DE1617769A1 - Process for the production of milk containing specific antibodies and preparations made therefrom - Google Patents

Process for the production of milk containing specific antibodies and preparations made therefrom

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DE1617769A1 DE19671617769 DE1617769A DE1617769A1 DE 1617769 A1 DE1617769 A1 DE 1617769A1 DE 19671617769 DE19671617769 DE 19671617769 DE 1617769 A DE1617769 A DE 1617769A DE 1617769 A1 DE1617769 A1 DE 1617769A1
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Description

BIPL-INQiH-J4HUBNER ,BIPL-INQiH-J 4 HUBNER,

PATENTANWALT »Ο 77769PATENT LAWYER »Ο 77769

■ί■ ί

896 Ketnpfen, l, Ruf 23Z9T896 Ketnpfen, l, call 23Z9T

Uncfieuer 84a-, 3aUncfieuer 84a-, 3a

Az. t P 16 $7 769*8-41 1 β,April 1970Az. T P 16 $ 7 769 * 8-41 1 β, April 1970

SrJSberhard Rehm,Dietmannsr±ed K/m - H 3/4SrJSberhard Rehm, Dietmannsr ± ed K / m - H 3/4

Br.Eberhard R eh ο , 8961 Dietmannsriedj Vockenthal 1Br.Eberhard R ehο, 8961 Dietmannsriedj Vockenthal 1

Verfahren zur Gewinnung von spezif Ischöü Antikörper enthaltender Milch und daraus hergestellter Präparate.Method for obtaining specific Ischöü antibodies containing milk and preparations made therefrom.

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von spezif lache Antikörper enthaltender Milch und daraus hergestellter Präparat»r bei deai einem milchgeberiden Tier Antigene zugeführt werden« eine Wartezeit eingelegt wird und dem Tier alt Antikörpern angereicherte Milch entnommen wird.The invention relates to a process for the recovery of specif laugh antibody-containing milk produced and preparation »r from a dairy animal riden antigens are supplied deai at" a wait time is inserted and the animal old antibodies fortified milk is taken out.

Ein solches Verfahren ist bekannt (5st8rr.Patentachr.ift Vt* ZiZ 9Tf)* Nach diesem bekannten Verfahren vrlrd zwei bis acht Wochen vor den Werfen der mllchgabenden Tiere eineSuch a method is known (5st8rr.Patentachr.ift Vt * ZiZ 9Tf) * According to this known method, one should be given two to eight weeks before the feeding animals are thrown

München 151919," DeuUAe Bsnk Kemplen 10/«J10*Munich 151919, "DeuUAe Bsnk Kemplen 10 /« J10 *

Lösung ader Suspension der Antigene durch den Strichkanal in das Euter eingebracht. Die Behandlung wird in regelmäßigen Abständen wiederholt« Die erste Entnahme von Antikörper enthaltender Milch erfolgt nach dem Werfen« Es vergehen also zwei bis acht Wochen ab erstmaliger Antigenapplikation, bis mit der ersten Entnahme von mit Antikörpern angereicherter Milch begonnen werden kann. Solution or suspension of the antigens through the teat canal introduced into the udder. The treatment is repeated at regular intervals «The first removal of Antibody-containing milk takes place after throwing "It takes two to eight weeks from the first antigen application, until the first milk that has been enriched with antibodies can be started.

Es ist ein weiteres Verfahren mit den obigen Maßnahmen bekannt (brit,Patentschrift 98S 175), bei dem dem Tier die Antigene mindestens in vier steigenden Dosen in wöchentlichen Intervallen verabfolgt werden, so daß auch hier zwischen Antigeninjektionen und Antikörperentnahme ein Zeitraum von mindestens vier Wochen liegt«There is another method with the above measures known (brit, patent 98S 175), in which the animal Antigens at least in four increasing doses weekly Intervals are administered, so that here, too, a period of time between antigen injections and antibody removal is at least four weeks "

