DE1236725B

DE1236725B - Process for the production of a corticotropin preparation with a long-lasting effect

Info

Publication number: DE1236725B
Application number: DEA32670A
Authority: DE
Inventors: Robert Edward Thompson
Original assignee: Armour Pharmaceutical Co
Current assignee: Armour Pharmaceutical Co
Priority date: 1958-08-15
Filing date: 1959-08-14
Publication date: 1967-03-16

Description

Verfahren zur Herstellung eines Corticotropinpräparates mit langanhaltender Wirkung Bei der Herstellung von Corticotropinpräparaten mit lang anhaltender Wirkung war man bestrebt, ein unlösliches Präparat zu schaffen, welches bei subkutaner oder intramuskulärer Verabreichung durch Abgabe von Corticotropin in den Blutkreislauf und damit in die Nebennieren zur Wirkung gelangen würde. Diese Präparate sind jedoch relativ kurzlebig, sofern nicht unerträgliche Dosen zur Anwendung kommen. Weiterhin geben sie das Corticotropin nicht gleichmäßig in den Blutstrom ab und besitzen keine zuverlässige Stabilität.Process for the production of a corticotropin preparation with long-lasting Effect In the production of corticotropin preparations with long-lasting effects one endeavored to create an insoluble preparation, which with subcutaneous or intramuscular administration by delivering corticotropin into the bloodstream and thus would take effect in the adrenal glands. However, these preparations are relatively short-lived unless unbearable doses are used. Farther they do not release the corticotropin evenly into the bloodstream and do not have any reliable stability.

Die üblichen wäßrigen Lösungen der Corticotropinhormone allein sind nach Injektion von ziemlich kurzer Wirkungsdauer, d. h., die hämatologischen und Stoffwechselveränderungen, die durch das Nebennierenrindenhormon zustande kommen, erreichen bis zur 4. Stunde nach der Verabreichung ein Maximum und sind bis zur 8. Stunde vollständig abgeklungen. The usual aqueous solutions of the corticotropin hormones alone are after injection of rather short duration of action, d. h., the hematological and Metabolic changes caused by the adrenal cortex hormone, reach a maximum up to the 4th hour after administration and are up to 8th hour completely subsided.

Im allgemeinen ist es notwendig, sie in Abständen von 6 Stunden oder weniger zu verabreichen, wobei bei den Maxima ein Wirkungsüberschuß und damit ein Verlust der wertvollen Substanz entsteht. Es liegt daher ein Bedarf an Präparaten vor, welche die Wirkung während der sogenannten »Spitzenperioden« verringern und dabei gleichzeitig während der gesamten Behandlungsdauer einen höheren Wirkungsgrad aufrechterhalten.In general, it is necessary to do them at intervals of 6 hours or more to administer less, with an excess effect at the maxima and thus a Loss of valuable substance occurs. There is therefore a need for preparations before, which reduce the effect during the so-called "peak periods" and at the same time a higher degree of effectiveness during the entire treatment period maintain.

Um diese Nachteile auszuschalten, hat man bereits versucht, Corticotropinpräparate mit länger dauernder Wirkung herzustellen. Diese bekannten Präparate enthalten als Hauptbestandteile Corticotropin (ACTH) und Oxypolygdatine oder teilweise hydrolysierte Gelatine. In order to eliminate these disadvantages, attempts have already been made to use corticotropin preparations to produce with a longer lasting effect. These known preparations contain as Main ingredients corticotropin (ACTH) and oxypolygdatin or partially hydrolyzed Gelatin.

Weiterhin sind Corticotropinpräparate bekannt, die neben Corticotropin die Sulfate oder Phosphate des Zinks, Nickels, Kobalts, Kupfers oder Eisens als Hautpbestandteile enthalten. Schließlich kennt man Corticotropinpräparate mit Zusätzen von teilweise hydrolysierter Gelatine und schwerlöslichen, adstringierend wirkenden Substanzen, wie APO4, Mg3(PO4)o oder Al(OH)3. Furthermore, corticotropin preparations are known which, in addition to corticotropin the sulfates or phosphates of zinc, nickel, cobalt, copper or iron as Contain skin ingredients. After all, corticotropin preparations with additives are known of partially hydrolyzed gelatine and sparingly soluble, astringent effects Substances like APO4, Mg3 (PO4) o or Al (OH) 3.

