DD272034A5

DD272034A5 - METHOD FOR PRODUCING A PRAEPARATION FOR REGULATING TISSUE GROWTH

Info

Publication number: DD272034A5
Application number: DD86295099A
Authority: DD
Inventors: Neil G C Hendry
Original assignee: Hendry,Neil Geddes Clarkson,Gb
Priority date: 1985-10-08
Filing date: 1986-10-08
Publication date: 1989-09-27
Also published as: AU606038B2; IN168295B; WO1987002244A1; CS265224B2; CS729286A2; EP0239607A1; ZA867664B; JPS63501077A; CA1289885C; GB8524807D0; AU6409486A

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer Praeparation zur Regulierung des Gewebewachstums. Dabei wird eine Loesung hergestellt aus a) wengistens einem N-Acetyl-D-gycosamin oder einem Oligomeren davon oder einem diacetylierten Derivat davon oder einem Substitutionsprodukt einer dieser Verbindungen, b) wenigstens einem Biotin oder einem Analogen davon oder einem Biotinderivat oder einem biologisch aktiven Rest davon und c) einem divalenten Metallkation einschliesslich eines pharmazeutisch geeigneten Anions, diese Loesung bei erhoehter Temperatur fuer eine laengere Zeit gehalten anschliessend gefriergetrocknet wird.The invention relates to a method for producing a preparation for regulating tissue growth. In this case, a solution is prepared from a) at least one N-acetyl-D-glycosamine or an oligomer thereof or a diacetylated derivative thereof or a substitution product of one of these compounds, b) at least one biotin or an analog thereof or a biotin derivative or a biologically active radical and c) a divalent metal cation including a pharmaceutically acceptable anion, this solution is kept at elevated temperature for a long time then freeze-dried.

Description

Field of application of the invention

Diese Erfindung bezieht sich auf eine Zusammensetzung zur Regulierung des Gewebewachstums in Menschen oder Tieren. Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen werden angewandt von verlangsamter Heilung, von Zell-Malignität oder zur Behandlung von verletztem oder entzündetem Gewebe.This invention relates to a composition for regulating tissue growth in humans or animals. The compositions of the present invention are used for slowing healing, cell malignancy or for treating injured or inflamed tissue.

Characteristic of the known state of the art

Bisher wurde sehr viel Arbeit bei der Regulation dos Gewebewachstums in Pflanzen geleistet; davon ist jedoch nichts auf tierisches Gewebe übertragbar. Untersuchungen über die Voraussetzungen zum Wachstum von Zellen tierischen Ursprungs (einschließlich menschlicher Zellen) wurden prinzipiell an Gewabekulturen durchgeführt, d.h. durch eine Technik, die die Untersuchung von Zellen, die isoliert unter Laborbedingungen gezüchtet wurden, erleichtert. Es wurden viele .Wachstumsfaktoren" verwendet, um die Vermehrung von Zellen zu fördern, wobei üblicherweise Extrakte relativ unsauberer Provenienz verwendet werden, die aus ganzen Organen, z. B. der Speicheldrüse von Mäusen oder der Leber von Ratten, erhalten wurden. Derartige Wachstumsfaktoren können beim lebenden Menschen oder bei lebenden Tieren nicht systemisch angewandt werden. So wurde z. B. vermutet, daß Riboflavin ein Wachstumsfaktor für Ratten ist, daß Liponsäure als Wachstumsfaktor fürSo far much work has been done on the regulation of tissue growth in plants; however, nothing is transferable to animal tissue. Studies on the conditions for growth of cells of animal origin (including human cells) have been carried out principally on tissue cultures, i. by a technique that facilitates the study of cells grown in isolation under laboratory conditions. Many "growth factors" have been used to promote the proliferation of cells, typically using extracts of relatively poor provenance obtained from whole organs, eg, the mouse glandular gland or rat liver For example, it has been suggested that riboflavin is a growth factor for rats, that lipoic acid is considered to be a growth factor for human beings or in live animals

