DE202007014762U1

DE202007014762U1 - Arrangement for the preparation of tissue to be examined and slides for tissue to be examined

Info

Publication number: DE202007014762U1
Application number: DE200720014762
Authority: DE
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2007-07-26
Filing date: 2007-07-26
Publication date: 2007-12-13
Anticipated expiration: 2017-07-27

Abstract

Anordnung (1000) zur Aufbereitung von zu untersuchendem Zellgewebe (613) mit:
a) ersten Mitteln (812, 813, 814) zur Zerteilung eines auf einem flexiblen ersten Substrat (61) aufgebrachten ersten flächigen Gewebeschnittes (613) in eine Vielzahl (611, 612, 615) von zu untersuchenden Gewebe-Substrateinheiten,
b) zweiten Mitteln (817, 818, 819) zur Überführung von einer Mehrzahl von Gewebe-Substrateinheiten (611, 612, 613) auf separate Reaktionszonen (84, 85) eines ersten Objektträgers (73) und
c) dritten Mitteln (822-825) zur Aufbringung von jeweils verschiedenen untersuchungsspezifischen Aufbereitungsreagenzien auf mindestens zwei verschiedene Reaktionszonen (84, 85).Arrangement (1000) for the preparation of cell tissue to be examined (613) with:
a) first means (812, 813, 814) for dividing a first planar tissue section (613) applied on a flexible first substrate (61) into a plurality (611, 612, 615) of tissue substrate units to be examined,
b) second means (817, 818, 819) for transferring a plurality of tissue substrate units (611, 612, 613) to separate reaction zones (84, 85) of a first slide (73) and
c) third means (822-825) for applying in each case different assay-specific treatment reagents to at least two different reaction zones (84, 85).

Description

Die Erfindung bezieht sich auf eine Anordnung zur Aufbereitung von zu untersuchendem Gewebe und einen geeigneten Objektträger dafür.The The invention relates to an arrangement for the preparation of examining tissue and a suitable slide for it.

In der jüngeren Vergangenheit ist durch die Verbesserung gentechnischer Analyseverfahren ein erhöhter Bedarf an Gewebeuntersuchungen entstanden. Insbesondere wird im Rahmen der Onkologie bei der Behandlung und Diagnose von Krebs vermehrt auf die Genexpressionsanalyse gesetzt.In the younger ones Past is by improving genetic engineering analysis an elevated one Need for tissue examinations emerged. In particular, in the Framework of oncology in the treatment and diagnosis of cancer set to the gene expression analysis.

Bei einer derartigen Analyse wird die Tatsache ausgenutzt, dass von 25.000 vorhandenen Genen des menschlichen Genoms häufig nur zwei- bis dreihundert bestimmend sind für die Funktion eines Tumors. Aus diesen charakteristischen Genen können wiederum häufig zwanzig bis dreißig extrahiert werden, die ohne signifikante Verschlechterung der statistischen Aussage eine verlässliche Aussage über den Tumorzustand, die Wirkungsweise einer Behandlung und den Verlauf der Erkrankung geben können. Mit einer Genexpressionsanalyse werden Tumore darauf untersucht, ob spezielle Gene ein- und ausgeschaltet sind, bzw. welche Gene vor handen sind. Dies geschieht anhand von Gewebeproben, die mittels spezieller Antikörper untersucht werden, welche dann über Färbeverfahren zu einem spezifischen Nachweis der Gene im Gewebe führen.at Such an analysis exploits the fact that 25,000 existing genes of the human genome often only Two to three hundred are decisive for the function of a tumor. Of these characteristic genes, in turn, often twenty to thirty be extracted without significant deterioration of the statistical Statement a reliable one Statement about the tumor state, the mode of action of a treatment and the course can give the disease. With a gene expression analysis tumors are examined, whether special genes are switched on and off or which genes available. This is done by means of tissue samples by means of special antibody be examined, which then over dyeing process lead to a specific detection of genes in the tissue.

Bisher bekannte Anordnungen und Verfahren, wie zum Beispiel offenbart in EP 1370639 und WO 01/22086 , setzen dabei Gewebefelder ein, die aus Feldanordnungen verschiedener Gewebeproben bestehen und gleichzeitig einem Agens ausgesetzt werden, mit dem ein spezifischer Antikörper auf die verschiedenen Gewebeproben aufgebracht werden kann. Nach einem anschließenden Färben können alle verschiedenen auf dem Objektträger untergebrachten Gewebeproben unter dem Mikroskop untersucht werden.Previously known arrangements and methods, such as disclosed in EP 1370639 and WO 01/22086 They use tissue fields that consist of field arrangements of different tissue samples and are simultaneously exposed to an agent with which a specific antibody can be applied to the various tissue samples. After subsequent staining, all different tissue samples housed on the slide can be examined under the microscope.

Wie später noch im Detail beschrieben werden wird, werden zur Vorbereitung der Gewebeproben zunächst ca. 2,0 × 2,0 mm × 0,2-0,3 mm große Gewebeblöcke aus zu untersuchendem Gewebe ausgestanzt und in einen Paraffinblock eingebracht. Die Größe der Gewebeblöcke hangt dabei vom beabsichtigten Stanzdurchmesser ab. Aus mehreren derartigen Paraffinblöcken werden dann so genannte Bereichsblöcke gebildet, indem jeweils mit dünnen Proberöhrchen der dort im Paraffinblock vorhandenen Gewebeprobe ein Stanzzylinder entnommen wird und in einem weiteren Paraffinblock nach Art eines Feldes eingebracht wird, sodass beispielsweise bis zu 240 unterschiedliche Gewebeproben unterschiedlicher Herkunft in einem solchen Block untergebracht werden können. Zur anschließenden Untersuchung wird dann ein Teilschnitt quer zu den Zylinderachsen vorgenommen und dadurch eine dünne Schicht der verschiedenen Gewebeproben erhalten, praktisch nach Art eines Rasters eingebettet in Paraffin, welche auf einen Objektträger aufgebracht und untersucht werden kann.As later will be described in more detail, are being prepared the tissue samples first about 2.0 × 2.0 mm × 0.2-0.3 mm large tissue blocks punched out to be examined tissue and in a paraffin block brought in. The size of the fabric blocks depends thereby from the intended punching diameter. From several such paraffin blocks Then, so-called area blocks are formed by each with thin test tubes the There in the paraffin block tissue sample a punching cylinder is removed and in another paraffin block in the manner of a Field is introduced, so for example, up to 240 different Tissue samples of different origin housed in such a block can be. To the subsequent Examination then becomes a partial section transverse to the cylinder axes made and thereby a thin layer obtained from the various tissue samples, practically in the manner of a Rasters embedded in paraffin, which are applied to a microscope slide and can be studied.

Derartige Anordnungen und die anschließenden Untersuchungsverfahren haben insbesondere den Nachteil, dass keine individualisierten, das heißt patientenbezogenen Untersuchungen damit möglich sind, weil immer wieder der gesamte Probenbereich, der einmal in einem Wachszylinder zusammengefasst wurde, gemeinsam untersucht wird bzw. untersucht werden muss. Weiterhin besteht ein Nachteil dieses Verfahrens darin, dass eine große Anzahl von Proben lediglich mit einem Untersuchungsagens untersucht werden kann.such Arrangements and the subsequent Investigation methods have the particular disadvantage that no individualized, that is Patient-related examinations are possible with it, because again and again the entire sample area, which is once summarized in a wax cylinder has to be investigated or investigated together. Farther a disadvantage of this method is that a large number of samples to be examined only with a research agent can.

