DE1169082B

DE1169082B - Process for the production of insulin crystals obtained from bovine pancreatic glands with a protracted effect

Info

Publication number: DE1169082B
Application number: DEN15176A
Authority: DE
Inventors: Jorgen Schlicht-Krull
Original assignee: Novo Terapeutisk Laboratorium AS
Current assignee: Novo Terapeutisk Laboratorium AS
Priority date: 1957-06-08
Filing date: 1958-06-06
Publication date: 1964-04-30

Description

Verfahren zur Herstellung von aus Rinderpankreasdrüsen gewonnenen Insulinkristallen mit protrahierter Wirkung Bekanntlich wird kristallines Insulin in der Weise hergestellt, daß man eine gepufferte wäßrige Insulinlösung, die eines oder mehrere der für die Kristallbindung des Insulins erforderlichen Metallionen, beispielsweise Zink, Kadmium, Kobalt, Nickel oder Kupfer, vorzugsweise aber Zink, enthält, auf einen pH-Wert von 5,5 bis 6,5 einstellt. Je nach den Kristallisationsbedingungen, dem verwendeten Pufferstoff und dem Kristallisations-PH werden Insulinkristalle mit einem variierenden Metallgehalt von etwa 0,1 bis auf etwa 0,3 Miniäquivalent Metall pro Gramm der getrockneten Kristalle (Wassergehalt 2 bis 8 %) erhalten.Process for the preparation of bovine pancreatic glands Insulin crystals with protracted action It is known that crystalline insulin is prepared in such a way that one has a buffered aqueous insulin solution, the one or several of the metal ions required for the crystal binding of insulin, for example zinc, cadmium, cobalt, nickel or copper, but preferably zinc, contains, adjusts to a pH value of 5.5 to 6.5. Depending on the crystallization conditions, the buffer substance used and the crystallization pH become insulin crystals with a metal content varying from about 0.1 to about 0.3 mini-equivalent Metal obtained per gram of the dried crystals (water content 2 to 8%).

Die Insulinkristallisation bildet bisweilen eine Stufe in der aseptischen Herstellung pharmazeutischer Insulinpräparate, indem keine Abtrennung der Kristalle von der Mutterlauge durchgeführt, die Kristallsuspension aber verdünnt wird, damit sich der gewünschte Insulingehalt des Endpräparates einstellt. In den meisten Fällen stellen die Insulinkristalle doch ein Zwischenprodukt im Herstellungsgang dar und werden deshalb abgetrennt und erforderlichenfalls gewaschen und getrocknet.Insulin crystallization sometimes forms a step in the aseptic process Manufacture of pharmaceutical insulin supplements by not removing the crystals carried out by the mother liquor, but the crystal suspension is diluted with it the desired insulin content of the final preparation adjusts itself. In most cases the insulin crystals represent an intermediate product in the manufacturing process and are therefore separated and, if necessary, washed and dried.

Während nach der Literatur (vgl. J. Pharmacol. Exp. Therap., 58, S.100 [1936]) in destilliertem Wasser suspendierte Insulinkristalle mit einem Zinkgehalt von 0,52% eine Insulinwirkung aufweisen, die sich im wesentlichen nicht von der kurzzeitigen Wirkung gelösten Insulins unterscheidet, wird eine erheblich protrahierte Insulinwirkung erhalten, wenn der erwähnten Insulinkristallsuspension ein wasserlösliches Zinksalz in solcher Menge zugesetzt wird, daß die suspendierten Insulinkristalle durch Aufnahme von Zink bei neutraler Reaktion der Suspension mehr als 1 % Zink enthalten (vgl. beispielsweise Science, Vol. 116, S. 394 bis 398 (1952]).While according to the literature (cf. J. Pharmacol. Exp. Therap., 58, p.100 [1936]) insulin crystals with a zinc content suspended in distilled water of 0.52% have an insulin effect which is essentially not different from the The short-term effect of dissolved insulin differs, it is considerably protracted Get insulin action when the mentioned insulin crystal suspension is a water-soluble one Zinc salt is added in such an amount that the suspended insulin crystals by uptake of zinc with a neutral reaction of the suspension more than 1% zinc (see, for example, Science, Vol. 116, pp. 394 to 398 (1952]).

