DE10258051A1

DE10258051A1 - Use of substances that bind to HAT for the diagnosis and treatment of squamous cell carcinoma of the lungs

Info

Publication number: DE10258051A1
Application number: DE2002158051
Authority: DE
Inventors: Detlev Dr. Mennerich; Thomas Brümmendorf; Bernd Hinzmann; Esmeralda Heiden; Klaus Dr. Hermann; Henrik Dr. Kinnemann; Xinzhong Dr. Li; Stefan Dr. Röpcke; Eicke Dr. Staub; André ROSENTHAL
Original assignee: Metagen Pharmaceuticals GmbH
Current assignee: HEIDEN CASTANOS-VELEZ, ESMERALDA, DR., 10589 BERLI; HERMANN, KLAUS, DR., 12679 BERLIN, DE; HINZMANN, BERND, DR., 13127 BERLIN, DE
Priority date: 2002-12-11
Filing date: 2002-12-11
Publication date: 2004-07-22
Also published as: WO2004053496A1; AU2003289837A1

Abstract

Die Erfindung betrifft Verwendungen von HAT zur Diagnose und Behandlung von Lungentumoren, insbesondere Plattenepithelkarzinomen der Lunge, sowie zum Screenen nach Substanzen für solche Zwecke.The invention relates to uses of HAT for the diagnosis and treatment of lung tumors, in particular squamous cell carcinomas of the lungs, and for screening for substances for such purposes.

Description

Gebiet der ErfindungTerritory of invention

Die Erfindung betrifft neue Verwendungen von HAT oder daraus abgeleiteten Sequenzen zum Screenen nach daran bindenden Substanzen, sowie die Verwendung von an HAT bindenden Substanzen zur Diagnose und/oder Behandlung des Plattenepithelkarzinoms der Lunge.The invention relates to new uses of HAT or sequences derived therefrom for screening for binding Substances, as well as the use of substances binding to HAT Diagnosis and / or treatment of lung squamous cell carcinoma.

Hintergrund der Erfindung und Stand der Technikbackground of the invention and prior art

HAT steht für Human Airway Trypsin-like Protease. Die HAT cDNR codiert für ein 418 AS (AminoSäuren) langes integrales Membranprotein vom Typ II. Nach der Sekretion wird das Protein proteolytisch gespalten und somit die Protease Funktion aktiviert.HAT stands for Human Airway Trypsin-like Protease. The HAT encodes for a 418 AS (amino acids) long integral type II membrane protein. After secretion the protein is cleaved proteolytically and thus the protease Function activated.

In der Literaturstelle Yasuoka et al., Am. J. Resp. Cell ;olec. Biol. 16:300-308 (1997) wird die AUfreinigung und Identifizierung des HAT Proteins aus Sputum von Patienten mit chronischen Atemwegserkrankungen (COPD – chronic obstructive pulmonary disease) beschrieben. In immunhistochemischen Gewebeanfärbungen der chronischen Atemwegserkrankungen zeigt sich eine signifikante Ansfärbung der submucosalen serösen Drüsen der Hauptatemwege. Yamaoka et al., J. Biol. Chem. 273: 11895-11901 (1998) beschreiben die Klonierung der HAT cDNA aus Trachea, den Open Reading Frame und die Prozessierung des HAT Proteins. Demnach wird das unreife 418 AS Protein an die äussere Zellmembran transloziert und anschließend proteolytisch in eine 232 AS katalytisch aktive Protease gespalten, während dem an der Membran verankerten zweiten 186 AS Spaltprodukt keine katalytische Aktivität zugeschrieben wird. In der Literaturstelle WO 0172295 ist in allgemeiner Form die Diagnose und Behandlung von Lungenkrebserkrankungen, ohne nähere Spezifizierung des Tumorsubtyps, mittels eines Antikörpers zur Diagnose und mittels einer Tumorvakzine zur Therapie beschrieben.In the reference Yasuoka et al., Am. J. Resp. Cell; olec. Biol. 16: 300-308 (1997) becomes the AU cleaning and identification of the HAT protein from patients with sputum chronic respiratory diseases (COPD - chronic obstructive pulmonary disease). In immunohistochemical tissue staining the chronic respiratory diseases shows a significant Ansfärbung the submucosal serous glands of the main airways. Yamaoka et al., J. Biol. Chem. 273: 11895-11901 (1998) describe the cloning of the HAT cDNA from trachea, the Open reading frame and processing of the HAT protein. Accordingly the immature 418 AS protein translocates to the outer cell membrane and subsequently proteolytically cleaved into a 232 AS catalytically active protease during the second 186 AS cleavage product anchored to the membrane no catalytic activity is attributed. In the literature reference WO 0172295 is in general Form the diagnosis and treatment of lung cancer without further specification of the tumor subtype, by means of an antibody for diagnosis and by means of described a tumor vaccine for therapy.

Insbesondere Lungenkrebs ist eine mit zunehmendem Alter und im Zusammenhang mit Nikotinkonsum mit beachtlicher Inzidenz auftretende Erkrankung. Das Bronchialkarzinom gehört zu den häufigsten Todesursachen aller krebserkrankter Patienten in Nordamerika und Europa. Die 5-Jahres-Überlebesrate liegt bei nur 13%. Lediglich im Falle noch lokal begrenzter Lungentumorerkrankungen liegt diese Überlebensrate zwar bei 46%, jedoch werden nur 16% der Bronchialkarzinome in einem solchen frühen Stadium diagnostiziert. Bislang erfolgte die Diagnose in der Praxis histopathologisch. Die anschließende Therapie richtet sich nach dem Tumorstadium, der Lokalisation und Ausbreitung des Tumors sowie nach der körperlichen Verfassung des Patienten. Typischerweise wird bei einem nichtkleinzelligen Lungenkarzinom eine potentiell kurative Operation angewandt. Dies bezieht sich auf die Stadien I und II und in Verbindung mit postoperativer Strahlentherapie auch auf das Stadium IIIA. Eine primäre Operation ist jedoch nur bei 25-30% aller Patienten möglich. Im Stadium IIIA mit Lymphknotenmetastasen sowie im Stadium IIIB wird dagegen klassischerweise die Radiotherapie angewandt. In den letzten Jahren gewinnt bei diesen Patienten ein multimodaler Therapieansatz zunehmend an Bedeutung. Bei gering ausgeprägtem und vermutlich technisch vollständig resektablem N2 konkurrieren primäre Operation und Nachbestrahlung mit einem neoadjuvanten Therapieansatz und anschließender Operation. Das neoadjuvante Konzept mit initialer Chemotherapie oder Chemoradiotherapie sowie anschließender Operation hat sich in der fortgeschrittenen N2-Situation bzw. im Stadium IIIB weitgehend durchgesetzt. Im disseminierten Stadium IV dominiert die Chemotherapie als palliative Behandlung, z.T. ergänzt durch die Radiotherapie. Der Operative Eingriff mit einer Teilentfernung einzelner befallener Lungenlappen und anschließender Chemo- und/oder Radiotherapie hat verschiedene nachteilige Effekte auf die Physis und Psyche der Patienten, was in der Regel zu einer starken Einschränkung der Lebensqualität führt.Lung cancer in particular is one with age and related to nicotine use considerable incidence of disease. Bronchial carcinoma heard among the most common Causes of death of all cancer patients in North America and Europe. The 5-year survival rate is only 13%. Only in the case of locally limited lung tumor diseases is this survival rate Although 46%, only 16% of bronchial carcinomas are in one such early Stage diagnosed. So far, the diagnosis has been made in practice histopathology. The subsequent one Therapy depends on the tumor stage, location and Spread of the tumor as well as according to the patient's physical condition. typically, becomes a potential in non-small cell lung cancer curative operation applied. This applies to the stadiums I and II and also in connection with postoperative radiation therapy to stage IIIA. A primary However, surgery is only possible in 25-30% of all patients. in the Stage IIIA with lymph node metastases as well as stage IIIB in contrast, radiotherapy was traditionally used. In the last Years, a multimodal therapy approach has been used in these patients increasingly important. With less pronounced and probably technical Completely resectable N2 compete primary Surgery and post-radiation with a neoadjuvant therapy approach and then Surgery. The neoadjuvant concept with initial chemotherapy or chemoradiotherapy as well as subsequent surgery has become in the advanced N2 situation or in stage IIIB largely enforced. In disseminated stage IV, chemotherapy dominates as palliative treatment, partly added through radiotherapy. The surgical intervention with a partial removal individual affected lung lobes and subsequent chemotherapy and / or radiotherapy has various adverse effects on the physique and psyche of the Patients, which usually results in a severe restriction of the life quality leads.

