DE1057733B

DE1057733B - Production of a concentrated vaccine against foot-and-mouth disease

Info

Publication number: DE1057733B
Application number: DEM36279A
Authority: DE
Inventors: Dr Janos Richter
Original assignee: IAMEDIMPEXIAGYOGYSZERKUELKERES
Current assignee: IAMEDIMPEXIAGYOGYSZERKUELKERES
Priority date: 1957-12-28
Filing date: 1957-12-28
Publication date: 1959-05-21

Description

Herstellung einer konzentrierten Vakzine gegen Maul- und Klauenseuche Vakzine gegen Maul- und Klauenseuche wird im allgemeinen derart hergestellt, daß die virushältige Substanz, welche entweder aus der Zunge des infizierten Rindes oder eines anderen infizierten Tieres stammt, mit einer großen, etwa 10fachen Wassermenge extrahiert wird; oder man verwendet hierzu das Filtrat einer Gewebekultur. Die Lösung wird, zwecks Entfernung der Bakterien, durch ein Seitz-Filter filtriert oder mit Desinfektionsmitteln, wie Phenol, Toluol, Anisol oder Chloroform, behandelt und dann z.B. mit einem gepufferten, sterilen Al(OH3)-Gel vermischt. Der im Gemisch enthaltene virulente Virus wird mittels Wärmebehandlung, Formaldehyd oder entsprechende Einstellung des PH abgeschwächt. Die erforderliche Dosis der derart hergestellten Vakzine beträgt im allgemeinen 30 ml pro Kuh.Production of a concentrated vaccine against foot and mouth disease Vaccine against foot and mouth disease is generally manufactured in such a way that the virus-containing substance, which either comes from the tongue of the infected cattle or from another infected animal, with a large amount of about 10 times the amount of water is extracted; or the filtrate from a tissue culture is used for this purpose. The solution is filtered through a Seitz filter or with to remove the bacteria Disinfectants such as phenol, toluene, anisole or chloroform, treated and then mixed e.g. with a buffered, sterile Al (OH3) gel. The one in the mix Contained virulent virus is obtained by means of heat treatment, formaldehyde or equivalent Adjustment of the pH weakened. The required dose of the so produced The vaccine is generally 30 ml per cow.

Eine Herabsetzung dieser Dosis erscheint aus mehreren Gründen vorteilhaft. Zu diesem Zwecke wurde ein Verfahren vorgeschlagen, gemäß welchem die virushältige Substanz mit einer wesentlich geringeren, z. B. mit der 7- bis 15fachen Wassermenge extrahiert wird. Die derart gewonnene konzentrierte Lösung kann jedoch auf dem Seitz-Filter lediglich mit hohen Verlusten an Virus keimfrei gemacht werden. Deshalb hat man das durch Extraktion hergestellte Gemisch mit einigen Prozenten Chloroform als bakterizides Mittel versetzt. Auf Einwirkung des Cbloroforms wird auch ein Teil der Proteine unlöslich und kann in Form eines Niederschlags durch Filtrieren oder Zentrifugieren getrennt werden. A reduction in this dose appears advantageous for several reasons. For this purpose, a method has been proposed according to which the virus-containing Substance with a much lower, z. B. with 7 to 15 times the amount of water is extracted. The concentrated solution obtained in this way can, however, be put on the Seitz filter can only be made germ-free with high losses of virus. That's why you have the mixture produced by extraction with a few percent chloroform as a bactericidal Means shifted. Under the influence of the chloroform, a part of the proteins also becomes insoluble and can take the form of a precipitate by filtration or centrifugation be separated.

Das Arbeiten mit Chloroform ist in diesem Stadium der Vakzineherstellung hinderlich. Working with chloroform is at this stage of vaccine production obstructive.