Wie eingangs erwähnt, besteht jedoch ein hoher Bedarf, je Patient eine Vielzahl Untersuchungen an Gewebeproben ein und desselben Gewebes durchzuführen, diese jedoch mit unterschiedlichsten Agenzien, das heißt mit Antikörpern oder Sonden für spezifische Gene, die beispielsweise je nach Krebstyp zu untersuchen sind.As mentioned in the beginning, However, there is a high need for each patient a variety of studies to perform tissue samples of one and the same tissue, this However, with a variety of agents, that is, with antibodies or Probes for specific Genes to be studied, for example, depending on the type of cancer.

Aus US 4647543 ist ein Verfahren zu serologischen Untersuchungen von Antikörpern im Blut eines Patienten bekannt, das hauptsächlich dazu verwendet wird, um Autoimmunkrankheiten bei den Probanden zu diagnostizieren. Bei diesem Verfahren werden im Blut vorhandene Antikörper dazu gebracht, mit speziell dafür präpariertem Indikatorgewebe zu reagieren, um durch eine Färbung des Gewebes eine Indikation für das Vorhandensein von Antikörpern spezifischer Art im Blut zu erhalten. Es wird dabei weder eine strukturelle Untersuchung des Gewebes durchgeführt, noch ist es mit dem dort eingesetzten Färbeverfahren möglich, eine gute morphologische Auflösung spezifischer Strukturen des Gewebes erkennbar zu machen.Out US 4647543 is a method for serological examinations of antibodies in the blood of a patient known, which is mainly used to diagnose autoimmune diseases in the subjects. In this method, antibodies present in the blood are made to react with specially prepared indicator tissue to provide an indication of the presence of antibodies of a specific type in the blood by staining the tissue. Neither a structural examination of the tissue is carried out, nor is it possible with the staining method used there to make a good morphological resolution of specific structures of the tissue recognizable.

Die der Erfindung zugrunde liegende Aufgabe besteht darin, eine Anordnung zur Aufbereitung von zu untersuchendem Gewebe sowie einen Objektträger für zu untersuchendes Gewebe anzugeben, die es erlauben, auf technisch einfache Weise mehrere Proben eines einzigen Gewebes gemeinsam und synchron aufzubereiten. Insbesondere soll diese Aufbereitung es ermöglichen, dass verschiedene Aufbereitungsverfahren gleichzeitig zur Anwendung kommen können.The The object underlying the invention is an arrangement for the preparation of tissue to be examined as well as a microscope slide for the examined Specify tissues that allow several technically simple way Prepare samples of a single tissue together and synchronously. In particular, this preparation should allow different Treatment methods can be used simultaneously.

Diese Aufgabe wird gemäß der Erfindung für die Anordnung nach den Merkmalen des Patentanspruches 1 und für den Objektträger nach den Merkmalen des Patentanspruches 13 gelöst. Weiterbildungen der Erfindung ergeben sich aus den abhängigen Ansprüchen.These Task is according to the invention for the Arrangement according to the features of claim 1 and for the slide after the features of claim 13 solved. Further developments of the invention arise from the dependent ones Claims.

Auf besonders günstige Weise kombiniert die Anordnung gemäß der Erfindung das Schneiden von Gewebeproben, das Aufbringen der Gewebeproben auf einen einzigen Objektträger und die Untersuchung auf dem Objektträger mit unterschiedlichen Reagenzien. Durch diese Maßnahmen werden zeiteffiziente simultane Untersuchungen an gleichartigem Gewebe mit unterschiedlichsten Reagenzien möglich.On especially cheap Way, the arrangement according to the invention combines the cutting of Tissue samples, applying the tissue samples to a single slides and the slide study with different reagents. Through these measures be time-efficient simultaneous investigations on similar Tissue with different reagents possible.

Günstigerweise können die derartig angefertigten Objektträger weiter aufbereitet werden, indem die entsprechenden Reaktionszonen abgedeckt werden, um die gesamte Probensammlung auf dem Objektträger zu konservieren, um sie so für eine Archivierung oder spätere Betrachtung zu präparieren.conveniently, can the slides prepared in this way are further processed, by covering the appropriate reaction zones to the Conserve entire sample collection on the slide to them so for an archiving or later To prepare consideration.

Vorteilhaft setzt die Weiterbildung der Erfindung Gewebeschnitte ein, die in eine wachsartige Substanz, insbesondere Paraffin, eingebettet sind, weil derartige Gewebeschnitte bereits verwendet werden und die Präparationstechnologien kostengünstig und technisch ausgereift am Markt verfügbar sind.Advantageous the development of the invention uses tissue sections which are in a waxy substance, especially paraffin, are embedded because Such tissue sections are already used and the preparation technologies economical and technically mature on the market.

Vorteilhaft wird bei einer Weiterbildung der Erfindung eine Stanze zur Unterteilung eines flächigen Gewebeschnittes verwendet, um Gewebe-Substrateinheiten, die später zu untersuchen sind, herzustellen. Diese technisch einfache Lösung ist deswegen möglich, weil auf ein sprödes Substratmaterial verzichtet wird und eine Trägerfolie mit dem darauf befestigten Gewebe durch Stanzen leicht und ohne Zerstörung unterteilt werden kann.Advantageous In a further development of the invention, a punch for subdivision a flat Tissue sections used to examine tissue substrate units later are to manufacture. This technically simple solution is possible because on a brittle Substrate material is omitted and a carrier film with the attached thereto Tissue can be divided by punching easily and without destruction.

Vorteilhaft setzt eine Weiterbildung der erfindungsgemäßen Anordnung Weiterführungsmittel in Form von Unterdruckweiterführungsmitteln ein, die beispielsweise als Saugnapfheber ausgeführt sind. Mittel zur Herstellung von Unterdrücken sind leicht und technisch einfach zu realisieren und in ausgereifter Weise am Markt verfügbar.Advantageous sets a further development of the inventive arrangement Weiterführungsungsmittel in the form of vacuum transfer means a, which are designed for example as a suction cup lifter. Means of preparation of oppressions are easy and technically easy to implement and more mature Way available on the market.

Vorteilhaft werden bei einer Weiterbildung der erfindungsgemäßen Anordnung als dritte Mittel zur Aufbringung eines untersuchungsspezifischen Aufbereitungsreagenz Pipetten eingesetzt, weil am Markt verfügbare Antikörper häufig in Flüssig keitsform angeboten werden und mit Pipetten genau dosiert werden können, wobei besonders vorteilhaft solche Verfahren eingesetzt werden können, die bereits im Analysebereich Pipettierverfahren nutzen.Advantageous be in a development of the arrangement according to the invention as a third means for Application of an investigation-specific treatment reagent Pipettes are used because antibodies available on the market are often offered in liquid form and can be accurately metered with pipettes, being particularly advantageous Such methods can be used that are already in the analysis area Use pipetting method.

Besonders vorteilhaft sind die auf dem Objektträger vorhandenen Reaktionszonen durch hydrophobe Umrandungen voneinander getrennt, weil auf diese Art und Weise vermieden wird, dass sich die unterschiedlichen Reaktionssubstanzen, welche beispielsweise in flüssiger Form auf die Reaktionszonen aufgebracht werden, mischen und sich die Reaktionen gegenseitig beeinflussen.Especially advantageous are the reaction zones present on the slide separated by hydrophobic borders because of this Way is avoided that the different reaction substances, which, for example, in liquid Form to be applied to the reaction zones, mix and get the reactions influence each other.

