01-0.1% at a temperature not above 70 0 C and the solution in this Temperature is left to stand for 2-10 hours, and then the denatured, heat-labile globulins and hemopigments are separated off.
Das erfindungsgemäße Verfahren wird wie folg durchgeführt:The method according to the invention is carried out as follows:
Den Ausgangsrohstoff — retroplazentares um Abortserum, hämolysiertes Plasma des Spender- ode Kadaverblutes und andere Rohstoffarien — unterzieh man einer Fraktionierung nach einem beliebiget Verfahren bis zur Herstellung einer Fraktion, di< Albumin α- und ^-Globuline und Hämopigmenti enthält. Die getrennte Fraktion wird von den Fraktio nierungsmitteln (im Falle der Verwendung von Salzen befreit und durch destilliertes Wasser vorzugsweise bii zu einer Konzentration von 6% Eiweißkörper in de Lösung verdünnt. Zu der Lösung fügt man Wasserstoff peroxid bis zu dessen Endkonzentration in der Lösunj von 0,01—0,1% bei einer Temperatur von höchsten: 700C hinzu und hält bei dieser Temperatur wahrem 2-10 Stunden.The starting raw material - retroplacental to abortion serum, hemolyzed plasma of the donor or carcass blood and other raw materials - is subjected to a fractionation according to any process up to the production of a fraction containing albumin α- and ^ -globulins and haemopigments. The separated fraction is freed from the fractionating agents (if salts are used, and diluted with distilled water, preferably up to a concentration of 6% protein in the solution. Hydrogen peroxide is added to the solution up to its final concentration in the solution of 0) , from 01 to 0.1% at a temperature of at most 70 0 C added, and holds true at this temperature for 2-10 hours.
Das Erwärmen unter den genannten Bedingungen üb eine denaturierende Wirkung auf die wärmelabilei Globuline und den Eiweißteil der Hämopigmente aus was zur Zerstörung des Komplexes von Globin mit den Harn führt. Die Anwesenheit von Wasserstoffperoxk bewirkt eine Zerstörung des Häms, das Freiwerden de Eisens und dessen Oxydation zur dreiwertigen Form Beim Erwärmen fällt ein Niederschlag der denaturiertei Globuline und Hämopigmente aus, der durch Zentrifu gieren getrennt wird.Heating under the conditions mentioned has a denaturing effect on the heat-sensitive properties Globulins and the protein part of the hemopigments from what to destroy the complex of globin with the Urine leads. The presence of hydrogen peroxide causes the heme to be destroyed, the iron being released and its oxidation to the trivalent form When heated, a precipitate of denatured globulins and haemopigments precipitates out, which is caused by centrifugation yaw is separated.
Die erhaltene Lösung enthält mindestens 70°/i Albumin und höchstens 30% stabile <x- und j3-Globuline wobei sie keine Hämopigmente enthält. Die genannt« Lösung enthält 4,3—4,8% Eiweißkörper und weniger al 1% Äthanol.The solution obtained contains at least 70% albumin and a maximum of 30% stable <x and j3 globulins it does not contain any hemopigments. The so-called "solution contains 4.3-4.8% protein and less than 1% ethanol.
Zur Bereitung einer Lösung mit größerem Gehalt ai Eiweißkörpern wird das Verhältnis zwischen der Mengi der Ausgangsfraktion des Albumins und der α- un< ^-Globuline und der Menge der Lösungsflüssigkei verändert oder die Konzentration des Zielprodukte: nach beliebigen bekannten Verfahren erhöht.To prepare a solution with a higher content of protein bodies, the ratio between the mengi the starting fraction of the albumin and the α- un <^ -globulins and the amount of the solution liquid changed or the concentration of the target product: increased by any known method.
Das erfindungsgemäße Verfahren macht es möglich eine stabile Lösung von Plasmaeiweißkörpern, die keim Hämopigmente und wärmelabile Globuline enthält, au Eiweißlösungen mit einem beliebigen Gehalt ai Hämopigmenten zu erhalten.The method according to the invention makes it possible to obtain a stable solution of plasma protein bodies which germinate Contains hemopigments and heat-labile globulins, including protein solutions with any content ai To obtain hemopigments.
In der erhaltenen stabilen Lösung der Plasmaeiweiß körper liegt der Gehalt an Natriumchlorid vierma niedriger als im Spenderserum.In the stable solution of the plasma protein body obtained, the sodium chloride content is four times lower than in donor serum.
Die Isoonkie der Lösung in den Fällen, die dii Verwendung von Lösung mit einem niedrigen Gehalt ai Natriumchlorid (für die Heilbehandlung von Nierener krankungen) erfordern, wird durch die Einführung voi Glukose in die Lösung herbeigeführt. Bei der Therapii von Erkrankungen, die Einführung von Chloriden in deiThe isoonkia of the solution in the cases that dii use solution with a low ai content Sodium chloride (for the curative treatment of kidney diseases) is required by the introduction of voi Glucose is brought about into the solution. In the therapy of diseases, the introduction of chlorides in the
Organismus nicht begrenzen, wird die Isoonkie der Lösung durch Einführung entsprechender Mengen von Natriumchlorid oder anderen Salzen herbeigeführt.Do not limit the organism, the isoonkia of the solution is increased by introducing appropriate amounts of Sodium chloride or other salts brought about.
