DE2144299C3 - S-Demethylbleomycin A deep 2 and method of making the compound - Google Patents
S-Demethylbleomycin A deep 2 and method of making the compoundInfo
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Description
•5• 5
Die Erfindung betrifft S-Demethylbleomycin A2 towie Verfahren zur Herstellung dieser Verbindung durch thermische Zersetzung von Bleomycin A2.The invention relates to S-2 towie Demethylbleomycin A process for the preparation of this compound by thermal decomposition of bleomycin A2.
Die Bleomycine, die krebshemmende Antibiotika find, werden durch Züchten von Bleomycin erzeugenden Stämmen von Actinomycetes Strentomyces verticillus in einem Nährmedium erhalten (vgl. japa- j, tiische Patentschrift 465 525).The bleomycins, which are anti-cancer antibiotics, are produced by growing bleomycin Strains of Actinomycetes Strentomyces verticillus obtained in a nutrient medium (cf. japa- j, Tiische Patent 465 525).
Durch Zugabe einer Aminoverbindung mit sowohl einer basischen und einer primären Aminogruppe ils Vorstufe, kann selektiv ein bekanntes oder neues Rleomvcin das die Aminoverbindung als Seitenkette enthält, erhalten werden (vgl. belgische PatentschriftBy adding an amino compound having both a basic and a primary amino group ils precursor, a known or new rleomvcin can selectively contain the amino compound as a side chain contains, can be obtained (see Belgian patent specification
7 Der Erfindung Hegt die Annahme zugrunde, daß ein Bleomycin mit einer 3-(Methylmercapto)-propy^ amino-Gruppe als Seitenkette eine brauchbare Substanz ist und es wurde in Übereinstimmung mit der belgischen Patentschrift versucht, uater Verwendung von 3-(Methylmercapto)-propyIamin als Vorstufe diese Verbindung durch Züchtung zu erhalten. Auf diesem Wege konnte jedoch nur eine kleine Menge des erwarteten Demethylbleomycin A2 hergestellt werden. 7 The invention is based on the assumption that a bleomycin with a 3- (methylmercapto) -propy ^ amino group as a side chain is a useful substance and attempts have been made, in accordance with the Belgian patent, to use 3- (methylmercapto) - propyIamin as a precursor to obtain this compound through cultivation. However, only a small amount of the expected demethylbleomycin A 2 could be produced in this way.
Es wird angenommen, daß dies auf die schlechte Assimilierbarkeit von 3 - (Methylmercapto) - propylamin in das Bleomycin A2-Molekül als Seitenkette während der Züchtung zurückzuführen ist, und zwar wegen der Abwesenheit einer basischen, von einer primären Aminogruppe verschiedenen Gruppe in dem 3-(Methylmercapto)-propyiamin.It is believed that this is due to the poor assimilability of 3 - (methylmercapto) - propylamine into the bleomycin A 2 molecule as a side chain during cultivation due to the absence of a basic group other than a primary amino group in the 3 - (Methylmercapto) propyiamine.
Im Verlaufe ausgedehnter Untersuchungen mit dem Ziel, S-Demethylbleomycin A2 herzustellen, wurde unerwarteterweise gefunden, daß Bleomycin A2, der Hauptbestandteil des kommerziell hergestellten Bleomycins, leicht durch thermische Zersetzung zum S-Demethylbleomycin A2 demethyliert werden kann.Produce in the course of extensive studies with the aim of S-Demethylbleomycin A 2, has unexpectedly been found that bleomycin A 2, the main component of the bleomycin commercially manufactured, can be easily demethylated by thermal decomposition of the S-Demethylbleomycin A2.
In der voi liegenden Erfindung kann Bleomycin A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) verwendet werden wie es in dem Kulturmedium gebildet wird und das die folgende Teilstruktur aufweist:In the present invention, bleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride) can be used as it is formed in the culture medium and which has the following partial structure:
NH — CH — CO — NH(CH2)2
CHOH
CH1 NH - CH - CO - NH (CH 2 ) 2
CHOH
CH 1
Es kann irgendein anderes Bleomycin A2 mit irgendeinem Anion verwendet werden, da der Anion-Typ von Bleomycin A2 im wesentlichen keinen Einfluß auf die Demethylierung hat.Any other bleomycin A 2 with any anion can be used since the anion type of bleomycin A 2 has essentially no effect on demethylation.
Es kann Bleomycin A2, das vom Kupfer durch Hydrogensulfid befreit wurde, als Ausgangsmaterial verwendet werden, wenngleich auch mit dem Nach-Bleomycin A 2 , which has been freed from copper by hydrogen sulfide, can be used as the starting material, even if with the after-
CO - NH — (CH2J3 —CO - NH - (CH 2 J 3 -
CH3 CH 3
CH3 CH 3
45 teil, daß bei der thermischen Zersetzung die Bildung von Nebenprodukten erhöht wird. 45 part that the formation of by-products is increased in the thermal decomposition.