bestimmte Mikroorganismen wirkt und das Biotin ein Wachstumsfaktor für Hefe und bestimmte Bakterien ist. Glycidyl-histidyllysin und das Wachstumshormon der Hypophyse sind zwei chemisch charakterisierte, reine Stoffe, die einen Einfluß auf das Wachstum a jfweisen, der erste Stoff in Kulturen isolierter Leberzellen, der zweite in Bezug auf das Körperwachstum als ganzes. Bisher ist nicht beschrieben worden, daß irgendeiner dieser „Wachstumsfaktoren" eine Bedeutung bei der Geweberegeneration hätte, und sie sind auch weit entfernt von den Zusammensetzungen, die hierin im folgenden beschrieben werden. Es ist bekannt, daß bei Patienten mit Unterernährung die systematische Behandlung mit Aminosäuren hinsichtlich der Unterstützung der Heilung von Wunden von Wert ist, jedoch nur im Falle von bestehenden Aminosäuredefiziten wirksam ist. Physikalische oder physiko-chemische Techniken, z. B. die Verwendung magnetischer Felder oder pulsierender alektrischer Ströme zur lokalen Stimulierung einer Wunde sind gegenwärtig im Gespräch.Certain microorganisms act and biotin is a growth factor for yeast and certain bacteria. Glycidyl histidyl lysine and the growth hormone of the pituitary gland are two chemically characterized pure substances that have an effect on growth, the first in cultures of isolated liver cells, the second in terms of body growth as a whole. Heretofore, it has not been described that any of these "growth factors" would be of importance in tissue regeneration, and they are also far from the compositions described hereinbelow It is known that in patients with malnutrition systematic treatment with amino acids is of value in assisting the healing of wounds, but is effective only in the case of existing amino acid deficiencies Physical or physico-chemical techniques, such as the use of magnetic fields or pulsatile alektric currents to locally stimulate a wound, are currently under discussion.

Die Inhibierung kranker oder bösartiger Zellen durch chemische Mittel ist gegenwärtig übliche Praxis und ist dann wirksam, wenn es ein günstiges Verhältnis der Aufnahmefähigkeit zwischen den bösartigen Zellen des Tumors und den normalen Zellen des Wirt 03 gibt. Da es gegenwärtig keine selektiverwirkenden Kontrollmittel gibt, werden dies« cytotoxisclien Stoffe weitgehend angewendet; ihre Toxizität und folglich die hohe Wahrscheinlichkeit von Nebenwirkungen machen es erforderlich, daß verbesserte Verfahren der physiologischen odor chemischen Kontrolle entwickelt werden. Kertison und seine Derivate sind in Bezug auf die Kontrolle der Bildung überschüssigen Fasergewebes, wie es z. B. bei einigen Arten von Verletzungen, in vielen Fällen von Verbrennungen und nach einigen entzündlichen Erkrankungen der Gelenke auftritt, wirksam. Die Verwendung von Kortison beinhaltet jedoch ein beträchtliches Risiko hinsichtlich möglicher Nebenwirkungen. Frühere Arbeiten des Autors dieser Erfindung (Nature 199,4991; 392,1963) zeigten, daß die Höhe der Aktivität des Enzyms N-Acetyl-D-glucosaminidase in engem Zusammenhang damit steht, was man als die „Reaktivität" einer Vielzahl von Krankheitsvorgängen bezeichnen kann. Diese Beziehung war in einer solchen Vielzahl von Umständen festgestellt worden, daß eine wesentlichere Bedeutung für N-Acetyl-D-glucosamin (NAG) und vielleicht für andere N-Acetyl-D-glucosamine erwartet werden könnte, als bisher dafür bekannt war. Der N-Acetyl-D-glucosaminrest (2-Acetamido-2-deoxy-D-glucose) ist in der Natur in gebundener Form weit verbreitet. Das gleiche gilt für D-Galactosamin.The inhibition of diseased or malignant cells by chemical means is presently the common practice and is effective when there is a favorable ratio of uptake between the malignant cells of the tumor and the normal cells of the host 03. Since there are currently no selective control agents, cytotoxic substances are widely used; their toxicity, and hence the high likelihood of side effects, require that improved methods of physiological or chemical control be developed. Kertison and its derivatives are in terms of controlling the formation of excess fiber tissue, as it is known e.g. B. in some types of injuries, in many cases of burns and after some inflammatory diseases of the joints occurs effective. However, the use of cortisone involves a considerable risk of possible side effects. Previous work by the author of this invention (Nature, 199, 4991, 392, 1963) showed that the level of activity of the enzyme N-acetyl-D-glucosaminidase is closely related to what is termed the "reactivity" of a variety of disease processes This relationship has been established in such a variety of circumstances that a more substantial significance for N-acetyl-D-glucosamine (NAG) and perhaps for other N-acetyl-D-glucosamine could be expected than previously known. The N-acetyl-D-glucosamine residue (2-acetamido-2-deoxy-D-glucose) is widely used in nature in its bound form, as is D-galactosamine.

