DE10100807C2 - Hard tissue analysis method - Google Patents
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Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Analyse von hartem Gewebe.The invention relates to a method for the analysis of hard Tissue.
Zur Analyse von hartem Gewebe, beispielsweise Hornhaut, Nägeln, Knochengewebe oder Zahngewebe, ist es bekannt, dies histologisch zu analysieren. Dabei wird das Gewebe eingefärbt, in dünne Gewebeschnitten unterteilt und anschließend mikroskopisch analysiert.For the analysis of hard tissue, e.g. cornea, Nails, bone tissue, or tooth tissue, it is known to do this to analyze histologically. The tissue dyed, divided into thin tissue sections and then analyzed microscopically.
Aus der Veröffentlichung "Longitudinal melanonychia caused by Trichophyton rubrum" von C. Perrin und R. Baran, Journal of the American Academy of Dermatology, Volume 31, Number 2, Part 2, August 1994, Seite 312 bis 316 ist beispielsweise bekannt, eine Probe eines pilzbefallenen Nagels durch teilweisen Abriss des Nagels und anschließendes Einbetten in einen Kunststoff zu gewinnen. Daran schließt sich eine histologische Untersuchung an.For example, a sample is known from the publication "Longitudinal melanonychia caused by Trichophyton rubrum" by C. Perrin and R. Baran, Journal of the American Academy of Dermatology, Volume 31 , Number 2 , Part 2 , August 1994, pages 312 to 316 a fungal nail by partially tearing the nail and then embedding it in a plastic. This is followed by a histological examination.
Aus der DE 195 23 581 A1 ist es bekannt, Proben von Zellen, beispielsweise von Körperoberflächen, insbesondere von Hautproben von der Hautoberfläche, auf einen gefärbten oder farbigen durchsichtigen oder durchscheinenden Klebefilm aufzunehmen und anschließend optisch oder elektronisch zu untersuchen.DE 195 23 581 A1 discloses samples of cells, for example of body surfaces, in particular of Skin samples from the skin surface, on a colored or colored transparent or translucent adhesive film record and then optically or electronically investigate.
Die DE 198 08 450 A1 beschreibt eine Vorrichtung zum Antreiben eines einen Schaft und einen beispielsweise schleifenden Werkzeugkopf aufweisenden Rotationswerkzeuges, die insbesondere für die Nagelpflege verwendet werden kann.DE 198 08 450 A1 describes a device for Driving a shaft and one, for example grinding tool head with rotating tool, which can be used especially for nail care.
Nachteilig an der histologischen Untersuchung ist der große personelle Aufwand und Anzahl kostspieliger Geräte, die zur Aufbereitung mikroskopisch analysierbarer Gewebeschnitten notwendig ist. Zudem ist das histologische Verfahren zeitaufwendig. So muß das Gewebe einer Einfärbung so lange unterzogen werden, bis alle zu analysierenden Gewebeschichten eingefärbt sind. Besonders bei dickeren Gewebeproben ist hierfür meist eine beträchtlicher Zeitaufwand einzurechnen.The disadvantage of the histological examination is the large one Personnel effort and number of expensive devices that are used for Preparation of microscopic tissue sections necessary is. In addition, the histological procedure time-consuming. So the fabric has to be dyed for so long be subjected to all to be analyzed Fabric layers are colored. Especially with thick ones Tissue samples are usually a considerable one for this Allow time.
In seiner Anwendung zur diagnostischen Abklärung von Nagelpilz weist das histologische Verfahren ferner den Nachteil auf, daß zur Gewinnung der Gewebeprobe lediglich distale Nagelanteile abgetrennt werden können. Zur Untersuchung proximaler Nagelteile ist als Gewebeprobe der gesamte Nagel zu entfernen, was für den Patienten schmerzhaft ist.In its application for the diagnostic clarification of Nail fungus also shows the histological method Disadvantage that only to obtain the tissue sample distal nail parts can be separated. to Examination of proximal nail parts is the tissue sample remove entire nail, which is for the patient is painful.
Dieser Nachteil haftet auch anderen Untersuchungsmethoden zur diagnostischen Abklärung von Nagelpilz an, beispielsweise bei der Anlage von Pilzkulturen. Letztere Methode weist zusätzlich den Nachteil auf, daß bis zu 50% der Pilzkulturen nicht anwachsen. Zudem sind die letztgenannten Untersuchungsmethoden ebenfalls Zeit- und personalaufwendig.This disadvantage is also liable to other methods of investigation for diagnostic clarification of nail fungus, for example when planting mushroom cultures. Latter The method also has the disadvantage that up to 50% the mushroom cultures do not grow. They are also last mentioned investigation methods also time and labor-intensive.
