DE1423427A1

DE1423427A1 - Dry indicator preparation on an absorbent carrier for the determination of protein in liquids

Info

Publication number: DE1423427A1
Application number: DE19571423427
Authority: DE
Inventors: Free Alfred Henry
Original assignee: Miles Laboratories Inc
Current assignee: Bayer Corp
Priority date: 1956-05-21
Filing date: 1957-05-21
Publication date: 1970-03-26
Also published as: BE557463A; GB826066A; NL217420A; NL126161C; IT572343A; IT623140A; CH356938A; NL237423A; GB853643A; BE577056A; FR1174942A

Description

DR. ING. F. WtTBSTHOFF 1423427 ⁸ MUNOHBN BODR. ING. F. WtTBSTHOFF 1423427 ⁸ MUNOHBN BO DIPL. ING. G. PITLS . · BOKWBIOIRBTUSSE 8DIPL. ING. G. PITLS. BOKWBIOIRBTUSSE 8 DRJLt.FIOHIU.NN TM.aroir 88 0· SlDRJLt.FIOHIU.NN TM.aroir 88 0 Sl DR. ING. D. BBHRBNS τηίαΐΐΜΗΛηηβΐ ■DR. ING. D. BBHRBNS τηίαΐΐΜΗΛηηβΐ ■ PATEMTAHWAM* I>»OI«OTFAT»lfT MÜKOM«PATEMTAHWAM * I> »OI« OTFAT »lfT MÜKOM«

1Δ-14 6831Δ-14,683

6. Februar 1969February 6, 1969

Beschreibung zu der PatentanmeldungDescription of the patent application

Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Indiana / USAMiles Laboratories, Inc., Elkhart, Indiana / USA

betreffendconcerning

Trockene Indikatorzubereitung.auf einem saugfähigen Träger zur Bestimmung von Protein in Flüssigkeiten. (Zusatz zu Patent (Patentanmeldung P 12 46 281.6-52) Dry indicator preparation on an absorbent carrier for the determination of protein in liquids. (Addition to patent (patent application P 12 46 281.6-52)

Gegenstand des Hauptpatents .·.···· (Patentanmeldung P 12 46 281.6-52) ist eine trockene Indikatorzubereitung, die dadurch gekennzeichnet ist, daß der Träger mit einem auf den Farbindikator abzustimmenden Puffer imprägniert ist, der bei Berührung mitder UntersuchungsflUssigkeit nahezu konstant einen pH-Wert einstellt, der in einem engen pH-Bereich liegt, und zwar innerhalb und dicht unterhall) des UmsohlagsbereiohB des Farbindikators, in dem der farbindikator normalerweise als pH-Indikator verwendet wird·The subject of the main patent. ·. ···· (patent application P 12 46 281.6-52) is a dry indicator preparation, which is characterized in that the carrier is impregnated with a buffer to be matched to the color indicator that is when it comes into contact with the test liquid almost constantly adjusts a pH value that lies in a narrow pH range, namely within and tightly under hall) of the cover area of the color indicator, in which the color indicator is normally used as a pH indicator

- 2 009813/0272 - 2 009813/0272

H23A27H23A27

lA-31 218LA-31 218

Diese Indikatorzubereitung, die vorzugsweise in .Form eines Indikatorpapiers vorliegt, ermöglicht in schneller und einfacher Weise das Vorhandensein von Protein, insbesondere Albumin, im Urin festzustellen. Das hierbei angewendete Prinzip ist die als "Proteinfehler" bezeichnete Erscheinung, die bei bestimmten Indikatoren in Gegenwart von Protein auftritt. Hierbei findet der für die Indikatoren kennzeichnende Farbumschlag bei niedrigeren pH-Werten statt als in Abwesenheit von Protein. Bei einer proteinhaltigen Lösung ist daher der Farbwechsel des Indikators verschoben. Das Ausmaß dieser Verschiebung ist ein Anzeichen für die Menge des in der Lösung vorhandenen Proteins.This indicator preparation, which is preferably used in In the form of an indicator paper, the presence of Detect protein, especially albumin, in the urine. The principle applied here is called "protein error" designated phenomenon that occurs with certain indicators in the presence of protein. Here the for the indicators characteristic color change at lower pH values rather than in the absence of protein. at the color change of the indicator is therefore shifted in a protein-containing solution. The extent of this shift is an indication of the amount of protein present in the solution.

In weiterer Ausgestaltung des Indikators gemäß dem Hauptpatent wurde festgestellt, daß bei Verwendung von Tetrabromphenolphthaleinäthylester und einem Puffer, der auf der sauren Seite des Umschlagbereichs liegt, eine besonders große Empfindlichkeit, erreicht wird. Die trockene Indikatorzubereitung auf einem saugfähigen Träger zur Bestimmung von Protein in Flüssigkeiten ist erfindungsgeraäß dadurch gekennzeichnet, daß der saugfähige Träger mit Tetrabromphenolphthaleinäthylester als Farbindikator und mit einem Puffer imprägniert ist, der bei der Berührung mit der Flüssigkeit den pH-Wert auf der sauren Seite des Umschlagbereichs des Farbindikators einstellt.In a further embodiment of the indicator according to the main patent, it was found that when using tetrabromophenolphthalein ethyl ester and a buffer which is on the acidic side of the envelope area, a particularly high sensitivity is achieved. The dry indicator preparation on an absorbent carrier for the determination of protein in liquids is according to the invention characterized in that the absorbent carrier is impregnated with tetrabromophenolphthalein ethyl ester as a color indicator and with a buffer which, when in contact with the liquid, the pH on the acidic side of the envelope area is impregnated of the color indicator.