Wie Mitarbeiter der Anmelderin nachträglich festgestellt haben (The Journal of Antibiotics, Bd. 25, 1972, S. 755 bis 758), weist Bleomycin A2 folgende Struktur auf:As employees of the applicant have subsequently determined (The Journal of Antibiotics, Vol. 25, 1972, pp. 755 to 758), bleomycin A 2 has the following structure:
O NHjO NHj
NNNN
< O OH H<O OH H
H2NH 2 N
HOHO
Y O Y O
NHN--NHN--
HCOC SHCOC S
H, H H,H, H H,
■■--Ν■■ --Ν
O" Nil.O "Nile.
R = —NH-(CH2)3—R = —NH- (CH 2 ) 3 -
Die Herstellung von S-Demethylbleomycin A2 durch Demethylierung von Bleomycin A2 gemäß der vorliegenden Erfindung kann in einfacher Weise durch Erhitzen von Bleomycin A2 bei etwa 80 bis 1200C unter gewöhnlichem Druck während 3 bis 48 Stunden durchgeführt werden. Die Zersetzung bei einer unnötig hohen Temperatur ist wegen der Verringerung der Ausbeute infolge von Nebenreaktionen nicht <!orteilhaft. Das Erhitzen kann in Gegenwart von Nicht-Lösungsmiiteln für Bleomycin A2, so wie z. B. von Toluol, Xylol, Benzol, Tetralin, Cyclohexan, Äthylacetat, Butylacetat,durchgeführt werden, wohingegen es vorgezogen wird, die Verwendung von Lösungsmitteln für Bleomycin A2, wie Wasser oder Methanol,zu vermeiden, da die Demethylierung vor. Bleomycin A2 in Anwesenheit derartiger Lösungsmittel stark unterdrückt wird. Die Demethylierung von Bleomycin A2 kann auch unter erhöhtem oder reduziertem Druck durchgeführt werden. Für die Verringerung einer eventuellen Oxydation, die durch atmosphärischen Sauerstoff induziert wird, ist die Durchführung der thermischen Zersetzung unter reduziertem Druck besonders vorteilhaft. Die thermische Zersetzung kann unter reduziertem Druck durch Erhitzen auf 80 bis 1200C bei einem Druck von 200 mm Hg, insbesondere von weniger als 50 mm Hg, während 3 bis 48 Stunden durchgeführt werden. Die im Anschluß an die Zersetzung durchgeführte Nachbehandlung kann in der gleichen Weise wie im Falle der Zersetzung unter gewöhnlichem Druck ausgeführt werden.The production of S-demethylbleomycin A 2 by demethylation of bleomycin A 2 according to the present invention can be carried out in a simple manner by heating bleomycin A 2 at about 80 to 120 ° C. under normal pressure for 3 to 48 hours. The decomposition at an unnecessarily high temperature is not advantageous because of the lowering of the yield due to side reactions. The heating can be carried out in the presence of non-solvents for bleomycin A 2 such as e.g. B. of toluene, xylene, benzene, tetralin, cyclohexane, ethyl acetate, butyl acetate, while it is preferred to avoid the use of solvents for bleomycin A 2 , such as water or methanol, since demethylation occurs. Bleomycin A 2 is strongly suppressed in the presence of such solvents. The demethylation of bleomycin A 2 can also be carried out under increased or reduced pressure. To reduce any oxidation induced by atmospheric oxygen, it is particularly advantageous to carry out the thermal decomposition under reduced pressure. The thermal decomposition can be carried out under reduced pressure by heating to 80 to 120 ° C. at a pressure of 200 mm Hg, in particular less than 50 mm Hg, for 3 to 48 hours. The post-treatment carried out after the decomposition can be carried out in the same manner as in the case of the decomposition under ordinary pressure.
Die Zersetzungsprodukte aus der Demethylierungs-Zersetzung enthalten neben S-Demethylbleomycin A2 unzersetztes Ausgangsmaterial, d. h. Bleomycin A2. Um eine derartige Mischung in die einzelnen Komponenten aufzutrennen, wird die Mischung in einer wässerigen Lösung von Ammoniumchlorid gelöst undIn addition to S-demethylbleomycin A 2, the decomposition products from the demethylation decomposition contain undecomposed starting material, ie bleomycin A 2 . In order to separate such a mixture into the individual components, the mixture is dissolved in an aqueous solution of ammonium chloride and
-NH-CH-CO —NH-(CH-Λ,—I-NH-CH-CO -NH- (CH-Λ, -I
i *" X i * " X
CHOHCHOH
CH,CH,
Diese Verbindung zeigt die folgenden Eigenschaften.This connection shows the following characteristics.
S-Demethylbleomycin A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) ist ein blaues Pulver, das sich langsam bei 201 bis 212' C zersetzt. Während es in Wasser und Methanol löslich ist, ist es in Äthanol, Propanol, Butanol, Äthylacetat, Äther, Aceton, Pctroläther, Benzol und Toluol unlöslich.S-Demethylbleomycin A 2 (copper containing hydrochloride) is a blue powder that slowly decomposes at 201 to 212 ° C. While it is soluble in water and methanol, it is insoluble in ethanol, propanol, butanol, ethyl acetate, ether, acetone, pctrolether, benzene and toluene.