Mit dem letztgenannten Präparat ließ sich eine um das Zwei- bis Dreifache verlängerte Wirkungsdauer gegenüber Corticotropinpräparaten in wäßriger Lösung, d. h. eine Wirkungsdauer von bis zu 24 Stunden erzielen. Diese Wirkungsdauer ist jedoch für viele Fälle nicht ausreichend. With the last-mentioned preparation, one could two to three times as much longer duration of action compared to corticotropin preparations in aqueous solution, d. H. achieve a duration of action of up to 24 hours. This duration of action is however, not sufficient for many cases.

Es wurde nun gefunden, daß sich die Wirkungsdauer von Corticotropinpräparaten auf mehr als 48 Stunden und sogar bis über 96 Stunden steigern läßt, wenn man von Corticotropin aus Schweinehypophysen ausgeht und dieses mit Gerbsäure, teilweise hydrolysierter Gelatine und einem Zinksalz zu einem wasserunlöslichen Komplex vereinigt. It has now been found that the duration of action of corticotropin preparations can be increased to more than 48 hours and even to over 96 hours, if you can Corticotropin emanates from pig pituitary and this with tannic acid, in part hydrolyzed gelatin and a zinc salt combined to form a water-insoluble complex.

Es hat sich hierbei herausgestellt, daß ein entsprechender Komplex, der ohne Gelatine hergestellt wurde, zwar eine lang anhaltende Wirkung hat, doch ist hierbei die Menge des in das Blut abgegebenen Corticotropins so gering, daß es zu keinem klinisch feststellbaren Effekt kommt. It turned out that a corresponding complex, which was made without gelatin, has a long-lasting effect, but the amount of corticotropin released into the blood is so small that there is no clinically detectable effect.

Die Erfindung betrifft somit ein Verfahren zur Herstellung eines Corticotropinpräparates mit lang anhaltender Wirkung unter Venvendung von Zinksalzen und teilweise hydrolysierter Gelatine, das dadurch gekennzeichnet ist, daß Schweine-Corticotropin, Gerbsäure, teilweise hydrolysierte Gelatine und ein Zinksalz in wäßriger Lösung zu einem wasseí unlöslichen Komplex vereinigt werden. The invention thus relates to a method for producing a Corticotropin preparation with long-lasting effect using zinc salts and partially hydrolyzed gelatin, which is characterized in that porcine corticotropin, Tannic acid, partially hydrolyzed gelatin and a zinc salt in aqueous solution be combined into a wasseí insoluble complex.

Das Corticotropinpräparat läßt sich auf subkutanem oder intramuskulärem Wege verabfolgen, und das Corticotropin geht während eines extrem langen Zeitraumes in den Blutstrom über und erreicht dort über genau ausgewählte Zeiträume einen konstanten Wert. The corticotropin preparation can be administered subcutaneously or intramuscularly Administer ways and the corticotropin goes for an extremely long period of time into the bloodstream, where it reaches a constant over precisely selected periods of time Value.

Das Präparat ist lange lagerfähig, ohne seine Stabilität zu verlieren.The preparation can be stored for a long time without losing its stability.

Vorzugsweise verfährt man so, daß man von einem Corticotropin mit 20 bis 500 USP-Subkutaneinheiten je Kubikzentimeter ausgeht und 100 USP-Subkutaneinheiten dieses Corticotropins in wäßriger Lösung mit 0,1 bis 2,5 mg Gerbsäure einer Zinksalzmenge, die mindestens 0,25 mg Zink äquivalent ist, und 6 bis 60 mg teilweise hydrolysierter Gelatine zu einem wasserunlöslichen Komplex vereinigt. The preferred procedure is to use a corticotropin with 20 to 500 USP subcutaneous units per cubic centimeter and 100 USP subcutaneous units this corticotropin in aqueous solution with 0.1 to 2.5 mg of tannic acid in a quantity of zinc salt, which is equivalent to at least 0.25 mg zinc, and 6 to 60 mg partially hydrolyzed gelatin combined into a water-insoluble complex.

