DE1219173B

DE1219173B - Process for the production of lysergic acid derivatives

Info

Publication number: DE1219173B
Application number: DES86967A
Authority: DE
Inventors: Dr Juerg Rutschmann; Dr Hans Kobel
Original assignee: Sandoz AG
Current assignee: Sandoz AG
Priority date: 1962-08-30
Filing date: 1963-08-29
Publication date: 1966-06-16

Description

Verfahren zur Gewinnung von Lysergsäure-Derivaten Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von Lysergsäure-Derivaten mit Hilfe eines neuen Stammes von Claviceps paspali Stevens et Hall. Verschiedene Stämme dieses Pilzes waren schon seit langer Zeit bekannt, doch ist es erst vor kurzem gelungen, einen bestimmten Stamm dieser Pilzgattung durch besondere Kunstgriffe zur Produktion von alkaloidartigen Derivaten der Lysergsäure zu veranlassen. Der erwähnte Kunstgriff lag darin, daß der Pilzstamm erst durch üüberimpfung auf Graskeimlinge »aktiviert« werden mußte. Später wurde von einer anderen Forschergruppe gefunden, daß dieser Kunstgriff sich unter bestimmten Bedingungen auch umgehen läßt, doch waren die so erhaltenen Ausbeuten an Lysergsäure ziemlich gering, was eine technische Ausführung des Verfahrens sehr erschwert. Vor allem aber war es bisher noch niemals geglückt, einen Stamm von Claviceps paspali Stevens et Hall zu finden bzw. zu züchten, der in vitro zur Konidienbildung fähig ist.Process for the preparation of lysergic acid derivatives The present The invention relates to a method for obtaining lysergic acid derivatives with the aid of a new strain of Claviceps paspali Stevens et Hall. Different tribes of this Mushrooms have been known for a long time, but only recently has it been possible to a certain strain of this genus of mushrooms through special artifacts for production of alkaloid-like derivatives of lysergic acid. The trick mentioned was due to the fact that the mushroom stem only "activated" by inoculation on grass seedlings had to become. It was later found by another group of researchers that this Artifice can also be circumvented under certain conditions, but that's how it was The yields of lysergic acid obtained are quite low, which is a technical design the procedure is very difficult. Above all, however, it had never been successful before to find or breed a strain of Claviceps paspali Stevens et Hall that is capable of conidia formation in vitro.

Nun ist es aber für die Ausführung von mikrobiologischen Verfahren im technischen Maßstab von großer Wichtigkeit, ob der betreffende Pilz Konidien bildet oder nicht. So ist es mit Hilfe von Konidien möglich, Einsporisolierungen zu machen und dadurch zu genetisch einheitlichem Material zu gelangen. Auch lassen sich aus Konidien durch Röntgen- und UV-Bestrahlung sowie mit Chemikalien sehr viel leichter Mutanten erzeugen und isolieren als aus sterilem Mycel. Ferner können mit Konidien blühende Paspalumpflanzen infiziert und auf diese Weise auf dem natürlichen Wirt Sklerotien erzeugt werden, welche sich zur Konservierung des Stammes ausgezeichnet eignen. Man kann beispielsweise aus diesem haltbaren Material jederzeit frischen Impfstoff gewinnen, wenn die In-vitro-Kulturen nach wiederholten Passagen degenerieren. Konidien können auch lyophilisiert bzw. nach Gefriertrocknung unbegrenzt gelagert wer-, den, was ebenfalls die Konservierung eines Stammes ermöglicht. Schließlich aber eignet sich für die Beimpfung einer Nährlösung eine Konidiensuspension am besten, weil die Impfmenge am geeignetsten dosiert werden kann und weil sich damit am leichtesten steril arbeiten läßt. Ein steriles Mycel hingegen muß .am Anfang in einem Mixer homogenisiert werden.But now it is for the execution of microbiological processes on a technical scale of great importance whether the fungus in question is conidia educates or not. With the help of conidia it is possible to isolate single spurs and thereby to arrive at genetically uniform material. Let too very much from conidia through X-ray and UV radiation as well as chemicals generate and isolate mutants more easily than from sterile mycelium. You can also use Conidia flowering paspalum plants are infected and in this way on the natural Host sclerotia are generated, which are excellent for preserving the strain suitable. For example, this durable material can be used for fresh food at any time Win the vaccine if the in vitro cultures degenerate after repeated passages. Conidia can also be lyophilized or stored indefinitely after freeze-drying become, which also enables the conservation of a trunk. In the end but a conidia suspension is best suited for the inoculation of a nutrient solution, because the amount of vaccine can be dosed in the most suitable way and because it is easiest to use lets work sterile. A sterile mycelium, on the other hand, must first be put in a blender be homogenized.