Demgegenüber besteht das Wesen der Erfindung darin, daS mit der Milchentnahme, erstmalig schon in einem Zeitraum (in der Grössenordnung) von zwölf oder vierundzwanzig Stunden nach erstmaliger Antigenapplikation begonnen wird» daß sich weitere Entnahmen bis zum Titerabfall anachliessen. Ein weiteres Merkmal der Erfindung besteht darin, daß die entnommene Milch zerlegt wird in eine Lipoproteidphase. und eine Magermilchphase und die weitere Gewinnung von Antikörper enthaltender Substanz aus der ersten Phase folgt. Die Erfindung besteht weiterhin in der Anwendung des erfindungsgemäßen Verfahrens zur Werterhöfeung von nahrungsmitteln, in-dem die Antikörper enthaltend,© Substanz diesen Nahrungsmittel zugesetzt wird. 109814/2019 In contrast, the essence of the invention is that milk withdrawal is started for the first time within a period (of the order of magnitude) of twelve or twenty-four hours after the first antigen application, that further withdrawals are made until the titer has dropped. Another feature of the invention is that the withdrawn milk is broken down into a lipoprotein phase. and a skimmed milk phase and the further recovery of antibody-containing substance from the first phase follows. The invention also consists in the use of the method according to the invention for increasing the value of foodstuffs, in which the antibody-containing substance is added to these foodstuffs. 109814/2019

Bisher würde In der FächweIt davon ausgegangen* daß man den Antikörper-Titer in der Milch durch Messen'des Titers im Bluteerum mittels Bakterieti-Agglut !nation bestimmen mußo Erst nach Poeltlvwerden des Serumtitere wird mit der AntikSrpermilch-Eutnahme begonnenö Ein entsprechender fiter im Serum tritt erst nach allerfrühestens einer Woche auf,meistens sogar erst nach zwei "bis Tier Wochen afc erstmaliger Antigenapplikation, und zwar durch erkennbare Agglutination homologer Bakterien. Aus dem Grund gehen die beiden bekannten Verfahret!κ auch die Lehre daß etwa vier Vochen vor der ersten Antikörperentnahme die Antigene zu applizieren^sind» Dieser Zeitraum reicht nach Erfahrung aus „ um einen messbaren !Eiter-mittels Bakterien--Agglutination ira Bluteerum su srreielieu. Jüan ging stillschweigend davon aus, daß erst nach Auftreteti erkennbarer Agglutinationstiter int Serum die Milch Antikörper enthalten könne.So far, would in the FächweIt assumed * that is the antibody titer must determine nation in milk by Messen'des titer in Bluteerum means Bakterieti-Agglut! O Only after Poeltlvwerden of Serumtitere with AntikSrpermilch-Eutnahme begonnenö A corresponding fiter in serum occurs only after a week at the earliest, usually not until after two "to animal weeks after the first antigen application, namely through recognizable agglutination of homologous bacteria. For this reason, the two well-known procedures also follow the doctrine that about four weeks before the first antibody removal The antigens are to be applied. According to experience, this period of time is sufficient for a measurable! pus-by means of bacteria-agglutination ira blood serum su srreielieu.

Erfindungsgemäß ist nun gefunden worden, daß die Entwicklung im Blut serum und diejenige in der Milch in keinem Fall· synchron verlaufene Der maximale Antikörpertiter im Blutserum liegt erheblich später als der maximale Titer in der Milch* Zwar tritt sowohl im Blutserum als auch in der Milch ein ähnlicher Verlauf des Antikörpertiters mit der Zeit ein, nämlich ein steiles Ansteigen bis zum maximalen Titer mit einem anechliessenden allmählichen Abfall, doch liegt in beiden Entwicklungen eine erhebliche Zeitdistanz. Während nämlich der maximale Antikörpertlter im Blutserum nach zwei bis vier Wochen nach erstmaliger Applikation der Antigene liegt, Stellt sich der entsprechende Antikörpertiter in der Milch schön nach zwölf bis dreißig StunflaR.?In0 According to the invention, it has now been found that the development in the blood serum and that in the milk never run synchronously. The maximum antibody titer in the blood serum is considerably later than the maximum titer in the milk a similar course of the antibody titer over time, namely a steep increase up to the maximum titer with a subsequent gradual decrease, but there is a considerable time difference in both developments. While the maximum antibody age in the blood serum is two to four weeks after the antigens have been applied for the first time, the corresponding antibody titer in the milk is nice after twelve to thirty hours.? In 0