In dem Werk ,Processes in Pathology" (M. J.Taussig), das 1979 von der Blackwell Scientific Publications herausgegeben wurde, wircfauf den Seiten 267-270, in einer Diskussion, die im wesentlichen auf die Aktivität von Lectinen gerichtet ist, in einer Untersuchung des Zellwachstums auf NAG Bezug genommen. Es werden Untersuchungen, die sich auf die Verwendung von NAG beziehen, erwähnt. In einem davon wird NAG in Form seines Dimeren, Di-N-acetylchitobiose, das an einen Protein-Träger gebunden ist, in einem Versuch verwendet, Mäuse gegen die lethale Wirkung eines transplantierten Tumors zu präimmunisieren, jedoch mit begrenztem Erfolg. In einem anderen Versuch zur Inhibierung des Wachstums von Tumorzellen durch Behandlung mit monovalenten Lectinen, um damit die an der Oberfläche befindlichen Agglutinationsstellen (NAG-Reste) abzusättigen, erwies sich dieses Verfahren durch die Zugabe überschüssigen, freiem NAG's als reversibel. Andere Forscher waren ebenfalls aktiv auf diesem Gebiet, z. B. in den frühen 60iger Jahren Lewy und seine Mitarbeiter am Rowett Research Institute, die zeigen konnten, daß die Umwandlung eines Glycoside in ein Lacton, wobei das Glycosid das Substrat für eine Glycosidase bildete, die beteiligte Glycosidace spezifisch inhibieren kann. Leider waren diese Lactone nur unter streng kontrollierten Laborbedingungen stabil. Versuche zu ihrer therapeutischen Verwendung wurden daher nicht durchgeführt. Der Erfinder gelangte zu dieser Erfindung bei der Durchführung von Forschungen über die Möglichkeit, daß N-Acetyl-D-glycosamine und ihre Oligomeren und Derivate beider Klassen von Verbindungen eine wichtige und bisher unbekannte Rolle in der Heilung und bei Regenerationsprozessen sowie bei der Fortpflanzung und beim Angriff bösartiger Zellen spielen könnten. Das Konzept der Inhibierung von N-Acetyl-D-glyoosamidasen und von N-Acetyl-D-giycosamidase im besonderen unter physiologischen Bedingungen, eröffnet neue Möglichkeiten sowohl für die Regulierung der Heilung und der Regeneration als auch für die Bekämpfung krebsartigen Wachstums.In the work, Processes in Pathology "(MJ Thaussig), published in 1979 by Blackwell Scientific Publications, on pages 267-270, in a discussion that is essentially directed to the activity of lectins, in a study of cell growth NAG is mentioned, in one of which NAG in the form of its dimer, di-N-acetylchitobiose, bound to a protein carrier is used in an experiment However, with limited success, mice were preimmunized against the lethal effect of a transplanted tumor In another attempt to inhibit the growth of tumor cells by treatment with monovalent lectins to saturate the surface agglutination sites (NAG residues), this proved to be Methods by adding excess, free NAGs as reversible.other researchers were also active in this field For example, in the early 1960's, Lewy and his coworkers at the Rowett Research Institute were able to demonstrate that the conversion of a glycoside into a lactone, where the glycoside formed the substrate for a glycosidase, can specifically inhibit the glycosidace involved. Unfortunately, these lactones were stable only under strictly controlled laboratory conditions. Attempts to their therapeutic use were therefore not performed. The inventor arrived at this invention in carrying out research on the possibility that N-acetyl-D-glycosamines and their oligomers and derivatives of both classes of compounds have an important and hitherto unknown role in healing and regeneration processes as well as in reproduction and in the Attacking malignant cells could play. The concept of inhibiting N-acetyl-D-glycosamidase and N-acetyl-D-giycosamidase in particular under physiological conditions opens up new opportunities for both the regulation of healing and regeneration and the control of cancerous growth.