Vorteilhaft wird bei einer Weiterbildung der erfindungsgemäßen Anordnung das erste Substrat aus transparentem Kunststoff ausgeführt, weil transparenter Kunststoff eine Untersuchung im Lichtmikroskop nicht behindert, und elastische Materialien, die sowohl Lösungsmittel beständig als auch elastisch sind, breit am Markt verfügbar sind, wobei insbesondere die Eigenschaften auch so gewählt werden können, dass ein geeigneter Brechungsindex vorhanden ist, der eine Untersuchung des Gewebes nach seiner Aufbereitung weiter zulässt.Advantageous In a further development of the arrangement according to the invention, the first substrate is made made of transparent plastic, because transparent plastic is an examination in a light microscope not hindered, and elastic materials that are both solvent resistant as well as being elastic, are widely available in the market, in particular the properties are also chosen can be that a suitable refractive index is present, which is an investigation tissue after its preparation.

Besonders vorteilhaft wird bei einer Weiterbildung der erfindungsgemäßen Anordnung Gewebe mit Krebszellen zur Untersuchung aufbereitet, weil sich die erfindungsgemäße Anordnung speziell für die Untersuchung vieler gleichartiger Proben mit unterschiedlichsten Substanzen eignet, wie sie im Bereich der Krebsdiagnostik und Behandlung benötigt werden.Especially is advantageous in a development of the inventive arrangement Tissue with cancer cells prepared for examination because of the inventive arrangement especially for the Investigation of many similar samples with different types Substances, as in the field of cancer diagnostics and treatment needed.

Speziell vorteilhaft werden bei einer Weiterbildung der erfindungsgemäßen Anordnung als Aufbereitungsreagenzien wenigstens ein Antigen, ein Farbstoff oder eine Flüssigkeit eingesetzt, weil derartige Reagenzien bereits bei aktuellen Verfahren eine Rolle spielen, und somit keine spezielle Anpassung des Reaktions- und Bearbeitungsablaufs in Bezug auf lediglich ein Reagenz erforderlich ist.specially be advantageous in a development of the inventive arrangement as processing reagents at least one antigen, a dye or a liquid used, because such reagents already in current procedures play a role, and thus no special adaptation of the reaction and processing required with respect to only one reagent is.

Besonders vorteilhaft sieht es eine Weiterbildung der erfindungsgemäßen Anordnung vor, dass die Reaktionszonen so bemessen und beabstandet sind, dass sie mit einem Abstand von zwei simultan arbeitenden dritten Mitteln übereinstimmen. Das heißt, die Reaktionszonen auf dem Objektträger können beispielsweise mit mehreren Pipetten gleichzeitig beschickt werden, wie sie beispielsweise schon im Stand der Technik eingesetzt werden, um größere Mengen von Probenmaterial mit Reaktionsflüssigkeit zu versorgen.Especially Advantageously, it provides a development of the arrangement according to the invention suggest that the reaction zones are sized and spaced such that they coincide with a distance of two simultaneously operating third means. This means, the reaction zones on the slide can, for example, with several Pipettes are charged simultaneously, as they already do used in the art to produce larger quantities of sample material with reaction liquid too supply.

Das Verfahren zur Aufbereitung von zu untersuchendem Zellgewebe sieht vor, einen flächigen Gewebeschnitt auf einem Substrat unterzubringen, dieses Substrat zu unterteilen und anschließend auf einem Objektträger einzelne Substratgewebepartikel in Reaktionszonen unterzubringen, weil auf diese Weise mit technisch vertretbarem Aufwand mehrere gleichartige Gewebe-Substrateinheiten gebildet werden können, die in den Reaktionszonen gleichartige Bedingungen zur Aufbereitung bieten. Vorteilhaft werden so für die Aufbereitung mit unterschiedlichen Reagenzien in den jeweiligen Reaktionszonen standardisierte Vorbedingungen geschaffen.The See method for processing of cell tissue to be examined before, a flat tissue section on a substrate to subdivide this substrate and subsequently on a microscope slide accommodate individual substrate tissue particles in reaction zones, because in this way with technically feasible effort several similar Tissue substrate units can be formed in the reaction zones provide similar conditions for processing. Be beneficial so for the preparation with different reagents in the respective Reaction zones standardized preconditions created.

Eine Weiterbildung des Verfahrens wird dabei auf Krebszellen enthaltendes Gewebe angewendet, weil sich das Verfahren besonders gut für die Untersuchung und/oder Aufbereitung von gleichartigem Gewebe mit unterschiedlichsten Substanzen eignet.A further development of the method is applied to tissue containing cancer cells det, because the method is particularly well suited for the investigation and / or treatment of similar tissue with a wide variety of substances.

Dabei werden bei einer Weiterbildung des Verfahrens die Aufbereitungsreagenzien mittels Pipetten aufgebracht, weil beispielsweise Antikörper standardisiert gelöst in Flüssigkeit am Markt vertrieben werden und Pipettierverfahren eine standardisierte Methode zur genau dosierten Aufbringung von Antikörpern auf Probenmaterial darstellen.there In a further development of the method, the treatment reagents applied by pipettes because, for example, standardized antibodies solved in liquid distributed on the market and pipetting a standardized Method for the precise application of antibodies Represent sample material.

Ferner werden bei einer Weiterbildung des Verfahrens die Aufbereitungsreagenzien wenigstens als Flüssigkeit mit Antikörper, Flüssigkeit mit Farbstoff, oder Spülflüssigkeit verwendet, weil sich mit derartigen Aufbereitungsreagenzien standardisierte Verfahren, die bereits für multiple Proben unterschiedlichen Gewebes eingesetzt werden, so für den Bereich der simultanen Einzeluntersuchung von gleichartigem Gewebe umsetzen lassen.Further In a further development of the method, the treatment reagents at least as a liquid with antibodies, liquid with dye, or rinsing liquid used, because with such treatment reagents standardized procedures, already for multiple samples of different tissue are used, so for the area the simultaneous single examination of similar tissue implement to let.

Bei einer Weiterbildung des Verfahrens wird dieses zur Genexpressionsuntersuchung von menschlichem Zellgewebe eingesetzt, weil auf diese Art und Weise eine verbesserte Diagnostik eine verbesserte Überprüfung eines Behandlungsfortschritts und eine verbesserte Statusanalyse des Probenmaterials möglich wird.at In a further development of the method, this is used for gene expression examination used by human cellular tissue because in this way improved diagnostics improved review of treatment progress and an improved status analysis of the sample material becomes possible.

Besonders vorteilhaft wird als erfindungsgemäßer Objektträger ein Objektträger verwendet, der mehrere gleich bemessene Reaktionszonen aufweist, wobei einzelne Gewebe-Substrateinheiten in Reaktionszonen untergebracht sind, wobei das Substrat flexibel und transparent ausgestaltet ist und die jeweiligen Reaktionszonen mit hydrophoben Umrandungen versehen sind.Especially is advantageous as a slide according to the invention slides used, which has several equal reaction zones, wherein individual tissue substrate units are housed in reaction zones are, wherein the substrate is flexible and transparent and the respective reaction zones provided with hydrophobic borders are.

Auf diese Weise wird ein standardisierter Untersuchungsträger geschaffen, mit dem bei der Durchführung spezieller Genexpressionsanalysen an Gewebematerial unterschiedliche Aufbereitungsflüssigkeiten durch Pipetten aufgebracht werden können.On this way, a standardized examination carrier is created, with that in the implementation special gene expression analyzes on tissue material different treatment fluids can be applied by pipettes.

Besonders vorteilhaft sieht es eine Weiterbildung des erfindungsgemäßen Objektträgers vor, dass eine Abdeckung über den Reaktionszonen aufgebracht wird, damit der Objektträger für eine spätere Beobachtung konserviert werden kann.Especially Advantageously, it provides a development of the slide according to the invention that a cover over is applied to the reaction zones, thus the slide for a later observation can be preserved.

