DE1798385C3 - Method and device for measuring the optical behavior of a sample - Google Patents

Method and device for measuring the optical behavior of a sample

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DE1798385C3 DE19681798385 DE1798385A DE1798385C3 DE 1798385 C3 DE1798385 C3 DE 1798385C3 DE 19681798385 DE19681798385 DE 19681798385 DE 1798385 A DE1798385 A DE 1798385A DE 1798385 C3 DE1798385 C3 DE 1798385C3
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sinusförmig mischen zwei vorgebbaren Eckwellen- chromator aufweisen, bei dem die Wellenlänge des ablängen geändert wird und dessen Intensität hinter der gegebenen Lichtes durch periodische Bewegung eines Probe auf fotoeleklnschem Wege durch ein Intensi- Spiegels, z.B. eines Tordonsschwingungen ausfühtätssignal dargestellt wird, aus d^uurch eine Spit- renden Spiegels, geändert wird. Zur Fokussierung zengtachnchtung seiner Wechselkomponente zum 5 des vom Monochromator abgegebenen Lichtes auf Anzeigen oder Registrieren ein Meßsignal erzeugt die Probe ist jedoch bei diesen Einrichtungen ein wird, das der jeweiligen Differenz der uichtintensitä- sehr hoher optischer Aufwand erforderlich, der zu ten bei den beiden vorgebbaren Eckwellenlängen ziemlichen Lichtverlusten führt und es insbesondere, entspricht, dadurch gelost, daß das Verfahren zum erforderlich macht, die Probe an einer bestimmten Messen des Fluoreszenzverhaltens einer Probe ange- «-<· Stelle im Strahlengang anzuordnen. Darüber hinaus wandt wird, wobei die eine Eckwellenlänge entspre- ist die Geschwindigkeit der Wellenlängenänderung chend einem intensitätsmaximum des Fluoreszenz- wegen der Trägheit des verwendeten Spiegels nicht lichts (Excitationsmaximum) und die andere ent- beliebig vergrößerbar. Bei der photometrischen Unsprechend einembenachbarten Minimum gewähltwird. tersuchung sehr schneller Reaktionskinetiken ist je-sinusoidal mix two predeterminable corner wave chromator, in which the wavelength of the cut is changed and its intensity behind the given light is represented by periodic movement of a sample on photo-electrical path through an intensity mirror, e.g. a Tordons vibrations executing signal, from the peak reindeer is changed to mirror. To focus zengtachnchtung its alternating component to 5 of the light emitted by the monochromator to display or register a measurement signal is generated the sample is, however, with these devices, the respective difference of the uichtintensitä- very high optical effort required to be th at the two predeterminable corner wavelengths leads to considerable loss of light and, in particular, corresponds to this, solved by the fact that the method makes it necessary to position the sample at a specific measurement of the fluorescence behavior of a sample in the beam path. In addition, one corner wavelength corresponds to the speed of the change in wavelength according to a maximum intensity of the fluorescence due to the inertia of the mirror used (excitation maximum) and the other can be increased at will. In the case of the photometric inappropriateness, an adjacent minimum is chosen. investigation of very fast reaction kinetics is always

Durch die Anstrahlung der Probe mit monochro- 15 doch eine sehr rasche Änderung der Wellenlänge desBy illuminating the sample with monochrome 15 a very rapid change in the wavelength of the

maiischem Licht periodisch veränderter Wellenlänge monochromatischen Lichtes erwünscht, um denMayic light of periodically changed wavelength of monochromatic light is desirable to the

dient die Probe gleichzeitig als »Re^renzprobe« in Ablauf der Reaktion, der sich in der Änderung z. B.the sample also serves as a "reference sample" in the course of the reaction. B.

bezug auf die zu untersuchende Substanz, wobei die der Extinktion oder der Intensität der Fluoreszenzwith respect to the substance to be examined, the extinction or the intensity of the fluorescence

Fluoreszenzintensität bei einer der beiden Eckwellen- einer Substanz wiederspiegelt, sichtbar machen zuFluorescence intensity at one of the two corner waves reflects a substance, make it visible

längen den Bezugswert für die Messung darstellt. Die 20 können.length represents the reference value for the measurement. The 20 can.

