DE10028725A1 - Primary structure and nucleic acid of the human neutrophil antigen-2a, useful for antigen detection, e.g. diagnosis of various forms of neutropenia - Google Patents
Primary structure and nucleic acid of the human neutrophil antigen-2a, useful for antigen detection, e.g. diagnosis of various forms of neutropeniaInfo
- Publication number
- DE10028725A1 DE10028725A1 DE2000128725 DE10028725A DE10028725A1 DE 10028725 A1 DE10028725 A1 DE 10028725A1 DE 2000128725 DE2000128725 DE 2000128725 DE 10028725 A DE10028725 A DE 10028725A DE 10028725 A1 DE10028725 A1 DE 10028725A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- antigen
- hna
- primary structure
- nucleic acid
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
Abstract
Description
Es ist bekannt, daß das HNA-2a (NB1)-Merkmal zur Bildung von Allo- und Autoantikörpern führen kann. Diese Antikörper können zu Erkrankungen wie der neonatalen Immunneutropenie, die transfusionsassoziierten akuten Lungeninsuffizienz, der Immunneutropenie nach Knochenmarktransplantation, der Medikament-induzierten Immunneutropenie sowie der Autoimmunneutropenie führen. Man weiß, daß es sich bei dem HNA-2a (NB1)-Antigen um ein auf einer Subpopulation der Granulozyten exprimiertes Glykoprotein handelt. Die dem Glykoprotein zugrundeliegende Nukleotid- und Aminosäuresequenz ist bisher nicht bekannt gewesen, weshalb die fragilen und nicht lagerbaren Granulozyten für die Antigen- und Antikörper-Diagnostik benutzt werden müssen. Hierzu sind die Granulozyten zunächst arbeits- und zeitaufwendig aus dem Blut von Patienten (Antigennachweis) bzw. ausgesuchter, gesunder Spender (Antikörpernachweis) zu isolieren. Erst dann können die notwendigen Untersuchungen für die Diagnostik der oben angeführten Erkrankungen durchgeführt werden. Dies hatte zur Folge, daß diese Untersuchungen nur von wenigen Speziallaboratorien durchgeführt werden, was wiederum Postversand notwendig macht, bzw. der Patient wegen der Instabilität der Granulozyten zur. Blutentnahme zum Speziallabor reisen muß.The HNA-2a (NB1) trait is known to produce allo- and autoantibodies can lead. These antibodies can cause diseases like the neonatal Immunneutropenia, the transfusion-associated acute lung insufficiency, the Immunoneutropenia after bone marrow transplantation, the drug-induced Immunneutropenia and autoimmune neutropenia. We know that it is HNA-2a (NB1) antigen by one expressed on a subpopulation of granulocytes Glycoprotein acts. The nucleotide and Amino acid sequence has not been known, which is why the fragile and not storable granulocytes must be used for antigen and antibody diagnostics. For this purpose, the granulocytes are initially laborious and time-consuming from the blood of patients (Antigen detection) or selected, healthy donor (antibody detection). Only then can the necessary examinations for the diagnosis of the above be carried out Diseases are carried out. As a result, these investigations only of few special laboratories are carried out, which in turn requires mailing makes, or the patient because of the instability of the granulocytes. Blood sampling for Special laboratory must travel.
Das Problem der Erfindung lag daher in der Aufklärung der kodierenden Nukleotidsequenz und der hieraus ableitbaren Aminosäuresequenz, um auf die Verwendung von humanen, Granulozyten verzichten zu können.The problem of the invention was therefore to elucidate the coding nucleotide sequence and the deduced amino acid sequence to indicate the use of human, To be able to do without granulocytes.
