DE19809978A1

DE19809978A1 - New soluble member of tumor necrosis factor receptor family, useful for identification specific modulators and for treating disease e.g. tumors

Info

Publication number: DE19809978A1
Application number: DE1998109978
Authority: DE
Inventors: Burkhard Kroeger
Original assignee: BASF SE
Current assignee: BASF SE
Priority date: 1998-03-09
Filing date: 1998-03-09
Publication date: 1999-09-16
Also published as: AU2930099A; WO1999046376A1

Abstract

An isolated protein (I) comprising a 300 amino acid (aa) sequence (2), reproduced, and derivatives of (2) having substitutions, inversions, insertions or deletions of one or more aa (provided they retain the essential biological properties of (2)), are new. Independent claims are also included for the following: (a) nucleic acid (II) encoding (I) or proteins with at least 60% identity with (2); (b) recombinant nucleic acid construct containing (I) linked to a regulatory element; (c) a host organism transformed with (II) or the construct of (b); (d) transgenic animals containing a (non-)functional construct of (b); (e) antibodies (Ab) that react selectively with (I); and (f) a method for identifying (ant)agonists or ligands (A) of (I).

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Proteine aus der Super familie der TNF-Rezeptoren speziell aus der humanen Lunge, dessen Gene und Verwendung. Weiterhin betrifft die Erfindung Antikörper, die spezifisch die neuen Proteine binden.The present invention relates to new proteins from the super family of TNF receptors specifically from the human lung, whose Genes and uses. The invention further relates to antibodies that specifically bind the new proteins.

Die Erfindung betrifft auch Verfahren zur Identifizierung von Antagonisten und/oder Agonisten dieser erfindungsgemäßen Proteine, sowie ein Verfahren zum Testen von Substanzen, die Liganden der Proteine sind, und ein Verfahren zum qualitativen und quantitativen Nachweis der Proteine. Die Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zum qualitativen und quantitativen Nach weis der Nukleinsäuren, die für die erfindungsgemäßen Proteine kodieren.The invention also relates to identification methods of antagonists and / or agonists of this invention Proteins, as well as a method for testing substances that Ligands of the proteins are, and a method of qualitative and quantitative detection of the proteins. The invention relates still a procedure for qualitative and quantitative follow-up knows the nucleic acids for the proteins of the invention encode.

Die TNF-Rezeptorfamilie stellt eine Superfamilie integraler Membranproteine dar, die in die Signaltransduktion einer Vielzahl von Zellen involviert sind. Dazu gehören neben den TNF-Rezeptoren p55 und p75 auch noch weitere Proteine wie CD27, OX40, sowie das Fas-Antigen (Armitage, R. J., Curr. Opin. Immunol. 6(3) 1994: 407 ff).The TNF receptor family is a super family integral Membrane proteins are involved in the signal transduction of a variety of cells are involved. In addition to the TNF receptors, these include p55 and p75 also other proteins such as CD27, OX40, as well the Fas antigen (Armitage, R.J., Curr. Opin. Immunol. 6 (3) 1994: 407 ff).

Die Rezeptoren dieser Superfamilie sind charakterisiert durch vier aminoterminale, extrazelluläre Cystein-reiche, TNFR-ähnliche Domänen mit starker Konservierung der Cystinbrücken. Es gibt keine Homologie der intrazellulären Abschnitte der TNF-Rezeptor-Super familienmitglieder p55, p75, Osteoprotegerin und der be schriebenen neuen Rezeptorsequenz, was auf eine unterschiedliche Signaltransduktion schließen läßt.The receptors of this superfamily are characterized by four amino terminal, extracellular cysteine-rich, TNFR-like Domains with strong conservation of the cystine bridges. There are no homology to the intracellular sections of the TNF receptor super family members p55, p75, osteoprotegerin and the be wrote new receptor sequence, suggesting a different Can close signal transduction.

Normalerweise handelt es sich bei den Vertretern dieser Familie um membranständige Rezeptorformen. In einigen Fällen kann es zur Freisetzung der extrazellulären Komponenten/Domänen der Rezeptoren kommen, wie im Falle der TNF-Rezeptoren (siehe: Lantz, M. et al. J. Clin. Invest. 86, 1990: 1396ff). In anderen Fällen haben Vertreter dieser Familie gar keine Membranankerdomäne, sondern werden vielmehr direkt als "lösliche", sezernierte Rezeptoren freigesetzt (Simonet, W. S. et al. Cell 89, 1997: 309ff).It is usually the representatives of this family membrane-based receptor forms. In some cases it can to release the extracellular components / domains of the Receptors come, as in the case of TNF receptors (see: Lantz, M. et al. J. Clin. Invest. 86, 1990: 1396ff). In other cases representatives of this family have no membrane anchor domain at all, Rather, they are secreted directly as "soluble" Receptors released (Simonet, W.S. et al. Cell 89, 1997: 309ff).

Die TNF-Rezeptorfamilie stellt eine Superfamilie integraler Membranproteine dar, die wie oben beschrieben an der Signaltrans duktion in einer Vielzahl von Zellen beteiligt ist. Aufgrund der vielfältigen physiologischen Bedeutung der Mitglieder der TNF-Rezeptor-Superfamilie stellte sich die Aufgabe, nach weiteren Mitgliedern dieser Familie zu suchen und sie für die Entwicklung neuer Wirkstofftargets bzw. neuer Wirkstoffe zur Verfügung zu stellen.The TNF receptor family is a super family integral Membrane proteins that, as described above, on the signal trans production in a variety of cells. Due to the diverse physiological importance of the members of the TNF receptor superfamily set itself the task, after others Search for members of this family and use them for development new drug targets or new drugs available put.

Diese Aufgabe wurde durch das erfindungsgemäße isolierte Protein, enthaltend die in SEQ ID NO: 2 dargestellte Aminosäure sequenz oder eine daraus durch Substitution, Inversion, Insertion oder Deletion von einem oder mehreren Aminosäureresten erhält liche Sequenz, wobei wenigstens noch eine der wesentlichen biologischen Eigenschaften des in SEQ ID NO: 2 dargestellten Proteins erhalten bleibt, gelöst.This object was isolated by the invention Protein containing the amino acid shown in SEQ ID NO: 2 sequence or one of them by substitution, inversion, insertion or deletion of one or more amino acid residues Liche sequence, at least one of the essential biological properties of that shown in SEQ ID NO: 2 Protein is preserved, resolved.