Intensität des Fluoreszenzlichtes bei einer bestimm- Eine Einrichtung zum Messen des optischen Verten, entsprechend der interessierenden Substanz in haltens einer vorzugsweise biologischen Probe mit der Probe gewählten Wellenlänge hängt von der einer Lichtquelle und einem Monochromator, wel-Wellenlänge des anregenden Lichtes ab. Es ist üb- eher monochromatisches Licht veränderbarer Wellich, die entsprechende Beziehung in Form eines Ex- »5 lenlänge durch einen Austrittsspalt an eine Probe abcitationsspektrums darzustellen. Bei dem erfindungs- strahlt, an welcher ein das durch die Probe hindurchgemäßen Verfahren spiegelt sich nun das Excita- getretene, von dieser reflektierte oder von dieser tionsspektrum oder ein Ausschnitt desselben auf durch Fluoreszenz abgestrahlte Licht empfangender Grund der in der Zeit sinusförmigen Änderung oder Strahlungsdetektor angeordnet ist, dessen Ausgangs-Modulation der Wellenlänge des anregenden Lichtes 30 signal über Verstärker und Umformer einem Anals eine in etwa sinusförmige Änderung des Intensi- zeige- oder Registriergerät zugeführt wird, ist destätssignals wieder. Der sinusförmigen Änderung halb nach einer Weiterbildung der Erfindung daüberlagert ist ein Gleichstromanteil, der vom Fluo- durch gekennzeichnet, daß der Austrittsspalt des reszenzlicht anderer, ebenfalls angeregter Substanzen Monochromators durch die in einer Reihe nebeneinherrührt, deren Excitationsspektrum sich jedoch in 35 anderliegenden Enden mehrerer Lichtleiter gebildet der Regel über einen größeren oder anderen als den ist, welche in Längsrichtung an einem Gabelarm durch die beiden Eckwellenlängen erfaßten Wellen- einer an sich bekannten, elektromagnetisch anregbalängenbereich erstreckt und die daher zur Intensität ren Stimmgabel derart befestigt sind, daß die Lichtdes empfangenen Fluoreszenzlichtes bei allen WeI- leiterreihe beim Schwingen der Stimmgabel die Spekleniängen des anregenden Lichtes ungefähr gleichmä- *o trallinien des Monochromators überstreicht, und ßig beitragen. Da das Intensitätssignal durch eine an welche mit ihren anderen, zu einem Bündei zusamsich bekannte Spitzengleichrichtung meiner Wechsel- mengefaßten Enden vor die Probe geführt sind,
komponente in ein Meßsignal überführt wird, was Vorzugsweise ist das von der Probe abgegebene einer Differenzbildung zwischen dem jeweiligen Ma- Licht mittels eines zweiten Lichtleiterbündels zum ximalwert und dem Minimalwert des Intensitätssig- 45 Strahlungsdetektor geführt.Intensity of the fluorescent light at a certain wavelength selected according to the substance of interest in keeping a preferably biological sample with the sample depends on the wavelength of a light source and a monochromator, wel-wavelength of the exciting light. Using monochromatic light, it is better to represent the corresponding relationship in the form of an excitation length through an exit slit on a sample spectrum. In the case of the beam of the invention, on which a method according to the method through the sample is now reflected, the excitement entered, reflected by this or ionic spectrum or a section of the same on light emitted by fluorescence receiving ground of the time sinusoidal change or radiation detector is arranged is, whose output modulation of the wavelength of the stimulating light 30 signal via amplifier and converter is fed to an anal with an approximately sinusoidal change in the intensity display or recording device, is destätssignals again. The sinusoidal change is superimposed half according to a further development of the invention, a direct current component, which is characterized by the fluorescent light in that the exit slit of the resonance light of other, also excited substances monochromator comes from the monochromator in a row, whose excitation spectrum is formed in 35 opposite ends of several light guides The rule is larger or different than the one which extends in the longitudinal direction on a fork arm through the two corner wavelengths detected waves - a known, electromagnetically stimulating range and which are therefore attached to the intensity ren tuning fork in such a way that the light of the received fluorescent light at all When the tuning fork is swinging, the waveguide line sweeps over the lengths of the stimulating light approximately evenly, and contributes equally to the monochromator. Since the intensity signal is passed through a tip rectification of my interchangeable ends in front of the sample, which are known to form a bundle,
Component is converted into a measurement signal, which is preferably the difference between the respective measurement signal emitted by the sample.

