DE1040186B

DE1040186B - Process for the production of preparations of adrenocorticotropic hormones

Info

Publication number: DE1040186B
Application number: DEN8310A
Authority: DE
Inventors: Dr Jan Daniel Herman Homan; Dr Jacobus Petrus J Neutelings
Original assignee: Organon NV
Current assignee: Organon NV
Priority date: 1953-01-17
Filing date: 1954-01-16
Publication date: 1958-10-02

Description

Verfahren zur Herstellung von Präparaten adrenocorticotroper Hormone Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung adrenocorticotroper Hormone, die, der allgemeinen Übung entsprechend, im weiteren Verlaufe der Beschreibung mit der Abkürzung »ACTHcc bezeichnet werden.Process for the preparation of preparations of adrenocorticotropic hormones The invention relates to a method for producing adrenocorticotropic Hormones, which, according to general practice, will be used in the further course of the description with the abbreviation »ACTHcc.

Die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten neuen Präparate besitzen eine Wirksamkeit, die ein Mehrfaches derjenigen der bisher bekannten Präparate beträgt, und weisen außerdem eine länger anhaltende Aktivität auf, als sie dem normalen ACTH eigen ist.The new preparations produced by the process according to the invention have an effectiveness which is several times that of the previously known preparations and also have a longer lasting activity than normal ACTH is peculiar.

In den letzten Jahren hat man sich bemüht, Präparate dieses aus dem Hypophysenvorderlappen von Säugetieren dargestellten Hormons mit verlängerter Wirkungsdauer zu erzielen; derartige Präparate werden, wie allgemein bekannt ist, mit bevorzugter Wirkung angewendet in Fällen der Polyarthritis rheumatica, Asthma, gewisser Augenerkrankungen undbei ausgedehnten Verbrennungen.In recent years, efforts have been made to extract this from the Mammalian anterior pituitary lobes depicted hormone with extended duration of action to achieve; such preparations, as is well known, are more preferred Effect applied in cases of rheumatic polyarthritis, asthma, certain eye diseases and in the case of extensive burns.

Um Präparate zu erhalten, deren Resorption im Körper gehemmt ist, ist es bekannt, das Hormon mit einem oder mehreren Trägerstoffen, wie Aluminiumphosphat zu kombinieren, die gegebenenfalls mit Hilfsstoffen, wie beispielsweise Gelatine und Polyvinylpyrrolidon, kombiniert werden können (Univ. Michigan Med. Bull., 16, S. 152 [1950]). Bei diesen Präparaten ist der Trägerstoff meistens in kolloidaler oder suspendierter Form anwesend. Die Viskosität dieser Dispersionen ist oft so groß, daß man das Präparat erhitzen muß, bevor es injiziert werden kann. Einige dieser Präparate haben den Nachteil, daß sie nach der Injektion zu lokalen Reizungen Anlaß geben.To obtain preparations whose absorption in the body is inhibited, it is known to combine the hormone with one or more carriers, such as aluminum phosphate to combine, optionally with excipients, such as gelatin and polyvinylpyrrolidone, can be combined (Univ. Michigan Med. Bull., 16, P. 152 [1950]). In these preparations, the carrier is usually colloidal or suspended form present. The viscosity of these dispersions is often like this great that you have to heat the preparation before it can be injected. Some These preparations have the disadvantage that they cause local irritation after injection To give reason.

Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht die Herstellung neuer ACTH-Präparate, die nicht nur eine lange Wirkungszeit besitzen, sondern deren Wirkung auch beträchtlich größer ist, als auf Grund des ACTH-Gehaltes erwartet werden kann. Der ACTH-Gehalt wird nach dem Sayerstest bestimmt (vgl. Endocrinologie, 42, S.379 [1948]).The method according to the invention enables the production of new ACTH preparations, which not only have a long duration of action, but also have a considerable effect is greater than can be expected based on the ACTH content. The ACTH content is determined according to the Sayerstest (cf. Endocrinologie, 42, p.379 [1948]).

Diese erfindungsgemäßen Präparate besitzen nicht die Nachteile, die den bekannten Präparaten mit längerer Wirkungsdauer anhaften. Die erfindungsgemäßen Präparate werden dargestellt, indem man das Hormon in einem für Injektionszwecke geeigneten, wäßiigen Lösungsmittel mit einem oder mehreren Salzen, Hydroxyden oder Oxyden der Metalle Zink, Nickel, Kobalt, Kupfer und Eisen versetzt und das pH auf einem Wert von 3 bis 8, vorzugsweise zwecks Bildung einer schwerlöslichen Komplexverbindung auf 6 bis 7,5, einstellt.These preparations according to the invention do not have the disadvantages that adhere to the known preparations with a longer duration of action. The invention Preparations are made by putting the hormone in one for injections suitable aqueous solvent with one or more salts, hydroxides or Oxides of the metals zinc, nickel, cobalt, copper and iron are added and the pH is increased a value of 3 to 8, preferably for the purpose of forming a poorly soluble complex compound to 6 to 7.5.