Elcmentaranalyse: C 41,23%; H 5,78%; N 15,40%; O22,54%; S 7,47%; Cl 2,35%; Cu 4,52%. Ultraviolett-Absorptionsmaxima bei 292 πΐμ (E 1%, 1 cm = 134) und 244 τημ (E 1%, 1 cm = 167), ähnlich wie Bleomycin A2 (vgl. F i g. 1 der anliegenden Zeichnungen). Das an einem Kaliumbromid-Preßling gemessene Infrarot-Absorptionsspektrum weist wie aus Fig. 2 der anliegenden Zeichnung zu ersehen ist, Absorptionsmaxima bei 3600 3100 (3300), 2930. 1720. 1670 1640 (1655), 1585, 1550, 1520, 1458, 1370. 1320. 1245, 1130, 1090, 1050, 1010, 810 und 775 (cm"1) auf und stimmt damit mit dem von Bleomycin A2 übercin.Elemental Analysis: C 41.23%; H 5.78%; N 15.40%; O22.54%; S 7.47%; Cl 2.35%; Cu 4.52%. Ultraviolet absorption maxima at 292 πΐμ (E 1%, 1 cm = 134) and 244 τημ (E 1%, 1 cm = 167), similar to bleomycin A 2 (see Fig. 1 of the accompanying drawings). As can be seen from FIG. 2 of the accompanying drawing, the infrared absorption spectrum measured on a potassium bromide compact has absorption maxima at 3600, 3100 (3300), 2930, 1720, 1670, 1640 (1655), 1585, 1550, 1520, 1458, 1370 . 1320, 1245, 1130, 1090, 1050, 1010, 810 and 775 (cm " 1 ) and thus agrees with that of bleomycin A 2 .
Die R1 -Werte auf den Chromatogrammcn sind in die Lösung dann durch eine mit Dextran (ein trockenes, unlösliches Pulver, zusammengesetzt aus mikroskopischen Perlen, die synthetische, organische Verbindungen aus dem Polysacchand Dextran sind) beschickte Kolonne geführt, die mit einer wässerigen Lösung von Ammoniumchlorid behandelt worden war. Sobald die Mischung einmal auf dem Adsorber adsorbiert ist, wird sie mit einer wässerigen Lösung von Ammoniumchlorid eluiert, und man erhält eine blaue Lösung des angestrebten S-Demethylbleomycin A2 als erste Fraktion. Bei weiterer Elution mit einer wässerigen Ammoniumchlorid-Lösung werden die Eluate farblos und anschließend wieder blau. Das blaue Eluat, welches unzersetztes Bleomycin A2 enthält, wird gesammelt. Die gesammelten Lösungen von S-Demethylbleomycin A2 und Bleomycin A2 werden in an sich bekannter Weise behandelt. Beispielsweise wird die Lösung durch eine mit einer in der Chromatographie üblichen Aktivkohle beschickte Säule geführt, um S-Demethylbleomycin A2 oder Bleomycin A2 zu adsorbieren. Anschließend wird die Säule mit Wasser zur Entfernung von anorganischen Salzen gewaschen, und anschließend wird eine Mischlösung, enthaltend verdünnte Chlorwasserstoffsäure und Aceton, durch die Säule geleitet, um eine S-Demethylbleomycin A2 enthaltende Lösung und eine Bleomycin A2 enthaltende Lösung zu erzielen. Die gesammelte Lösung wird mit einem basischen Anionen-Austauscherharz gemischt und der pH-Wert auf 6,0 eingestellt. Bei der Entfernung des Lösungsmittels durch Destillation kann sowohl das abgestrebte S-Demethylbleomycin A2 und das nicht zersetzte Bleomycin A2 als blaues Pulver erhalten werden.The R 1 values on the chromatograms are then fed into the solution through a column charged with dextran (a dry, insoluble powder composed of microscopic beads which are synthetic, organic compounds from the polysacchand dextran) which is fed with an aqueous solution of Ammonium chloride had been treated. As soon as the mixture is adsorbed once on the adsorber, it is eluted with an aqueous solution of ammonium chloride, and a blue solution of the desired S-demethylbleomycin A 2 is obtained as the first fraction. On further elution with an aqueous ammonium chloride solution, the eluates become colorless and then blue again. The blue eluate, which contains undecomposed bleomycin A 2 , is collected. The collected solutions of S-demethylbleomycin A 2 and bleomycin A 2 are treated in a manner known per se. For example, the solution is passed through a column charged with an activated carbon customary in chromatography in order to adsorb S-demethylbleomycin A 2 or bleomycin A 2. Thereafter, the column is washed with water to remove inorganic salts, and then a mixed solution containing dilute hydrochloric acid and acetone is passed through the column to obtain a solution containing S-demethylbleomycin A 2 and a solution containing bleomycin A 2 . The collected solution is mixed with a basic anion exchange resin and the pH is adjusted to 6.0. Upon removal of the solvent by distillation, both the S-abgestrebte Demethylbleomycin A 2 and the non-decomposed can bleomycin A 2 are obtained as a blue powder.