Die Bezeichnung »USP-Subkutaneinheiten« bezieht sich auf die subkutane Corticotropinprüfung nach der »United States Pharmacopoeia XV«. Das Corticotropinpräparat eignet sich zur Verabreichung an Tiere und Menschen auf jedem Wege, doch wird es, nachdem die Grundlage für seine lang anhaltende Wirkung in einer Depotbildung in den Geweben zu suchen ist, vorzugsweise auf subkutanem oder intramuskulärem Wege verabreicht. The term »USP subcutaneous units« refers to the subcutaneous unit Corticotropin test according to the "United States Pharmacopoeia XV". The corticotropin preparation is suitable for administration to animals and humans by any route, but it will after the basis for its long-lasting effect in a depot formation in the tissues, preferably by the subcutaneous or intramuscular route administered.

Als Ausgangsmaterial verwendet man beispielsweise ein Corticotropin, wie es in der USA.-Patentschrift 2 739 099 beschrieben ist. Das Corticotropin kann nach einem an sich bekannten Reinigungsverfahren mit Oxycellulose, beispielsweise nach dem in der USA.-Patentschrift 2 669 536 beschriebenem, wobei die Reinigung durch Adsorptionen und Eluierung erfolgt, gereinigt werden. Obgleich das Corticotropin in dieser wäßrigen Suspension in einer Konzentration von 20 bis 500 USP-Subkutaneinheiten je Kubikzentimeter enthalten sein kann, ist es für praktische Zwecke vorzuziehen, das Corticotropin in einer Konzentration von 40 bis 100 USP-Subkutaneinheiten je Kubikzentimeter zu verwenden. A corticotropin, for example, is used as the starting material, as described in U.S. Patent 2,739,099. The corticotropin can after a known cleaning process with oxycellulose, for example according to that described in US Pat. No. 2,669,536, the purification takes place by adsorptions and elution. Although the corticotropin in this aqueous suspension in a concentration of 20 to 500 USP subcutaneous units can be contained per cubic centimeter, for practical purposes it is preferable to the corticotropin in a concentration of 40 to 100 USP subcutaneous units each Cubic centimeters to use.

Der Tannat-Bestandteil des Corticotropinpräparates läßt sich aus pharmazeutisch reiner Gerbsäure gewinnen. Obgleich das Tannat in diesem Präparat in einer Konzentration von 0,1 bis 2,5 mg je 100 USP-Subkutaneinheiten Corticotropin enthalten sein kann, lassen sich bessere Ergebnisse erzielen, wenn dessen Konzentration zwischen 0,2 bis 1,0 mg je 100 USP-Subkutaneinheiten Corticotropin beträgt; besonders gute Ergebnisse erhält man mit 0,4 mg Gerbsäure je 100 USP-Subkutaneinheiten Corticotropin. The tannate component of the corticotropin preparation can be omitted Obtain pharmaceutically pure tannic acid. Although the tannate in this preparation at a concentration of 0.1 to 2.5 mg per 100 USP subcutaneous units of corticotropin may be contained, better results can be achieved if its concentration is between 0.2 to 1.0 mg per 100 USP subcutaneous units of corticotropin; particularly Good results are obtained with 0.4 mg of tannic acid per 100 USP subcutaneous units of corticotropin.

Der Zinkbestandteil des Corticotropinpräparates läßt sich aus jedem Zinksalz gewinnen; am besten verwendet man ein wasserlösliches Zinksalz, z. B. Zinkacetat. Obgleich das Zink in dieser wäßrigen Suspension in einer Konzentration von wenigstens 0,25 mg je 100 USP-Subkutaneinheiten Corticotropin enthalten sein kann, ist es für praktische Zwecke vorzuziehen, das Zink in einer Konzentration von 0,5 bis 2,0 mg je 100 USP-Subkutaneinheiten Corticotropin zu verwenden. The zinc component of the corticotropin preparation can be taken from everyone Extract zinc salt; it is best to use a water soluble zinc salt, e.g. B. zinc acetate. Although the zinc in this aqueous suspension in a concentration of at least It is for 0.25 mg per 100 USP subcutaneous units of corticotropin For practical purposes it is preferable to use zinc in a concentration of 0.5 to 2.0 mg to use corticotropin per 100 USP subcutaneous units.