In den vorliegenden Präparaten bildet sich zwischen dem ACTH und der hinzugefügten Metallverbindung eine komplexe Verbindung, die beim p$ der Gewebeflüssigkeit schwer löslich ist. Daß diese komplexe Verbindung auch schon anwesend ist, wenn sich noch kein Niederschlag gebildet hat, also z. B. bei einem pg = 4, kann mittels einer polarografischen Untersuchung geprüft werden. Die für Zinkionen charakteristische Welle, die man beim Aufnehmen des Polarogramms einer sauren Lösung, die Zinkionen enthält, beobachtet, verschwindet, wenn der Lösung ACTH hinzugefügt wird. Die Zinkionen werden dann nämlich vom ACTH gebunden und können dadurch keine Veranlassung mehr geben zu der Bildung dieser für Zinkionen charakteristischen Welle.In the present preparations, between the ACTH and the added metal compound a complex compound that occurs when p $ of the tissue fluid is sparingly soluble. That this complex connection is already present when no precipitate has formed, e.g. B. with a pg = 4, can by means of a polarographic examination. The one characteristic of zinc ions Wave that one sees when recording the polarogram of an acidic solution, the zinc ions contains, observed, disappears when ACTH is added to the solution. The zinc ions are then bound by the ACTH and can therefore no longer initiate contribute to the formation of this wave characteristic of zinc ions.

Unter den für das erfindungsgemäße Verfahren geeigneten Metallen Zink, Nickel, Kobalt, Kupfer und Eisen ist das Zink zu bevorzugen. Es hat sich gezeigt, daß die Anwesenheit einer Metallmenge von 5 bis 15 mg pro 100 Einheiten ACTH einen optimalen Einfluß auf die Aktivität des ACTH ausübt, wie weiter unten erläutert wird.Among the metals suitable for the process according to the invention zinc, Nickel, cobalt, copper and iron, the zinc is preferable. It has shown, that the presence of an amount of metal from 5 to 15 mg per 100 units of ACTH exerts optimal influence on the activity of the ACTH, as explained below will.

Die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten Präparate zeigen die Eigenschaft, daß sie bei den im Körpergewebe vorherrschenden Bedingungen schwer löslich sind im Gegensatz zu dem normalen ACTH, das bei dem pH-Wert des Körpergewebes von ungefähr 7 leichter löslich ist und daher schneller verteilt und zersetzt werden kann. Aus dem Eosinophilentest ergibt sich beispielsweise, daß nach ungefähr 8 Stunden nach erfolgter Injektion das normale ACTH seine Aktivität praktisch verloren hat, daß aber Präparate nach dem erfindungsgemäßen Verfahren ihre Wirksamkeit erst nach 24Stunden und sogar nach längerer Zeit, beispielsweise nach 40 Stunden, einbüßen.The preparations produced by the method according to the invention show the property that they are difficult under the conditions prevailing in the body tissue are soluble in contrast to the normal ACTH, which occurs at the pH of the body tissue of about 7 is more soluble and therefore more rapidly dispersed and decomposed can. For example, the eosinophil test shows that after about 8 hours after the injection, the normal ACTH has practically lost its activity, but that preparations according to the method according to the invention only become effective after You lose 24 hours and even after a longer period of time, for example after 40 hours.

Vorzugsweise vewendet man ein wässeriges Lösungsmittel, das als Schutzmittel beispielsweise ein Phenol und eine Verbindung, wie beispielsweise Glycerin oder Natriumchlorid, enthält, durch die das Präparat isoton gemacht wird. Um den pH-Wert auf den gewünschten Wert einzustellen, wird vorzugsweise ein Puffer verwendet, beispielsweise ein Citrat-, Acetat- oder Phosphatpuffer, oder ein Alkalihydroxyd, insbesondere Natriumhydroxvd. Als Lösungsmittel wird vorzugsweise Wasser benutzt mit einem Gehalt von ungefähr 0,5 0,. 0 Phenol, 2,5 °.'o Glycerin und ausreichend tertiärem Natriumphosphat, um den pH-Wert des Präparates auf ungefähr 6 bis 8 einzustellen.An aqueous solvent is preferably used as a protective agent for example a phenol and a connection such as Contains glycerin or sodium chloride, which make the preparation isotonic. In order to adjust the pH to the desired value, a buffer is preferably used used, for example a citrate, acetate or phosphate buffer, or an alkali hydroxide, especially sodium hydroxide. The preferred solvent used is water with a content of about 0.5 0 ,. 0 phenol, 2.5 ° .'o glycerine and sufficient tertiary sodium phosphate to adjust the pH of the preparation to about 6 to 8.