Besonders vorteilhaft sieht es eine Weiterbildung des erfindungsgemäßen Objektträgers vor, dass seine Dicke insgesamt nicht den Abstand zwischen einem Objektträger eines Lichtmikroskops und dessen Okularobjektivtubus überschreitet.Especially Advantageously, it provides a development of the slide according to the invention that its thickness does not total the distance between a slide of a Light microscope and its eyepiece lens tube passes.

Weiterhin vorteilhaft sieht es eine Weiterbildung des erfindungsgemäßen Objektträgers vor, dass die Höhe der Umrandung einer Reaktionszone und die Dicke des Substrats, sowie jene des darauf befindlichen Gewebes aufeinander abgestimmt sind, sodass eine gewünschte Aufbereitung mit der Reaktionsflüssigkeit noch erfolgen kann, aber dass möglichst genau die Menge von Flüssigkeit eingebracht wird und werden muss, die für eine Reaktion zur Aufbereitung ausreicht, sodass keine teureren Flüssigkeiten verschwendet werden müssen, bzw. eine handelsüblich stan dardisiert vertriebene Flüssigkeitsmenge für die Aufbereitung von mehr Proben als bisher ausreicht.Farther Advantageously, it provides a development of the slide according to the invention that the height the border of a reaction zone and the thickness of the substrate, as well those of the tissue thereon are matched, so that a desired one Preparation with the reaction liquid can still be done, but that possible exactly the amount of liquid is introduced and must be, for a reaction to the treatment sufficient so that no more expensive liquids are wasted have to, or a commercially available stan dardisiert distributed amount of liquid for the Preparation of more samples than previously sufficient.

Besonders vorteilhaft ist der erfindungsgemäße Objektträger bei einer Weiterbildung so ausgestaltet, dass der Abstand der Reaktionszonen dem Abstand von standardisierten Pipettenträgern entspricht, weil auf diese Weise simultan mehrere Reaktionsflüssigkeiten gleichzeitig in unterschiedliche Reaktionszonen eingebracht werden können.Especially the slide according to the invention is advantageous in a development designed so that the distance of the reaction zones to the distance from standardized pipettors corresponds because in this way simultaneously multiple reaction liquids be introduced simultaneously into different reaction zones can.

Im Folgenden werden Ausführungsbeispiele der Erfindung anhand von Figuren weiter erläutert.in the Below are embodiments of the Invention explained with reference to figures.

1 zeigt ein Beispiel einer zu untersuchenden Genmenge. 1 shows an example of a gene to be examined.

2 zeigt ein Beispiel der zylindrischen Probeentnahme aus in Wachswürfeln eingebetteten Gewebeproben. 2 shows an example of cylindrical sampling from tissues embedded in wax cubes.

3 zeigt die Aufbereitung von Gewebeprobefeldern und die Aufbringung des Gewebeprobenfeldes auf einen Objektträger. 3 shows the preparation of tissue prover fields and the application of the tissue sample field on a slide.

4 veranschaulicht Probleme bei der Untersuchung von Stanzzylindergewebeproben, die in einem Gewebefeld zusammengefasst sind. 4 illustrates problems in examining punch cylinder tissue samples collected in a tissue field.

5 veranschaulicht eine Gewebeprobe zur Färbung auf einem Objektträger. 5 illustrates a tissue sample for staining on a slide.

6 verdeutlicht die Unterteilung eines auf einem Substrat befestigten flächigen Gewebeschnittes in einzelne Gewebe-Substrateinheiten zur weiteren Verarbeitung. 6 illustrates the subdivision of a surface-mounted tissue section attached to a substrate into individual tissue substrate units for further processing.

7 zeigt ein Ausführungsbeispiel eines erfindungsgemäßen Objektträgers. 7 shows an embodiment of a slide according to the invention.

8 verdeutlicht an einem Schnitt entlang der Linie A-A die Abmessungen einer Reaktionszone mit eingebrachter Gewebe- Substrateinheit. 8th illustrates on a section along the line AA the dimensions of a reaction zone with incorporated tissue substrate unit.

9 zeigt schematisch ein Ausführungsbeispiel einer erfindungsgemäßen Anordnung zur Aufbereitung von zu untersuchendem Gewebe. 9 schematically shows an embodiment of an inventive arrangement for the preparation of tissue to be examined.

10 zeigt ein Detail einer erfindungsgemäßen Anordnung zur Aufbereitung von zu untersuchendem Gewebe. 10 shows a detail of an arrangement according to the invention for the preparation of under investigation tissue.

1 zeigt anhand eines Beispiels die Vielfalt von zu untersuchenden Genen bei einer speziellen Krebsart. Einzelheiten der Darstellung sind dem Artikel von Lossos et al. „Prediction of Survival in Diffuse Large-B-Cell Lymphoma Based an the Expression of Six Genes" N. Engl J Med 2004; 350: 1828-37 im New England Journal of Medicine entnommen . 1 shows by way of example the variety of genes to be tested in a particular type of cancer. Details of the presentation are given in the article by Lossos et al. "Prediction of Survival in Diffuse Large-B-Cell Lymphoma Based on the Expression of Six Genes" N. Engl J Med 2004; 350: 1828-37, in the New England Journal of Medicine ,

Die im Verlaufe dieser Beschreibung der Erfindung häufig verwendeten Begriffe „Aufbereitung" und „aufbereiten" sollen eine auch schrittweise Vorbereitung von zu untersuchendem Gewebe für einzelne Untersuchungsstationen bedeuteten.The In the course of this description of the invention frequently used terms "processing" and "processing" are intended to include one Gradual preparation of tissue to be examined for individual Inspection stations meant.

Insbesondere ist weiter in 1 zu erkennen, dass die Gene 1, 2 und 3 bzw. 4, 5 und 6 statistisch besonders signifikant sind, sodass sie als repräsentativ für die hier dargestellte Genmenge gelten können, was ihre Aussagekraft in Bezug auf die Diagnose des Gewebes anbelangt.In particular, is further in 1 to recognize that the genes 1 . 2 and 3 respectively. 4 . 5 and 6 are statistically particularly significant, so that they can be considered representative of the amount of genes presented here, as far as their predictive value in terms of the diagnosis of the tissue is concerned.

Hier ist besonders zu erkennen, dass die Gene 1, 2 und 3 speziell charakteristisch sind in Bezug auf statistisch längeres Überleben eines Patienten, während die Gene 4, 5 und 6 speziell charakteristisch sind in Bezug auf statistisch kürzeres Überleben eines Patienten.Here it is particularly clear that the genes 1 . 2 and 3 are particularly characteristic in terms of statistically longer survival of a patient, while the genes 4 . 5 and 6 specifically characteristic in terms of statistically shorter survival of a patient.

Anhand der Darstellung in 1 kann leicht erkannt werden, dass ein großer Bedarf an der Aufbereitung von spezifischem Gewebe in Bezug auf die Untersuchung mit spezifischen Antikörpern für mehrere Gene besteht.Based on the illustration in 1 It can easily be recognized that there is a great need for the preparation of specific tissue in relation to the examination with specific antibodies for several genes.

Insbesondere besteht auch ein Bedarf darin, dies technisch wirkungsvoll und schnell und unter möglichst hoher Ausnutzung der vorhandenen Untersuchungsflüssigkeiten durchführen zu können.Especially There is also a need for this to be technically effective and fast and under as possible high utilization of existing investigation fluids to perform can.