Bei den zu der vorliegenden Erfindung führenden Versuchen wurde in Toleranzprüfungen mit Tieren festgestellt, daß ein Zink-Corticotropin-Tannat-Komplex ohne Gelatine durch das Gewebe inaktiviert zu werden scheint. Infolgedessen kommt es zu einer verminderten Ausschüttung des Corticotropins in den Blutstrom, und die Nebenniere spricht nicht mehr an. In the experiments leading to the present invention, in Tolerance tests with animals found that a zinc-corticotropin-tannate complex without gelatin appears to be inactivated by the tissue. As a result, comes there is a reduced secretion of corticotropin in the bloodstream, and the Adrenal gland no longer responds.

Der Zusatz einer teilweise hydrolysierten Gelatine zu diesem Komplex wirkt dieser Inaktivierung durch das Gewebe entgegen. Durch Veränderung der in diesem Komplex enthaltenen Gelatinemenge kann die Geschwindigkeit, mit welcher das Corticotropin in den Blutstrom abgegeben wird, und infolgedessen auch die Wirkungsdauer des Corticotropinpräparates innerhalb gewisser Grenzen eingestellt werden. Gleichzeitig wird durch die Gelatine eine gesteigerte Corticotropinaktivität ohne Verminderung der Wirkungsdauer sowie eine Erhöhung der Stabilität des Komplexes, insbesondere des Tannatbestandteiles, und eine Herabsetzung lokaler Reizerscheinungen erzielt.The addition of a partially hydrolyzed gelatin to this complex counteracts this inactivation by the tissue. By changing the in this The amount of gelatin contained in the complex can reduce the speed with which the corticotropin is released into the bloodstream, and consequently the duration of the action of the corticotropin preparation can be set within certain limits. At the same time is through the gelatin an increased corticotropin activity without reducing the duration of action as well an increase in the stability of the complex, especially the tannate component, and a reduction in local irritation is achieved.

Der Gelatinebestandteil des Corticotropinpräparates soll pharmazeutisch rein und antigenfrei sein. Die teilweise Hydrolyse der Gelatine läßt sich durch Be- handlung einer geeigneten Gelatinelösung in einem Autoklav bei einem Druck von etwas mehr als 1 atü über einen Zeitraum von etwa 8 Stunden erreichen. The gelatin component of the corticotropin preparation is said to be pharmaceutical be pure and antigen free. The partial hydrolysis of the gelatin allows through Loading treatment of a suitable gelatin solution in an autoclave at a pressure of reach a little more than 1 atm over a period of about 8 hours.

Obwohl die Gelatine in der Zubereitung in einer Konzentration von 2 bis 60 mg je 100 USP-Subkutaneinheiten Corticotropin enthalten sein kann, lassen sich bessere Resultate erzielen, wenn deren Konzentration zwischen 6 bis 20 mg je 100 USP-Subkutaneinheiten Corticotropin beträgt; besonders gute Ergebnisse erhält man mit etwa 15 mg Gelatine je 100 USP-Subkutaneinheiten Corticotropin. Although the gelatin in the preparation is in a concentration of 2 to 60 mg per 100 USP subcutaneous units of corticotropin can be contained get better results if their concentration is between 6 to 20 mg each Is 100 USP subcutaneous units of corticotropin; gets particularly good results about 15 mg of gelatin per 100 USP subcutaneous units of corticotropin.

Die mit diesem Corticotropinpräparat erzielte Wirkungsdauer läßt sich auch durch Änderung der Konzentration der Zink- und Tannatkomponente innerhalb eines weiten Bereiches variieren. The duration of action achieved with this corticotropin preparation leaves also by changing the concentration of the zinc and tannate components within vary over a wide range.

Das erfindungsgemäß hergestellte Corticotropinpräparat hat zweckmäßig einen pH-Wert von 4 bis 8, vorzugsweise von etwa 5. The corticotropin preparation produced according to the invention is useful a pH of 4 to 8, preferably about 5.

