DE1767613C

DE1767613C - Edible, heat sealable film

Info

Publication number: DE1767613C
Authority: DE
Inventors: Toshio Somerville N J Tsuzuki (V St A)
Original assignee: Johnson and Johnson
Current assignee: Johnson and Johnson
Publication date: 1972-04-20

Description

Es gibt bereits zahlreiche Veröffentlichungen über fiziert wird, daß seine Zugfestigkeit bis zu rin-.-...ι die Herstellung von wasserlöslichen eßbaren Filmen, solchen Maße verschlechtert wird, daß es al , ^- die sich als Verpackungsmaterial für 'Nahrungsmittel packungsmaterial für Nahrungsmittel ungeeign . ist. eignen, jedoch sind diese Produkte bisher nicht in Im allgemeinen sind Folien und Filme mit einer Zugnennenswertem Umfange verwendet worden, weil sie 5 festigkeit von 703 kg/cm² oder mehr für diesen Zweck von Natur aus schwach sind, d. h. eine niedrige Zug- geeignet.There are already numerous publications on is ficated that its tensile strength up to rin -.-... ι the production of water-soluble edible films, is deteriorated to such an extent that it al, ^ - which is used as packaging material for 'food packaging material for food unsuitable. is. In general, sheets and films have been used to an appreciable extent because they are ^{inherently weak in tensile strength of 703 kg / cm 2} or more for this purpose, ie, low tensile strength.

festigkeit und niedrige Einreißfestigkeit haben, und Filme des enzymmodifizierten Kollagens können weil sie außerdem empfindlich gegenüber Luft mit wie folgt hergestellt werden: Eine wäßrige Aufhohem Feuchtigkeitsgehalt sind. schlämmung des Kollagens wird mit einem Enzym have strength and low tear resistance, and films of enzyme-modified collagen can because they are also made sensitive to air with the following: An aqueous high moisture content. The collagen is slurried with an enzyme

Es ist bekannt, daß Kollagen, das in der Korium- io gemahlen und das Gemisch mit einer eßbaren Säure, schicht von frischen Häuten enthalten ist, zu Folien wie Citronensäure, angiSäuert. Das durch die Säure oder Filmen gegossen werden kann, die stark genug gequollene Kollagen wird einige Stunden bei Raumsind, um für die Verpackung von Lebensmitteln ver- temperatur gehalten und dann homogenisiert und vor wendet zu werden. Diese Kollagenfilme sind jedoch dem Strangpressen zu Folien und Filmen entlüftet,
zwar eßbar und haben einen Nährwert, jedoch sind 15 Weichmacher, z. B. Glycerin, Sorbit, Propylensie in Wasser nicht leicht löslich. glykol oder Maisstärkesirup, können dem modifiziertenIt is known that collagen, which is ground in the corium and the mixture with an edible acid, contained in a layer of fresh skin, is acidified to form films such as citric acid. That can be poured through the acid or films, the strong enough swollen collagen is left in room for a few hours to be kept temperature for the packaging of food and then homogenized and turned before. However, these collagen films are vented after extrusion into foils and films,
although edible and nutritional, there are 15 plasticizers, e.g. B. glycerine, sorbitol, propylene not easily soluble in water. glycol, or corn syrup, can be modified

Es wurde nun gefunden, daß Kollagen durch Be- Kollagen in Mengen bis zu 50 Gewichtsprozent der handlung mit einem proteolytischen Enzym, z. B. trockenen Kollagenfeststoffe zugesetzt werden.
Ficin, bei einem pH-Wert im sauren Bereich so Die Erfindung wird aus der folgenden ausführlichen modifiziert werden kann, daß es in Wasser bei 70⁰C 20 Beschreibung in Verbindung mit den Figuren, die als löslich wird, während es die ursprüngliche Zug- Beispiel eine bevorzugte Ausführungsform des Erfestigkeit des nativen Kollagens in wesentlichem findungsgedankens darstellen, besser verständlich.
Umfange behält. Aus einem solchen en?ymbehahdelten F i g. 1 ist eine graphische Darstellung der optischen Kollagen hergestellte Filme eigner, sich zum Ver- Dichte in Abhängigkeit von der Tyrosinkonzentration; packen von Nahrungsmitteln und sind viel stärker als 25 F i g. 2 ist eine graphische Darstellung, die die zuFilme, die bisher aus anderen eßbaren Produkten nehmende Tyrosinmenge veranschaulicht, die mit hergestellt wurden. fortschreitender Reaktion des Enzyms mit demIt has now been found that collagen in amounts up to 50 percent by weight of the action with a proteolytic enzyme, z. B. dry collagen solids may be added.
Ficin, at a pH in the acidic range so The invention will be modified from the following detailed that it can be in water at 70 ⁰ C 20 description in connection with the figures, which is considered soluble, while it is the original tensile example represent a preferred embodiment of the solidification of native collagen in an essential inventive concept, better understandable.
Maintains scope. From such an enamel-treated Fig. Fig. 1 is a graph of the collagen optical films prepared for increasing density as a function of tyrosine concentration; pack food and are much stronger than 25 f i g. Figure 2 is a graph illustrating the amount of tyrosine in films heretofore obtained from other edible products that were made with. progressive reaction of the enzyme with the

Gegenstand der Erfindung ist demzufolge ein eß- Kollagen gebildet wird.The object of the invention is therefore an eating collagen is formed.