Technisches Problem der Erfindungtechnical Problem of the invention

Der Erfindung liegt daher das technische Problem zugrunde, pharmazeutische Zusammensetzungen zur Diagnose, insbesondere Frühdiagnose, und/oder zur Behandlung des Bronchialkarzinoms anzugeben sowie Mittel zu deren Identifizierung.The invention therefore has the technical problem based, pharmaceutical compositions for diagnosis, in particular Early diagnosis, and / or for the treatment of bronchial carcinoma as well as funds their identification.

Grundzüge der Erfindung und bevorzugte Ausführungsformen.Basics of the invention and preferred Embodiments.

Zur Lösung dieses technischen Problems lehrt die Verwendung einer für HAT codierenden Nukleinsäure und/oder eines HAT Peptids oder Proteins zur Detektion des Plattenepithelkarzinoms der Lunge oder zur Detektion eines Risikos der Erkrankung an einem solchen Karzinom, wobei eine Plattenepithelprobe der Lunge auf Transkription oder Übertranskription von HAT RNA oder auf Expression oder Überexpression eines HAT Proteins untersucht wird. Eine an für HAT codierende Nukleinsäure oder eine an HAT Protein oder Peptid bindende Detektorsubstanz, vorzugsweise enthaltend eine Reportergruppe, kann verwendet werden, wobei Bindung besagter Nukleinsäure und/oder besagten Proteins oder Peptids an die Detektorsubstanz halbquantitativ oder quantitativ detektiert wird. In diesem Zusammenhang lehrt die Erfindung weiterhin ein Testsystem zur (in vitro) Detektion eines vorstehend genannten Karzinoms oder eines Risikos der Erkrankung hieran, enthaltend Mittel zur quantitativen Messung der Expression von HAT in Gewebeproben, wobei diese Mittel beispielsweise Mittel zur Amplifikation und spezifischen Detektion von HAT RNA und/oder eine Detektorsubstanz, insbesondere spezifisch für HAT Protein, sein können.To solve this technical problem, the use of a nucleic acid coding for HAT and / or a HAT peptide or protein for the detection of squamous cell carcinoma of the lung or for the detection of a risk of the disease of such a carcinoma teaches, wherein a squamous cell sample of the lung for transcription or over-transcription of HAT RNA or for expression or overexpression of a HAT protein is examined. A nucleic acid coding for HAT or a detector substance binding to HAT protein or peptide, preferably containing a reporter group, can be used, whereby binding of said nucleic acid and / or said protein or peptide to the detector substance is detected semi-quantitatively or quantitatively. In this context, the invention further teaches a test system for (in vitro) detection of a carcinoma mentioned above or a risk of disease thereon, comprising means for quantitatively measuring the expression of HAT in tissue samples, these means being, for example, means for amplifying and specifically detecting HAT RNA and / or a detec tors substance, in particular specific for HAT protein, can be.

Die Erfindung lehrt weiterhin die Verwendung einer HAT RNA oder eines HAT Proteins oder Peptids zum Screenen nach daran bindenden Substanzen, insbesondere prospektiven Wirkstoffen zur Inhibierung von besagter RNA oder besagtem Protein oder Peptid oder prospektiven Detektorsubstanzen, insbesondere in der vorstehend angegebenen Indikation, wobei eine prospektive Substanz oder eine Mischung solcher prospektiver Substanzen mit besagter RNA oder besagtem Protein oder Peptid kontaktiert wird, wobei mit einem Bindungsassay Bindungsereignisse festgestellt werden, und wobei eine bindende prospektive Substanz, ggf. nach Dekonvolutierung, selektiert wird. In diesen Zusammenhängen lehrt die Erfindung weiterhin ein Screeningsystem zur Ermittlung von für die Behandlung von vorstehenden Tumorerkrankungen geeigneten Wirksubstanzen enthaltend eine HAT Nukleinsäure oder ein HAT Protein bzw. Peptid, Mittel zur Bestimmung von (in vitro) Bindungsereignissen an die HAT Nukleinsäure oder an das HAT Protein bzw. Peptid, und/oder Mittel zur Bestimmung der (in vitro) Aktivität von HAT Protein. Hierbei kann HAT in einem zellfreien oder einem zellbasierten System, letzteres insbesondere aufweisend Plattenepitheltumorzellen der Lunge bzw. eine hieraus entwickelte Zelllinie, vorliegen. Mittel zur Bestimmung von Bindungsereignissen können beispielsweise natürlicherweise in normalen oder in Tumorzellen z.B. an die Proteasedomäne von HAT Protein bindende Substanzen bzw. Assoziationspartner umfassen, wobei über deren (freie) Konzentration bzw. Konzentrationsänderung bei Zugabe prospektiver Wirksubstanzen und/oder Detektorsubstanzen eine kompetitive Bindung einer bindenden Wirk- oder Detektorsubstanz bestimmt wird. Solche Mittel können aber auch physikalische bzw. physikalisch-chemische Methoden umfassen, wie beispielsweise Röntgenstrukturanalyse und/oder NMR, insbesondere zweidimensionale 1H/1H oder 15N/1H Korrealtionsspektroskopie. Hierbei werden Spektren vor und nach der Zugabe einer prospektiven Wirk- oder Detektorsubstanz miteinander verglichen und im Falle von Änderungen ist ein Bindungsereignis festgestellt. Es kann mit Spektren oder dergleichen entweder von HAT oder der prospektiven Substanz oder mit einer Kombination aus beidem gearbeitet werden. Selbstverständlich sind auch alle anderen fachüblichen Methoden der Bestimmung von Bindungsereignissen und/oder Proteinaktivitäten einsetzbar. Beispielsweise kann eine prospektive Substanz (oder mehrere Substanzen, räumlich voneinander getrennt) immobilisiert sein, wobei dann markiertes HAT aufgetragen wird. Ein Bindungsereignis wird dann nach Auftrag und folgender Spülung durch Detektion, ggf. ortlich aufgelöst, der Markierung gebundenen HATs festgestellt. Umgekehrt kann HAT immobilisiert sein und es wird eine markierte prospektive Substanz oder eine Mischung hieraus aufgetragen. Bindungsereignisse werden analog der vorstehenden Variante festgestellt.The invention further teaches Use of a HAT RNA or a HAT protein or peptide for Screening for substances that bind to it, especially prospective ones Active substances for inhibiting said RNA or said protein or peptide or prospective detector substances, especially in the indication given above, being a prospective substance or a mixture of such prospective substances with said RNA or said protein or peptide is contacted, with a binding assay, binding events are detected, and a binding prospective substance, if necessary after deconvolution, is selected. The invention further teaches in these contexts a screening system for determining for the treatment of the above Active substances suitable for tumor diseases containing a HAT nucleic acid or a HAT protein or peptide, means for determining (in vitro) binding events to the HAT nucleic acid or to the HAT protein or peptide, and / or means for determining the (in vitro) activity of HAT protein. Here HAT can be in a cell-free or a cell-based system, the latter in particular having squamous cell tumor cells of the Lungs or a cell line developed from them. medium to determine binding events, for example, naturally in normal or in tumor cells e.g. to the protease domain of HAT protein include binding substances or association partners, with their (Free) concentration or concentration change when adding prospective Active substances and / or detector substances form a competitive bond a binding active substance or detector substance is determined. Such Means can but also include physical or physico-chemical methods, such as X-ray structure analysis and / or NMR, in particular two-dimensional 1H / 1H or 15N / 1H correlation ion spectroscopy. This involves spectra before and after adding a prospective Active or detector substance compared with each other and in the case of changes a binding event is detected. It can be with spectra or the like either from HAT or the prospective substance or with a combination of both. Of course also all other usual ones Methods of determining binding events and / or protein activities can be used. For example can be a prospective substance (or several substances, spatially separated) be immobilized, in which case marked HAT is applied. A binding event is then carried out after application and subsequent rinsing Detection, if necessary localized, bound HATs found. Conversely, HAT can be immobilized and it will be a labeled prospective substance or mixture plotted from here. Binding events become analogous to the above Variant determined.