Obwohl nun bisher in der Literatur kein Stamm von Claviceps paspali Stevens et Hall beschrieben worden ist, der in vitro der Konidienbildung fähig wäre, ja darüber hinaus immer wieder betont wurde, daß bei diesen Stämmen bisher noch niemals Konidien beobachtet worden sind, gelang es nun überraschenderweise, auf Neu-Guinea einen neuen Stamm von Claviceps paspali Stevens et Hall zu finden, der in Form von Skl:erotien .auf Paspalum dilatatum Poir. wuchs und der unter bestimmten Bedingungen Konidien bildet. Proben dieses Pilzes wurden beim United States Department of Agriculture (Northern Utilization Research and Development Division), Peoria, 11l., deponiert und erhielten dort die Nummer NRRL 3027. Im Gegensatz zu den bisher beschriebenen Stämmen von Claviceps paspali Stevens et Hall sind die Sklerotien des Stammes NRRL 3027 alkaloidhaltig. Der Alkaloidgehalt dieser Sklerotienproben betrug 0,04% und setzt sich aus folgenden Substanzen zusammen: Lysergsäureamid.................. 40% Isolysergsäureamid . . . . . . . . . . . . . . . . 20'% Ergobasin ........................ 15% Ergobasinin ...................... 10% Chanoclavin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10% Unbekannte . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5'% Die Analyse des Alkaloidgemisches wurde auf papierchromatischem Weg vorgenommen und der prozentuelle Anteil der einzelnen Komponenten auf Grund der Färbfleckintensität bestimmt. Die Isolierung und Vermehrung des neuen Pilzstammes erfolgt auf folgende Weise: Aus dem Innern eines Sklerotiums wird ein kleines Gewebestück steril entnommen und auf Bierwürzeagar übertragen [Zusammensetzung: 250 ml ungehopfte helle Bierwürze (Trockensubstanz 17%), 18 g Agar Agar, destilliertes Wasser ad 11 (pH 5,2)]. Es entwickelt sich eine kreisrunde Kolonie, die nach 14 Tagen bei 24° C einen Durchmesser von 15 mm erreicht. Sie besteht aus einer dem Agar aufliegenden, etwa 1 mm dicken Haut von pseudosklerotialer Struktur und darüber einem Polster von weißem Luftmycel. Ein brauner Farbstoff diffundiert in den Agar hinein. Es werden keine Konidien gebildet.Although no strain of Claviceps paspali Stevens et Hall has been described in the literature that would be capable of conidia formation in vitro, and it has been emphasized again and again that conidia have never been observed in these strains, it was now surprisingly successful to find a new strain of Claviceps paspali Stevens et Hall in New Guinea, in the form of Skl: erotien. on Paspalum dilatatum Poir. and which forms conidia under certain conditions. Samples of this fungus were deposited with the United States Department of Agriculture (Northern Utilization Research and Development Division), Peoria, 11l., Where they were given the number NRRL 3027. In contrast to the previously described strains of Claviceps paspali Stevens et Hall, the sclerotia of the Strain NRRL 3027 containing alkaloid. The alkaloid content of these sclerotia samples was 0.04% and consists of the following substances: Lysergic acid amide .................. 40% Isolysergic acid amide. . . . . . . . . . . . . . . . 20 '% Ergobasin ........................ 15% Ergobasinin ...................... 10% Chanoclavine. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10% Unknown. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 '% The analysis of the alkaloid mixture was carried out using paper chromatography and the percentage of the individual components was determined on the basis of the intensity of the stain. The new fungal strain is isolated and multiplied in the following way: A small piece of tissue is removed in a sterile manner from the inside of a sclerotium and transferred to wort agar [composition: 250 ml unhopped light wort (dry matter 17%), 18 g agar agar, distilled water ad 11 (pH 5.2)]. A circular colony develops, which reaches a diameter of 15 mm after 14 days at 24 ° C. It consists of an approximately 1 mm thick skin with a pseudosclerotial structure on top of the agar and above it a cushion of white aerial mycelium. A brown dye diffuses into the agar. No conidia are formed.