Unter der wesentlichen biologischen Eigenschaft der erfindungs gemäßen Proteine sind beispielsweise die vier aminoterminalen, extrazellulären Cystein-reichen TNFR-ähnlichen Domänen mit starker Konservierung der Cystinbrücken zu verstehen. Diese Eigenschaft ermöglicht die spezielle biologische Wirkung der Proteine. Die erfindungsgemäßen Proteine weisen außerdem keine Homologie innerhalb der typischen intrazellulären Abschnitte der TNF-Rezeptor-Superfamilienmitglieder auf, wie zu den Proteinen p55, p75. Zu dem bisher einzigen beschriebenen, löslichen Rezeptor dieser Familie dem Osteoprotegerin besitzt das erfindungsgemäße Protein keine signifikante Homologie im C-terminalen, der Cystein-reichen Region folgenden Bereich.Under the essential biological property of the Invention modern proteins are, for example, the four amino terminals, extracellular cysteine-rich TNFR-like domains with understand the strong conservation of the cystine bridges. This Property enables the special biological effect of Proteins. The proteins of the invention also have none Homology within the typical intracellular sections of the TNF receptor superfamily members on how to proteins p55, p75. To the only soluble so far described This family's receptor, the osteoprotegerin, possesses this protein of the invention has no significant homology in C-terminal region following the cysteine-rich region.

Das isolierte Protein und seine funktionellen Varianten läßt sich vorteilhafterweise aus der menschlichen Lunge, dem Herzen und/oder der Niere isolieren.The isolated protein and its functional variants leaves advantageously from the human lungs, the heart and / or isolate the kidney.

Eine weitere wesentliche biologische Eigenschaft ist in der Ligandenbindung zu sehen, insbesondere in Form löslicher Rezeptoren für diese Liganden.Another essential biological property is in the To see ligand binding, especially in the form of soluble Receptors for these ligands.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung sind Proteine, die noch die Ligandenbindungsaktivität aufweisen und die ausgehend von der in SEQ ID NO: 2 dargestellten Aminosäuresequenz durch gezielte Veränderungen herstellbar sind. Dabei können beispielsweise be stimmte Aminosäuren durch solche mit ähnlichen physikochemischen Eigenschaften (Raumerfüllung, Basizität, Hydrophobizität etc.) ersetzt werden. Beispielsweise werden Argininreste gegen Lysin reste, Valinreste gegen Isoleucinreste oder Asparaginsäurereste gegen Glutaminsäurereste ausgetauscht. Es können aber auch ein oder mehrere Aminosäuren in ihrer Reihenfolge vertauscht, hinzu gefügt oder entfernt werden, oder es können mehrere dieser Maß nahmen miteinander kombiniert werden. Die solchermaßen gegenüber der SEQ ID NO: 2 veränderten Proteine besitzen wenigstens 60%, bevorzugt wenigstens 75%, ganz besonders bevorzugt wenigstens 85% Homologie zu SEQ ID NO: 2, berechnet nach dem Algorithmus von Pearson und Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 85, No. 8, 1988: 2444-2448.Another object of the invention are proteins that which have ligand binding activity and which start from the shown in SEQ ID NO: 2 by targeted Changes can be made. For example, be tuned amino acids by those with similar physicochemical Properties (space filling, basicity, hydrophobicity etc.) be replaced. For example, arginine residues are used against lysine residues, valine residues against isoleucine residues or aspartic acid residues exchanged for glutamic acid residues. But it can also be a or interchanged several amino acids in their order be added or removed, or there can be several of these dimensions could be combined with each other. The opposite way of SEQ ID NO: 2 modified proteins have at least 60%, preferably at least 75%, very particularly preferably at least 85% homology to SEQ ID NO: 2, calculated according to the algorithm by Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 85, No. 8th, 1988: 2444-2448.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung sind Nukleinsäuresequenzen, die für die oben genannten Proteine codieren, insbesondere solche mit der in SEQ ID NO: 1 dargestellten Primärstruktur. Unter den erfindungsgemäßen Nukleinsäuresequenzen sind auch Allelvarianten zu verstehen, die wie oben für die Aminosäuresequenzen beschrie ben, durch Deletion, Inversion, Insertion oder Substitution von Nukleotiden aus der in SEQ ID NO: 1 dargestellten Sequenz erhält lich sind, wobei die biologischen Eigenschaften bzw. die biolo gische Aktivität aber erhalten bleibt.The invention further relates to nucleic acid sequences, which code for the above proteins, especially those with the primary structure shown in SEQ ID NO: 1. Among the The nucleic acid sequences according to the invention are also allele variants to understand that as described above for the amino acid sequences ben, by deletion, inversion, insertion or substitution of Receives nucleotides from the sequence shown in SEQ ID NO: 1 Lich, the biological properties or the biolo activity remains.

Weiterhin sind unter Nukleinsäuresequenzen auch funktionelle Äquivalente der Gene wie eukaryontische Homologe beispiels weise aus Evertebraten wie Caenorhabditis oder Drosophila oder Vertebraten vorteilhafterweise aus Mammalia wie Maus, Rate oder Affe zu verstehen, bevorzugt aus Vertebraten, die in der Lage sind die biologische Aktivität des Gens bzw. Genprodukts zu übernehmen.Furthermore, there are also functional ones under nucleic acid sequences Equivalents of genes such as eukaryotic homologs, for example from Evertebrates such as Caenorhabditis or Drosophila or Vertebrates advantageously from mammalia such as mouse, rate or Monkey understand, preferably from vertebrates who are able are the biological activity of the gene or gene product too take.

Weiterhin sind unter den erfindungsgemäßen Nukleinsäuresequenzen auch verkürzte Sequenzen, Einzelstrang-DNA oder RNA der codieren den und nichtcodierenden DNA-Sequenz zu verstehen, die die bio logischen Eigenschaften aufweisen.Furthermore, are among the nucleic acid sequences according to the invention also shortened sequences, single-stranded DNA or RNA to understand the and non-coding DNA sequence that the bio have logical properties.