Es wurde festgestellt, daß der Virus der Maul- und Klauenseuche von den als wirksame Desinfektionsmittel bekannten quaternären Ammoniumverbindungen, die eine aliphatische Kohlenstoffkette von 8 bis 18 C enthalten, innerhalb breiter Konzentrationsgrenzen nicht angegriffen wird. Weiterhin wurde festgestellt, daß die Proteine aus ihren Lösungen, abhängig vom Pn des Mediums und der Konzentration der verwendeten, oben bezeichneten Lösung der quaternären Ammoniumverbindung, mit Hilfe derartiger Verbindungen, insbesondere mit Hexadecylpyridiniumbromid oder -chlorid, fraktioniert abgeschieden werden können. Diese Eigenschaften genannter Verbindungen werden gemäß Erfindung dazu verwendet, den konzentrierten wäßrigen Auszug des Virus der Maul- und Klauenseuche von den überflüssigen Ballastproteinen zu befreien und gleichzeitig die Bakterien abzutöten. The virus was found to be responsible for foot and mouth disease the quaternary ammonium compounds known as effective disinfectants, which contain an aliphatic carbon chain from 8 to 18 C, within broader Concentration limits is not attacked. It was also found that the proteins from their solutions, depending on the Pn of the medium and the concentration the above-mentioned solution of the quaternary ammonium compound used, with Using such compounds, especially with hexadecylpyridinium bromide or chloride, can be deposited fractionally. These properties are called compounds are used according to the invention, the concentrated aqueous extract of the virus to rid foot-and-mouth disease of the superfluous ballast proteins and kill the bacteria at the same time.

Man verfährt derart, daß das virushältige Ausgangsmaterial mit einer geringen Wassermenge, z. B. mit der 4- bis Sfachen Menge von sterilem Wasser, in Anteilen, extrahiert, der Auszug vom Rückstand getrennt und das Filtrat mit der etwa 350/oigen Lösung einer, eine aliphatische Kohlenstoffkette von 8 bis 18 C enthaltenden quaternären Ammoniumverbindung vermischt wird. Im allgemeinen genügt hierzu ein Zusatz von 0,2 bis 30/oo der quaternären Ammoniumverbindung, auf die angewendete Lösungsmittelmenge berechnet. Es bildet sich ein voluminöser Niederschlag, welcher die Ballastproteine und auch die abgetöteten Bakterien enthält. Das Gemisch wird vom Niederschlag getrennt und das Filtrat, in bekannter Weise, mit sterilisiertem Al (0 H8) -Gel vermischt und aufbewahrt. Die derart erhaltene Substanz ist bereits in Dosen von 1,5 bis 4 ml pro Rind wirksam. The procedure is that the virus-containing starting material with a small amount of water, e.g. B. with 4 to 5 times the amount of sterile water in Shares, extracted, the extract separated from the residue and the filtrate with about 350 / oigen Solution of a quaternary containing an aliphatic carbon chain from 8 to 18 C Ammonium compound is mixed. In general, an addition of 0.2 is sufficient for this up to 30 / oo of the quaternary ammonium compound, based on the amount of solvent used calculated. A voluminous precipitate forms, which contains the ballast proteins and also contains the killed bacteria. The mixture is separated from the precipitate and the filtrate, in a known manner, mixed with sterilized Al (0 H8) gel and kept. The substance obtained in this way is already in doses from 1.5 to 4 ml effective per cow.

Mit dem neuen Verfahren können Vakzine gegen verschiedene Typen der Maul- und Klauenseuche, auch Mischvakzinen in verschiedenen Konzentrationen bzw. Dosenstärken hergestellt werden. With the new method, vaccines against different types of Foot and mouth disease, also mixed vaccines in different concentrations or Can strengths are produced.