Es wurde gefunden, daß die Reihenfolge, in der das ACTH, die Metallverbindung und das Lösungsmittel miteinander kombiniert werden, nicht von entscheidender Bedeutung ist. Üblicherweise wird jedoch eine Lösung des ACTH in einem Lösungsmittel, das bereits beispielsweise Phenol und Glycerin enthält, mit einer Suspension eines Metallhydroxydes oder Metalloxyds in gleichem Lösungsmittel gemischt; danach wird gegebenenfalls mittels eines Puffers oder einer Alkalihydroxydlösung der pH-Wert der Mischung auf einen Wert eingestellt, bei dem die schwach lösliche, ACTH-haltige komplexe Verbindung gebildet wird. Schließlich wird auf ein Volumen verdünnt, bei dem die gewünschte Menge ACTH, beispielsweise 20 Ecem enthalten ist. Die Präparate nach dem erfindungsgemäßen Verfahren werden hinsichtlich ihrer Wirksamkeit auf drei verschiedene, anschließend kurz erläuterten Weisen getestet.It was found that the order in which the ACTH, the metal compound and the solvent are combined with each other are not critical is. Usually, however, a solution of the ACTH in a solvent that already contains, for example, phenol and glycerine, with a suspension of a metal hydroxide or metal oxide mixed in the same solvent; thereafter, if necessary the pH of the mixture by means of a buffer or an alkali hydroxide solution set a value at which the slightly soluble, ACTH-containing complex compound is formed. Finally, it is diluted to a volume at which the desired Amount of ACTH, for example 20 ecem, is included. The preparations according to the invention Procedures are three different in terms of effectiveness, subsequently briefly explained ways tested.

1. Der Leberglycogentest, wobei man bei hypophysektomiziertenhungernden Ratten Glucoseund die betreffenden Präparate injiziert. Eine Bestimmung des Gehaltes an Lebergly cogen nach Anlauf einer bestimmten Zeit gibt dann einen Eindruck über die Wirkungsdauer der Präparate.1. The liver glycogen test, which is used in starving people with hypophysectomy Rats were injected with glucose and the relevant preparations. A determination of the salary to Lebergly cogen after a certain period of time then gives an impression the duration of action of the preparations.

2. Der Eosinophilentest, wobei man nach Injektion eines ACTH-Präparates an Tieren mit regelmäßigen Zwischenpausen den Gehalt an eosinophilen, weißen Blutkörpern im Blut bestimmt. Das Maß der Abnahme dieser Eosinophilen und diese Abnahmedauer sind Maß für die Wirksamkeit des injizierten Präparates.2. The eosinophil test, which is performed after injection of an ACTH preparation in animals with regular breaks, the content of eosinophils, white blood cells determined in the blood. The degree of decrease in these eosinophils and this decrease time are a measure of the effectiveness of the injected preparation.

3. Der Thymus-Involutionstest, wobei jungen Ratten intramuskular ACTH verabreicht wird. Die Abnahme des Thymusgewichtes und die Zunahme des Nebennierengewichtes geben ein Maß der Wirksamkeit des injizierten Präparates.3. The thymus involution test, giving young rats intramuscular ACTH is administered. The decrease in thymus weight and the increase in adrenal weight give a measure of the effectiveness of the injected preparation.

Die Präparate nach dem Verfahren zeigen eine Aktivität, die wenigstens 10- bis 20mal stärker ist als diejenige der entsprechenden Menge des normalen ACTH.The preparations according to the method show an activity that is at least 10 to 20 times stronger than that of the corresponding amount of normal ACTH.