barer, heißsiegelbarer Film, der in Wasser bei 70°C In den folgenden Beispielen sind alle Mengen in Gezu wenigstens 90% löslich ist unil eine Zugfestigkeit 30 wichtsteilen ausgedrückt, falls nicht anders angegeben, von wenigstens 702 kg/cm² hat, der in η sich bekannter Die Kollagenfilme gemäß der Erfindung sind zu Weise aus Kollagen, gegebenenfalls unter Zusatz eines wenigstens 90% löslich, wenn sie 1 Minute mit Wasser Weichmachers, hergestellt worden ist, der dadurch im Überschuß bei 70⁰C gerührt werden. Die Löslichgekennzeichnet ist, daß das Gewichtsverhältnis von keit eines Kollagenfilms läßt sich in einfacher Weise freiem Tyrosin zu gebundenem Hydroxypyrolin in 35 wie folgt bestimmen:In the following examples, all amounts are soluble in Gez to at least 90% and have a tensile strength of 30 parts by weight, unless otherwise stated, of at least 702 kg / cm ² , which is in η the known collagen films according to the invention are to be way of collagen, optionally with the addition of at least 90% soluble, if it has been produced 1 minute with water softener, which are stirred characterized in excess at 70 ⁰ C. The solubility is characterized by the fact that the weight ratio of keit of a collagen film can be determined in a simple manner free tyrosine to bound hydroxypyroline in 35 as follows:

dem Kollagen durch Behandlung mit einer verdünnten Aus einem Kollagenfilm, der eine Dicke von 25,4 μthe collagen by treatment with a diluted from a collagen film, which is a thickness of 25.4 μ

sauren Lösung eines proteolytischen Enzyms auf hat, werden mit einer Schere zwei Proben, die eineacidic solution of a proteolytic enzyme has on it, scissors cut two samples, one

wenigstens 0,062 eingestellt worden ist. Fläche von etwa 90 cm² haben, herausgeschnitten.at least 0.062 has been set. Have an area of about 90 cm ² , cut out.

Das enzymmodifizierte Kollagen gemäß der Er- Die beiden Proben werden genau auf ¹I₁₀ mg gewogen,The enzyme-modified collagen according to the Er- The two samples are ^{weighed exactly to 1} _{l 10} mg,

findung kann in einfacher Weise aus der Korium- 40 und eine dieser Proben wird in einem WärmeschrankFinding can easily be done from the Korium 40 and one of these samples is placed in a heating cabinet

schicht von Häuten gewonnen werden. Proteolytische bei 110⁰C über Nacht getrocknet. Die getrocknetelayer of skins can be obtained. Proteolytic dried at 110 ⁰ C overnight. The dried one

Enzyme, die zur Modifikation des Kollagens gemäß Probe wird erneut gewogen, um den Feuchtigkeits-Enzymes that modify the collagen according to the sample is weighed again to maintain the moisture

der Erfindung verwendet werden können, sind verlust zu ermitteln.of the invention can be used to determine loss.

Bromelain, Ficin, Papain und die von Aspergillus niger Der zweite Film wird in ein mit einem MagnetrührerBromelain, Ficin, Papain and those from Aspergillus niger The second film is put into one with a magnetic stirrer

gebildeten proteolytischen Enzyme. Die verwendete 45 versehenes Becherglas gegeben, das 248 ml Wasserformed proteolytic enzymes. The 45 fitted beaker used was given that contained 248 ml of water

Enzymmenge hängt von dem jeweils verwendeten enthält, das bei 70⁰C gehalten wird. Nach einerAmount of enzyme will depend on the particular contains held at 70 ⁰ C. After a

Enzym und vom pH-Wert und der Temperatur der Rührdauer von 1 Minute wird der Inhalt des BechersEnzyme and the pH and temperature of the stirring time of 1 minute will be the contents of the beaker

Kollagendispersion ab. Diese Faktoren werden so in einen 250-ml-Meßzylinder überführt und dasCollagen dispersion. These factors are then transferred to a 250 ml graduated cylinder and that

aufeinander abgestimmt, daß gute Ergebnisse mit Volumen ermittelt. Dieses Volumen abzüglich descoordinated that good results are determined with volume. This volume minus the

dem jeweils verwendeten Enzym erhalten werden, wie 50 Volumens des Magnetrührers ist das Volumen derthe particular enzyme used can be obtained, such as 50 volume of the magnetic stirrer is the volume of the

lieh aus den später folgenden Beispielen ergibt. Lösung. Eine aliquote Probe von 25 ml wird mit einerborrowed from the examples below. Solution. A 25 ml aliquot is mixed with a

Bei Verwendung von Ficin als proteolytisches 25-ml-Pipette aus dem Meßzylinder genommen. EinWhen using ficin as a proteolytic 25 ml pipette, take it out of the measuring cylinder. A

Enzym werden 0,05 bis 0,15 Gewichtsteile zur Be- kleines Stück Glaswolle, das auf die öffnung derEnzyme will add 0.05 to 0.15 parts by weight to the small piece of glass wool that is placed on the opening of the

handlung von 100 Gewichtsteilen Kollagen verwendet. Pipette gelegt wird, verhindert, daß etwaiges ungelöstestreatment of 100 parts by weight of collagen used. Pipette is placed, prevents any undissolved

Durch die Behandlung des Kollagens mit einer Enzym- 55 festes Material aus dem Meßzylinder entnommen wird,By treating the collagen with an enzyme, solid material is removed from the measuring cylinder,

lösung unter den noch anzugebenden Bedingungen Die 25-ml-Probe wird in eine Verdampfungsschalesolution under the conditions to be specified The 25 ml sample is transferred to an evaporation dish

wird das Molekulargewicht des Kollagens verändert. gegeben und in einem Wärmeschrank bei 110⁰C zurthe molecular weight of the collagen is changed. given and in a heating cabinet at 110 ⁰ C for

Dieser Vorgang kann durch Bestimmung des während Trockene eingedampft. Nach dem Abdampfen desThis process can be determined by evaporation during dryness. After the

der Reaktion frei werdenden Tyrosins verfolgt werden. gesamten Wassers wird die Löslichkeit des Films austhe reaction released tyrosine can be followed. all water will determine the solubility of the film

Das Gewichtsverhältnis von freiem Tyrosin zu ge- 60 der folgenden Gleichung berechnet:The weight ratio of free tyrosine to 60 is calculated from the following equation:

bundenem Hydroxyprolin im Reaktionsgemisch darf y^y bound hydroxyproline in the reaction mixture may y ^ y

nicht geringer sein als 0,074, wenn frische Kuhhaut · 4 = % Löslichkeit.not be less than 0.074 when fresh cowhide x 4 =% solubility.

mit einem proteolytischen Enzym behandelt wird. SP treated with a proteolytic enzyme. SP