Vor diesem Hintergrund liegt der Erfindung das technische Problem zugrunde, ein rascheres und einfacheres Verfahren zur Analyse eines harten Gewebes zu schaffen.Against this background, the invention is technical Underlying problem, a faster and easier procedure to create a hard tissue analysis.
Dieses technische Problem wird gelöst, indem das Gewebe mittels eines Fräsers in Gewebeteilchen abgetragen wird und die Gewebeteilchen zytologisch analysiert werden.This technical problem is solved by the fabric is removed by means of a milling cutter in tissue particles and the tissue particles are analyzed cytologically.
In einer Ausgestaltung der zytologischen Analyse ist vorgesehen, dass die Gewebeteilchen mit einer Färbemethode angefärbt und mikroskopisch analysiert werden. In one embodiment of the cytological analysis provided the tissue particles with a staining method stained and analyzed microscopically.
Es hat sich gezeigt, daß durch den Abtrag mittels des Fräsers Gewebeteilchen abgetragen werden, die rasch eingefärbt werden können und ohne eine Teilung in Gewebeschnitten mikroskopisch analysiert werden können.It has been shown that the removal by means of Milling tissue particles are removed quickly can be colored and without a division in Tissue sections can be analyzed microscopically.
Durch den Abtrag mittels des Fräsers wird das harte Gewebe in einzelne Zellen, Zellbruchstücke und kleinere Zellgruppen zerteilt, die einer zytologischen Untersuchung ohne weitere Unterteilungsschritte zugeführt werden können.The hard tissue is removed by means of the milling cutter into individual cells, cell fragments and smaller cell groups divided that a cytological examination without further Subdivision steps can be performed.
Damit ist es möglich, auch bei hartem Gewebe die bisher nur für zelluläres Material weicher Gewebeschichten oder einzelner in Flüssigkeiten vorhandener Zellen angewandten zytologischen Verfahren anzuwenden. Bisher war es lediglich möglich, zytologisch analysierbares Material mittels Abstrichen bei weichen Gewebeschichten (Gynäkologie, Gastroenterologie, Dermatologie) oder mittels Filtration bei in Flüssigkeiten befindlichen Zellen (Urologie, Innere Medizin bei Lavagen, Chirurgie) zu gewinnen.This makes it possible, even with hard tissue, so far only for cellular material of soft tissue layers or individual cells used in liquids apply cytological procedures. So far it was only possible to use cytologically analyzable material Smear on soft tissue layers (gynecology, Gastroenterology, dermatology) or by filtration cells in fluids (urology, internal Medicine in lavage, surgery).
Wie auch bei den bekannten zytologischen Methoden, werden auch bei dem erfindungsgemäßen Verfahren die Zellen, bzw. Zellbruchstücke oder kleinere Zellgruppen auf einen durchsichtigen Objektträger gelegt und eingefärbt. Durch ihre hohe Transparenz können die Zellen, bzw. Zellbruchstücke oder kleinere Zellgruppen mikroskopisch gut untersucht werden.As with the known cytological methods also in the method according to the invention the cells or Cell fragments or smaller cell groups on one transparent slide placed and stained. By the cells, or Cell fragments or smaller cell groups are microscopic to be examined.
Das erfindungsgemäße Verfahren läßt sich beispielsweise gut für die diagnostische Abklärung von Nagelpilz einsetzen. Mittels des Fräsers können gezielt und schmerzfrei einzelne Nagelbereiche abgetragen werden. Dabei können auch proximale Nagelbereiche abgetragen werden.The method according to the invention can be used, for example, well use for the diagnostic clarification of nail fungus. Individuals can be targeted and painlessly using the milling cutter Nail areas are removed. It can also be proximal Nail areas are removed.
Durch die selektive Untersuchung einzelner Nagelbereiche wird die Diagnostik des Nagelpilzes, auch bei schwieriger poximaler und tiefer Lokalisierung, genauer. Through the selective examination of individual nail areas will diagnose the nail fungus, even with more difficult poximal and deep localization, more precisely.
Vor allen Dingen kann mit dem erfindungsgemäßen Verfahren die Analyse der entnommen Proben rasch und mit einfachen Mitteln erfolgen, so daß die Möglichkeit einer Vorort- Analyse besteht.Above all, can be done with the inventive method the analysis of the samples taken quickly and easily Funds so that the possibility of an on-site Analysis exists.
Auch lassen sich mit dem erfindungsgemäßen Verfahren gezielte Analysen von Lufteinschlüssen in Nägeln einfach durchführen. Hierzu wird der Nagel an diesen Stellen abgefräst und zytologisch untersucht. Damit kann festgestellt werden, ob in den Luftpolstern Sporen vorhanden sind, die dann mittels mechanischer Methoden, beispielsweise durch einen Läser oder einen Fräser entfernt werden müssen, da durch das Luftpolster keine Medikamente zu den Sporen vordringen.The method according to the invention can also be used targeted analysis of air pockets in nails easily carry out. To do this, the nail at these points milled and examined cytologically. So that can determine whether spores are present in the air cushions are, which are then by means of mechanical methods, for example have to be removed by a laser or a milling cutter, because there is no medication to the spores through the air cushion penetrate.