f 098 14/2 0 19 SADOFf 098 14/2 0 19 SADOF

Die Erfindung bringt erhebliche Vorteile. Innerhalb kürzester Zeit, zum Beispiel innerhalb von vierundzwanzig Stunden lassen sich erfindungsgemäß spezifische Antikörper zur Sofort-Therapie plötzlicher Unfallsituationen (Tetanus od.dergl.) für Immunislerungszweeke, für Allergietherapie, für akute Transplantationszwecke bzw. Transplantationsvorbereitung gewinnen. Diese ganz neuen Anwendungsmöglichkeiten schieden bisher aus, da mann es als' Tatsache hinnahm, daß die früheste Gewinnung von Antikörpern nach etwa vierzehn Tagen ab erstmaliger Antigenapplikatlon mögllch/ist. The invention has considerable advantages. Within a very short time, for example within twenty-four hours, specific antibodies can be obtained according to the invention for the immediate therapy of sudden accident situations (tetanus or the like) for immunization purposes, for allergy therapy, for acute transplant purposes or transplant preparation. These completely new possible uses have so far been ruled out because it has been accepted as a fact that the earliest generation of antibodies is possible after about fourteen days from the first antigen application.

Ein weiterer Vorteil besteht darin, daß gemäß vorliegender Erfindung eine weit höhere Ausbeute an Antikörpern erreicht wird, weil nämlich nach den bekannten Verfahren zwar der Antikörpertiter im Blutserum erkennbar angestiegen ist, der entsprechende Tlter in der Milch aber bereits wieder erheblich abgeklungen ist, wenn mit der ersten Entnahme begonnen wird. Da es aber auf den optimalen Antikörpertiter in der Milch und nicht auf denjenigen im Blutserum aukommt, erbringt das erfindungsgemäöe Verfahren nicht nur die ersten Antikörper in wesentlich kürzerer Zeit, sondern «ine Gesamtausbeute t die ganz erheblich, über derjenigen nach den bekannten Verfahren liegt. Another advantage is that, according to the present invention, a far higher yield of antibodies is achieved because, according to the known method, although the antibody titer in the blood serum has increased noticeably, the corresponding age in the milk has already subsided considerably when the first removal is started . But since it aukommt to the optimal antibody titers in the milk rather than those in the blood serum erfindungsgemäöe method not only provides the first antibody in a much shorter time, but "ine overall yield t quite considerably in excess of that of the known methods.

Beispiel 1example 1

Ein mehrere Passagen in steriler Milch gezüchteter Stamm von Dyßpep.siecoli 0 55 wird mittels handelsüblichem ZahnbJtatt auf dar Oberfläche von Z mit" Milöh-Nähragarr gefällten PetriechalenA strain of Dyßpep.siecoli 0 55 which has been cultivated for several passages in sterile milk is placed on the surface of Z with "Miloeh nutrient agar" precipitated by means of a commercially available tooth