Die Erfindung lehrt schließlich die Verwendung einer HAT inhibierenden oder daran bindenden Substanz zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung und/oder Diagnose von Plattenepithelkarzinomen der Lunge.The invention finally teaches Use of a HAT inhibiting or binding substance for the manufacture of a pharmaceutical composition for treatment and / or diagnosis of squamous cell carcinoma of the lungs.

Die Substanz kann ein Antikörper sein, welcher durch Immunisierung eines nicht-menschlichen Säugetiers mit einem HAT Peptid oder Protein, mit hierfür codierender cDNA transfizierte Zellen, mit endogen ein solches Peptid oder Protein exprimierenden Tumorzellen, oder mit rekombinant hergestellten HAT Peptiden oder Proteinen, erhältlich ist, oder ein Phage-Display-Antikörper sein. Die Substanz kann aber auch eine Mimikryverbindung eines Antikörpers gegen ein HAT Peptid oder Protein sein. Die Substanz kann schließlich ein Aptamer, eine antisense RNA, ein Ribozym oder eine siRNA sein. Die Substanz kann zusätzlich eine zytotoxische und/oder immunstimulierende Komponente tragen.The substance can be an antibody which by immunizing a non-human mammal with a HAT peptide or protein, with cDNA coding for it Cells with endogenously expressing such a peptide or protein Tumor cells, or with recombinantly produced HAT peptides or Proteins, available is, or a phage display antibody. But the substance can also a mimicry compound of an antibody against a HAT peptide or be protein. Finally, the substance can be an aptamer, an antisense RNA, be a ribozyme or an siRNA. The substance can also be a wear cytotoxic and / or immunostimulating component.

Bevorzugt ist es, wenn die vorstehenden, an HAT Protein bindenden Substanzen in der Verwendung zu therapeutischen Zwecken spezifisch an das funktionell aktive Zentrum der Protease Domäne binden und das HAT Protein in seiner biologischen Aktivität inhibieren. Dies ist nicht erforderlich im Falle der Fusion bzw. Verbindung der Substanz mit einer zytotoxischen Komponente. Dies ist weiterhin nicht erforderlich, wenn die Substanz der Gewinnung eines antiidiotypischen Antikörpers dient, welcher vom Immunsystem eines Patienten aufgrund seiner nicht-humanisierten Form als körperfremd erkannt wird und dem Immunsystem ansonsten ein HAT-Antigen präsentiert.It is preferred if the above, HAT protein binding substances used in therapeutic Purposes specific to the functionally active center of the protease domain bind and inhibit the HAT protein in its biological activity. This is not necessary in the case of a merger or connection the substance with a cytotoxic component. This is still not required when extracting an anti-idiotypic substance antibody which is used by a patient's immune system due to its non-humanized Form as foreign to the body is recognized and otherwise a HAT antigen is presented to the immune system.

In Verwendungen zu diagnostischen Zwecken ist eine Bindung an das aktive Zentrum der Protease Domäne nicht erforderlich.In diagnostic uses Binding to the active center of the protease domain is not for purposes required.

Die pharmazeutische Zusammensetzung kann zur beliebigen Applikation, beispielsweise i.v. oder i.p. Injektion, hergerichtet sein. Eine Herrichtung zur lokalen Applikation in Tumorzellen enthaltendem Gewebe wird sich empfehlen im Falle des Einsatzes einer zytotoxischen Komponente.The pharmaceutical composition can for any application, e.g. i.v. or i.p. Injection, be prepared. A preparation for local application in tumor cells containing tissue will be recommended in case of using a cytotoxic component.

Die Erfindung läßt sich im Rahmen eines Verfahrens zur Diagnose einer Tumorerkrankung des Plattenepithels der Lunge verwenden, wobei eine Detektorsubstanz in einer Ausführungsform mit einer Reportergruppe in zu untersuchendes Gewebe, ggf. in vitro nach Gewebeentnahme, appliziert wird, wobei das zu untersuchende Gewebe dann einer Detektionsverfahrenstufe unterworfen wird, welche sensitiv für die Reportergruppe ist, und wobei im Fall der Detektion eines definierten Mindestwertes der Reportergruppe im Gewebe das Gewebe als Tumorzellen enthaltend qualifiziert wird, sowie eines Verfahrens zur Behandlung einer Tumorerkrankung des Plattenepithels der Lunge, wobei eine erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung in einer physiologisch wirksamen Dosis einem Patienten dargereicht wird. Im Falle der Diagnose kann zusätzlich oder alternativ eine Gewebeprobe mit einem erfindungsgemäßen Testsystem auf HAT Expression untersucht werden.The invention can be used in the context of a method for diagnosing a tumor disease of the squamous epithelium of the lungs, an embodiment of a detector substance having a reporter group being applied to the tissue to be examined, possibly in vitro after tissue removal, the tissue to be examined then being subjected to a detection method step is subjected, which is sensitive to the reporter group, and wherein in the case of the detection of a defined minimum value of the reporter group in the tissue the tissue is qualified as containing tumor cells, and a method for the treatment of a tumor disease of the squamous epithelium of the lungs, wherein a pharmaceutical composition according to the invention in a physiologically effective dose presented to a patient becomes. In the event of a diagnosis, a tissue sample can additionally or alternatively be examined for HAT expression using a test system according to the invention.

Die Erfindung beruht auf der Erkenntnis, daß HAT in Plattenepithelkarzinomen überexprimiert ist bzw. differenziell exprimiert wird, i.e. in besagten Tumorgeweben ist die Expression höher, verglichen mit normalen Zellen gleichen Gewebes, und der daraus herleitbaren technische Lehre, daß HAT als Zielmolekül bei der Diagnostik und Therapie dieser speziellen Tumorerkrankungen eingesetzt werden kann. HAT kann also als spezifischer Marker zur Identifizierung von Tumorzellen in den besagten Tumorgeweben dienen. Auf der anderen Seite bietet die Inhibierung von HAT die Möglichkeit, in die Tumor-spezifischen HAT Assoziationen mit anderen Prozessen in den Tumorzellen einzugreifen und somit letztendlich den tumorzellenspezifisch veränderten Stoffwechsel zu stören und zu einem Absterben oder zumindest einer Wachstumshemmung der Tumorzellen beizutragen.The invention is based on the knowledge that that HAT overexpressed in squamous cell carcinoma is or is expressed differentially, i.e. in said tumor tissues the expression is higher, compared to normal cells of the same tissue, and the ones that can be derived from them technical teaching that HAT as a target in the diagnosis and therapy of these special tumor diseases can be used. HAT can therefore be used as a specific marker for Identification of tumor cells in the said tumor tissues serve. On the other hand, the inhibition of HAT offers the possibility into the tumor-specific HAT associations with other processes intervene in the tumor cells and thus ultimately the tumor cell-specific changed Disrupt metabolism and to die off or at least inhibit growth Contribute to tumor cells.