Das gemäß der vorliegenden Erfindung erhaltene S-Demethylbleomycin A2 hat die folgende Teilstruktur (U): The S-demethylbleomycin A 2 obtained according to the present invention has the following partial structure (U):
CO-NH- (CH2)3 — S — CH3 CO-NH- (CH 2 ) 3 - S - CH 3
der nachstehenden Tabelle 1 zusammengestellt um unterscheiden sich eindeutig von denjenigen de: Bleomycins A2.the following table 1 compiled to differ clearly from those de: Bleomycins A 2 .
Entwickelndes
LösungssystemDeveloping
Solution system
S-Demethylbleomycin A2 S-demethylbleomycin A 2
Bleomycin A2 . .Bleomycin A 2 . .
0,71 0.850.71 0.85
" = Kieselsäuregel."= Silica gel.
Methanol: 10% Ammoniumacctai = 1:1.Methanol: 10% ammonium acetate = 1: 1.
b = Kieselsäuregel.b = silica gel.
Methanol: 10% Ammoniumacctai zu 10% wällriges Amm niak = 10:9:1.Methanol: 10% ammonium acetate to 10% aqueous ammonia niak = 10: 9: 1.
c = Filtrierpapier; aufsteigendes Verfahren. 10% Ammoniumchlorid.c = filter paper; ascending procedure. 10% ammonium chloride.
S-Demethylbleomycin A2 reagiert mit Pauly-. Eh lieh-, Dragcndorff- und Pcrmanganat-Reagcns in dS-demethylbleomycin A 2 reacts with Pauly-. Eh borrowed, Dragondorff and Pcrmanganate reagents in d
gleichen Weise wie die Blcomycine allgemein; ungleich anderen Bleomycinen reagiert S-Demethylblcomycin A2 positiv mit Chloroplatinsäure, die ein Reagens zur Identifizierung der Gruppe CH3—S— ist.same way as the blcomycins in general; Unlike other bleomycins, S-demethylblcomycin A 2 reacts positively with chloroplatinic acid, which is a reagent for identifying the group CH 3 —S—.
Um sicherzustellen, daß das gemäß der vorliegenden Erfindung erhaltene S-Demethylbleomycin A, eine Verbindung mit der oben angeführten Teilstruktur II ist, wurden die folgenden Versuche zur überprüfung durchgeführt.In order to ensure that the S-demethylbleomycin A obtained according to the present invention is a compound having the above-mentioned partial structure II, the following tests were carried out for verification.
Zunächst wurde S-Demelhylbleomycin A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) mit Schwefelwasserstoff vom Kupfer zur Herstellung von S-Dcmethylblcomycin A2 (kupferfreies Hydrochlorid) befreit, welches dann durch Erhitzen mit on-ChlorwasscrstoIlsäure in einem verschlossenen Rohr hydrolysiert wurde. Das Hydrolysat wurde einer Hochspannungspapier-Elektrophorcse unter Verwendung eines Systems, enthaltend Ameisensäure zu Essigsäure zu Wasser = 25:75:900 und anschließend einer zwcidimensionalen Papierchromalographie (n-Propanol zu Pyridin zu Essigsäure zu Wasser = 15:10:3:12) unterworfen, wobei man das gleiche Chromatogramm wie im Falle der Verwendung eines Hydrolysats von Bleomycin A2 erhielt, mit Ausnahme eines Farbfleckes von S-lMethylmcrcaptoJ-propylamin an Stelle von S-tS.S-Dimethylmercaptol-propylamin.First, S-demethylbleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride) was freed from the copper with hydrogen sulfide to produce S-demethylblcomycin A 2 (copper-free hydrochloride), which was then hydrolyzed by heating with hydrochloric acid in a sealed tube. The hydrolyzate was subjected to high voltage paper electrophoresis using a system containing formic acid to acetic acid to water = 25: 75: 900 and then a two-dimensional paper chromatography (n-propanol to pyridine to acetic acid to water = 15: 10: 3: 12), the same chromatogram was obtained as in the case of using a hydrolyzate of bleomycin A 2 , with the exception of a colored spot of S-1-methylmcrcaptoJ-propylamine instead of S-tS-S-dimethylmercaptol-propylamine.