109aU/20 19 . SAp original109aU / 20 19. SAp original

■ 1617739■ 1617739

»eiienüörraig außgestriöhsa. Die Schalen werden über flacht (14-te Standen) im Brutseteanfe "bei 39° O inkubiert» lter Bewuchs wird dann mit je 4-5 ml steriler physiologischer 0,85 $iger Kochsalzlösung -(TTaCl) abgeschwemmt und über einen Glastrichtar in ei« Heagetisglas einlaufen gelassen· In einem Wasserbad erfolgt 20 Minuten lang AbtÖtung der Keime bei 62° C* N&afa. tlbertragung in sterile Zentrifügengläser wird hoehtourig zentrifugiert-, d&r Überstand, abgegossen,, durch .neue-sterile HaCl-*LÖBiiög ersetztj. nach Aufwirbesln dais Sediments* wieder zentrifugiertο wieder dekantiert3 mit frischer JFaOl-Läsung aufgerülarb xmä. sentrifugiert uu.sBf.» etwa .5-6 aal in gleicher Weise wiederholend* Das somit mehrfach gewaschene Gesamt-Bakteriensedir/iex»% wird schlisse lieh" in etwa 10 ml-steriler physiologischer UaCl-Iiöauög -aufgeuoimen lai-t" einer 20 ml-Rekordsprltz® einem Mllehöoliaf ί,ττ, ic die liüke Halsve-ne .tn;j.lgi®rte Die Antikörper-".-milch-Gswinnung erfolgt bereits ate aächstfolg©Bd@m Melken und dann-fortlaufend bia ssum totalen Titerabfall.»Eiienüörraig angry. The dishes are incubated over flat (14th stand) in the brood jar "at 39 ° O". The older growth is then washed away with 4-5 ml sterile physiological 0.85% saline solution - (TTaCl) and poured over a glass funnel into egg " Heagetis glass allowed to run in · The germs are killed in a water bath at 62 ° C * N & afa for 20 minutes. Oil transfer into sterile centrifuge glasses is centrifuged at high speed, the supernatant is poured off, replaced by .new sterile HaCl- * LÖBiiög, after whirling up Sediment * centrifuged again ο decanted again 3 cleared up with fresh JFaOl solution xmä. Centrifuged uu.s B f. » about .5-6 eels repeating in the same way * The total bacterial sediment thus washed several times is finally lent "in about 10 ml-sterile physiological UaCl-Iiöauög -aufgeuoimen lai-t" a 20 ml record spray® to a milk oil ί, ττ, ic the liüke Halsve plans .tn; j.lgi®rt e the antibodies - ".- milk-Gswinnung done already ate aächstfolg © Bd @ m milking and then-ongoing bia SSUM total Ti terabfall.

Beispiel 2Example 2

4 p&thogene Dariakeime (Dyspapslecoli 0-55» 0 869 0 1-11 und Samonella typhimuriam) werden mit handelsübliehen ^ahßblättohen zellenförmig auf 4 Mhragarplatt®n (Petrisohalsn) ausgestrichen (beimpft). Ansehliessend erfolgt- 18. Stde B©ferüt~ung bei 37° C. Dann wird der Bsvmchs mit physlologtsolier HaGl-Lösuug'4 p & thogenic Daria germs (Dyspapslecoli 0-55 »0 86 9 0 1-11 and Samonella typhimuriam) are spread (inoculated) in cells on 4 Mhragar plates (Petriso necks) with commercially available hessial leaves. Ansehliessend erfolgt- 18 h e B © ferüt ~ ung at 37 ° C. Then, the Bsvmchs with physlologtsolier hagl-Lösuug '

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abgeschwemmt, und mittels Trichter ic ein Reagensglaa Übertragen. Nach Keimabtötung durch Einstellen in ein 60° C temperiertes Wasserbad für 30 min (Sterilkontrolle) und Umfüllen in Zentrifugengläschen wir hociitourig sentrifugiert, nach Übaretand-Defcantieren mehrfach mit zwischenzeitigern Zentrifugieren in steriler phys. NaCl-Iösung gewaschen. Nach abschliessender Steril— kontrolle wird das noch einmals gewaschene Gesamteediment (dichte Aufschwemmung gewaschener Bakterien) in ein Volumen von 10-15 ml Bterilör phys. NaCl-Iösung übernommen und in einer 20 ml Ganzglaaspritae einem Schaf in die linke Halsvene injiziert; bereite ab nächstfolgendem Melken (mit einer impfbedingten kurzfristigen Milchverhaltung ist zu rechnen) wird die antikörperhalt ige Milch, fortlaufend bis sum totalen Titerabfall gewonnen.washed away, and transferring a reagent vial by means of a funnel ic. After killing the germs by placing in a 60 ° C temperature controlled Water bath for 30 min (sterile control) and decanting into centrifuge tubes we centrifuged hociitourig, after Übaretand defcantation several times with intermediate centrifugation in a sterile phys. NaCl solution washed. After final sterile The total sediment, washed once again (density Suspension of washed bacteria) in a volume of 10-15 ml Bterilör phys. NaCl solution and taken in a 20 ml whole glass pritae injected into the left jugular vein of a sheep; ready from the next following milking (with a vaccination-related short-term Milk retention is to be expected) the antibody-containing milk, won continuously until the total titer decrease.