Im Rahmen der Erfindung kann es sich empfehlen, im Vorfeld einer Behandlung mit einer erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung eine Probe aus einem Gewebe, welches als Tumorgewebe mit anderen Methoden identifiziert ist, zu entnehmen und die Gewebeprobe auf Expression bzw. Überexpression von HAT zu untersuchen. Alternativ kann mit einer erfindungsgemäßen Detektorsubstanz zur Diagnose in vivo auf HAT Abhängigkeit getestet werden. Wird eine Expression bzw. Überexpression von HAT gegenüber Normalgewebe gleichen Typs festgestellt, so ist die Anwendung der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung indiziert.In the context of the invention it can recommend in advance of treatment with a pharmaceutical according to the invention Composition a sample from a tissue, which is called tumor tissue identified with other methods, and take the tissue sample for expression or overexpression by HAT to investigate. Alternatively, with a detector substance according to the invention Tested for HAT dependence for in vivo diagnosis become. Is an expression or overexpression of HAT compared to normal tissue same type, the application of the pharmaceutical according to the invention Composition indexed.

Generell ist es im Rahmen der Erfindung möglich, patientenspezifisch auf differentielle Expression zu untersuchen, wobei Normalgewebeprobe und Tumorgewebeproben bzw. tumorverdächtige Gewebeproben dem (gleichen) Patienten entnommen und vergleichend auf Werte der HAT Expression untersucht werden.In general, it is possible within the scope of the invention to be patient-specific to examine for differential expression, taking normal tissue sample and tumor tissue samples or suspected tumor samples (same) Patients removed and examined for values of HAT expression become.

Handelt es sich bei dem Tumor um einem Typus, bei welchem Tumorzellen HAT exprimieren, Normalzellen gleichen Gewebetyps jedoch nicht, so ist es besonders bevorzugt, wenn die an HAT bindende Substanz zusätzlich eine zytotoxische und/oder immunstimulierende Komponente trägt. Dies führt dann letztendlich dazu, dass praktisch ausschließlich Tumorzellen getötet werden, sei es durch die Zytotoxizität, sei es durch Angriff durch das stimulierte Immunsystem, während Normalzellen in dem Gewebe praktisch vollständig erhalten bleiben. In dieser Ausführungsform braucht die bindende Substanz selbst nicht inhibierend auf HAT zu wirken, da die bindende Substanz dann lediglich als Marker funktionieren muß, welcher die Komponenten zu Ziel-Tumorzellen trägt. Im Falle des Einsatzes einer zytotoxischen Komponente wird es sich besonders empfehlen, wenn die pharmazeutische Zusammensetzung zur lokalen Applikation in Tumorzellen enthaltendem Gewebe hergerichtet ist, beispielsweise zur Injektion.Is it the tumor? a type in which tumor cells express HAT, normal cells the same type of fabric, however, it is particularly preferred if the substance binding to HAT is additionally a cytotoxic and / or immunostimulating component. this leads to then ultimately that almost exclusively tumor cells are killed, be it through cytotoxicity, be it through attack by the stimulated immune system during normal cells in the tissue practically completely remain. In this embodiment the binding substance itself does not inhibit HAT act, since the binding substance then only has to function as a marker, which carries the components to target tumor cells. In the event of The use of a cytotoxic component will make it special recommend if the pharmaceutical composition to local Application is prepared in tissue containing tumor cells, for example for injection.

Definitionen und weitere Ausführungsformen der Erfindung.Definitions and more embodiments the invention.

Die Nukleinsäure- sowie Proteinsequenz sind in den 1 und 2 dargestellt (Seq.-ID No. 1 und 2). Das funktionell aktive Zentrum der Protease Domäne erstreckt sich dabei von AS 187 bis AS 418 (jeweils einschließlich).The nucleic acid and protein sequence are in the 1 and 2 shown (Seq. ID No. 1 and 2). The functionally active center of the protease domain extends from AS 187 to AS 418 (each inclusive).

Im Rahmen dieser Beschreibung wird die Bezeichnung HAT für alle humanen Isoformen, bekannt oder neu, auf Nukleinsäuren- oder Aminosäurenbasis, verwendet. Mit diesen Begriffen mit umfaßt sind auch die im Rahmen dieser Beschreibung offenbarten kurzen Sequenzen, welche aus den Isoformen stammen, beispielsweise Immunisierungssequenzen. Weiterhin mit umfaßt sind auch Homologe, wobei die Homologie zumindest 80%, vorzugsweise mehr als 90%, höchstvorzugsweise mehr als 95%, beträgt, berechnet mit dem Programm MEGALIGN (DNASTAR LASERGENE) in der zum Zeitpunkt der vorliegenden Anmeldung aktuellen Fassung. Im Falle der Nukleinsäuresequenzen sind auch komplementäre oder allelische Varianten mit umfaßt. Weiterhin sind Sequenzen umfaßt, welche lediglich Teilsequenzen der explizit offenbarten Sequenzen, beispielsweise ein Exon oder mehrere Exons, oder komplementärer Sequenzen hierzu darstellen, mit der Maßgabe, daß diese Teilsequenzen im Falle der Nukleinsäuren eine für eine Hybridisierung mit einer erfindungsgemäßen Nukleinsäure hinreichende Länge, zumindest 50 Basen, aufweisen und im Falle der Proteine bzw. Peptide mit zumindest gleicher Affinität an ein protein- oder peptidspezifisches Zielmolekül binden. Weiterhin sind alle mit erfindungsgemäßen Nukleinsäuren hybridisierende Nukleinsäuren umfaßt, nämlich solche, die unter stringenten Bedingungen (5°C bis 25°C unterhalb der Aufschmelztemperatur; siehe ergänzend J.M. Sambrook et al., A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989) und E.M. Southern, J Mol Biol, 98:503ff (1975)) hybridisieren. Es versteht sich, daß die Erfindung auch Expressionskassetten umfaßt, i.e. eine oder mehrere der erfindungsgemäßen Nukleinsäuresequenzen mit mindestens einer operativ verbundenen Kontroll- oder regulatorischen Sequenz. Eine solche Expressionskassette kann auch eine Sequenz für ein bekanntes Protein umfassen, wobei im Zuge der Translation ein Fusionsprotein aus einem bekannten Protein und einem erfindungsgemäßen Protein oder Peptid entsteht. Ebenso sind auch antisense Sequenzen zu den vorstehenden Nukleinsäuresequenzen umfaßt. Schließlich sind. RNA sowie damit korrelierende DNA und umgekehrt umfaßt, ebenso wie genomische DNA als auch korrelierte cDNA und umgekehrt.Within this description the designation HAT for all human isoforms, known or new, on nucleic acids or Amino acid based used. These terms also include those in the frame this description disclosed short sequences, which from the Isoforms originate, for example immunization sequences. Farther includes are also homologues, the homology being at least 80%, preferably more than 90%, most preferably more than 95%, calculated with the program MEGALIGN (DNASTAR LASERGENE) in the at Date of the current application. In case of nucleic acid sequences are also complementary or includes allelic variants. There are also sequences comprises which are only partial sequences of the explicitly disclosed sequences, for example one or more exons, or complementary sequences represent, with the proviso that this Partial sequences in the case of nucleic acids for hybridization with a sufficient nucleic acid according to the invention Length, have at least 50 bases, and in the case of proteins or peptides with at least the same affinity bind to a protein or peptide specific target molecule. Furthermore, all are hybridizing with nucleic acids according to the invention nucleic acids comprises namely those those under stringent conditions (5 ° C to 25 ° C below the melting temperature; see additional J.M. Sambrook et al., A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989) and E.M. Southern, J Mol Biol, 98: 503ff (1975)) hybridize. It is understood that the Invention also includes expression cassettes, i.e. one or more of the nucleic acid sequences according to the invention with at least one operationally related control or regulatory Sequence. Such an expression cassette can also be a sequence for a known protein include, in the course of translation a fusion protein from a known protein and a protein according to the invention or peptide is formed. Antisense sequences are also included above nucleic acid sequences includes. Finally are. RNA as well as correlating DNA and vice versa, likewise like genomic DNA as well as correlated cDNA and vice versa.