Man ist bisher der Ansicht gewesen, daß eine klinisch brauchbare protrahierte Insulinwirkung nur dann erreicht werden könnte, wenn die suspendierten Insulinkristalle einen solchen erhöhten Zinkgehalt aufweisen.It has heretofore been believed that a clinically useful protracted one Insulin action could only be achieved if the insulin crystals were suspended have such an increased zinc content.

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von aus Rinderpankreasdrüsen gewonnenen Insulinkristallen mit protrahierter Wirkung, wodurch es nicht mehr erforderlich sein wird, um eine verlängerte Insulinwirkung zu erhalten, daß ein bestimmter Mindestgehalt an kristallisationsfördernden Metallen in dem wäßrigen Medium vorhanden ist, und daß das Medium eine derartige Zusammensetzung hat, daß die Kristalle bei neutraler Reaktion Metall aus dem Medium aufnehmen. Auch ist es nicht mehr notwendig, den Insulinkristallen von vornherein einen erhöhten Metallgehalt zu verleihen.The invention relates to a method for producing from Bovine pancreatic glands obtained insulin crystals with a protracted effect, whereby you will no longer be required to get a prolonged action of insulin that a certain minimum content of crystallization-promoting metals in the aqueous Medium is present and that the medium has a composition such that the crystals absorb metal from the medium in the event of a neutral reaction. It is too no longer necessary, the insulin crystals have an increased metal content from the outset to rent.

Das erfindungsgemäße Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß man die Kristalle einer Wärmebehandlung bei einer Temperatur von mehr als 20° C, vorzugsweise 40 bis 70° C, aussetzt, wobei die Dauer der Wärmebehandlung um so geringer sein kann, je höher die Temperatur ist, und der Wassergehalt der Kristalle während der Wärmebehandlung auf mindestens 811/o gehalten wird.The inventive method is characterized in that one the crystals of a heat treatment at a temperature of more than 20 ° C, preferably 40 to 70 ° C, the duration of the heat treatment being the shorter can, the higher the temperature and the water content of the crystals during the Heat treatment is kept to at least 811 / o.

Am zweckmäßigsten ist es nach der Erfindung von einer Insulinkristallsuspension auszugehen, in welchem Falle die Suspension einen pH-Wert kleiner als 7 besitzt. So hat sich bei Versuchen gezeigt, daß die protrahierte Wirkung der behandelten Kristalle um so nachhaltiger ist, je niedriger der pH-Wert des Mediums, mit dem sich die Kristalle im Gleichgewicht befinden oder befanden, innerhalb des Bereiches zwischen 5 und 7 liegt. Wenn der pH-Wert etwa der gleiche ist wie der des Blutes (7,4), dann ist die Wärmebehandlung praktisch wirkungslos. Ein bevorzugter pH-Bereich ist 5 bis 6.According to the invention, it is most expediently from an insulin crystal suspension assume, in which case the suspension has a pH value less than 7. Experiments have shown that the protracted effect of the treated Crystals, the more sustainable, the lower the pH of the medium with which the crystals are or were in equilibrium within the range is between 5 and 7. When the pH is about the same as that of the blood (7.4), then the heat treatment is practically ineffective. A preferred pH range is 5 to 6.