Diese Kolonie wird mit einem Spatel in Stücke zerteilt und in ein Reagenzglas mit 12 cm3 des folgenden Agarnährbodens übertragen: Bierwürze..................... 500 ml Cornsteep-Solids .............. 60 g Milchsäure.................... 1 ml Salmiaklösung bis pH 4,8 Agar-Agar . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20 g Destilliertes Wasser . . . . . . . . . . . . 11 Um jedes Impfstück bildet sich eine kleine Kolonie von zunächst weißem, später rotbraunem Mycel. Nach 10 Tagen beginnen sich an den Hyphenspitzen Konidien abzuschnüren. Nach 20 Tagen sind genügend Konidien vorhanden, um damit eine wässerige Suspension herzustellen, mit welcher 20 Schrägagarröhrchen (gleicher Agar wie oben) beimpft werden können. Diese Kulturen werden bei 24° C bebrütet. Die Konidien keimen nach 24 bis 36 Stunden. Nach 6 Tagen ist die Agaroberfläche von einem feinen, weißen Mycel gleichmäßig überzogen, nach 10 Tagen ist eine braungraue, feingefurchte Myceldecke gebildet, welche dem Agar eng aufliegt und nur kurze Lufthyphen hat. An diesen werden Konidien abgeschnürt. Nach 12 Tagen entstehen an mehreren Stellen im Mycel Zentren, an welchen kleine Tröpfchen einer rotbraunen Flüssigkeit ausgeschieden werden. Die Tröpfchen erreichen einen Durchmesser von 1 bis 3 mm und werden bald von sehr ,zahlreichen Konidien milchig-trüb. Nach 16 bis 18 Tagen ist die Konidienbildung praktisch abgeschlossen. Eine Schrägagarkultur in einem Reagenzglas von 2 cm Durchmesser mit 12 ml Agar-Nährboden enthält etwa 109 Konidien.This colony is cut into pieces with a spatula and transferred to a 12 cm3 test tube of the following agar culture medium: Beer wort ..................... 500 ml Cornsteep solids .............. 60 g Lactic acid .................... 1 ml Ammonia solution up to pH 4.8 Agar Agar . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20 g Distilled water . . . . . . . . . . . . 11 A small colony of initially white and later red-brown mycelium forms around each inoculation piece. After 10 days, conidia begin to constrict at the hyphae tips. After 20 days there are enough conidia to produce an aqueous suspension with which 20 slant agar tubes (same agar as above) can be inoculated. These cultures are incubated at 24 ° C. The conidia germinate after 24 to 36 hours. After 6 days the agar surface is evenly covered by a fine, white mycelium, after 10 days a brown-gray, finely furrowed mycelium cover is formed, which lies tightly on the agar and has only short aerial hyphae. Conidia are pinched off at these. After 12 days, centers develop in several places in the mycelium, at which small droplets of a red-brown liquid are excreted. The droplets reach a diameter of 1 to 3 mm and soon become milky-cloudy from very numerous conidia. Conidia formation is practically complete after 16 to 18 days. An agar slant culture in a test tube 2 cm in diameter with 12 ml agar medium contains about 109 conidia.