Im Zusammenhang mit erfindungsgemäßen Verwendungen umfassen die Begriffe der HAT Nukleinsäuren oder Protein bzw. Peptide neben den Volllängen der offenbarten Sequenzen (siehe auch vorstehender Absatz) auch Teilsequenzen hieraus, und zwar mit einer Mindestlänge von 12 bis 30 Nukleotiden, vorzugsweise 30 bis 90 Nukleotiden, im Falle der Nukleinsäuren und einer Mindestlänge von 4 bis 10 Aminosäuren, vorzugsweise 10 bis 30 Aminosäuren, im Falle der Peptide oder Proteine. Eine wichtige Teilsequenz ist jene des funktionell aktiven Zentrums der Protease Domäne, wobei auch kürzere Teilsequenzen hieraus brauchbar sind. Diese Teilsequenzen können in ansonsten von HAT verschiedene Nukleinsäuren- oder Protein- bzw. Peptidsequenzen eingebaut sein.In connection with uses according to the invention, the terms HAT include nucleic acids or protein or peptides in addition to the Voll lengths of the disclosed sequences (see also the preceding paragraph) also partial sequences thereof, with a minimum length of 12 to 30 nucleotides, preferably 30 to 90 nucleotides, in the case of nucleic acids and a minimum length of 4 to 10 amino acids, preferably 10 to 30 amino acids, in the case of peptides or proteins. An important partial sequence is that of the functionally active center of the protease domain, although shorter partial sequences from this can also be used. These partial sequences can be incorporated into nucleic acid or protein or peptide sequences that are otherwise different from HAT.

Der Begriff der Behandlung umfaßt auch die Prophylaxe.The concept of treatment also includes prophylaxis.

Als Inhibitor ist eine Verbindung oder Substanz bezeichnet, welche entweder die Bildung von HAT Protein inhibiert oder gebildetes HAT Protein in der Aktivität reduziert, bezogen auf die HAT Aktivität in Abwesenheit des Inhibitors. Insofern kann ein Inhibitor einerseits eine Substanz sein, welche in der Entstehungskaskade von HAT inhibierend eingreift. Auf der anderen Seite kann ein Inhibitor eine Substanz sein, welche mit gebildetem HAT eine Bindung eingeht, und zwar dergestalt, dass weitere physiologische Wechselwirkungen mit endogenen Substanzen zumindest reduziert sind.A compound is an inhibitor or substance that denotes either the formation of HAT protein inhibits or reduces the formation of HAT protein, based on HAT activity in Absence of the inhibitor. In this respect, on the one hand, an inhibitor be a substance that inhibits in the cascade of HAT intervenes. On the other hand, an inhibitor can be a substance which forms a bond with formed HAT, in such a way that further physiological interactions with endogenous substances at least are reduced.

Mimikry-Moleküle sind Verbindungen, die den variablen Bereich, insbesondere den Bindungsbereich eines Antikörpers, nachbilden und an gleicher Stelle eines Zielmoleküls binden, wie der zu Grunde liegende Antikörper.Mimicry molecules are compounds that the emulate a variable region, in particular the binding region of an antibody and bind in the same place as a target molecule lying antibodies.

Der Begriff der Antikörper umfaßt polyklonale Antikörper, monoklonale Antikörper, nicht-humane, humane und humanisierte Antikörper, sowie Phage-Display-Antikörper, aber auch chimäre Antikörper sowie spezifische Fragmente der leichten und/oder der schweren Kette des variablen Bereiches zu Grunde liegender Antikörper vorstehender Art sowie anti-idiotypische Antikörper. Die Herstellung bzw. Gewinnung solcher Antikörper mit vorgegebenen Immunogenen ist dem Durchschnittsfachmann wohl vertraut und braucht nicht näher erläutert zu werden. Weiterhin umfaßt der Begriff der Antikörper bispezifische Antikörper. Bispezifische Antikörper kombinieren eine definierte Immunzellaktivität mit einer spezifischen Tumorzellerkennung, wodurch Tumorzellen getötet werden. Ein bispezifischer Antikörper bindet einerseits an ein Auslösemolekül der Immun-Effektorzelle (z.B. CD3, CD16, CD64) und andererseits an Antigene der Tumorzielzelle.The term antibody includes polyclonal antibodies, monoclonal Antibody, non-human, human and humanized antibodies, as well as phage display antibodies, however also chimeric Antibodies as well specific fragments of the light and / or heavy chain of the variable range of the underlying antibodies of the above type and anti-idiotypic antibodies. The production or extraction of such antibodies with predetermined immunogens is well known to the average specialist and need not be explained in more detail become. Also includes the concept of antibodies bispecific antibodies. Bispecific antibodies combine a defined immune cell activity with a specific tumor cell recognition, thereby killing tumor cells become. A bispecific antibody binds to a trigger molecule of the immune effector cell (e.g. CD3, CD16, CD64) and on the other hand to antigens of the tumor target cell.