Object of the invention

Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung einer Zusammensetzung, die geeignet ist zur Regulierung des Gewebewachstums bei Menschen oder Tieren und die angewandt werden kann zur Behandlung von verletztem oder entzündetem Gewebe, insbesondere bei verlangsamter Heilung oder von Zell-Malignität.The aim of the invention is to provide a composition which is suitable for regulating tissue growth in humans or animals and which can be used for the treatment of injured or inflamed tissue, in particular in case of slow healing or of cell malignancy.

Explanation of the essence of the invention

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine physiologisch aktive Zusammensetzung zur Verfügung zu stellen, bei der wenigstens eine Komponente das Wachstum sowohl normalen als auch anormalen Gewebes fördert, während eine oder mehrere andere Komponenten dieses Wachstum hemmenThe object of the invention is to provide a physiologically active composition in which at least one component promotes the growth of both normal and abnormal tissue, while one or more other components inhibit this growth

Erfindungsgemäß wird eine Zusammensetzung zur Regulation des Gewebewachstums zur Verfügung gestellt, die besteht aus According to the invention, a composition for the regulation of the tissue growth is provided which consists of

a) wenigstens einem N-Acetyl-D-glycosamin oder einem Oligomeren davon oder einem deacetylierten Derivat davon oder einem substituierten Produkt dieser Verbindungen, vorzugsweise mita) at least one N-acetyl-D-glycosamine or an oligomer thereof or a deacetylated derivative thereof or a substituted product of these compounds, preferably with

b) wenigstens einem Biotin oder einem Analogen von Biotin oder einem Derivat von Biotin oder einem biologisch aktiven Rest davonb) at least one biotin or an analog of biotin or a derivative of biotin or a biologically active residue thereof

c) einem divalenten Metallkation, z. B. Mg, Ca oder Mn zusammen mit einem pharmazeutisch geeigneten Anion.c) a divalent metal cation, e.g. As Mg, Ca or Mn together with a pharmaceutically suitable anion.

Die Komponente a) der Zusammensetzung dies ar Erfindung ist vorzugsweise N-Acetyl-D-glycosamin oder seine Oligomeren oder seine vollständig oder teilweise entacetylierten Derivate.Component a) of the composition of this invention is preferably N-acetyl-D-glycosamine or its oligomers or its fully or partially deacetylated derivatives.

Vorzugsweis3 wird die Zusammensetzung in Form einer wäßrigen Lösung hergestellt, die N-Acetyl-D-glycosamin, Biotin und ein divalentes Kation, z. B. Mg²*, enthält. Diese Lösung kann auch Puffersalze enthalten. Als Lösung ist diese Zusammensetzung zur parenteralen oder oralen Verabreichung geeignet.Preferably, the composition is prepared in the form of an aqueous solution containing N-acetyl-D-glycosamine, biotin and a divalent cation, e.g. B. Mg ² * contains. This solution may also contain buffer salts. As a solution, this composition is suitable for parenteral or oral administration.

-3- L72 034-3- L72 034

Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann auch in fester Form zur oralen oder rectalen Verabreichung hergestellt werden und dabei als Tablette, Pastille oder Zäpfchen formuliert werden. Andererseits ist es auch möglich, damit ein Pulver herzustellen, das eingenommen werden kann, oder eine verkapselte Lösung oder Emulsion für die orale Verabreichung zu rezeptieren. Weiterhin ist die nachfolgende Formulierung und Verabreichung in Form einer Injektionslösung möglich. Außerdem kann die erfindungsgemäße Zusammensetzung als Salbe mit einer neutralen Salbengrundlage zur Anwendung auf der Oberfläche des Körpers rezeptiert werdenThe composition of the invention may also be prepared in solid form for oral or rectal administration and thereby formulated as a tablet, troche or suppository. On the other hand, it is also possible to prepare a powder which can be taken or to formulate an encapsulated solution or emulsion for oral administration. Furthermore, the following formulation and administration in the form of an injection solution is possible. In addition, the composition of the invention may be formulated as an ointment with a neutral ointment base for application to the surface of the body

Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen führen The compositions of the invention lead

a) zu einer Verstärkung des normalen Gewebewachstums, um die normalen Reparaturfunktionen zu beschleunigen, unda) to increase normal tissue growth to accelerate normal repair functions, and

b) zu einer Unterdrückung unerwünschten Gewebewachstums, entweder gutartig, wie in der Fibrosis, die mit der übermäßigen Gewebebildung bei Narben verbunden ist, oder bösartig, wie uei krebsartigen oder anderen, krankhaften Veränderungen.b) suppression of undesired tissue growth, either benign, as in fibrosis, associated with excessive tissue formation of scars, or malignant, such as cancerous or other, pathological changes.