nals enspricht, stellt das Meßsignal nur noch die Bei dieser Einrichtung werden das aufwendige Fo-Änderungen der Fluoreszenz der interessierenden kussiersystem und der schwingende Spiegel voilstän-Substanz in der Probe dar. Fluoreszenzen anderer dig eingespart Der gegenständliche Austrittsspalt des Substanzen, deren Intensität sich zwischen den bei- Monochromators ist durch die in einer Reihe nebenden Eckwellenlängen nicht wesentlich ändert, sowie 50 einanderliegenden Enden einzelner Lichtleiter eraußerdem Unregelmäßigkeiten der optischen Ein- setzt, wobei die Reihe parallel zu den Spektrallinien richtungen und Änderungen der optischen Eigen- des Monochromators verläuft und, durch die Stimmschaften der Probe, z.B. funktionell Schwellungs- gabel angetrieben, vor der Austrittsebene desselben und Strömunesänderuneen in einem Organ, werden sinusförmig hin- und herbewegt wird. Das dadurch durch die Differenzbildung kompensiert. Da das bei 55 von den Lichtleitern aufgenommene monochromatidem erfindungsgemäßen Verfahren sich ergebende sehe Licht variabler Wellenlänge wird durch die Intensitätssignal ungefähr sinusförmig, also praktisch Lichtleiter mit hohem Wirkungsgrad weitergeleitet monofrequent ist, ergibt sich eine außerordentliche und kann, da die Lichtleiter ohne Schwierigkeiten rauscharme Messung, so daß mit niedrigen Anre- verlegbar sind, einer Probe in jeder beliebigen Lage gungsintensitäten gearbeitet werden kann und da- 60 zugeführt werden. Es ist dadurch ohne weiteres mögdurch auch lichtempfindliche Proben untersucht wer- lieh, z. B. lebende Organe in narkotisierten Versuchsden können, deren Uniersuchung mit dem bisher be- tieren zu untersuchen.
kannten Verfahren nicht möglich ist. Da Lichtleiter mit sehr kleinem Durchmesser innals corresponds, the measurement signal only represents the. With this device, the complex fo changes in the fluorescence of the kussiersystem of interest and the oscillating mirror voilstän substance in the sample are saved. Fluorescences of other digs are saved The monochromator does not change significantly due to the corner wavelengths in a row, as well as 50 mutually lying ends of individual light guides and irregularities in the optical inserts, whereby the row runs parallel to the directions of the spectral lines and changes in the optical properties of the monochromator and, through the Voices of the sample, eg functionally driven swelling fork, in front of its exit plane and flow changes in an organ, are moved back and forth sinusoidally. This is compensated by forming the difference. Since the monochromatic method according to the invention, which is recorded at 55 monochromatic light of variable wavelengths, is approximately sinusoidal due to the intensity signal, i.e. it is practically monofrequency transmitted light guide with high efficiency, there is an extraordinary and can, since the light guide without difficulty, low-noise measurement, so that low excitations can be applied, a sample can be worked with in any position and supplied with intensities. It is therefore easily possible to examine even light-sensitive samples, e.g. For example, living organs in anesthetized experiments can be investigated with animals that have hitherto been used.
known procedure is not possible. Since light guides with a very small diameter in

Zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfah- der Größenordnung von Bruchteilen von Millimetern rens sowie des in der Hauptanmeldung beschriebe- «5 verwendbar sind, kann der Spalt sehr schmal genen Verfahrens zum Messen des Absorptionsverhai- macht werden, was die Monochromatisierung des tens einer Probe können an sich bekannte optische Lichtes verbessert. Ein entsprechender Intensitäts-Einrichtungen verwendet werden, die einen Mono- verlust wird durch Verlängerung des Spaltes, d.h.To carry out the method according to the invention, the order of magnitude of fractions of a millimeter rens and that described in the main application can be used, the gap can be very narrow Method for measuring the absorption ratio, which is the monochromatization of the At least one sample can be used to improve known optical light. A corresponding intensity facilities can be used, which is a mono loss by lengthening the gap, i.e.