Die galenische Herrichtung einer erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung kann in fachüblicher Weise erfolgen. Als Gegenionen für ionische Verbindungen kommen beispielsweise Na⁺, K⁺, Li⁺ oder Cyclohexylammonium infrage. Geeigente feste oder flüssige galenische Zubereitungsformen sind beispielsweise Granulate, Pulver, Dragees, Tabletten, (Mikro-) Kapseln, Suppositorien, Sirupe, Säfte, Suspensionen, Emulsionen, Tropfen oder injizierbare Lösungen (i.v., i.p., i.m.) sowie Präparate mit protrahierter. Wirkstoff-Freigabe, bei deren Herstellung übliche Hilfsmittel wie Trägerstoffe, Spreng-, Binde-, Überzugs-, Quellungs-, Gleit- oder Schmiermittel, Geschmacksstoffe, Süßungsmittel und Lösungsvermittler, Verwendung finden. Als Hilfsstoffe sei Magnesiumcarbonat, Titandioxyd, Lactose, Mannit und andere Zucker, Talcum, Milcheiweiß, Gelatine, Stärke, Zellulose und ihre Derivate, tierische und pflanzliche Öle wie Lebertran, Sonnenblumen-, Erdnuss- oder Sesamöl, Polyethylenglycole und Lösungsmittel, wie etwa steriles Wasser und ein- oder mehrwertige Alkohole, beispielsweise Glycerin, genannt. Eine erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung ist dadurch herstellbar, dass mindestens ein erfindungsgemäß verwendeter Inhibitor in definierter Dosis mit einem pharmazeutisch geeigneten und physiologisch verträglichen Träger und ggf. weiteren geeigneten Wirk-, Zusatz- oder Hilfsstoffen mit definierter Inhibitordosis gemischt und zu der gewünschten Darreichungsform hergerichtet ist.The pharmaceutical preparation of a pharmaceutical composition according to the invention can be carried out in a manner customary in the art. Counter ions for ionic compounds are, for example, Na ⁺ , K ⁺ , Li ⁺ or cyclohexylammonium. Suitable solid or liquid pharmaceutical preparation forms are, for example, granules, powders, dragees, tablets, (micro) capsules, suppositories, syrups, juices, suspensions, emulsions, drops or injectable solutions (iv, ip, im) and preparations with a protracted one. Active ingredient release, in the production of which conventional auxiliaries such as carriers, explosives, binders, coatings, swelling agents, lubricants or lubricants, flavorings, sweeteners and solubilizers are used. Auxiliaries include magnesium carbonate, titanium dioxide, lactose, mannitol and other sugars, talc, milk protein, gelatin, starch, cellulose and its derivatives, animal and vegetable oils such as cod liver oil, sunflower, peanut or sesame oil, polyethylene glycols and solvents such as sterile water and mono- or polyhydric alcohols, for example glycerol. A pharmaceutical composition according to the invention can be produced by mixing at least one inhibitor used according to the invention in a defined dose with a pharmaceutically suitable and physiologically compatible carrier and, if appropriate, other suitable active ingredients, additives or auxiliaries with a defined inhibitor dose and preparing the desired dosage form.

Tumorzellen exprimieren HAT differenziell, wenn Normalzellen des gleichen Gewebetyps (des gleichen oder verschiedener Probanden) dieses nicht exprimieren. Tumorzellen überexprimieren HAT spezifisch bzw. differenziell, wenn HAT im Vergleich zu Normalzellen des gleichen Gewebetyps zumindest in doppelter Menge exprimiert wird.Tumor cells express HAT differentially when Normal cells of the same tissue type (the same or different Subjects) did not express this. Overexpress tumor cells HAT specific or differential if HAT compared to normal cells of the same tissue type are expressed at least in twice the amount becomes.

Zytotoxische Komponenten bzw. Gruppen sind Verbindungen, welche direkt oder indirekt Apoptose einleiten bzw. zu Nekrose führen oder zumindest wachstumshemmend wirken. Solche Gruppen bzw. Verbindungen können neben Radioisotopen (z.B. 188Re, 213Bi, 99mTc, 90Y, 131J, 177Lu) insbesondere Zytostatika sein, welche in der Tumortherapie eingesetzt werden. Beispiele hierfür sind: Alkylantien (z.B. Mechlorethamin, Ifosfamid, Chlorambucil, Cyclophosphamid, Melphalan, Alkylsulfonate, Busulphan, Nitrosoharnstoffe, Carmustin, Lomustin, Semustin, Triazene, Dacarbazin), Antimetaboliten (z.B. Folsäure-Antagonisten, Methotrexat, Pyrimidin-Analoga, Fluoruracil, Fluordesoxyuridin, Cytarabin, Gemcitabin, Purin-Analoga, Mercaptopurin), Mitosehemmer (z.B. Vincaalkaloide, Voncristin, Vinblastin, Paclitaxal, Docetaxel, Protaxel), Epipodophyllotoxine (z.B. Etoposid, Teniposid), Antibiotika (z.B. Dactinomycin, Daunorubicin, Idarubicin, Anthracycline, Bleomycin, L-Asparaginase), Platinkomplexverbindungen (z.B. Cisplatin), Hormone und verwandte Verbindungen (z.B. Nebennierenrindensteroide, Aminogluthetimid, Gestagene, Östrogene, Androgene, Antiöstrogene, Tamoxifen, Steriodanaloga, Flutamid). Bei Bindung einer solchen Verbindung mit einer an HAT bindenden Substanz erfolgt die Kopplung dergestalt, daß die Affinität zu HAT um nicht mehr als 90%, vorzugsweise 50%, bezogen auf die Substanz ohne zytostatische Gruppe, reduziert ist und die zytostatische Wirkung der Gruppe um nicht mehr als 90%, vorzugsweise 50%, bezogen auf die Verbindung ohne Substanz, reduziert ist.Are cytotoxic components or groups Compounds that directly or indirectly induce apoptosis or lead to necrosis or at least act to inhibit growth. Such groups or connections can in addition to radioisotopes (e.g. 188Re, 213Bi, 99mTc, 90Y, 131J, 177Lu) in particular Be cytostatics, which are used in tumor therapy. Examples of this are: alkylating agents (e.g. mechlorethamine, ifosfamide, chlorambucil, Cyclophosphamide, melphalan, alkyl sulfonates, busulphan, nitrosoureas, Carmustine, lomustine, semustine, triazenes, dacarbazine), antimetabolites (e.g. folic acid antagonists, Methotrexate, pyrimidine analogues, fluorouracil, fluorodeoxyuridine, Cytarabine, gemcitabine, purine analogs, mercaptopurine), mitotic inhibitors (e.g. vinca alkaloids, Voncristin, Vinblastin, Paclitaxal, Docetaxel, Protaxel), epipodophyllotoxins (e.g. etoposide, teniposide), antibiotics (e.g. dactinomycin, daunorubicin, idarubicin, anthracycline, bleomycin, L-asparaginase), platinum complex compounds (e.g. cisplatin), hormones and related compounds (e.g. adrenal cortex steroids, aminogluthetimide, Progestogens, estrogens, Androgens, anti-estrogens, Tamoxifen, steroid analogs, flutamide). When binding such Coupling takes place with a substance that binds to HAT in such a way that the affinity to HAT by no more than 90%, preferably 50%, based on the Substance without a cytostatic group, is reduced and the cytostatic Effect of the group by no more than 90%, preferably 50% to the compound without substance.

Eine immunstimulierende Komponente ist meist ein Protein oder ein wirksamer Bestandteil hiervon, welches Zellen des Immunsystems stimuliert. Beispiele hierfür sind: Zytokine, wie M-CSF, GM-CSF, G-CSF, Interferone, wie IFN-alpha, -beta, -gamma, Interleukine wie IL-1 bis -16 (außer -8), human LIF, Chemokine wie Rantes, MCAF, MIP-1-alpha, -beta, NAP-1 und IL-8.An immunostimulating component is usually a protein or an effective component thereof, which Immune system cells stimulated. Examples for this are: Cytokines, such as M-CSF, GM-CSF, G-CSF, interferons, such as IFN-alpha, -beta, -gamma, interleukins such as IL-1 to -16 (except -8), human LIF, chemokines such as Rantes, MCAF, MIP-1-alpha, -beta, NAP-1 and IL-8.

Eine Reportergruppe ist ein Atom, Molekül oder eine Verbindung, welche in Verbindung mit einem hierauf abgestellten Assay den Nachweis der Reportergruppe und der somit mit der Reportergruppe verbundenen Verbindung oder Substanz ermöglicht. Beispiele für Reportergruppen und hiermit assoziierte Detektionsmethoden sind: 32P-Labeling und Intensitätsmessung mittels Phosphoimager. Viele weitere Beispiele sind dem Durchschnittsfachmann bekannt und bedürfen nicht der detaillierten Aufzählung.A reporter group is an atom, Molecule or a connection which in connection with one placed thereon Assay the detection of the reporter group and thus with the reporter group connected compound or substance. Examples of reporter groups and associated detection methods are: 32P labeling and intensity measurement using phosphoimager. Many other examples are known to those of ordinary skill in the art and need not the detailed list.

