DE10225180A1

DE10225180A1 - Protein or peptide (MIMPD), nucleic acid coding therefor and uses of these substances

Info

Publication number: DE10225180A1
Application number: DE2002125180
Authority: DE
Inventors: Edgar Dr. Dahl; Katrin Dr. Gottlob; Bernd Hinzmann; Karin Blechschmidt; Anke Stein; Christian Pilarsky; Thomas Specht; André ROSENTHAL; Rosemarie Lichtner; Georg Dr. Beckmann; Irina Klamann; Armin Dr. Schmidt
Original assignee: Metagen Pharmaceuticals GmbH
Current assignee: DAHL, EDGAR, DR., GEMMENICH, BE; HINZMANN, BERND, DR., 13127 BERLIN, DE; KLAMAN, IRINA, DR., 10318 BERLIN, DE; LICHTNER, ROSEMARIE, DR., 10823 BERLIN, DE; PILARSKY, CHRISTIAN, DR., 01309 DRESDEN, DE; ROSENTHAL, ANDRE, PROF., 14482 POTSDAM, DE; SPECHT, THOMAS, DR., 83088 KIEFERSFELDEN, DE
Priority date: 2002-05-31
Filing date: 2002-05-31
Publication date: 2004-02-12
Also published as: WO2003102173A8; AU2003243913A1; WO2003102173A2

Abstract

Die Erfindung betrifft ein neues Protein bzw. Peptid (MIMPD), eine hierfür codierende Nukleinsäure sowie Verwendungen von MIMPD zur Diagnose und Behandlung von Krebserkrankungen sowie zum Screenen nach Substanzen für solche Zwecke.The invention relates to a new protein or peptide (MIMPD), a nucleic acid coding therefor, and uses of MIMPD for diagnosing and treating cancer and for screening for substances for such purposes.

Description

Gebiet der ErfindungField of the Invention

Die Erfindung betrifft ein neues Protein, folgend genannt MIMPD, Teilsequenzen hieraus, Nukleinsäuren codierend für MIMPD oder für Teilsequenzen hieraus, neue Verwendungen von MIMPD oder daraus abgeleiteten Sequenzen zum Screenen nach daran bindenden Substanzen, sowie die Verwendung von an MIMPD bindenden Substanzen zur Diagnose und/oder Behandlung von Tumor-Erkrankungen.The invention relates to a new one Protein, hereinafter called MIMPD, partial sequences from it, coding for nucleic acids for MIMPD or for Partial sequences from this, new uses of MIMPD or derived therefrom Sequences for screening for substances that bind to it, as well as the Use of substances binding to MIMPD for diagnosis and / or Treatment of tumor diseases.

Hintergrund der Erfindung und Stand der Technikbackground of the invention and prior art

Aus den Literaturstellen D.W. Waggoner et al., Biochem Biophys Acta 1439: 299-316 (1999) und H. Kanoh et al., Biochem Biophys Acta 1348: 56-62 (1997) ist eine Lipid Phosphat Phosphatase Familie bekannt, welche auch als PAP (Phosphatic Acid Phosphatases) bezeichnet werden. PAPs katalysieren die Umwandlung von Phosphatidsäure zu Diacylglycerinen und anorganischem Phosphat. Diacylglycerine spielen eine wichtige Rolle in der Zellsignalisierung und dürften daher in der Signaltransduktion von Bedeutung sein. Auch weitere Lipidphosphate, wie Lyso-Phosphatidsäure (LPA) und Sphingosine-1-Phosphat (S1P) sind PAP Substrate. Die Spaltung von LPA und S1P durch PAP verhindert deren Bindung an spezifische Rezeptoren in der Zellmembran und inhibiert so die Rezeptor-vermittelte Signaltransduktion.From the references D.W. Wagoner et al., Biochem Biophys Acta 1439: 299-316 (1999) and H. Kanoh et al., Biochem Biophys Acta 1348: 56-62 (1997) is a lipid phosphate Phosphatase family also known as PAP (Phosphatic Acid Phosphatases). PAPs catalyze the conversion of phosphatidic to diacylglycerols and inorganic phosphate. diacylglycerols play an important role in cell signaling and are therefore likely be of importance in signal transduction. Also other lipid phosphates, like lysophosphatidic acid (LPA) and sphingosine-1-phosphate (S1P) are PAP substrates. The split of LPA and S1P by PAP prevents their binding to specific ones Receptors in the cell membrane and thus inhibits the receptor-mediated Signal transduction.

Aus der Literaturstelle Lexikon der Biochemie und Molekularbiologie, Herder, 1992, 3. Band, ist es bekannt, daß saure Serum Phosphatasen als Indikationen für Prostatakrebs geeignet sind.From the bibliography Biochemistry and Molecular Biology, Herder, 1992, 3rd Volume, It Is Known that sour Serum phosphatases are suitable as indications for prostate cancer.

Aus der Literaturstelle US-6,225,054, dort Sequenz 275, ist eine Sequenz bekannt, welche ca. 90% Sequenzidentität mit einer Teilsequenz des im Rahmen der Erfindung folgend beschriebenen neuen Proteins MIMPD aufweist. Weiterhin ist aus dieser Literaturstelle die differenzielle Expression der besagten Sequenz in Brusttumor- und Brustnormalgewebe bekannt.From the literature US-6,225,054, there sequence 275, a sequence is known which has approximately 90% sequence identity with a Partial sequence of the new described in the context of the invention Has protein MIMPD. Furthermore, from this reference the differential expression of the said sequence in breast tumor and normal breast tissue.

Krebs ist eine mit zunehmendem Alter mit beachtlicher Inzidenz auftretende Erkrankung. Bislang werden Krebserkrankungen im wesentlichen pathologisch diagnostiziert und meist durch Entfernung des malignen Gewebes behandelt. Die Entfernung von Organen hat meist verschiedene nachteilige Effekte auf einen Patienten. Eine verbesserte Diagnose und Behandlung von Krebs, insbesondere ohne das Erfordernis einer Entfernung eines Organs oder von Teilen hiervon, ist daher in hohem Maße wünschenswert.Cancer is one with age disease occurring with considerable incidence. So far Cancer diagnosed and pathological essentially mostly treated by removing the malignant tissue. The distance of organs usually has various adverse effects on you Patients. Improved diagnosis and treatment of cancer, in particular without the need to remove an organ or parts of this, is therefore to a high degree desirable.

Technisches Problem der Erfindungtechnical Problem of the invention

Der Erfindung liegt das technische Problem zugrunde, pharmazeutische Zusammensetzungen zur Diagnose und/oder zur Behandlung von Krebserkrankungen anzugeben sowie Mittel zu deren Identifizierung.The invention is technical Underlying problem, pharmaceutical compositions for diagnosis and / or to indicate the treatment of cancer and agents to identify them.

Grundzüge der Erfindung sowie bevorzugte Ausführungsbeispiele.Basics of the invention and preferred Embodiments.

Die Erfindung lehrt zunächst eine Nukleinsäure enthaltend zumindest eine Teilsequenz mit einer Länge von zumindest 12 bis 21 Nukleotiden aus SEQ.-ID 1 oder 16. Insbesondere von Interesse ist eine Teilsequenz oder eine Teil-Teilsequenz hieraus bis zum Stop Codon TGA beginnend bei Nukleotid 1166. Demgegenüber liegt die aus der Literaturstelle US-6,225,054 bekannte Sequenz 275 jenseits des Stop Codons, i.e. im nicht translatierten 3'-Bereich (3'-UTR) der erfindungsgemäßen Gesamtsequenz SEQ.-ID 1.The invention first teaches one nucleic acid containing at least one partial sequence with a length of at least 12 to 21 nucleotides from SEQ ID 1 or 16. In particular a partial sequence or a partial partial sequence from this is of interest to the stop codon TGA starting at nucleotide 1166. This is opposite the sequence 275 beyond, known from US-6,225,054 the stop codon, i.e. in the non-translated 3 'area (3'-UTR) the overall sequence according to the invention SEQ ID 1.