Die Reihenfolge, in welcher die wäßrige Corticotropinlösung mit den anderen Komponenten kombiniert wird, kann je nach den gewünschten Eigenschaften des Produktes variiert werden. Wird die wäßrige Corticotropinlösung zuerst mit Gerbsäure versetzt, so kann das Zinksalz innerhalb eines relativ großen pH-Bereiches zugegeben werden. Wird andererseits die wäßrige Corticotropinlösung zuerst mit dem Zinksalz vereinigt, so wird das Gemisch zuerst alkalisch gemacht und dann mit Gerbsäure versetzt, so daß ein alkalischer pH-Wert von etwa 7,4 erreicht wird. The order in which the aqueous corticotropin solution with the other components can be combined, depending on the desired properties of the product can be varied. The aqueous corticotropin solution is first mixed with tannic acid added, the zinc salt can be added within a relatively wide pH range will. On the other hand, the aqueous corticotropin solution is first mixed with the zinc salt combined, the mixture is first made alkaline and then treated with tannic acid, so that an alkaline pH of about 7.4 is reached.

Zur Erhöhung der Stabilität und Lagerfähigkeit des Corticotropinpräparates kann beispielsweise Cystein zugegeben werden. Das Cystein macht das lösliche Zink unlöslich, was zu einer Verringerung örtlicher Reizerscheinungen führt. Darüber hinaus scheint das Cystein die chemischen Veränderungen in den Gerbsäure-, ACTH- und Gelatinebestandteilen dieser Zubereitung zu verzögern. Offensichtlich verbindet sich das Cystein auch mit dem wasserunlöslichen Komplex und übt an der Injektionsstelle seine antioxydativen Eigenschaften im Gewebe aus. Das Cystein wird der wäßrigen Ausgangslösung in Mengen von 0,2 bis 2,0 mg, vorzugsweise von etwa 1 mg, je 100 USP-Subkutaneinheiten Corticotropin zugesetzt. Als Antioxydationsmittel kann man auch Pyridoxin und Thioharnstoff verwenden. To increase the stability and shelf life of the corticotropin preparation for example, cysteine can be added. The cysteine makes zinc soluble insoluble, which leads to a reduction in local irritation. About that In addition, the cysteine appears to be the chemical changes in the tannic acid, ACTH and to delay gelatin components of this preparation. Obviously connects The cysteine also interacts with the water-insoluble complex and exercises at the injection site its antioxidant properties in the tissue. The cysteine becomes the aqueous Starting solution in amounts of 0.2 to 2.0 mg, preferably about 1 mg, per 100 USP subcutaneous units corticotropin added. As an antioxidant you can also use pyridoxine and thiourea.

Weiterhin kann man dem Corticotropinpräparat, insbesondere wenn man ein vielseitig verwendbares Injektionspräparat wünscht, antibakteriell wirkende Mittel, wie Methyl- und Propylparaminobenzoat, vorzugsweise in Mengen von etwa 0,1 bis 0,2 0/, (Gewicht/ Volumen) bzw. 0,01 bis 0,02 0/o (Gewicht/Volumen) zusetzen. Ebenso kann hierzu Phenol verwendet werden. Furthermore, one can take the corticotropin preparation, especially if one wants a versatile injection preparation that has an antibacterial effect Agents such as methyl and propyl paraminobenzoate, preferably in amounts of about 0.1 Add up to 0.2 0 / o (weight / volume) or 0.01 to 0.02 0 / o (weight / volume). Phenol can also be used for this purpose.

