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Technisches Gebiet:
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Die
vorliegende Erfindung betrifft ein Implantat, insbesondere einen
Stent, für den Einsatz im menschlichen oder tierischen
Körpern.
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Hintergrund der Erfindung:
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Implantate
sind Stoffe oder Teile, die zur Erfüllung bestimmter Ersatzfunktionen
für einen begrenzten Zeitraum oder auf Lebenszeit in den menschlichen
oder tierischen Körper eingebracht werden. Im Gegensatz
zu Transplantaten bestehen Implantate aus künstlichem Material
(Alloplastik). Es wird häufig nach medizinischen, plastischen
oder funktionellen Implantaten unterschieden.
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Medizinische
Implantate haben die Aufgabe, Körperfunktionen zu unterstützen
oder zu ersetzen. Je nach Funktion werden sie auch als implantierbare Prothese
bezeichnet. Bekannte Vertreter sind z. B. Herzschrittmacher, Hirnschrittmacher
bei Parkinson, Herzimplantate, Cochleaimplantate, Implantate in der
Zahnmedizin, Stents und Implantate, die dazu dienen, ein Depot eines
Arzneistoffes zu bilden sowie verschiedene Formen des Gelenkersatzes.
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Stents
im Allgemeinen sind endovaskuläre Prothesen beziehungsweise
Implantate, die beispielsweise zur Behandlung von Stenosen verwendet
werden. Stents sind außerdem bekannt für die Behandlung
von Aneurysmen. Stents weisen grundsätzlich eine Tragstruktur
auf, die geeignet ist, die Wand eines Gefäßes
in geeigneter Weise abzustützen, um so das Gefäß zu
weiten beziehungsweise ein Aneurysma zu überbrücken.
Stents werden dazu in einem komprimierten Zustand in das Gefäß eingeführt
und dann an dem zu behandelnden Ort aufgeweitet und gegen die Gefäßwand
gedrückt. Dieses Aufweiten kann beispielsweise mit Hilfe
eines Ballonkatheters erfolgen. Alternativ sind auch selbst expandierende
Stents bekannt. Diese sind beispielsweise aus einem superelastischen
Metall, wie Nitinol, aufgebaut.
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Stents
werden derzeit in zwei Grundtypen eingeteilt, die dauerhaften Stents
und die biodegradierbaren Stents. Dauerhafte Stents sind so ausgestaltet,
dass sie im Gefäß für einen unbestimmten Zeitraum
verbleiben können. Biodegradierbare Stents hingegen werden über
einen vorbestimmten Zeitraum hinweg in einem Gefäß abgebaut.
Vorzugsweise werden biodegradierbare Stents erst abgebaut, wenn
das traumatisierte Gewebe des Gefäßes verheilt
ist und somit der Stent nicht weiter im Gefäßlumen
verbleiben muss.
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Plastische
Implantate werden in der plastischen Chirurgie, z. B. zum Ersatz
von zerstörten Körperteilen oder auch zur Veränderung
von bestehenden Körperteilen verwendet.
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Funktionelle
Implantate dienen zur Überwachung von menschlichen oder
tierischen Funktionen, indem z. B. RFID(radio frequency identicifaction)-Chips
unter die Haut verpflanzt werden.
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Anhand
der Vielzahl der vorhandenen Implantattypen kann man erkennen, dass
Implantate und deren Anwendung in der Medizin einen großen
Stellenwert erlangt haben.
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Da
bei klassischen Behandlungsprinzipien, wie beispielsweise bei der
systemischen Applikation von ein oder mehreren Wirkstoffen, zum
Teil erhebliche Nebenwirkungen, wie beispielsweise bei der Tumorbehandlung,
zu erwarten sind, gewinnt eine lokale, kontrollierte Wirkstofffreisetzung
am Zielort oder in der Nähe davon zunehmende Bedeutung
(Local-Drug-Delivery-Konzept; LDD-Konzept). Um diese lokale Applikation
von Wirkstoffen durchführen zu können, werden
insbesondere Implantatgrundkörper mit ein oder mehreren
Wirkstoffen beschichtet, die entweder am Zielort oder in dessen
Nähe in einen menschlichen oder tierischen Organismus implantiert werden
und so lokal Wirkstoffe freisetzen. Diese klinisch etablierte Methode
wird jährlich weltweit millionenfach angewendet und es
ist zu erwarten, dass bei Berücksichtigung der demoskopischen
Verschiebung innerhalb der Alterspyramide der Bedarf an neuen Werkstoffen
sowie neuen Darreichungsformen wächst.
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Im
orthopädischen Bereich sind im Zusammenhang mit endoprothetischen
Implantaten implantat-assoziierte Infektionen und thromboembolische Komplikationen
bekannt. Thromboembolie ist ein akuter venöser oder arterieller
Gefäßverschluss, der durch einen verschleppten
Thrombus, der durch das Anhaften von Thrombozyten an die Oberfläche
des Implantates entstehen kann, hervorgerufen wird. Die häufigsten
Formen der Thromboembolie sind die Embolie, insbesondere die Lungenembolie.
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Im
Bereich der Herz-Kreislauf-Erkrankungen bieten minimalinvasive Therapieformen
zur Aufweitung und Stabilisierung stenosierter Koronargefäße durch
die Perkutane Transluminale Coronarangioplastie (PTCA) und die Stentimplantation
eine sich immer weiter etablierende Behandlungsmethode. Als Spätkomplikation
ist hier neben der Wiederverengung des Gefäßes
nach PTCA oder Stent-Implantation (sogenannte In-Stent-Restenose,
(ISR)) und der Gewebeinflammation vor allem das Risiko einer Thromboembolie
zu nennen. Vor diesem Hintergrund werden insbesondere Stents im
Stand der Technik bereitgestellt, die mit Wirkstoffen beschichtet
sind, die einer oder mehreren Spätkomplikationen entgegenwirken
sollen.
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Die
wirkstofffreisetzenden Implantate des Standes der Technik sind demnach
mit ein oder mehreren Wirkstoffen in einer vorgegebenen Konzentration
beschichtet und setzen diese gegebenenfalls nach einem definierten
Freisetzungsregime in physiologischer Umgebung eines menschlichen
oder tierischen Körper frei. Diese wirkstoffbeschichteten
Implantate des Standes der Technik ermöglichen jedoch keine
flexible, auf eine Situation (Auftreten einer Spätkomplikation)
bedarfsgerecht abgestimmte Freisetzung von Wirkstoffen bzw. Hemmung
von physiologischen Reaktionen als Antwort auf die Implantation
des Implantats, beispielsweise inadäquate Proliferation
glatter Muskelzellen, überschießende Bildung und
Sekretion von Bestandteilen der extrazellulären Matrix,
etc.