Beispiel 3Example 3

Gemäß in den Beispielen 1 oder 2 beachriebenerVerfahrenstechnik werden entsprechende Mengen gewonnenen Bakteriensedintente (auch anderer pathogener Darmbakterie ti) einer Ziege, einer Kuh oder einem anderen milchgebenden Eier intravenös, intraperitoneal oder anderweitig parenteral bzw. peroral verabfolgt; jeweils beim nächsten Melken wird mit der Gewinnung antikörperhaltiger MilchAccording to the process technique described in Examples 1 or 2 appropriate amounts of recovered bacterial sedintents (also other pathogenic intestinal bacteria ti) a goat, a cow or another lactating egg intravenously, intraperitoneally or otherwise administered parenterally or orally; each at Next milking will involve the production of antibody milk

begonnen.began.

1098U/20191098U / 2019

Die verfeforensgeEiäß gewonnene AntikiSrperuiileh .let'-gesundheitlich unbedenklich., da sie durch Injektion abgetöteier Antigene (also in Form eines sterilen Produkts) analog der üblichen Impfstoffherstellung bzwv der in Arztpraxen ältlichen Autovaccine-Hers-tellung gewonnenThe antigenic body obtained from verfeforensgeEiäß is 'not harmful to health', as it is obtained by injection of killed antigens (i.e. in the form of a sterile product) in a manner analogous to the usual vaccine production or the older autovaccine production in medical practices

Darüber hinaue wurde die absolute " Unschädliches»it in aasgedehnten Selbstvereuchen em Henschen bewiesen durch tägliches' Srinlcen dieser Antikörperifiilch über Monate hinaus mit bestem gesundheitlichem Erfolge ,Above and beyond this, the absolute "harmless" it was expanded into Self-curdling in a man proved by daily surrender this antibody milk for months with the best health Successes ,

1098147201910981472019

Claims (1)

knapr Ü e h e just about before 1« Verfuhren zur Gewinnung iron spezifische Antikörper enthaltender Milch und daraus hergestellten Präparaten, bei dem einem milchgebenden Tier Antigene zugeführt werden, eine Wartezeit eingelegt wird und dem Tier mit Antikörpern angereicherte Milch entnommen wird, dadurch gekennzeichnet, daß mit der Milchentnahae erstmalig schon in einem Zeitraum in der GrSssenordnung von zwölf oder vierundzwanzig Stunden ztach erstmaliger Antigenapplikation begonnen wird, und da8 sich weitere Entnahmen bis zum !Fiterabfall anschliessen. 1 «Procedure for obtaining milk containing iron specific antibodies and preparations made therefrom, in which antigens are supplied to a dairy animal, a waiting period is inserted and milk enriched with antibodies is removed from the animal, characterized in that with the milk removal for the first time in a period is started in the order of magnitude of twelve or twenty-four hours after the first antigen application, and that further withdrawals follow until the filter drops. 2· Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die entnommene Milch zerlegt wird in eine Lipoproteidphase und eine Magermilchphase und daß dl« weitere Gewinnung von Antikörper enthaltender Substanz aus dar ersten Phase «rfolgt.2 · The method according to claim 1, characterized in that the withdrawn milk is broken down into a lipoprotein phase and a skimmed milk phase and that the further extraction of Antibody-containing substance from the first phase follows. 3« Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daS die Antikörper enthaltende Substanz herkömmlichen nahrungsmitteln zugesetzt wird«3 «Method according to claim 1 or 2, characterized in that the substance containing the antibodies is conventional food is added "
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