DE1132558B - Process for the preparation of ribotides and deoxyribotides of 5-fluorouracil - Google Patents
Process for the preparation of ribotides and deoxyribotides of 5-fluorouracilInfo
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Description
Verfahren zur Herstellung von Ribotiden und Desoxyribotiden von 5-Fluoruracil Die Erfindung betrifft- ein Verfahren zur Herstellung von neuen Ribotiden und Desoxyribotiden von 5-Fluoruracil und deren Salzen mit pharmazeutisch verwendbaren Basen, insbesondere das 5-Fluoruridinphosphat und das 2'-Desoxy-5-fluoruridinphosphat, sowie Salze dieser Verbindungen. Der Ausdruck »Phosphat« ist bei der Beschreibung der vorliegenden- :Erfindung in weitem Sinne zu verstehen. Er soll einen Ester des Phosphors bezeichnpn, worin der Säureteil des Esters von einer Säure des Phosphors abgeleitet ist, welche nur Wasserstoff, Sauerstoff und Phosphor enthält und worin der Phosphor fünfwertig und über ein Sauerstoffatom mit einem Kohlenstoffatom verbunden ist.Process for the preparation of ribotides and deoxyribotides of 5-fluorouracil The invention relates to a process for the production of new ribotides and deoxyribotides of 5-fluorouracil and its salts with pharmaceutically acceptable bases, in particular the 5-fluorouridine phosphate and the 2'-deoxy-5-fluorouridine phosphate, and salts thereof Links. The term "phosphate" is used in the description of the present : To understand invention in a broad sense. It is said to denote an ester of phosphorus, wherein the acid portion of the ester is derived from an acid of phosphorus, which contains only hydrogen, oxygen and phosphorus and in which the phosphorus is pentavalent and is connected to a carbon atom via an oxygen atom.
Das erfindungsgemäße Verfahren besteht darin, daß man ein 5-Fluoruracü-N-ribosid bzw. -N-desoxyribösid; z. B. 5-Fluoruridin =oder 2'-Desoxy-5-fluoruridin.unter Ausschluß von Wasser mit Phosphorsäuremonochlorid oder Phosphorsäuredichlorid oder.einer Mischung dieser beiden Stöffe in Gegenwart' 'einer tertiären organischen Base, -z. $. Pyridin, Chinolin, bei Zimmertemperatur oder leicht erhöhter Temperatur umsetzt und die gewünschten Nucleotide chromatographisch abtrennt. Die Reaktionsdauer hängt im allgemeinen vom Verhältnis des verwendeten °Monozum.Dichlorid der Phosphorsäure ab. Bei Verwendung von im wesentlichen reinen PhosphorsäuredichIorid ist die kürzeste Reaktionsdauer :erforderlich. Die .längste Reaktionsdauer ist notwendig, wenn man im wesentlichen reines Phosphorsäuremonochlorid verwendet. Eine mittlere Reaktionsdauer ist dann nötig, wenn -man ein Gemisch dieser beiden Stoffe. anwendet. '.The inventive method consists in that one 5-Fluoruracü-N-riboside or -N-deoxyriboside; z. B. 5-fluorouridine = or 2'-deoxy-5-fluorouridine, to the exclusion of water with phosphoric acid monochloride or phosphoric acid dichloride or a mixture of these two substances in the presence of a tertiary organic base, -z. $. Pyridine, Quinoline, at room temperature or at a slightly elevated temperature, and the desired Separating nucleotides by chromatography. The reaction time generally depends on The ratio of the ° Monozum.Dichlorid used to the phosphoric acid. Using of essentially pure phosphoric acid dichloride is the shortest reaction time :necessary. The longest reaction time is necessary if one essentially pure phosphoric acid monochloride is used. An average reaction time is then necessary if you use a mixture of these two substances. applies. '.
Als Beispiele für die gemäß dem erfindungsgemäßen Verfahren erhältlichen 5-Fluoruracilmononucleotide seien, die folgenden genannt: 2'-Desoxy-5-fluoruridin-5'-monophosphat, 2'-Desoxy-5-fluoruridin-3',5'-diphosphat, 5-Fluoruridin-5'-rnonophosphat, 5-Fluoruridin-5'-diphosphat, 5-Fluoruridin-5'-triphosphat.As examples of those obtainable by the process of the invention 5-fluorouracil mononucleotides are the following: 2'-deoxy-5-fluorouridine-5'-monophosphate, 2'-deoxy-5-fluorouridine-3 ', 5'-diphosphate, 5-fluorouridine-5'-monophosphate, 5-fluorouridine-5'-diphosphate, 5-fluorouridine-5'-triphosphate.