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Die
Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht nun darin, ein Implantat
bereitzustellen, dass unter physiologischen Bedingungen in einem menschlichen
oder tierischen Organismus ein oder mehrere der folgenden Eigenschaften
aufweist:
- – Vermindertes Nebenwirkungsprofil,
bevorzugt vermindertes Restenoserisiko und/oder Thromboserisiko
bei Stentimplantationen,
- – Verbesserte Endothelialisierung und/oder
- – Individuelle, flexibel auf eine Situation (Auftreten einer
Spätkomplikation) bedarfsgerecht abgestimmte Behandlung
und/oder
- – einfach herstellbar ist.
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Zusammenfassung der Erfindung:
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Diese
Aufgabe wird teilweise oder vollständig durch die erfindungsgemäßen
Gegenstände der unabhängigen Patentansprüche
gelöst. Bevorzugte Ausgestaltungen werden in den abhängigen
Ansprüchen dargestellt.
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Die
Erfindung betrifft demzufolge ein Implantat zur Implantation in
einen menschlichen oder tierischen Organismus umfassend oder bestehend
aus
- a) einem Implanatgrundkörper
- b) einer oder mehreren, gleichen oder verschiedenen Ankergruppen
auf der Oberfläche des Implanatgrundkörpers
- c) ein oder mehreren, gleichen oder verschiedenen Aptameren,
die an die Ankergruppen gebunden sind,
dadurch gekennzeichnet,
dass
die Ankergruppen gleich oder verschieden ausgewählt
werden aus der Gruppe der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) (R2O)2(O)P-L-(CH2)x-M-R1 (I)wobei
R1 für -COOH, -OH, -SH, -NH2, Benzophenon oder Benzophenon-Derivate
steht, bevorzugt für -COOH oder -NH2,
R2 für Wasserstoff, -CH2CH3 oder -CH3 steht,
bevorzugt für Wasserstoff,
L für eine Einfach-Bindung
oder -O- steht, bevorzugt für eine Einfach-Bindung,
M
für eine Einfach-Bindung oder -(CH2-CH2-O)y steht, bevorzugt
für -(CH2-CH2-O)y, steht,
x für eine Zahl ausgewählt
aus der Gruppe bestehend aus 1 bis 25 steht, bevorzugt für
3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 oder 12 steht und
y für
eine Zahl ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 1 bis
25 steht, bevorzugt für 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 10, 11 oder
12 steht
sowie deren Salze und Hydrate und
die Aptamere
so ausgerichtet sind, dass sie i) ein oder mehrere physiologische
Verbindungen eines menschlichen oder tierischen Organismus und/oder
ii) ein oder mehrere systemisch verabreichte Wirkstoffe unter physiologischen
Bedingungen in einem menschlichen oder tierischen Organismus binden.
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Ebenso
betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung
von erfindungsgemäßen Implantaten umfassend oder
bestehend aus den folgenden Schritten:
- a) Bereitstellen
von ein oder mehreren Implantatgrundkörper,
- b) Reinigung des oder der Implantatgrundkörper,
- c) Bereitstellen von ein oder mehreren, gleichen oder verschiedenen
Ankergruppen ausgewählt aus der Gruppe an Verbindungen
der allgemeinen Formel (I) (R2O)2(O)P-L-(CH2)x-M-R1 (I)wobei
R1 für -COOH, -OH, -SH, -NH2, Benzophenon oder Benzophenon-Derivate
steht,
R2 für Wasserstoff,
-CH2CH3 oder -CH3 steht,
L für eine Einfach-Bindung
oder -O- steht,
M für eine Einfach-Bindung oder -(CH2-CH2-O)y steht,
x
für eine Zahl ausgewählt aus der Gruppe bestehend
aus 1 bis 25 steht, bevorzugt für 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,
10, 11 oder 12 steht und
y für eine Zahl ausgewählt
aus der Gruppe bestehend aus 1 bis 25 steht, bevorzugt für
3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 oder 12 steht,
- d) Funktionalisieren des oder der gereinigten Implantatgrundkörper
aus Schritt b) mit der oder den Ankergruppen der allgemeinen Formel
(I) aus Schritt c),
- e) Bereitstellen von ein oder mehreren, gleichen oder verschiedenen
Aptameren, die so ausgerichtet sind, dass sie i) ein oder mehrere
physiologische Verbindungen eines menschlichen oder tierischen Organismus
und/oder ii) ein oder mehrere systemisch verabreichte Wirkstoffe
unter physiologischen Bedingungen in einem menschlichen oder tierischen
Organismus binden und
- f) Bindung des oder der Aptamere aus Schritt e) an den oder
die funktionalisierten Implantatgrundkörper aus Schritt
d).
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Ebenso
betrifft die Erfindung die Verwendung von ein oder mehreren Verbindungen
ausgewählt aus der Gruppe der allgemeinen Formel (I) (R2O)2(O)P-L-(CH2)x-M-R1 (I)wobei
R1 für -COOH, -OH, -SH, -NH2, Benzophenon oder Benzophenon-Derivate
steht, bevorzugt für -COOH oder -NH2,
R2 für Wasserstoff, -CH2CH3 oder -CH3 steht,
bevorzugt für Wasserstoff,
L für eine Einfach-Bindung
oder -O- steht, bevorzugt für eine Einfach-Bindung,
M
für eine Einfach-Bindung oder -(CH2-CH2-O)y steht, bevorzugt
für -(CH2-CH2-O)y,
x für eine Zahl ausgewählt
aus der Gruppe bestehend aus 1 bis 25 steht, bevorzugt für
3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 oder 12 steht und
y für
eine Zahl ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 1 bis
25 steht, bevorzugt für 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 10, 11 oder
12 steht
sowie deren Salze und Hydrate
als Ankergruppen
für Aptamere auf Implantatgrundkörpern.
