DE1798385A1 - Method and device for the photometric examination of, in particular, biological samples - Google Patents
Method and device for the photometric examination of, in particular, biological samplesInfo
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Description
Verfahren und Einrichtung zur photometrischen Untersuchung von insbesondere biologischen Proben In dem älteren Patent ... (Patentanmeldung P 15.72 594.7) ist ein Verfahren zur Messung des optischen Absorptionsverhaltens einer Probe, insbesondere einer Probe biologischer Objekte, angegeben, mit dem eine beträchtliche Empfindlichkeitsteigerung, speziell bei der Untersuchung sehr dichter -Proben, gegenüber dem bis dahin bekannten Verfahren erzieltwird. Bei dem beschriebenen Verfahren wird die Probe mit monochromatischem Licht durchstrahlt und die Veränderung der Absorption oder Extinktion der Probe, die z. B. durch chemische oder biologische Prozesse in der Probe hervorgerufen werden, beobachtet.Method and device for the photometric examination of in particular biological samples In the older patent ... (patent application P 15.72 594.7) is a method for measuring the optical absorption behavior of a sample, in particular a sample of biological objects, indicated, with which a considerable increase in sensitivity, especially when examining very dense samples compared to the previously known Procedure is achieved. In the method described, the sample is monochromatic Light shines through and the change in absorption or extinction of the sample, the z. B. caused by chemical or biological processes in the sample, observed.
Ähnlichen Untersuchungszwcken dient die Pluormetrie. Pluormetry is used for similar research purposes.
Hierbei werden zeitliche Konzentrationsänderungen bestimmter fluoreszierender Substanzen einer Probe registriert. In biclouischen, in biochemischen, medizinischen und technischen Proben liegt jedoch die zu untersuchende Substanz praktisch niemals isoliert vor, sondern die Probe enthält weitere ebenfalls fluoreszierende Substanzen. In einer Probe, die mit monochromatischem Licht angestrahlt wird, werden deshalb in aller Regel nicht nur die zu untersuchende Substanz, die spezifisch zur Fluorescenz angeregt werden soll, sondern auch andere Substanzen angeregt (Basis-Pluorescenz). Die interessierende Pluorescenz läßt sich gegen die Basisfluorescenz mit bekannten Verfahren, selbst bei strenger Filterung, nicht abgrenzen. Außerdem kann die Intensität der Exitationsstrahlung bei licht empfindlichen Proben. nicht beliebig gesteigert werden, da photochemische Wirkungen des Lichtes in der Probe vermieden werden müssen.Here, changes in concentration over time become more fluorescent Substances of a sample registered. In biochemical, biochemical, medical and technical samples, however, lies the substance to be examined practically never isolated before, but the sample contains others which are also fluorescent Substances. In a sample that is illuminated with monochromatic light therefore, as a rule, not only the substance to be examined that is specific to the Fluorescence is to be excited, but also other substances are excited (base fluorescence). The fluorescence of interest can be compared to the basic fluorescence with known Do not delimit procedures, even with strict filtering. It can also increase the intensity the exitation radiation in light-sensitive samples. not increased at will as photochemical effects of the light in the sample must be avoided.