Bei den erfindungsgemäßen Nukleinsäuresequenzen handelt es sich um eine cDNA oder genomische DNA, welche für eine bislang unbekannte PAP codiert, hiermit genannt MIMPD. Die Sequenz der neuen PAP ist in SEQ.-ID 2 angegeben. Daher betrifft die Erfindung auch ein Peptid oder Protein enthaltend zumindest eine Teilsequenz einer Länge von zumindest 4 bis 7 Aminosäuren aus SEQ-ID 2.In the nucleic acid sequences according to the invention is it a cDNA or genomic DNA, which for a so far encoded unknown PAP, hereby called MIMPD. The sequence of the new PAP is given in SEQ ID 2. Therefore, the invention also relates a peptide or protein containing at least a partial sequence of one length of at least 4 to 7 amino acids from SEQ-ID 2.

Die Untergrenzen der Längen der Teilsequenzen aus den in den Sequenzprotokollen gegebenen Sequenzen können auch 12 bis 30 (Nukleinsäuren; NS) bzw. 4 bis 10 (Aminosäuren; AS) sein. Auch Untergrenzen von 60 oder 90 (NS) bzw. 20 oder 30 (AS) sind möglich. Es versteht sich, daß höhere Untergrenzen als 21 (NS) bzw. 7 (AS) nur dann zur Anwendung kommen können, wenn die angewandte Sequenz aus den Sequenzprotokollen die erforderliche Anzahl an NS bzw. AS aufweist.The lower limits of the lengths of the Partial sequences from the sequences given in the sequence listing can also 12 to 30 (nucleic acids; NS) or 4 to 10 (amino acids; AS). Also lower limits of 60 or 90 (NS) or 20 or 30 (AS) are possible. It is understood that higher lower limits than 21 (NS) or 7 (AS) can only be used if the sequence used from the sequence listing the required Has number of NS or AS.

MIMPD ist ein integrales Membranprotein mit vermutlich sechs transmembranen Regionen, wobei drei Loops gebildet sind, welche membranaußenseitig stehen. Daher betrifft die Erfindung auch Proteine oder Peptide enthaltend zumindest eine Teilsequenz einer Länge von zumindest 7 Aminosäuren aus einer oder mehrerer der Sequenzen SEQ.-ID 3 – 9 (membranaußenständige Bereiche) und/der Seq.-ID 10 – 15 (konservierte PAP Teilsequenzen), oder bestehend aus einer oder mehrerer solcher Teilsequenzen.MIMPD is an integral membrane protein with probably six transmembrane regions, with three loops being formed, which outside of the membrane stand. The invention therefore also relates to proteins or peptides containing at least one partial sequence of at least 7 amino acids in length one or more of the sequences SEQ.ID 3 - 9 (areas outside the membrane) and / SEQ ID 10-15 (preserved PAP partial sequences), or consisting of an or several such partial sequences.

Die Teilsequenzen können vorzugsweise eine Länge von zumindest 15 oder 30 Aminosäuren bzw. 45 oder 90 Nukleotiden aufweisen. Sie können aber im Extremfall der Sequenzlänge auch durch die angegebenen Sequenzen insgesamt gebildet sein. In den Ausführungsformen, in welchen die Nukleinsäuren oder Protein bzw. Peptide die besagten Sequenzen oder Teilsequenzen enthalten, können an einem oder beiden Enden der Sequenzen beliebige Anschlußsequenzen angefügt sein. Auch können verschiedenste nicht-natürliche Moleküle bzw. chemische Gruppen angeschlossen oder mit den Anschlußsequenzen verbunden sein.The partial sequences can preferably have a length of at least 15 or 30 amino acids or 45 or 90 nucleotides. In the extreme case of the sequence length, however, they can also be formed as a whole by the specified sequences. In the embodiments in which the nucleic acids or Pro tein or peptides containing said sequences or partial sequences, any connecting sequences can be added to one or both ends of the sequences. A wide variety of non-natural molecules or chemical groups can also be connected or connected to the connection sequences.

Im Rahmen der Erfindung wurde gefunden, daß MIMPD in den verschiedensten Tumorgeweben differenziell exprimiert wird. Daher ist ein wesentlicher Einsatzbereich der Erfindung in der Diagnose und/oder Behandlung von Krebserkrankungen zu sehen, ebenso wie als Target bzw. Tool zur Findung von Wirkstoffen zur Diagnose und/oder Behandlung von Krebserkankungen.In the context of the invention, it was found that MIMPD is differentially expressed in different tumor tissues. Therefore, an essential area of application of the invention is in diagnosis and / or cancer treatment, as well as Target or tool for finding active ingredients for diagnosis and / or Treatment of cancer.

Im Einzelnen lehrt die Erfindung daher auch Verwendung einer für MIMPD codierenden Nukleinsäure und/oder eines MIMPD Peptids oder Proteins zur Detektion einer Krebserkrankung oder zur Detektion eines Risikos der Erkrankung an Krebs, wobei eine Gewebeprobe auf Übertranskription von MIMPD RNA oder auf Überexpression eines MIMPD Proteins oder Peptides untersucht wird. Es kann eine an für MIMPD codierende Nukleinsäure oder eine an MIMPD Protein oder Peptid bindende Detektorsubstanz, vorzugsweise enthaltend eine Reportergruppe, verwendet werden, wobei Bindung besagter Nukleinsäure und/oder besagten Proteins oder Peptids an die Detektorsubstanz halbquantitativ oder quantitativ detektiert wird.The invention teaches in detail therefore use one for MIMPD encoding nucleic acid and / or a MIMPD peptide or protein to detect cancer or to detect a risk of the disease from cancer, wherein a tissue sample for over-transcription of MIMPD RNA or for overexpression of a MIMPD protein or peptide is examined. It can be one on for MIMPD encoding nucleic acid or a detector substance that binds to MIMPD protein or peptide, preferably containing a reporter group can be used, wherein Binding of said nucleic acid and / or said protein or peptide to the detector substance is detected semi-quantitatively or quantitatively.

Die Erfindung lehrt weiterhin die Verwendung einer MIMPD RNA oder eines MIMPD Proteins oder Peptids zum Screenen nach daran bindenden Substanzen, insbesondere nach prospektiven Wirkstoffen zur Inhibierung von besagter RNA oder besagtem Protein oder Peptid oder nach prospektiven Detektorsubstanzen, wobei eine prospektiv bindende Substanz oder eine Mischung solcher Substanzen mit besagter RNA oder besagtem Protein oder Peptid kontaktiert wird, wobei mit einem Bindungsassay Bindungsereignisse festgestellt werden, und wobei eine bindende prospektive Substanz, ggf. nach Dekonvolutierung, als zum Nachweis oder zur Behandlung von Krebserkrankungen geeignete Substanz selektiert wird.The invention further teaches Use of a MIMPD RNA or a MIMPD protein or peptide for screening for substances that bind to it, especially for prospective agents for inhibiting said RNA or said Protein or peptide or according to prospective detector substances, wherein a prospectively binding substance or a mixture of such substances is contacted with said RNA or said protein or peptide, whereby binding events are determined with a binding assay, and where a binding prospective substance, if necessary after deconvolution, as suitable for the detection or treatment of cancer Substance is selected.