Die Insulinwirkung ist um so nachhaltiger, je höher die Temperatur und je länger die Zeit gewählt wird. So kann eine außergewöhnlich lange Insulinwirkeng erreicht werden, wenn die Kristalle etwa 3 Wochen bei 45° C oder 24 Stunden bei 70=' C gelagert werden. Temperaturen der Kristallsuspensionen von mehr als 70° C werden im allgemeinen nicht geeignet sein, da die Kristalle dann leicht aneinander haften. Bei Anwendung von Temperaturen unterhalb 40" C ist eine Lagerzeit erforderlich, die für eine praktische Herstellung nicht sehr zweckmäßig wäre. Durch Variierung der Temperatur und der Zeitdauer der Wärmebehandlung kann jeder gewünschte Grad der prolongierten Insulinwirkung leicht eingestellt werden. Durch Mischen von Suspensionen mit verschiedener Wirkungsdauer ist es möglich, eine unbegrenzte Anzahl verschiedener Wirkungskombinationen zu erzielen.The higher the temperature, the more sustained the insulin effect and the longer the time is chosen. So an exceptionally long insulin can work achieved if the crystals are stored for about 3 weeks at 45 ° C or 24 hours at 70 ° C will. Temperatures of the crystal suspensions of more than 70 ° C are generally not be suitable, as the crystals then easily adhere to one another. When applied from temperatures below 40 "C, a storage time is required that is practical Manufacturing would not be very useful. By varying the temperature and the Duration of heat treatment can be any desired degree of prolonged insulin action can be easily adjusted. By mixing suspensions with different durations of action it is possible to achieve an unlimited number of different combinations of effects.

Wie erwähnt, ist es zweckmäßig, die erfindungsgemäße Wärbehandlung der Kristalle durchzuführen, während die Kristalle suspendiert sind, z. B. wie man sie durch Kristallisation erhält. In diesem Zustand enthalten die Kristalle etwa 6011/o Trockensubstanz. Die Wirkung der Wärmebehandlung wird abgeschwächt, wenn der Wassergehalt der Kristalle verringert wird. Wenn der Wassergehalt der Kristalle während der Wärmebehandlung nur etwa 201/o beträgt, ist schätzungsweise die zweifache Zeit für die Behandlung der Kristalle erforderlich, um dieselbe prolongierte Wirkung zu erzielen, wie bei der Behandlung von nichtgetrockneten Kristallen, unter sonst gleichen Bedingungen. Gewöhnliches, kristallines Trockeninsulin, das etwa 2 bis 8 % Wasser enthält, wird durch die Wärmebehandlung praktisch nicht beeinflußt.As mentioned, it is expedient to carry out the heat treatment according to the invention of the crystals while the crystals are in suspension, e.g. B. how to it is obtained through crystallization. In this state the crystals contain about 6011 / o dry matter. The effect of the heat treatment is weakened when the water content of the crystals is reduced. When the water content of the crystals while the heat treatment is only about 201 / o, it is estimated to be twice that Time required for treating the crystals to have the same prolonged effect to achieve, as with the treatment of undried crystals, under otherwise same conditions. Ordinary, crystalline dry insulin that is about 2 to Contains 8% water, is practically not influenced by the heat treatment.

Zur Erläuterung der nach der Erfindung erzielbaren protrahierten Insulinwirkung wird auf die Blutzuckerkurven der Zeichnung verwiesen. Diese Kurven werden in der folgenden Weise erhalten: Es wird eine injizierbare wäßrige Suspension von Rinderinsulinkristallen hergestellt, welche 0,3" Zink pro Insulineinheit und 0,1 Mol Natriumacetat enthält und einen pH-Wert von 5,5 besitzt. Diese Suspension wird bei verschiedenen Temperaturen, und zwar 4, 25, 27 bzw. 45° C, 4 Wochen gelagert und ihre biologische Insulinwirkung dann in an sich bekannter Weise bei Kaninchen festgestellt. Wie ersichtlich, wird die Insulinwirkung um so mehr verlängert je höher die Aufbewahrungstemperatur gewesen ist, denn während beispielsweise die bei 4° C gelagerte Insulinkristallsuspension einen großen Teil ihrer Inselinaktivität entfaltet hat, hat die bei 45° C gelagerte Insulinkristallsuspension nur einen kleinen Teil ihrer Aktivität entfaltet, was bedeutet, daß sie viel länger als die bei 4° C gelagerte Insulinkristallsuspension wirken wird und somit mehr protrahiert ist. Falls man die gleiche Suspension mit einem pH-Wert von etwa 7 an Stelle von 5,5 denselben Versuchsbedingungen unterwirft, wird keine Änderung der Insulinwirkung erhalten. Auch eine Sehweineinsulinkristallsuspension gleicher Zusammensetzung mit einem p11-Wert von 5,5 verändert nicht ihre Insulinwirkung nach Lagerung bei 45° C in 4 Wochen.To explain the protracted insulin action that can be achieved according to the invention, reference is made to the blood sugar curves in the drawing. These curves are obtained in the following manner: An injectable aqueous suspension of bovine insulin crystals is prepared which contains 0.3 " zinc per unit of insulin and 0.1 mol of sodium acetate and has a pH of 5.5. This suspension is at various Temperatures, namely 4, 25, 27 or 45 ° C, stored for 4 weeks and their biological insulin action is then determined in a known manner in rabbits.As can be seen, the higher the storage temperature, the more prolonged the insulin action For example, while the insulin crystal suspension stored at 4 ° C has developed a large part of its islet inactivity, the insulin crystal suspension stored at 45 ° C has only developed a small part of its activity, which means that it will act much longer than the insulin crystal suspension stored at 4 ° C and thus more protracted. If one uses the same suspension with a pH of about 7 instead of Subjected 5.5 to the same experimental conditions, no change in insulin action is obtained. Even a white wine insulin crystal suspension of the same composition with a p11 value of 5.5 does not change its insulin action after storage at 45 ° C. in 4 weeks.