Die Präparate gemäß der Erfindung wurden biologisch und klinisch im Vergleich mit Präparaten mit normalem ACTH ohne verlängerte Wirkung geprüft. Aus den klinischen Versuchen ging hervor, daß der Gehalt an eosinophilen Leucocyten nach Injektion von 20 E ACTH in der Form eines Präparates gemäß Beispiel 9 bei den Patienten sofort ein sehr starker Eosinophilensturz einsetzt, der nach 8 bis 14 Stunden ein Minimum unter 200j0 erreicht, während die Wirkung des Präparates noch nach 48 Stunden wahrnehmbar ist.The preparations according to the invention were biologically and clinically im Comparison with preparations with normal ACTH without prolonged effect tested. the end the clinical trials showed that the content of eosinophils leukocytes after injection of 20 U ACTH in the form of a preparation according to Example 9 in the Patients immediately experience a very severe eosinophil fall, which occurs after 8 to 14 weeks Hours reached a minimum under 200j0 while the effect of the preparation is still is noticeable after 48 hours.

Weiter ging aus den klinischen Versuchen hervor, daß eine Injektion von 20 E eines Präparates gemäß der Erfindung einen ebenso starken, aber längeren Effekt hatte als vier Injektionen von je 20 E normalem ACTH, die mit Zwischenpausen von 2 Stunden verabreicht wurden, und daß die Wirkung dieser einzigen Injektion stärker und beträchtlich länger war als die einer Injektion von 80 E normalem ACTH.The clinical trials also showed that an injection of 20 U of a preparation according to the invention an equally strong, but longer one The effect was four injections of 20 U of normal ACTH each with breaks in between of 2 hours and that the effect of this single injection was stronger and considerably longer than that of an injection of 80 U normal ACTH.

Die folgenden Beispiele zeigen die Darstellung und Zusammensetzung der Präparate der Erfindung. Die Aktivität der Ausgangsprodukte wird in diesen Beispielen in USP-Einheiten angegeben. Die Aktivität wird bestimmt gemäß Sayers und Mitarbeiter, beschrieben in Endocrinology, 42, S. 379 bis 393 (l948).The following examples show the presentation and composition of the preparations of the invention. The activity of the starting products is shown in these examples given in USP units. The activity is determined according to Sayers and employees, described in Endocrinology, 42, pp. 379 to 393 (1948).

Beispiel 1 73,5 mg ACTH aus Hypophysenvorderlappen von Schweinen mit einer Aktivität von 1,36 USP E mg wurden in 8 ccm Wasser, das 0,5°:0 Phenol und 2,50;'0 Glycerol enthielt, gelöst. Hierzu wurden 0,7 ccm Zinksulfatlösung mit einer Konzentration von 10 mg Zink%ccm in dem gleichen Lösungsmittel gegeben und mit 0,54 ccm Na, P O, Lösung mit einer Konzentration von 40 mgccm in dem Lösungsmittel gemischt. Der pH-Wert beträgt 7,02. Nach Verdünnung der Suspension mit dem Lösungsmittel auf 10 ccm wurde ein Präparat erhalten, das 10 E ACTH pro ccm enthielt. Dieses Präparat war hoch aktiv sowohl beim Thymus-Invulutionstest als auch beim Leberglycogentest. Beispiel 2 41,6 mg ACTH aus Hypophysenvorderlappen von Schweinen mit einer Aktivität von 2,4 USP E/mg wurden in 4 ccm Lösungsmittel gemäß Beispiel 1 gelöst. Hierzu wurden 0,8 ccm einer Kobaltsulfatlösung mit einer Konzentration von 10 mg Kobalti'ccm in dem gleichen Lösungsmittel gegeben. Die Mischung wurde aui 9 ccm verdünnt und anschließend der p11-Wert mittels einer Na3P0,-Lösung, die 40 mg Salz ;°ccm enthielt, auf 6,0 eingestellt. Schließlich wurde das Volumen des Präparates auf 10 ccm aufgefüllt, so daß es 10 E ACTH pro ccm enthielt. Bei dem Eosinophilentest zeigte dieses Präparat eine Aktivität von wenigstens 40 Stunden.Example 1 Using 73.5 mg of ACTH from porcine anterior pituitary lobes an activity of 1.36 USP E mg were in 8 ccm water, the 0.5 °: 0 phenol and 2.50; '0 contained glycerol, dissolved. For this purpose, 0.7 ccm of zinc sulfate solution was mixed with a Concentration of 10 mg zinc% ccm given in the same solvent and with 0.54 cc Na, PO, solution at a concentration of 40 mgccm mixed in the solvent. The pH is 7.02. After diluting the suspension with the solvent up 10 ccm a preparation was obtained which contained 10 U ACTH per ccm. This preparation was highly active in both the thymus involution test and the liver glycogen test. Example 2 41.6 mg ACTH from porcine anterior pituitary lobes with activity of 2.4 USP U / mg were dissolved in 4 ccm of solvent according to Example 1. For this were 0.8 ccm of a cobalt sulfate solution with a concentration of 10 mg Kobalti'ccm in given the same solvent. The mixture was diluted to 9 cc and then the p11 value was reduced to 6.0 using a Na3PO, solution containing 40 mg salt; ° ccm set. Finally the volume of the preparation was made up to 10 ccm, so that it contained 10 U ACTH per cc. This preparation showed in the eosinophil test activity of at least 40 hours.