Die Erfindung lehrt weiterhin die Verwendung einer MIMPD inhibierenden oder daran bindenden Substanz zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Detektion und/oder Behandlung von Krebserkrankungen. Die Substanz kann ein Antikörper sein, welcher durch Immunisierung eines nicht-menschlichen Säugetiers mit einem MIMPD Peptid oder Protein, oder mit mit cDNA von MIMPD transient oder stabil transfizierten Zellen (z.B. Tumorzelllinien, NIH3T3 Zellen), oder mit endogen MIMPD exprimierenden Tumorzellen oder mit in Insektenzellen hergestelltem MIMPD erhältlich ist, oder ein Phage-Display Antikörper ist. Es kann zur Immunisierung auch MIMPD cDNA in nicht-menschlichen Säugetieren verwendet werden.The invention further teaches Use of a MIMPD inhibiting or binding substance for the preparation of a pharmaceutical composition for detection and / or treatment of cancer. The substance can be a antibody by immunization of a non-human mammal with a MIMPD peptide or protein, or with with MIMPD cDNA transiently or stably transfected cells (e.g. tumor cell lines, NIH3T3 cells), or with endogenously expressing MIMPD tumor cells or is available with MIMPD produced in insect cells, or a phage display antibody is. It can also immunize MIMPD cDNA in non-human mammals be used.

Die Substanz kann aber auch eine Mimikryverbindung eines Antikörpers gegen ein MIMPD Peptid oder Protein sein. ALternativ kann die Substanz, ein Aptamer, eine antisense RNA, eine inhibitorische RNA, oder ein Ribozym gegen MIMPD sein. Die Substanz kann zusätzlich eine zytotoxische, radioaktive und/oder immunstimulierende Komponente tragen. Die pharmazeutische Zusammensetzung kann zur lokalen oder systemischen Applikation in Tumorzellen enthaltendem Gewebe hergerichtet sein.But the substance can also be Mimicry compound of an antibody against a MIMPD peptide or protein. Alternatively, the substance an aptamer, an antisense RNA, an inhibitory RNA, or a Ribozyme against MIMPD. The substance can also be a cytotoxic, radioactive and / or wear immunostimulating component. The pharmaceutical Composition can be used for local or systemic application Tissue-containing tissue can be prepared.

Die Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zur Diagnose einer Krebserkrankung, wobei eine erfindungsgemäße Detektorsubstanz in einer Ausführungsform mit einer Reportergruppe in zu untersuchendes Gewebe, in vitro oder in vivo, appliziert wird, wobei das zu untersuchende Gewebe dann einer Detektionsverfahrenstufe unterworfen wird, welche sensitiv für die Reportergruppe ist, und wobei im Fall der Detektion eines definierten Mindestwertes der Reportergruppe im Gewebe das Gewebe als Tumorzellen enthaltend qualifiziert wird.The invention further relates to a method for diagnosing cancer, wherein a detector substance according to the invention in one embodiment with a reporter group in tissue to be examined, in vitro or is applied in vivo, the tissue to be examined then is subjected to a detection method stage which is sensitive for the Is reporter group, and being in the case of detection of a defined Minimum values of the reporter group in the tissue the tissue as tumor cells containing qualified.

Die Erfindung betrifft schließlich ein Verfahren zur Behandlung einer Krebserkrankung, wobei eine erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung in einer physiologisch wirksamen Dosis einem Patienten dargereicht wird.Finally, the invention relates to a A method for treating a cancer, wherein a pharmaceutical according to the invention Composition in a physiologically effective dose to a patient is presented.

Die Erfindung ist insbesondere bei den folgenden Krebserkrankungen einsetzbar: Brustkrebs, Uteruskrebs, Colonkrebs, Magenkrebs, Ovarkrebs, Lungenkrebs und/oder Mastdarmkrebs.The invention is in particular at the following cancers can be used: breast cancer, uterine cancer, colon cancer, Stomach cancer, ovarian cancer, lung cancer and / or rectal cancer.

Die Erfindung beruht auf der Erkenntnis, daß MIMPD überexprimiert ist bzw. differenziell exprimiert wird in den genannten Tumorgeweben, i.e. in besagten Tumorgeweben ist die Expression höher bzw. überhaupt zu beobachten, verglichen mit normalen Zellen gleichen Gewebes, und der daraus herleitbaren technische Lehre, daß MIMPD als Zielmolekül bei der Diagnostik und Therapie dieser Erkrankungen eingesetzt werden kann. MIMPD kann also als Marker zur Identifizierung von Tumorzellen in den besagten Tumorgeweben dienen. Auf der anderen Seite bietet die Inhibierung von MIMPD, insbesondere auch bei lokaler Applikation, die Möglichkeit, in Tumor-spezifische MIMPD Assoziationen mit anderen Prozessen in den Tumorzellen einzugreifen und somit letztendlich den tumorzellenspezifisch veränderten Stoffwechsel zu stören und zu einem Absterben oder zumindest einer Wachstumshemmung der Tumorzellen beizutragen. Die Inhibierung von MIMPD kann auch in Kombination mit einer Chemo- oder Radiotherapie eingesetzt werden.The invention is based on the knowledge that that MIMPD overexpresses is or is expressed differentially in the tumor tissues mentioned, i.e. in said tumor tissues, the expression is higher or at all observed compared to normal cells of the same tissue, and the resulting technical teaching that MIMPD is the target molecule in the Diagnostics and therapy of these diseases can be used. MIMPD can therefore be used as a marker for the identification of tumor cells in serve the said tumor tissues. On the other hand, the Inhibition of MIMPD, especially when applied locally Possibility, in tumor-specific MIMPD associations with other processes in to intervene in the tumor cells and thus ultimately the tumor cell-specific changed Disrupt metabolism and to die off or at least inhibit growth Contribute to tumor cells. Inhibition of MIMPD can also occur in Combination with chemotherapy or radiotherapy can be used.

Im Rahmen der Efindung kann es sich empfehlen, im Vorfeld einer Behandlung mit einer erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung eine Probe aus einem Gewebe, welches als Tumorgewebe mit anderen Methoden identifiziert ist, zu entnehmen und die Gewebeprobe auf Expression bzw. Überexpression von MIMPD zu untersuchen. Alternativ kann mit einer erfindungsgemäßen Detektorsubstanz zur Diagnose in vivo auf MIMPD Abhängigkeit getestet werden. Wird eine Expression bzw. Überexpression von MIMPD gegenüber Normalgewebe gleichen Typs bzw. überhaupt eine Expression festgestellt, so ist die Anwendung der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung indiziert.Within the scope of the invention, it may be advisable to take a sample from a tissue which is identified as tumor tissue by other methods in advance of treatment with a pharmaceutical composition according to the invention and to examine the tissue sample for expression or overexpression of MIMPD. Alternatively, a detector substance according to the invention can be used to test in vivo for MIMPD dependency. If an expression or overexpression of MIMPD compared to normal tissue of the same type or expression at all, the use of the pharmaceutical composition according to the invention is indicated.

Handelt es sich bei dem Tumor um einen Typus, bei welchem Tumorzellen MIMPD exprimieren, Normalzellen gleichen Gewebetyps jedoch nicht, so ist es besonders bevorzugt, wenn die an MIMPD bindende Substanz zusätzlich eine zytotoxische, radioaktive und/oder immunstimulierende Komponente trägt. Dies führt dann letztendlich dazu, dass praktisch ausschließlich Tumorzellen getötet werden, sei es durch die Zytotoxizität, sei es durch Angriff durch das stimulierte Immunsystem, während Normalzellen in dem Gewebe praktisch vollständig erhalten bleiben. In dieser Ausführungsform braucht die bindende Substanz selbst nicht inhibierend auf MIMPD zu wirken, da die bindende Substanz dann lediglich als Marker funktionieren muß, welcher die Komponenten zu Ziel-Tumorzellen trägt. Im Falle des Einsatzes einer zytotoxischen, radioaktiven und/oder immunstimulierenden Komponente wird es sich besonders empfehlen, wenn die pharmazeutische Zusammensetzung zur lokalen Applikation in Tumorzellen enthaltendem Gewebe hergerichtet ist, beispielsweise zur Injektion.Is it the tumor? a type in which tumor cells express MIMPD, normal cells the same type of fabric, however, it is particularly preferred if the substance binding to MIMPD is additionally a cytotoxic, radioactive and / or immunostimulating component. This ultimately leads to that practically exclusively Tumor cells killed be it by cytotoxicity or by attack the stimulated immune system while Normal cells in the tissue are almost completely preserved. In this embodiment the binding substance itself does not need to inhibit MIMPD to act, since the binding substance then only function as a marker must, which one carries the components to target tumor cells. In case of use a cytotoxic, radioactive and / or immunostimulating component it will be particularly recommended if the pharmaceutical composition prepared for local application in tissue containing tumor cells is, for example, for injection.