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Des
Weiteren betrifft die Erfindung die Verwendung von Verbindungen
der allgemeinen Formel (I) (R2O)2(O)P-L-(CH2)x-M-R1 (I)wobei
R1 für -COOH, -OH, -SH, -NH2, Benzophenon oder Benzophenon-Derivate
steht, bevorzugt für -COOH oder -NH2,
R2 für Wasserstoff, -CH2CH3 oder -CH3 steht,
bevorzugt für Wasserstoff,
L für eine Einfach-Bindung
oder -O- steht, bevorzugt für eine Einfach-Bindung,
M
für eine Einfach-Bindung oder -(CH2-CH2-O)y steht, bevorzugt
für -(CH2-CH2-O)y,
x für eine Zahl ausgewählt
aus der Gruppe bestehend aus 1 bis 25 steht, bevorzugt für
3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 oder 12 steht und
y für
eine Zahl ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 1 bis
25 steht, bevorzugt für 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 10, 11 oder
12 steht
sowie deren Salze und Hydrate
als Ankergruppen
zur Herstellung eines oder mehrerer erfindungsgemäßer
Implantate.
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Bevorzugte
Ausgestaltungen der erfindungsgemäßen Gegenstände
werden in den abhängigen Ansprüchen sowie der
nachfolgenden detaillierten Beschreibung dargestellt und sind, sofern
sinnvoll, untereinander kombinierbar.
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Detaillierte Beschreibung der Erfindung:
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Der
vorliegenden Erfindung liegt die Erkenntnis zu Grunde, dass durch
die erfindungsgemäße Beschichtung der Implantate
mit Aptameren i) ein oder mehrere physiologische Verbindungen eines menschlichen
oder tierischen Organismus und/oder ii) ein oder mehrere systemisch
verabreichte Wirkstoffe unter physiologischen Bedingungen in einem menschlichen
oder tierischen Organismus an die Oberfläche des Implantats
gebunden werden und somit unter Ausnutzung körpereigener
Mechanismen
- – Wachstumsfaktoren zur
Verbesserung der Endothelialisierung, insbesondere im Gefäßsystem bei
Stenosen, Enzyme zur Modifikation/Reduktion extrazellulärer
Matrix, Enzyme zur Fibrinlösung und/oder Enzyme zur Spaltung
von systemisch verabreichten Prodrugs angereichert werden,
- – Rezeptoren für Wachstumsfaktoren zur Proliferationskontrolle
oder Rezeptoren der Zellaktivierung zur Manipulation von Immunzellen
gehemmt werden und/oder
- – Systemisch verabreichte Wirkstoffe an die Implantatoberfläche
gebunden werden, was
- – eine nachträglich und damit bedarfsgerechte Wirkstoffbeladung
des Implantats und damit auch Wirkstofffreisetzung (beispielsweise
notwendig bei Vorliegen weiterer Krankheitsbilder, insbesondere
Diabetes mellitus) ermöglicht,
- – den Erhalt einer Wirkstoffkonzentration über
einen vordefinierten Zeitraum und damit Wiederholungsapplikationen
ermöglicht,
- – einen Wechsel von Wirkstoffen von beispielsweise
von betont proliferationshemmend (z. B. Paclitaxel) zu betont endothelfördernd
oder antithrombogen wirkend ermöglicht,
- – eine parallele lokale Vasodilationstherapie ermöglicht
und/oder ein Einwirken auf Effekte einer lokalen pH-Wert-Verschiebung
insbesondere beim Abbau von degradierbaren Metallstents, vorzugsweise
Magnesiumstents ermöglicht.
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Überraschenderweise
wurde ebenfalls erkannt, dass durch die Verwendung von Verbindungen
der allgemeinen Formel (I), wobei die Substituenten oben beschrieben
wurden, als Ankergruppen auf den Implantatgrundkörpern
das Entzündungsrisiko und/oder das Thromboserisiko im Vergleich
zu Polymerbeschichtungen vermindert werden kann. Es wird angenommen,
dass Entzündungen und/oder Thrombosen durch den Abbau der
Polymere in Polymerbeschichtungen, z. B. von Polyurethanen oder
einigen Polyestern, hervorgerufen werden können. Im Gegensatz
hierzu werden die erfindungsgemäßen Ankerverbindungen – ausgewählt
aus der Gruppe der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) – unter physiologischen
Bedingungen nicht entzündungs- und/oder thrombosefördernd
abgebaut.
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Durch
ein erfindungsgemäßes Implantat können
demzufolge natürliche Mechanismen des menschlichen oder
tierischen Organismus genutzt werden, um situationsgerecht auf Nebenwirkungen und
insbesondere Spätkomplikationen, wie beispielsweise Thrombose oder
Restenose, zu reagieren. Insbesondere kann durch die Anlagerung
von endothelialen Vorläuferzellen ein schnelles und/oder
gezieltes Wachstum eines (durch die Implantation) geschädigten
Endothels bewirkt werden. Durch die entsprechend früher
geschlossene Zellschicht des Endothels werden weniger Signalmoleküle
wie Entzündungsmediatoren freigesetzt, was zu einer weiteren Reduktion
der Nebenwirkungen führt.
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Des
Weiteren ermöglicht eine erfindungsgemäße
Kopplung des oder der erfindungsgemäß einzusetzenden
Aptamere eine einfache Herstellung der erfindungsgemäßen
Implantate, da zum einen die Aptamere selbst mittels kombinatorischer
Chemie einfach in großem Maße herstellbar sind
und auf Grund der erfindungsgemäß einzusetzenden
Ankergruppen, den Verbindungen der Formel (I), gerade im Gegensatz
zur nicht erfindungsgemäßen Silanisierungen keine
Aktivierung insbesondere der Hydroxy-Gruppen vorgenommen werden
muss. Zudem wurde beobachtet, dass erfindungsgemäß einzusetzende
Aptamere über Verbindungen der Formel (I) im Gegensatz
zu nicht erfindungsgemäßen Silanisierungen von
Aptameren fester an die Implantatoberfläche gebunden werden.
Des Weiteren haben die Erfinder beobachtet, dass eine erfindungsgemäße
Anbindung von Aptameren über Verbindungen der Formel (I) eine
im Gegensatz zu nicht erfindungsgemäßen Silanisierungen
von Aptameren geringere Oberflächenfunktionalisierung ergibt,
was für größere erfindungsgemäß zu
bindende Moleküle von Vorteil ist.