Beispiel 3 83,2 mg ACTH mit einer Aktivität von 2,4 USP E/mg wurden in 8 ccm des Lösungsmittels gemäß Beispiel 1 gelöst. Hierzu wurden 0,32 ccm einer Zinkchloridlösung mit einer Konzentration von 37,5 mg Zink/ccm gegeben. Zu dieser Mischung wurden dann 0,5 ccm Na, P 04 Lösung mit einer Konzentration von 40 mg/Salz pro ccm und außerdem 0,5 ccm 0,23 n-Natriumhydroxydlösung zugegeben; der pH-Wert stellte sich hierbei auf 7,01 ein. Nach Auffüllung auf 10 ccm enthielt das Präparat 20 E ACTH/ccm. Bei dem Thymustest zeigte sich dieses Präparat 16mal aktiver als normales ACTH. Beispiel 4 83,2 mg ACTH mit einer Aktivität von 2,4 USP E/mg wurden in 12 ccm Lösungsmittel gelöst. Hierzu wurden 1,8 ccm Kupfersulfatlösung mit einer Konzentration von 10 mg Kupfer pro ccm gegeben, worauf das Volumen unter Verwendung des Lösungsmittels auf 17,5 ccm aufgefüllt wurde. Mittels einer N a3 P O,- Lösung mit einer Konzentration von 40 mg Salz/'ccm wurde der pH-Wert auf 6,0 eingestellt. Das erhaltene Präparat wurde auf 20 ccm verdünnt, so daß es 10 E ACTH; ccm enthielt. Beim Leberglycogentest zeigte sich dieses Präparat hoch aktiv.Example 3 83.2 mg ACTH with an activity of 2.4 USP U / mg dissolved in 8 ccm of the solvent according to Example 1. For this purpose, 0.32 ccm were used Zinc chloride solution with a concentration of 37.5 mg zinc / ccm is given. To this Mixture was then 0.5 cc Na, P 04 solution with a concentration of 40 mg / salt 0.23 N sodium hydroxide solution was added per cc and also 0.5 cc; the pH adjusted to 7.01. When it was made up to 10 ccm, the preparation contained 20 U ACTH / ccm. In the thymus test, this preparation was 16 times more active than normal ACTH. Example 4 83.2 mg ACTH with an activity of 2.4 USP U / mg dissolved in 12 cc solvent. For this purpose, 1.8 ccm of copper sulfate solution was mixed with a Concentration of 10 mg copper per ccm given, whereupon using the volume of the solvent was made up to 17.5 ccm. Using a N a3 PO, solution with a concentration of 40 mg salt / ccm the pH was adjusted to 6.0. The preparation obtained was diluted to 20 cc so that it contained 10 U ACTH; ccm contained. This preparation showed itself to be highly active in the liver glycogen test.