Es ist ein Verfahren zur fluorimeischen Untersuchung von biologischen Proben bekannt geworden, das einige dieser Schwierigkeiten vermeidet. Bei diesem Verfahren wird ein monochromatischer Lichtstrahl abwechselnd auf einen'Proben-und einen Bezugskanal geschaltet. Das von der Probe und einer Normalprobe im Bezugskanal abgegebene Fluorecenzlicht wird einem gemeinsamen Lichtempfänger zugeleitet, mittels dessen ein die Intensität des empfangenen Lichtes darstellendes elektrisches Signal erzeugt wird. Dieses Signal wird im Rhythmus der Umschaltung zwischen Proben- und Bezugskanal in zwei Komponenten aufgeteilt, die durch fortlaufende Subtraktion voneinander in ein meßsignal Uberftihrt werden, das die Intensitätsdifferenz des Fluorescenzlichtes aus dem Bezugskanal und des Fluorescenzlichtes aus dem Vergleichskanal darstellt. Durch diesen Verfahren werden zwar Störungen, die in der verwendeten optischen Einrichtung, dem Fluorimeter, entstehen, kompensiert, jedoch werden alle von der Probe ausgehenden Störungen nicht beseitigt. Bei diesen Störungen handelt es sich z.B. um dir oben beschriebene Überlagerung der untersuchten Fluoresaens mit der Basisfluorescenz, aber auch z.B. um scheinbare Änderungen der Fluorescenz, die aus Veränderungen der räumlichen Struktur der Proben resultieren. It is a method for the fluorometric investigation of biological Rehearsal has become known that avoids some of these difficulties. With this one Method is a monochromatic light beam alternately on a 'sample and switched to a reference channel. That of the sample and a normal sample in the reference channel Fluorescent light emitted is fed to a common light receiver by means of its an electrical signal representing the intensity of the received light is produced. This signal is generated in the rhythm of switching between sample and Reference channel divided into two components by successive subtraction from each other can be converted into a measurement signal that shows the difference in intensity of the fluorescent light from the reference channel and the fluorescence light from the comparison channel. Although this method eliminates interference that occurs in the optical device used, the fluorimeter, are compensated, but all emanating from the sample are compensated Faults not eliminated. These disorders are, for example, you above described superposition of the examined fluorescent with the basic fluorescence, but also, for example, about apparent changes in fluorescence resulting from changes in the spatial structure of the samples result.
Aufgabe der Erfindung ist die Angabe eines Verfahrens, das die Messung des Fluorescenzverhaltens einer Probe durch Untersuchung der spezifischen Fluorescenz bestimmter Substanzen in der Probe mit großer Empfindlichkeit gestattet, wobei nicht interessierende Veränderungen der Probe und die Fluorescenz weiterer Substanzen in der Probe, die Basisfluorescenz, das Meßergebnis nicht beeinflussen sollen. The object of the invention is to specify a method that the measurement the fluorescence behavior of a sample by examining the specific fluorescence certain substances in the sample are allowed with great sensitivity, not being interesting changes in the sample and the fluorescence of other substances in the sample, the base fluorescence, should not influence the measurement result.
Diese Aufgabe wird, ausgehend von einem Verfahren zum Messen des Fluorescenzverhaltens einer Probe, bei welchem die Probe mit monochromatischem Licht einstellbarer lSellenlänge beleuchtet und die Intensität des von der Probe abgegebenen Fluorescenzlichtes auf photoelektrischem Wege durch ein Intensitatssignal dargestellt wird, dadurch gelöst, daß erfindungsgemäß die Wellenlänge des monochromatischen Lichtes sinusförmig zwischen zwei vorgebbaren Eckwellenlägen geändert wird und daß das Intensitätssignal durch eine an sich bekannte Spitzengleichrichtung seiner Wechselkomponente in ein Meßsignal überführt wird, das angezeigt oder zeitabhängig registriert wird. This task is based on a method for measuring the Fluorescence behavior of a sample in which the sample is exposed to monochromatic light adjustable wavelength and the intensity of the emitted by the sample Fluorescence light represented photoelectrically by an intensity signal is achieved in that, according to the invention, the wavelength of the monochromatic Light is changed sinusoidally between two predefinable corner wave lengths and that the intensity signal by a known peak rectification of its alternating component is converted into a measurement signal that is displayed or registered as a function of time.
Das oben angegebene Verfahren beruht auf der gleichen Erfindungsidee wie das in dem Hauptpatent... (Patentanmeldung P 15 72 594) angegebene Verfahren zum Messen des optischen Absorptionsverhaltens. The method given above is based on the same inventive idea like the method specified in the main patent ... (patent application P 15 72 594) for measuring the optical absorption behavior.
Durch die Anstrahlung der Probe mit monochromatischem Licht periodisch veränderter Wellenlänge dinet die Probe gleichzeitig als "Referenzprobe" in bezug auf die zu untersuchende Substanz, wobei die Fluorescenzintensität bei einer der beiden Eckwellenlängen den Bezugswert für die Messung darstellt. Periodically by illuminating the sample with monochromatic light If the wavelength is changed, the sample is also used as a "reference sample" on the substance to be examined, the fluorescence intensity at one of the both Corner wavelengths represents the reference value for the measurement.