Es ist wesentlich, daß die Enzymbehandlung unter Hierbei ist W das Gewicht der restlichen getrock·It is essential that the enzyme treatment under Where W is the weight of the remaining dry

solchen Bedingungen vorgenommen wird, daß die 65 neten Feststoffe in der Verdampfungsschale nach demsuch conditions are made that the 65 th solids in the evaporation dish after

Löslichkeit des Kollagens in heißem Wasser zunimmt. Eindampfen, S das Gewicht des Kollagenfilms, P dieThe solubility of collagen in hot water increases. Evaporation, S the weight of the collagen film, P the

Gleichzeitig ist große Vorsicht erforderlich, um zu Menge der Feststoffe des Films in Prozent, bestimmtAt the same time, great care must be taken in determining the percentage of solids in the film

verhindern, daß das Kollagen so weitgehend modi- aus dem Gewichtsverlust der ersten Filmprobe nachprevent the collagen from becoming so largely modi- from the weight loss of the first film sample after

Jem Trocknen bei UO⁰C über Nacht, und V das Der Hydroxyprolingehall des Kollagen-Enzym-Volumen der Lösung. Reaktionsgemisches, der ein Mall der vorhandenen Die Tyrosinmenge, die während der Kollagen- Kollagenmenge ist, kann zu jeder Zeit nach der Inzym-Reaktionfrei wird, kann zu jeder Zeit während folgenden Methode bestimmt werden: Das im ^Rsaklies Reaktionsablaufs nach der folgenden Methode 5 tionsgemisch vorhandene Kollagen wird mit 6n-HCI bestimmt werden: Standurdlösungen von Zyrosin zu seinen jeweiligen Aminosäuren hydrolysiert. Das werden hergestellt, indem LOO mg kristallines Tyrosin frei gewordene Hydroxyprolin wird dann durchJem drying at RO ⁰ C overnight, and V the the hydroxyproline hall of the collagen enzyme volume of the solution. Reaction mixture, of a mall existing The tyrosine, that is during the collagen amount of collagen may be at any time after the Inzym-reaction-free, can be determined at any time during the following method: The saklies in the ^R reaction process according to the following Method 5 tion mixture existing collagen will be determined with 6n-HCl: standard solutions of zyrosine hydrolyzed to its respective amino acids. The hydroxyproline is then produced by LOO mg of crystalline tyrosine released

η 100 ml destilliertem Wasser und einigen Tropfen Chloramin T zu Pyrrol oxydiert, das seinerseits mitη 100 ml of distilled water and a few drops of chloramine T is oxidized to pyrrole, which in turn with

:m-Salzsäure gelöst werden. Diese Vorratslösung wird p-Dimethylaminobenzaldehyd (DMAB) umgesetzt: m-hydrochloric acid can be dissolved. This stock solution is converted to p-dimethylaminobenzaldehyde (DMAB)

erdünnt, indem 10 ml in einen Meßkolben gegeben io wird, wobei ein Farbstoff gebildet wird.diluted by placing 10 ml in a volumetric flask, forming a dye.

,erden und mit destilliertem Wasser auf ein Gesamt- Eine genau gewogene Menge von 2,75 bis 3,00 g des, ground and dilute with distilled water to a total of. An accurately weighed amount of 2.75 to 3.00 g of the

olumen von 100 ml (1:10) aufgefüllt wird. In vier Kollagen-Enzym-Reaktionsgemisches wird in einenvolume of 100 ml (1:10) is made up. In four collagen-enzyme reaction mixes are put into one

.teagensgläser werden 0,2:5, 0,5, 1,0 und 1,5 ml der 100-ml-MeßkoIben gegeben. Konzentrierte HCl in.teagent glasses are given 0.2: 5, 0.5, 1.0 and 1.5 ml of the 100 ml volumetric flasks. Concentrated HCl in

erdünnten Vorratslösung, gegeben, die 0,1 mg Tyro- einer Menge, die in Milliliter dem Gewicht der Probediluted stock solution, given the 0.1 mg of Tyro- an amount which, in milliliters, corresponds to the weight of the sample

,in/ml enthält. Durch Zusatz von destilliertem Wasser 15 in Gramm entspricht, wird zugesetzt. Der kolben, in / ml contains. By adding distilled water, equivalent to 15 grams is added. The piston

,11 jedem Reagensglas wird das Gesamtvolumen auf wird dann nicht ganz bis zur Marke mit 6n-HCl, 11 of each test tube the total volume is then not quite up to the mark with 6N HCl

5 ml gebracht. In die Reagensgläser werden je 2 ml gefüllt und auf ein Dampfbad gestellt, bis die ProbeBrought 5 ml. The test tubes are filled with 2 ml and placed on a steam bath until the sample

Ün-Natriumhydroxyd und unmittelbar darauf 2 ml gelöst ist (etwa 10 bis 15 Minu'-n). Der Kolben wiraÜn sodium hydroxide and immediately afterwards 2 ml is dissolved (about 10 to 15 Minu'-n). The piston wira

O,666n-Folin-Ciocalteau-Ri;agens gegeben. Der Inhalt vom Dampfbad entfernt und der Abkühlung iiber-O, 666n-Folin-Ciocalteau-Ri; agens given. The contents are removed from the steam bath and left to cool.

icdes Reagensglases wird durch Umdrehen gemischt, ao lassen, worauf er bis zur Marke mit 6n-HCl gefülltMix the test tube by inverting it, leave it and fill it to the mark with 6N HCl

jnd die Reagensgläser werden dann 5 Minuten im wird. Die Lösung wird stehengelassen, bis etwaigesjnd the test tubes are then in the will for 5 minutes. The solution is left to stand until there is no

Dunkeln gehalten. Die gebildete blaue Farbe wird vorhandendes Fett oben schwimmt. Ein Teil derKept in the dark. The blue color formed will float up existing fat. A part of

,inch 5 Minuten in einem Beckmann-DU-Spektro- Lösi ig wird filtriert, wobei die ersten 20 ml verworfen, inch 5 minutes in a Beckmann-DU-Spektro-Lösi ig is filtered, the first 20 ml being discarded

photometer bei einer Wellenlänge von 660 ΐημ be- werden und das anschließende Filtrat aufgefangenload the photometer at a wavelength of 660 ΐημ and collect the subsequent filtrate

■.ertet. Aus diesen vier Werten wird eine Eichkurve 25 wird. 2 ml werden entnommen und in eine 10-mI-■. Rates. A calibration curve 25 is derived from these four values. 2 ml are removed and placed in a 10 ml

uc7eichnet, wie sie in F i g. 1 dargestellt ist. Die Ampulle für die nachstehend beschriebene Ver?r-uc7eichnet, as shown in FIG. 1 is shown. The ampoule for the use described below

optische Dichte ist hierbei als Abszisse und die beitung überführt.optical density is shown here as the abscissa and the processing is transferred.