Als Suspensionsmedium für die Kristalle während der Durchführung der Wärmebehandlung kann beispielsweise die Mutterlauge von der Kristallisation verwendet werden. Es können auch andere Medien Verwendung finden, vorausgesetzt, daß unter Beachtung der allgemeinen Kenntnisse der Eigenschaften des Insulins darauf Wert gelegt wird, daß die Kristalle in dem Medium nicht in Lösung gehen. Das Medium darf außerdem keine Substanzen enthalten, welche die biologische Wirksamkeit des Insulins beeinträchtigen. Zur Einstellung des pH-Wertes eines wäßrigen Mediums ist es zweckmäßig, Puffersubstanzen zu verwenden, wofür Beispiele im folgenden angegeben werden. Zu erwähnten ist, daß Puffersubstanzen wie Zitrat, die bei einer Bindung an die Zinkionen die prolongierte Wirkung der kristallinen Insulin-Zink-Suspensionen hinfällig machen können, die Wirkung der Wärmebehandlung nicht beeinträchtigen. Das Medium kann auch mit Wasser mischbare Lösungsmittel, z. B. Azeton, enthalten. Diese Verhältnisse liegen beispielsweise dann vor, wenn es sich um eine Mutterlauge aus einer Kristallisation nach der Zitratmethode handelt. In der Praxis ist es am zweckmäßigsten, wenn das Medium, in dem die Wärmebehandlung stattfindet, eine derartige Zusammensetzung hat, daß sie für Injektionszwecke geeignet ist.As a suspension medium for the crystals during the implementation of the For example, heat treatment can use the mother liquor from crystallization will. Other media can also be used, provided that under Pay attention to the general knowledge of the properties of the insulin is placed so that the crystals do not go into solution in the medium. The medium is allowed to In addition, they do not contain any substances that would impair the biological effectiveness of insulin affect. To adjust the pH of an aqueous medium, it is advisable to To use buffer substances, examples of which are given below. to mentioned is that buffer substances such as citrate, which bind to the zinc ions make the prolonged effect of the crystalline insulin-zinc suspensions obsolete cannot affect the effect of the heat treatment. The medium can too water-miscible solvents, e.g. B. acetone included. These conditions are present, for example, when it is a mother liquor from a crystallization acts according to the citrate method. In practice it is most useful if that The medium in which the heat treatment takes place has such a composition, that it is suitable for injections.

In solchen Fällen ist es durch entsprechendes Verdünnen usw. und durch Einstellung des pH-Wertes auf 7 möglich, die Suspension in ein sofort verwendungsfähiges Insulinpräparat zu überführen, sofern unter sterilen Bedingungen gearbeitet wird.In such cases it is through appropriate dilution, etc. and through Adjustment of the pH value to 7 possible, the suspension in an immediately usable To transfer insulin preparation, provided that work is carried out under sterile conditions.