Die gemäß dem erfindungsgemäßen Verfahren -.er= hältlichen Nucleotide von 5-Fluoruracil können mit pharmazeutisch verwendbaren Basen, wie AlkalimetaIlhydroxyde, Egdalkalimetallhydroxyde, Ammoniak, nicht toxische organische Basen, z,- B. Diäthänolämin; Morpholin,. in ihre Salze übergeführt werden.The nucleotides obtainable according to the method according to the invention of 5-fluorouracil can be mixed with pharmaceutically acceptable bases, such as alkali metal hydroxides, Egdalkali metal hydroxides, ammonia, non-toxic organic bases, e.g. diethhenolamine; Morpholine ,. be converted into their salts.
Die neuen 5-Flüoruracilribotide und Desoxyribotide und ihre Salze sind germicid wirksam. Sie wirken z.$-: gegen grampositive Bakterien, wie Staphylococcus aureus. Sie lassen sich auch als Antimetaboliten- verwenden, z. B. zur Wachstumshemmung von Zellen, wie Lactobacillus leichmannii, wobei sie in den Nucleinsäuremetabolismus eingreifen.The new 5-fluorouracilribotide and deoxyribotide and their salts are germicidally effective. They work z. -: against gram-positive bacteria such as Staphylococcus aureus. They can also be used as antimetabolites, e.g. B. to inhibit growth of cells such as Lactobacillus leichmannii, taking them into nucleic acid metabolism intervention.
Verfahren zur Herstellung der als Ausgangsstof% verwendeten Riboside bzw. Desoxyriboside sind Gegenstand `der deutschen Patentschriften `@ 1083825 bzw. 1072249.. Die verfahrensgemäß benötigten Phos= pliörsäurechloride werden nach -dein folgenden Verfahren, für das ein Schutz nicht begehrt wird; hergestellt (1) Zu 10 ml - (etwa. 0,11 Mo» frisch destilliertem Phosphoroxychlorid werden .langsam unter Kühlung auf 25°C und gutem Rühren 20 ml (etwa 0,11 Mol) destilliertes Wasserzugesetzt. Man läßt die Mischung hierauf etwa 15 Stunden unter sorgfältigem Ausschluß von atmosphärischer Feuchtigkeit stehen: Das erhaltene Produkt besteht im wesentlichen aus Phosphorsäuredichlorid (I) der Formel (2) Zu 20 ml (etwa 0,22 Mol) frisch destilliertem Phosphoroxychlorid werden unter gutem Rühren 8,0 ml (etwa 0;44 Mol) destilliertes Wasser zugesetzt, wobei durch Kühlung eine Temperatur von 25°C aufrechterhalten wird. Die Mischung wird hierauf während 15 Stunden unter Ausschluß-von atmosphärischer Feuchtigkeit stehengelassen: Man erhält ein Produkt, dasimwesentlichen ausPhosphorsäuremonochlorid (II) der folgenden Formel besteht. (3) Zu 36,6 ml (0,4 Mol) technischem, nicht redestilliertem Phosphoroxychlorid werden langsam unter gutem Rühren und unter Kühlung auf etwa 25'C 7,2 ml (0,4 Mol) destilliertes Wasser zugesetzt. Die Mischung wird gerührt, bis die Chlorwasserstoffentwicklung im wesentlichen beendigt erscheint, und hierauf während etwa 15 Stunden stehengelassen. Man erhält ein Produkt (1I1), das im wesentlichen aus Phosphorsäuremonochlorid mit einer geringen Menge Phosphorsäuredichlorid besteht.Processes for the production of the ribosides or deoxyribosides used as starting materials are the subject of the German patents @ 1083825 and 1072249 .. The phosphoric acid chlorides required according to the process are made according to the following process, for which protection is not sought; (1) 20 ml (about 0.11 mol) of distilled water are slowly added to 10 ml (about 0.11 mol) of freshly distilled phosphorus oxychloride while cooling to 25 ° C and stirring well Stand for hours with careful exclusion of atmospheric moisture: The product obtained consists essentially of phosphoric acid dichloride (I) of the formula (2) 8.0 ml (about 0; 44 mol) of distilled water are added to 20 ml (about 0.22 mol) of freshly distilled phosphorus oxychloride with thorough stirring, a temperature of 25 ° C. being maintained by cooling. The mixture is then left to stand for 15 hours with the exclusion of atmospheric moisture: a product is obtained which essentially consists of phosphoric acid monochloride (II) of the following formula consists. (3) 7.2 ml (0.4 mol) of distilled water are slowly added to 36.6 ml (0.4 mol) of technical, non-redistilled phosphorus oxychloride with thorough stirring and while cooling to about 25 ° C. The mixture is stirred until the evolution of hydrogen chloride appears to have essentially ceased and then left to stand for about 15 hours. A product (11) is obtained which consists essentially of phosphoric acid monochloride with a small amount of phosphoric acid dichloride.