Konzentration des Tyrosins als Ordinate gezeichnet. Die Ampulle, die 2 ml des mit 6n-HCl digeriertenThe concentration of the tyrosine is drawn as the ordinate. The ampoule containing 2 ml of the 6N HCl digested

Die Konzentration des freien Tyrosins in einem Reaktionsgemisches enthält, wird mit Stickstoff, ge-The concentration of free tyrosine contained in a reaction mixture is

K ,Ilagen-Enzym-Gemisch kann nun wie folgt be- 30 spült und verschlossen. Die Hydrolyse wird vollendet, The K , Ilage enzyme mixture can now be rinsed and sealed as follows. The hydrolysis is completed

,iirnmt werden: Eine homogene Probe von 15 ml des indem die Ampulle in einem Wärmeschrank 3 StundenTo be kept: a homogeneous sample of 15 ml of the by placing the ampoule in a heating cabinet for 3 hours

Knliagen-Enzym-Gemischtis wird zentrifugiert und bei 138⁰C gehalten wird. Die Ampulle wird dannKnliagen enzyme Gemischtis is centrifuged and kept at 138 ⁰ C. The ampoule will then

durch Whatmann-Filterpapier Nr. 42 filtriert. In einem auf Raumtemperatur gekühlt und das Hydrolysatfiltered through No. 42 Whatmann filter paper. In one cooled to room temperature and the hydrolyzate

Reagcnsglas wird 1 ml dieser filtrierten Probe auf quantitativ in einen 100-ml-MeßkoIben überfuhrt.Test tube, 1 ml of this filtered sample is transferred quantitatively into a 100 ml measuring flask.

5 ml verdünnt. Dann werden 2 ml 2n-Natrium- 35 Die Probe wird dann mit 2 ml 6n-NaOH neutralisiert5 ml diluted. Then 2 ml of 2N sodium 35 The sample is then neutralized with 2 ml of 6N NaOH

Mv,' -yd und unmittelbar danach 2 ml O,666n-Folin- und mit Wasser verdünnt. Wenn Änderungen an denMv, '-yd and immediately afterwards 2 ml of O, 666n-folin- and diluted with water. If changes are made to the

1. teau-rleagens zugesetzt. Der Inhalt des Rea- vorstehend beschriebenen Maßnahmen der Proben-1. Tea reagent added. The content of the rea-

ilases wird gemischt. Nachdem die Farbe sich vorbereitung, Hydrolyse oder Neutralisation vor-ilases is mixed. After the paint has been prepared, hydrolysis or neutralization

" ,muten im Dunkeln ausgebildet hüt, wird das genommen werden, ist zu beachten, daß der Natrium-", must be trained in the dark, if that is taken, it should be noted that the sodium

f „M.gensglas herausgenommen und die Farbe mit 40 chloridgehalt des verdünnten Hydrolycats nie 0,4 Molf "M.gensglas removed and the paint with 40 chloride content of the diluted hydrolyzate never 0.4 mol

■;:nem Beckman-DU-Spektrophotometer bei 660 ΐπμ übersteigen darf. Genau 2 ml des neutralisierten und■;: nem Beckman-DU spectrophotometer at 660 ΐπμ may exceed. Exactly 2 ml of the neutralized and

bestimmt. Wenn die optische Dichte nicht auf der verdünnten Hydrolysats werden in ein Reagensglasdefinitely. If the optical density is not on the diluted hydrolyzate be placed in a test tube

in F i g. 1 dargestellten Kurve liegt, wird die Testprobe von 16 · 150 mm überführt.in Fig. 1, the test sample of 16 x 150 mm is transferred.