Für die Züchtung in Submerskultur wird zunächst eine Vorkultur wie folgt bereitet: Als Medium wird eine 4,5%ige wässerige Malzextraktlösung mit ph 5,4 verwendet. 11 dieser Lösung wird in einem 2-1-Erlenmeyerkolben 20 Minuten bei 110° C sterilisiert, hernach 5 -10$ Konidien von einer 20 Tage alten Agarkultur einer Einspormutante des Neu-Guinea-Stammes beimpft und 3 Tage lang auf einer rotierenden Schüttelmaschine bei 23° C inkubiert. Es entsteht eine dichte Kultur aus feinen Mycelflocken. Die Flocken bestehen aus einem lockeren Knäuel von Hyphen und haben einen Durchmesser von 2 bis 4 mm. Es sind keine Alkaloide nachweisbar.For breeding in submerged culture, a preculture such as is prepared as follows: A 4.5% aqueous malt extract solution with pH 5.4 used. 11 of this solution is in a 2-1 Erlenmeyer flask for 20 minutes Sterilized at 110 ° C, then 5-10 $ conidia from a 20-day-old agar culture inoculated in a single mutant of the New Guinea tribe and on a rotary for 3 days Shaker incubated at 23 ° C. A dense culture of fine arises Mycelium flakes. The flakes consist of a loose tangle of hyphae and have a diameter of 2 to 4 mm. No alkaloids are detectable.

Zur Herstellung größerer Mengen Vorkultur werden Glasfermenter, welche je 101 desselben Mediums enthalten, mit je 5 -109 Konidien beimpft und 3 Tage bei 23° C unter Belüftung mit 61 Luft pro Minute und Rühren mit 200 UpM bebrütet. Zur Schaumbekämpfung wird eine Siliconemulsion verwendet. Die so erhaltenen Fermenterkultüren sind von gleicher Beschaffenheit wie die Schüttelkulturen. Für die Hauptkultur erwies sich die folgende Nährlösung, die in 11 destilliertem Wasser Sorbit... ................ 50 g Bernsteinsäure . . . . . . . . . . . 36g KH2P04................. 2 g Mg804 . . . . . . . . . . . . . . .... 0,3 g FeS04................... 1 mg-7 H20 ZnSo4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 mg - 7H20 enthielt und mit NH40H auf pH 5,4 eingestellt worden war, als besonders zweckmäßig.To produce larger quantities of preculture, glass fermenters, each containing 101 of the same medium, are inoculated with 5-109 conidia and incubated for 3 days at 23 ° C. with aeration at 61 air per minute and stirring at 200 rpm. A silicone emulsion is used to combat foam. The fermenter cultures obtained in this way are of the same nature as the shaking cultures. For the main culture, the following nutrient solution turned out to be that in 11% of distilled water Sorbitol ... ................ 50 g Succinic acid. . . . . . . . . . . 36g KH2P04 ................. 2 g Mg804. . . . . . . . . . . . . . .... 0.3 g FeS04 ................... 1 mg-7 H20 ZnSo4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 mg - 7H20 and had been adjusted to pH 5.4 with NH40H, as particularly expedient.