In jedem der folgenden Beispiele wird das Phosphorsäurechlorid unmittelbar nach dem vorstehend erwähnten Zeitraum von etwa 15 Stunden verwendet.In each of the following examples, the phosphoric acid chloride becomes immediate used after the aforementioned period of about 15 hours.
Die nachfolgenden Beispiele veranschaulichen das erfindungsgemäße Verfahren.The following examples illustrate the invention Procedure.
Beispiel 1 50 mg 5-Fluoruridin werden in 15 ml wasserfreiem Pyridin
gelöst. Die Lösung wird mit 0,3 ml Phosphorsäurechlorid (III) (nach vorstehendem
Verfahren 3 erhalten) vermischt, wobei eine leichte Temperaturerhöhung eintritt.
Die Mischung, wird während 18 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Während
dieser Zeit fällt etwas Pyridinsalz als gummiartiger weißer Feststoff aus. Man setzt
zur Reaktionsmischung 10 ml Wasser und erhitzt die erhaltene Lösung in einem warmen
Wasserbad während 20 Minuten auf 60°C. Die Lösung wird hierauf auf etwa 25°C abgekühlt
und durch Zusatz von verdünnter Natronlauge auf p$ 7,2 gebracht, worauf das Pyridin
durch Abdampfen im Vakuum bis auf ein geringes Volumen entfernt wird. Der pyridinfreie
Rückstand wird mit 100 ml Wasser verdünnt, der pH-Wert mit verdünnter Natronlauge
auf 9,0 gebracht und die Reaktionsprodukte an einer unter dem Handelsnamen »Dowex
1-X4« bekannten Anionenaustauschersäule(bestehendausquerverbundenen Copolymerenvon
Styrolmit 4 % pWinylbenzol; welches als funktionelle Gruppen quaternäre Ammoniumgruppen
enthält, 1 cm - 20 cm, Maschenabstand 0,075 bis 0,15 mm), welche vorgängig in die
Formiatform übergeführt wurde, adsorbiert. Die Säule wird hierauf entsprechend den
Angaben in Tabelle 1 behandelt. Die Durchflußgeschwindigkeit der Eluiermittel beträgt
1 ml je Minute, wobei einzelne Fraktionen von etwa 15 ml mit einer automatischen
Auffangvorrichtung gesammelt werden.
Die Fraktionen 296, 298 und 302, welche die Hauptfraktion von drei
verschiedenen 5-Fluoruridinphosphaten darstellen, werden vereinigt, mit Wasser auf
ein Volumen von 1000 ml verdünnt und neuerlich an einer i>Dowex 1-X4«-Anionenaustauschersäule
(1 cm - 20 cm, Maschenabstand 0,075 bis 0,15 mm), welche vorgängig in die Formiatform
übergeführt wird, adsorbiert. Nach
Adsorption des Materials wird
die Säule mit 100 ml Wasser gewaschen und hierauf entsprechend den Angaben in Tabelle
2 behandelt. Die Durchflußgeschwindigkeit der Eluiermittel beträgt 1 ml je Minute,
wobei einzelne Fraktionen von etwa 15 ml mittels einer automatischen Auffangvorrichtung
gesammelt werden.