Verbreiterung der Lichtlcilerbahn ausgeglichen. Eine entsprechende Maßnahme ist bei den bekannten Einrichtungen nicht möglich, da die Umformung eines sehr langen Spaltquerschnitts in einem zur Beleuchtung der Probe geeigneten, z. B. runden Querschnitt praktisch undurchführbar ist, bei der erfindungsgemäßen Einrichtung aber in einfachster Weise durch entsprechende Bündelung der Lichtleiter erreicht werden kann.Widening of the Lichtlcilerbahn compensated. A corresponding measure is in the known facilities not possible, as the forming of a very long gap cross-section in one for lighting suitable for the sample, e.g. B. round cross-section is practically impracticable in the inventive Establishment achieved in the simplest way by appropriate bundling of the light guides can be.

Der überstrichene Wellenlängenbereich ist ohne Schwierigkeiten durch Veränderung der Schwingungsamplitude der Stimmgabel veränderbar, was z.B. durch Einstellung eines die Stimmgabel antreibenden Generators geschehen kann. Ein wesentlicher Vorteil der erfindungsgemäßen Einrichtung ist die hohe Frequenz, mit der die Wellenlänge des monochromatischen Lichtes geändert werden kann. Es ist möglich, mit Stimmgabeifrequenzen bis zu 3 kHz zu arbeiten. Dies bedeutet eine erhebliche Steigerung gegenüber den bisher verwendeten Monochromatoren, bei denen der die Wellenlängenänderung bewirkende Torsionsspiegel eine Schwingungsfrequenz von höchstens 100 Hz besitzt. Dadurch ist es mit der erfindungsgemäßen Einrichtung erstmalig möglich, auch sehr schnelle Reaktionskinetiken auf optischem Wege zu untersuchen.The swept wavelength range can be changed without difficulty by changing the oscillation amplitude of the tuning fork, which is e.g. can be done by setting a generator driving the tuning fork. A major advantage the device according to the invention is the high frequency with which the wavelength of the monochromatic Light can be changed. It is possible to work with tuning frequencies up to 3 kHz. This means a considerable increase compared to the previously used monochromators in which the torsion mirror causing the change in wavelength has an oscillation frequency of at most 100 Hz. As a result, it is possible for the first time with the device according to the invention, also very much to investigate fast reaction kinetics by optical means.

Als Monochromator wird vorzugsweise ein Gittermonochromator verwendet, jedoch ist es bei der erfindungsgemäßen Einrichtung auch ohne weiteres möglich, als Monochromator ein Verlaufsfilter einzusetzen. Bei Verwendung der Einrichtung zur Fluoreszenzmessung ist das notwendige Filter für das Fluoreszenzlicht, dessen Durchlässigkeitsmaximum dem Emissionsmaximum der untersuchten Probe entspricht, vorzugsweise zwischen dem zweiten Lichtleiterbündel und dem Strahlungsdetektor angeordnet. Dann kann das das monochromatische Licht zur Probe hinleitende Lichtleiterbündel mit dem das Fluoreszenzlicht von der Probe ableitenden Bündel vor der Probe zu einem Bündel gemischt und in einem einzigen, leicht handhabbaren Gerät vereinigt sein.A grating monochromator is preferably used as the monochromator, but this is the case with the one according to the invention Setup also easily possible to use a graduated filter as a monochromator. When using the device for fluorescence measurement, the necessary filter for the fluorescence light is whose maximum permeability corresponds to the emission maximum of the sample examined, preferably arranged between the second light guide bundle and the radiation detector. Then the light guide bundle leading the monochromatic light to the sample can be used with the das Fluorescent light from the sample-dissipating bundle before the sample is mixed into a bundle and placed in be combined in a single, easy-to-use device.

Die Erfindung ist im folgenden an einem Ausführungsbeispiel an Hand einer Figur näher erläutert, wobei die Figur in schematischer Darstellung ein Ausführungsbeispiel einer erfindungsgemäßen Einrichtung zeigt, mit welcher das Absorptionsverhalten einer Probe meßbar ist.The invention is explained in more detail below using an exemplary embodiment using a figure, wherein the figure shows in a schematic representation an embodiment of a device according to the invention shows with which the absorption behavior of a sample can be measured.