Die Intensität des Fluorescenzlichtes bei einer bestimmten, entsprechend der interessierenden Substanz in der Probe gewählten Wellenlänge hängt von der Wellenlänge des anregenden Lichtes ab. Es ist üblich, die entsprechende Beziehung in Form eines Exitationsspektrums darzustellen.The intensity of the fluorescence light at a certain, accordingly The wavelength of interest in the sample chosen depends on the wavelength of the stimulating light. It is common to have the appropriate relationship in the form of a To represent the exit spectrum.
Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren spiegelt sich nun das Excitationsspektrum oder ein Ausschnitt desselben auf Grund der in der Zeit sinusförmigen Änderung oder Modulation der Wellenlänge des anregenden Lichtes als eine in etwa sinusförmige Änderung des Intensitätssignals wieder, Der sinusförnigen Änderung überlagert ist ein Gleichstromanteil, der vom Fluorescenzlicht anderer, ebenfalls angeregter Substanzen herrührt, deren Excitationsspektrum sich jedoch ia der Regel über einen größeren oder anderen als den durch die beiden Eckwellenlängen erfaßten Wellenlängenbereich. erstreckt und die daher zur Intensität des empfangenen Fluorescenzlichtes bei allen Wellenlängen des anregenden Lichtes ungefähr gleichmäßig beitragen. Da das Intensitätssignl durch eine an sich bekannte Spitzengleichrichtung seiner \\7echselkomponente in ein Meßsignal überführt wird, Wan einer Differenzbildung zwischen dem jeweiligen Maximalwert und dem Minimalwert des Intensitätssignales entspricht, stellt das Meßsignal nur noch die Änderungen der Fluorescnz der interessierenden Substanz in der Probe dar. Fluorescenzen anderer Substanzen, deren. Intensität sich wischen den beiden Eckwellenlängen nicht wesentlich ändert, sowie außer dem Unregelmäßigkeiten der optischen Einrichtungen und Änderungen der optischen Eigenschalften der Probe, z.B. funktionelle Schwellunge- und Strömungsänderungen in einem Organ, werden durch die differenzbildung kompeneiert Da das bei dem erfindungsgemäßen Verfahren sich ergebende Intensitätssignal ungefähr sinusfôrmig, alao praktisch monofrequent ist, ergibt sich eine außerordenfliohen rauscharme Messung, so daß mit niedrigen Anregunfeintensitaten gearbeitet werden kann und dadurch auch lichtempfindliche Proben untersucht werden können, deren Untersuchung mit dem bisher bekannten Verfahren nicht möglich ist.In the method according to the invention, the excitation spectrum is now reflected or a section of the same due to the sinusoidal change in time or Modulation of the wavelength of the exciting light as an approximately sinusoidal one Change in the intensity signal again, the sinusoidal change is superimposed a direct current component from the fluorescence light of other substances that are also excited originates, the excitation spectrum of which, however, generally extends over a larger one or wavelength ranges other than those covered by the two corner wavelengths. extends and therefore to the intensity of the received fluorescent light in all Contributing wavelengths of stimulating light approximately evenly. Since the intensity signal by a known peak rectification of its alternating component in a measurement signal is transferred, Wan a difference between the respective The measurement signal represents the maximum value and the minimum value of the intensity signal only the changes in the fluorescence of the substance of interest in the sample . Fluorescences of other substances, their. Intensity wipe the two Corner wavelengths does not change significantly, as well as other than the irregularities of the optical devices and changes in the optical properties of the sample, e.g. functional changes in swelling and flow in an organ are caused by the difference formation compensated Since the result of the method according to the invention Intensity signal approximately sinusoidal, which is practically monofrequency an extremely low-noise measurement, so that with low excitation imperfections worked and thus light-sensitive samples can also be examined, whose investigation is not possible with the previously known method.
Die durch das erfindungsgemäße Verfahren bewirkte Differenzbildung wird optimal, wenn die eine Eckwellenlange entsprechend einem Intensitätsmaximum des Fluorescenzlichtes, d.h. entsprechend einem Maximum des Exitationsspektrums, und die andere entsprechend einem benachbarten Minimum gewählt wird. The difference formation brought about by the method according to the invention becomes optimal when the one corner wavelength corresponds to an intensity maximum of the fluorescence light, i.e. corresponding to a maximum of the excitation spectrum, and the other is chosen according to an adjacent minimum.