Zweitens wurde S-Demethylbleomycin A2 in schwerem Wasser gelöst und die magnetische Kernresonanz
(100 MHz) unter Verwendung von Tetramethylsilan als Außenstandard gemessen. Hier wurde
ein Signal bei 8 = 2,6 ppm (Singulett) beobachtet, das das Vorhandensein der Gruppe CH,-S
bestätigte, während das Verschwinden des Signals bei 8 = 3.4 ppm der Gruppe CH,— S— CH, zuzuschreiben
ist, die in dem Ausgangsmatcrial. d. Iv. Bleomycin A2 vorhanden war. Es wurde ferner auch
kein Signal bei 8 = 3,2 ppm für die Gruppe CH,— S O und bei 8 — 3,62 ppm für die Gruppe
CH1SO2 beobachtet.Second, S-demethylbleomycin A 2 was dissolved in heavy water, and nuclear magnetic resonance (100 MHz) was measured using tetramethylsilane as an external standard. Here a signal was observed at 8 = 2.6 ppm (singlet), which indicates the presence of the group CH, -S
confirmed, while the disappearance of the signal at 8 = 3.4 ppm is attributable to the group CH, - S - CH, which in the starting material. d. Iv. Bleomycin A 2 was present. Furthermore, no signal was observed at 8 = 3.2 ppm for the group CH, - SO and at 8-3.62 ppm for the group CH 1 SO 2 .
Durch die vorstehenden Untersuchungen wurde bestätigt, daß das gemäß der vorliegenden Erfindung erhaltene S-Dcmethylbleomycin A2 ein Bleomycin ist, das die vorstehend erwähnte Teilstruktur aufweist.From the above investigations, it was confirmed that the S-dimethyl bleomycin A 2 obtained according to the present invention is a bleomycin having the above-mentioned partial structure.
ίο Das nach dem erfindungsgemäßcn Verfahren erhaltene S-Demethylbleomycin A2 zeigt eine extrem hohe antimikrobielle Aktivität gegen Mycobacterium smegmatis 607. d. h. 2458 meg Aktivität mg im Vergleich mit 10(X) meg Aktivität mg von Bleomycin A2. ίο The S-demethylbleomycin A 2 obtained by the process according to the invention shows an extremely high antimicrobial activity against Mycobacterium smegmatis 607, ie 2458 mg of activity compared to 10 (X) mg of activity of bleomycin A 2 .
Verbindungen, die in hohem Maße gegen Myeobacterium smegmatis 607 wirksam sind, besitzen im allgemeinen auch eine hohe anticanccrogenc Wirksamkeit. Compounds which are highly effective against Myeobacterium smegmatis 607 are possessed by im generally also a high anticanccrogenc effectiveness.
Die Überlegenheit des S-Demethylbleomyein A2 bei der Bekämpfung von Ehrlich-Ascitescarcinon bei Mäusen gehl aus folgendem Vcrgleichsvcrsuch hervor:The superiority of S-demethylbleomyein A 2 in the control of Ehrlich's ascites carcinone in mice can be seen from the following comparison:
Männliche Mäuse vom Stamm ICR JCL. dieMale mice from the ICR JCL strain. the
5 Wochen alt waren, wurden zu je fünf Mäusen per Gruppe mit Ehrlich-Ascitcscarcinon-Zellcn in Dosen von 2 Millionen Maus geimpft.5 weeks old, five mice per group were dosed with Ehrlich ascitic carcinone cells vaccinated by 2 million mice.
Die zu testenden Verbindungen A und B wurden in Mengen von 25 mg/kg bis zu 0,19 mg kg einmal täglich für 10 Tage inlrapcritoneal verabreicht. Die erste Verabreichung erfolgte 2 Stunden nach der Impfung. Bis zu 50 Tagen wurde täglich beobachtet, ob Tiere getötet waren; das Gewicht der Tiere wurde jeden fünften Tage bestimmt. Die dabei erhaltenen Resultate werden unter Angabe der Ubcrlcbensdaucr, in Tagen, in Tabelle 1 !"aufgeführt.Compounds A and B to be tested were used in amounts of 25 mg / kg up to 0.19 mg / kg once administered inlrapcritoneally daily for 10 days. the first administration was 2 hours after vaccination. Up to 50 days was observed daily whether animals were killed; the weight of the animals was determined every fifth day. The received The results are listed in Table 1, with details of the service life, in days.
VersuchsergebnisseTest results
Tabelle II Oberlebensdauer in TagenTable II Survival time in days
Getestete VerbindungTested connection
Das Kupferchelat von
S-Demethylbleomycin A2 The copper chelate of
S-demethylbleomycin A 2
Das Kupferchelat von
Bleomycin A2 The copper chelate of
Bleomycin A 2
Plnsiolng. SnI/-lösunu Plnsiolng. SnI / solution
18.1
13.518.1
13.5
Der therapeutische Index der Verbindungen A. B und C wurde ebenfalls bestimmt. Dabei wurden die Werte fur LD50 nach der Methode von Behrens K ä r b e r kalkuliert aus der Versuchsgruppe, an die hohe Dosen verabreicht wurden.The therapeutic index of compounds A. B and C was also determined. The values for LD 50 were calculated using the Behrens Kärber method from the test group to which high doses were administered.
Die Uberlebensrate, in Prozent von jeder Dosis, wird erhalten, indem die durchschnittliche Zahl von Tagen des Überlebens, der mit der mit physiologischer Kochsalzlösung behandelten Gruppe gleich 100% gesetzt wird.The survival rate, as a percentage of each dose, is obtained by taking the average number of Days of survival of the saline treated group equal to 100% is set.