Zum besseren Verstehen der vorliegenden Erfindung werden nachgehend folgende Beispiele für die Durchführung des Verfahrens zur Bereitung von stabiler Lösung der Plasmaeiweißkörper aus Lösungen angeführt, die Hämopigmente enthalten.For a better understanding of the present invention, the following examples of its implementation are provided below the procedure for the preparation of a stable solution of plasma protein bodies from solutions is given, which contain hemopigments.
Man verwendet retroplazentares Serum, dar. eine erhöhte Menge von Hämonigmenten enthält. Man kühlt das Serum auf 00C und gießt unter ständigem Rühren 53%iges Äthanol, das auf eine Temperatur von —15° C abgekühlt ist, in einer Menge von 180 ml je Liter Ausgangsplasma hinzu. In dem Gemisch wird eine Konzentration des Alkohols von 8% herbeigeführt. Die Temperatur des Gemisches sinkt dabei auf —3°C. Unter diesen Bedingungen trennen sich Gerinnsel und Schleim. Das Gemisch wird zentrifugiert, der Niederschlag abgetrennt und dem Zentrifugat 53°/oiger Alkohol, der auf eine Temperatur von — 15° C abgekühlt ist, in einer Menge von 720 ml je Liter Ausgangsplasma zugegeben. Die Alkoholkonzentration in der Lösung erreicht 25%, die Temperatur des Gemisches sinkt auf -80C. Unter den genannten Bedingungen fällt die das Gamma-Globulin enthaltende Fraktion aus, die durch Zentrifugieren getrennt wird. Zu dem erhaltenen Zentrifugat gibt man 1 n-HCI bis zu einem pH-Wert von 6,0 zu und trennt den sich bildenden Niederschlag durch Zentrifugieren. Zu dem Zentrifugat gibt man das auf eine Temperatur von — 15°C abgekühlte 96%ige Äthanol in einer Menge von 200 ml je Liter Zentrifugat bis zu einer Endkonzentration des Alkohols in der Lösung von 40% zu. Durch die Zugabe von 1 n-HCI senkt man den pH-Wert auf 4,8.Retroplacental serum is used, which contains an increased amount of hemonyigments. Cool the serum to 0 0 C, and poured with constant stirring 53% ethanol, which is cooled to a temperature of -15 ° C, in an amount of 180 ml per liter of starting plasma added. A concentration of the alcohol of 8% is brought about in the mixture. The temperature of the mixture drops to -3 ° C. Under these conditions, the clot and mucus separate. The mixture is centrifuged, the precipitate is separated and the centrifugate 53% alcohol, which has cooled to a temperature of -15 ° C., is added in an amount of 720 ml per liter of starting plasma. The alcohol concentration in the solution reaches 25%, the temperature of the mixture is lowered to -8 0 C. Under the conditions mentioned the gamma globulin fraction containing precipitates which is separated by centrifugation. 1N HCl is added to the resulting centrifugate up to a pH of 6.0 and the precipitate which forms is separated off by centrifugation. The 96% ethanol, cooled to a temperature of -15 ° C., is added to the centrifugate in an amount of 200 ml per liter of centrifugate up to a final concentration of the alcohol in the solution of 40%. The pH value is lowered to 4.8 by adding 1N HCl.
Den sich bildenden Niederschlag trennt man durch Zentrifugieren und löst in vierfachem Volumen von apyrogenem destilliertem Wasser, das 0,3% Natriumkaprylat und 3% Glukose enthält. Die Auflösung wird unter intensivem Rühren innerhalb 30—40 Minuten durchgeführt. Das erhaltene Gemisch wird zentrifugiert, der Niederschlag entfernt und dem Zentrifugat 1 n-NaOH bis zu einem pH-Wert von 7,2 zugegeben.The precipitate that forms is separated by centrifugation and dissolved in four times the volume of apyrogenic distilled water containing 0.3% sodium caprylate and 3% glucose. The resolution will carried out with vigorous stirring within 30-40 minutes. The mixture obtained is centrifuged, the precipitate is removed and 1N NaOH is added to the centrifugate up to a pH of 7.2.