über den Einfluß von Zink- und Eisenionen auf das Wachstum des Pilzes und den Alkaloidgehalt der Kulturlösung informieren die beiden folgenden Tabellen: 2. Alkaloidgehalt überall 1 mg/1 FeS04. 7 H20 ZnSo4 - 7 H20 in mg/1 Alkaloidgehalt in mg/1 0 8 1 1060 15 985 60 950 Diese Nährlösung wird mit 10% einer 3 Tage alten Vorkultur beimpft und in Portionen von 100 ml in 500-m1 Erlenmeyerkolben auf einer reziprok schüttelnden Maschine bei 23°C inkubiert. Andere Kulturen werden in analoger Weise in einem 170-1-Nährmedium enthaltenden Fermenter aus rostfreiem Stahl gezüchtet. Dabei wird mit 1701 Luft pro Minute belüftet und mit anfänglich 70, später 180 UpM gerührt. Zur Schaumbekämpfung wird eine Siliconemulsion verwendet.The following two tables provide information on the influence of zinc and iron ions on the growth of the fungus and the alkaloid content of the culture solution: 2. Alkaloid content everywhere 1 mg / 1 FeS04. 7 H20 ZnSo4 - 7 H20 in mg / 1 Alkaloid content in mg / 1 0 8 1 1060 15,985 60 950 This nutrient solution is inoculated with 10% of a 3-day-old preculture and incubated in 100 ml portions in 500 ml Erlenmeyer flasks on a reciprocally shaking machine at 23 ° C. Other cultures are grown in an analogous manner in a stainless steel fermenter containing 170-1 nutrient medium. It is ventilated with 1701 air per minute and stirred at initially 70, later 180 rpm. A silicone emulsion is used to combat foam.

Auf diese Weise entstehen Kulturen aus zahlreichen, gleichartigen Mycelpartikeln. Diese haben einen Durchmesser von etwa 5 mm und besitzen einen kugeligen, kompakten Kern von etwa 1 mm Durchmesser.aus pseudoparenchymatischem Gewebe. Dieser Kern trägt sternartig angeordnete, etwa 2 mm lange Fortsätze aus parallelgelagerten Hyphen. Am Ende der etwa 10tägigen Kulturdauer ist das Mycel dunkelbraun und das Filtrat intensiv rotbraun gefärbt. Das pH verändert sich nur unwesentlich.In this way cultures emerge from numerous, similar ones Mycelium particles. These have a diameter of about 5 mm and have a spherical, compact nucleus about 1 mm in diameter. made of pseudoparenchymatic tissue. This The core has star-like, approximately 2 mm long appendages made up of parallel layers Hyphae. At the end of the 10-day culture period, the mycelium is dark brown and that The filtrate is intensely red-brown in color. The pH changes only insignificantly.

Das so erhaltene Kulturfiltrat kann beispielsweise wie folgt .aufgearbeitet werden: Eine Portion von 201 Kulturfiltrat wurde mit etwa 1,2 kg Soda auf pH 9,75 gebracht und dreimal mit je 201 Äthylenchlorid extrahiert. Die organische Phase wurde jeweils einmal mit 51 Wasser gewaschen und dann im Vakuum auf total 41 eingeengt. Das Konzentrat wurde mit dreimal je 11 5%iger Weinsäure extrahiert, die Weinsäureauszüge wurden mit Soda auf pH 9,0 gebracht und dreimal mit je 21 Äthylenchlorid extrahiert. Die mit wenig Wasser gewaschenen und über Natriumsulfat getrockneten Auszüge gaben nach Eindampfen im Vakuum 16,7 g Basen, die nach v.an Urk 12,2 g Indolkörper bzw. nach papierchromatographischer Untersuchung 11,3 g verseifbare Indole enthielten.The culture filtrate obtained in this way can, for example, be worked up as follows be: A portion of 201 culture filtrate was brought to pH 9.75 with about 1.2 kg of soda brought and extracted three times with 201 ethylene chloride each time. The organic phase was washed once with 51% water and then concentrated to a total of 41% in vacuo. The concentrate was extracted three times with 11 5% tartaric acid each time, the tartaric acid extracts were brought to pH 9.0 with soda and extracted three times with 21 ethylene chloride each time. The extracts washed with a little water and dried over sodium sulfate gifts after evaporation in vacuo 16.7 g bases, which according to v.an Urk 12.2 g indole body resp. after examination by paper chromatography contained 11.3 g of saponifiable indoles.