Diejenigen Substanzen, bei denen die Tiere du. Kontrollgruppe mit 200% überlebt haben, werden für wirksam gehalten. Die Maximum-Dosis, bei welcher die Tiere die Kontrollgruppen um 100 bis 200" η überleben, wird F.D5n genannt.Those substances with which the animals and the control group survived with 200% are considered to be effective. The maximum dose at which the animals survive the control groups by 100 to 200 "η is called FD 5n .
Der therapeutische Index errechnet sich aus I.IX1, 1 D^,, Die I rgebnisse werden in Tabelle III iinneuchen.The therapeutic index is calculated from I.IX 1 , 1 D ^ ,, The results are shown in Table III.
Therapeutischer IndexTherapeutic index
Das Kupferchelat von
S-Demethylbleomycm A2 The copper chelate of
S-demethylbleomycm A 2
Das Kupferchelat vonThe copper chelate of
Bleomycin A2 Bleomycin A 2
Mitomycin CMitomycin C
Therap Index
LD,,,
ED,,,Therap Index
LD ,,,
ED ,,,
Deshalb ist S-Demethylbleomycin A2 cine als krebshemmendes Antibiotikum brauchbare Verbindung. Therefore, S-demethylbleomycin A 2 cine is a useful compound as an anti-cancer antibiotic.
Die Erfindung wird durch die nachstehenden Beispiele näher erläutert.The invention is illustrated by the following examples explained in more detail.
22 g eines Bleomycin A2-Pulvers (Kupfer enthallendes Hydrochlorid) wurden bei 100''C unter vermindertem Druck (15 mm Hg) 16 Stunden lang erhitzt »nd anschließend in 200 ml einer 0,0fimolaren, was •erigen Ammoniumchlorid-Lösung gelöst. Die erhallene Lösung wurde über eine mil 800 ml Dextran gefüllte Säule geführt, die mit dem gleichen Lösungsmittel wie oben vorbehandelt worden war, um die Bleomycin-Komponente zu adsorbieren. Anschließend wurden 690 ml einer 0,1 molaren, wässerigen Ammoniumchlorid-Lösung auf die Säule aufgegeben und ao 1780 ml der eluierten blauen Fraktion gesammelt. Die gesammelte eluierte Fraktion wurde dann auf eine mit 500 ml Aktivkohle, wie sie in der Chromatographie verwendet wird, gefüllte Säule aufgegeben, um das Demethylbleomycin A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) daran zu adsorbieren. Die Säule wurde mit Wasser zur Entfernung von anorganischen Salzen gewaschen. Anschließend wurde eine 0,02n-HCl-Aceton(l: 1)-Mischung auf die Säule aufgegeben, und es wurde eine blaue eluierte Lösung, die das S-Deme-Ihylbleomycin A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) enthielt, gesammelt. Ein basisches Ionenaustauscher-Harz (in der OH-Form) wurde zu der gesammelten Fraktion hinzugegeben und der pH-Wert auf 6,0 eingestellt.22 g of a bleomycin A 2 powder (hydrochloride containing copper) were heated at 100 ° C. under reduced pressure (15 mm Hg) for 16 hours and then dissolved in 200 ml of a 0.0 fimolar ammonium chloride solution. The resulting solution was passed through a column filled with 800 ml of dextran, which had been pretreated with the same solvent as above, in order to adsorb the bleomycin component. Then 690 ml of a 0.1 molar, aqueous ammonium chloride solution were applied to the column and ao 1780 ml of the eluted blue fraction were collected. The collected eluted fraction was then applied to a column filled with 500 ml of activated carbon as used in chromatography to adsorb demethylbleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride) thereon. The column was washed with water to remove inorganic salts. A 0.02N HCl-acetone (1: 1) mixture was then applied to the column and a blue eluted solution containing the S-deme-ethylbleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride) was collected. A basic ion exchange resin (in the OH form) was added to the collected fraction and the pH was adjusted to 6.0.
Nach Entfernen des Lösungsmittels durch Destillation und Trocknen wurden 8,91 g eines blauen Pulvers von S-Demethylbleomycin A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) erhalten, das sich allmählich bei 201 bis 212° C zersetzte.After removing the solvent by distillation and drying, 8.91 g of a blue powder of S-demethylbleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride), which gradually decomposed at 201 to 212 ° C., was obtained.
Nachdem das S-Demethylbleomycin A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) aus der Säule entfernt worden war, enthielt das Dextran noch unzersetztes Bleomycin A2. Deshalb wurde die Säule wiederum mit einer 0,1 molaren Ammoniumchlorid-Lösung eluiert, um die blaue Fraktion, welche das Bleomycin A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) enthielt, zu sammeln. Die gesammelte Fraktion wurde in der gleichen Weise wie im Falle des S-Demethylbleomycins A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) behandelt und 10,9 g Bleomycin A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) mit blauer Farbe zurückgewonnen.After the S-demethylbleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride) had been removed from the column, the dextran still contained undecomposed bleomycin A 2 . Therefore, the column was again eluted with a 0.1 molar ammonium chloride solution in order to collect the blue fraction containing the bleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride). The collected fraction was treated in the same manner as in the case of S-demethylbleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride), and 10.9 g of bleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride) of blue color was recovered.