Die erhaltene Lösung wird auf eine Temperatur von 65° C erwärmt, dann 10%ige Lösung von Wasserstoffperoxid bis zu dessen Endkonzentration in der Lösung von 0,05% hinzugefügt und die Lösung bei einer Temperatur von 65° C innerhalb 10 Stunden stehengelassen, wodurch der Restgehalt an Alkohol 1% nicht übersteigt. Nach der Abkühlung der Lösung wird 1 n-HCI bis zu einem pH-Wert von 5,1 zugegeben. Dabei fällt ein Niederschlag aus, der abfiltriert wird. Zu der Lösung gibt man 1 n-NaOH bis zu einem pH-Wert von 7,0—7,4 zu. Die erhaltene, von dem Hepatitisvirus freie Lösung, die keine Hämopigmente und instabile Globuline enthält, wird geklärt, durch Filtration sterilisiert und dann auf Flakons abgefüllt.The solution obtained is heated to a temperature of 65 ° C., then a 10% solution of hydrogen peroxide added to its final concentration in the solution of 0.05% and the solution at a Temperature of 65 ° C left to stand for 10 hours, which means that the residual alcohol content is not 1% exceeds. After the solution has cooled, 1N HCl is added up to a pH of 5.1. A precipitate separates out and is filtered off. 1N NaOH is added to the solution until it has a pH value from 7.0-7.4 to. The solution obtained is free from the hepatitis virus, has no hemopigments and is unstable Contains globulins, is clarified, sterilized by filtration and then filled into bottles.
Als Ausgangsrohstoff verwendet man natives Spenderplasma mit einem erhöhten Gehalt an Hämopigmenten. Native donor plasma with an increased content of hemopigments is used as the starting raw material.
Die Fraktionierung wird wie im Beispiel 1 durchgeführl. Die erhaltene Fraktion, die Albumin, λ- und j3-Globuline, Hämopigmente enthält, löst man in vierfachem Volumen von apyrogenem destilliertem Wasser, das G,3% Natriumkaprylat und 3% Glukose enthält. Die Auflösung wird unter intensivem Rühren innerhalb 30—40 Minuten durchgeführt. Das erhaltene Gemisch wird zentrifugiert, und dem Zentrifugat 1 n-NaOH bis zu einem pH-Wert von 7,2 zugegeben.The fractionation is carried out as in Example 1. The fraction obtained, which contains albumin, λ- and j3-globulins, hemopigments, is dissolved in four times the volume of pyrogenic distilled water, the G, 3% sodium caprylate and 3% glucose contains. The dissolution is carried out with intensive stirring within 30-40 minutes. The received The mixture is centrifuged and 1N NaOH is added to the centrifugate up to a pH of 7.2.
Die erhaltene Lösung wird auf eine Temperatur von 60°C erwärmt, dann 10%ige Lösung von Wasserstoffperoxid bis zu dessen Endkonzentration in der Lösung von 0,03% zugegeben und die Lösung bei einer Temperatur von 60°C innerhalb 2 Stunden stehengelassen. Nach der Abkühlung der Lösung wird 1 n-HCI bis zu einem pH-Wert von 5,1 hinzugefügt. Dabei fällt ein Niederschlag aus, der abfiltriert wird. Zu der Lösung fügt man 1 n-NaOH bis zu einem pH-Wert von 7,0—7,4 hinzu. Man erhält eine Lösung, die 4,3—4,8% Eiweißkörper enthält.The resulting solution is heated to a temperature of 60 ° C., then 10% strength solution of hydrogen peroxide added up to its final concentration in the solution of 0.03% and the solution at a Allowed to stand at a temperature of 60 ° C within 2 hours. After the solution has cooled, 1N HCl is added to a pH of 5.1. It occurs to me Precipitate, which is filtered off. 1N NaOH is added to the solution up to a pH of 7.0-7.4 added. A solution is obtained which contains 4.3-4.8% protein.
Die erhaltene Lösung, die keine Hämopigmente und instabile Globuline enthält, wird geklärt, durch Filtration sterilisiert, auf Flankons abgefüllt und einer Pasteurisierung bei einer Temperatur von 6O0C innerhalb 10 Stunden zur Inaktivierung von Virus heptatitis infectiosa unterzogen.The resulting solution, containing no Hämopigmente and unstable globulins is clarified, sterilized by filtration, dispensed on Flankons and pasteurization at a temperature of 6O 0 C within 10 hours to inactivate hepatitis virus infectious subjected.
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| DE19691920423 DE1920423B2 (en) | 1969-04-22 | 1969-04-22 | Prodn of pure human albumin from haemopigment-contng |
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| DE19691920423 DE1920423B2 (en) | 1969-04-22 | 1969-04-22 | Prodn of pure human albumin from haemopigment-contng |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE1920423A1 DE1920423A1 (en) | 1970-11-12 |
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| DE19691920423 Withdrawn DE1920423B2 (en) | 1969-04-22 | 1969-04-22 | Prodn of pure human albumin from haemopigment-contng |
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|---|---|
| DE (1) | DE1920423B2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1986005361A1 (en) * | 1985-03-20 | 1986-09-25 | Harmath Sandor | Decolourized preparations containing formed elements of blood, process for their preparation as well as food- and feed-additives containing the same and processes for preparation of the latter |
-
1969
- 1969-04-22 DE DE19691920423 patent/DE1920423B2/en not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1986005361A1 (en) * | 1985-03-20 | 1986-09-25 | Harmath Sandor | Decolourized preparations containing formed elements of blood, process for their preparation as well as food- and feed-additives containing the same and processes for preparation of the latter |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE1920423A1 (en) | 1970-11-12 |
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Legal Events
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| 8239 | Disposal/non-payment of the annual fee |