Unter den Nukleinsäuresequenzen sind auch Derivate wie beispiels weise Promotorvarianten zu verstehen. Die Promotoren, die den angegebenen Nukleotidsequenzen vorgeschalten sind, können dabei durch ein oder mehrere Nukleotidaustausche, durch Inversionen, durch Insertion(en) und/oder Deletion(en) verändert sein, ohne daß aber die Funktionalität bzw. Wirksamkeit der Promotoren beeinträchtigt wird. Des weiteren können die Promotoren durch Veränderung ihrer Sequenz in ihrer Wirksamkeit erhöht oder komplett durch wirksamere Promotoren auch artfremder Organismen ausgetauscht werden.Derivatives such as are also among the nucleic acid sequences to understand wise promoter variants. The promoters that the specified nucleotide sequences can precede through one or more nucleotide exchanges, through inversions, be changed by insertion (s) and / or deletion (s) without but that the functionality or effectiveness of the promoters is affected. Furthermore, the promoters can by Change in their sequence increases in their effectiveness or completely through more effective promoters of other organisms be replaced.

Unter Derivaten sind auch Varianten zu verstehen, deren Nukleo tidsequenz im Bereich von -1 bis -1000 vor dem Startkodon so verändert wurden, daß die Genexpression und/oder die Protein expression erhöht wird. Derivatives are also to be understood as variants whose nucleos tid sequence in the range from -1 to -1000 before the start codon were changed that the gene expression and / or the protein expression is increased.

Die vorliegende cDNA der Nukleinsäuresequenz kann in dem Fachmann bekannter weise über Vektoren in geeignete Systeme eingebracht und exprimiert werden. Vorteilhafterweise werden die erfindungs gemäßen Nukleinsäuresequenzen, ihre Allelvarianten, ihre funktio nellen Äquivalente oder Derivate als rekombinantes Nukleinsäure konstrukt in einem geeigneten System eingebracht und exprimiert. Dabei werden vorteilhaft dem Fachmann bekannte geläufige Klonie rungs- und Transfektionsmethoden verwendet, um die genannten Nukleinsäuren in verschiedenen Expressionssystemen zur Expression zu bringen. Diese Systeme werden beispielsweise in Current Proto cols in Molecular Biology, ed. F. Ausubel et al. Wiley Inter science, New York 1997, beschrieben.The present cDNA of the nucleic acid sequence can be found in the person skilled in the art known to be introduced into suitable systems via vectors and be expressed. Advantageously, the fiction according nucleic acid sequences, their allele variants, their functio equivalents or derivatives as recombinant nucleic acid constructed and expressed in a suitable system. In this case, familiar clones known to the skilled worker are advantageous and transfection methods used to achieve the above Nucleic acids in various expression systems for expression bring to. These systems are, for example, in Current Proto cols in Molecular Biology, ed. F. Ausubel et al. Wiley Inter science, New York 1997.

Dazu wird die erfindungsgemäße Nukleinsäuresequenz üblicherweise mit genetischen Regulationselementen wie Transkriptions- und Translationssignalen funktionell verknüpft. Diese Verknüpfung kann zu je nach gewünschter Anwendung zu einer Erhöhung oder Erniedrigung der Genexpression führen. Mit den solchermaßen her gestellten rekombinanten Nukleinsäurekonstrukten werden anschlie ßend Wirtsorganismen transformiert. Zusätzlich zu diesen neuen Regulationssequenzen kann die natürliche Regulation dieser Sequenzen vor den eigentlichen Strukturgenen noch vorhanden sein und gegebenenfalls genetisch verändert worden sein, so daß die natürliche Regulation ausgeschaltet und die Expression der Gene erhöht wurde. Das Genkonstrukt kann aber auch einfacher aufgebaut sein, das heißt es werden keine zusätzlichen Regulationssignale vor die Sequenzen inseriert und der natürliche Promotor mit seiner Regulation wird nicht entfernt. Statt dessen wird die natürliche Regulationssequenz so mutiert, daß keine Regulation mehr erfolgt und die Genexpression gesteigert wird. Auch am 3'-Ende der Nukleinsäure-Sequenzen können zusätzliche vorteil hafte regulatorische Elemente inseriert werden. Die Nukleinsäure sequenzen können in einer oder mehreren Kopien im Genkonstrukt enthalten sein.For this purpose, the nucleic acid sequence according to the invention is usually used with genetic regulatory elements such as transcription and Functionally linked translation signals. This link can increase or depending on the desired application Decrease gene expression. With that way Recombinant nucleic acid constructs are then put eating host organisms transformed. In addition to these new ones Regulation sequences can be the natural regulation of this Sequences before the actual structural genes still exist and possibly have been genetically modified so that the natural regulation turned off and gene expression was increased. The gene construct can also be constructed more simply be, that means there will be no additional regulatory signals inserted before the sequences and the natural promoter with its regulation is not removed. Instead, the natural regulatory sequence so mutated that no regulation more is done and gene expression is increased. As well on 3 'ends of the nucleic acid sequences can be of additional advantage Adherent regulatory elements are inserted. The nucleic acid sequences can be in one or more copies in the gene construct be included.

Vorteilhafte Regulationssequenzen für das erfindungsgemäße Ver fahren sind beispielsweise in Promotoren wie cos-, tac-, trp-, tet-, trp-tet-, lpp-, lac-, lpp-lac-, lacIq-, T7-, T5-, T3-, gal-, trc-, ara-, SP6-, 1-PR- oder im 1-PL-Promotor enthalten, die vorteilhafterweise in gram-negativen Bakterien Anwendung finden. Weitere vorteilhafte Regulationssequenzen sind beispiels weise in den gram-positiven Promotoren amy und SPO2, in den Hefepromotoren ADC1, MFa, AC, P-60, CYC1, GAPDH oder in den Pflanzenpromotoren CaMV/35S, SSU, OCS, lib4, usp, STLS1, B33, nos oder im Ubiquitin- oder Phaseolin-Promotor enthalten. Advantageous regulatory sequences for the Ver driving are in promoters such as cos, tac, trp, tet-, trp-tet-, lpp-, lac-, lpp-lac-, lacIq-, T7-, T5-, T3-, contain gal, trc, ara, SP6, 1-PR or in the 1-PL promoter, which is advantageously used in gram-negative bacteria Find. Further advantageous regulation sequences are examples as in the gram-positive promoters amy and SPO2, in the Yeast promoters ADC1, MFa, AC, P-60, CYC1, GAPDH or in the Plant promoters CaMV / 35S, SSU, OCS, lib4, usp, STLS1, B33, nos or contained in the ubiquitin or phaseolin promoter.