Zur Lösung dieses Problems wurden zunächst Granulozyten aus dem Blut HNA-2a (NB1) tragender Individuen separiert und anschließend lysiert. Mittels Immunaffinitätschromatographie wurde das Antigen aus dem Granulozytenlysat isoliert. Nach Auftrennung in der SDS-Polyacrylamid-Gelelektropherese wurde das isolierte Antigen mittels Immunoblot unter Verwendung von mehreren Referenzantikörpern als HNA-2a (NB1)-Antigen bestätigt. Die N-terminale Aminosäuresequenz wurde durch Edman-Abbau ermittelt und Primer zur Aufklärung der cDNA-Sequenz konstruiert. Nach Isolierung von m- RNA aus Granulozyten HNA-2a (NB1)-positiver Individuen wurde die cDNA-Sequenz mittels RACE-PCR ("rapid amplification of cDNA ends polymerase chain reaction) ermittelt. Die aus der cDNA-Sequenz abgeleitete Aminosäuresequenz enthielt Aminosäuresequenzen von 3 Trypsinspaltprodukten des immunchromatographisch isolierten Antigens. Die gefundene Nukleinsäuresequenz wurde in COS- und CHO-Säugerzellen zur Expression gebracht. Das exprimierte Glykoprotein (Antigen) wurde von monoklonalen und humanen Antikörpern sowohl in der Durchflußzytometrie als auch in immunchemischen Methoden wie dem Immunoblot und der Immunpräzipitation erkannt. Somit ist nach derzeit gültigen wissenschaftlichen Maßstäben nachgewiesen, daß die von uns aufgeklärte Nukleinsäuresequenz für das bekannte HNA-2a- (NB1)-Antigen codiert. Nukleinsäuresequenz-Datenbanksuchen zeigten, daß der Anfangsteil der Nukleotidsequenz bereits im Rahmen des Human Genome Projekts sequenziert worden waren, ohne jedoch die Bedeutung der Nukleotidsequenz als kodierende Sequenz für das HNA-2a (NB1)-Antigen zu erkennen, was sich auch in den Protein-Datenbanksuchen bestätigte. Bei dem HNA-2a (NB 1)-Antigen handelte es sich somit um ein Glykoprotein der Granulozytenmembran mit bislang unbekannter Primärstruktur.To solve this problem, granulocytes from the blood HNA-2a (NB1) were first bearing individuals separated and then lysed. Means The antigen was isolated from the granulocyte lysate by immunoaffinity chromatography. After separation in the SDS polyacrylamide gel electropheresis, the isolated antigen by immunoblot using several reference antibodies as HNA-2a (NB1) antigen confirmed. The N-terminal amino acid sequence was determined by Edman degradation determined and primers constructed to elucidate the cDNA sequence. After isolation of m- RNA from granulocyte HNA-2a (NB1) positive individuals became the cDNA sequence determined by RACE-PCR ("rapid amplification of cDNA ends polymerase chain reaction). The amino acid sequence derived from the cDNA sequence contained amino acid sequences of 3 trypsin cleavage products of the immunochromatographically isolated antigen. The Nucleic acid sequence found was used in COS and CHO mammalian cells for expression brought. The expressed glycoprotein (antigen) was from monoclonal and human Antibodies both in flow cytometry and in immunochemical methods such as the immunoblot and the immunoprecipitation. Thus, is currently valid scientific standards prove that the one we have enlightened Nucleic acid sequence encoded for the known HNA-2a (NB1) antigen. Nucleic acid sequence database searches showed that the initial part of the nucleotide sequence had already been sequenced as part of the Human Genome Project, but without the Importance of the nucleotide sequence as coding sequence for the HNA-2a (NB1) antigen recognize what was also confirmed in the protein database searches. In the HNA-2a (NB 1) antigen was thus a glycoprotein with the granulocyte membrane previously unknown primary structure.
Mit Hilfe der gewonnenen Nukleotidsequenz lassen sich einfache und sichere molekularbiologische Methoden, z. B. Polymerase-Ketten-Reaktionen, zur Antigenbestimmung entwickeln, die nur geringe Mengen lagerbare DNA und nicht fragile Granulozyten als Ausgangsmaterial erfordern. Die DNA-basierten Techniken erlauben im Gegensatz zu intakten Granulozyten auch einen Versand der Patientenblutproben. Weiterhin kann mit Hilfe der Rekombinationstechnologie das HNA-2a (NB1)-Antigen in großer Menge und ohne Verunreinigungen durch andere humane Glykoproteine hergestellt und in Antikörpernachweisverfahen, z. B. ELISA, eingesetzt werden.With the help of the nucleotide sequence obtained, simple and reliable molecular biological methods, e.g. B. polymerase chain reactions Develop antigen determination that uses only small amounts of storable DNA and is not fragile Require granulocytes as starting material. The DNA-based techniques allow in In contrast to intact granulocytes, the patient's blood samples are also sent. With the help of recombination technology, the HNA-2a (NB1) antigen in produced in large quantities and without contamination by other human glycoproteins and in antibody detection procedures, e.g. B. ELISA can be used.