von 1 ml entsprechend vergrößert oder verkleinert, Eine Vorratslösung, die 25 mg vakuumgetrocknetes um einen Wert zu erhalten, der auf diese Kurve fällt. 45 1-Hydroxyprolin in 250 ml 0,00In-HCl enthält, wird Die Konzentration des Tyiosins in der Testprobe kann hergestellt. Hydroxyprolin-Bezugslösungen werden tagaus F i g. 1 ermittelt werden. lieh durch Verdünnung der Vorratslösung auf Kon-Die Tyrosinmenge, die in einem an der Luft ge- zentrationen von 1 bis 5 Mikrogramm/2 ml hergestellt, trockneten Kollagenfilm vorhanden ist, kann in ahn- Man kann 2,5 ml aer Vorratslösung mit Wasser auf licher Weise wie folgt bestimmt werden: 100 mg des 50 100 ml zu einer Bezugslösung verdünnen, die2,5 Mikrogefriergetrockneten Films werden unter Rühren in gramm/ml enthält. In der täglichen Praxis genügen 50 ml Wasser gelöst. Die Läsung wird durch Zutropfen gewöhnlich zwei Reagensgläser von 0 und 5 M'krovon NH₄OH gegen Lackmus neutralisiert, in einen gramm, um eine genaue Kurve zu zeichnen.
100-ml-Meßkolben übertragen und mit destilliertem Eine 0,05molare Lösung von Chloramin T (Natrium-Wasser auf 100 ml aufgefüllt. Die Lösung wird 55 p-toluolsulfonuiloramid) wird durch Auflösen von unmittelbar durch eine grobporige Glasfritte und dann 1,41g Chloramin T in 20 ml Wasser täglich frisch durch eine feinporige Glasfritte filtriert, wobei die hergestellt. Nach Zusatz von 30 ml Möthylcellosolvc ersten 15 ml des Filtrats verworfen werden. Proben und 50 ml Wasser wird die Lösung in einer mit Glasdes Filtrats von 1 bis 5 m! werden auf 5 ml verdünnt. stopfen verschlossenen Flasche aufbewahrt Dte Dann werden 2 ml 2n-Natriumhydroxyd und un- 60 Oxydation von Hydroxyprolin wird ausgelöst durch mittelbar danach 2 ml O.ooon-Folin-Ciocalteau-Reä- Zusatz von 1 ml dieser Chloramin T-Lösung zu jedem gen3 zugesetzt. Der 'nhaltder Probenröhrchen wird Reagensglas (Probe und Bezugslösungen) in einer gemischt und ihre Faibe in der beschriebenen Weise bestimmten Reihenfolge. Der Inhalt des Reagensglases bestimmt. wird durch mehrmaliges Schütteln gemischt undof 1 ml increased or decreased accordingly, A stock solution containing 25 mg of vacuum-dried to get a value that falls on this curve. 45 contains 1-hydroxyproline in 250 ml 0.00In-HCl, the concentration of the tyiosin in the test sample can be established. Hydroxyproline reference solutions are available day in and day out. 1 can be determined. lent The Kon-tyrosine, which concentrations overall in an air 1-5 micrograms prepared ml by dilution of the stock solution / 2, dried collagen film is present, in ahn- can One can 2.5ml aer stock solution with water to can be determined as follows: 100 mg of the 50 100 ml dilute to a reference solution which contains 2.5 micro-freeze-dried films with stirring in grams / ml. In daily practice, 50 ml of dissolved water is sufficient. The solution is neutralized by dropping usually two test tubes of 0 and 5 M'kro of NH ₄ OH against litmus, in one gram, in order to draw a precise curve.
A 0.05 molar solution of chloramine T (sodium water made up to 100 ml. The solution is 55 p-toluenesulfonuiloramide) is transferred by dissolving directly through a large-pored glass frit and then 1.41 g of chloramine T in 20 ml of water freshly filtered daily through a fine-pored glass frit, the produced. After adding 30 ml of methylcellosolve, the first 15 ml of the filtrate are discarded. Samples and 50 ml of water, the solution is in a glass with the filtrate from 1 to 5 m! are diluted to 5 ml. Stopper closed bottle stored Dte Then 2 ml of 2N sodium hydroxide and un- 60 oxidation of hydroxyproline is triggered by indirectly afterwards 2 ml of O.ooon-Folin-Ciocalteau-Reä- addition of 1 ml of this chloramine T solution to each gen3. The contents of the test tube are mixed in the test tube (sample and reference solutions) and their color is determined in the order described. The contents of the test tube determine. is mixed by shaking several times and

ο/ τ««.!« iTrnrk«,s«io - ^C' ^S ' 10 ö₅ 20 Minuten bei Raumtemperatur stehengelassen.ο / τ ««.! «iTrnrk«, s «io - ^C ' ^S ' 10 ö ₅ Let stand for 20 minutes at room temperature.

«/, Tyrosin (Trockeiibasis) - ^ 10. _{Das ChIoramin T wird} dann zerstört, indem ImI«/, Tyrosine (dry egg basis) - ^ 10. _{The chloramine T is} then destroyed by ImI

. . „ . _c. . einer 3,15molaren Perchlorsäurelösung in der gleichen. . ". _c . . a 3.15 molar perchloric acid solution in the same

C = Konzentration aus der Kurve in F ι g. 1. Reihenfolge wie vorher zu jedem Reagensglas gegebenC = concentration from the curve in FIG. 1. Order as before given to each test tube

s = ml des auf 5 ml verdünnten Filtrats. ⁶ s = ml of the filtrate diluted to 5 ml. ^6th

wird. Der Inhalt wird gemischt und 5 Minuten stehengelassen. Abschließend wird 1 ml einer 20°/„igen Lösung von p-Dimelhylaminobenzaldehyd zugesetzt und das Reagensglas geschüttelt, bis keine Schlieren mehr sichtbar sind. Die 2O°/_Oige Lösung wird einige Minuten vor dem Gebrauch hergestellt, indem 20 g p-Dimethylaminobenzaldehyd mit Methylcellosolve auf ein Endvolumen von 100 ml aufgefüllt werden. Dies kann in einem Wasserbad von 60^rC bis zur vollständigen Auflösung erfolgen.will. The contents are mixed and left to stand for 5 minutes. Finally, 1 ml of a 20% solution of p-dimethylaminobenzaldehyde is added and the test tube is shaken until no more streaks are visible. The 2O ° / _O by weight solution is made a few minutes before use by mixing 20 g of p-dimethylaminobenzaldehyde with methyl cellosolve to a final volume of 100 ml are filled up. This can be done in a water bath at 60 ^r C until it is completely dissolved.

Die Reagensgläser werden 25 Minuten in ein bei 60'C gehaltenes Wasserbad gestellt und 5 Minuten in Leitungswasser gekühlt. Die entwickelte Farbe ist wenigstens 1 Stunde beständig. Die Absorptionswerte der. gefärbten Lösungen werden bei 457 ηιμ gegen eine Blindprobe des Reagens als Bezugsflüssigkeit bestimmt, Der Hydroxyprolingehalt der Probe kann direkt aus der Eichkurve gemäß der folgenden Formel bestimmt werden:The test tubes are placed in a water bath kept at 60'C for 25 minutes and 5 minutes chilled in tap water. The developed color is stable for at least 1 hour. The absorption values the. colored solutions are at 457 ηιμ against a The blank sample of the reagent is determined as the reference liquid. The hydroxyproline content of the sample can be determined directly from the calibration curve can be determined according to the following formula:

100 CFD W 100 CFD W

°/₀ Hydroxyprolin.° / ₀ hydroxyproline.

Γ - Mikrogramm, bestimmt aus der Eichkurve.
F -■ Umrechnungsfaktor von Mikrogramm inΓ - micrograms, determined from the calibration curve.
F - ■ Conversion factor from micrograms to

Gramm (0.000001).
D Verdünnungsfaktor -= 2500.
W Gewicht der Probe in Gramm.Gram (0.000001).
D dilution factor - = 2500.
W Weight of the sample in grams.