Beispiel 1 Aus Schweinehypophysen wurde Roh-ACTH nach dem Salzsäure-Aceton-Extraktionsverfahren herge stellt. Das Roh-ACTH wurde nach dem Oxycellulose-Adsorptionsverfahren gereinigt. 400 mg gereinigtes ACTH wurden bei einem pH-Wert von 4,7 mit Wasser und Pyridoxinhydrochlorid vermischt und 5 Stunden auf eine Temperatur von 95 bis 1000 C erhitzt. Von dem bis auf etwa 50"C abgekühlten Gemisch wurden die unlöslichen inaktiven Bestandteile abfiltriert. Der Rückstand wurde dann bis auf ein Filtratvolumen von 40 ccm mit Wasser ausgewaschen, und das Filtrat wurde durch eine >02 Selas-Kerze« steril filtriert. Dem Filtrat wurden durch die Kerze 128 mg Gerbsäure in 25 ccm Wasser und dann getrennt 1,056 g kristallines Zinkacetat und 9,6 g teilweise hydrolysierte Gelatine in jeweils 25 ccm Wasser zugesetzt. Anschließend wurden 640 mg Cystein, 600 mg Methylparaoxybenzoat und 60 mg Propylparaoxybenzoat in 200 ccm warmem Wasser durch das sterile Filter zugesetzt. Nach jeder Filtration wurden 10 ccm Wasser zugesetzt, um bereits vorher vorhandene Bestandteile aus der Kerze herauszuwaschen. Das Endvolumen der sterilen Suspension betrug 320 ccm. Die Suspension wurde in Mengen zu 2,5 ccm aseptisch in weithalsige Ampullen mit einem Volumen von 6 ccm abgefüllt, und die Ampullen wurden mit Stöpseln aseptisch verschlossen. Sodann wurden die Ampullen imVakuum der Gefriertrocknung unterworfen und mit üblichen Aluminiumverschlüssen aseptisch versiegelt. Example 1 Crude ACTH was obtained from porcine pituitary by the hydrochloric acid-acetone extraction method manufactured. The raw ACTH was purified by the oxycellulose adsorption process. 400 mg of purified ACTH were at pH 4.7 with water and pyridoxine hydrochloride mixed and heated to a temperature of 95 to 1000 C for 5 hours. From that to When the mixture was cooled to about 50 "C, the insoluble inactive ingredients became filtered off. The residue was then to a filtrate volume of 40 ccm with Washed out water, and the filtrate was made sterile by a "02 Selas candle" filtered. 128 mg of tannic acid in 25 cc of water were added to the filtrate through the candle and then separately 1.056 g of crystalline Zinc acetate and 9.6 g partially hydrolyzed gelatine was added to each 25 cc of water. Then 640 mg of cysteine, 600 mg of methyl paraoxybenzoate and 60 mg of propyl paraoxybenzoate in 200 ccm added to warm water through the sterile filter. After each filtration 10 ccm of water was added to wash out previously existing components from the candle. The final volume of the sterile suspension was 320 cc. The suspension was in bulk 2.5 ccm aseptically filled into wide-necked ampoules with a volume of 6 ccm, and the vials were aseptically sealed with stoppers. Then the ampoules Subjected to freeze-drying in vacuo and with the usual aluminum closures aseptically sealed.

Das Fertigprodukt erwies sich bei der Prüfung als steril. Nach Zugabe von 1,0 bis 5,0 ccm Wasser oder physiologischer Kochsalzlösung erhielt man eine ausgezeichnete gleichmäßige Suspension des unlöslichen ACTH-Komplexes. Die Wirksamkeitsprüfung zeigte 234:t19 Einheiten je Ampulle nach der USP-Subkutan-Prüfungsmethode. Das mit physiologischer Kochsalzlösung gebrauchsfertig zubereitete Endprodukt bewirkte eine anhaltende Nebennierenstimulation, die sich nach einer einmaligen Injektion über 48 bis 72 Stunden erstreckte. Die lokale Verträglichkeit war ausgezeichnet. The finished product was found to be sterile when tested. After adding from 1.0 to 5.0 cc of water or physiological saline solution was obtained excellent uniform suspension of the insoluble ACTH complex. The effectiveness test showed 234: t19 units per ampoule according to the USP subcutaneous test method. That with Ready-to-use end product prepared from physiological saline caused a sustained adrenal stimulation that is over after a single injection 48 to 72 hours extended. The local tolerance was excellent.

Beispiel 2 Das Produkt wurde wie im Beispiel 1 zubereitet Zum Zeitpunkt der Zugabe von Cystein sowie von Methyl- und Propylparaoxybenzoat wurden auch 6,25 ccm einer 32%igen wäßligen Gelatinelösung zugesetzt, die zuvor 4 bis 8 Stunden bei 120"C im Autoklav erhitzt worden war. Diese Gelatinemenge ergab im Fertigprodukt etwa 6 mg teilweise hydrolysierte Gelatine je Kubikzentimeter. Example 2 The product was prepared as in Example 1 At the time the addition of cysteine and methyl and propyl paraoxybenzoate were also 6.25 ccm of a 32% aqueous gelatin solution was added, which had previously been added for 4 to 8 hours at 120 "C had been heated in the autoclave. This amount of gelatin resulted in the finished product about 6 mg of partially hydrolyzed gelatin per cubic centimeter.