Eine an HAT bindende Substanz kann eine Substanz sein, welche an ein HAT Protein oder eine HAT RNA bindet.A substance that binds to HAT can be a substance that binds to a HAT protein or a HAT RNA binds.

Im Rahmen der vorstehenden Definition gegenüber dem engen Wortsinn erweiterte Begriffsbestimmungen umfassen auch die bestimmten Begriffe im engen Wortsinn.As part of the above definition across from The narrow sense of the word also includes expanded definitions the certain terms in the narrow sense of the word.

Beispiele.Examples.

Im Folgenden wird die Erfindung anhand von lediglich bevorzugte Ausführungsformen darstellenden Beispielen und Figuren näher erläutert. Es zeigen:The invention is described below of preferred embodiments only illustrative examples and figures explained. Show it:

1: Nukleinsäuresequenz von HAT 1 : Nucleic acid sequence of HAT

2: Aminosäurensequenz von HAT 2 : HAT amino acid sequence

3: Chipanalyse zur differenziellen Expression von HAT in Lungentumorgeweben, insbesondere im Subtyp des Plattenepithelkarzinoms, aus 26 Patienten, 3 : Chip analysis for the differential expression of HAT in lung tumor tissues, especially in the subtype of squamous cell carcinoma, from 26 patients,

4: Northern-Blot-Verfahren des sogenannten Cancer Profiling Array zur differenziellen Expression von HAT im Lungentumorgewebe, insbesondere im Subtyp des Plattenepithelkarzinoms, ausgehend von 21 Patienten, 4 : Northern blot method of the so-called Cancer Profiling Array for the differential expression of HAT in lung tumor tissue, in particular in the subtype of squamous cell carcinoma, based on 21 patients,

5: Tagman-Analyse zur differenziellen Expression von HAT im Lungentumorgewebe (nach erfolgter Lasergestützter Mikrodissektion der Normalepithelien und Tumorzellen), insbesondere im Subtyp des Plattenepithelkarzinoms, aus 16 Patienten, 5 : Tagman analysis for the differential expression of HAT in lung tumor tissue (after laser-assisted microdissection of normal epithelia and tumor cells), in particular in the subtype of squamous cell carcinoma, from 16 patients,

6: Tagman-Analyse zur differenziellen Expression von HAT im Lungentumorgewebe (bulk), insbesondere im Subtyp des Plattenepithelkarzinoms, aus 13 Patienten, 6 : Tagman analysis for the differential expression of HAT in lung tumor tissue (bulk), in particular in the subtype of squamous cell carcinoma, from 13 patients,

7: Tagman-Analyse zur differenziellen Expression von HAT im Gewebe der Luftröhre (Trachea), des Gebärmutterhalses (Cervix), der Milz (Spleen) und des Magens (Stomach) ausgehend von 26 humanen Normalgeweben. 7 : Tagman analysis for the differential expression of HAT in the tissues of the trachea, cervix, cervix, spleen and stomach based on 26 normal human tissues.

Beispiel 1: Überexpression von HAT im Plattenepithelkarzinom der LungeExample 1: Overexpression of HAT in squamous cell carcinoma of the lungs

Gepaartes Tumor- und Normalgewebe wurde im Wege der Lasermikrodissektion von 26 Patienten entnommen. Die daraus präparierte RNA wurde amplifiziert, mit Digoxygenin gelabelt und auf einen DNA Chip mit Hilfe der Affymetrix Technologie hybridisiert. Die Ergebnisse der Analyse des Chips sind in der 3 dargestellt. Man erkennt, daß in 11/16 der Plattenepithelkarzinome die Expression um zumindest den Faktor 2 erhöht ist.Paired tumor and normal tissue were removed by laser microdissection from 26 patients. The RNA prepared from it was amplified, labeled with digoxygenin and hybridized on a DNA chip using Affymetrix technology. The results of the analysis of the chip are in the 3 shown. It can be seen that in 11/16 of squamous cell carcinomas the expression is increased by at least a factor of 2.

5 zeigt Taqman Ergebnisse der Expression von HAT in verschiedenen Subtypen aus 16 Patienten. Man erkennt auch hier, dass die Expression spezifisch im Plattenepithelkarzinom beachtlich erhöht ist. 5 Taqman shows results of HAT expression in different subtypes from 16 patients. It can also be seen here that the expression specifically in squamous cell carcinoma is considerably increased.

Beispiel 2: Überexpression von HAT in Lungentumorgewebe.Example 2: Overexpression of HAT in lung tumor tissue.

4 zeigt Ergebnisse der Expression von HAT in verschiedenen Tumorgeweben und den dazugehörenden Normalgeweben, erhalten aus 21 Patienten, aus einem Cancer Profiling Array. Man erkennt, daß die Überexpression in Lungentumorgewebe ausgesprochen spezifisch ist. Entsprechende Ergebnisse sind den Taqman Analysen gemäß der 6 und 7 entnehmbar. Man erkennt in 6, daß in 10/13 Fällen eine ausgesprochen starke Überexpression im Tumorgewebe stattfindet. 4 shows results of the expression of HAT in different tumor tissues and the associated normal tissues, obtained from 21 Patients, from a Cancer Profiling Array. It can be seen that overexpression in lung tumor tissue is extremely specific. Corresponding results are the Taqman analyzes according to the 6 and 7 removable. One recognizes in 6 that in 10/13 cases there is an extremely strong overexpression in the tumor tissue.

Beispiel 3: Nachweis von HAT mittels AntikörpernExample 3: Detection of HAS using antibodies

In diesem Beispiel wird die Markierung eines Plattenepithelkarzinoms der Lunge durch einen anti-HAT-Antikörper in vivo (Mausmodell) beschrieben. Ein anti-HAT-Antikörper wird mit einem Markermolekül (z. B. Radioisotop) markiert. In NMRI-Nacktmäuse werden 3 × 10⁶ HAT-transfizierte humane Zellen transplantiert. Nach einem Zeitraum, der ausreicht, um Metastasen an einer sekundären Stelle des Körpers zu entwickeln, beispielsweise 30 Tage nach der Transplantation, wird den Mäuse markierter Antikörper infiziert. Die Kontrolltiere werden mit einem nicht relevanten Antikörper behandelt. Wenige Stunden nach der Antikörperapplikation. werden die Tiere getötet und aus allen Organen Gewebeschnitte angefertigt. Diese Schnitte werden auf die Gegenwart von markiertem anti-HAT Antikörper untersucht.In this example the labeling of a squamous cell carcinoma of the lungs by an anti-HAT antibody in vivo (mouse model) is described. An anti-HAT antibody is labeled with a marker molecule (e.g. radioisotope). 3 × 10 ⁶ HAT-transfected human cells are transplanted into NMRI nude mice. After a period of time sufficient to develop metastases to a secondary site in the body, for example 30 days after the transplant, the labeled antibody becomes infected. The control animals are treated with an irrelevant antibody. A few hours after the antibody application. the animals are killed and tissue sections are made from all organs. These sections are examined for the presence of labeled anti-HAT antibody.

Bei den anti-HAT Antikörpern handelt es sich um polyklonale Antikörper gegen humanes HAT Protein, konjugiert mit einem Trägerprotein, in Kaninchen gezogen und mit den spezifischen immobilisierten Peptiden affinitätsgereinigt.The anti-HAT antibodies act polyclonal antibodies against human HAT protein, conjugated with a carrier protein, raised in rabbits and with the specific immobilized peptides affinity purified.