Zur Durchfahrung des erfindungsgemäßen Verfahrens sowie des in der Hauptanmeldung beschriebenen Verfahrens zum Messen des Absorptionsverhaltens einer Probe können an sich bekannte optische Einrichtungen verwendet werden, die einen Monoohromator aufweisen, bei dem die Wellenlänge des abgegebenen Lichtes durch periodische Bewegung eines Spiegels, z.B. eines Torsionsschwingungen ausfuhrenden Spiegels, geändert wird. Zur Fokussierung des vom Monochromator abgegebenen Lichties auf die Probe ist jedoch bei diesen Einrichtungen ein sehr hoher optischer Aufwand erforderlich, der zu ziemlichen Lichtverlusten fahrt und eD insbesondere erforderlich macht, die Probe an einer bestimmten Stelle im Strahlengan anzuordnen. Darlberhinaus ist die Geschwindigkeit der Wellenländerung wegen der Träheit des verwendeten Spiegels nicht beliebig vergrößerbar. Bei der photometrischen Untersuchung sehr schneller Reaktionskinetiken ist jedoch eine sehr rasche Änderung der Wellenlänge des monochrom. atschen Lichtes erwünscht, um den Ablauf der Reaktion, der sich in der Änderung z.. der Extinktion oder der Intensität der Flucreseenz einer Substanz wiederspiegelt, sichtbar machen zu können. To carry out the method according to the invention as well as that in the Main application described method for measuring the absorption behavior of a Sample can be used per se known optical devices that have a Monoohromator have in which the wavelength of the emitted light by periodic Movement of a mirror, e.g. a mirror with torsional vibrations, will be changed. To focus the light emitted by the monochromator on the However, a very high optical effort is required for these facilities, which drives to considerable light losses and makes eD especially necessary that To arrange the sample at a certain point in the beam. Moreover, the The speed of the wave change is not due to the inertia of the mirror used can be enlarged as required. In the photometric investigation of very fast reaction kinetics however, there is a very rapid change in the wavelength of the monochrome. atschen light desirable to the course of the reaction, which is reflected in the change z .. the absorbance or reflect the intensity of the fluence of a substance to be able to.
Eine Einrichtung zum Messen des optischen Verhaltens einer vorzugsweise biogischen Probe mit einer Lichtquelle und einem Monochromator, welcher monochrosatisches Licht veränderbarer Wellenlänge durch einen Austrittsspalt an eine Probe abstrahlt, an welcher ein das durch die Probe hindurchgetretene, von dieser refleRtierte oder von dieser durch Fluorescenz abgestrahlte Licht empfangender Strahlungsdetektor angeordnet ist, dessen Ausgangssignal über Verstärker und Umformer einem Anzeige- oder Registriergerät zugeführt wird, ist deshalb nach einem weiteren wesentlichen Merkmal der Erfin dung dadurch gekennzeichnet, daß der Austrittsspalt des Monochromators durch die in einer Reihe nebeneinanderliegenden Enden mehrerer Lichtleiter gebildet ist, welche in Längsrichtung an einem Gabelarm einer an sich bekannten, elektromagnetisch anregbaren Stimmgabel derart befestigt sind, daß die Lichtleiterreihe beim Schwingen der Stimmgabel die Spektrallinien des Monochromators überstreicht, und welche mit ihren anderen, zu einem Bündel zusammengefaßten Enden vor die Probe geführt sind. A device for measuring the optical behavior of a preferably biogical sample with a light source and a monochromator, which monochromatic light of variable wavelength through an exit slit radiates to a sample on which a that which has passed through the sample, from it reflects or receives light emitted by fluorescence Radiation detector is arranged, the output signal via amplifier and converter is fed to a display or recording device, is therefore after another essential feature of the inven tion, characterized in that the exit gap of the monochromator through the ends of several adjacent to one another in a row Light guide is formed, which in the longitudinal direction on a fork arm one per se known, electromagnetically excitable tuning fork are attached such that the When the tuning fork is swinging, the light guide lines form the spectral lines of the monochromator and which with their other ends gathered in a bundle are performed in front of the sample.
Vorzugsweise ist das von der Probe abgegebene Licht mittcls eines zweiten Lichtleiterbündels zum Strahlungsdetektor geführt. The light emitted by the sample is preferably by means of a second light guide bundle led to the radiation detector.
Bei dieser Einrichtung werden das aufwendige Fokussiersystem und der schwingende Spiegel vollständig eingespart. With this device, the complex focusing system and the swinging mirror is completely saved.