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Implantate
bzw. Implantatgrundkörper im Sinne der vorliegenden Erfindung
können alle medizinischen, plastischen und/oder funktionellen
Implantate bzw. Implantatgrundkörper darstellen und werden
beispielsweise ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus
Herzschrittmacher; Hirnschrittmacher; Herzimplantate; Schrittmacherelektroden;
Defibrillationselektroden; Cochleaimplantate; Implantate für Zahnmedizin;
Endoprothesen, bevorzugt für Kniegelenke und/Hüftgelenke;
Depotimplantate, die dazu dienen, ein Depot eines Wirkstoffs zu
bilden; degradierbare oder dauerhafte, koronare oder periphere Stents;
degradierbare oder dauerhafte Stents für andere Hohlräume,
vorzugsweise die Speiseröhre, den Gallengang, die Harnröhre,
die Prostata oder die Luftröhre; und local drug delivery(LDD)-Implantate, die
vorzugsweise endovaskulär im Blut oder anderen Hohlräumen
implantiert werden.
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In
einer bevorzugten Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung werden
erfindungsgemäße Implantate ausgewählt
aus der Gruppe bestehend aus Herzschrittmacher; Herzimplantate;
Schrittmacherelektroden; Defibrillationselektroden; degradierbare oder
dauerhafte, koronare oder periphere Stents; und local drug delivery(LDD)-Implantate,
die vorzugsweise endovaskulär im Blut oder anderen Hohlräumen
implantiert werden.
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In
einer besonders bevorzugten Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung
werden erfindungsgemäße Implantate ausgewählt
aus der Gruppe der dauerhaften oder degradierbaren koronaren Stents (Koronarstents),
wobei das Stentgrundkörpermaterial Metall und/oder Polymer
umfassen kann.
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Die
ursprünglichen mechanischen Funktionen eines Koronarstents,
beispielsweise die Dilatierbarkeit, der geringe Recoil, die Stabilität über
eine gewünschte Zeitdauer (im Falle degradierbarer Stents,
beispielsweise bestehend aus Magnesium und seinen Legierungen) sowie
die Flexibilität sollen in erfindungsgemäßen
Stents als erfindungsgemäße Implantate bevorzugt
vorhanden sein.
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Im
Folgenden werden erfindungsgemäß zu verwendende
Implantat-Materialien, bevorzugt Stentgrundkörper-Materialien
sowie bevorzugte Ausgestaltungen hiervon beschrieben:
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Degradierbarer Implantatgrundkörper,
vorzugsweise degradierbarer Stentgrundkörper:
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Im
Sinne der vorliegenden Erfindung bedeutet „degradierbarer
Implantat(grundkörper)”, bevorzugt „degradierbarer
Stent(grundkörper)”, dass der Grundkörper
in physiologischer Umgebung, insbesondere im Gefäßsystem
eines menschlichen oder tierischen Organismus degradiert, d. h.,
so abgebaut wird, dass der Stent seine Integrität verliert.
Vorzugsweise degradieren erfindungsgemäß degradierbare Grundkörper
erst dann, wenn die Funktion des Implantats nicht mehr physiologisch
sinnvoll bzw. notwendig ist. Bei degradierbaren Stents bedeutet
das, dass der Stent vorzugsweise erst dann degradiert oder seine
Integrität verliert, wenn das traumatisierte Gewebe des
Gefäßes verheilt ist und der Stent somit nicht
länger seine Stützwirkung in der Gefäßwand aufrecht
erhalten muss.
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Metallischer Grundkörper:
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In
einer bevorzugten erfindungsgemäßen Ausgestaltung
umfasst oder besteht der degradierbare Werkstoff bevorzugt aus einem
metallischen Werkstoff, der eine biokorrodierbare Legierung darstellt,
wobei die Hauptkomponente der Legierung ausgewählt wird
aus der Gruppe Magnesium, Eisen, Zink und/oder Wolfram; insbesondere
wird für einen degradierbaren metallischen Werkstoff eine
Magnesiumlegierung bevorzugt.
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Die
Legierung, insbesondere umfassend Magnesium, Eisen, Zink und/oder
Wolfram, ist so in ihrer Zusammensetzung zu wählen, dass
sie biokorrodierbar ist. Als biokorrodierbar im Sinne der vorliegenden
Erfindung werden Legierungen bezeichnet, bei denen in physiologischer
Umgebung ein Abbau (Degradierung) stattfindet, der letztendlich
dazu führt, dass der gesamte Stent oder der aus dem Werkstoff
gebildete Teil des Stents seine mechanische Integrität
verliert. Unter Legierung wird vorliegend ein metallisches Gefüge
verstanden, dessen Hauptkomponente Magnesium, Eisen, Zink und/oder Wolfram
ist. Hauptkomponente ist die Legierungskomponente, deren Gewichtsanteil
an der Legierung am höchsten ist. Ein Anteil der Hauptkomponente
beträgt vorzugsweise mehr als 50 Gew.-%, weiter bevorzugt
mehr als 70 Gew.-%. Eine Magnesium-Legierung ist hiervon besonders
bevorzugt.
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Ist
der erfindungsgemäße Werkstoff eine Magnesium-Legierung,
so enthält diese vorzugsweise Yttrium und weitere Seltenerdmetalle,
da sich eine derartige Legierung aufgrund ihrer physiko-chemischen
Eigenschaften und ihrer hohen Biokompatibilität, insbesondere
auch ihrer Abbauprodukte, auszeichnet.
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Besonders
bevorzugt werde die in
EP
1 419 793 B1 beschriebenen Yttrium (W) und Seltene Erden
(E) enthaltenden biokorrodierbaren Magnesiumlegierungen (WE43 & WE54 von Magnesium
Elektron) mit einem Anteil von Magnesium > 90 Gew., Yttrium 3,7–5,5 Gew.-%,
Seltenerdmetallen 1,5–4,4 Gew.-% und Rest < 1 Gew.-%, zur Herstellung
von Implantaten (Stents) eingesetzt.
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Diese
Magnesiumlegierungen bestätigen bereits experimentell und
in ersten klinischen Versuchen ihre besondere Eignung, d. h. sie
zeigen eine hohe Biokompatibilität, günstige Verarbeitungseigenschaften,
gute mechanische Kennwerte und ein für die Einsatzzwecke
adäquates Korrosionsverhalten.