2 veranschaulicht anhand eines Beispiels von unterschiedlichen Gewebeproben, die Gewebeentnahme in Form von Stanzzylindern. Ein derartiges Verfahren ist beispielsweise in EP 1370639 A1 offenbart. Wie in 2 zu erkennen ist, sind dort einzelne Gewebeproben in Paraffinwürfeln 21, 22, 23 und 24 angeordnet. Die Paraffinwürfel sind hier im Schnitt dargestellt. Der Würfel 21 enthält Gewebepartikel 213 und 214, aus denen Gewebezylinder 211 und 212 ausgestanzt werden. Die Stanzung erfolgt hier in einer Richtung 100. Der Paraffinwürfel 22 enthält Gewebebestandteile 223 und 224, aus denen zylindrische Proben 221 und 222 entnommen werden. 2 illustrates, using an example of different tissue samples, the tissue removal in the form of punching cylinders. Such a method is for example in EP 1370639 A1 disclosed. As in 2 can be seen, there are individual tissue samples in paraffin cubes 21 . 22 . 23 and 24 arranged. The paraffin cubes are shown here in section. The cube 21 contains tissue particles 213 and 214 making up tissue cylinders 211 and 212 be punched out. The punching takes place here in one direction 100 , The paraffin cube 22 contains tissue ingredients 223 and 224 from which cylindrical samples 221 and 222 be removed.

Der Paraffinwürfel 23 enthält Gewebe 233, aus dem Zylinder 231 und 232 ausgestanzt werden. Der Paraffinwürfel 24 enthält Gewebe 244 und 243, aus dem Gewebezylinder 241 und 242 ausgestanzt werden.The paraffin cube 23 contains tissue 233 , from the cylinder 231 and 232 be punched out. The paraffin cube 24 contains tissue 244 and 243 , from the tissue cylinder 241 and 242 be punched out.

Es kann bereits hier deutlich erkannt werden, dass das Gewebe bezüglich seiner Gewebezusammensetzung, beispielsweise bei 213 und bei 214 inhomogen ist und ebenso auch eine unterschiedliche Tiefenausdehnung hat, sodass in den einzelnen Stanzzylindern beim Ausstanzen teilweise mehr oder weniger Gewebe zu liegen kommt. Im Falle der Stanzzylinder 212 und 241 wird besonders viel Gewebe entnommen, während im Falle der Stanzzylinder 221 und 222 weniger Gewebe entnommen wird. Es ist auch deutlich zu erkennen, dass bezüglich der Tiefenausdehnung der Zylinder beispielsweise im Bereich des Zylinders 212 in der Tiefenabfolge in der Richtung 100 unterschiedliche Gewebeschichten übereinander zu liegen kommen.It can already be clearly recognized here that the tissue with respect to its tissue composition, for example in 213 and at 214 is inhomogeneous and also has a different depth extent, so that sometimes more or less tissue comes to lie in the individual punching cylinders during punching. In the case of the punching cylinder 212 and 241 A great deal of tissue is removed while in the case of the punching cylinder 221 and 222 less tissue is removed. It can also be clearly seen that with respect to the depth extent of the cylinder, for example in the region of the cylinder 212 in the depth sequence in the direction 100 different tissue layers come to lie one above the other.

3 zeigt eine weitere Darstellung zur Veranschaulichung, wie aus in Paraffinwürfeln eingebetteten Gewebeproben durch zylindrische gestanzte Probenentnahme Probenfelder werden, die auf einem Objektträger aufgebracht werden können. 3 Figure 4 shows another illustration illustrating how tissue paraffin embedded tissue samples become sample fields by cylindrical punched sampling that can be applied to a slide.

In Analogie zu 2 sind hier wieder Paraffinwürfel 21 und 23 dargestellt, aus denen Probezylinder 211 und 212 respektive 231 und 232 entnommen werden. Die Richtung 100 zeigt hier in die Zeichenebene. Wie weiter erkannt werden kann, werden die aus den Paraffinwürfeln 21 und 23 entnommenen Zylinder in einem weiteren Paraffinzylinder 31 in regelmäßigen Abständen feldartig angeordnet, sodass ein Probenblock erzeugt wird, der Stanzzylinder aus unterschiedlichstem Ge webe enthält. Durch Schnitte senkrecht zur Richtung 100 kann dann eine dünne Schicht von Gewebematerial von diesem Probenblock abgetrennt werden und auf einem Objektträger 33 aufgebracht werden. Diese dünne Schicht 32 ist rechts in 3 dargestellt. Ein solches Aufbereitungsverfahren ist beispielsweise im Stand der Technik in WO 01/22086 offenbart. Insbesondere ist anhand von 3 zu erkennen, dass durch diese herkömmliche Aufbereitungstechnologie immer eine Vielzahl von Proben unterschiedlichsten Gewebes auf einem Objektträger angeordnet werden. Dieses Aufbereitungsverfahren hat weiterhin den Nachteil, dass alle auf dem Objektträger 33 gemeinsam vorhandenen Gewebeproben gemeinsam einer Reaktion unterzogen werden müssen, weil keine Vorkehrungen getroffen sind, um die Proben separat zu untersuchen. Abgesehen davon, gibt es im Stand der Technik derzeit keine Verfahren, um die Gewebeproben unterschiedlich und separat einzufärben. Vielmehr sehen es die gängigen Gerätschaften lediglich vor, dass derartige Objektträger in großen Mengen Schritt für Schritt einer Einzelbehandlung unterzogen werden.In analogy to 2 Here are again paraffin cubes 21 and 23 shown, from which sample cylinder 211 and 212 respectively 231 and 232 be removed. The direction 100 shows here in the drawing plane. As can be further appreciated, those from the paraffin cubes 21 and 23 removed cylinder in another paraffin cylinder 31 arranged in a field-like manner at regular intervals, so that a sample block is produced, the punching cylinder contains a variety of Ge tissue. By cuts perpendicular to the direction 100 Then a thin layer of tissue material can be separated from this sample block and placed on a microscope slide 33 be applied. This thin layer 32 is right in 3 shown. Such a treatment process is for example in the prior art in WO 01/22086 disclosed. In particular, is based on 3 recognize that this conventional processing technology always a variety of samples of different tissues are placed on a microscope slide. This reprocessing process also has the disadvantage that all on the slide 33 co-existing tissue samples must be co-reacted because no provision is made to separately examine the samples. Apart from that, there are currently no methods in the art for staining the tissue samples differently and separately. Rather, it is the common equipment only that such slides are subjected in large quantities step by step of a single treatment.

Die Nachteile dieser Verfahren sind, dass sie zeitaufwändig sind, dass sie große Flüssigkeitsmengen konsumieren und dass sie keine individualisierten Untersuchungen erlauben.The Disadvantages of these methods are that they are time consuming that they are big amounts of liquid and that they do not require individualized examinations allow.

4 veranschaulicht anhand der Tiefenausdehnung in einer Richtung 100 der unterschiedlichen Stanzzylinder 211, 212, 221, 222, 231, 232, 241 und 242 eine weitere Problematik der Aufbereitung von Gewebeproben nach Art von Gewebefeldern, wie in 3 beschrieben. Die Stanzzylinder sind hier analog zu 2 bezeichnet. Deutlich ist anhand der Tiefenausdehnung der einzelnen Zylinder in Richtung 100 zu erkennen, dass beispielsweise bei einem weit oben liegenden Schnitt in der Richtung an der die Bezugszeichen angebracht sind, zum Beispiel bei Zylinder 221 und 222 kein Gewebe erhalten werden wird, sondern lediglich Paraffin. Sodass bei einer entsprechenden Untersuchung zwar eine Schicht mit Gewebe eines Probenzylinders 212 und 231 untersucht werden kann, aber die anderen Gewebeproben ausfallen. Im Falle von Paraffin ist dieser Ausfall nicht kritisch, weil optisch erkannt werden kann, dass an dieser Stelle kein Gewebe vorhanden ist. 4 illustrated by the depth extent in one direction 100 the different punching cylinder 211 . 212 . 221 . 222 . 231 . 232 . 241 and 242 Another problem of the preparation of tissue samples on the type of tissue fields, as in 3 described. The punching cylinders are analogous to here 2 designated. It is clear from the depth extent of the individual cylinders in the direction 100 to recognize that, for example, in a high overhead cut in the direction at which the reference numerals are attached, for example, in cylinders 221 and 222 no tissue will be obtained, but only paraffin. So that in a corresponding investigation, although a layer with tissue of a sample cylinder 212 and 231 can be examined, but the other tissue samples fail. In the case of paraffin this failure is not critical, because it can be visually recognized that there is no tissue at this point.