Die Hydroxyprolinmenge, die in einem an der Luft getrockneten Kollagenfilm vorhanden ist, kann auch nach der folgenden Methode bestimmt werden: Etwa 200 mg Film werden genau in einen 100-ml-Meßkolben gewogen. Nach Zusatz von 90 ml 6n-HCI wird die Lösung auf dem Dampfbad erhitzt, bis das Kollagen aufgelöst ist (etwa 15 bis 20 Minuten). Die Lösung wird vom Dampfbad genommen und der Abkühlung auf Raumtemperatur überlassen. Der Kolben wird mit 6n-HCI bis zur Marke aufgefüllt. 2 ml ohne etwaiges Fett oder Niederschlag (falls erforderlich, wird filtriert und der erste Teil des Filtrats verworfen) werden zur Verarbeitung auf die oben beschriebene Weise in eine 10-ml-Ampuile überführt.The amount of hydroxyproline that is present in an air-dried collagen film can also be determined by the following method: Approximately 200 mg of film are precisely placed in a 100 ml volumetric flask weighed. After adding 90 ml of 6N HCl, the solution is heated on the steam bath until the collagen is dissolved (about 15 to 20 minutes). The solution is removed from the steam bath and allowed to cool leave to room temperature. The flask is filled to the mark with 6N HCl. 2 ml without anything Fat or precipitate (if necessary, it is filtered and the first part of the filtrate is discarded) Transfer to a 10 ml ampule for processing as described above.

example 1

Das Korium der Häute von frisch geschlachteten Rindern wird in einer Fleischmühle so zerkleinert, daß es ein Sieb einer Maschenweite von 6.35 mm passiert. Zu 13 Teilen des gemahlenen Koriums (Trockenfeststoffe der Haut) werden 87 Teile Wasser und 0,013 Teile Ficin gegeben. Die Aufschlämmung des Kollagens in der wäßrigen Enzymlösung wird fein gemahlen. Nach zwei Durchgängen durch die Mühle hat die Kollagen-Ficin-Aufschlämmung einen pH-Wert von 7.32. Nach 2 Stunden wird eine homogene Probe (15 ml) der Kollagenaufschlämmung entnommen und auf freies Tyrosin nach der beschriebenen Methode getestet. Das Kollagen wird in 18 Teilen einer Lösung gequollen, die 6°/₀ (bezogen auf trockene Kollagenfeststoffe) Citronensäure enthält, wobei eine Dispersion gequollener Kollagenfibrillen gebildet wird, die 24 Stunden bei 23 C gealtert wird. Die Viskositätszahl (intrinsic viscosity) der mit Ficin behandelten Kollagenlösung nahm während dieser 24 Stunden ab und näherte sich asymptotisch einem Wert von etwa ] 5 dl/g. Die Viskositäten der verdünnten Kollagenlösungen in 0,3°/_oiger Essigsäure wurden bei 25 C bestimmt.The corium of the hides of freshly slaughtered cattle is ground in a meat mill so that it passes through a sieve with a mesh size of 6.35 mm. To 13 parts of the ground korium (dry solids of the skin) are added 87 parts of water and 0.013 parts of ficine. The slurry of collagen in the aqueous enzyme solution is finely ground. After two passes through the mill, the collagen-ficin slurry has a pH of 7.32. After 2 hours, a homogeneous sample (15 ml) of the collagen slurry is taken and tested for free tyrosine by the method described. The collagen is swollen in 18 parts of a solution containing 6 ° / ₀ (based on dry collagen solids) citric acid, wherein a dispersion of swollen collagen is formed, the 24 hours at 23 C is aged. The intrinsic viscosity of the ficin-treated collagen solution decreased during these 24 hours and asymptotically approached a value of about 5 dl / g. The viscosities of the diluted collagen solution in 0.3 ° / _o acetic acid were determined at 25 C.

Aus dieser Dispersion gegossene Kollagenfolien sind in siedendem Wasser löslich und haben eine Zugfestigkeit von 702 kg/cm². Die Menge an freiem Tyrosin in den Kollagenfolien, bestimmt nach der beschriebenen Methode, beträgt 1,07 °/₀. Die Hydroxyprolinanalyse der Folie nach der beschriebenen Methode ergibt ll,6°/₀ und ein Verhältnis von freiem Tyrosin zu Hydroxyprolin von 0,092.Collagen films cast from this dispersion are soluble in boiling water and have a tensile strength of 702 kg / cm ² . The amount of free tyrosine in the collagen films, as determined by the method described, is 1.07 ° / _0th The Hydroxyprolinanalyse of the film by the method described results ll, 6 ° / ₀ and a ratio of free tyrosine to hydroxyproline of 0.092.

B e i s ρ i e I 2B e i s ρ i e I 2

Zu 13 Teilen des gemahlenen Koriums von frischen Häuten (Trockenfeststoffe der Häute) werden 87 Teile Wasser gegeben. Die Aufschlämmung wird in einer Mikro-Cut-Mühle fein gemahlen. Nach zwei Durchgängen durch die Mühle wird die Aufschlämmung mit 18 Teilen einer wäßrigen Lösung gemischt, die 0.0195 Teile Ficin und 0,78 Teile Citronensäure enthält. Das Gemisch wird 9 Stunden bei 35" C gehalten. NachTo 13 parts of the ground korium of fresh hides (dry solids of the hides) becomes 87 parts Given water. The slurry is finely ground in a micro-cut mill. After two passes through the mill, the slurry is mixed with 18 parts of an aqueous solution which Contains 0.0195 parts of ficin and 0.78 parts of citric acid. The mixture is kept at 35 ° C. for 9 hours

ao dieser Zeit werden Folien aus dem Gemisch hergestellt und getrocknet. Die Folien sind zu 90,1 °/₀ in Wasser von 70⁰C in 1 Minute löslich. Das Verhältnis von freiem Tyrosin zu Hydroxyprolin in den Folien beträgt 0,0875. Die Folien haben eine Zugfestigkeit vonAt this time, foils are made from the mixture and dried. The films are soluble to 90.1 ° / ₀ in water at 70 ⁰ C in 1 minute. The ratio of free tyrosine to hydroxyproline in the films is 0.0875. The foils have a tensile strength of

as 1050 kg/cm* ν 15 °/₀ Dehnung).as 1050 kg / cm * ν 15 ° / ₀ elongation).