- 3-009813/0272- 3-009813 / 0272

BAD OFEQINALBAD OFEQINAL

- 3 - IA-14 683- 3 - IA-14 683

Zur Einstellung des pH-Wertes, der auf der sauren Seite des Umschlajrspunkts (pH-Viert 3,5) des IndikatorsTo adjust the pH, which is based on the acidic Side of the changeover point (pH-fourth 3.5) of the indicator

Tetrabromphenolphthaleinäthylester liegen soll, kann als Puffersystem die Kombination Natriumcitrat-Zitronensäure vervrendet werden. Anstelle eines Citratpuffers können jedoch auch Puffersysteme der folgenden Säuren einzeln oder kombiniert verwendet werden: Weinsäure, Maleinsäure, Ascorbinsäure, Salicylsäure, SuIf©salicylsäure, Oxalsäure, Itakonsäure, Glukonsäure, SuIfaminsäure, Bernsteinsäure, Benzoesäure, Handelsäure, Glutarsäure, Apfelsäure und Phthalsäure.Tetrabromophenolphthalein ethyl ester can be used as a buffer system, the combination of sodium citrate and citric acid can be used. Instead of a citrate buffer, however, buffer systems can also be used the following acids can be used individually or in combination: tartaric acid, maleic acid, ascorbic acid, Salicylic acid, sulfamic acid, oxalic acid, itaconic acid, gluconic acid, sulfamic acid, succinic acid, Benzoic acid, commercial acid, glutaric acid, malic acid and phthalic acid.

-■■· Der Tetrabromphenolphthaleinäthylester ist bereits beim Nachweis von Eiweiß in Flüssigkeiten als Indikator vervrendet worden. Daher wird hierfür auch kein Schutz an sich beansprucht. Nach Feigl und Anger Hicrochim. Acfca Vol. II (1937) S. 107 -HO wird ein Tropfen der auf Eiweiß zu prüfenden Lösung auf der Tüpfelpl'atte mit einer 0,1 #igen alkoholischen Lösung des Kaliumsalzes von Tetrabromphenolphthaleinäthylester _#versetzt und hierauf mit ein bis zwei Tropfen 1/5« Essigsäure angesäuert. In Gegenwart von Eiweiß bleibt die Farbe der Lösung blau, während sie in Abwesenheit von Eiweiß nach gelb umschlägt. Dieser bekannte Test ist nicht vergleichbar mit dem unter Vervrendung der trockenen Indikatorzube-- ■■ · The tetrabromophenolphthalein ethyl ester has already been used as an indicator for the detection of protein in liquids. Therefore, no protection per se is claimed for this. According to Feigl and Anger Hicrochim. Acfca Vol. II (1937) p. 107 -HO one drop of the solution to be tested for protein on the spot plate is mixed with a 0.1 # strength alcoholic solution of the potassium salt of tetrabromophenolphthalein ethyl ester _# and then with one to two drops 1 / 5 «acetic acid acidified. In the presence of egg white, the color of the solution remains blue, while in the absence of egg white it turns yellow. This well-known test is not comparable with the one using the dry indicator accessories.

O O 9 8 1 3 / O 2 ψ - *- _BAD OO 9 8 1 3 / O 2 ψ - * - _BAD

IA-IA 683IA-IA 683

reitung gemäß der Erfindung, bei dem diese nur mit der zu prüfenden Lösung benetzt werden muß. Hierbei zeigt im Gegensatz su der bekannten Tüpfelmethode der Farbumschlag die Anwesenheit von Protein an.Riding according to the invention, in which this only needs to be wetted with the solution to be tested. Here In contrast to the well-known spot method, the color change indicates the presence of protein.