Die Fraktionen 80 bis 86, welche das erste 5-Fluoruridinphosphat enthalten, werden vereinigt, und durch eine Säule eines mit »Dowex 50-X8« bezeichneten Kationenaustauscherharzes (bestehend aus querverbundenen Copolymeren von Styrol mit 8 % Divinylbenzol, enthaltend nucleare Sulfonsäuregruppen als funktionelle Gruppen, 2,5 cm - 35 cm, Maschenabstand 0,075 bis 0,15 mm), welches vorgängig in die Säureform umgewandelt wurde, fließen gelassen. Die von Kationen freien Nucleotide werden quantitativ im wäßrigen Ausflußgut erhalten, aus welchem man die Ameisensäure durch Verdampfung entfernt. Der Rückstand wird mit Wasser verdünnt und die erhaltene wäßrige Lösung mit verdünnter Natronlauge auf p$ 6,0 eingestellt. Die Lösung wird hierauf im Vakuum zur Trockne eingedampft, der Rückstand in Äthanol aufgenommen und die Lösung abermals zur Trockne eingedampft. Die Verdampfung mit Äthanol wird einige Male wiederholt, um das Wasser zu entfernen. Der Rückstand wird schließlich in Äther aufgenommen, das unlösliche Produkt durch Zentrifugieren und Dekantieren gewaschen und getrocknet. Man erhält das Natriumsalz eines 5-Fluoruridinpolyphosphats mit den folgenden spektrophotometrischen Daten: pH = 1: Amax = 270 m#t; E270/mg = 5,45; -'280/E280 = e816.The fractions 80 to 86, which contain the first 5-fluorouridine phosphate, are combined and passed through a column of a cation exchange resin called "Dowex 50-X8" (consisting of cross-linked copolymers of styrene with 8% divinylbenzene, containing nuclear sulfonic acid groups as functional groups, 2.5 cm - 35 cm, mesh spacing 0.075 to 0.15 mm), which was previously converted into the acid form, allowed to flow. The cation-free nucleotides are obtained quantitatively in the aqueous effluent from which the formic acid is removed by evaporation. The residue is diluted with water and the aqueous solution obtained is adjusted to pH 6.0 with dilute sodium hydroxide solution. The solution is then evaporated to dryness in vacuo, the residue is taken up in ethanol and the solution is again evaporated to dryness. Evaporation with ethanol is repeated a few times to remove the water. The residue is finally taken up in ether, the insoluble product washed by centrifugation and decanting and dried. The sodium salt of a 5-fluorouridine polyphosphate is obtained with the following spectrophotometric data: pH = 1: Amax = 270 m # t; E270 / mg = 5.45; -'280 / E280 = e816.
pg = 4,5: @max = 268 m#t; E2.8/mg = 5,87; -'280/E280 - 0,740.pg = 4.5: @max = 268 m # t; E2.8 / mg = 5.87; -'280 / E280 - 0.740.
p$ = 8,5: im.., = 268 m#t; E26$/mg = 4,78; 8280/E280 = e829. Dieses Salz enthält 1,5 [,Mol organisch gebundenen Phosphor je Milligramm Substanz.p $ = 8.5: im .., = 268 m # t; E26 $ / mg = 4.78; 8280 / E280 = e829. This salt contains 1.5 mol of organically bound phosphorus per milligram of substance.
In derselben Art, wie vorstehend für die Fraktionen 80 bis 86 angegeben, werden die Fraktionen 119 bis 122, welche das zweite 5-Fluoruridinphosphat enthalten, in die freie Säureform umgewandelt, indem man diese Fraktionen durch einen »Dowex 50-X8«-Kationenaustauscher fließen läßt; sodann wird die Säureform in die Natriumsalzform umgewandelt. Das zweite 5-Fluoruridinpolyphosphat-natriumsalz weist die folgenden spektrophotometrischen Daten auf p$ = 1: imax = 270 mtL; E2.o/mg = 6,68; - -'280/-'280 = 0,834.In the same manner as given above for fractions 80 to 86, fractions 119 to 122, which contain the second 5-fluorouridine phosphate, are converted to the free acid form by flowing these fractions through a "Dowex 50-X8" cation exchanger leaves; then the acid form is converted to the sodium salt form. The second 5-fluorouridine polyphosphate sodium salt has the following spectrophotometric data p $ = 1: imax = 270 ml; E2.o / mg = 6.68; - -'280 / - '280 = 0.834.
p$ = 4,5: @max = 268 m#t; E218/mg = 6,90; -'280/-'280 = e837.p $ = 4.5: @max = 268 m # t; E218 / mg = 6.90; -'280 / - '280 = e837.