Das Verfahren nach der Erfindung hat demjenigen Verfahren gegenüber, bei welchen man eine Suspension von Insulinkristallen mit einem Zinkgehalt über 1 % bei neutraler Reaktion der Suspension herstellt, den Vorteil, daß man mit geringerem Zinkgehalt auskommen kann.The process according to the invention has the advantage over that process in which a suspension of insulin crystals with a zinc content of more than 1 % with a neutral reaction of the suspension is produced that a lower zinc content can be used.

Es erübrigt sich ein zusätzlicher Zinkzusatz. Man kann einfach das Rinderinsulin in bekannter Weise unter sterilen Bedingungen kristallisieren, der Kristallsuspension die erfindungsgemäße Wärmebehandlung unterwerfen und dann durch Verdünnung auf die therapeutisch brauchbare Insulinkonzentration und auf neutrale Reaktion einstellen. Auch kann man beliebige, gegebenenfalls zinkbindende Pufferstoffe, wie Phosphat- oder Zitratpuffer verwenden.There is no need to add additional zinc. You can just do that Crystallize bovine insulin in a known manner under sterile conditions, the Crystal suspension subject to the heat treatment according to the invention and then through Dilution to the therapeutically useful insulin concentration and to neutral Set reaction. Any, optionally zinc-binding buffer substances, use like phosphate or citrate buffer.

Schließlich besteht beim Verfahren nach der vorliegenden Erfindung die Möglichkeit, die Dauer der Insulinwirkung innerhalb weiter Grenzen zu variieren.Finally, there is the method according to the present invention the possibility of varying the duration of the insulin action within wide limits.

Die entsprechend der Erfindung hergestellten Insulinkristalle unterscheiden sich weder im Aussehen noch im Aminosäuregehalt von den nicht einer Wärmebehandlung unterworfenen Kristallen; jedoch besitzen sie eine etwas geringere Löslichkeit in einer mit HCl angesäuerten Natriumchloridlösung und in einem neutralen Phosphatpuffer. Die Kristallisationsfähigkeit des Insulins nimmt während der Wärmebehandlung ab, was leicht nachzuweisen ist, wenn die behandelten Kristalle umkristallisiert werden.The insulin crystals produced according to the invention differ neither in appearance nor in the amino acid content of the heat treatment subjected crystals; however, they have a somewhat lower solubility in a sodium chloride solution acidified with HCl and in a neutral phosphate buffer. The crystallization ability of the insulin decreases during the heat treatment, which is easy to detect when the treated crystals are recrystallized.

Bei der Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens können Insulinkristalle verwendet werden, die mittels eines beliebigen Kristallisationsverfahrens erhalten wurden. Besonders zweckmäßig ist das Kristallisationsverfahren nach der deutschen Patentschrift 962 637.When carrying out the method according to the invention, insulin crystals obtained by any crystallization method can be used became. The crystallization process according to the German is particularly useful Patent 962,637.

Das erfindungsgemäße Verfahren kann auch auf Insulinkristalle mit einem besonders hohen Metallgehalt (über 0,25 Miniäquivalent pro Gramm) angewandt werden, da dadurch die protrahierte Wirkung in wäßriger Suspension nachhaltiger wird, als dies ohne die erfindungsgemäße Wärmebehandlung der Fall ist.The method according to the invention can also be applied to insulin crystals a particularly high metal content (over 0.25 mini equivalent per gram) as this makes the protracted effect more sustained in aqueous suspension than is the case without the heat treatment according to the invention.