Das nachstehende Beispiel erläutert die Herstellung und Vervrendung eines erf indungsgemässen Indikatorpapiers .The following example explains the production and use of an indicator paper according to the invention .

example

0,5 cnr einer 0,1-^igen alkoholischen Lösung von Tetrabromphenolphthaleinäthylester wurden mit 0,5 cm^ einer Lösung vermischt, die 35 mg eines Gemisches von Natriumeitrat und Zitronensäure enthielt. Dieses Gemisch bestand aus 27 % Natriumcitratdihydrat und 73 % wasserfreier Zitronensäure. Hit dieser Lösung wufcden Streifen aus Filterpapier, z.B. Eaton and Dikeman Nr. 623 imprägniert und an der Luft getrocknet. Darauf waren die Streifen verwendungsfertig. So hergestellte Albuminindikatorpapiere waren auf einen pH-Wert von etwa 3 gepuffert. Die Prüfung auf· "Beständigkeit der so hergestellten Indikatorzubereitungen zeigte, daß diese mindestens 5 Monate vollständig stabil war.0.5 cm of a 0.1% alcoholic solution of tetrabromophenolphthalein ethyl ester was mixed with 0.5 cm ^ of a solution which contained 35 mg of a mixture of sodium citrate and citric acid. This mixture consisted of 27 % sodium citrate dihydrate and 73 % anhydrous citric acid. When this solution was used, strips of filter paper, for example Eaton and Dikeman No. 623, were impregnated and air-dried. The strips were then ready to use. Albumin indicator papers produced in this way were buffered to a pH of about 3. The test for the resistance of the indicator preparations produced in this way showed that they were completely stable for at least 5 months.

Zur Schnellbestimmung von Protein in Flüssigkeiten,For the rapid determination of protein in liquids,

- 5 0098 13/0272- 5 0098 13/0272

• - 5 - " IA-IA 683• - 5 - "IA-IA 683

z.B. zum Nachweis von Albumin in Urin wurde ein Streifen des mit Tetrabromphenolphthaleinäthylester und dem Zitronensäurepuffer imprägnierten Indikatorpapiers, das bei pH 3 gelb gefärbt war, kurze Zeit in die zu untersuchende Probe getaucht. Infolge der Pufferwirkung des Citratpuffers im Indikatorpapierstreifen behielt dLeser nach dem Herausziehen aus der untersuchten Probe bei Abwesenheit von Albumin seine gelbe Farbe. Lag jedoch Albumin in einer Menge von 0,01 % oder mehr vor, so schlug der Farbstoff, mit dem der Streifen imprägniert war, infolge des Proteinfehlers nach blau um, wobei die Farbintensität ein Haß für die Menge des in der Urinprobe enthaltenen Albumins war. Das erfindungsgemässe Indikatorpapier sprach in den klinisch wertvollen Bereichen von 0,01 bis über 2,0 % auf Protein an.For example, to detect albumin in urine, a strip of indicator paper impregnated with tetrabromophenolphthalein ethyl ester and citric acid buffer, which was colored yellow at pH 3, was dipped into the sample to be examined for a short time. As a result of the buffering effect of the citrate buffer in the indicator paper strip, dLeser retained its yellow color in the absence of albumin after it was pulled out of the examined sample. However, when albumin was 0.01 % or more, the dye impregnated on the strip turned blue due to the protein defect, and the intensity of the color was a hatred for the amount of albumin in the urine sample. The indicator paper according to the invention responded to protein in the clinically valuable ranges from 0.01 to over 2.0 %.

Gemäß dem beschriebenen Nachweisverfahren unter Verwendung des erfindungsgemässen Indikatorpapiers kann man sichere qualitative und sogar auch halbquantitative Bestimmungen von Albumin durchführen. Unr genauere Ergebnisse zu erzielen, vergleicht man die erzeugte Farbe mit einer Farbtabelle, welche die Farbtöne desselben Farbstoffes angibt, der mit einer Anzahl Standardalbuminlösungen im Bereich der im Urin auftretenden Albuminkonzentrationen behandelt worden ist.According to the detection method described using the indicator paper according to the invention it is possible to carry out reliable qualitative and even semi-quantitative determinations of albumin. In order to achieve more precise results, one compares the generated color with a color table, which indicates the hues of the same dye used with a number of standard albumin solutions in the range the albumin concentrations in the urine have been treated.

Patentans pruch 0098 13/0272 BAD ORIGINAL Patent claim 0098 13/0272 BAD ORIGINAL

Claims

1Λ23Λ271Λ23Λ27

DH. ING. F. WUBSTHOFF 8 MÜNCHEN ΘΟ ' "» *- ^ τ *· 'DH. ING. F. WUBSTHOFF 8 MUNICH ΘΟ '"» * - ^ τ * ·'

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DR.E.T.PECHMANN φ TiLiro» SSO«81DR.E.T.PECHMANN φ TiLiro »SSO« 81

DR. ING. D. BEHRENS τΐιίοΜχιιιοηιη ■DR. ING. D. BEHRENS τΐιίοΜχιιιοηιη ■

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IA-U 683

February 6, 1969

Claim

Dry indicator preparation on an absorbent Carrier for the determination of protein in liquids, which contain a color indicator, which with Protein shows a noticeable color change, according to Ä-

tent (patent application P 12 46 281.6-52), thereby

characterized in that the absorbent carrier with tetrabromophenolphthalein ethyl ester as a color indicator and is impregnated with a buffer which, on contact with the liquid, keeps the pH on the acidic side of the Sets the envelope range of the color indicator.

009813/0272 > new documents w 7 11 ^ s. 2 _No. 1S ₃ * 3 _des Än <t _eru n _fl s _fl e .. v. 4.9. η