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Unter
der Sammelbezeichnung „Seltene Erden” SE werden
in der vorliegenden Anmeldung Scandium (21) und Yttrium (39) sowie
die ”Leichten Seltenen Erden” LSE Lanthan (57),
Cer (58), Neodym (60), und Promethium (61) und die ”Schweren Seltenen
Erden” SSE Samarium (62), Europium (63), Gadolinium (64),
Terbium (65), Dysprosium (66), Holmium (67), Erbium (68), Thulium
(69), Ytterbium (70) und Lutetium (71) verstanden.
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Polymer-Grundkörper:
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Erfindungsgemäße
Implantatgrundkörper, bevorzugt Stentgrundkörper,
können gemäß einer weiteren alternativen
erfindungsgemäßen Ausgestaltung degradierbares
Polymer umfassen oder daraus bestehen, vorzugsweise ausgewählt
aus der Gruppe bestehend aus Polydioxanon; Polyglycolid; Polycaprolacton;
Polyhydroxyvaleriansäure; Polyhydroxybuttersäure;
Polylactide, vorzugsweise Poly(L-lactid), Poly(D-lactid), Poly(D,L-lactid)
und Elends sowie Copoylmere, und vorzugsweise Poly(L-lactid-co-glycolid),
Poly(D,L-lactid-co-glycolid), Poly(L-lactid-co-D-L-lactid), Poly(L-lactid-co-trimethylencarbonat)
und Triblockcopolymere; Polysaccharide, vorzugsweise Chitosan, Levan,
Hyaluronsäure, Heparin, Dextran und Cellulose.
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Dauerhafter Implantatgrundkörper,
vorzugsweise dauerhafter Stentgrundkörper:
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Im
Gegensatz zum degradierbaren Grundkörper wird der „dauerhafte
Implantatgrundkörper”, vorzugsweise der „dauerhafte
Stentgrundkörper” in physiologischer Umgebung
im menschlichen oder tierischen Organismus im Wesentlichen nicht
abgebaut, so dass er seine Integrität nicht verliert.
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In
einer weiteren erfindungsgemäßen bevorzugten Ausgestaltung
umfasst oder besteht der Grundkörper eines dauerhaften
Implantats, vorzugsweise eines dauerhaften Stents, aus einem Formgedächtnis-Material,
vorzugsweise aus einem oder mehreren Materialien ausgewählt
aus der Gruppe der Nickel-Titan-Legierungen und Kupfer-Zink-Aluminium-Legierungen,
weiter bevorzugt Nitinol.
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In
einer besonders bevorzugten erfindungsgemäßen
Ausgestaltung umfasst oder besteht der Grundkörper eines
dauerhaften Implantats, vorzugsweise eines dauerhaften Stents aus
Edelstahl, vorzugsweise aus Cr-Ni-Fe-Stahl, hier bevorzugt die Legierung
316L, oder einem Co-Cr-Stahl.
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In
einer weiteren bevorzugten Ausgestaltung kann der Implantatgrundkörper,
vorzugsweise Stentgrundkörper zusätzlich Kunststoff,
vorzugsweise Polyetherurethan, und/oder Keramik und/oder weitere Polymerbeschichtungen
umfassen.
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Werden
im Sinne der vorliegenden Erfindung endovaskulär implantierbare
Stents, vorzugsweise Koronarstents als implantierbare Grundkörper
verwendet, so können alle üblichen Stentgeometrien
für die vorliegende Erfindung verwendet werden. Insbesondere
bevorzugt sind Stentgeometrien, die insbesondere in
US 6,896,695 ,
US 2006/241742 ,
US 5,968,083 (Tenax),
EP 1 430 854 (Helix-Design),
US 6,197,047 und
EP 0 884 985 beschrieben
werden.
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Im
Sinne der vorliegenden Erfindung sind degradierbare und dauerhafte
Metallgrundkörper der Implantate, bevorzugt Stents, gegenüber
degradierbaren Polymerstents bevorzugt, da diese durch ihre Abbauprodukte
entzündungs- und thrombosefördernd wirken können
und so das Spätkomplikationsrisiko erhöhen.
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Gemäß der
vorliegenden Erfindung werden ein oder mehrere, gleiche oder verschiedene
Ankergruppen für ein erfindungsgemäßes
Implantat, bevorzugt ein erfindungsgemäßen Stent
ausgewählt aus der Gruppe der Verbindungen der allgemeinen Formel
(I)
R1 für -COOH, -OH, -SH,
-NH2, Benzophenon oder Benzophenon-Derivate
steht, bevorzugt für -COOH oder -NH2,
R2 für Wasserstoff, -CH2CH3 oder -CH3 steht,
bevorzugt für Wasserstoff,
L für eine Einfach-Bindung
oder -O- steht, bevorzugt für eine Einfach-Bindung,
M
für eine Einfach-Bindung oder -(CH2-CH2-O)y, steht, bevorzugt
für eine Einfach-Bindung,
x für eine Zahl
ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 1 bis 25 steht,
bevorzugt für 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 oder 12 steht
und
y für eine Zahl ausgewählt aus der Gruppe
bestehend aus 1 bis 25 steht, bevorzugt für 3, 4, 5, 6,
7, 8, 9 10, 11 oder 12 steht
sowie deren Salze und Hydrate.+
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Im
Sinne der vorliegenden Erfindung sind unter dem Begriff „Benzophenon-Derivat” alle üblichen Derivate
zu fassen. Bevorzugt werden die Derivate ausgewählt aus
der Gruppe der Oxybenzophenone.
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Demzufolge
fallen unter Verbindungen der allgemeinen Formel (I) Phosphonsäuren
der allgemeinen Formel (II) (HO)2(O)P-O(CH2)xM-R1 (II)und
deren
Ester der allgemeinen Formel (III) (R2O2(O)P-CH2)x-M-R1 (III)sowie
Verbindungen der phosphorigen Säure der allgemeinen Formel
(IV) (HO)2(O)P-O-(CH2)x-M-R1 (IV)und/oder
deren Ester der allgemeinen Formel (V) (R2O)2(O)P-O(CH2)x-M-R1 (V),wobei die
(bevorzugten) Reste R1, R2,
M, und x gemäß der allgemeinen Formel (I) definiert
sind und die bevorzugten Reste alle zusammen, teilweise – in
beliebiger Kombination – und einzeln vorhanden sein können.
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Besonders
bevorzugt werden Verbindungen der allgemeinen Formel (I) ausgewählt
aus der Gruppe bestehend aus Hydroxyundecylphosphonsäure, 3-(4-Oxybenzophenon)propylphosphonsäure
und Carboxydodecylphosphonsäure.