Ein Strahlungsbündel einer Xenonhochdrucklampe 1 wird in einem Gittermonochromator 2 spektral zerlegt. Das Spektrum wird in der Austrittsebene 3 des Monochromator von einem Lichtleiterbündel Sa mit der Amplitude 4 abgetastet. Die Eckwellenlängen des abgetasteten Wellenlängenbereiches sind mit / 1 und λ 2 bezeichnet.A beam of radiation from a high-pressure xenon lamp 1 is spectrally broken down in a grating monochromator 2. The spectrum is scanned in the exit plane 3 of the monochromator by a light guide bundle Sa with the amplitude 4. The corner wavelengths of the scanned wavelength range are denoted by / 1 and λ 2.

Das aus mehreren einzelnen Lichtleitern bestehende Lichtleiterbündel 5 α ist an der Außenseite eines Armes 6 einer im übrigen nicht dargestellten Stimmgabel mit Kunstharz in der Weise angeklebt, daß mehrere Quarzlichtleiter von jeweils gleichem Durchmesser nebeneinander an der Außenseite desThe light guide bundle 5 α, which consists of several individual light guides, is on the outside an arm 6 of a tuning fork, otherwise not shown, glued with synthetic resin in such a way that that several quartz light guides of the same diameter side by side on the outside of the

ίο Stimmgabelarmes 6 anliegen. Die einzelnen Lichtleiter enden in einer Reihe, die auf Grund entsprechender Anordnungen der Stimmgabel vor der Austrittsebene des Monochromators parallel zu den Spektrallinien liegt und beim Schwingen der Stimmgabel die Spektrallinien abtastet.ίο the tuning fork arm 6 is in contact. The individual light guides end in a row, which due to the appropriate arrangements of the tuning fork in front of the exit level of the monochromator is parallel to the spectral lines and when the tuning fork vibrates the Scanned spectral lines.

Die Stimmgabel wird in bekannter Weise mittels eines Elektromagneten 7 angetrieben, dessen Wicklung 9 aus einem regelbaren Verstärker 10 gespeist ist, dessen Frequenz über die Wicklung 8 von der Stimmgabel gesteuert wird. Die Frequenz der Stimmgabelschwingung beträgt z. B. 500 Hz, so daß die Lichtwellenlänge zwischen λ 1 und λ 2 mit der gleichen Frequenz moduliert wird.The tuning fork is driven in a known manner by means of an electromagnet 7, the winding 9 of which is fed from a controllable amplifier 10, the frequency of which is controlled via the winding 8 of the tuning fork. The frequency of the tuning fork oscillation is z. B. 500 Hz, so that the light wavelength between λ 1 and λ 2 is modulated with the same frequency.

Das Lichtleiterbündel 5 α endet nach Umformung in z. B. einen runden Querschnitt vor der Probe 11. Das aus dieser austretende Licht gelangt durch ein zweites Lichtleiterbündel 5 b zu einem Strahlungsdetektor 12, z. B. zu einem Photoelektronenvervielfacher. Dieser gibt ein der Intensität der empfangenen Strahlung entsprechendes Ausgangssignal ab, welches über einen Verstärker 13, eine Loganthmierstufe 14, einen Bandpaß 18 und einen als Spitzengleichrichter wirkenden Demodulator 19 als Meßsignal zu einem Registriergerät 20 gelangt und dort als Extinktionsdifferenz gegen die Zeit registriert wird.The light guide bundle 5 α ends after reshaping in z. B. a round cross-section in front of the sample 11. The light emerging from this passes through a second light guide bundle 5 b to a radiation detector 12, z. B. to a photoelectron multiplier. This emits an output signal corresponding to the intensity of the received radiation, which reaches a recording device 20 as a measurement signal via an amplifier 13, a logging stage 14, a bandpass filter 18 and a demodulator 19 acting as a peak rectifier and is recorded there as an absorbance difference against time.