Example 3

Eine Kollagenaufschlämmung wird auf die im Beispiel 1 beschriebene Weise aus dem Korium von frischen Häuten hergestellt, indem 2,2 Teile Hautfeststoffe (auf eine solche Teilchengröße gemahlen, daß die Feststoffe ein Sieb einer Maschenweite von 6,35 mm passieren) zu 14,7 Teilen Wasser gegeben werden. Zu dieser Aufschlämmung werden 0,066 Teile Papain und 0,066 Teile des Dinatriumsalzes von Äthylendiamintetraessigsäure und 0,0066 Teile Cystein gegeben. Die Kollagen-Enzym-Aufschlämmung wird zweimal durch eine Mühle gegeben und 4 Stunden bei 35°C gehalten. Der pH-Wert dieses Materials während dieser 4 Stunden beträgt 7,20.A collagen slurry is prepared in the manner described in Example 1 from the corium of fresh hides made by adding 2.2 parts of skin solids (ground to a particle size that that the solids pass a sieve with a mesh size of 6.35 mm) added to 14.7 parts of water will. 0.066 part of papain and 0.066 part of the disodium salt of ethylenediaminetetraacetic acid are added to this slurry and 0.0066 parts of cysteine. The collagen enzyme slurry is made twice passed through a mill and held at 35 ° C for 4 hours. The pH of this material during this 4 hours is 7.20.

Example 4

Zu 92000 Teilen Wasser werden 4,7 Teile Ficin gegeben. Zu dieser Lösung werden 15800 Teile eines auf eine Teilchengröße von 6,35 mm gemahlenen Kollagens von frischen Häuten (23,7 °/o Feststoffe) gegeben, wobei eine Aufschlämmung gebildet wird, die unmittelbar gemahlen wird. Das Kollagen wird dann 2 Stunden bei Raumtemperatur gehalten. Der pH-Wert beträgt 7,35.4.7 parts of ficine are added to 92,000 parts of water. 15,800 parts of a to a particle size of 6.35 mm ground collagen from fresh hides (23.7% solids) given, forming a slurry which is immediately milled. The collagen will then kept at room temperature for 2 hours. The pH is 7.35.

Eine Glycerin-Citronensäure-Lösung wird hergestellt durch Auflösen von 1125 Teilen Glycerin und 375 Teilen Citronensäure in 8500 Teilen Wasser.A glycerine-citric acid solution is prepared by dissolving 1125 parts of glycerine and 375 parts of citric acid in 8500 parts of water.

Das enzymbehandelte Kollagen wird mit der Glycerin-Citronensäure-Lösung gemischt, über Nacht be Raumtemperatur gehalten, homogenisiert, entlüftei und nach 4 Stunden auf ein laufendes Band strangge preßt. Die Folie ist innerhalb von 30 Sekunden ir siedendem Wasser vollständig löslich und hat ein< Zugfestigkeit von 918 kg/cm* (Dehnung 20,6%). Da: Verhältnis von freiem Tyrosin zu Hydroxyprolin ii dieser Folie beträgt 0,093.The enzyme-treated collagen is mixed with the glycerine-citric acid solution mixed, kept at room temperature overnight, homogenized, deaerated and after 4 hours it is extruded onto a running belt. The slide is irrigation within 30 seconds Completely soluble in boiling water and has a tensile strength of <918 kg / cm * (elongation 20.6%). There: The ratio of free tyrosine to hydroxyproline ii of this film is 0.093.

B e i s ρ i e 1 5B e i s ρ i e 1 5

Zu 10 Teilen des gemahlenen Koriums von Häutei (Trockenfeststoffe der Haut) werden 90 Teile WasseTo 10 parts of the ground corium of the hide egg (dry solids of the skin) add 90 parts of water

gegeben. Nach zweimaligem Durchgang durch eine Mühle wird die Aufschlämmung mit 25,5 Teilen einer wäßrigen Lösung gemischt, die 0,04 Teile eines durch Aspergillus niger gebildeten proteolytischen Enzyms und 3 TViIe Citronensäure enthält. Das Enzym wird hergestellt nach der Methode, die in The Journal of Agricultural and Biological Chemistry, IBd. 28, S. 216 bis 223 (1964), beschrieben ist. Das Gemisch wird bei •H 3,0 20 Stunden bei Raumtemperatur gehalten. Nach dieser Zeit wird das Gemisch homogenisiert und entlüftet. Dann werden Folien aus dem Gemisch hergestellt und getrocknet. Die Folien sind zu 97,2 °/„ in Wasser bei 70⁰C in 1 Minute löslich. Das Verhältnis von freiem Tyrosin zu Hydroxyprolin in der Folie beträgt 0,082. Die Zugfestigkeit beträgt 997 kg/cm¹ (Dehnung 4,6 °/_e).given. After passing through a mill twice, the slurry is mixed with 25.5 parts of an aqueous solution containing 0.04 parts of a proteolytic enzyme produced by Aspergillus niger and 3 parts of citric acid. The enzyme is made by the method described in The Journal of Agricultural and Biological Chemistry, IBd. 28, pp. 216-223 (1964). The mixture is kept at • H 3.0 for 20 hours at room temperature. After this time, the mixture is homogenized and deaerated. Films are then made from the mixture and dried. The films are "soluble to 97.2 ° / in water at 70 ⁰ C in 1 minute. The ratio of free tyrosine to hydroxyproline in the film is 0.082. The tensile strength is 997 kg / cm ¹ (elongation 4.6 ° / _e ).

Beispiel 6Example 6

In 8700 Teilen Wasser werden 7,8 Teile Bromelain dispergiert. Zu dieser Lösung werden 1300 Teile des gemahlenen frischen Koriums (Trockenfeststoffe der Haut) unter Bildung einer Aufschlämmung gegeben. Nach zweimaligem Durchgang durch eine Mühle wird die Aufschlämmung 150 Minuten bei 30°C gehalten. Der pH-Wert beträgt 7,30.7.8 parts of bromelain are dispersed in 8,700 parts of water. For this solution, 1300 parts of the ground fresh koriums (dry skin solids) to form a slurry. After passing through a mill twice, the slurry is held at 30 ° C for 150 minutes. The pH is 7.30.