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Verbindungen
der allgemeinen Formeln (I), (II), (III), (IV) und (V), wobei M
für einen Oligoethylenglykol-Linker -((CH2)CH2O)y- steht, sind
insbesondere bevorzugt, da hierdurch weiterhin eine unspezifische
Proteinanlagerung an diese Ankergruppen im Gegensatz zu Ankergruppen,
in denen M für eine Einfach-Bindung steht, vermindert wird.
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Im
Sinne der vorliegenden Erfindung sind unter Aptameren kurze einzelsträngige
DNA- oder RNA-Oligonukleotide (25–70 Basen) zu verstehen, die
erfindungsgemäß i) ein oder mehrere physiologische
Verbindungen eines menschlichen oder tierischen Organismus und/oder
ii) ein oder mehrere systemisch verabreichte Wirkstoffe unter physiologischen
Bedingungen in einem menschlichen oder tierischen Organismus über
ihre 3D-Struktur binden. Aptamere können gezielt in vitro
hergestellt werden und zeichnen sich durch hohe Spezifität
und Affinität, hohe thermische Stabilität, niedrige
Immunogenizität und die Fähigkeit der gezielten
Beeinflussung von Protein-Protein-Interaktionen aus. Aptamere und
bevorzugt Spiegelmere sind durch ihre Konformation von DNAasen (Enzyme,
die DNA abbauen) geschützt und besitzen eine ausreichend
hohe Halbwertszeit im menschlichen oder tierischen Organismus.
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Bevorzugte
Herstellung von erfindungsgemäß einzusetzenden
Aptameren mit gewünschtem Eigenschaftsprofil:
Durch
in vitro Selektion von Nukleinsäuren nach dem SELEX-Verfahren
(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment) lassen
sich hochaffine Aptamere aus einer kombinatorischen Bibliothek mit bis
zu 1015 verschiedenen Molekülen
isolieren. Dabei werden wiederholt Zyklen von Selektion und Amplifikation
durchlaufen, bis das gestellte Selektionskriterium von einer angereicherten
Population in ausreichendem Maße erfüllt wird.
Bei den Aptameren handelt es sich dabei um ein Bindungsereignis
an eine vorgegebene Zielstruktur. Nach Vereinzelung und Sequenzierung
können die erhaltenen Aptamere strukturell analysiert und
weiter optimiert werden. So können Aptamere mit Bindungskonstanten
im subnano- bis picomolaren Bereich generiert werden. Die Zielmoleküle
für bindende Nukleinsäuren können dabei
sehr vielfältig sein. So gibt es Aptamere, die kleine organische
Moleküle, Zucker, Peptide oder auch hoch komplexe Strukturen
wie ganze Zellen oder Organismen binden können. Die geringe
Größe, ihre einfache und kostengünstige
Herstellung durch automatisierte Synthese, als auch ihre hohe Spezifität zeichnen
Aptamere daher als vielseitige Werkzeuge zur Target-Erkennung und
-Fixierung aus.
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Durch
die Spiegelmer-Technologie können die positiven Eigenschaften
der Aptamere auf spiegelbildliche Nukleinsäuren übertragen
werden, die aus L-Nukleotiden bestehen und daher von Nukleinsäure-abbauenden
Enzymen, z. B. ubiquitäre RNasen, nicht erkannt werden.
Diese Spiegelmere beweisen auch im Blutserum eine hohe Stabilität.
Neben den Spiegelmeren ist es aber auch möglich, selektierte
funktionelle Nukleinsäuren durch Modifikation des Zucker-Phosphat-Rückgrates
gegen Nukleaseabbau zu stabilisieren. Dabei können beispielsweise
Methylierungen und Fluorierungen durchgeführt oder auch
so genannte Locked Nucleic Acids (LNA) in die Aptamere zur Stabilisierung
eingebaut werden.
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In
einer bevorzugten erfindungsgemäßen Ausgestaltung
sind die Aptamere bevorzugt gerichtet auf i) eine oder mehrere physiologische
Verbindungen ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wachstumsfaktoren,
Enzymen zur Modifikation oder Reduktion extrazellulärer
Matrix, Enzymen zur Fibrinlösung wie, aber nicht ausschließlich,
dem Plasmin, Enzymen zur Aktivierung von systemisch verabreichten
Prodrugs, Enzyme aus der Reihe der Hydrolasen insbesondere der Lipasen
und Proteasen, Enzyme aus der Reihe der Isomerasen, Rezeptoren für Wachstumsfaktoren
und Rezeptoren für Zellaktivierung.
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Im
Sinne der vorliegenden Erfindung bedeutet „Wirkstoff” eine
Substanz oder eine Verbindung, die in einem menschlichen oder tierischen
Organismus nicht physiologisch vorhanden ist und im menschlichen
oder tierischen Organismus eine biologische Reaktion hervorruft.
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Im
Sinne der vorliegenden Erfindung bedeutet „Prodrug”,
dass eine Verbindung erst unter physiologischen Bedingungen in einem
menschlichen oder tierischen Körper in den aktiven „Wirkstoff” gespalten
wird.
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In
einer weiteren bevorzugten erfindungsgemäßen Ausgestaltung
sind Aptamere bevorzugt gerichtet auf ii) ein oder mehrere systemisch
verabreichte Wirkstoffe, welche eine Kontrolle der Bildung extrazellulärer
Matrix bzw. Intima-Proliferation ermöglichen, d. h. proliferationshemmend
wirken, beispielsweise Paclitaxel oder Rapamycin und seine Derivate,
endothelfördernd wirken, beispielsweise Statine, antithrombogen
wirken, beispielsweise Dipyridamol oder Clopidogrel, vasodilatierend
wirken, beispielsweise Bosentan, Dipyridamol oder NO und/oder dem
biologischen Effekt einer lokalen pH-Wert-Verschiebung in den basischen
Bereich bei degradierbaren Metallstents, vorzugsweise Magnesium-Stents
entgegenwirken kann. Biologische Effekte, die bei einer lokalen
pH-Wert-Verschiebung in den basischen Bereich nach der Implantation
von Metallstents, vorzugsweise Magnesium-Stents auftreten, sowie
Wirkstoffe, die diesen biologischen Effekten entgegenwirken, werden
in
DE 10 2006
038 235 A1 beschrieben und werden in soweit durch Referenz auf
DE 10 2006 038 235
A1 hierein inkorporiert.