Der gegenständliche Austrittsspalt des Monochrornators ist durch die in einer Reihe nebeneinanderliegenden Enden einzelner Lichtleiter ersetzt, wobei die Reihe parallel zu den Spektrallinien des Monochromators verläuft und, durch die Stimmgabel angetrieben, vor der Austrittsebene desselben sinusförmig hin-und herbewegt wird. Das dadurch von den Lichtleitern aufgenommone mDnochromatische Licht variabler Wellenlänge wird durch die Lichtleiter mit hohem Wirkungsgrad weitergeleitet und kann, da die Lichtleiter ohne Schwierigkeiten verlegbar sind, einer Probe in jeder beliebigen Lage zugeführt werden.The objective exit slit of the monochromator is through the replaced in a row of adjacent ends of individual light guides, wherein the series runs parallel to the spectral lines of the monochromator and, through the tuning fork driven, sinusoidally back and forth in front of the exit plane of the same is moved. The mDnochromatic light absorbed by the light guides variable wavelength is transmitted through the light guide with high efficiency and, since the light guides can be laid without difficulty, a sample in can be fed to any position.
Es ist dadurch ohne weiteres möglich, z.B. lebende Organe in narkotisierten Versuchstieren zu untersuchen.It is thus easily possible, e.g. living organs in anesthetized Investigate laboratory animals.
Da Lichtleiter mit sehr kleinem Durchmesser in der Größenordnung von Bruchteilen von Millimetern verwendbar sind, kann der Spalt sehr schmal gemacht werden, was die Monochromatisierung des Lichtes verbessert. Ein entsprechender Insensitätsverlust wird durch Verlängerung des Spaltes, d.h. Verbreiterung der Lichtleiterbahn ausgeglichen. Eine entsprechende Maßnahme ist bei den bekannten Einrichtungen nicht möglich, da die Umformung eines sehr langen Spalt querschnitts in einem zur Beleuchtung der Probe geeigneten, z.B. runden Querschnitt praktisch undurchführbar ist,bei der erfindungsgemäßen Einrichtung aber in einfachster Weise durch entsprechende Bündelung der Lichtleiter erreicht werden kann. Because light guides with a very small diameter in the order of magnitude of fractions of a millimeter are usable, the gap can be made very narrow which improves the monochromatization of the light. A corresponding loss of insensitivity is compensated for by lengthening the gap, i.e. widening the light guide path. A corresponding measure is not possible with the known facilities, there the forming of a very long gap cross-section in one to illuminate the Sample suitable, e.g. round cross-section is practically impracticable in the case of the invention However, it is set up in the simplest possible way by bundling the light guides accordingly can be reached.
Der überstrichene Wellenlängenbereich ist ohne.Schwierigzeiten durch Veränderung der Schwingungsamplitude der Stimmgabel veränderbar, was z. B. durch Einstellung einesie Stimmgabel antreibenden Generators geschehen kann. Ein wesentlicher Vorteil der erfindungsgemaßen Einrichtung ist die hohe Frequenz, mit der die Wellenlänge des monochromatischen Lichtes geändert werden kann. Es ist möglich, mit StirnmgaTelfrequen zen bis zu 3 kz zu arbeiten. Dies bedeutet eine erhebliche Steigerung gegenüber den bisher verwendeten Monochromatoren, bei denen der die ellenllngenänderung bewirkende Torsionsspiegel eine Schwingungsfrequenz von höchstens 100 Hz besitzt. Dadurch ist es mit der erfindungsgemaßen Einrichtung erstmalig möglich, auch sehr schnelle Reaktionskinetiken auf optischem Wege zu untersuchen. The swept wavelength range is without any difficult times Change in the oscillation amplitude of the tuning fork changeable, which z. B. by Setting a generator driving the tuning fork can be done. An essential one The advantage of the device according to the invention is the high frequency with which the wavelength of monochromatic light can be changed. It is possible with forehead gasoline frequencies zen up to 3 kz to work. This means a significant increase over the monochromators used up to now, in which the one that causes the change in length Torsion mirror has an oscillation frequency of at most 100 Hz. This is it is possible for the first time with the device according to the invention, also very fast reaction kinetics to be examined optically.