Eine wäßrige Lösung wird durch Auflösen von 78 Teilen Citronensäure und 325 Teilen Glycerin in 1396 Teilen Wasser hergestellt. Die Aufschlämmung des enzymbehandelten Kollagens wird mit der Glycerin-Citronensäure-Lösung gemischt und 20 Stunden bei 30° C gehalten. Nach dieser Zeit wird das Gemisch homogenisiert und entlüftet. Folien werden dann aus diesem Gemisch hergestellt und getrocknet. Die Folien lind in Wasser von 70°C in 1 Minute zu 96,8 °/₀ löslich. Die Zugfestigkeit beträgt 944 kgZcmMDehnunglo^Vo)-Das Verhältnis von freiem Tyrosin zu Hydroxyprolin in den Folien beträgt 0,074.An aqueous solution is prepared by dissolving 78 parts of citric acid and 325 parts of glycerin in 1396 parts of water. The enzyme-treated collagen slurry is mixed with the glycerol-citric acid solution and held at 30 ° C. for 20 hours. After this time, the mixture is homogenized and deaerated. Films are then made from this mixture and dried. The films are soluble in water at 70 ° C. to 96.8 ° / ₀ in 1 minute. The tensile strength is 944 kgZcmMDehnunglo ^ Vo) -The ratio of free tyrosine to hydroxyproline in the films is 0.074.

Beispiel 7Example 7

Eine frisch geäscherte Haut wird zur Entfernung des Kalks mit einer gepufferten sauren Lösung gewaschen. Zu 1330 Teilen des gemahlenen Koriums der entkalkten Haut (Trockenfeststoffe der Haut) werdenA freshly cremated skin is used to remove the Lime washed with a buffered acidic solution. To 1330 parts of the ground Korium of the decalcified skin (dry solids of the skin) become 8670 Teile Wasser gegeben. Die Aufschlämmung wird langsam auf eine Temperatur von 32° C erwärmt. Bei dieser Temperatur wird eine wäßrige Dispersion von 0,665 Teilen Ficin und 3,99 Teilen L-Cystein in 200 Tei-S len Wasser gut mit der Aufschlämmung gemischt, die dann zweimal durch eine Mühle gegeben wird. Eine wäßrige Lösung wird durch Auflösen von 79,2 Teilen Citronensäure und 396 Teilen Glycerin in 1383 Teilen Wasser hergestellt. Die Aufschlämmung des mit demGiven 8670 parts of water. The slurry is slowly heated to a temperature of 32 ° C. at At this temperature, an aqueous dispersion of 0.665 parts of ficin and 3.99 parts of L-cysteine in 200 parts of water is mixed well with the slurry then passed through a grinder twice. An aqueous solution is made by dissolving 79.2 parts Citric acid and 396 parts of glycerin in 1383 parts of water. The slurry of the

ίο Enzym behandelten Kollagens wird mit der Glycerin-Citronensäure-Lösung gemischt und über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Gemisch wird homogenisiert und entlüftet und zu Folien verarbeitet, die getrocknet werden. Die Folien sind in 1 Minute zuίο Enzyme-treated collagen is mixed with the glycerol-citric acid solution and left on overnight Left to stand at room temperature. The mixture is homogenized and deaerated and processed into foils, which are dried. The slides are closed in 1 minute 96,6°/„ in siedendem Wasser löslich. Die Zugfestigkeit beträgt 998 kg/cm* (Dehnung 19,5 °/₀). Das Verhältnis von freiem Tyrosin zu Hydroxyprolin in den Folien beträgt 0,062. Es wird angenommen, daß das niedrige Verhältnis von Tyrosin zu Hydroxyprolin auf die96.6% soluble in boiling water. The tensile strength is 998 kg / cm * (elongation 19.5 ° / ₀ ). The ratio of free tyrosine to hydroxyproline in the films is 0.062. It is believed that the low ratio of tyrosine to hydroxyproline has an effect on the Löslichkeit des Tyrosine in der sauren Pufferlösung, die zum Entkalken verwendet wird, zurückzuführen ist.Solubility of the tyrosine in the acidic buffer solution, which is used for decalcifying, is due.

Claims

Patent claims:

1. Eßbarer, heißsiegelbarer Film, der in Wasser1. Edible, heat sealable film that can be immersed in water

»5 bei 70"C zu wenigstens 90°/_e löslich ist und eine Zugfestigkeit von wenigstens 702 kg/cm¹ hat, der in an sich bekannter Weise aus Kollagen, gegebenenfalls unter Zusatz eines Weichmachers, hergestellt worden ist, dadurch gekennzeichnet,»5 is soluble to at least 90 ° / _e at 70" C and has a tensile strength of at least 702 kg / cm ¹ , which has been produced in a manner known per se from collagen, optionally with the addition of a plasticizer, characterized in that daß das Gewichtsverhältnis von freiem Tyrosin zu gebundenem Hydroxyprolin in dem Kollagen durch Behandlung mit einer verdünnten sauren Lösung eines proteolytischen Enzyms auf wenigstens 0,062 eingestellt worden ist.that the weight ratio of free tyrosine to bound hydroxyproline in the collagen by treatment with a dilute acidic Proteolytic enzyme solution has been adjusted to at least 0.062.

2. Eßbarer Film nach Anspruch 1, dadurch2. Edible film according to claim 1, characterized gekennzeichnet, daß als Weichmacher Glycern verwendet worden ist, das in einer Menge von 30 Gewichtsprozent der im Film vorhandenen Kollagenfeststoffe vorhanden ist.characterized in that glycers are used as plasticizers that was used in an amount of 30% by weight of that present in the film Collagen solids is present.

3. Eßbarer Film nach Anspruch 1, dadurch3. Edible film according to claim 1, characterized gekennzeichnet, daß als proteolytisches Enzym Ficin, Papain, Bromelain oder das durch Aspergillus niger proteolytische Enzym verwendet worden ist.characterized in that as a proteolytic enzyme Ficin, papain, bromelain or that has been used by Aspergillus niger proteolytic enzyme.

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen1 sheet of drawings

1 209 617/21 209 617/2