Die folgenden Beispiele dienen zur näheren Erläuterung der erfindungsgemäßen Verfahren. Beispiel 1 Es wird eine Insulinkristallsuspension folgender Zusammensetzung: 40 Einheiten pro Kubikzentimeter an Insulinkristallen aus Rinderpankreas, 1,4 mg Zinkionen pro 100 cm3 (als Chlorid), 0,01 Mol Natriumacetat, 0,71/0 NaCI, 0,1% Methyl-p-hydroxybenzoat, HCl bis pE, = 5,5, in der Weise hergestellt, daß 1 Volumen einer konzentrierten Kristallsuspension mit 9 Volumen einer 0,11%igen Methyl-p-hydroxybenzoatlösung verdünnt wird. Diese konzentrierte Kristallsuspension wird dadurch hergestellt, daß die nachstehenden Lösungen A und B miteinander vermischt und anschließend während der Kristallisation des Insulins in Bewegung gehalten wird.The following examples serve to explain the processes according to the invention in more detail. Example 1 There is an insulin crystal suspension of the following composition: 40 units per cubic centimeter of insulin crystals from bovine pancreas, 1.4 mg zinc ions per 100 cm3 (as chloride), 0.01 mol sodium acetate, 0.71 / 0 NaCl, 0.1% methyl p-hydroxybenzoate, HCl to pE, = 5.5, prepared in such a way that 1 volume of a concentrated crystal suspension is diluted with 9 volumes of a 0.11% strength methyl p-hydroxybenzoate solution. This concentrated crystal suspension is prepared by mixing the following solutions A and B with one another and then keeping them in motion during the crystallization of the insulin.

A. 3,48 g Rinderinsulinkristalle, die 0,78 % Zn enthalten, werden in 100 cm3 Wasser suspendiert und durch Zugabe von 4 cm3 1 n-HCl gelöst. Die Lösung wird steril gefiltert und bis auf 150 cm3 verdünnt.A. 3.48 g of beef insulin crystals containing 0.78% Zn will be suspended in 100 cm3 of water and dissolved by adding 4 cm3 of 1 n-HCl. The solution is filtered sterile and diluted to 150 cm3.

B. 1/5O Mol Natriumacetat und 14 g NaCl werden in Wasser bis auf 50 cm3 gelöst; es wird so viel NaOH zugesetzt, daß die Mischung von Lösung A mit Lösung B einen p11-Wert von 5,5 erhält.B. 1 / 5O mol of sodium acetate and 14 g of NaCl are in water up to 50 cm3 dissolved; so much NaOH is added that the mixture of solution A with solution B receives a p11 value of 5.5.

Die hergestellte Suspension wird 2 Wochen lang bei 45J C gelagert. Bei Injektion an Kanninchen zeigt sich eine protrahierte Wirkung, die derjenigen des Zink-Protamin-Insulins entspricht. Die Kristalle werden abgesaugt und getrocknet.The suspension produced is stored at 45 ° C. for 2 weeks. When injected into rabbits, the effect is protracted, that of the rabbit of zinc protamine insulin. The crystals are filtered off with suction and dried.

Beispiel 2 Es wird eine Mischung folgender Zusammensetzung hergestellt: 0,8% Rinderinsulin, 0,040% Zn+@ (als Chlorid), 0,05 Mol Natriumzitrat, 15'/o Azeton, CH1 bis pg = 6,0.Example 2 A mixture of the following composition is prepared: 0.8% bovine insulin, 0.040% Zn + @ (as chloride), 0.05 mol sodium citrate, 15% acetone, CH1 to pg = 6.0.

Die Kristallisation findet unter ständigem, mehrstündigem Umrühren statt, wonach das Azeton unter ständigem Weiterrühren über 24 Stunden bei 45° C abgedampft wird. Daraufhin wird die Suspension mit einer Lösung von Natriumehlorid und Methyl-phydroxybenzoat verdünnt, wodurch sie die folgende Zusammensetzung erhält: 40 Einheiten Insulinkristalle pro Kubikzentimeter, 97 ;, Zn++ pro Kubikzentimeter, 0,01 Mol Natriumzitrat, 0,7% NaCl, 0,1% Methyl-p-hydroxybenzoat. Danach wird der pI;-Wert mit 1 n-HCl auf 5,5 eingestellt. Nach einer Lagerung von 2 Wochen bei 45° C zeigt die Suspension eine protrahierte Insulinwirkung, welche die protrahierte Wirkung des bekannten Zink-Protamin-Insulins übersteigt. Die Kristalle werden dann abgetrennt.The crystallization takes place with constant stirring for several hours instead, after which the acetone with constant stirring for 24 hours at 45 ° C is evaporated. The suspension is then mixed with a solution of sodium chloride and methyl hydroxybenzoate diluted, giving it the following composition: 40 units of insulin crystals per cubic centimeter, 97;, Zn ++ per cubic centimeter, 0.01 mole sodium citrate, 0.7% NaCl, 0.1% methyl p-hydroxybenzoate. After that, the pI; value adjusted to 5.5 with 1N HCl. After storage for 2 weeks at 45 ° C shows the suspension a protracted insulin action, which the protracted Effect of the well-known zinc protamine insulin exceeds. The crystals will then severed.