Prinzipiell können alle natürlichen Promotoren mit ihren Regula tionssequenzen wie die oben genannten verwendet werden. Darüber hinaus können auch synthetische Promotoren vorteilhaft verwendet werden.In principle, all natural promoters can use their regulations tion sequences such as those mentioned above. About that In addition, synthetic promoters can also be used advantageously become.

Diese regulatorischen Sequenzen sollen die gezielte Expression der Nukleinsäuresequenzen und der Proteinexpression ermöglichen. Dies kann beispielsweise je nach Wirtsorganismus bedeuten, daß das Gen erst nach Induktion exprimiert oder überexprimiert wird, oder daß es sofort exprimiert und/oder überexprimiert wird.These regulatory sequences are designed to target expression enable nucleic acid sequences and protein expression. Depending on the host organism, this can mean, for example, that the gene is only expressed or overexpressed after induction, or that it is immediately expressed and / or overexpressed.

Die regulatorischen Sequenzen bzw. Faktoren können dabei vorzugs weise die Expression positiv beeinflussen und dadurch erhöhen. So kann eine Verstärkung der regulatorischen Elemente vorteilhafter weise auf der Transkriptionsebene erfolgen, indem starke Trans kriptionssignale wie Promotoren und/oder "Enhancer" verwendet werden. Daneben ist aber auch eine Verstärkung der Translation möglich, indem beispielsweise die Stabilität der mRNA verbessert wird.The regulatory sequences or factors can be preferred wise influence the expression positively and thereby increase. So can strengthen the regulatory elements more advantageous done at the transcriptional level by using strong trans Kriptionssignale such as promoters and / or "enhancers" used become. But there is also an increase in translation possible, for example, by improving the stability of the mRNA becomes.

Unter "Enhancer" sind beispielsweise DNA-Sequenzen zu verstehen, die über eine verbesserte Wechselwirkung zwischen RNA-Polymerase und DNA eine erhöhte Expression bewirken.“Enhancers” are understood to mean, for example, DNA sequences which have an improved interaction between RNA polymerase and DNA cause increased expression.

Eine bevorzugte Ausführungsform ist die Verknüpfung der erfin dungsgemäßen Nukleinsäuresequenz mit einem Promotor, wobei der Promotor 5' up stream zu liegen kommt. Weitere Regulationssignale wie Terminatoren, Polyadenylierungssignale, Enhancer können in dem Nukleinsäurekonstrukt Anwendung finden.A preferred embodiment is the linking of the inventions nucleic acid sequence according to the invention with a promoter, wherein the Promoter 5 'up stream comes to rest. Further regulation signals such as terminators, polyadenylation signals, enhancers can the nucleic acid construct find application.

Das rekombinante Nukleinsäurekonstrukt bzw. Genkonstrukt wird zur Expression in einem geeigneten Wirtsorganismus vorteilhafterweise in einen wirtsspezifischen Vektor inseriert, der eine optimale Expression der Gene im Wirt ermöglicht. Vektoren sind dem Fach mann wohl bekannt und können beispielsweise aus dem Buch Cloning Vectors (Eds. Pouwels P. H. et al. Elsevier, Amsterdam-New York-Ox ford, 1985, ISBN 0 444 904018) entnommen werden. Unter Vektoren sind außer Plasmiden auch alle anderen dem Fachmann bekannten Vektoren wie beispielsweise Phagen, Viren wie SV40, CMV, Baculo virus, Adenovirus, Transposons, IS-Elemente, Phasmide, Cosmide, lineare oder zirkuläre DNA zu verstehen. Diese Vektoren können autonom im Wirtsorganismus repliziert oder chromosomal repliziert werden.The recombinant nucleic acid construct or gene construct becomes Expression in a suitable host organism advantageously inserted into a host-specific vector that is an optimal Allows expression of the genes in the host. Vectors are the subject well known and can, for example, from the book cloning Vectors (Eds. Pouwels P.H. et al. Elsevier, Amsterdam-New York-Ox Ford, 1985, ISBN 0 444 904018). Under vectors In addition to plasmids, all other known to the expert Vectors such as phages, viruses such as SV40, CMV, Baculo virus, adenovirus, transposons, IS elements, phasmids, cosmids, to understand linear or circular DNA. These vectors can replicated autonomously in the host organism or replicated chromosomally become.

Als Wirtsorganismen sind prinzipiell alle Organismen geeignet, die eine Expression der erfindungsgemäßen Nukleinsäuren, ihrer Allelvarianten, ihrer funktionellen Äquivalente oder Derivate oder des rekombinanten Nukleinsäurekonstrukt ermöglichen. Unter Wirtsorganismen sind beispielsweise Bakterien, Pilze, Hefen, pflanzliche oder tierische Zellen zu verstehen. Bevorzugte Organismen sind Bakterien wie Escherichia coli, Streptomyces, Bacillus oder Pseudomonas, eukaryotische Mikroorganismen wie Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus, höhere eukaryotische Zellen aus Tieren oder Pflanzen, beispielsweise Sf9 oder CHO-Zellen.In principle, all organisms are suitable as host organisms, an expression of the nucleic acids of the invention, their Allele variants, their functional equivalents or derivatives or enable the recombinant nucleic acid construct. Under Host organisms are, for example, bacteria, fungi, yeasts, understand plant or animal cells. Preferred Organisms are bacteria such as Escherichia coli, Streptomyces, Bacillus or Pseudomonas, eukaryotic microorganisms like Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus, higher eukaryotic Cells from animals or plants, for example Sf9 or CHO cells.

Gewünschtenfalls kann das Genprodukt auch in transgenen Organis men wie transgenen Tieren z. B. Mäusen, Schafen oder transgenen Pflanzen zur Expression gebracht werden. Bei den transgenen Organismen kann es sich auch um sogenannte Knock-Out Tiere oder Pflanzen handeln.If desired, the gene product can also be found in transgenic organisms men like transgenic animals e.g. B. mice, sheep or transgenic Plants are brought to expression. With the transgenic Organisms can also be so-called knock-out animals or Trade plants.