Außerdem wird am Punkt 16 hinter der Logarithmierstufe ein Signal abgezweigt und auf ein Oszilloskop 17 gegeben, wo, wie auch bei bekannten Einrichtungen üblich, entweder das gesamte Extinktionssignal, d. h. das Spektrum zwischen λ 1 und λ 2 odei nur die modulierte Komponente gegen λ registrier! wird. Das für die letztere Registrierung erforderliche Jf-Signal wird über eine Leitung 15 an der Wicklung 9 abgenommen.In addition, a signal is branched off at point 16 behind the logarithmic stage and sent to an oscilloscope 17, where, as is usual with known devices, either the entire extinction signal, ie the spectrum between λ 1 and λ 2, or only the modulated component against λ is recorded! will. The Jf signal required for the latter registration is picked up on the winding 9 via a line 15.

Um große Schwankungen der optischen Dichte dei Proben vorweg kompensieren zu können, wird in bekannter Weise am Ausgang des Verstärkers 13 eir Signal abgenommen, welches der Transmission be λ 2 entspricht, und über eine Leitung 21 zur Rege lung der Hochspannung des Photoelektronenverviel fachers 12 benutztIn order to be able to compensate for large fluctuations in the optical density of the samples in advance, a signal is taken in a known manner at the output of the amplifier 13, which corresponds to the transmission be λ 2 , and is used via a line 21 to regulate the high voltage of the photoelectron multiplier 12

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen 1 sheet of drawings

Claims (5)