Als Monochromator wird vorzugsweise ein Gittermonochromator verwendet, jedoch ist es bei der erfindungsgemäßen Einrichtung auch ohne weiteres möglich, als Ilonochromator ein Verlaufsfilter einzusetzen. Bei Verwendung der Einrichtung zur Fluorescenzmessung ist das notwendige Filter für das Fluorescenzlicht, dessen Durchlässigkeitsmaximum dem Emissionsmaximum der untersuchten Probe entspricht, vorzugsweise zwischen dem zweiten Lichtleiterbündel und dem Strahlungsdetektor angeordnet. Dann kann das das monochromatische Licht zur Probe hinleitende Lichtleiterbündel mit dem das Fluorescenzlicht von der Probe ableitenden Bündel vor der Probe zu einem Bündel gemischt und in einem einzigen, leicht handhab-. baren Meßkop, Vereinigt sein. A grating monochromator is preferably used as the monochromator, however, with the device according to the invention it is also easily possible as an ilonochromator to use a graduated filter. Using the fluorescence measurement device is the necessary filter for the fluorescence light, whose maximum permeability corresponds to the emission maximum of the sample examined, preferably arranged between the second light guide bundle and the radiation detector. Then the light guide bundle leading the monochromatic light to the sample can with the bundle in front of the sample which conducts the fluorescent light away from the sample Bundles mixed and in a single, easily manageable. baren Meßkop, United be.
Die Erfindung ist im folgenden an einem Ausführungsbeispiel anhand einer Figur näher erläutert, wobei die Figur in schematischer Darstellung ein Ausführungsbeispiel einer erfindungsgemäßen Einrichtung zeigt, mit welcher das Absorptionsverhalten einer Probe meßbar ist. The invention is based on an exemplary embodiment below a figure explained in more detail, the figure in a schematic representation of an embodiment shows a device according to the invention, with which the absorption behavior a sample is measurable.
Ein StrahlungsbündeleinerX enohnochdrucklampe 1 wird in einem Gittermonochromator 2 spektral zerlegt. Das Spektrum wird in ir Austrittsebene 3 des Monochromators von einem Lichtleiterbündel 5a mit der Amplitude 4 abgetastet. Die Eckwellenlängen des abgetasteten Wellenlängenbereiches sind mit jt1 und 342 bezeichnet. A radiation beam from a high pressure lamp 1 is placed in a grating monochromator 2 spectrally broken down. The spectrum is in ir exit plane 3 of the monochromator scanned by an optical fiber bundle 5a with the amplitude 4. The corner wavelengths of the scanned wavelength range are denoted by jt1 and 342.
Das aus mehreren einzelnen Lichtleitern bestehende Lichtleiterbündel 5a ist an der Außenseite eines Armes 6 einer im übrigen nicht dargestellten Stimmgabel mit Kunstharz in der Weise angeklebt, daß mehrere Quarzlichtleiter von jeweils gleichem Durchmcsser nebeneinander an der Außenweite des Stimmgabelarmes 6 anliegen. Die einzelnen Lichtleiter enden in einer Reihe, die auf Grund entsprechender AnorSnungen der Stimmgabel vor der Austrittsebene des Mono chromatcrs parallel zu den Spektrallinien liegt. und beim Schwingen der Stimmgabel die Spektrallinien abtastet. The light guide bundle consisting of several individual light guides 5a is on the outside of an arm 6 of a tuning fork, otherwise not shown glued with synthetic resin in such a way that several quartz light guides of the same Diameter lie next to one another on the outer width of the tuning fork arm 6. the individual light guides end in a row, which is based on corresponding anorSulations the tuning fork in front of the exit plane of the monochromatic parallel to the spectral lines lies. and at Swinging the tuning fork scans the spectral lines.
Die Stimmgabel wird in bekannter Weise mittels eines Elektromagneten 7 angetrieben, dessen Wicklung 9 aus einem regelbaren Verstärker 10 gespeist ist, dessen Frequenz über die Wicklung 8 von der Stimmgabel gesteuert wird. Die Frequenz der Stimmgabelschwingung beträgt z. B. 500 Hz, so daß die Lichtwellenlänge zwischen kl und W 2 mit der gleichen Frequenz moduliert wird. The tuning fork is in a known manner by means of an electromagnet 7 driven, the winding 9 of which is fed from a controllable amplifier 10, the frequency of which is controlled via the winding 8 of the tuning fork. The frequency the tuning fork oscillation is z. B. 500 Hz, so that the light wavelength between kl and W 2 is modulated with the same frequency.