Definitionen.Definitions.

Im Rahmen dieser Beschreibung wird die Bezeichnung MIMPD als Oberbegriff für alle humanen Isoformen, Splice Varianten und regulatorische RNA, auf Nukleinsäuren- oder Aminosäurenbasis, verwendet. Mit diesen Begriffen mit umfaßt sind auch die im Rahmen dieser Beschreibung offenbarten kurzen Sequenzen. Weiterhin mit umfaßt sind auch Homologe, wobei die Homologie zumindest 80%, vorzugsweise mehr als 90%, höchstvorzugsweise mehr als 95%, beträgt, nicht jedoch Sequenz 275 aus US-6,225,054. Im Falle der Nukleinsäuresequenzen sind auch komplementäre oder allelische Varianten mit umfaßt. Weiterhin sind Sequenzen umfaßt, welche lediglich Teilsequenzen, beispielsweise ein Exon oder mehrere Exons, der explizit offenbarten Sequenzen oder komplementärer Sequenzen hierzu darstellen, mit der Maßgabe, daß diese Teilsequenzen im Falle der Nukleinsäuren eine für eine Hybridisierung mit einer erfindungsgemäßen Nukleinsäure hinreichende Länge, zumindest 50 Basen, aufweisen und im Falle der Proteine bzw. Peptide, ggf. codiert durch eine Nukleinsäure, mit zumindest gleicher Affinität an ein protein- oder peptidspezifisches Zielmoleküle binden. Es versteht sich, daß die Erfindung auch Expressionskassetten umfaßt, i.e. eine oder mehrere der erfindungsgemäßen Nukleinsäuresequenzen mit mindestens einer Kontroll- oder regulatorischen Sequenz. Eine solche Expressionskassette kann auch eine Sequenz für ein bekanntes Protein umfassen, wobei im Zuge der Translation ein Fusionsprotein aus einem bekannten Protein und einem erfindungsgemäßen Protein oder Peptid entsteht. Ebenso sind auch antisense Sequenzen zu den vorstehenden Nukleinsäuresequenzen umfaßt. Mit umfaßt sind auch Expressionsvektoren enthaltend erfindungsgemäße Nukleinsäuren sowie damit transformierte Wirtszellen, beispielsweise Säugerzellen, e.Coli oder Vertebratenzellen. Weiterhin sind RNA sowie damit korrelierende DNA und umgekehrt umfaßt, ebenso wie genomische DNA als auch korrelierte cDNA und umgekehrt. Schließlich sind, bezogen auf Aminosäure(teil)sequenzen, die hierfür codierenden Nukleinsäuren mit umfaßt.Within this description the term MIMPD as a generic term for all human isoforms, splice Variants and regulatory RNA, based on nucleic acids or amino acids, used. These terms also include those in the frame short sequences disclosed in this description. Continue with comprises are also homologues, the homology being at least 80%, preferably more than 90%, most preferably more than 95%, but not sequence 275 from US 6,225,054. In the case of nucleic acid sequences are also complementary or includes allelic variants. Sequences are also included, which only partial sequences, for example one exon or several exons, the explicitly disclosed sequences or complementary sequences represent with the proviso that these Partial sequences in the case of nucleic acids for hybridization with a Nucleic acid of the invention sufficient length, at least 50 bases, and in the case of the proteins or peptides, if appropriate encoded by a nucleic acid, with at least the same affinity bind to a protein or peptide specific target molecule. It is understood that the Invention also includes expression cassettes, i.e. one or more of the nucleic acid sequences according to the invention with at least one control or regulatory sequence. A such an expression cassette can also be a sequence for a known one Include protein, with in the course of translation a fusion protein from a known protein and a protein according to the invention or peptide is formed. Antisense sequences are also included above nucleic acid sequences includes. Includes are also expression vectors containing nucleic acids according to the invention and host cells transformed therewith, for example mammalian cells, e.Coli or vertebrate cells. Furthermore, RNA is correlated with it DNA and vice versa, as well as genomic DNA as well as correlated cDNA and vice versa. Finally are, based on amino acid (partial) sequences, the for this coding nucleic acids includes.

Als Inhibitor ist eine Verbindung oder Substanz bezeichnet, welche entweder die Bildung von MIMPD inhibiert oder gebildetes MIMPD in der Aktivität reduziert, bezogen auf die MIMPD in vitro oder in vivo Aktivität in Abwesenheit des Inhibitors. Insofern kann ein Inhibitor einerseits eine Substanz sein, welche in der Entstehungskaskade von MIMPD inhibierend eingreift. Auf der anderen Seite kann ein Inhibitor eine Substanz sein, welche mit gebildetem MIMPD eine Bindung eingeht, und zwar dergestalt, dass weitere physiologische Wechselwirkungen mit endogenen Substanzen zumindest reduziert sind.A compound is an inhibitor or substance that either inhibits the formation of MIMPD or formed MIMPD reduced in activity based on that MIMPD in vitro or in vivo activity in the absence of the inhibitor. In this respect, an inhibitor can on the one hand be a substance which interfering in the cascade of MIMPD. On the on the other hand, an inhibitor can be a substance that is associated with formed MIMPD binds in such a way that further physiological interactions with endogenous substances are at least reduced.

Mimikry-Moleküle sind Verbindungen, die den variablen Bereich, insbesondere den Bindungsbereich eines Antikörpers nachbilden und an gleicher Stelle eines Zielmoleküls binden wie der zu Grunde liegende Antikörper.Mimicry molecules are compounds that the replicate variable area, in particular the binding area of an antibody and bind in the same place as a target molecule lying antibodies.

Der Begriff der Antikörper umfaßt humane, humanisierte und nicht-humanisierte, polyklonale oder monoklonale Antikörper sowie Phage-Display-Antikörper, aber auch antiidiotypische oder Chimäre Antikörper sowie spezifische Fragmente der leichten und/oder der schweren Kette des variablen Bereiches zu Grunde liegender Antikörper vorstehender Art. Die Herstellung bzw. Gewinnung solcher Antikörper mit vorgegebenen Immunogenen ist dem Durchschnittsfachmann wohl vertraut und braucht nicht näher erläutert zu werden. Weiterhin umfaßt sind bispezifische Antikörper, welche einerseits an ein Auslösemolekül einer Immun-Effektorzelle (z.B. CD3, CD16, CD64) und andererseits an ein erfindungs gemäßes Antigen, beispielsweise ein membranaußenseitiges Loop, der Tumorzielzelle binden. Dies bewirkt letzendlich im Bindungsfall, daß die Tumorzelle getötet wird.The term antibody includes human, humanized and non-humanized, polyclonal or monoclonal antibody as well as phage display antibodies, but also anti-idiotypic or chimeric antibodies and specific fragments the light and / or heavy chain of the variable range underlying antibody above type. The production or production of such antibodies with given immunogens is well known to the average person skilled in the art and need no closer explained to become. Also includes are bispecific antibodies, which on the one hand attaches to a triggering molecule Immune effector cell (e.g. CD3, CD16, CD64) and on the other hand to one antigen according to the invention, for example a membrane outside Loop to bind the tumor target cell. Ultimately, this causes that the Tumor cell killed becomes.