Patentansprüche:Patent claims: 1. Verfahren zum Messen des optischen Verhaltens einer Probe, insbesondere einer Probe biologischer Objekte, bei welchem die Probe mit monochromatischem Licht durchstrahlt wird, dessen Wellenlänge sinusförmig zwischen zwei vorgebbaren Eckwellenlängen geändert wird und dessen Intensität hinter der Probe auf fotoelektrischem Wege durch ein Intensitätssignal dargestellt wird, aus dem durch eine Spitzengleichrichtung seiner Wechselkomponente zum Anzeigen oder Registrieren ein Meßsignal erzeugt wird, das der jeweiligen Differenz der Lichtintensitäten bei den beiden vorgebbaren Eckwellenlängen entspricht, dadurch gekennzeichnet, daß das Verfahren zum Messen des Fluoreszenzverhaltens einer Probe angewandt wird, wobei die eine Eckwellenlänge entsprechend einem Intensitätsmaximum des Fluoreszenzlichts (Excitationsmaximum) und die andere entsprechend einem benachbarten Minimum gewählt wird.1. Method for measuring the optical behavior of a sample, in particular a sample biological objects in which the sample is irradiated with monochromatic light, whose wavelength is changed sinusoidally between two predeterminable corner wavelengths and the intensity of which is represented by an intensity signal behind the sample in a photoelectric manner is, from which its alternating component for display by a peak rectification or register a measurement signal is generated which corresponds to the respective difference in the light intensities corresponds to the two predeterminable corner wavelengths, characterized in that the method for measuring the fluorescence behavior a sample is applied, the one corner wavelength corresponding to an intensity maximum of fluorescent light (excitation maximum) and the other corresponding to one adjacent minimum is chosen. 2. Einrichtung zum Messen des optischen Verhaltens einer vorzugsweise biologischen Probe, insbesondere zum Durchführen des Verfahrens nach Anspruch 1 mit einer Lichtquelle und einem Monochromator, welcher monochromatisches Licht veränderbarer Wellenlänge durch einen Austrittspalt an eine Probe abstrahlt, an welcher ein das durch die Probe hindurchgetretene, von dieser reflektierte oder von dieser durch Fluoreszenz abgestrahlte Licht empfangender Strahlungsdetektor angeordnet ist, dessen Ausgangssignal über Verstärker und Umformer einem Anzeige- oder Registriergerät zugeführt ist, dadurch gekennzeichnet, daß der Austrittsspalt des Monochromators (2) durch die in eine Reihe nebeneinanderliegenden Enden mehrerer Lichtleiter (Sa) gebildet ist, welche in Längsrichtung an einem Gabelarm (6) einer an sich bekannten, elektromagnetisch anregbaren Stimmgabel derart befestigt sind, daß die Lichtleiterreihe beim Schwingen der Stimmgabel die Spektrallinien des Monochromator überstreicht, und welche mit ihren anderen, zu einem Bündel zusammengefaßten Enden vor die Probe (II) geführt sind.2. Device for measuring the optical behavior of a preferably biological sample, in particular for performing the method according to claim 1 with a light source and a Monochromator, which monochromatic light of variable wavelength through a The exit slit radiates onto a sample, at which a from which has passed through the sample this reflected light or light emitted from it by fluorescence receiving radiation detector is arranged, whose output signal via amplifier and converter to a display or recording device is supplied, characterized in that the exit slit of the monochromator (2) is formed by the ends of several light guides (Sa) lying next to one another in a row, which are connected in the longitudinal direction a fork arm (6) of a known, electromagnetically excitable tuning fork of this type are attached that the light guide row when swinging the tuning fork the spectral lines of the Monochromator sweeps over them, and which, with their others, are combined in a bundle Ends in front of the sample (II) are passed. 3. Einrichtung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß das von der Probe (11) abgegebene Licht mittels eines zweiten Lichtleiterbündels (5 b) zum Strahlungsdetektor (12) geführt ist.3. Device according to claim 2, characterized in that the emitted from the sample (11) Light guided to the radiation detector (12) by means of a second light guide bundle (5 b) is. 4. Einrichtung nach Anspruch3, dadurch gekennzeichnet, daß zwischen dem zweiten Lichtleiterbündel (5 b) und dem Strahlungsdetektor (12) bei der Verwendung der Einrichtung zur Fluoreszenzmessung ein Filter angeordnet ist, dessen Durchlässigkeitsmaximum dem Emissionsmaximum der untersuchten Probe (11) entspricht. 4. Device according to claim 3, characterized in that a filter is arranged between the second light guide bundle (5 b) and the radiation detector (12) when using the device for fluorescence measurement, the maximum permeability of which corresponds to the emission maximum of the examined sample (11). 5. Einrichtung nach Anspruch 2, 3 oder 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Amplitude der Stimmgabelschwingung durch Einstellung eines die Stimmgabel antreibenden Generators (8, 10) veränderbar ist.5. Device according to claim 2, 3 or 4, characterized in that the amplitude of the Tuning fork oscillation by setting a generator that drives the tuning fork (8, 10) is changeable. einer Probe biologischer Objekte, laßt sich eine beträchtliche Empfindlichkeitssteigerung, speziell bei der Untersuchung sehr dichter Proben, gegenüber dem bis dahin bekannten Verfahren erzielen wenn Je Probe mit monochromatischem Licht durchstrahlt und dte Veränderung der Absorption oder Extinktion der Probe, die z. B. durch chemische oder biologische Prozesse in der Probe hervorgerufen werden, beobaChAhnTicrhen Untersuchungszwecken dient die FIuormetrie. Hierbei werden zeitliche Konzentrationsanderungen bestimmter fluoreszierender Substanzen einer Probe registriert. In biologischen, m biochemischen medizinischen und