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Für
das erfindungsgemäße Verfahren können,
sofern sinnvoll, auch alle bevorzugten Ausgestaltungen zum Erfindungsgegenstand
angewendet werden.
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Unter
Bereitstellung eines Implantatgrundkörpers, bevorzugt Stentgrundkörpers
gemäß Schritt a) des Verfahrens der vorliegenden
Erfindung ist üblicherweise die Bereitstellung eines nicht
derivatisierten und/oder funktionalisierten Implantatgrundkörpers,
bevorzugt Stentgrundkörpers zu verstehen. Solche erfindungsgemäß einzusetzenden
Implantatgrundkörper, bevorzugt Stentgrundkörper
werden vorstehend zum Erfindungsgegenstand beschrieben.
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Unter
dem erfindungsgemäßen Reinigungsschritt von Implantatgrundkörpern,
bevorzugt Stentgrundkörpern gemäß Schritt
b) des zweiten Erfindungsgegenstandes ist üblicherweise
eine Behandlung des Implantatgrundkörpers, bevorzugt Stentgrundkörpers
zu verstehen, die den Implantatgrundkörper, bevorzugt Stentgrundkörper
so aktiviert, dass im anschließenden Schritt die Ankermoleküle
an den Implantatgrundkörper, bevorzugt Stentgrundkörper gebunden
werden. Bevorzugt ist unter dem erfindungsgemäßen
Reinigungsschritt die Reinigung des Implantatgrundkörpers,
bevorzugt Stentgrundkörpers in einem Sauerstoffplasma und/oder
durch Spülen mit Lösungsmittel, bevorzugt der
Lösungsmittelreihe Dichlormethan, Aceton, Methanol und
Millipore Wasser zu verstehen. Gegebenenfalls sich kann an den Reinigungsschritt
ein Trocknungsschritt anschließen.
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Unter
Bereitstellung von Ankergruppen, ausgewählt aus Verbindungen
der allgemeinen Formel (I) gemäß Schritt c) des
erfindungsgemäßen Verfahrens, ist eine Bereitstellung
dieser Verbindungen gelöst, suspendiert oder emulgiert
in einem Lösungsmittel, vorzugsweise ausgewählt
aus der Gruppe bestehend aus Methanol, Ethanol, Aceton, Tetrahydrofuran,
Dimethylformamid, Chloroform, Dimethylsulfoxid, Dichlormethan etc.
weiter bevorzugt trockenes, Tetrahydrofuran zu verstehen.
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Unter
dem erfindungsgemäßen Funktionalisieren der gereinigten
Implantatgrundkörper, bevorzugt Stentgrundkörper
mit einer oder mehreren, gleichen oder verschiedenen Ankergruppen
gemäß Schritt d) des zweiten Erfindungsgegenstandes
ist üblicherweise das vollständige oder teilweise
In-Kontakt-Bringen des gereinigten Implantatgrundkörpers, bevorzugt
Stentgrundkörpers mit einer oder mehreren Lösungen
gleicher und/oder verschiedener Ankergruppen der Verbindungen der
Formel (I) zu verstehen, wobei das oder die Lösungsmittel
anschließend ganz oder teilweise abgedampft werden. Weiter bevorzugt
wird das oder die Lösungsmittel innerhalb von einer Stunde
so abgedampft, dass der Meniskus der Lösung über
die Implantatoberfläche, bevorzugt Stentoberfläche
wandert. Unter „In-Kontakt-Bringen” ist erfindungsgemäß üblicherweise
ein Besprühen des gereinigten Stentgrundkörpers
mit einer oder mehreren Lösungen, gleicher und/oder unterschiedlicher
Ankergruppen oder ein Eintauchen des gereinigten Stentgrundkörpers
in eine oder mehrere Lösungen, gleicher und/oder verschiedener
Ankergruppen zu verstehen.
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Anschließend
kann hieran gegebenenfalls das mit einer oder mehreren Ankergruppen
funktionalisierte Implantat, bevorzugt der funktionalisierte Stent
thermisch behandelt werden (getempert werden), um die Anbindung
der Ankergruppen an den Implantatgrundkörper, bevorzugt
Stentgrundkörper zu erhöhen. Bevorzugt wird über
einen Zeitraum von 1 bis 124 Stunden und in einem Temperaturbereich von
60 bis 220°C, weiter bevorzugt für 18 bis 74 Stunden
bei 100 bis 140°C getempert.
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Gegebenenfalls
wird das funktionalisierte Implantat, bevorzugt der funktionalisierte
Stent, thermisch behandelt oder nicht, anschließend mit
Lösungsmittel gespült.
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Anschließend
kann das so vorbehandelte funktionalisierte Implantat, bevorzugt
der so vorbehandelte funktionalisierte Stent vorzugsweise über einen
Zeitraum von 1 bis 24 Stunden in eine Carbonyldiimidazol-Lösung
(CDI) in trockenem Dioxan gelegt werden, bevorzugt über
15 Stunden in eine 0,3 M Lösung von Carbonyldiimidazol
in trockenem Dioxan. Gegebenenfalls schließt hieran eine
Spülung des funktionalisierten Implantats, bevorzugt Stents
mit trockenem Dioxan an.
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Anschließend
kann zusätzlich bevorzugt ein Trockenschritt im Stickstoffstrom
folgen.
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Unter
Bereitstellung erfindungsgemäß einzusetzender
Aptamere gemäß Schritt e) des Erfindungsverfahrens
ist üblicherweise eine Bereitstellung als Lösung,
Suspension sowie Emulsion, bevorzugt in einer Puffer-Lösung,
die aminosäurefrei ist, zu verstehen. Als Puffer kommen
Phosphat-Puffer, PBS-Puffer (phosphate buffered saline), MES-Puffer (2-Morpholinoethanesulfonic
acid), Borat-Puffer etc. in Frage. Bevorzugt ist der PBS-Puffer.