Die Kombination aus dem Wirtsorganismen und den zu den Organismen passenden Vektoren wie Plasmide, Viren oder Phagen wie beispiels weise Plasmide mit dem RNA-Polymerase/Promoter System, die Phagen l, Mu oder andere temperänte Phagen oder Transposons und/oder weiteren vorteilhaften regulatorischen Sequenzen bilden ein Expressionssystem. Bevorzugt sind unter dem Begriff Expressions systeme beispielsweise die Kombination aus Säugetierzellen wie CHO-Zellen und Vektoren wie pcDNA3neo-Vektor, die für Säugetier zellen geeignet sind, zu verstehen.The combination of the host organism and that of the organism matching vectors such as plasmids, viruses or phages such as wise plasmids with the RNA polymerase / promoter system, the phages l, Mu or other temperate phages or transposons and / or form further advantageous regulatory sequences Expression system. Expressions are preferred under the term systems, for example the combination of mammalian cells such as CHO cells and vectors such as pcDNA3neo vector, which are for mammals cells are suitable to understand.

Bei der vorliegenden Erfindung handelt es sich um eine cDNA, die für ein neues Mitglied der TNF-Rezeptor-Superfamilie kodiert. Sequenzvergleiche mit der Aminosäuresequenz des vorliegenden Rezeptors zeigen Ähnlichkeiten mit dem humanen Osteoprotegerin (GenBank acc. no. U94332) und dem humanen TNFRII p75 (GenBank acc. no. U52165). In beiden Fällen beschränkt sich die Ähnlich keit auf die C-terminale Hälfte der Proteine, die im wesentlichen der Cystein-reichen Domäne, also der Ligandenbindungsdomäne ent spricht. So ist die Identität zwischen SEQ ID NO: 2 (AS 34-193) und dem humanen Osteoprotegerin (AS 26-185) bei 43%; die Identi tät zwischen SEQ ID NO: 2 (AS 3-134) und dem humanen TNFRII (p75) (AS 8-139) bei 27%. (FastA-Programm, Pearson und Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 85, 2444-2448).The present invention is a cDNA that encodes a new member of the TNF receptor superfamily. Sequence comparisons with the amino acid sequence of the present Receptor show similarities to the human osteoprotegerin (GenBank acc. No. U94332) and the human TNFRII p75 (GenBank acc. no. U52165). In both cases the similarity is limited on the C-terminal half of the proteins, essentially the cysteine-rich domain, ie the ligand-binding domain speaks. So is the identity between SEQ ID NO: 2 (AS 34-193) and human osteoprotegerin (AS 26-185) in 43%; the ident between SEQ ID NO: 2 (AS 3-134) and the human TNFRII (p75) (AS 8-139) at 27%. (FastA program, Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 85, 2444-2448).

Die vorliegende Nukleotidsequenz wurde ursprünglich in mehreren cDNA-Bibliotheken aus humaner Lunge identifiziert. Die Analyse der Verteilung der zugehörigen mRNA in verschiedenen menschlichen Geweben ergab Expression in Lunge, Herz und Niere. Dabei wurde zwei Transkripte, 1,4 und 2,4 knt (= Kilonukleotide) lang, detek tiert. The present nucleotide sequence was originally in several Human lung cDNA libraries identified. The analysis the distribution of the associated mRNA in different human Tissues gave expression in the lungs, heart and kidneys. It was two transcripts, 1.4 and 2.4 knt (= kilonucleotides) long, detec animals.

Das durch die vorliegende cDNA kodierte Polypeptid läßt sich zweifelsfrei als Mitglied der TNF-Rezeptor-Superfamilie identifi zieren. Die für die Mitglieder der TNF-Rezeptor-Superfamilie be kannten extrazelluläre, Cystein-reiche Domäne findet sich auch in dem neuen von der erfindungsgemäßen Nukleinsäuresequenz kodierten Rezeptor. Der neue beschriebene Rezeptor verfügt aber nicht über die z. B. beim TNF-Rezeptor II (p75, Goodwin, R. G., Mol.Cell.Biol. Vol. 11, No. 6, 1991: 3020 ff) bekannte Membrananker-Domäne, so daß vermutet werden kann, daß es sich bei dem erfindungsgemäßen Poly peptid um einen sogenannten "löslichen" Rezeptor handelt, der von der produzierenden Zelle sezerniert wird.The polypeptide encoded by the present cDNA can be identified as a member of the TNF receptor superfamily adorn. The for the members of the TNF receptor superfamily be known extracellular, cysteine-rich domain can also be found in the new encoded by the nucleic acid sequence according to the invention Receptor. However, the new receptor described does not have the z. B. with TNF receptor II (p75, Goodwin, R.G., Mol.Cell.Biol. Vol. 11, No. 6, 1991: 3020 ff) known membrane anchor domain, so that It can be assumed that the poly according to the invention peptide is a so-called "soluble" receptor which is derived from of the producing cell is secreted.

Wie oben beschrieben kann das Genprodukt vorteilhaft auch in transgenen Tieren, z. B. Mäusen, Schafen oder transgenen Pflanzen zur Expression gebracht werden. Ebenso ist es möglich, zellfreie Translationssysteme mit der von der Nukleinsäure abgeleiteten RNA zu programmieren.As described above, the gene product can also advantageously be used in transgenic animals, e.g. B. mice, sheep or transgenic plants to be expressed. It is also possible to be cell-free Translation systems with the RNA derived from the nucleic acid to program.