B e i s ρ i e 1 2B e i s ρ i e 1 2
Zu 10 g eines Bleomycin A2-Pulvers (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) wurden 200 ml Toluol gegeben und die Mischung unter gewöhnlichem Druck und Rückfluß 6 Stunden lang zur Durchführung der Zersetzung erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde zur Abtrennung einer Mischung von S-Demethylbleomycin A2 und Bleomycin A2 filtriert. Nach Trocknen wurde die Mischung gemäß dem Verfahren von Beispiel 1 nachbehandelt, und man erhielt 4,1 g S-Demethylbleomycin A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) und 3,7 g unzersetztes Bleomycin A: (Kupfer enthallendes Hydrochlorid).To 10 g of bleomycin A 2 powder (copper-containing hydrochloride) was added 200 ml of toluene, and the mixture was heated under ordinary pressure and reflux for 6 hours to effect decomposition. The reaction mixture was filtered to separate a mixture of S-Demethylbleomycin A 2 and bleomycin A2. After drying, the mixture was aftertreated according to the method of Example 1, and 4.1 g of S-demethylbleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride) and 3.7 g of undecomposed bleomycin A : (copper-containing hydrochloride) were obtained.
250 mg von Bleomycin A2-Pulver (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) wurden in einem Behälter bei 1000C während 48 Stunden trockener Hitze ausgesetzt. Die erhaltenen Zersetzungsprodukte wurden nach dem Verfahren von Beispiel 1 behandelt, und man erhielt 172,5 mg S-Demethylbleomycin A2 (Kupfer enthallendes Hydrochlorid), das in 30 ml Methanol gelöst wurde. Nach Entfernen des Kupfers vermittels Durchleiten von Schwefelwasserstoff wurde die methanolische Lösung zur Trockene konzentriert, und man erhielt 153 mg weißes S-Demethylbleomycin A2 (kupferfreies Hydrochlorid), das sich allmählich bei einer Temperatur von 2000C zu zersetzen begann.250 mg of bleomycin A 2 powder (copper-containing hydrochloride) were suspended in a container at 100 0 C for 48 hours dry heat. The decomposition products obtained were treated according to the procedure of Example 1, and 172.5 mg of S-demethylbleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride) were obtained, which was dissolved in 30 ml of methanol. After removing the copper by passing through hydrogen sulfide, the methanolic solution was concentrated to dryness, and 153 mg of white S-demethylbleomycin A 2 (copper-free hydrochloride) which began to decompose gradually at a temperature of 200 ° C. were obtained.
Jeweils 25 mg Bleomycin A2-Pulver (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) wurden bei 100° C thermisch unter den in der nachstehenden Tabelle IV angegebenen Bedingungen zersetzt. Die Nachbehandlung der Zersetzungsprodukte wurde gemäß dem Verfahren von Beispiel 1 durchgeführt, wobei die ebenfalls in Tabelle IV angeführten Ergebnisse erhalten wurden.In each case 25 mg of bleomycin A 2 powder (copper-containing hydrochloride) were thermally decomposed at 100 ° C. under the conditions given in Table IV below. Post-treatment of the decomposition products was carried out according to the procedure of Example 1, the results also given in Table IV being obtained.
S-Dcmc-Educated
S-Dcmc-
gewon
nenesReturn
won
nenes
(Cu-cnl-mycin A,
(Cu-cnl-
(Cu-ent-mycin A 2
(Cu-ent-
Jeweils 2,0 mg Bleomycin A2-Pulver (Kupfer ent haltendes Hydrochlorid) wurde bei verschiedener Temperaturen unter einem vermindertem Druck voi 40 mm Hg 3 Stunden lang erhitzt, wie dies in Ta belle V angegeben ist. Die Nachbehandlung wurdi gemäß dem Verfahren von Beispiel 1 durchgeführ und die in der Tabelle V aufgeführten Ergebnissi erhalten.In each case 2.0 mg of bleomycin A 2 powder (hydrochloride containing copper) was heated at various temperatures under a reduced pressure of 40 mm Hg for 3 hours, as indicated in Table V. The aftertreatment was carried out according to the procedure of Example 1 and the results listed in Table V were obtained.
509 616/19509 616/19
Aus den in Tabelle V zusammengefaßten Versuchsergebnissen ist zu ersehen, daß die Ausbeute an S-Demethylbieomycin A2 bei einer Reaktionstemperatur von 60uC sehr gering ist, mit steigender Reaktionstemperatur zwischen 80 und 1200C zunächst stark und dann nur noch wenig weiter zunimmt und schließlich bei 1400C sogar wieder abzufallen beginnt, sowie daß beim überschreiten einer Reaktionstemperatur von etwa 1200C die Selektivität der Umsetzung deutlich abnimmt, wie ein Vergleich der Summen an gewonnenem S-Demethylbleomycin A2 und zurückgewonnenem Bleomycin A2 (vgl. insbesondere die Ergebnisse der bei 120 und 140° C durchgeführten Versuche) zeigt.From the results summarized in Table V test results it can be seen that the yield of S-Demethylbieomycin A 2 at a reaction temperature of 60 is very low and C, with increasing reaction temperature between 80 and 120 0 C, first strong and then only further increases little and finally, even begins to fall again at 140 0 C, and that when exceeding a reaction temperature of about 120 0 C, the selectivity of the reaction decreases markedly, as a comparison of the sums of recovered S-Demethylbleomycin a 2 and recovered bleomycin a 2 (see. in particular the Results of the tests carried out at 120 and 140 ° C) shows.