Entsprechend den vorstehenden Beispielen wurden auch die folgenden Präparate hergestellt. Beispiel 5 Das Präparat ist wie folgt zusammengesetzt ACTH ................ 7,35 mg/ccm = 10 USP E/ccm Ni S 04 ............... 3,00 mg Nickel/ccm Na3P04 .............. bis pA = 7 Lösungsmittel ......... Wasser mit 0,5 Phenol und 0,750::0 Nacl Beispiel 6 Das Präparat ist wie folgt zusammengesetzt ACTH ................ 7,35 mg/ccm = 10 USP E/ccm COSO4 . . . . . . . . . . . . . . . 1,5 mg Kobalt/ccm H Cl ........ . .......... bis pH = 3,0 Lösungsmittel ......... gemäß Beispiel l Beispiel 7 Das Präparat ist wie folgt zusammengesetzt: ACTH ................ 7,35 mg/ccm -- 10 USP E/ccm Zn S 04 ............... 1,00 mg Zink/ccm Acetatpuffer .......... bis pH = 5,3 Lösungsmittel ......... gemäß Beispiel l Beispiel 8 Das Präparat ist wie folgt zusammengesetzt ACTH ................ 2,77 mg/ccm = 10 USP E/ccm ZnC12 . . . . . . . . . . . . . . . . 1,00 mg Zink/ccm NaOH ............... bis pH = 7,7 Lösungsmittel ......... gemäß Beispiel l Dieses Präparat war hoch aktiv beim Leberglycogentest. Beispiel 9 Das Präparat ist wie folgt zusammengesetzt: ACTH ................ 7,70 mg/ccm = 20 USP E/ccm Zn C12 ................ 1,50 mg Zink/ccm Na3P04 .............. 2,50 mg/ccm NaOH ............... bis pA = 6,0 Lösungsmittel ......... Wasser mit 0,26 °l, Phenol und 2,0 °,o Glycerol Beispiel 10 77,1 mg ACTH mit einer Aktivität von 2,59 U SP E/mg wurden in 6 ccm Lösungsmittel gemäß Beispiel 1 gelöst. Hierzu wurden 1,5 ccm Zn C12 Lösung mit 10 mg Zink/ccm im gleichen Lösungsmittel zugegeben. Hierzu wurden 1,0 ccm 0,5 n-Natriumhydroxydlösung zugegeben, so daß der pH-Wert den Wert von 7,5 erreichte; mit dem Lösungsmittel wurde das Volumen auf 10 ccm aufgefüllt. Die erzielte Suspension besaß eine verlängerte bzw. vergrößerte Wirksamkeit beim Leberglycogentest und beim Thymustest. Beim Eosinophilentest trat während wenigstens 20 Stunden ein starker Sturz der eosinophilen Leucocyten ein.The following preparations were also produced in accordance with the above examples. Example 5 The preparation is composed as follows : ACTH ................ 7.35 mg / ccm = 10 USP E / ccm Ni S 04 .......... ..... 3.00 mg nickel / ccm Na3P04 .............. up to pA = 7 solvents ......... water with 0.5 phenol and 0.750: : 0 Nacl Example 6 The preparation is composed as follows : ACTH ................ 7.35 mg / ccm = 10 USP U / ccm COSO4. . . . . . . . . . . . . . . 1.5 mg cobalt / cc H Cl ......... .......... up to pH = 3.0 solvent ......... according to example 1 example 7 The preparation is composed as follows: ACTH ........... ..... 7.35 mg / ccm - 10 USP U / ccm Zn S 04 ............... 1.00 mg zinc / ccm acetate buffer ...... .... up to pH = 5.3 Solvent ......... according to Example 1 Example 8 The preparation is composed as follows : ACTH ................ 2, 77 mg / cc = 10 USP U / cc ZnC12. . . . . . . . . . . . . . . . 1.00 mg zinc / ccm NaOH ............... up to pH = 7.7 solvent ......... according to Example 1 This preparation was highly active in the liver glycogen test. Example 9 The preparation is composed as follows: ACTH ................ 7.70 mg / ccm = 20 USP U / ccm Zn C12 .......... ...... 1.50 mg zinc / ccm Na3P04 .............. 2.50 mg / ccm NaOH ............... up to pA = 6.0 solvent ......... water with 0.26 ° l, phenol and 2.0 °, o glycerol Example 10 77.1 mg ACTH with an activity of 2.59 U SP E / mg were dissolved in 6 ccm of solvent according to Example 1. For this purpose, 1.5 ccm Zn C12 solution with 10 mg zinc / ccm in the same solvent were added. To this, 1.0 cc of 0.5 N sodium hydroxide solution was added so that the pH reached 7.5; the volume was made up to 10 ccm with the solvent. The suspension obtained had a prolonged or increased effectiveness in the liver glycogen test and in the thymus test. In the eosinophil test, the eosinophil leucocytes fell sharply for at least 20 hours.

Beispiel 11 55,5 mg A CT H mit einer Aktivität von 36 U S P E/mg wurden in 60 ccm Lösungsmittel gemäß Beispiel 1 gelöst. Hierzu wurden 10 ccm Zn C12 Lösung mit 10 mg Zink/ccm zugegeben und der pH-Wert mit 0,5 n-N atriumhydroxydlösung auf 7,5 eingestellt. Das Volumen wurde dann mit Hilfe des Lösungsmittels auf 100 ccm aufgefüllt. Die Suspension besaß eine verlängerte Wirkungsdauer beim Leberglycogentest.Example 11 55.5 mg of A CT H with an activity of 36 U S P E / mg dissolved in 60 ccm of solvent according to Example 1. For this purpose, 10 ccm of Zn C12 solution was added with 10 mg zinc / ccm added and the pH value with 0.5 N atrium hydroxide solution 7.5 set. The volume was then increased to 100 cc with the aid of the solvent filled up. The suspension had an extended duration of action in the liver glycogen test.