Darüberhinaus kann das Genprodukt auch in Form therapeutisch oder diagnostisch geeigneter Fragmente exprimiert werden. Zur Isolierung des rekombinanten Proteins können vorteilhaft Vektor systeme oder Oligonukleotide verwendet werden, die die cDNA um bestimmte Nukleotidsequenzen verlängern und damit für veränderte Polypeptide kodieren, die einer einfacheren Reinigung dienen. Als solche Anker sind beispielsweise sogenannte "Tags" in der Litera tur z. B. Hexa-Histidin-Anker bekannt oder Epitope, die als Anti gene verschiedener Antikörper erkannt werden können (beschrieben zum Beispiel in Harlow, E. and Lane, D., 1988, Antibodies: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor (N.Y.) Press). Diese Anker können zur Anheftung der Proteine an einen festen Träger wie an einer polymeren Matrix, die beispielsweise in einer Chromato graphiesäule eingefüllt sein kann, oder an einer Mikrotiterplatte oder an einen sonstigen Träger verwendet werden. Gleichzeitig können diese Anker auch zur Erkennung der Proteine verwendet werden. Zur Erkennung der Proteine können außerdem übliche Marker wie Fluoreszenzfarbstoffe, Enzymmarker, die nach Reaktion mit einem Substrat ein detektierbares Reaktionsprodukt bilden, oder ein radioaktive Marker allein oder in Kombination mit den Ankern zur Derivatisierung der Proteine verwendet werden.In addition, the gene product can also be therapeutic in form or diagnostically suitable fragments are expressed. For Isolation of the recombinant protein can advantageously be vector systems or oligonucleotides can be used to convert the cDNA extend certain nucleotide sequences and thus for modified ones Encode polypeptides for easier purification. As such anchors are, for example, so-called "tags" in the litera tur z. B. Hexa-histidine anchors known or epitopes known as anti genes of different antibodies can be recognized (described for example in Harlow, E. and Lane, D., 1988, Antibodies: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor (N.Y.) Press). These anchors can be used to attach the proteins to a solid support such as a polymeric matrix, for example in a Chromato graphic column can be filled, or on a microtiter plate or used on another carrier. At the same time these anchors can also be used to recognize proteins become. Common markers can also be used to recognize the proteins such as fluorescent dyes, enzyme markers, which after reaction with form a detectable reaction product on a substrate, or a radioactive marker alone or in combination with the anchors can be used to derivatize the proteins.

Ausgehend von der Peptidsequenz können synthetische Peptide generiert werden, die einzeln oder in Kombination als Antigene für die Produktion von Antikörpern eingesetzt werden. Es ist auch möglich, das Polypeptid oder Bruchstücke davon zur Generierung von Antikörpern einzusetzen. Starting from the peptide sequence, synthetic peptides generated individually or in combination as antigens be used for the production of antibodies. It is also possible to generate the polypeptide or fragments thereof of antibodies.

Die Herstellung von Antikörpern ist eine dem Fachmann geläufige Tätigkeit. Mit Antikörpern sind sowohl polyklonale, monoklonale, humane oder humanisierte Antikörper oder Fragmente davon, single chain Antikörper oder auch synthetische Antikörper gemeint.The production of antibodies is familiar to the person skilled in the art Activity. Antibodies are both polyclonal, monoclonal, human or humanized antibodies or fragments thereof, single chain antibodies or synthetic antibodies.

Die vorliegende cDNA bietet außerdem die Voraussetzung, die genomische Sequenz dieses neuen Rezeptorgens zu klonieren. Darunter fällt auch die dazugehörige regulatorische oder Promo torsequenz, die beispielsweise durch Sequenzierung des 5' up-stream Bereiches der vorliegenden cDNA zugänglich wird. Die Sequenzinformation der cDNA ist auch die Grundlage für die Her stellung von antisense Molekülen oder Ribozymen. Diese genomische DNA kann ebenfalls zur Herstellung der oben beschriebenen Gen konstrukte verwendet werden.The present cDNA also offers the prerequisite that to clone the genomic sequence of this new recipe gene. This also includes the associated regulatory or promo gate sequence, for example by sequencing the 5 ' up-stream area of the present cDNA becomes accessible. The Sequence information of the cDNA is also the basis for the Her provision of antisense molecules or ribozymes. This genomic DNA can also be used to produce the gene described above constructs are used.

Eine weitere Möglichkeit des Einsatzes der Nukleotidsequenz oder Teilen davon ist die Erzeugung transgener Tiere. Transgene Über expression oder genetischer Knockout der Sequenzinformation in geeigneten Tiermodellen kann wertvolle weitere Informationen über die (Patho-)Physiologie des neuen Rezeptors liefern.Another possibility of using the nucleotide sequence or Part of this is the production of transgenic animals. Transgenic About expression or genetic knockout of the sequence information in Suitable animal models can provide valuable additional information about provide the (patho-) physiology of the new receptor.

In Situationen, in denen ein Mangel an dem beschriebenen Rezeptor (Protein gemäß Anspruch 1) herrscht, können mehrere Methoden zur Substituierung eingesetzt werden. Zum einen kann das Protein, natürlich oder rekombinant direkt, oder durch geeignete Maßnahmen in Form seiner kodierenden Nukleinsäure (DNA oder RNA) appliziert werden. Dazu können beliebige Vektoren beispielsweise sowohl virale, als auch nichtvirale Vehikel zum Einsatz kommen.In situations where there is a lack of the described receptor (Protein according to claim 1), there are several methods for Substitution can be used. For one thing, the protein, natural or recombinant directly, or by suitable measures applied in the form of its coding nucleic acid (DNA or RNA) become. Any vector can be used for this purpose, for example, both viral and non-viral vehicles are used.

Ein weiterer Weg bietet sich durch die Stimulation des endogenen, körpereigenen Genes durch geeignete Mittel. Auch der turn-over oder die Inaktivierung z. B. durch Rezeptorkinasen können blockiert werden. Schließlich können Agonisten dieses Proteins bzw. Rezeptors zum Einsatz gelangen.Another way is to stimulate the endogenous, body's genes by appropriate means. Even the turn-over or the inactivation e.g. B. by receptor kinases be blocked. Finally, agonists of this protein or receptor are used.

In Situationen, in denen überschüssiger Rezeptor vorliegt, können verschiedene Inhibitoren eingesetzt werden. Diese Inhibition kann sowohl durch antisense Moleküle oder Ribozyme, oder Antikörper und Oligonukleotide, als auch durch niedermolekulare Verbindungen erreicht werden. Darüberhinaus kann der Rezeptor auch durch Antagonisten blockiert werden.In situations where there is excess receptor different inhibitors are used. This inhibition can both by antisense molecules or ribozymes, or antibodies and oligonucleotides, as well as through low molecular weight compounds can be achieved. In addition, the receptor can also pass through Antagonists are blocked.