Ebenso kann das erfindungsgemäße Verfahren zur Analyse von Zahnpartikeln verwendet werden.The method according to the invention for analyzing Tooth particles are used.
Das erfindungsgemäße Verfahren kann ferner in der Tiermedizien, beispielsweise zur Untersuchung von Klauenerkrankungen bakterieller oder mykotischer Art eingesetzt werden.The inventive method can also in the Veterinary medicine, for example for the investigation of Claw diseases of a bacterial or mycotic type be used.
Neben der Möglichkeit, Gewebeproben mittels des erfindungsgemäßen Verfahren direkt zu entnehmen, kann das erfindungsgemäße Verfahren auch dazu eingesetzt werden, bereits abgelöste Gewebe, beispielsweise einen bereits gezogenen Nagel oder Nagelteile, zu untersuchen.In addition to the possibility of taking tissue samples using the To remove the inventive method directly, can methods according to the invention can also be used already detached tissue, for example one already drawn nail or nail parts to examine.
Besonders vorteilhaft für das erfindungsgemäße Verfahren hat sich eine Größe der Gewebeteilchen von 1 bis 50 µm, insbesondere von 10 bis 30 µm, in ihrer längsten Erstreckung gezeigt. Derartige Gewebeteilchen werden beispielsweise durch den Einsatz herkömmlicher Diamantfräser, wie sie aus der Fußpflege oder der Zahnmedizin bekannt sind, erreicht. Has particularly advantageous for the inventive method the size of the tissue particles is from 1 to 50 µm, in particular from 10 to 30 µm, in its longest extension shown. Such tissue particles are, for example through the use of conventional diamond milling cutters as they are made from foot care or dentistry are known.
Das erfindungsgemäße Verfahren kann besonders rasch durchgeführt werden, wenn die durch den Fräsvorgang abgelösten Gewebeteilchen auf einer Haftfläche eines Objektträgers aufgefangen werden. Es hat sich gezeigt, daß die Gewebeteilchen durch die Rotation des Fräskopfes beim Fräsvorgang in eine Hauptrichtung weggeschleudert werden. Bei einem in dieser Hauptrichtung angeordneten Objektträger, der eine dem Fräser zugewandte Haftfläche aufweist, bleibt eine Mehrzahl der weggeschleuderten Gewebeteilchen an dieser Haftfläche kleben. Dieser Objektträger kann dann direkt zur Durchführung der zytologischen Untersuchung eingesetzt werden. Hierzu werden die auf der Haftfläche befindlichen Zellen, bzw. Zellbruchstücke oder kleinere Zellgruppen eingefärbt und anschließend direkt auf dem Objektträger mikroskopisch untersucht.The method according to the invention can be particularly rapid be done when through the milling process detached tissue particles on an adhesive surface of a Slides are caught. It has been shown that the tissue particles by the rotation of the milling head when Milling process in a main direction. With a slide arranged in this main direction, which has an adhesive surface facing the milling cutter remains a majority of the tissue particles flung away on it Glue the adhesive surface. This slide can then go straight to Implementation of the cytological examination used become. For this, the ones located on the adhesive surface Cells, or cell fragments or smaller cell groups stained and then directly on the slide examined microscopically.
Als Objektträger können herkömmliche, für mikroskopische Untersuchungen verwendete, durchsichtige Objektträger verwendet werden. Diese werden für den Einsatz in der oben beschriebenen bevorzugten Ausgestaltung mit einem glasklaren Klebelack bestrichen. Ebenso können bereits mit einer haftenden Oberfläche ausgerüstete Objektträger verwendet werden.Slides can be conventional, for microscopic Examinations used, transparent slides be used. These are for use in the above described preferred embodiment with a crystal clear Spread glue varnish. Likewise, with one equipped slide equipped adhesive surface become.
Schließlich kann als Objektträger auch ein Klebefilm verwendet werden. Dieser wird, nachdem durch ihn die abgelösten Gewebeteilchen aufgefangen wurden, zur zytologischen Untersuchung verwendet, indem er auf einen Objektträger gelegt wird, eingefärbt und mikroskopisch untersucht wird.Finally, an adhesive film can also be used as a slide be used. After it becomes the detached tissue particles were collected for cytological examination used by pointing to a Slides are placed, stained and microscopic is examined.