Ein weiteres Problem besteht jedoch darin, dass das Gewebe, welches den zu untersuchendem Gewebe von beispielsweise 2,0 × 2,0 mm ×0,2-0,3 mm in Form eines Stanzzylinders entnommen wurde, sowohl in der Tiefe als auch in der Fläche inhomogen ist. Was bedeutet, dass Krebsgewebe teilweise in gesundem Gewebe eingelagert ist und je nach Anordnung des Schnittes sowohl in der Horizontalen als auch in der Vertikalen Richtung unterschiedliche Gewebeschichten durch den Stanzzylinder erfasst werden.One However, another problem is that the tissue, which the tissue to be examined, for example, 2.0 × 2.0 mm × 0.2-0.3 mm was taken in the form of a punching cylinder, both in depth as well as in the area is inhomogeneous. Which means that cancerous tissue is partially healthy Tissue is stored and depending on the arrangement of the cut both in the horizontal as well as in the vertical direction different Tissue layers are detected by the punching cylinder.

In der Darstellung in 4 ist gesundes Gewebe dunkel und erkranktes Gewebe hell dargestellt. Dies bedeutet, dass beispielsweise in den Zylindern 222 und 242 kein erkranktes Gewebe enthalten ist, während in den anderen Zylindern je nach der Darstellung in unterschiedlichen Schnitttiefen mal erkranktes Gewebe, das heißt Krebszellengewebe, und mal gesundes Gewebe erhalten wird. Es ist also denkbar, dass nach der Methode der Aufbereitung von Gewebefeldern, wie sie beispielsweise in 3 dargestellt ist, man einen vollständigen Gewebebereich auf einem Objektträger erhält, der auch bei optischer Inspektion keine Paraffinbereiche offenbart, dass aber trotzdem einzelne Gewebeflecken kein Krebszellengewebe enthalten. Dies ist besonders nachteilig, weil durch Probeuntersuchungen sicherzustellen ist, dass ein negatives Resultat nicht darauf basiert, dass falsches Gewebe untersucht wurde.In the illustration in 4 Healthy tissue is dark and diseased tissue is bright. This means that, for example, in the cylinders 222 and 242 no diseased tissue is contained, while in the other cylinders depending on the representation in different depths of cut times diseased tissue, that is cancer cell tissue, and sometimes healthy tissue is obtained. It is therefore conceivable that by the method of processing tissue fields, as they are for example in 3 is shown, one obtains a complete tissue region on a slide, which does not reveal any paraffin areas even under optical inspection, but still individual tissue stains contain no cancer cell tissue. This is particularly disadvantageous because it is to be ensured by trial examinations that a negative result is not based on the fact that wrong tissue was examined.

5 veranschaulicht einen Objektträger, auf dem eine Gewebeprobe angeordnet ist. Der Objektträger 33 enthält eine flächige Schnittprobe 532, die beispielsweise mittels einer Färbemethode einzufärben ist, um spezifische Zellenareale sichtbar zu machen. 5 illustrates a slide on which a tissue sample is placed. The slide 33 contains a surface cut sample 532 which is to be stained for example by means of a staining method to make specific cell areas visible.

6 zeigt anhand eines Beispiels, wie ein flächiger Gewebeschnitt in Gewebe-Substrateinheiten unterteilt wird. 6 shows by way of example how a sheet-like tissue section is divided into tissue substrate units.

6 zeigt ein Substratmaterial transparenter Art, auf dem ein flächiger Gewebeschnitt 613 aufgebracht ist. Dieser Gewebeschnitt 613 weist beispielsweise eine Dicke von 1 bis 5 μm auf und eine Größe von 1 × 1 cm. Vor der Aufbringung des Gewebeschnittes auf dem Substratmaterial, das beispielsweise elastisch ist und aus einer Polycarbonatfolie ausgeführt sein kann, kann sichergestellt werden, dass das Gewebe homogen ist, und durch optische Inspektion kann weiterhin sichergestellt werden, dass lediglich untersuchungsrelevantes Gewebematerial in diesem Gewebeschnitt enthalten ist, sodass die Nachteile des Standes der Technik, wie sie zuvor in Bezug auf Gewebebereiche in Gewebefeldern beschrieben wurden, weitestgehend ausgeschlossen werden können. 6 shows a substrate material transparent type, on which a flat tissue section 613 is applied. This tissue cut 613 For example, has a thickness of 1 to 5 microns and a size of 1 × 1 cm. Prior to application of the tissue section to the substrate material, which may be elastic and made of a polycarbonate film, for example, it can be ensured that the tissue is homogeneous, and visual inspection can further ensure that only tissue material relevant to the examination is contained in this tissue section, so that the disadvantages of the prior art, as previously described in relation to tissue areas in tissue fields, can be largely excluded.

Wie 6 weiter zeigt, wird der Gewebeschnitt 613 in Richtung 610 und 620 gestückelt, sodass nachfolgend Gewebe-Substrateinheiten 615, 612 und 611 erhalten werden, von denen lediglich einige zur Veranschaulichung dargestellt sind. Diese Gewebe-Substrateinheiten können dann in Reaktionszonen eingebracht werden, um mit Hilfe verschiedener Aufbereitungsreagenzien den Nachweis unterschiedlicher Antigene führen zu können.As 6 further shows, the tissue section 613 in the direction 610 and 620 so that subsequently tissue-substrate units 615 . 612 and 611 are obtained, only a few of which are shown for illustrative purposes. These tissue substrate units can then be placed in reaction zones to allow the detection of different antigens using various processing reagents.

7 veranschaulicht einen Objektträger 73 als Ausführungsbeispiel eines Objektträgers gemäß der Erfindung. Oben ist ein Textfeld 71 angeordnet, das beispielsweise einen Identifikationscode in Form eines Barcodes enthalten kann. Der Objektträger 73 ist beispielsweise mit einem aufgespritzten Rahmen, einer Teflonfolie oder einer Folie aus anderem hydrophoben Material beschichtet, in welche Reaktionszonen 74 eingelassen sind. Als Beispiel sind in einzelnen Reaktionszonen Gewebe-Substrateinheiten 611, 612 und 615 dargestellt. Beispielsweise beträgt die Abmessung einer Reaktionszone 4,5 × 4,5 mm und die seitlichen Ränder längs unten und oben betragen jeweils 1,8 mm. Die Foliendicke kann beispielsweise 0,13 mm betragen, alternativ aber auch 0,25 bis 0,28 mm. Weiterhin ist eine gestrichelte Linie A-A dargestellt, die eine Schnittlinie für die Darstellung in 8 veranschaulicht. 7 illustrates a slide 73 as an embodiment of a slide according to the invention. Above is a text box 71 arranged, which may for example contain an identification code in the form of a barcode. The slide 73 For example, it is coated with a sprayed-on frame, a teflon sheet or a sheet of other hydrophobic material into which reaction zones 74 are admitted. As an example, in individual reaction zones tissue substrate units 611 . 612 and 615 shown. For example, the dimension of a reaction zone is 4.5 x 4.5 mm and the lateral edges along the bottom and top are each 1.8 mm. The film thickness can be for example 0.13 mm, but alternatively also 0.25 to 0.28 mm. Furthermore, a dashed line AA is shown, which is a section line for the representation in 8th illustrated.