Das so erhaltene Basengemisch wurde, wie oben beschrieben, papierchromatographisch analysiert und zeigte die folgende Zusammensetzung: Lysergsäureamid . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45% Isolysergsäureamid . . . . . . . . . . . . . . . . 42% Ergobasin ........................ 3-% Ergobasinin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3% Chanoclavin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3% Elymoclavin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21% Penniclavin ...................... 2% Bei Durchführung als Fermenterkultur erhält man nach 12 Tagen Kulturdauer 1451 Kulturfiltrat. Dieses Kulturfiltrat wurde nach Alkalisieren mit 2 n-Natronlauge fünfmal mit 2001 Essigester bei pH 7,4 und dreimal mit 2001 Essigester bei pH 10 extrahiert. Die beiden Essigesterextrakte wurden je auf 101 eingeengt und den Konzentraten die Alkoloide mit wässeriger Weinsäurelösung entzogen. Die weinsauren, wässerigen Auszüge extrahierte man nach dem Alkalisieren wieder bei pH 7,4 und bei pH 10 mit Essigester, welcher, nach dem Neutralwaschen mit wenig Wasser, zur Trockne eingedampft wurde. Der Extraktrückstand wurde, wie oben beschrieben, papierchromatographisch analysiert und zeigte die folgende Zusammensetzung: Lysergsäureamid.................. 66% Isolysergsäureamid................ 21% Ergobasin ........................ 4% Ergobasinin ...................... 2% Chanoclavin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2% Elymoclavin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2% Agroclavin ....................... 2'% Penniclavin ...................... 1% Ein weiterer Vorteil des .erfindungsgemäßen Verfahrens unter Verwendung des neuen Stammes von Claviceps paspali Stevens et Hall besteht darin, daß das erhaltene Gemisch besonders reich an Lysergsäureamid bzw. Isolysergsäureamid ist. Diese beiden Verbindungen lassen sich nämlich im Gegensatz zu den natürlichen Mutterkomalkaloiden, wie z. B. Ergobasin, wesentlich leichter zur freien Lysergsäure hydrolisieren, die ein wichtiges Zwischenprodukt für die Synthese hochwirksamer Pharmaca ist. Falls gewünscht, kann diese Hydolyse auch direkt in einem Arbeitsgang mit der Isolierung des Alkaloidgemisches aus dem Kulturfiltrat geschehen, z. B. auf folgende Weise: 16,7 g des nach obigem Verfahren erhaltenen Rohalkaloid#gemisches wurden in 50%igem Äthanol gelöst und die alkalische Lösung nach Zusatz von 75 g Bariumhydroxyd und 2 g Natriumdithionit 31/z Stunden am Rückfuß gekocht.The base mixture thus obtained was analyzed by paper chromatography as described above and showed the following composition: Lysergic acid amide. . . . . . . . . . . . . . . . . . 45% Isolysergic acid amide. . . . . . . . . . . . . . . . 42% Ergobasin ........................ 3% Ergobasinin. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3% Chanoclavine. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3% Elymoclavin. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21% Penniclavine ...................... 2% When carried out as a fermenter culture, 1451 culture filtrate is obtained after 12 days of culture. After alkalinization with 2N sodium hydroxide solution, this culture filtrate was extracted five times with 2001 ethyl acetate at pH 7.4 and three times with 2001 ethyl acetate at pH 10. The two ethyl acetate extracts were each concentrated to 101 and the alkoloids were removed from the concentrates with aqueous tartaric acid solution. The tartaric, aqueous extracts were extracted again after alkalization at pH 7.4 and at pH 10 with ethyl acetate, which, after washing neutral with a little water, was evaporated to dryness. The extract residue was analyzed by paper chromatography as described above and showed the following composition: Lysergic acid amide .................. 66% Isolysergic acid amide ................ 21% Ergobasin ........................ 4% Ergobasinin ...................... 2% Chanoclavine. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2% Elymoclavin. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2% Agroclavin ....................... 2% Penniclavine ...................... 1% Another advantage of the method according to the invention using the new strain of Claviceps paspali Stevens et Hall is that the mixture obtained is particularly rich in lysergic acid amide or isolysergic acid amide. In contrast to the natural parent comalkaloids, such as e.g. B. Ergobasin, hydrolyze much more easily to free lysergic acid, which is an important intermediate for the synthesis of highly effective pharmaceuticals. If desired, this hydrolysis can also be done directly in one operation with the isolation of the alkaloid mixture from the culture filtrate, e.g. B. in the following way: 16.7 g of the raw alkaloid # mixture obtained by the above process were dissolved in 50% ethanol and the alkaline solution, after adding 75 g of barium hydroxide and 2 g of sodium dithionite, was boiled on the backfoot for 31/2 hours.