Die galenische Herrichtung einer erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung kann in fachüblicher Weise erfolgen. Als Gegenionen für ionische Verbindungen kommen beispielsweise Na⁺, K⁺, Li⁺ oder Cyclohexylammonium infrage. Geeignete feste oder flüssige galenische Zubereitungsformen sind beispielsweise Granulate, Pulver, Dragees, Tabletten, (Mikro-) Kapseln, Suppositorien, Sirupe, Säfte, Suspensionen, Emulsionen, Tropfen oder injizierbare Lösungen (i.v., i.p., i.m.) sowie Präparate mit protrahierter Wirkstoff-Freigabe, bei deren Herstellung übliche Hilfsmittel wie Trägerstoffe, Spreng-, Binde-, Überzugs-, Quellungs-, Gleit- oder Schmiermittel, Geschmacksstoffe, Süßungsmittel und Lösungsvermittler, Verwendung finden. Als Hilfsstoffe sei Magnesiumcarbonat, Titandioxid, Lactose, Mannit und andere Zucker, Talcum, Milcheiweiß, Gelatine, Stärke, Zellulose und ihre Derivate, tierische und pflanzliche Öle wie Lebertran, Sonnenblumen-, Erdnussoder Sesamöl, Polyethylenglycole und Lösungsmittel, wie etwa steriles Wasser und ein- oder mehrwertige Alkohole, beispielsweise Glycerin, genannt. Eine erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung ist dadurch herstellbar, dass mindestens ein erfindungsgemäß verwendeter MIMPD-Inhibitor in definierter Dosis mit einem pharmazeutisch geeigneten und physiologisch verträglichen Träger und ggf. weiteren geeigneten Wirk-, Zusatz- oder Hilfsstoffen mit definierter Inhibitordosis gemischt und zu der gewünschten Darreichungsform hergerichtet ist.The pharmaceutical preparation of a pharmaceutical composition according to the invention can be carried out in a manner customary in the art. Counter ions for ionic compounds are, for example, Na ⁺ , K ⁺ , Li ⁺ or cyclohexylammonium. Suitable solid or liquid pharmaceutical preparation forms are, for example, granules, powders, dragees, tablets, (micro) capsules, suppositories, syrups, juices, suspensions, emulsions, drops or injectable solutions (iv, ip, im) and preparations with a protracted action Release of substances, in the production of which conventional auxiliaries such as carriers, explosives, binders, coatings, swelling agents, lubricants or lubricants, flavorings, sweeteners and solubilizers are used. Magnesium carbonate, titanium dioxide, lactose, mannitol and other sugars, talcum, milk protein, gelatin, starch, cellulose and their derivatives, animal and vegetable oils such as cod liver oil, sunflower, peanut or sesame oil, polyethylene glycols and solvents such as sterile water and a - or polyhydric alcohols, for example glycerol. A pharmaceutical composition according to the invention can be produced by mixing at least one MIMPD inhibitor used according to the invention in a defined dose with a pharmaceutically suitable and physiologically compatible carrier and, if appropriate, other suitable active ingredients, additives or auxiliaries with a defined inhibitor dose and preparing the desired dosage form ,

Tumorzellen exprimieren MIMPD differenziell, wenn Normalzellen des gleichen Gewebetyps dieses nicht exprimieren. Tumorzellen überexprimieren MIMPD spezifisch bzw. differenziell, wenn MIMPD im Vergleich zu Normalzellen des gleichen Gewebes in höherer, beispielsweise zumindest in doppelter, Menge exprimiert wird.Tumor cells express MIMPD differentially, if normal cells of the same tissue type do not express it. Overexpress tumor cells MIMPD specific or differential if MIMPD compared to Normal cells of the same tissue in higher, for example at least is expressed in double, quantity.

Zytotoxische Komponenten bzw. Gruppen sind Verbindungen, welche direkt oder indirekt Apoptose einleiten oder zumindest wachstumshemmend wirken. Solche Gruppen bzw. Verbindungen können neben Radioisotopen (z.B. 188Re, 213Bi, 99mTc, 90Y, 131J, 177Lu) insbesondere Zytostatika einschließlich sogenannter Prodrugs sein, welche in der Tumortherapie eingesetzt werden. Beispiele hierfür sind: Alkylantien (z.B. Mechlorethamin, Ifosfamid, Chlorambucil, Cyclophosphamid, Melphalan, Alkylsulfonate, Busulphan, Nitrosoharnstoffe, Carmustin, Lomustin, Semustin, Triazene, Dacarbazin), Antimetaboliten (z.B. Folsäure-Antagonisten, Methotrexat, Pyrimidin-Analoga, Fluoruracil, Fluordesoxyuridin, Cytarabin, Gemcitabin, Purin-Analoga, Mercaptopurin), Mitosehemmer (z.B. Vincaalkaloide, Vincristin, Vinblastin, Paclitaxal, Docetaxel, Protaxel), Epipodophyllotoxine (z.B. Etoposid, Teniposid), Antibiotika (z.B. Dactinomycin, Daunorubicin, Idarubicin, Anthracycline, Bleomycin, L-Asparaginase), Platinkomplexverbindungen (z.B. Cisplatin), Hormone und verwandte Verbindungen (z.B. Nebennierensindensteroide, Aminogluthetimid, Gestagene, Östrogene, Androgene, Antiöstrogene, Tamoxifen, Steriodanaloga, Flutamid). Bei Bindung einer solchen Verbindung mit einer an MIMPD bindenden Substanz erfolgt die Kopplung dergestalt, daß die Affinität zu MIMPD um nicht mehr als 90%, vorzugsweise 50%, bezogen auf die Substanz ohne zytostatische Gruppe, reduziert ist und die zytostatische Wirkung der Gruppe um nicht mehr als 90%, vorzugsweise 50%, bezogen auf die Verbindung ohne Substanz, reduziert ist.Cytotoxic components or groups are compounds that directly or indirectly induce apoptosis or at least act to inhibit growth. Such groups or connections can in addition to radioisotopes (e.g. 188Re, 213Bi, 99mTc, 90Y, 131J, 177Lu) especially cytostatics including so-called prodrugs which are used in tumor therapy. Examples for this are: Alkylating agents (e.g. mechlorethamine, ifosfamide, chlorambucil, cyclophosphamide, Melphalan, alkyl sulfonates, busulphan, nitrosoureas, carmustine, Lomustine, semustine, triazenes, dacarbazine), antimetabolites (e.g. Folic acid antagonists, methotrexate, Pyrimidine analogs, fluorouracil, fluorodeoxyuridine, cytarabine, gemcitabine, Purine analogs, mercaptopurine), mitosis inhibitors (e.g. vinca alkaloids, Vincristine, vinblastine, paclitaxal, docetaxel, protaxel), epipodophyllotoxins (e.g. etoposide, teniposide), antibiotics (e.g. dactinomycin, daunorubicin, Idarubicin, anthracycline, bleomycin, L-asparaginase), platinum complex compounds (e.g. cisplatin), hormones and related compounds (e.g. adrenal cortex steroids, Aminogluthetimide, progestogens, estrogens, Androgens, anti-estrogens, Tamoxifen, steroid analogs, flutamide). When binding such Coupling takes place with a substance that binds to MIMPD in such a way that the affinity to MIMPD by no more than 90%, preferably 50%, based on the Substance without a cytostatic group, is reduced and the cytostatic Effect of the group by no more than 90%, preferably 50% to the compound without substance.