Beispiel 12 77,1 mg ACTH aus Hypophysenvorderlappen von Schweinen mit einer Aktivität von 2,59 U S P E /mg wurden in 6 ccm Wasser mit einem Gehalt von 0,511/ o Phenol und 2 °/o Glycerin gelöst; darauf wurden 2,46 ccm einer Zinkhydroxydsuspension zugegeben, die erhalten wurde, indem 1,5 ccm Zinkchloridlösung mit 10 mg Zink/ccm und 0,96 ccm 0,47 n-Natriumhydroxydlösung miteinander kombiniert wurden. Der pH-Wert der erzielten Mischung wurde mit NaOH auf 7,5 eingestellt; anschließend wurde das Volumen auf 10 ccm mit Hilfe des Lösungsmittels aufgefüllt, so daß die ACTH-Konzentration 20 USP E/ccm betrug. Beim Eosinophilentest war das Präparat länger als 24 Stunden aktiv; die Aktivität beim Leberglycogentest war sehr hoch. Beim Thymus-Invulutionstest ist das Präparat 16mal so aktiv wie normales ACTH.Example 12 77.1 mg ACTH from porcine anterior pituitary lobes with an activity of 2.59 U S P E / mg were in 6 ccm of water with a content dissolved by 0.511 / o phenol and 2% glycerine; then 2.46 cc of a zinc hydroxide suspension were added added, which was obtained by adding 1.5 ccm zinc chloride solution with 10 mg zinc / ccm and 0.96 cc of 0.47 N sodium hydroxide solution were combined. The pH the resulting mixture was adjusted to 7.5 with NaOH; then it became Volume made up to 10 ccm with the help of the solvent, so that the ACTH concentration 20 USP E / cc. In the eosinophil test, the preparation was longer than 24 hours active; the activity in the liver glycogen test was very high. In the thymus involution test the preparation is 16 times as active as normal ACTH.

Beispiel 13 55,4 mg A CTH mit einer Aktivität von 3,61 US P E/mg wurden in 6 ccm Lösungsmittel gemäß Beispiel 12 gelöst. Hierzu wurde eine Zinkhydroxydsuspension gegeben, die erhalten wurde durch Mischung von 2 ccm Zinkchloridlösung mit 10 mg Zink/ccm mit 1,25 ccm 0,48 n-Na 0H. Der p11-Wert wurde mit Na 0H auf 7,5 eingestellt; schließlich wird das erhaltene Volumen auf 10 ccm verdünnt. Das Präparat war hoch aktiv beim Leberglycogentest.Example 13 55.4 mg of A CTH with an activity of 3.61 US PE / mg dissolved in 6 cc of solvent according to example 12. A zinc hydroxide suspension was used for this purpose which was obtained by mixing 2 cc of zinc chloride solution with 10 mg Zinc / cc with 1.25 cc 0.48 n-Na OH. The p11 value was adjusted to 7.5 with Na OH; finally the volume obtained is diluted to 10 cc. The preparation was high active in the liver glycogen test.

Beispiel 14 73,5 mg A C T H mit einer Aktivität von 1,36 U S P E/mg wurden in 7,5 ccm Lösungsmittel gelöst; es wurde eine zinkhydroxydhaltige Suspension zugegeben, die erhalten wurde durch Mischung von 1,06 ccm Zinksulfatlösung mit 10 mg Zink/ccm und von 0,5 ccm 1 n-Natriumhydroxydlösung. Das Volumen der erhaltenenMischung wurde auf 10 ccm eingestellt; der pH-\Vert betrug 7,4. Die Suspension enthielt 10 U S P E-ccm. Beim Leberglycogentest zeigte eine einzige Injektion dieses Präparates eine Wirkung gleich derjenigen, die durch eine entsprechende Menge normales ACTH ausgeübt wurde, das auf acht gleiche Injektionen mit einstündigem Abstand verteilt war; das neue Präparat zeigte somit eine deutlich verlängerte Wirkung.Example 14 73.5 mg A C T H with an activity of 1.36 U S P E / mg were dissolved in 7.5 cc of solvent; it became a suspension containing zinc hydroxide added, which was obtained by mixing 1.06 ccm of zinc sulfate solution with 10 mg zinc / ccm and of 0.5 ccm 1N sodium hydroxide solution. The volume of the mixture obtained was adjusted to 10 cc; the pH was 7.4. The suspension contained 10 U S P E-ccm. The liver glycogen test showed a single injection of this preparation an effect equal to that of an equivalent amount of normal ACTH was exercised, which was divided into eight equal injections, one hour apart was; the new preparation thus showed a significantly longer effect.