Sowohl die DNA-basierten Antigentests als auch die Antikörpernachweisverfahren unter Verwendung rekombinanter Antigene lassen sich in Form von fertig konfektionierten Testkits als einfache diagnostische Verfahren für Laboratorien vermarkten. Die Aufklärung der HNA- 2a (NB 1)-Primärstruktur führt somit zu einer entscheidenden Vereinfachung seiner Antigen- und Antikörper-Diagnostik.Both the DNA-based antigen tests and the antibody detection methods below Recombinant antigens can be used in the form of ready-made test kits Market as simple diagnostic procedures for laboratories. The clarification of the HNA 2a (NB 1) primary structure thus leads to a decisive simplification of its antigen- and antibody diagnostics.
Die Ausführung der Testkits kann zum Beispiel analog zu den bereits im Handel befindlichen PCR-SSP-Testkits für die molekulare HLA-Antigenbestimmung erfolgen, wobei die Nukleotidsequenzen für die HLA-Primer durch HNA-2a (NB1)-Antigen-spezifische Primersequenzen zu ersetzen wären.The execution of the test kits can, for example, be analogous to those already on the market PCR-SSP test kits for molecular HLA antigen determination take place, the Nucleotide sequences for the HLA primers by HNA-2a (NB1) antigen-specific Primer sequences would have to be replaced.
Der Antikörpernachweistest könnte entsprechend einem ebenfalls bereits auf dem Markt befindlichen Testkit zum Nachweis antinukleärer Antikörper unter Verwendung rekombinat hergestellter Antigene konfiguriert werden. Hierzu könnte die rekombinate Herstellung des HNA-2a (NB1)-Antigens in größerem Stile ebenfalls im Baculovirus-Insektenzellen- Expressionssystem erfolgen. The antibody detection test could also correspond to one already on the market located test kit for the detection of antinuclear antibodies using recombinant prepared antigens can be configured. The recombinant production of the HNA-2a (NB1) antigen in a larger style also in baculovirus insect cells Expression system take place.
Claims (2)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2000128725 DE10028725B4 (en) | 2000-06-09 | 2000-06-09 | Primary structure of HNA-2a (formerly NB1) antigen |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2000128725 DE10028725B4 (en) | 2000-06-09 | 2000-06-09 | Primary structure of HNA-2a (formerly NB1) antigen |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE10028725A1 true DE10028725A1 (en) | 2001-12-13 |
DE10028725B4 DE10028725B4 (en) | 2013-03-21 |
Family
ID=7645324
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE2000128725 Expired - Lifetime DE10028725B4 (en) | 2000-06-09 | 2000-06-09 | Primary structure of HNA-2a (formerly NB1) antigen |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE10028725B4 (en) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004034061A2 (en) * | 2002-10-10 | 2004-04-22 | Mabtech Ab | Method for determining the susceptibility of a subject to infection |
DE102008045696A1 (en) | 2008-09-04 | 2010-03-11 | Drk Blutspendedienst West Ggmbh | Granulocyte HNA-3a / b antigen |
-
2000
- 2000-06-09 DE DE2000128725 patent/DE10028725B4/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004034061A2 (en) * | 2002-10-10 | 2004-04-22 | Mabtech Ab | Method for determining the susceptibility of a subject to infection |
WO2004034061A3 (en) * | 2002-10-10 | 2004-05-21 | Mabtech Ab | Method for determining the susceptibility of a subject to infection |
US7591997B2 (en) | 2002-10-10 | 2009-09-22 | Mabtech Ab | Method for determining the susceptibility of a subject to infection |