Eine immunstimulierende Komponente ist meist ein Protein oder ein wirksamer Bestandteil hiervon, welches Zellen des Immunsystems stimuliert. Beispiele hierfür sind: Zytokine, wie M-CSF, GM-CSF, G-CSF, Interferone, wie IFN-alpha, beta, gamma, Interleukine wie IL-1 bis -16 (außer -8), human LIF, Chemokine wie Rantes, NICAF, MIP-1-alpha, -beta, NAP-1 und IL-8.An immunostimulating component is usually a protein or an effective component thereof, which Immune system cells stimulated. Examples for this are: Cytokines, such as M-CSF, GM-CSF, G-CSF, interferons, such as IFN-alpha, beta, gamma, interleukins such as IL-1 to -16 (except -8), human LIF, chemokines such as Rantes, NICAF, MIP-1-alpha, -beta, NAP-1 and IL-8.

Eine Reportergruppe ist ein Atom, Molekül oder eine Verbindung, welche in Verbindung mit einem hierauf abgestellten Assay den Nachweis der Reportergruppe und der somit mit der Reportergruppe verbundenen Verbindung oder Substanz ermöglicht. Beispiele für Reportergruppen und hiermit assoziierte Detektionsmethoden sind: 32P-Labeling und Intensitätsmessung mittels Phosphoimager. Viele weitere Beispiele sind dem Durchschnittsfachmann bekannt und bedürfen nicht der detaillierten Aufzählung.A reporter group is an atom, molecule or a connection in connection with one placed thereon Assay the detection of the reporter group and thus with the reporter group connected compound or substance. Examples of reporter groups and associated detection methods are: 32P labeling and intensity measurement using phosphoimager. Many other examples are of ordinary skill in the art known and need not the detailed list.

Eine an MIMPD bindende Substanz kann eine Substanz sein, welche ein MIMPD-Protein oder MIMPD-RNA bindet.A substance that binds to MIMPD can be a substance that binds a MIMPD protein or MIMPD RNA.

Der Begriff membranaußenständig bezeichnet Teile eines in oder an einem Membran befindlichen Proteins oder Peptids, welche die Membran nicht durchspannen oder nicht innerhalb der Membran eingebaut sind. Der Begriff membranaußenständig begrenzt nicht auf eine Seite der Membran; vielmehr kann ein membranaußenständiger Teil auf beliebigen Seiten der Membran angeordnet sein.The term external membrane designation Parts of a protein located in or on a membrane or Peptides that do not span or within the membrane the membrane are installed. The term external membrane limited not on one side of the membrane; rather, a part outside the membrane be arranged on any side of the membrane.

Detaillierte Beschreibung der Erfindung sowie Beispiele.Detailed description of the invention as well as examples.

Im Folgenden wird die Erfindung anhand von lediglich bevorzugte Ausführungsformen darstellenden Beispielen und Figuren näher erläutert. Es zeigen:The invention is described below of preferred embodiments only illustrative examples and figures explained. Show it:

1: MIMPD cDNA (a) und MIMPD Aminosäurensequenz (b), 1 : MIMPD cDNA (a) and MIMPD amino acid sequence (b),

2: genomische Organisation von MIMPD, 2 : genomic organization of MIMPD,

3: Topologiemodell von MIMPD (a) und Sequenzvergleich MIMPD mit konservierten Phosphatase Motiven (b), 3 : Topology model of MIMPD (a) and sequence comparison MIMPD with conserved phosphatase motifs (b),

4: Chip-basiertes Expressionsprofil für Brustkrebs, 4 : Chip-based expression profile for breast cancer,

5: Krebsgewebe Profiling, 5 : Cancer tissue profiling,

6: Quantifizierungen aus 5 zu Brustkrebs (a), Colonkrebs (b), Lungenkrebs (c), Ovarkrebs (d), Endometriumkrebs (e), Magenkrebs (f), Rectumkrebs (g) 6 : Quantifications from 5 for breast cancer (a), colon cancer (b), lung cancer (c), ovarian cancer (d), endometrial cancer (e), stomach cancer (f), rectal cancer (g)

7: in situ Hybridisierung in Uterus (7a) und Mamma (7b) Proben, 7 : in situ hybridization in uterus ( 7a ) and Mamma (7b) samples,

8: ein Hammerhead Ribozyme, welches MIMPD mRNA schneidet, 8th : a hammerhead ribozyme that cuts MIMPD mRNA,

9: antisense Sequenzen. 9 : antisense sequences.

In der 1a ist die erfindungsgemäße MIMPD cDNA Sequenz und in der 1b die hierdurch codierte Aminosäuresequenz dargestellt. Diesen Sequenzen entsprechen SEQ.-ID 1 und SEQ.-ID 2, respektive.In the 1a is the MIMPD cDNA sequence according to the invention and in the 1b the hereby co dated amino acid sequence shown. These sequences correspond to SEQ ID 1 and SEQ ID 2, respectively.

In der 2 ist die genomische Organisation des MIMPD Gens dargestellt. Es weist eine Größe von 133 kb auf und umfaßt sieben Exons. Die 5' und 3' nicht translatierten Bereiche (UTR) sind von ähnlicher Größe. Der Locus des Gens ist 10g26.13.In the 2 the genomic organization of the MIMPD gene is shown. It is 133 kb in size and contains seven exons. The 5 'and 3' non-translated areas (UTR) are of similar size. The locus of the gene is 10g26.13.

In der 3a ist ein Topologiemodell dargestellt, welches mit TMHMM Vers. 2.0 (A. Krogh et al., J. Mol. Biol. 305(3): 567-580 (2001) erstellt wurde. Man erkennt insgesamt sechs transmebrane Bereiche wobei 7 membranaußenständige Bereich gebildet werden. Insbesondere die membranaußenständigen Bereiche eignen sich als Targets für Diagnostika und/oder Therapeutika. 3b vergleicht Bereiche von MIMPD mit konservierten Phosphatase Bereichen gemäß der Literaturstelle J. Stukey et al., Protein Sci. 6: 469-472 (1997).In the 3a a topology model is shown, which was created with TMHMM Vers. 2.0 (A. Krogh et al., J. Mol. Biol. 305 (3): 567-580 (2001). A total of six transmebrane regions can be recognized, 7 membrane-external regions being formed The areas outside the membrane are particularly suitable as targets for diagnostics and / or therapeutics. 3b compares areas of MIMPD with conserved phosphatase areas according to J. Stukey et al., Protein Sci. 6: 469-472 (1997).

Beispiel 1: Chip-basiertes Expressionsprofil für Brustkrebs.Example 1: Chip-based Expression profile for Breast cancer.

Es wurden Mikrodissektionen aus Brusttumorgewebe und Brustnormalgewebe, möglichst aus der gleichen Patientin, durchgeführt und die RNA aus diesen Gewebeproben isoliert. Expressionsprofile von insgesamt 52 Brustgeweben wurden unter Einsatz eines DNA Chips auf Basis der Affymetrix Technologie untersucht. Die Ergebnisse sind in der 4 zusammengefaßt. MIMPD mRNA wurde verbreitet exprimiert in 84% (26/31) der analysierten invasiven ductalen Mammakarzinomen (IDC), während die MIMPD mRNA Expression in Normalgewebe in praktisch allen Fällen (12/13) unter dem Detektionslimit war. Expression in invasiven lobulären Mammakarzinomen (ILC) und Duktalkarzinomen in situ (DCIS) wurde zwar gefunden, ist aber nicht so vorherrschend wie im Falle der IDC. Im Einzelnen erkennt man in der 4 linksseitig die Ergebnisse von gepaarten Gewebeproben von neun verschiedenen Patientinnen, wobei die niedrigen Werte alle aus Normalgewebe und die hohen werte aus gepaartem Tumorgewebe rühren. Die rechte Seite der 4 zeigt Ergebnisse aus nicht-gepaarten Proben, wie vorstehend bereits erläutert. NE ist normales Epithelium, N1 sind Mammokarzinome mit Lymphknotenmetastasen, NO sind Mammakarzinome ohne Lymphknotenmetastasen, Nx sind Proben deren Lymphknotenstatus unbekannt ist.Microdissections from breast tumor tissue and normal breast tissue, if possible from the same patient, were carried out and the RNA was isolated from these tissue samples. Expression profiles of a total of 52 breast tissues were examined using a DNA chip based on Affymetrix technology. The results are in the 4 summarized. MIMPD mRNA was widely expressed in 84% (26/31) of the invasive ductal breast cancers (IDC) analyzed, while MIMPD mRNA expression in normal tissue was below the detection limit in almost all cases (12/13). Expression in invasive lobular breast cancer (ILC) and ductal cancer in situ (DCIS) has been found, but is not as prevalent as in the case of IDC. You can see in detail in the 4 on the left are the results of paired tissue samples from nine different patients, the low values being all from normal tissue and the high values from paired tumor tissue. The right side of the 4 shows results from unpaired samples, as previously explained. NE is normal epithelium, N1 are breast carcinomas with lymph node metastases, NO are breast carcinomas without lymph node metastases, Nx are samples whose lymph node status is unknown.