Das Verfahren zur Herstellung der Zusammensetzung beeinflußt deren Eigenschaften. Zum Beispiel können Gemische dadurch aktiviert werden, daß sie unterschiedlichen Zeiträumen oder Bedingungen des Erwärmens, der Trocknung oder teilweisen Trocknung unterworfen werden, wodurch zwischenzeitlich kristalline oder assoziierte, unlösliche Stoffe mit anderen Stoffen, die in Lösung oder in einer sirupösen Form verbleiben, hergestellt werden. Diese Stoffe, die einerseits Biotin in gefällter Form begleiten, oder jene Stoffe, die in Lösung verbleiben nach einer solchen Fällung und die andererseits in sirupöser oder gotrockneter Form isoliert werden, weisen andere biologische Aktivitäten auf, wie sie hierin im folgenden beschrieben werden. Die biologische Aktivität kann auch dadurch erhalten werden, daß die Konzentration an Biotin und die Zeiträume der Erwärmung und der Trocknung oder teilwGisen Trocknung so angosetzt werden, daß die oben beschriebene Fällung vermieden wird. Die Aktivität steht dann mit dem Material in Verbindung, das entweder in Lösung verbleibt oder in sirupöser oder trockener Form davon hergestellt wird. Diese verschiedenen Materialformen beeinflussen die Aktivität der N-Acetyl-D-glucosaminidase und ihrer zwei hauptsächlichen Isoenzyme A und B. In Abhängigkeit von dem genauen Verfahren zur Herstellung können die Stoffe das gesamte Enzym odo: seine Isoenzyme A und B isoliert oder zusammen verstärken oder inhibieren. Dabei kann die Inhibierung kon^urrio·. end oder nicht konkurrierend eingestellt werden. Damit wird deutlich, daß das Herstellungsverfahren die integrale Höhe der Cnzymaktivität von N-Acetyl-D-olucosaminldase im Körper beeinflussen kann. Außerdem kann das Verhältnis der Wirkungen der beiden hauptsächlichen l*oenryme A und B verändert werden. In dieser Hinsicht scheint die Zusammensetzung die Reaktionen des Körpers auf viele Krankheitsvorgärige, z. B. in seiner Antwort auf die Abstoßung fremden Gewebes, bei Entzündungen und auch bei bösartigen Gewächsen, nachzuahmen.The process for preparing the composition affects its properties. For example, mixtures may be activated by being subjected to different periods or conditions of heating, drying or partial drying, thereby producing, in the meantime, crystalline or associated insoluble matters with other materials remaining in solution or syrupy form. These substances, which on the one hand accompany biotin in precipitated form, or those which remain in solution after such precipitation and on the other hand are isolated in syrupy or dried form, have other biological activities as described hereinafter. The biological activity can also be obtained by adjusting the concentration of biotin and the periods of heating and drying or partially drying to avoid precipitation as described above. The activity is then associated with the material which either remains in solution or is prepared in syrupy or dry form thereof. These various forms of material affect the activity of N-acetyl-D-glucosaminidase and its two major isoenzymes A and B. Depending on the precise method of preparation, the substances may isolate or inhibit all or both of the enzyme: its isoenzymes A and B. , In this case, the inhibition may occur. be stopped or not competing. Thus, it is clear that the method of preparation can affect the integral level of enzyme activity of N-acetyl-D-olucosamine dlase in the body. In addition, the ratio of the effects of the two main enzymes A and B can be changed. In this regard, the composition appears to affect the body's responses to many progenitors, e.g. B. in its response to the rejection of foreign tissue, in inflammation and even in malignant plants mimic.

Um das erfindungsgemäße Verfahren besser verständlich zu machen, wird es hierin weiter in Bezug ?.uf ein Glycosamin, nämlich N-Acetyl-D-glucosamin, beschrieben, jedoch wird durch den Fachmann akzeptiert werden, daß dar, Verfahren zur Herstellung auf analoge Verbindungen übertragbar ist, wobei die erhaltenen biologischen Wirkungen in Abhängigkeit davon unterschiedlich sein werden, welches Enzym oder Zellsystem untersucht oder therapiert.To better understand the method of the invention, it will be further described herein with respect to a glycosamine, namely N-acetyl-D-glucosamine, but it will be appreciated by those skilled in the art that methods of preparation are applicable to analogous compounds wherein the biological effects obtained will vary depending on which enzyme or cell system is being studied or treated.