8 zeigt ein Beispiel einer Reaktionszone 74. In der Reaktionszone 74 ist ein auf einem Substrat 714 angeordnetes Gewebepartikel 715 dargestellt, das auf einem Objektträger 73 zu liegen kommt. Insbesondere ist bei der Darstellung zu beachten, dass eine Dicke d1, das heißt die Summe der Dicke des Gewebeschnittes und des Substrates kleiner ist als eine Dicke d2, das heißt die Dicke der Folie 75, beziehungsweise einer aufgespritzten Umrandung, wobei das Dickenverhältnis so bemessen ist, dass die Reaktionszone ausreichend Flüssigkeit aufnimmt, um das Gewebepartikel 715 aufbereiten zu können, jedoch gleichzeitig keine Flüssigkeit verschwendet wird. Auf diese Weise wird sichergestellt, dass mit einer definierten Flüssigkeitsmenge entsprechend dem so vorgegebenen Reaktionsvolumen möglichst viele Gewebe-Substrateinheiten aufbereitet werden können, bzw. möglichst viele Objektträger untersucht werden können. 8th shows an example of a reaction zone 74 , In the reaction zone 74 is one on a substrate 714 arranged tissue particles 715 pictured on a slide 73 to come to rest. In particular, it should be noted in the illustration that a thickness d1, that is, the sum of the thickness of the tissue section and the substrate is smaller than a thickness d2, that is, the thickness of the film 75 , or a sprayed-on border, wherein the thickness ratio is dimensioned so that the reaction zone receives sufficient liquid to the tissue particles 715 to process but at the same time no liquid is wasted. In this way, it is ensured that as many tissue substrate units as possible can be prepared with a defined amount of liquid in accordance with the reaction volume thus prescribed, or as many slides as possible can be examined.

Besonders vorteilhaft können mit einem derartigen Objektträger 18 Untersuchungen an ein und demselben Gewebe zusammengefasst werden und simultan durchgeführt werden. Speziell kann ein derartiger Objektträger mittels einer Abdeckfolie versiegelt werden, anschließend patientenspezifisch archiviert werden und zur späteren Beobachtung bereitgehalten werden.Particularly advantageous with such a slide 18 Investigations on the same tissue are summarized and carried out simultaneously. Specifically, such a slide can be sealed by means of a cover, then archived patient-specific and kept ready for later observation.

9 zeigt ein Beispiel einer Anordnung zur Aufbereitung von zu untersuchendem Gewebe als Ausführungsbeispiel der Erfindung. Mit 81 ist ein Probentisch bezeichnet, auf dem ein Substrat 61 mit einem flächigen Gewebeschnitt 613 angebracht ist. Der Gewebeschnitt 613 kann beispielsweise in Paraffin eingebettetes Gewebe enthalten und kann auf geeignete Weise mit dem Substrat 61 verklebt sein. Weiter oben zeigt die Anordnung einen beispielsweise linearen Hydraulik- oder Pressluftzylinder 812, an dem ein Aktor 813 mit an der Spitze angeordneter Stanze angeordnet ist. Die Stanze mit dem Aktor 813 kann aus dem flächigen Gewebeschnitt 613 und dem Substrat 61 zusammen eine Gewebe-Substrateinheit ausstanzen. Beispielsweise ist an dem Aktor ein Unterdruckschlauch 814 befestigt, der durch eine mittige Bohrung bis zur Probenoberfläche durchgeführt ist. Auf diese Weise wird es er möglicht, durch Unterdruckmittel die Probe, das heißt die Gewebe-Substrateinheit anzusaugen. 9 shows an example of an arrangement for the preparation of tissue to be examined as an embodiment of the invention. With 81 is a sample table labeled on which a substrate 61 with a flat tissue section 613 is appropriate. The tissue section 613 For example, it may contain tissue embedded in paraffin and may suitably bind to the substrate 61 be glued. Earlier, the arrangement shows an example linear hydraulic or pneumatic cylinder 812 on which an actor 813 arranged with arranged at the top punch. The punch with the actuator 813 may be from the areal tissue section 613 and the substrate 61 punch together a tissue substrate unit. For example, on the actuator, a vacuum hose 814 attached, which is performed through a central bore to the sample surface. In this way it is possible, by means of negative pressure means, to suck in the sample, that is to say the tissue substrate unit.

Die ersten Mittel zur Zerteilung des flächigen Gewebeschnittes sind hier mit dem Mittel zur Überführung in Reaktionszonen kombiniert. Die Mittel zur Überführung sind in Form einer Drehplatte 817 ausgestaltet, die in einem Lager 818 gelagert ist und um eine Achse 819 drehbar ist. Durch Drehung des Zylinders mit Aktor 813 nach Aufnahme einer Gewebe-Substrateinheit kann diese auf einen Tisch 82 transportiert werden, auf dem ein Objektträger 75 mit Reaktionszonen 84 und 85 angeordnet ist. Beispielsweise wird die Gewebe-Substrateinheit, die ausgestanzt wurde, dann in einer Reaktionszone 84 abgelegt.The first means for dividing the flat tissue section are combined here with the means for transferring into reaction zones. The means for transfer are in the form of a rotary plate 817 designed in a warehouse 818 is stored and around an axis 819 is rotatable. By rotation of the cylinder with actuator 813 after receiving a tissue substrate unit, this can be placed on a table 82 be transported on which a slide 75 with reaction zones 84 and 85 is arranged. For example, the tissue substrate unit that has been punched out then becomes in a reaction zone 84 stored.

9 zeigt im rechten Teil weiter schematisiert dargestellt einen Hydraulikzylinder oder Pressluftzylinder, der lineare Schubbewegung ermöglicht und einen Aktor 822 und einen damit verbundenen Aktor 823. An einer Brücke 821 sind Pipetten 825 und 824 befestigt, deren Abstand so bemessen ist, dass sie gleichzeitig die Reaktionszonen 84 und 85 mit Aufbereitungsreagenzien beschicken können. 9 shows in the right part further schematically shown a hydraulic cylinder or compressed air cylinder, which allows linear thrust movement and an actuator 822 and an associated actor 823 , At a bridge 821 are pipettes 825 and 824 attached, whose spacing is such that they simultaneously the reaction zones 84 and 85 can feed with treatment reagents.

Vorteilhaft werden durch diese beispielhaft ausgeführte erfindungsgemäße Anordnung die Aufbereitung von mehreren Gewebe-Substrateinheiten simultan in Reaktionszonen eines Objektträgers ermöglicht, sodass zeiteffizient verschiedenste Untersuchungen am gleichen Gewebe, beispielsweise eines Patienten durchgeführt werden können. Selbstverständlich sind auch andere Zellgewebearten denkbar, wie beispielsweise biologisches Gewebe von Tieren, Pflanzen oder Saatgut, aber auch adhärente Blutbestandteile, Eiweiße oder industrielle Materialien woran derartige Untersuchungen durchzuführen sind.Advantageous be through this exemplary embodiment of the invention the preparation of several tissue substrate units simultaneously in reaction zones of a slide allows so that time-efficiently various studies on the same tissue, For example, a patient can be performed. Of course they are Other cell tissue types are conceivable, such as biological Tissues of animals, plants or seeds, but also adherent blood components, proteins or industrial materials on which such investigations are to be carried out.