Beispiel 2: Überexpression vom MIMPD in verschiedenen Tumorgeweben.Example 2: Overexpression from MIMPD in various tumor tissues.

Ein Cancer Profiling Array (kommerzielles Produkt von Clontech) mit 240 aufgetragenen humanen cDNAs von Tumorund korrespondierenden Normalgeweben jeweils eines Patienten wurde unter Verwendung einer 32P markierten MIMPDspezifischen Sonde unter Einsatz eines Phosphoimagers analysiert. Die 5 (N = Normalgewebe, T = Tumorgewebe) zeigt eine vergleichsweise starke Überexpression in nahezu allen untersuchten Tumorgeweben. Die rechte Spalte zeigt Kontrollen sowie Expression in verschiedenen humanen Tumorze111inien. Oben rechts ist eine labelling Kontrolle für die Hybridisierung wiedergegeben; 1 pg MIMPD Plasmid-DNA wurden mittels der gelabelten Probe problemlos detektiert.A Cancer Profiling Array (commercial product from Clontech) with 240 applied human cDNAs from tumor and corresponding normal tissues from one patient each was analyzed using a 32P-labeled MIMPD-specific probe using a phosphoimager. The 5 (N = normal tissue, T = tumor tissue) shows a comparatively strong overexpression in almost all examined tumor tissues. The right column shows controls and expression in various human tumor lines. A labeling control for the hybridization is shown at the top right; 1 pg MIMPD plasmid DNA was easily detected using the labeled sample.

Im Einzelnen wurden die Ergebnisse aus der 5 gemäß den 6a bis 6g sowie der Tabelle 1 quantifiziert.The results of the 5 according to the 6a to 6g and Table 1 quantified.

Eine differenzielle Expression (pos) wurde angenommen bei zumindest 2-facher Überexpression von MIMPD in Tumorgewebe gegenüber Normalgewebe. Tabelle 1

A differential expression (pos) was assumed with at least 2-fold overexpression of MIMPD in tumor tissue compared to normal tissue. Table 1

Die 6a bis 6g zeigen die vorstehenden Ergebnisse in graphischer Darstellung und in der tabellarischen Reihenfolge.The 6a to 6g show the above results in graphical representation and in tabular order.

Beispiel 3: in-vivo Diagnostik von MIMPD mittels AntikörpernExample 3: in vivo diagnostics of MIMPD using antibodies

In diesem Beispiel wird die Markierung eines Tumors bzw. seiner Metastasen durch einen anti-MIMPD-Antikörper in vivo (Mausmodell) beschrieben. In NMRI-Nacktmäuse werden 2.000.000 MIMPD-transfizierte humane Zellen oder endogen exprimierende Zellen transplantiert. 30 Tage nach der Transplantation wird den Mäusen markierter Antikörper injiziert. Die Kontrolltiere werden mit einem nicht relevanten Antikörper behandelt. Wenige Stunden nach der Antikörperapplikation werden die Tiere getötet und alle Organe entnommen. Es erfolgt die Messung der relativen Anreicherung in Metastasen bzw. anderen Organen. Die Anreicherung sollte überwiegend im Tumor erfolgen.In this example, the marker a tumor or its metastases by an anti-MIMPD antibody in described in vivo (mouse model). 2,000,000 MIMPD transfected in NMRI nude mice human cells or endogenously expressing cells transplanted. Labeled antibodies are injected into the mice 30 days after the transplant. The control animals are treated with an irrelevant antibody. A few hours after the antibody application the animals are killed and removed all organs. The relative is measured Enrichment in metastases or other organs. The enrichment should predominantly done in the tumor.

Bei den anti-MIMPD Antikörpern handelt es sich um monoklonale Antikörper gegen humanes MIMPD Protein, konjugiert mit einem Trägerprotein, in einem nicht-humanen Säugetier. Die Herstellung monoklonaler Antikörper ist dem Durchschnittsfachmann bekannt. Zur Immunisierung können (erfindungsgemäße) MIMPD Peptide, rekombinantes MIMPD Protein sowie mit der cDNA von MIMPD transient oder stabil transfizierte Zellen oder die MIMPD cDNA verwendet werden.The anti-MIMPD antibodies act it is monoclonal antibodies against human MIMPD protein conjugated with a carrier protein, in a non-human mammal. The production of monoclonal antibodies is known to those of ordinary skill in the art known. For immunization can MIMPD peptides (according to the invention), recombinant MIMPD protein and transient with the MIMPD cDNA or stably transfected cells or the MIMPD cDNA can be used.

Beispiel 4: Immunhistochemischer Nachweis von MIMPD in Tumorzellen.Example 4: Immunohistochemical Detection of MIMPD in tumor cells.

Primäre Tumoren werden aus den Patienten mit Tumoren isoliert und als Paraffin bzw. Gefrierschnitte präpariert. Diese Schnitte werden mit einem anti-MIMPD-Antikörper auf die Überexpression von MIMPD in Tumorzellen untersucht. Darüber hinaus werden in NMRI-Nacktmäuse 2 Mio MIMPDtransfizierte humane Zellen oder endogen exprimierende humane Zellen transplantiert. Einen Monat nach der Transplantation werden die Mäuse getötet und Tumorgewebe entnommen und als Paraffin- bzw. Gefrierschnitte präpariert.Primary tumors emerge from the patient isolated with tumors and prepared as paraffin or frozen sections. These sections are over-expressed with an anti-MIMPD antibody investigated by MIMPD in tumor cells. In addition, 2 million MIMPD-transfected human cells or endogenously expressing human cells Cells transplanted. Be a month after the transplant the mice killed and tumor tissue taken and as paraffin or frozen sections prepared.

Die immunhistologische Untersuchung mit dem MIMPD-Antikörper zeigt höhere Expression von MIMPD in den Tumorzellen im Vergleich zu umliegenden Normalgewebe. Die Untersuchung erfolgt im Einzelnen durch Inkubation mit dem anti-MIMPD Antikörper als primärem Antikörper, einem biotinyliertem sekundären Antikörper, der gegen die Spezies gerichtet ist, aus der der Primärantikörper gewonnen wurde, und einer Streptavidin-gekoppelten Meerrettichperoxidase. Die Färbung erfolgt mit DAB als chromogenen Substrat (braune Färbung). Die Gegenfärbung erfolgt mit Hemalaun-Lösung (blaue Färbung). Es sind maligne und nichtmaligne Zellen unterscheidbar, wobei die malignen Zellen eine starke Färbung, i.e. hohen MIMPD Gehalt, aufweisen, während die nichtmalignen Zellen nur moderat gefärbt sind.The immunohistological examination with the MIMPD antibody higher Expression of MIMPD in the tumor cells compared to the surrounding Normal tissue. The examination is carried out in detail by incubation with the anti-MIMPD antibody as the primary Antibody, a biotinylated secondary Antibody, which is directed against the species from which the primary antibody is derived and a streptavidin-coupled horseradish peroxidase. The coloring done with DAB as a chromogenic substrate (brown color). The counterstaining is done with Hemalaun solution (blue color). Malignant and non-malignant cells can be distinguished, the malignant cells a strong staining, i.e. have high MIMPD content, while the non-malignant cells only moderately colored are.