Alternativ können die durch den Fräsvorgang abgelösten Gewebeteilchen in einer Flüssigkeit aufgefangen werden. Hierzu kann der Fräsvorgang beispielsweise über einem Flüssigkeitsbecken durchgeführt werden. Die Verwendung einer Flüssigkeit zum Auffangen der Gewebeteilchen bietet den weiteren Vorteil, daß die Gewebeteilchen bis zur zytologischen Untersuchung in dieser Flüssigkeit gelagert werden können.Alternatively, they can be replaced by the milling process Tissue particles are caught in a liquid. For this purpose, the milling process can be carried out, for example, over a Liquid pools are carried out. The use of a Fluid for collecting the tissue particles offers the further advantage that the tissue particles up to cytological examination stored in this liquid can be.
Bei in Flüssigkeit gelagerten Gewebeteilchen können diese durch Hitze oder Acteon auf dem Objektträger fixiert werden und anschließend zytologisch untersucht werden.In the case of tissue particles stored in liquid, these can fixed on the slide by heat or Acteon and then examined cytologically.
Nachfolgend wird das erfindungsgemäße Verfahren anhand einer lediglich ein Anwendungsbeispiel darstellenden Zeichnung näher erläutert. Die einzige Figur zeigt dabei einen menschlichen Zeh, bei dem das erfindungsgemäße Verfahren zur Diagnose eines Nagelpilz angewendet wird.The method according to the invention is described below using a just an example of an application drawing explained in more detail. The only figure shows one human toe, in which the inventive method for Diagnosis of a nail fungus is applied.
In der Figur ist der vordere Teil eines menschlichen Zehs 1 dargestellt. Dieser weist einen Nagel 2 auf. Ein ebenfalls dargestellter Fräser 3 weist einen Diamantfräskopf 4 auf. Neben den Zeh 1 wird ein durchsichtiger Objektträger 5 gehalten, dessen dem Zeh 1 zugewandte Oberfläche als Klebefläche ausgebildet ist.The front part of a human toe 1 is shown in the figure. This has a nail 2 . A milling cutter 3 , also shown, has a diamond milling head 4 . In addition to the toe 1 , a transparent slide 5 is held, the surface of which faces the toe 1 is designed as an adhesive surface.
Zur Abtragung des harten Nagelgewebes wird der in Richtung des Pfeils A drehende Diamantfräskopf 4 an der zu analysierenden Stelle an den Nagel 2 gehalten. Dabei werden durch den Fräsvorgang Gewebeteilchen 6 abgelöst. Diese werden durch die rotierende Fräsbewegung in Richtung des Pfeils B von der Frässtelle weggeschleudert. Der in Richtung des Pfeils B neben den Zeh 1 gehaltene Objektträger 5 fängt die Gewebeteilchen 6 mit seiner Klebefläche auf. Dadurch wird auf dem Objektträger eine dünne, aus einzelnen Zellen, Zellbruchstücken oder kleineren Zellgruppen gebildete Schicht gebildet.To remove the hard nail tissue, the diamond milling head 4 rotating in the direction of arrow A is held on the nail 2 at the point to be analyzed. Tissue particles 6 are detached by the milling process. These are thrown away from the milling point by the rotating milling movement in the direction of arrow B. The slide 5 held next to the toe 1 in the direction of the arrow B catches the tissue particles 6 with its adhesive surface. This forms a thin layer formed from individual cells, cell fragments or smaller cell groups on the slide.
Zur Analyse der abgetragenen Gewebeteilchen werden diese eingefärbt und mikroskopisch analysiert. Zwar werden durch die Fräsung die Zelllagen und Zellschichten sowie längliche Pilzhyphen und andere Gebilde teils zerstört, trotzdem können die anders wie die üblichen histologischen aussehenden Präparate zur eindeutigen Identifikation des Pilzbefalls verwendet werden.These are used to analyze the removed tissue particles colored and analyzed microscopically. Although through the milling of the cell layers and cell layers as well as elongated Mushroom hyphae and other structures partly destroyed, nevertheless can be different from the usual histological looking preparations for clear identification of the Fungus infestation can be used.
Ein Vergleich der mit dem zuvor beschriebenen Verfahren ermittelten Befunde mit histologischen Befunden des gleichen Nagels hat eine fast 100% Übereinstimmung der Befunde ergeben. Jedoch konnten die Befunde, wie oben dargestellt, mit dem erfindungsgemäßen Verfahren mit weniger Verfahrensschritten und rascher durchzuführenden Schritten, insbesondere hinsichtlich der Färbung, Einbettung, mikrotomischen Aufbereitung, durchgeführt werden, als die bekannten histologischen Untersuchungsverfahren.A comparison of the method described above Findings with histological findings of the same Nagels' findings are almost 100% identical result. However, as shown above, the findings with the method according to the invention with less Procedural steps and steps to be carried out more quickly, especially with regard to coloring, embedding, microtomic preparation, to be carried out as the known histological examination methods.
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