Jeweils 2.0 mg Bleomycin A2-Pulver (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) wurde einem Anionenaustausch unter Verwendung eines stark basischen Anionenaustauscher-Harzes unterworfen und getrocknet, wie dies in Tabelle Vl gezeigt wird. Nach thermischer Zersetzung des erhaltenen Bleomycin A2 bei 100 C unter einem verminderten Druck von 40 mm Hg während 3 Stunden wurden die Zersetzungsprodukte nach dem Verfahren des Beispiels 1Each 2.0 mg of bleomycin A 2 powder (copper-containing hydrochloride) was anion-exchanged using a strongly basic anion-exchange resin and dried, as shown in Table VI. After the resulting bleomycin A 2 was thermally decomposed at 100.degree. C. under a reduced pressure of 40 mm Hg for 3 hours, the decomposition products were obtained by following the procedure of Example 1
ίοίο
nachbehandelt, und man erhielt die in
gezeigten Ergebnisse.post-treated, and the in
results shown.
AnionAnion
erhe
H2NSOrH 2 NSOr
- NHSOt- NHSOt
CH3COO-CH 3 COO-
GebildetesEducated
S-Demethyl-S-demethyl
bleomycin A2 bleomycin A 2
(Cu-cnlhaltendl(Cu-cnlhaltendl
[mg) [mg)
0,82
0,88
0,44
0,380.82
0.88
0.44
0.38
0,24
1.380.24
1.38
Zurückgewonnenes Bleomycin A2 lCu-enlhaltend (mg]_Recovered bleomycin A 2 containing lCu-enl (mg) _
0,82
0,72
1,14
0,870.82
0.72
1.14
0.87
1,14
0,501.14
0.50
2,1 mg Bleomycin A2-Pulver (Kupfer enthaltende! Hydrochlorid) wurden in 0,3 ml o-Xylol suspendiert in einem verschlossenen Rohr bei 1000C währenc 3 Stunden thermisch zersetzt und anschließend einet Nachbehandlung gemäß dem Verfahren von Bei spiel 1 unterworfen, wobei man 0,85 mg S-Demethylbleomycin A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid und 0,87 mg unzersetztes Bleomycin A2 (Kupfer enthaltendes Hydrochlorid) erhielt.2.1 mg bleomycin A 2 powder (containing copper! Hydrochloride) were dissolved in 0.3 ml of o-xylene suspended in a sealed tube at 100 0 C währenc thermally decomposed 3 hours and then Ainet post-treatment according to the method of subject In Game 1 to obtain 0.85 mg of S-demethylbleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride and 0.87 mg of undecomposed bleomycin A 2 (copper-containing hydrochloride).
2,0 mg Bleomycin A2-Pulver (kupferfreies Hydrochlorid) wurden 3 Stunden lang einer thermischen Reaktion bei 100" C unter einem vermindertem Druck von 40 mm Hg unterworfen. Die Nachbehandlung wurde gemäß dem Verfahren von Beispiel 1 durchgeführt, und man erhielt 0,83 mg S-Demethylbleomycin A2 und 0,42 mg unzersetztes Bleomycin A2 (kupferfreies Hydrochlorid).2.0 mg of bleomycin A 2 powder (copper-free hydrochloride) was subjected to a thermal reaction at 100 "C for 3 hours under a reduced pressure of 40 mm Hg. The post-treatment was carried out according to the method of Example 1, and 0 was obtained. 83 mg S-demethylbleomycin A 2 and 0.42 mg undecomposed bleomycin A 2 (copper-free hydrochloride).
Hierzu 2 Blatt ZeichnungenFor this purpose 2 sheets of drawings
Claims (3)
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| DE19712144299 DE2144299C3 (en) | 1971-09-03 | 1971-09-03 | S-Demethylbleomycin A deep 2 and method of making the compound |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19712144299 DE2144299C3 (en) | 1971-09-03 | 1971-09-03 | S-Demethylbleomycin A deep 2 and method of making the compound |
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| DE2144299C3 true DE2144299C3 (en) | 1975-04-17 |
Family
ID=5818643
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19712144299 Expired DE2144299C3 (en) | 1971-09-03 | 1971-09-03 | S-Demethylbleomycin A deep 2 and method of making the compound |
Country Status (1)
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-
1971
- 1971-09-03 DE DE19712144299 patent/DE2144299C3/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2144299A1 (en) | 1973-03-15 |
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