Nach erfolgter Lyophilierung konnte das Produkt in einwandfreier Weise gebrauchsfertig gemacht werden und zeigte nach der Injektion eine stärkere Nebennierenstimulation als das nach Beispiel 1 zubereitete Produkt. Hinsichtlich der Wirksamkeitsdauer änderte sich nichts. After the lyophilization, the product could be in perfect condition Way to be made ready for use and showed stronger after injection Adrenal stimulation than the product prepared according to Example 1. Regarding the duration of effectiveness did not change.

Beispiel 3 40 ccm des nach Beispiel 1 erhaltenen Filtrats mit 400 mg ACTH aus Schweinehypophysen wurden durch eine »0,2 Selas-Kerze« filtriert. Dem Filtrat wurden durch die Kerze 256 mg Gerbsäure in 25 ccm Wasser (0,8 mg Gerbsäure je Kubikzentimeter Endprodukt) und dann getrennt 1,056 g kristallines Zinkacetat und 9,6 g teilweise hydrolysierte Gelatine in jeweils 25 ccm Wasser zugesetzt. Dann wurden 640 mg Cystein, 600 mg Methylenparaoxybenzoat und 60 mg Propylparaoxybenzoat in 200 ccm warmem Wasser durch das sterile Filter hinzugegeben. Nach jeder Filtration wurden 10 ccm Wasser hinzugefügt, um bereits früher vorhandene Bestandteile aus der Kerze herauszuwaschen. Das Endvolumen der sterilen Suspension betrug 320 ccm. Diese Suspension wurde wie nach Beispiel 1 weiterbehandelt. Das Produkt bewirkte nach Verabreichung einer einmaligen subkutanen Dosis eine über 96 Stunden anhaltende Nebennierenstimulation. Example 3 40 ccm of the filtrate obtained according to Example 1 with 400 mg ACTH from pig pituitary were filtered through a »0.2 Selas candle«. To the The filtrate was 256 mg of tannic acid in 25 ccm of water (0.8 mg of tannic acid per cubic centimeter of end product) and then separately 1.056 g of crystalline zinc acetate and 9.6 g of partially hydrolyzed gelatin in 25 cc of water each time. then were 640 mg of cysteine, 600 mg of methylene paraoxybenzoate and 60 mg of propyl paraoxybenzoate added in 200 ccm warm water through the sterile filter. After every filtration 10 cc of water were added to remove previously existing components to wash out the candle. The final volume of the sterile suspension was 320 cc. This suspension was treated further as in Example 1. The product worked 96 hours after administration of a single subcutaneous dose Adrenal stimulation.

Beispiel 4 40 ccm des nach Beispiel 1 erhaltenen Filtrats mit 400 mg ACTH aus Schweinehypophysen wurden steril durch eine »0,2 Selas-Kerze« filtriert. Dem Filtrat wurden durch die Kerze 128 mg Gerbsäure in 25 ccm Wasser und dann 0,528 g kristallines Zinkacetat und 9,6 g teilweise hydrolysierte Gelatine in jeweils 25 ccm Wasser (0,5 mg Zink je Kubikzentimeter Endprodukt) zugesetzt. Dann wurden 640 mg Cystein, 600 mg Methylparaoxybenzoat und 60 mg Propylparaoxybenzoat in 200 ccm warmem Wasser durch das sterile Filter zugesetzt. Nach jeder Filtration wurden 10 ccm Wasser hinzugegeben, um bereits früher vorhandene Bestandteile aus der Kerze herauszuwaschen. Das Endvolumen der sterilen Suspension betrug 320 ccm. Die Suspension wurde wie nach Beispiel 1 weiterbehandelt. Example 4 40 ccm of the filtrate obtained according to Example 1 with 400 mg ACTH from porcine pituitary glands sterile filtered through a »0.2 Selas candle«. 128 mg of tannic acid in 25 cc of water and then 0.528 mg of tannic acid were added to the filtrate through the candle g of crystalline zinc acetate and 9.6 g of partially hydrolyzed gelatin in each 25 cc of water (0.5 mg of zinc per cubic centimeter of end product) was added. Then were 640 mg cysteine, 600 mg methyl paraoxybenzoate and 60 mg propyl paraoxybenzoate in 200 cc of warm water was added through the sterile filter. After each filtration were 10 ccm of water are added to remove previously existing components from the candle to wash out. The final volume of the sterile suspension was 320 cc. The suspension was treated as in Example 1.