technischen Proben hegta sample of biological objects, a considerable increase in sensitivity, especially when examining very dense samples, compared to the previously known method can be achieved if each sample is irradiated with monochromatic light and dte change in the absorption or extinction of the sample, the z. B. be caused by chemical or biological processes in the sample, observ aCh AhnTic r hen investigation purposes, fluorometry is used. Changes in the concentration of certain fluorescent substances in a sample are registered over time. In biological, m biochemical, medical and technical samples „ jedoch die zu untersuchende Substanz praktisch nie-"However, the substance to be examined is practically never Ss isoliert vor, sondern die Probe enthalt weitere ebenfalls fluoreszierende Substanzen. In einer Probe, die mit monochromatischem L.cht angestrahlt wird, werden deshalb in aller Regel nicht nur die zu unter-Ss is isolated before, but the sample contains other substances that are also fluorescent. In a rehearsal which is illuminated with monochromatic light, are therefore usually not only the under- buchende Substanz, die spezifisch zur Fluoreszenz, angeregt werden soll, sondern auch andere Substanzen angeregt (Basis-Fluoreszenz). Die interessierende Fluoreszenz läßt sich gegen die Basisiluoreszenz mit bekannten Verfahren, selbst bei strenger Fi terung,booking substance that is specific to fluorescence, should be stimulated, but also other substances excited (basic fluorescence). The fluorescence of interest can be compared with the basic fluorescence known procedures, even with strict Fi tion, „ nichc abgrenzen. Außerdem kann die Intensität der"Don't delimit. It can also change the intensity of the Sationsstrahlung bei lichtempfindlichen ProbenStation radiation in light-sensitive samples nicht beliebig gesteigert werden, da photochemischecannot be increased at will, since photochemical Wirkungen des Lichtes in der Probe vermieden wer-Effects of light in the sample are avoided Bei einem Verfahren zur Messung des optischen Ahsorntionsverhaltens einer Probe, insbesondere Bs ist ein Verfahren zur fluorimetrischen Untersuchune von biologischen Proben bekanntgeworden, das einige dieser Schwierigkeiten vermeidet. Bei diesem Verfahren wird ein monochromatischer Lichtstrahl abwechselnd auf einen Proben- und einen Bezugskanal geschaltet. Das von der Probe und einer Normalprobe im Bezugskanal abgegebene Fluoreszenzlicht wird einem gemeinsamen Lichtempfanger zugeleitet, mittels dessen ein die Intensität des empfangenen Lichtes darstellendes elektrisches Signal erzeugt wird. Dieses Signal wird im Rhythmus der Umschaltung zwischen Proben- und Bezugskanal in zwei Komponenten aufgeteilt, die riurch fortlaufende Subtraktion voneinander in ein Meßsignal überfuhrt werden das die Intensitätsdifferenz des Fluoreszenzlichtes aus dem Bezugskanal und des Fluoreszenzlichtes aus dem Vergleichskanal darstellt. Durch dieses Verfahren werden zwar Störungen, die in der verwendeten optischen Einrichtung, dem Fluorimeter, entstehen kompensiert, jedoch werden alle von der Probe so ausgehenden Störungen nicht beseitigt Bei diesen Störungen handelt es sich z. B. um die oben beschriebene überlagerung der untersuchten Fluoreszenz mit der Basisfluoreszenz, aber auch z. B. um scheinbare Änderungen der Fluoreszenz, die aus Veränderungen „ der räumlichen Struktur der Proben resultieren.In a method for measuring the optical absorption behavior of a sample, in particular Bs is a method of fluorometric investigation of biological samples that avoids some of these difficulties. With this one The method is a monochromatic light beam alternately on a sample and a reference channel switched. The fluorescent light emitted by the sample and a normal sample in the reference channel is fed to a common light receiver, by means of which the intensity of the received Light representing electrical signal is generated. This signal is generated in the rhythm of the switchover between sample and reference channel in two Components divided by consecutive subtraction The difference in intensity of the fluorescent light is converted from one another into a measurement signal from the reference channel and the fluorescent light from the comparison channel. Through this procedure are interference that arise in the optical device used, the fluorimeter compensated, but all of the interferences emanating from the sample are not eliminated Faults are z. B. to the above-described superposition of the fluorescence examined with the basic fluorescence, but also z. B. Apparent changes in fluorescence resulting from changes “The spatial structure of the samples. Aufgabe der Erfindung ist die Aufgabe eines Verfahrens das die Messung des Fluoreszenzverhaltens einer Probe durch Untersuchung der spezifischen Fluoreszenz bestimmter Substanzen in der Probe mit großer Empfindlichkeit gestattet, wobei nicht interessierende Veränderungen der Probe und die Fluoreszenz weiterer Substanzen in der Probe, die Basisfluoreszenz, das Meßergebnis nicht beeinflussen sollen.The object of the invention is the object of a method that measures the fluorescence behavior a sample by examining the specific fluorescence of certain substances in the sample Great sensitivity allowed, with no interesting changes in the sample and fluorescence other substances in the sample, the basic fluorescence, should not influence the measurement result. Diese Aufgabe wird ausgehend von einem Verfahren zum Messen des optischen Verhaltens einer Probe insbesondere einer Probe biologischer Objekte bei welchem die Probe mit monochromatischem Licht durchstrahlt wird, dessen WellenlängeThis task is based on a method for measuring the optical behavior of a Sample in particular a sample of biological objects in which the sample with monochromatic Light is penetrated, its wavelength
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