Bei den vorgenannten Beispielen wurden Zink-Insulin-Kristalle verwendet. Das erfindungsgemäße Verfahren kann jedoch auch mit Insulinkristallen Anwendung finden, die andere Metalle wie Kobalt, Kadmium, Nickel oder Kupfer enthalten.Zinc insulin crystals were used in the above examples. However, the method according to the invention can also be used with insulin crystals that contain other metals such as cobalt, cadmium, nickel, or copper.

Statt die Insulinkristalle der Wärmebehandlung in der Suspension zu unterziehen, können auch die Kristalle selbst auf diese Weise behandelt werden, wobei jedoch darauf geachtet werden muß, daß die Kristalle während der Behandlung nicht austrocknen. Um dies zu vermeiden, können die abgetrennten Kristalle in einem Behälter, z. B. einem Exsikkator gelagert werden, in dem beispielsweise mittels einer wäßrigen Salzlösung ein derartiger Dampfdruck aufrecht erhalten bleibt, daß der Wassergehalt der Kristalle beispielsweise auf etwa 20 bis 40% konstant gehalten wird.Instead of the insulin crystals of the heat treatment in the suspension undergo, the crystals themselves can also be treated in this way, however, care must be taken to keep the crystals clean during treatment don't dry out. To avoid this, the separated crystals can be stored in one Container, e.g. B. be stored in a desiccator, for example by means of an aqueous salt solution such a vapor pressure is maintained that the water content of the crystals, for example, kept constant at about 20 to 40% will.

Beispiel 3 Die Kristalle der im Beispiel 1 erwähnten Suspension werden abgesaugt und auf einem tarierten Glasfilter gewogen.Example 3 The crystals of the suspension mentioned in Example 1 become aspirated and weighed on a tared glass filter.

Danach werden sie im Vakuum (1 bis 2 mm Hg) in einen Exsikkator gebracht, der eine 5 %ige Natriumchloridlösung enthält. Bei Raumtemperatur stellt sich nach 3 Tagen ein Gleichgewicht ein; der Trockenbehälter wird 3 Wochen lang auf einer Temperatur von 45° C gehalten. Dadurch wird der Gleichgewichtszustand nur wenig verändert, und es zeigt sich, daß die Kristalle etwa 20% Wasser enthalten. Die Kristalle werden derart suspendiert, daß die Suspension die gleiche Zusammensetzung hat wie die der im Beispiel 1 erwähnten Suspension. Sie zeigt eine protrahierte Wirkung.Then they are placed in a desiccator in a vacuum (1 to 2 mm Hg), which contains a 5% sodium chloride solution. At room temperature it reproduces 3 days a balance; the drying container is on one for 3 weeks Maintained temperature of 45 ° C. As a result, the state of equilibrium is only slightly reduced changes, and it is found that the crystals contain about 20% water. The crystals are suspended so that the suspension has the same composition as that of the suspension mentioned in Example 1. It shows a protracted effect.

Claims

Claims: 1. Process for the production of bovine pancreatic glands obtained insulin crystals with protracted effect, thus g e k e n n -z e i c h n e t that the crystals can be subjected to a heat treatment at a temperature of more than 20 ° C, preferably 40 to 70 ° C, exposed, the duration of the heat treatment the lower the higher the temperature and the water content of the crystals is kept to at least 8% during the heat treatment.

2. Procedure according to Claim 1, characterized in that an insulin crystal suspension is used goes out, which has a pH value less than 7, preferably 5 to 6, has.