Weiterhin können die cDNA, die genomische DNA, der Promotor, als auch das Polypeptid, sowie Teilfragmente davon in rekombinanter oder nichtrekombinanter Form zur Ausarbeitung eines Testsystems verwendet werden. Dieses Testsystem ist geeignet, die Aktivität des Promotors oder des Proteins in Anwesenheit einer Testsubstanz zu messen. Bevorzugt handelt es sich dabei um einfache Meß methoden (colorimetrischer, luminometrischer, fluorimetrischer, immunologischer oder radioaktiver Art,) die die schnelle Meß barkeit einer Vielzahl von Testsubstanzen vorteilhaft in einem sogenannten High-Throughput-Screening erlauben. Diese beschriebe nen Testsysteme erlauben die Bindung oder Agonisierung oder Anta gonisierung von Testsubstanzen in Bezug zum neuen Rezeptor zu beschreiben.Furthermore, the cDNA, the genomic DNA, the promoter, as also the polypeptide, as well as partial fragments thereof in recombinant or non-recombinant form to develop a test system be used. This test system is suitable for activity of the promoter or protein in the presence of a test substance to eat. It is preferably a simple measurement methods (colorimetric, luminometric, fluorimetric, immunological or radioactive type,) which the rapid measurement Ability of a large number of test substances advantageously in one allow so-called high-throughput screening. This describes Test systems allow binding or agonization or anta gonization of test substances in relation to the new receptor describe.

Die Bestimmung von Menge, Aktivität und Verteilung des Rezeptors oder seiner zugrundeliegenden mRNA im menschlichen Körper kann zur Diagnose, Prädisposition und zum Monitoring bei bestimmten Erkrankungen dienen. Desgleichen kann die Sequenz der cDNA sowie der genomischen Sequenz zu Aussagen über genetische Ursachen und Prädispositionen bestimmter Erkrankungen herangezogen werden. Dazu können sowohl DNA/RNA-Proben, sowie unnatürliche DNA/RNA-Proben, als auch Antikörper verschiedenster Art benutzt werden. Dabei dient die beschriebene Nukleotidsequenz oder Teile davon in Form geeigneter Proben zur Aufdeckung von Punktmutationen oder Deletionen/Insertionen.Determining the amount, activity and distribution of the receptor or its underlying mRNA in the human body for diagnosis, predisposition and monitoring for certain Serve diseases. Likewise, the sequence of the cDNA as well the genomic sequence for statements about genetic causes and Predispositions of certain diseases can be used. This can include both DNA / RNA samples, as well as unnatural ones DNA / RNA samples, as well as various types of antibodies can be used. The nucleotide sequence described or parts thereof are used in the form of suitable samples for the detection of point mutations or Deletions / insertions.

Weiterhin kann das beschriebene Protein benutzt werden, um seine natürlichen Liganden zu bestimmen und zu isolieren. Außerdem kann das beschriebene Protein benutzt werden, um künstliche oder synthetische Liganden zu bestimmen und zu isolieren. Dazu kann man das rekombinant hergestellte oder gereinigte natürliche Protein derart derivatisieren, daß es Modifikationen trägt, die eine Verknüpfung mit Trägermaterialien erlauben. Derart gebunde nen Proteine können mit Proteinextrakten oder Peptidbibliotheken oder anderen Quellen für Liganden inkubiert werden. Spezifisch gebundenen Peptide, Proteine oder niedermolekulare, nicht- proteinogene Substanzen können so isoliert und charakterisiert werden. Unter nichtproteinogenen Substanzen sind beispielsweise niedermolekulare, chemische Substanzen (= kleiner 1000 Dalton) zu verstehen, die beispielsweise aus der klassischen Wirkstoff synthese oder aus sogenannten Substanzbibliotheken stammen können, die mit Hilfe der Kombinatorik synthetisiert worden sind.Furthermore, the protein described can be used to its to determine and isolate natural ligands. Besides, can the protein described can be used to make artificial or to determine and isolate synthetic ligands. This can the recombinantly produced or purified natural Derivatize protein so that it bears modifications that allow a link to carrier materials. So bound Proteins can be obtained with protein extracts or peptide libraries or other sources of ligands. Specific bound peptides, proteins or low molecular weight, non- Proteinogenic substances can be isolated and characterized in this way become. Among non-proteinogenic substances are, for example low molecular weight, chemical substances (= less than 1000 daltons) understand that, for example, from the classic active ingredient synthesis or come from so-called substance libraries can, which have been synthesized with the help of combinatorics.

Die verwendeten Proteinextrakte können vorteilhafterweise aus der Lunge, dem Herz, der Niere oder Körperflüssigkeiten wie Lymphe, Liquor, Blut oder Harn stammen.The protein extracts used can advantageously be obtained from the Lungs, heart, kidney, or body fluids such as lymph, CSF, blood or urine.

Die oben beschriebenen Liganden können durch ein Verfahren zum Testen von Substanzen auf ihre Eigenschaft als Ligand für das Protein gemäß Anspruch 1 zu fungieren, isoliert werden, das folgende Schritte umfaßt:
The ligands described above can be isolated by a method of testing substances for their ability to act as ligands for the protein according to claim 1, comprising the steps of:

a) recombinant expression of the protein according to claim 1, wherein the protein is provided with an anchor or marker which attachment to a carrier or recognition or Attachment to a support and recognition of the protein enables
b) attachment of the proteins mentioned in (a) to the support,
c) Incubation of the carrier-bound proteins with natural Protein extracts or synthetic peptide libraries,
d) Isolation and identification of the specifically bound Components.

Die Proteinextrakte (c) stammen dabei vorteilhafterweise aus der Lunge, dem Herz oder der Niere.The protein extracts (c) advantageously come from the Lungs, heart or kidney.

Die erfindungsgemäße Nukleinsäuresequenz und das von ihr kodierte Protein können zur Entwicklung von Reagenzien, Agonisten und Antagonisten, zur Diagnose und Therapie von chronischen und akuten Erkrankungen, die mit der Expression der erfindungsgemäßen Proteinsequenz bevorzugt mit der erhöhten oder erniedrigten Expression der Sequenz assoziiert sind, eingesetzt werden. Die entwickelten Reagenzien, Agonisten und/oder Antagonisten können anschließend zur Herstellung von pharmazeutischen Zubereitungen zur Behandlung oder Diagnose von Krankheiten verwendet. Dabei kann es sich um Erkrankungen des Immunsystems, des knochenbilden den Systems, des Herz/Kreislaufsystems, des zentralen und peri pheren Nervensystems, Tumoren, Transplantationsinkompatibili täten, Asthma, rheumatoide Arthritis, handeln.The nucleic acid sequence according to the invention and the one encoded by it Protein can be used to develop reagents, agonists and Antagonists, for the diagnosis and therapy of chronic and acute diseases associated with the expression of the invention Protein sequence preferred with the increased or decreased Expression associated with the sequence can be used. The developed reagents, agonists and / or antagonists subsequently for the production of pharmaceutical preparations used to treat or diagnose diseases. Here can be diseases of the immune system, the bone formation the system, the cardiovascular system, the central and peri peripheral nervous system, tumors, transplant incompatibilities acts, asthma, rheumatoid arthritis, act.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist Verfahren zum qualita tiven und quantitativen Nachweis einer Nukleinsäure nach Anspruch 2 in einer biologischen Probe, das folgende Schritte umfaßt:
The invention further provides a method for the qualitative and quantitative detection of a nucleic acid according to claim 2 in a biological sample, which comprises the following steps:

a) Incubation of a biological sample with a known amount of nucleic acid according to claim 2 or a known amount on oligonucleotides that act as primers for amplification the nucleic acid according to claim 2 are suitable,
b) Detection of the nucleic acid according to claim 2 by specific Hybridization or PCR amplification,
c) Comparison of the amount of hybridizing nucleic acid according to Claim 2 or obtained by PCR amplification Nucleic acid according to claim 2 with a standard.

Weiterhin umfaßt die Erfindung ein Verfahren zum qualitativen und quantitativen Nachweis eines Proteins gemäß Anspruch 1 in einer biologischen Probe, das folgende Schritte umfaßt:
The invention further comprises a method for the qualitative and quantitative detection of a protein according to claim 1 in a biological sample, which comprises the following steps:

a) incubation of a biological sample with an antibody that is specifically directed against the protein according to claim 1,
b) detection of the antibody / antigen complex,
c) Comparison of the amounts of the antibody / antigen complex with one standard.

Als Standard können biologische Proben wie Gewebestücke, Serum oder Blut dienen, die von gesunden Probanden entnommen wurden.As a standard, biological samples such as pieces of tissue, serum or blood taken from healthy subjects.

example 1 Cloning of the receptor cDNA

Bei der Sequenzanalyse von cDNA-Klonen einer cDNA-Bibliothek aus menschlicher Lunge wurde die vorliegende cDNA-Sequenz gefunden.Sequence analysis of cDNA clones from a cDNA library The present cDNA sequence was found in human lung.

Die Sequenz dieses Klones ist in SEQ ID NO: 1 beschrieben.The sequence of this clone is described in SEQ ID NO: 1.

Example 2

Expression des neuen Rezeptors in menschlichen Geweben Die Expression des neuen Rezeptors wurde in 50 verschiedenen menschlichen Geweben mittels RNA-Dotblot-Analyse untersucht. Ein Blot der Firma Clontech (#7770-1) wurde dazu mit einer Rezeptor-Probe hybridisiert. Die Probe wurde durch in vitro Transkription der entsprechenden cDNA in Anwesenheit Digoxigenin-markierter Nukleotide hergestellt. Nach stringenter Waschung wurde das Transkript hauptsächlich in Lunge, Herz und Niere nachgewiesen. Expression of the new receptor in human tissues The expression of the new receptor was expressed in 50 different human tissues using RNA dot blot analysis. A Blot from Clontech (# 7770-1) was used with a receptor sample hybridizes. The sample was obtained by in vitro transcription the corresponding cDNA in the presence of digoxigenin-labeled Nucleotides produced. After a stringent wash it was Transcript mainly detected in the lungs, heart and kidneys.

SEQUENZPROTOKOLL SEQUENCE LOG

Claims

1. Isolated protein containing those in SEQ ID NO: 2 provided amino acid sequence or one of them by Substi tution, inversion, insertion or deletion of one or sequence available from several amino acid residues, wherein at least one of the essential biological properties Obtained properties of the protein shown in SEQ ID NO: 2 remains.

2. Nucleic acid sequence coding for a protein after Claim 1.

3. Nucleic acid sequence according to claim 2, characterized in that that it codes for a protein that is at least 60% Identity with the sequence shown in SEQ ID NO: 2.

4. Nucleic acid sequence according to claim 3, characterized in that that it contains the sequence shown in SEQ ID NO: 1.

5. Recombinant nucleic acid construct containing a nucleotide acid sequence according to claim 2 functionally linked to at least one genetic regulatory element.

6. Host organism transformed with a nucleic acid sequence according to claim 2.

7. Host organism transformed with a recombinant Nucleic acid construct according to claim 5.

8. Transgenic animals containing a functional or not Functional nucleic acid construct according to claim 5.

9. Use of a protein according to claim 1 as an antigen for Generation of specific antibodies.

10. Antibodies that specifically comprise the protein of claim 1 detect.

11. Use of a nucleic acid sequence according to claim 2 for Gene therapy.

12. Use of a complement to the sequence according to claim 2 tary nucleic acid sequence for gene therapy.

13. Method of identifying antagonists, agonists or ligands for the protein of claim 1 by Cells which express the protein according to claim 1 with a large number of substances to be examined (test substances) brings together, and then the biological activity of the protein in the presence and absence of the test substance ver equal.

14. A method of testing substances for their ability to act as a ligand, agonist or antagonist for the protein according to claim 1, comprising the following steps:

a) recombinant expression of the protein according to claim 1, wherein the protein is provided with an anchor or marker which enables the attachment to a support or the recognition or attachment to a support and the recognition of the protein,
b) attachment of the proteins mentioned in (a) to the support,
c) incubation of the carrier-bound proteins with natural protein extracts, synthetic peptide libraries or non-proteinogenic substances,
d) Isolation and identification of the specifically bound components.

15. A method for testing substances according to claim 14, characterized in that the protein extract (c) from the Lungs, heart, kidney, or body fluids.

16. A method for the qualitative and quantitative detection of a nucleic acid according to claim 2 in a biological sample, comprising the following steps:

a) incubation of a biological sample with a known amount of nucleic acid according to claim 2 or a known amount of oligonucleotides which are suitable as primers for an amplification of the nucleic acid according to claim 2,
b) detection of the nucleic acid according to claim 2 by specific hybridization or PCR amplification,
c) Comparison of the amount of hybridizing nucleic acid according to claim 2 or of nucleic acid obtained by PCR amplification according to claim 2 with a standard.

17. A method for the qualitative and quantitative detection of a protein according to claim 1 in a biological sample, comprising the following steps:

a) incubation of a biological sample with an antibody which is specifically directed against the protein according to claim 1,
b) detection of the antibody / antigen complex,
c) Comparison of the amounts of the antibody / antigen complex with a standard.