PH = 8,5: Amax = 268 m£; E261/mg = 5,97; -'280/E280 - 0,872. Dieses Salz enthält 1,7 #LMol organisch gebundenen Phosphor je Milligramm Substanz.PH = 8.5: Amax = 268m £; E261 / mg = 5.97; -'280 / E280 - 0.872. This salt contains 1.7 mol of organically bound phosphorus per milligram of substance.
In derselben Art, wie vorstehend für die Fraktionen 80 bis 86 angegeben, werden die Fraktionen 129 bis 134, welche das dritte 5-Fluoruridinphosphat enthalten, in die freie Säureform übergeführt, indem man es durch einen »Dowex 50-X8«-Kationenaustauscher fließen läßt, und sodann in die Natriumsalzform überführt. Das dritte 5-Fluoruridinpolyphosphatnatriumsalz weist die folgenden spektrophotometrischen Daten auf PH = 1: Amax = 270 m#t; E2,o/mg = 5,05; 8280/8210 = e813.In the same way as indicated above for fractions 80 to 86, the fractions 129 to 134, which contain the third 5-fluorouridine phosphate, converted into the free acid form by passing it through a "Dowex 50-X8" cation exchanger allowed to flow, and then converted into the sodium salt form. The third 5-fluorouridine polyphosphate sodium salt exhibits the following spectrophotometric data: PH = 1: Amax = 270 m # t; E2, o / mg = 5.05; 8280/8210 = e813.
pg = 4,5: Am"." = 268 ml,t; E2"/mg= 5,17; 8280I8280 - 0,813. pg = 8,5: Amax = 268 m#t; E2"8/mg = 4,62; -'280/82B0 = e810. Dieses Salz enthält 1,7 #tMol organisch gebundenen Phosphor je Milligramm Substanz.pg = 4.5: On "." = 268 ml, t; E2 "/ mg = 5.17; 8280I8280-0.813 . Pg = 8.5: Amax = 268 m # t; E2" 8 / mg = 4.62; -'280 / 82B0 = e810. This salt contains 1.7 tmoles of organically bound phosphorus per milligram of substance.
Jedes der drei vorstehend beschriebenen 5-Fluoruridinpolyphosphate zeigt im Testversuch eine hohe Hemmaktivität auf das Wachstum von Lactobacillus leichmannii.Any of the three 5-fluorouridine polyphosphates described above shows a high inhibitory activity on the growth of Lactobacillus in the test leichmannii.
Beispiel 2 1,0 g 2'-Desoxy-5-fluoruridin wird in 300 ml trockenem
Pyridin gelöst. Zu der klaren Lösung werden
unter Rühren 6,0 ml
Phosphorsäurechlorid (III) zugesetzt, wobei eine leichte Temperaturerhöhung eintritt.
Die Mischung wird während einiger Stunden bei 25 bis 30°C gerührt, wobei etwas Pyridinsalz
als gummiartiger weißer Feststoff aus der Lösung ausfällt. Die Reaktionsmischung
wird hierauf mit 500 ml Wasser verdünnt, der pH-Wert mit verdünnter Natronlauge
auf 9,0 gebracht und die Lösung hierauf durch eine Säule von »Dowex 1-X4«-Anionenaustauscherharz
(3 cm - 60 cm, Maschenabstand 0,075 bis 0,15 mm) fließen gelassen, welches vorgängig
in die Formiatform übergeführt wurde. Die Säule wird mit Wasser gewaschen, bis sie
pyridinfrei ist, und hierauf, in der in Tabelle 3 angegebenen Weise behandelt.
Die Durchflußgeschwindigkeit der Eluiermittel beträgt 3 ml je Minnte, wobei einzelne
Fraktionen von etwa 15 ml mit Hilfe einer automatischen Auffangvorrichtung gesammelt
werden.
'73;5 mg dieses Rückstandes:werden in 50 ml.Wasser gelöst und in die
freie Säureform umgewandelt, indem man' die Lösung durch eine »13öwex 50-X8«-Kationenaüstauschersäule
(2,5 cm - 35 cm) in der im "Vorhergehenden Beispiel angegebenen Weise fließen -läßt.