Zum abgekühlten Reaktionsgemisch wurden 16 ml konzentriertes Ammoniak und 218 ml 2n-Schwefelsäure gegeben. Dann wurde vom Niederschlag abzentrifugiert. Der Rückstand wurde noch fünfmal mit je 200 ml warmem Methanol-Ammoniak (9: 1) aufgeschlämmt. Das Filtrat wurde mit den Methanol-Ammoniak-Waschlösungen vereinigt und im Vakuum eingeengt. Die mit Eisessig ausgefällte rohe Lysergsäure wurde aus einem Gemisch von 75 ml Methanol und 75 ml 2n-Natronlauge durch Zusatz von 33 ml Eisessig ausgefällt. Die Ausbeute an reiner Lysergsäure betrug 6,5 g.16 ml of concentrated ammonia and 218 ml of 2N sulfuric acid were added to the cooled reaction mixture. The precipitate was then centrifuged off. The residue was suspended five times with 200 ml of warm methanol-ammonia (9: 1) each time. The filtrate was combined with the methanol-ammonia wash solutions and concentrated in vacuo. The crude lysergic acid precipitated with glacial acetic acid was precipitated from a mixture of 75 ml of methanol and 75 ml of 2N sodium hydroxide solution by adding 33 ml of glacial acetic acid. The yield of pure lysergic acid was 6.5 g.

Durch Behandlung der Konidien des Pilzstammes NRRL 3027 mit Äthylenimin und ultraviolettem Licht auf an sich bekannte Weise, wobei die Überlebensrate 0,2 bis 2% beträgt, erhält man eine Mutante mit höherem Produktionsvermögen an Lysergsäure bzw. Isolysergsäureamiden. Proben dieser Mutante wurden beim United States Department of Agriculture (Northern Utilization Research and Development Division), Peoria, I11., deponiert und erhielten dort die Nummer NRRL 3166.By treating the conidia of the fungal strain NRRL 3027 with ethyleneimine and ultraviolet light in a manner known per se, the survival rate being 0.2 up to 2%, a mutant is obtained with a higher production capacity of lysergic acid or isolysergic acid amides. Samples of this mutant have been obtained from the United States Department of Agriculture (Northern Utilization Research and Development Division), Peoria, I11., Deposited and received the number NRRL 3166 there.

Claims

Claim: Process for the production of lysergic acid or isolysergic acid amides, in which one strain of Claviceps Paspali in a culture consisting of one Polyalcohol as a carbon source, the ammonium salt of an organic acid as Nitrogen source and mineral salts grow saprophytically, the culture medium filtered and the lysergic acid or isolysergic acid amide from the filtrate by extraction with With the help of a suitable organic solvent, characterized in that that the conidia-forming trunk grown on Claviceps paspalum dilatatum NRRL 3027 from Claviceps P.aspali Stevens et Hall or its conidia-forming and used to form mutants capable of lysergic acid or isolysergic acid amides. References considered: British Patent No. 883,329.