Das Produkt entfaltete etwa 48 Stunden gegenüber dem 1,0 mg Zink je Kubikzentimeter enthaltenden Endprodukt nach Beispiell die gleiche oder eine überlegene Wirkungsintensität. The product unfolded about 48 hours against the 1.0 mg zinc per cubic centimeter containing end product according to example the same or one superior intensity of action.

Beispiel 5 40 ccm einet wäßrigen Lösung von Schweine-ACTH mit 640 Einheiten ACTH je Kubikzentimeter, 25 ccm einer wäßrigen Lösung mit 120mg Gerbsäure und 1,056 g Zinkacetat in 25 ccm Wasser wurden durch eine Selas-Kerze in einen sterilen Behälter filtriert. Example 5 40 cc of an aqueous solution of 640 porcine ACTH ACTH units per cubic centimeter, 25 cc of an aqueous solution with 120 mg of tannic acid and 1.056 g of zinc acetate in 25 cc of water were poured through a Selas candle into a sterile Filtered container.

Die Selas-Kerze wurde nach jeder Filtration mit 10 ccm Wasser gewaschen.The Selas candle was washed with 10 cc of water after each filtration.

Daraufhin wurde eine wäßrige Lösung, welche die nachstehend aufgeführte Zusammensetzung aufwies, dulch die Selas-Kerze in den sterilen Behälter filtriert. Thereupon, an aqueous solution such as that shown below was produced Composition, filtered the Selas candle into the sterile container.

Cystein 320 ................... .. 320 mg Methylparnoxybenzont ....... 600 mg Propylparaoxybenzoat ........ 60 mg Eine wäßrige Lösung, enthaltend 32 0/o Gelatine, die durch 8stündiges Erhitzen imAutoklav hydrolysiert worden war 6,25 ccm Wasser ......... 95 ccm Der sterile Behälter wurde mit Wasser auf ein Endvolumen von 320 ccm aufgefüllt. Die gebildete flüssige Suspension wurde wie nach Beispiel 1 weiterbehandelt. Cysteine 320 ................... .. 320 mg Methylparnoxybenzont ....... 600 mg propyl paraoxybenzoate ........ 60 mg An aqueous solution containing 32% Gelatin hydrolyzed by autoclaving for 8 hours 6.25 cc water ......... 95 cc The sterile container was filled with water to a final volume filled up by 320 cc. The liquid suspension formed was as in Example 1 further treated.

Die Analyse ergab, daß auf eine Ampulle 233 Einheiten ACTH-Wirksamkeit entfielen. Das Produkt ließ klinisch eine größere ACTH-Aktivität erkennen als ein Vergleichsprodukt ohne Gelatine. Die klinische Wirkungsdauer des Präparates betrug etwa 72 Stunden. The analysis showed that one ampoule had 233 units of ACTH activity accounted for. The product clinically demonstrated greater ACTH activity than one Comparative product without gelatine. The clinical duration of action of the preparation was about 72 hours.

Claims

Claims: 1. Process for the production of a corticotropin preparation with a long-lasting effect using zinc salts and partially hydrolyzed Gelatin, characterized in that pork corticotropin, tannic acid, partially hydrolyzed gelatin and a zinc salt in aqueous solution to a water-insoluble one Complex to be united.

2. The method according to claim 1, characterized in that the aqueous Starting solution 0.2 to 2.0 mg cysteine per 100 USP subcutaneous units of corticotropin be added.

Considered publications: German Patent Specifications No. 960 579, 951 228; British Patent Nos. 757 934, 748 857; U.S. Patent No. 2,669,537; Farmacja polska, 12, pp. 317-319 (1956); ref.

Chem. Zentralbl., 1959, p. 3903; L a n c e t, 266, pp. 541/542 (1954).