Die freien Nucleotide werden quantitativ im wäßrigen Ausflußgut wiedergeWörinen-Dieses
wird 'gefriergetrocknet, der feste 'kiickstärld in: 15 ml Methanol gelöst, eine
geringe Menge umlösliches Material abfiltriert und das methanolische.Filtrat zur
Trockne eingedampft. Der 48,1 mg schwere feste Rückstand wird in 5-ml Methanol gelöst,
rvdräuf man 25 ml -Äther zusetzt. Der erhaltene weiße -Niederschlag wird mit Äther
durch Zentrifugieren und Dekantieren gewaschen und hierauf getrocknet. Man erhält
33,2 mg eines weißen Pulvers, welches-Im wesentlichen 2'-Deso XY'5 -fluoruridin-5'-monophosphat
enthält. Die: spektrophotometrischen Daten flir diese Verbindung sind die foleenden:
-
" - Beispiel 3 50 mg 2'-Desoxy-5-fluoruridin werden in 15 ml trockenem
Pyridin gelöst. Zu der klaren Lösung setzt man 0,3 ml Phosphorsäürechlorid (III).
Es tritt -eine leichte Temperaturerhöhung ein. Die Mischung wird während 18 Stunden
bei 25 bis 30°C gerührt, wobei etwas Pyridinsalz als gummiartiger weißer Feststoff
aus der Lösung ausfällt. Die Reaktionsmischung wird hierauf mit 10 ml Wasser verdünnt,
-im Wasserbad während 20 Minuten auf 80°C erhitzt, hierauf gekühlt
und
mit 50 ml Wasser verdünnt. Man stellt den pg-Wert der Lösung mit verdünnter Natronlauge
auf 7,2 ein und entfernt das Pyridin durch Vakuumdestillation. Die pyridinfreie
Lösung wird hierauf durch Zusatz von verdünnter Natronlauge auf pg 9,0 gebracht
und an einer »Dowex 1-X4«-Formiatkolonne (1 cm - 20 cm, Maschenabstand 0,075 bis
0,15 mm) adsorbiert. Die Kolonne wird mit 200 ml Wasser gewaschen und hierauf entsprechend
den Angaben in Tabelle 4 eluiert. Die Durchflußgeschwindigkeit der Eluiermittel
beträgt 1 ml je Minute, wobei einzelne Fraktionen von etwa 30 ml mit Hilfe einer
automatischen Auffangvorrichtung gesammelt werden.
Die Fraktionen 36 bis 54, welche Nucleotide enthalten, werden vereinigt
und mit 570 ml Wasser verdünnt an einer »Dowex 1-X4«-Formiatsäule (1 cm 20 cm, Maschenabstand
0,075 bis 0,15 mm) neuerlich adsorbiert und hierauf in der Tabelle 5 angegebenen
Weise behandelt. Die Durchflußgeschwindigkeit beträgt 1 ml je Minute, wobei Fraktionen
von etwa 15 ml mit Hilfe einer automatischen Auffangvorrichtung gesammelt werden.
Tabelle 5 (200 ml 0,05 n-Ameisensäure, mit Ammoniak auf pg 6,5 eingestellt, werden
durch die Kolonne laufengelassen, ohne einzelne Fraktionen zu sammeln. Das Ausflußgut
enthält kein organisches Material. Die Eluierung wird hierauf fortgesetzt, wobei
einzelne Fraktionen gesammelt werden.)