Beispiel 150 g eines Ausgangsmaterials, bestehend aus Rinderaphthen und Lymphe, enthaltend den Virus vom Typ C, wird zuerst auf dem Fleischwolf und dann mit Zugabe von 100ml Wasser in einem z.B. elektrisch betriebenen Zerkleinerungsapparat fein zerkleinert, wobei die Temperatur des Materials 280 C nicht übersteigen soll. Zu diesem Zwecke können sterile Eiswürfel mitzerkleinert werden. Man versetzt dann mit 400 ml sterilem Wasser und rührt 20 Minuten weiter. Hierauf wird das Gemisch zentrifugiert, die klare Lösung vom Rückstand getrennt, der Rückstand mit 100ml sterilem Kaltwasser verrührt und zentrifugiert. Die beiden Flüssigkeiten werden vereinigt und mit 2 ml einer 350/obigen alkoholischen Lösung von Hexadecylpyridiniumbromid, welche mit so viel Wasser verdünnt ist, daß das Volumen der vereinigten Flüssigkeiten 600 ml beträgt, versetzt. Die Lösung wird 1/2 Stunde bei Zimmertemperatur stehengelassen, wobei ein dichter Niederschlag entsteht, welcher die Ballastproteine und auch die abgetöteten Keime enthält. Example 150 g of a starting material consisting of bovine naphthene and lymph, containing the type C virus, is first on the meat grinder and then with the addition of 100ml water in an electrically operated shredder, for example finely chopped, the temperature of the material should not exceed 280 C. For this purpose, sterile ice cubes can also be crushed. You then move with 400 ml of sterile water and stir for 20 minutes. The mixture is then centrifuged, the clear solution separated from the residue, the residue with 100ml Stirred sterile cold water and centrifuged. The two liquids are combined and with 2 ml of a 350 / above alcoholic solution of hexadecylpyridinium bromide, which is diluted with so much water that the volume of the combined liquids 600 ml is added. The solution is left to stand for 1/2 hour at room temperature, whereby a dense precipitate arises, which contains the ballast proteins and also the contains killed germs.

Das Gemisch wird mittels der Zentrifuge getrennt und die Flüssigkeit zu 380ml sterilem Al(OH3)-Gel vom Pn = 7,8 und einem Al2 O8-Gehalt von 2,7 0/o zugesetzt, 15 Minuten weitergerührt und zur Abschwächung des Virus mit 20 ml einer 20/obigen Formaldehydlösung versetzt, worauf das Gemisch 24 Stunden bei etwa 260 C weitergerührt wird. Die fertige Vakzine wird bei t40 C aufbewahrt. The mixture is separated and the liquid is separated by means of the centrifuge added to 380ml sterile Al (OH3) gel with a Pn = 7.8 and an Al2 O8 content of 2.7%, Stirring for 15 minutes and to weaken the virus with 20 ml of a 20 / above Formaldehyde solution is added, whereupon the mixture is stirred for a further 24 hours at about 260.degree will. The finished vaccine is stored at t40 ° C.

Mit der derart erhaltenen Vakzine kann Rindvieh gegen Maul- und Klauenseucheninfektion des Typs C in einer Dosis von 1,5 ml pro Tier immunisiert werden. With the vaccine obtained in this way, cattle can protect against foot-and-mouth disease infection of type C be immunized at a dose of 1.5 ml per animal.

Nach der deutschen Patentschrift 945 948 ist es bereits bekannt, zur Herstellung einer Poliomyelitisvakzine als Konservierungsmittel Benzäthoniumchlorid zu verwenden. Diese Substanz wird einer von Balaststoffen bereits gereinigten Viruslösung zugesetzt. According to the German patent specification 945 948 it is already known for the production of a poliomyelitis vaccine as a preservative benzethonium chloride to use. This substance becomes a virus solution that has already been purified from fiber added.

Claims

PATENT CLAIM: Use of quaternary ammonium compounds, which contain an aliphatic carbon chain with 8 to 18 carbon atoms, for the same time Removing the proteins and killing the bacteria from foot and mouth disease containing concentrated suspensions.

Considered publications: German Patent Specifications No. 945 948, 967 241.