Auf vorteilhafte Weise stellt so eine Anordnung nach der Erfindung eine kombinierte Aufbereitung und Untersuchung der Proben bereit, die zeitnah mehrere Untersuchungen zulässt. Insbesondere können beispielsweise die Abstände zwischen den einzelnen Reaktionszonen so zu bemessen sein, dass sie mit den Pipettenab ständen eines Standardmaßes beispielsweise einer ELISA Platte übereinstimmen, wobei 6, 8- oder 12-Kanal Pipetten eingesetzt werden können. Je mehr Kanäle hierbei vorhanden sind, desto mehr Untersuchungen/Aufbereitungen können gleichzeitig stattfinden. Dies führt zu einer beträchtlichen Zeit- und Kostenersparnis.On advantageous manner so provides an arrangement according to the invention Combined preparation and analysis of the samples ready promptly allows several examinations. In particular, for example the distances be sized between the individual reaction zones so that they stand with the pipette a standard measure for example, an ELISA plate, where 6, 8- or 12-channel pipettes can be used. The more channels here are present, the more investigations / preparations can be done simultaneously occur. this leads to to a considerable Time and cost savings.

Vorteilhaft können so standardisierte Untersuchungsgeräte eingesetzt werden, die lediglich auf den speziellen Anwendungsfall abzustimmen sind. Es wäre selbstverständlich denkbar, dass Probenblöcke, wie sie in 3 mit 31 bezeichnet sind, von lediglich Gewebe von einem Patienten hergestellt werden, sodass es denkbar wäre, dass nach der Methode des Standes der Technik ein Objektträger zur Verfügung gestellt werden könnte, der lediglich Probenmaterial eines einzigen Patienten enthält. Es gibt jedoch keinerlei Möglichkeiten, diesen Probenträger dann mit einzelnen Reaktionszonen zu versehen bzw. das dünne Paraffinblättchen 32 mit den Gewebeproben im Anschluss zu unterteilen und in separaten Reaktionszonen unterzubringen, weil dieses dafür viel zu empfindlich wäre, und ein definierter Reaktionszustand so nicht hergestellt werden kann. Des Weiteren bleiben die zuvor auf Seiten 9 und 10 beschriebenen Nachtweile davon unberührtAdvantageously, it is thus possible to use standardized examination devices which are only adapted to the specific application. It would of course be conceivable that sample blocks, as in 3 With 31 are made of only tissue from a patient, so that it would be conceivable that a slide could be provided by the method of the prior art, which contains only sample material of a single patient. However, there are no possibilities to provide this sample carrier with individual reaction zones or the thin paraffin flakes 32 subdivide with the tissue samples and accommodate in separate reaction zones, because this would be much too sensitive, and a defined reaction state can not be prepared so. Furthermore, the boredom previously described on pages 9 and 10 remain unaffected

10 zeigt mehrere Darstellungen von Details einer Anordnung zur Aufbereitung von zu untersuchendem Gewebe als Ausführungsbeispiel der Erfindung. Bei 815 ist eine Stanzmatrize gezeigt, die aus flächigem Gewebe und dem darunter befindlichen Substrat neun Gewebe-Substrateinheiten ausstanzen kann. Selbstverständlich sind Konfigurationen mit einer anderen Zahl von Gewebeproben denkbar, die nach belieben auf spezielle Untersuchungen abgestimmt werden kann. Ebenfalls sind hier die Schnittlinien A-A und B-B Für Schnittansichten der Stanze gezeigt. Ebenfalls erkennt man Pfeile der Betrachtungsrichtung für den jeweiligen Schnitt durch die Stanze der darüber dargestellt ist. Ansonsten sind die Bezugszeichen gleich wie in 9 verwendet. 10 shows several illustrations of details of an arrangement for the preparation of tissue to be examined as an embodiment of the invention. at 815 a punching die is shown which can punch out nine tissue substrate units from sheet tissue and the underlying substrate. Of course, configurations with a different number of tissue samples are conceivable, which can be adjusted as desired to specific examinations. Also shown here are section lines AA and BB for sectional views of the punch. Also you can see arrows of Be Direction of direction for the respective section through the punch is shown above. Otherwise, the reference numerals are the same as in 9 used.

Der lineare Hydraulik- oder Pressluftzylinder 812, an dem ein Aktor 813 mit an der Spitze angeordneter Stanze angeordnet ist, kann beispielsweise um einen Hub d4 abgesenkt werden um mit ausrechendem Druck das Gewebe und das Substrat in einem Arbeitsablauf zu zerteilen.The linear hydraulic or pneumatic cylinder 812 on which an actor 813 arranged with arranged at the top punch, for example, can be lowered by a stroke d4 to divide with ausrechendem pressure the tissue and the substrate in a workflow.

Claims

Arrangement ( 1000 ) for the preparation of cell tissue to be examined ( 613 ) with: a) first means ( 812 . 813 . 814 ) for splitting one onto a flexible first substrate ( 61 ) applied first planar tissue section ( 613 ) into a multitude ( 611 . 612 . 615 ) of tissue substrate units to be examined, b) second means ( 817 . 818 . 819 ) for the transfer of a plurality of tissue substrate units ( 611 . 612 . 613 ) on separate reaction zones ( 84 . 85 ) of a first slide ( 73 ) and c) third means ( 822 - 825 ) for applying in each case different test-specific treatment reagents to at least two different reaction zones ( 84 . 85 ).

Arrangement ( 1000 ) according to claim 1 comprising means for covering the processing tissue substrate units ( 611 . 612 . 615 ) for their preservation.

Arrangement ( 1000 ) according to claim 1 or 2, wherein the tissue section ( 21 . 23 ) is embedded in a waxy substance.

Arrangement ( 1000 ) according to claim 3, wherein the wax substance is paraffin.

Arrangement ( 1000 ) according to any one of the preceding claims, wherein the first means as a punch ( 813 ) are executed.

Arrangement ( 1000 ) according to one of the preceding claims, in which the second means are used as means for transferring to negative pressure ( 814 ) are configured.

Arrangement ( 1000 ) according to one of the preceding claims, in which the third means ( 824 . 825 ) are designed as pipettes that work with a liquid processing reagent.

Arrangement ( 1000 ) according to any one of the preceding claims, wherein the reaction zones ( 84 . 85 ) by hydrophobic borders ( 75 ) are separated from each other.

Arrangement according to one of the preceding claims, in which the first substrate ( 61 ) is made of transparent plastic.

Arrangement ( 1000 ) according to one of the preceding claims, in which the tissue to be examined ( 613 ) Contains cancer cells.

Arrangement ( 1000 ) according to one of the preceding claims, in which at least one antigen, a dye or a rinsing liquid is present as a conditioning reagent.

Arrangement ( 1000 ) according to any one of the preceding claims, wherein the reaction zones ( 84 . 85 ) are dimensioned and spaced such that they are spaced apart by two simultaneously operating third means ( 824 . 825 ) to match.

Slides ( 73 ) for cell tissue to be reprocessed or examined, comprising: a) several reaction zones ( 84 . 85 ) at a uniform first distance, b) tissue substrate units ( 611 . 612 . 615 ) in the reaction zones ( 84 . 85 ), the substrate ( 61 ) is flexible and transparent and has a first thickness together, c) hydrophobic borders ( 75 ) of the reaction zones having a first height.

Slides ( 73 ) according to claim 13, having a transparent cover for covering and preserving the reaction zones, the cover having a second thickness.

Slides ( 73 ) according to claim 14, wherein the second thickness, the first height and the thickness of the slide are sized to fit between a slide and a lens barrel of a microscope.

Slides ( 73 ) according to any one of claims 13 to 15, wherein the first thickness D1 and the first height D2 in relation to a small volume of liquid within the border ( 75 ) is optimized.

Slides ( 73 ) according to one of claims 13 to 16, in which the first distance corresponds to the pipette distance of at least two collectively guided pipettes ( 824 . 825 ) is adjusted.