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Der
oder die funktionalisierten Implantate, bevorzugt Stents gemäß Schritt
c) des zweiten Erfindungsgegenstandes werden gemäß Schritt
f) des zweiten Erfindungsgegenstandes ganz oder teilweise mit der
Lösung, Suspension oder Emulsion der Aptamere aus Schritt
c) in Kontakt gebracht und gegebenenfalls gespült. Unter „In-Kontakt-Bringen” ist üblicherweise
ein Besprühen des funktionalisierten Implantatgrundkörpers,
bevorzugt Stentgrundkörpers mit einer oder mehreren Puffer-Lösungen,
gleicher und/oder verschiedener erfindungsgemäß einzusetzender
Aptamere oder ein Eintauchen des gereinigten Implantatgrundkörpers,
bevorzugt Stentgrundkörpers in eine oder mehrere Puffer-Lösungen, gleicher
und/oder verschiedener Aptamere zu verstehen.
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Anschließend
kann bevorzugt ein Trocknungsschritt mit Stickstoff folgen.
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Zur
Ausbildung der Bindung der erfindungsgemäß einzusetzenden
Aptamere an Benzophenon-Ankergruppen folgt bevorzugt ein Belichtungsschritt,
zum Beispiel bei 260 nm mit 100 mW/cm2.
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Zur
Ausbildung der Bindung der Biomoleküle an Carbonyl-Ankergruppen
folgt bevorzugt zuerst eine Aktivierung der Carbonyl-Ankergruppen
mit N,N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethyl-carbodiimid hydrochloride
(EDC) und/oder N-hydroxysuccinimid (NHS) und daran anschließend
eine Kopplung des erfindungsgemäß einzusetzenden
Aptamers.
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Für
das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung
und die Verwendung können ebenfalls, sofern sinnvoll, die
bevorzugten Ausgestaltungen der erläuterten Erfindungen
angewendet werden.
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Ausführungsbeispiele:
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Die
vorliegende Erfindung wird im Folgenden durch Ausführungsbeispiele
beschrieben, wobei sich insbesondere Merkmale, Einzelheiten und
Vorteile der Erfindung hieraus ergeben. Die vorliegende Erfindung
wird allerdings nicht auf die Ausführungsbeispiele beschränkt.
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Beispiel 1:
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Ein
im Sauerstoffplasma (Gerät der Fa. Diener; Modell Terta;
200 W; 0,2 mBar; 2–30 Min.) oder durch Spülen
mit der Lösungsmittelreihe Dichlormethan, Aceton, Methanol
und Millipore-Wasser gereinigter Stent wird im Folgenden weiterbehandelt:
Es
wird eine 1 mM Lösung von Hydroxyundecylphosphonsäure
in trockenem Tetrahydrofuran hergestellt. In diese wird der Stent
gehängt und das Lösungsmittel wird innerhalb von
einer Stunde abgedampft, wobei der Meniskus der Lösung über
die Stentoberfläche abwandert.
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Anschließend
wird der Stent 18 h bei 120°C getempert und daraufhin im
Lösungsmittel gespült. Der so vorbehandelte Stent
wird 15 h in eine 0.3 M Lösung von Carbonyldiimidazol (CDI)
in trockenem Dioxan gelegt. Anschließend wird er 2 × 10
Minuten mit trockenem Dioxan gespült und im Stickstoffstrom getrocknet.
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Auf
die so behandelten Stents wird eine Lösung zu koppelnden
Reagenzien, wie den oben beschriebenen erfindungsgemäß einzusetzenden
Aptameren (ca. 50 μg/ml), in PBS-Puffer (aminosäurefrei, RNAse-frei)
gegeben und über Nacht bei 4°C geschüttelt.
Anschließend wurden die Stents mit Puffer gespült.
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Beispiel 2:
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Ein
im Sauerstoffplasma (Gerät der Fa. Diener; Modell Terta;
200 W; 0,2 mBar; 2–30 Min.) oder durch Spülen
mit der Lösungsmittelreihe Dichlormethan, Aceton, Methanol
und Millipore-Wasser gereinigter Stent wird im Folgenden weiterbehandelt:
Es
wird eine 3 mM Lösung von 3-(4-Oxybenzophenon)propylphosphonsäure
in trockenem Tetrahydrofuran hergestellt. Mit dieser wird der Stent
3× besprüht. Anschließend wird der Stent
12 h bei 120°C getempert und daraufhin im Lösungsmittel
gespült.
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Diese
Stents werden in eine Lösung zu koppelnder Reagenzien,
wie den oben beschriebenen erfindungsgemäß einzusetzenden
Aptameren (ca. 50 μg/ml) in Puffer gegeben und über
Nacht bei 4°C geschüttelt.
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Am
nächsten Tag werden die Stents aus dem Lösungsmittel
entfernt, getrocknet und bei 260 nm mit 100 mW/cm2 belichtet.
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Nicht
gebundene RNA wird abgewaschen.
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Beispiel 3:
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Ein
im Sauerstoffplasma (Gerät der Fa. Diener; Modell Terta;
200 W; 0,2 mBar; 2–30 Min.) oder durch Spülen
mit der Lösungsmittelreihe Dichlormethan, Aceton, Methanol
und Millipore-Wasser gereinigter Stent wird im Folgenden weiterbehandelt:
Es
wird eine 1 mM Lösung von Carboxydodecylphosphonsäure
in trockenem Tetrahydrofuran hergestellt. In diese wird der Stent
gehängt und das Lösungsmittel wird innerhalb von
einer Stunde abgedampft, wobei der Meniskus der Lösung über
die Stentoberfläche abwandert. Anschließend wird
der Stent 74 h bei 120°C getempert und daraufhin im Lösungsmittel
gespült.
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Der
so vorbehandelte Stent wird 45 min in eine 1:1 Mischung von 0.4
M EDC und 0.1 M NHS in Millipore Wasser gelegt. Anschließend
wird er kurz mit Millipore Wasser gespült und im Stickstoffstrom getrocknet.
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Auf
die so behandelten Stents wird eine Lösung zu koppelnden
Reagenzien, wie den oben beschriebenen erfindungsgemäß einzusetzenden
Aptameren (ca. 50 μg/ml), in PBS-Puffer (aminosäurefrei, RNAse-frei)
gegeben und über Nacht bei 4°C geschüttelt.
Anschließend wurden die Stents mit Puffer gespült.
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ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
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Zitierte Patentliteratur
-
- - EP 1419793
B1 [0033]
- - US 6896695 [0041]
- - US 2006/241742 [0041]
- - US 5968083 [0041]
- - EP 1430854 [0041]
- - US 6197047 [0041]
- - EP 0884985 [0041]
- - DE 102006038235 A1 [0054, 0054]