DE102008045696A1 (en) | 2008-09-04 | 2010-03-11 | Drk Blutspendedienst West Ggmbh | Granulocyte HNA-3a / b antigen |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE10028725B4 (en) | 2013-03-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE69822840T2 (en) | MYSTERY CYTOKINREZEPTOR-11 | |
Sutcliffe | mRNA in the mammalian central nervous system | |
Mallinson et al. | Mutations in the erythrocyte chemokine receptor (Duffy) gene: the molecular basis of the Fya/Fyb antigens and identification of a deletion in the Duffy gene of an apparently healthy individual with the Fy (a–b–) phenotype | |
Tempel et al. | Sequence of a probable potassium channel component encoded at Shaker locus of Drosophila | |
DE69333315T2 (en) | MAMMAL RECEPTORS FOR THE MELANOCYTE-STIMULATING HORMONE AND THEIR USE | |
EP1761553A2 (en) | Tumor-associated peptides that bind to mhc-molecules | |
DE69534624T2 (en) | Transcripts of the HLA G gene of major histocompatibility complex (MHC) class 1 and their applications | |
EP1379664A1 (en) | Mhc tetramers | |
DE3805331A1 (en) | AIDS FORECAST TEST AND KIT DAFUER | |
EP0892047A3 (en) | Human and murine semaphorin L | |
WO2013102458A1 (en) | Method for producing an examination reagent and kit for analysing a t-cell frequency | |
DE10028725B4 (en) | Primary structure of HNA-2a (formerly NB1) antigen | |
DE60319121T2 (en) | COMPOSITIONS, PROCESSES AND KITS FOR DETECTING AN ANTIGEN ON A CELL AND IN A BIOLOGICAL MIXTURE | |
Nakamura et al. | Cosegregation of the polymorphic C4 with the MHC in the frog, Xenopus laevis | |
EP0938679B1 (en) | Receptor binding assay, appropriate recombinant fusion receptor for said assay, vector for its production and reagent kit for implementing the receptor binding assay | |
Dunon et al. | Ontogenic appearance of MHC class I (BF) antigens during chicken embryogenesis | |
DAHR et al. | High-frequency antigens of human erythrocyte membrane sialoglycoproteins. VI. Monoclonal antibodies reacting with the N-terminal domain of glycophorin C | |
DE69032526D1 (en) | cDNA FRAGMENT ENCODING AN INTERFERON ALPHA RECEPTOR GENE AND METHOD FOR PRODUCING A CORRESPONDING PROTEIN | |
DE19809978A1 (en) | New soluble member of tumor necrosis factor receptor family, useful for identification specific modulators and for treating disease e.g. tumors | |
DE4408999A1 (en) | Human T cell receptors for diagnostic and therapeutic use in autoimmune diabetes mellitus | |
EP0943685A2 (en) | G-protein coupled receptor from human brain | |
DE60034867T2 (en) | MAST CELL-SPECIFIC SIGNAL TRANSDUCTION MOLECULES AND THEIR CDNAS | |
EP0226069A1 (en) | HLA-B 27, DNA coding therefor and its utilization | |
Lawson et al. | Evolutionary relationships of cartilaginous fishes: an immunological study | |
DE602004004312T2 (en) | Allergenic rubber protein |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8122 | Nonbinding interest in granting licences declared | ||
8127 | New person/name/address of the applicant |
Owner name: MAYER JUN., NORBERT, DR., 61462 KOENIGSTEIN, DE Owner name: FARKAS, FERENC, BUDAPEST, HU |
|
8127 | New person/name/address of the applicant |
Owner name: BUX, JUERGEN, DR., 58093 HAGEN, DE |
|
8110 | Request for examination paragraph 44 | ||
R018 | Grant decision by examination section/examining division | ||
R020 | Patent grant now final |
Effective date: 20130622 |
|
R082 | Change of representative |
Representative=s name: ADVOTEC. PATENT- UND RECHTSANWAELTE, DE Representative=s name: ETL WABLAT & KOLLEGEN PATENT- UND RECHTSANWALT, DE |
|
R082 | Change of representative |
Representative=s name: ADVOTEC. PATENT- UND RECHTSANWAELTE, DE |
|
R081 | Change of applicant/patentee |
Owner name: BAG HEALTH CARE GMBH, DE Free format text: FORMER OWNER: BUX, JUERGEN, DR., 58093 HAGEN, DE |
|
R071 | Expiry of right |