Geeignete Immunisierungspeptide sind beispielsweise mit der Protease Domäne gebildet. Als Immunogene können ebenso mit cDNA von HAT, oder Teilsequenzen hiervon transfizierte Zellen, wie beispielsweise COS-Zellen oder NIH3T3-Zellen, eingesetzt werden. Ebenso sind Tumorzellen, die endogen HAT exprimieren, geeignet. Weiterhin kann auch rekombinant hergestelltes HAT bzw. Teilsequenzen hieraus, die in Producerzellen, wie E. coli oder Insektenzellen exprimiert werden, zur Immunisierung eingesetzt werden.Suitable immunization peptides are formed, for example, with the protease domain. Cells that are transfected with HAT cDNA or partial sequences thereof, such as, for example, COS cells or NIH3T3 cells, can also be used as immunogens be set. Tumor cells that express endogenously HAT are also suitable. Furthermore, recombinantly produced HAT or partial sequences thereof, which are expressed in producer cells such as E. coli or insect cells, can also be used for the immunization.

Beispiel 4: Immunhistochemischer Nachweis von Tumorzellen.Example 4: Immunohistochemical Detection of tumor cells.

Plattenepithelgewebe werden aus den Patienten mit Lungentumoren isoliert und als Paraffin- bzw. Gefrierschnitte präpariert. Diese Schnitte werden mit einem anti-HAT-Antikörper auf die Überexpression von HAT in Tumorzellen untersucht. Die immunhistologische Untersuchung mit dem HAT-Antikörper zeigt höhere Expression von HAT in den Tumorzellen im Vergleich zu umliegenden Normalgewebe. Die Untersuchung erfolgt im Einzelnen durch Inkubation mit dem anti-HAT Antikörper als primärem Antikörper, einem biotinyliertem sekundären anti-Kaninchen Antikörper und einer Streptavidin-gekoppelten Meerrettichperoxidase. Die Färbung erfolgt mit mit DAB als chromogenen Substrat (braune Färbung). Die Gegenfärbung erfolgt mit Hemalaun-Lösung (blaue Färbung). Es sind maligne und nichtmaligne Zellen unterscheidbar, wobei die malignen Zellen eine starke Färbung, i.e. hohen HAT Gehalt, aufweisen, während die nichtmalignen Zellen nur moderat gefärbt sind.Squamous tissues are made from the Patients with lung tumors isolated and as paraffin or frozen sections prepared. These sections are over-expressed with an anti-HAT antibody investigated by HAT in tumor cells. The immunohistological examination with the HAT antibody shows higher Expression of HAT in the tumor cells compared to the surrounding Normal tissue. The examination is carried out in detail by incubation with the anti-HAT antibody as the primary antibody, a biotinylated secondary anti-rabbit antibody and a streptavidin-coupled horseradish peroxidase. The coloring is done with with DAB as a chromogenic substrate (brown color). The counterstaining takes place with hemalaun solution (blue Coloring). Malignant and non-malignant cells can be distinguished, the malignant cells a strong staining, i.e. have high HAT content, while the non-malignant cells only moderately colored are.

Beispiel 5: Erzeugung von anti-idiotypischen monoklonalen Antikörpern zu therapeutischen ZweckenExample 5: Generation of anti-idiotypic monoclonal antibodies for therapeutic purposes

Ausgehend von dem HAT Protein wird in fachüblicher Weise ein monoklonaler Antikörper Abt erzeugt, welcher in der Lage ist, HAT spezifisch zu erkennen und daran zu binden. Dabei ist es unwesentlich, ob die Protease Domäne oder ein anderer zugänglicher Bereich erkannt wird. Mit Hilfe des erzeugten Antikörpers Abt wird in ebenso fachüblicher Weise ein zweiter anti-idiotypischer nicht humanisierter, beispielsweise Maus, monoklonaler Antikörper aAB1 erzeugt, welcher zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung von Lungentumoren geeignet ist. Die Funktion des Antikörpers aAB1 beruht dabei darauf, dass dieser dem humanen Immunsystem ein Image des (humanen) HAT-Antigens gleichsam vortäuscht, wobei das Immunsystem den Antikörper aAB1 aufgrund seiner mangelnden Humanisierung als körperfremd erkennt. Der humane Körper bildet folglich eigene Antikörper, die gegen aAB1 und somit auch gegen das humane HAT bzw. dieses exprimierende Tumorzellen gerichtet sind.Starting from the HAT protein in the usual way Wise a monoclonal antibody Abbot who is able to recognize HAT specifically and tie to it. It is immaterial whether the protease domain or another accessible Area is recognized. With the help of the antibody Abt becomes just as common Way a second anti-idiotypic non-humanized, for example Mouse, monoclonal antibody aAB1, which is used to produce a pharmaceutical composition is suitable for the treatment of lung tumors. The function of the antibody aAB1 is based on the fact that it is part of the human immune system Image of the (human) HAT antigen, as it were, pretending to be the immune system the antibody aAB1 due to its lack of humanization as a foreign body recognizes. The human body consequently forms its own antibodies, which expresses against aAB1 and thus also against the human HAT or this Tumor cells are targeted.

Claims

Use of a nucleic acid coding for HAT and / or a HAT peptide or protein for the detection of lung tumors, especially squamous cell carcinoma of the lungs, or for detection a risk of disease of the lung tumors, in particular the Squamous cell carcinoma of the lungs, taking a lung tissue sample on transcription or over-transcription of HAT RNA or for expression or overexpression of a HAT protein becomes.

Use according to claim 1, wherein an HAT coding nucleic acid or a detector substance that binds to HAT protein or peptide, preferably containing a reporter group is used, wherein Binding said nucleic acid and / or said protein or peptide semi-quantitative to the detector substance or is detected quantitatively.

Use of a HAT RNA or a HAT protein or peptide for screening for substances binding to it, in particular prospective agents for inhibiting said RNA or said Protein or peptide or prospective detector substances, wherein a prospective substance or a mixture of such prospective substances Substances contacted with said RNA or said protein or peptide with binding events determined using a binding assay be, and being a binding prospective substance, possibly after Deconvolutation is selected.

Use of a HAT inhibiting or binding Substance for the manufacture of a pharmaceutical composition for the treatment of lung tumors, especially squamous cell carcinoma the lungs.

Use according to claim 4, wherein the substance is a antibody which is by immunization of a non-human mammal with a HAT peptide or protein, with HAT transfected cells, or one for this for coding cDNA, available or a phage display antibody is.

Use according to claim 4, wherein the substance is a Facial expression of an antibody against a HAT peptide or protein.

Use according to claim 4, wherein the substance is a Aptamer, an antisense RNA, an siRNA, or a ribozyme.

Use according to one of claims 4 to 7, wherein the substance additionally carries a cytotoxic and / or immunostimulating component.

Use according to one of claims 4 to 8, wherein the pharmaceutical Composition for local application in tissue containing tumor cells is prepared.

Methods of diagnosing a lung tumor disease, in particular a squamous cell carcinoma of the lungs, one Detector substance in one embodiment applied to a tissue to be examined with a reporter group is, the tissue to be examined then a detection method stage is subjected to which is sensitive to the reporter group, and where in the case of the detection of a defined minimum value the Reporter group in the tissue qualified the tissue as containing tumor cells becomes.

Methods of treating a lung tumor disease, in particular a squamous cell carcinoma of the lungs, one Pharmaceutical composition according to one of claims 4 to 9 in a physiologically effective dose and galenically for the one to be used Dosage form is presented to a patient.