Das Ausflußgut wird auf etwa l0ml-im Vakuum eingedampft, um die größte Menge der Ameisensäure zu entfernen. Hierauf setzt man 25 ml Äthanol zu und dampft die Lösung im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird in 25 ml Äthanol aufgenommen und abermals zur Trockne eingedampft. Der feste Rückstand wird hierauf in 40 ml gelöst und der pH-Wert durch Zusatz von verdünnter Natronlauge auf 6,5 gebracht, wobei sich das Natriumsalz der Nucleotide bildet. Die Lösung wird abermals im Vakuum zur Trockne eingedampft, wobei ein fester Rückstand von 16,0 mg erhalten wird. 8 mg der Substanz werden abermals in 4,5 ml Wasser gelöst und zur Erhaltung eines gleichmäßigen Produktes gefriergetrocknet. Man erhält 7,2 mg des Natriumsalzes von 2'-Desoxy-5-fluoruridin-3',5'-diphosphat mit den folgenden spektrophotometrischen Daten: p$ = 1,0: Amax = 268 m,,, E2"/mg = 10,0; E280/E260 = @@g8. Es enthält 2,22 #tMol organisch gebundenen Phosphor je Milligramm. Dieses Nucleotid zeigt ebenfalls sehr ausgeprägte Aktivität in bezug auf die Wachstumshemmung von Lactobacillus leichmannii. Beispiel 4 Zu 0,5 ml trockenem Pyridin werden 10 mg 2'-Desoxy-5-fluoruridin unter völligem Ausschluß von atmosphärischer Feuchtigkeit zugesetzt. Man versetzt die klare Lösung unter Rühren mit 0,03 ml Phosphorsäuredichlorid (I). Es tritt eine- leichte Temperaturerhöhung ein, wobei man die Reaktionsmischung .durch Kühlung bei einer Temperatur von 25'C hält. Man läßt während 10 Minuten unter sorgfältigem Ausschluß atmosphärischer Feuchtigkeit reagieren, wobei eine geringe Menge Pyridinsalz als weißer gummiartiger Feststoff' ausfällt. Hierauf setzt man der Reaktionsmischung unter Kühlen 0,5 ml Wasser zu und erhält eine wasserklare Lösung. 0,01 ml dieser Reaktionslösung, welche 0,1 mg 2'-Desoxy-5-fluoruridin entspricht, wird durch Papierchromatographie (Whatman Nr. 1-Papier, System n-Butanol-Essigsäure-Wasser, Verhältnis 5:2:3) analysiert. Durch Vergleich mit einer authentischen Probe im selben Chromatographiesystem wird festgestellt, daß etwa 40 °/o der Gesamtmenge aus 2'-Desoxy-5-fluoruridin-5'-monophosphat bestehen. Es wird auch etwa 2'-Desoxy-5-fluoruridin-3',5'-diphosphat gebildet.The effluent is evaporated to about 10 ml in vacuo in order to remove most of the formic acid. 25 ml of ethanol are then added and the solution is evaporated to dryness in vacuo. The residue is taken up in 25 ml of ethanol and again evaporated to dryness. The solid residue is then dissolved in 40 ml and the pH is brought to 6.5 by adding dilute sodium hydroxide solution, the sodium salt of the nucleotides being formed. The solution is again evaporated to dryness in vacuo, a solid residue of 16.0 mg being obtained. 8 mg of the substance are again dissolved in 4.5 ml of water and freeze-dried to obtain a uniform product. 7.2 mg of the sodium salt of 2'-deoxy-5-fluorouridine-3 ', 5'-diphosphate are obtained with the following spectrophotometric data: p $ = 1.0: Amax = 268 m ,,, E2 "/ mg = 10.0; E280 / E260 = @@ g8. It contains 2.22 tmoles of organically bound phosphorus per milligram. This nucleotide also shows very pronounced activity in relation to the growth inhibition of Lactobacillus leichmannii. Example 4 To 0.5 ml of dry pyridine 10 mg of 2'-deoxy-5-fluorouridine are added with complete exclusion of atmospheric moisture. 0.03 ml of phosphoric acid dichloride (I) are added to the clear solution while stirring Cooling is maintained at a temperature of 25 ° C. The reaction mixture is allowed to react for 10 minutes with careful exclusion of atmospheric moisture, a small amount of pyridine salt precipitating as a white, gummy solid ne water-clear solution. 0.01 ml of this reaction solution, which corresponds to 0.1 mg of 2'-deoxy-5-fluorouridine, is analyzed by paper chromatography (Whatman No. 1 paper, n-butanol-acetic acid-water system, ratio 5: 2: 3) . By comparison with an authentic sample in the same chromatography system, it is found that about 40% of the total amount consists of 2'-deoxy-5-fluorouridine-5'-monophosphate. About 2'-deoxy-5-fluorouridine-3 ', 5'-diphosphate is also formed.
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE1269127B (en) * | 1964-02-24 | 1968-05-30 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Fermentative process for the production of 5-fluorouracil ribotide |
-
1959
- 1959-05-05 DE DEH40403A patent/DE1132558B/en active Pending
Non-Patent Citations (1)
Title |
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None * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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DE1269127B (en) * | 1964-02-24 | 1968-05-30 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Fermentative process for the production of 5-fluorouracil ribotide |
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