Das Lichtleiterbündel 5a endet nach Umformung in z.B. einen runden Querschnitt vor der Probe 11. Das aus dieser austretende Licht gelangt durch ein zweites Lichtleiterbündel 5b zu einem Strahlungsdetektor 12, z.B. zu einem Photoelektronen vervielfacher. Dieser gibt ein der Intensität der empfangenen Strahlung entsprechendes Ausgangssignal ab, welches über einen Verstärker 13, eine Logarithmierstufe 14, einen Bandpaß 18 und einen als Spitzengleichrichter wirkenden Demodulator 19 als Meßsignal zu einem Registriergerät 20 gelangt und dort als Extinktionsdifferenz gegen die Zeit registriert wird. The light guide bundle 5a ends after being shaped into, for example, a round one Cross section in front of the sample 11. The light emerging from this passes through a second light guide bundle 5b to a radiation detector 12, e.g. to a photoelectron multiplier. This gives an intensity corresponding to the radiation received Output signal, which via an amplifier 13, a logarithmic stage 14, a bandpass filter 18 and a demodulator 19 acting as a peak rectifier Measurement signal arrives at a recorder 20 and there as an absorbance difference is registered against the time.
Außerdem wird am Punkt 16 hinter der Logarithmierstufe ein Signal abgezweigt und auf ein Oscilloskop 17 gegeben, wo, wie auch bei bekannten Einrichtungen üblich, entweder das gesamere Extinktionssignal d.h. das Spektrum zwischen @@ und Jt2 oder nur die modulierte Komponente gegen N registriert wird. Das für die letztere Registrierung erforderliche Signal wird über eine Leitung 15 an der Wicklung 9 abgenommen. In addition, a signal is generated at point 16 after the logarithmic stage branched off and given to an oscilloscope 17, where, as well as with known devices usual, either the total extinction signal i.e. the spectrum between @@ and Jt2 or only the modulated component against N is registered. That for the latter The signal required for registration is picked up via a line 15 on the winding 9.
Um große Schwankungen der optischen Dichte der Proben vorwegkompensieren zu können, viird in bekannter Weise am Ausgang der Verstärkers 13 ein Signal abgenommen, welches der Transmission bei #2 entspricht, und über eine Leitung 21 zur Regelung der Hochspannung des Photoelckronenvervielfachers 12 benutzt. To compensate for large fluctuations in the optical density of the samples in advance a signal is picked up in a known manner at the output of the amplifier 13, which corresponds to the transmission at # 2, and via a line 21 for regulation the high voltage of the photomultiplier 12 is used.
Claims (6)
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| DE19681798385 DE1798385C3 (en) | 1968-08-02 | Method and device for measuring the optical behavior of a sample |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE1798385A1 true DE1798385A1 (en) | 1972-01-20 |
| DE1798385B2 DE1798385B2 (en) | 1974-03-07 |
| DE1798385C3 DE1798385C3 (en) | 1976-02-12 |
Family
ID=
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1554635B1 (en) * | 1966-05-25 | 1971-04-01 | Burger Eisenwerke Ag | DEVICE FOR GRILLING MEATS |
| DE2509215A1 (en) * | 1974-03-04 | 1975-10-30 | Int Diagnostic Tech | FLUOROMETRIC SYSTEM, METHOD AND TEST OBJECT |
| FR2363102A1 (en) * | 1976-08-30 | 1978-03-24 | Philips Nv | METHOD AND DEVICE FOR MEASURING THE CONCENTRATION OF MOLECULES PRESENTING A SELECTIVE SPECTRUM IN A SAMPLE SUBSTANCE |
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| DE2509215A1 (en) * | 1974-03-04 | 1975-10-30 | Int Diagnostic Tech | FLUOROMETRIC SYSTEM, METHOD AND TEST OBJECT |
| FR2363102A1 (en) * | 1976-08-30 | 1978-03-24 | Philips Nv | METHOD AND DEVICE FOR MEASURING THE CONCENTRATION OF MOLECULES PRESENTING A SELECTIVE SPECTRUM IN A SAMPLE SUBSTANCE |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE1798385B2 (en) | 1974-03-07 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) |