Beispiel 15 73,5 mg ACTH mit einer Aktivität von 1,36 USPE/mg wurde in 4 ccm Lösungsmittel gelöst. Der pH-Wert der Lösung wurde mit einer Natriumhydroxydlösung auf 7,5 eingestellt. Dann wurden 4 ccm einer Nickelhydroxydsuspension mit einem pH-Wert von 7,5 und einem Gesamtgehalt von 30 mg Nickel zugegeben. Nach Auffüllung des Volumens auf 10 ccm enthielt die Suspension 10 U S P E ACTH/ccm. Das Präparat zeigte eine gute Aktivität. Beispiel 16 5,55 mg hochgereinigtes ACTH-Präparat mit einer Aktivität von 36 U S P E/mg wurde in 8 ccm Lösungsmittel mit 0,5 °/o Phenol und 0,90/, Natriumchlorid gelöst. Hierzu wurden 18,7 mg Zinkoxyd zugegeben und der p11-Wert auf 7,5 eingestellt. Das Volumen wurde auf 10 ccm aufgefüllt, so daß das Präparat 20 U S P E A CT H/ ccm enthielt. Beim Thymus-Invulutionstest war dieses Präparat hoch aktiv.Example 15 73.5 mg of ACTH with an activity of 1.36 USPE / mg was dissolved in 4 cc of solvent. The pH of the solution was adjusted to 7.5 with a sodium hydroxide solution. Then 4 cc of a nickel hydroxide suspension with a pH of 7.5 and a total content of 30 mg of nickel were added. After the volume was made up to 10 ccm, the suspension contained 10 USPE ACTH / ccm. The preparation showed good activity. Example 16 5.55 mg of highly purified ACTH preparation with an activity of 36 USPE / mg was dissolved in 8 cc of solvent with 0.5% phenol and 0.90 % sodium chloride. To this end, 18.7 mg of zinc oxide were added and the p11 value was set to 7.5. The volume was made up to 10 ccm so that the preparation contained 20 USPEA CT H / ccm. This preparation was highly active in the thymus involution test.

Beispiel 17 83,2 mg A CT H mit einer Aktivität von 2,4 U S P E/mg wurde in 5,5 ccm Lösungsmittel gemäß Beispiel 16 gelöst, worauf eine Kobalthydroxydsuspension zugegebenwurde, die erhalten wurde durch Mischung von 2,5 ccm Kobaltsulfatlösung mit 10 mg Kobalt/ccm und 0,5 n-Natriumhydroxydlösung, die zur Einstellung des pH-Wertes der gesamten Mischung auf 7,5 ausreicht. Das Volumen wurde dann auf 10 ccm aufgefüllt, so daß ein Präparat mit 20 US P E/ACTH/ccm erzielt wurde. Die verlängerte Aktivität beim Leberglycogentest war sehr günstig.Example 17 83.2 mg A CT H with an activity of 2.4 U S P E / mg was dissolved in 5.5 cc of solvent according to Example 16, followed by a cobalt hydroxide suspension which was obtained by mixing 2.5 cc of cobalt sulfate solution with 10 mg cobalt / ccm and 0.5 N sodium hydroxide solution, which is used to adjust the pH value of the entire mixture to 7.5 is sufficient. The volume was then made up to 10 ccm, so that a preparation with 20 US PE / ACTH / ccm was achieved. The prolonged activity the liver glycogen test was very cheap.

Claims

PATENT CLAIMS: 1. Process for the production of preparations adrenocorticotropic Hormones with increased and prolonged effectiveness, characterized in that man the ACTH in an aqueous solvent suitable for injection purposes with a or more salts, hydroxides or oxides of the metals zinc, nickel, cobalt, copper or iron and the pH to a value of 3 to 8, preferably for the purpose of formation a sparingly soluble complex compound to 6 to 7.5, adjusts.

2. Procedure according to Claim 1, characterized in that the metal compound in an amount of 5 to 15 mg of metal per 100 units of ACTH is used.

3. Procedure after a of claims 1 and 2, characterized in that preferably a zinc compound is used.

4. The method according to claim 3, characterized in that zinc phosphate is used.

5. The method according to any one of claims 1 to 4, characterized in that that the aqueous solvent contains 0.5% phenol and 2.5% glycerol.

6. Procedure according to claim 1 to 5, characterized in that for setting the preferably called PH range phosphate buffer is used. Considered publications: Nordisk Med., 1952, pp. 486-488; Schweizer Med. Wschr., 82, pp. 549 to 553.