Darüber hinaus kann die Untersuchung der Gewebeschnitte auch mittels Immunofluoreszenz erfolgen. Dafür wird der anti-MIMPD Antikörper entweder direkt mit einem Fluoreszenzfarbstoff markiert oder mit einem sekundären fluoreszenzmarkiertem Antikörper, der gegen die Spezies gerichtet ist, aus der der Primärantikörper gewonnen wurde. Die Auswertung erfolgt mittels Fluoreszenzmikroskopie bzw. mittels Laser Scanning Mikroskopie.In addition, the investigation the tissue sections are also made by immunofluorescence. For that the anti-MIMPD antibody either labeled directly with a fluorescent dye or with a secondary fluorescent labeled antibody, which is directed against the species from which the primary antibody is derived has been. The evaluation is carried out using fluorescence microscopy or using laser scanning microscopy.

Beispiel 5: RNA-InhibitorenExample 5: RNA inhibitors

In der 8 ist ein Hammerhead Ribozym dargestellt, das MIMPD an der dargestellten Stelle schneidet und so die Aktivität eventueller Translationsprodukte inhibiert oder zumindest reduziert. Als antisense Sequenzen kommen beispielsweise jene der 9 in Frage, welche nach Hybridisierung an die MIMPD mRNA zu deren Abbau führen.In the 8th a hammerhead ribozyme is shown which cuts MIMPD at the point shown and thus inhibits or at least reduces the activity of any translation products. Antisense sequences include, for example, those of 9 in question, which lead to their degradation after hybridization to the MIMPD mRNA.

Beispiel 6: RNA in situ Hybridisierung, Ovarialkarzinom Example 6: RNA in situ Hybridization, ovarian cancer

Gewebeproben aus Ovarialkarzinomgewebe wurde mit einer MIMPD spezifischen Sonde inkubiert und mit BM-Purple gefärbt. Die Gegenfärbung erfolgte mit Kernecht-Rot. Es waren maligne und nichtmaligne Epithelzellen unterscheidbar, wobei die malignen Zellen eine starke BM-Purple Färbung aufwiesen, was auf eine starke Expression von MIMPD RNA in den gefärbten Tumorzellen hinweist. Demgegenüber war die Färbung und damit Expression von MIMPD in normalen Brustepithelzellen nur sehr schwach. Die RNA in situ Hybridisierung bestätigt damit die Überexpression von MIMPD RNA in Tumoren, verglichen zu entsprechenden Normalgeweben (siehe 7a).Tissue samples from ovarian cancer tissue were incubated with a MIMPD-specific probe and stained with BM-Purple. The counterstaining was done with Kernecht-Rot. Malignant and non-malignant epithelial cells were distinguishable, the malignant cells having a strong BM-Purple staining, which indicates a strong expression of MIMPD RNA in the stained tumor cells. In contrast, the staining and thus expression of MIMPD in normal breast epithelial cells was only very weak. The RNA in situ hybridization thus confirms the overexpression of MIMPD RNA in tumors compared to corresponding normal tissues (see 7a ).

Beispiel 7: RNA in situ Hybridisierung, MammakarzinomExample 7: RNA in situ Hybridization, breast cancer

Es wurde wie in Beispiel 6 vorgegangen, nur daß Brustgewebe eingesetzt wurden. In der 7b sind Tumorzellen eines invasiven duktalen Mammakarzinoms zu erkennen, die eine starke BM-Purple Färbung aufweisen, was Beleg ist für eine starke MIMPD RNA Expression in diesen Tumorzellen ist. das zweite Bild zeigt die entsprechende Hybridisierung mit der sense RNA als Kontrolle. Hier ist erwartungsgemäß keine Färbung zu erkennen. Das dritte Bild zeigt eine Hämatoxilin/Eosin-Färbung des entsprechenden Tumorareals.The procedure was as in Example 6, except that breast tissue was used. In the 7b are Recognizing tumor cells of an invasive ductal breast cancer that have a strong BM-Purple staining, which is evidence of a strong MIMPD RNA expression in these tumor cells. the second picture shows the corresponding hybridization with the sense RNA as a control. As expected, no coloration can be seen here. The third picture shows a hematoxylin / eosin staining of the corresponding tumor area.

Claims

nucleic acid containing at least one partial sequence with a length of at least 12 nucleotides from SEQ.ID 1 or SEQ.ID 16.

Peptide or protein containing at least a partial sequence of one length of at least 4 amino acids SEQ ID 2 (MIMPD).

A peptide or protein according to claim 2 containing at least one Partial sequence of a length of at least 4 to 8 amino acids from one or more of the sequences SEQ.-ID 3 - 9 (areas outside the membrane) and / SEQ ID 10-15 (conserved areas), or consisting of one or more such partial sequences.

Use one for MIMPD encoding nucleic acid and / or a MIMPD peptide or protein for the detection of cancer or to detect a risk of the disease from cancer, wherein a tissue sample for over-transcription of MIMPD RNA or for overexpression of a MIMPD protein or peptide is examined.

Use according to claim 4, wherein a nucleic acid coding for MIMPD or a detector substance binding to MIMPD protein or peptide, preferably containing a reporter group is used, binding said nucleic acid and / or said protein or peptide semi-quantitatively to the detector substance or is detected quantitatively.

Use of a MIMPD RNA or a MIMPD protein or peptide for screening for substances that bind to it, especially for prospective agents for inhibiting said RNA or said Protein or peptide or according to prospective detector substances, wherein a prospectively binding substance or a mixture of such substances is contacted with said RNA or said protein or peptide, whereby binding events are determined with a binding assay, and where a binding prospective substance, if necessary after deconvolution, as suitable for the detection or treatment of cancer Substance is selected.

Use of a MIMPD inhibiting or binding substance for the preparation of a pharmaceutical composition for detection and / or treatment of cancer.

Use according to claim 7, wherein the substance is an antibody, which by immunization of a non-human mammal transfected with a MIMPD peptide or protein, or with MIMPD cDNA Cells, or with endogenously expressing MIMPD tumor cells, or is available with MIMPD made in insect cells, or a phage display antibody or an anti-idiotypic antibody is.

Use according to claim 7, wherein the substance is a mimicry compound of an antibody against a MIMPD peptide or protein.

Use according to claim 7, wherein the substance, an aptamer, an antisense RNA, an inhibitory RNA, or a ribozyme against MIMPD is.

Use according to one of claims 7 to 10, wherein the substance additionally a cytotoxic, radioactive and / or immunostimulating component wearing.

Use according to one of claims 7 to 11, wherein the pharmaceutical Composition for local or systemic application in tumor cells containing tissue is prepared.

Method for diagnosing a cancer, wherein a detector substance according to one of claims 4 to 12, in one embodiment with a reporter group, is applied to the tissue to be examined, in vitro or in vivo, the tissue to be examined then being subjected to a detection method step which is sensitive to the reporter group, and in the case of detection of a defined minimum value of the reporter group in the tissue the tissue is qualified as containing tumor cells.

A method of treating a cancer, including a pharmaceutical Composition according to one of claims 4 to 12 in a physiological effective dose is given to a patient.

Use or method according to any one of claims 4 to 14, wherein the cancer is breast cancer, uterine cancer, colon cancer, stomach cancer, ovarian cancer, lung cancer, and / or rectal cancer. Nucleotide sequence of the human MIMPD gene

SEQUENCE LISTING