Es konnte gezeigt werden, daß N-Acetyl-D-glucosamin selbst einen stimulierenden Einfluß auf die Abwehreellen des Körpers dusübt und es wird angenommen, daß die erfindungsgemäße Zusammensetzung ein neues und selektiv wirkendes Mittel zur Einflußnahme auf das Immunsystem des Körpers zur Verfügung stellt. Die aktiven Bestandteile können über den Mund oder durch Injektion verabreicht werden, entweder ailein oder in geeigneten physiologischen Flüssigkeiten oder Feststoffen odor in irgendwelchen pharmazeutisch geeigneten Objekten, Trägermittel oder Hilfsstoffen. Während nicht der Wunsch besteht, an eine bestimmte Theorie gebunden zu sein, kann die Rolle dor aktiven Bestandteile darin bestehen, die aktiven Stellen in Enzymen, die am Gewebe- oder Zellenwachstum beteiligt sind, selektiv zu blockieren oder deblockieren. Sie können fin Stellen auf dar Oberfläche von Zellen wirksam werden, die für solche Funktionen wie Zellspezifität, für den Transport von Nährstoffen oder Hormonen verantwortlich sind. Es ist bekannt, daß derartige Orte in cancerogsnen Zellen abnormal funktionieren und daß diese auch bei viralen oder anderen möglichen Infekten beeinflußt werdenIt has been shown that N-acetyl-D-glucosamine itself has a stimulating effect on the body's defenses and it is believed that the composition of the invention provides a novel and selective means of influencing the body's immune system. The active ingredients may be administered by mouth or by injection, either alone or in suitable physiological fluids or solids, or in any pharmaceutically acceptable object, carrier or excipient. While not wishing to be bound by any particular theory, the role of the active ingredients may be to selectively block or deblock the active sites in enzymes involved in tissue or cell growth. They can take effect on the surface of cells responsible for such functions as cell specificity, the transport of nutrients or hormones. It is known that such sites function abnormally in cancerous cells and that they are also affected by viral or other potential infections

Folglich findet das erfindungsgemäße Verfahren Anwendung bei Consequently, the method according to the invention finds application

a) der Bekämpfung der Vermehrung, des Wachstums und der Wucherung bösartiger Zellen;(a) combating the proliferation, growth and proliferation of malignant cells;

b) der Regulation der Aktivitätshöhe von Zellen, die an der Regeneration von Gewebe nach Verletzung oder Entzündung beteiligt sind, mit dem Ziel der Heilung, während gleichzeitig Bestrebungen eines Aspekts der Heilung, einen anderen auszuschließen, kontrolliert werden, z. B. die Überproduktion von Kollagen durch Fibroblasten führt zu übergroßer Wundrandbildung, was anschließend durch kosmetische oder funktionell Operationen behoben werden muß; undb) the regulation of the level of activity of cells involved in the regeneration of tissue after injury or inflammation for the purpose of healing, while at the same time controlling aspirations of one aspect of the healing to exclude another, e.g. For example, the overproduction of collagen by fibroblasts leads to oversized wound edge formation, which must then be remedied by cosmetic or functional surgery; and

c) der Stimulierung der Heilung in Fällen, in denen sie verlangsamt abläuft, z. B. bei älteren Patienten oder bei den Patienten, die sehr schwach durch Infektionen erkrankt waren.c) the stimulation of healing in cases where it is slowed down, eg. In elderly patients or in patients who were very ill with infections.

embodiment

Die Erfindung wird nun weiter beschrieben werden durch die nachfolgenden Beispiele und Daten, die bevorzugte Verfahren zur Herstellung darstellen und die biologischen Wirkungen beschreiben, die bei Verwendung der erifindungsgemäßen Präparationen beobachtet we: den.The invention will now be further described by the following examples and data which illustrate preferred methods of preparation and describe the biological effects observed when using the preparations of the present invention.

Examples

Beispiel 1: Verfahren zur Herstellung von a) einer Präparation zu/ Verwendung bei der Stimulierung und Hellung und b) einer Präparation zur Bekämpfung von bösartigen ZellenExample 1: Process for the preparation of a) a preparation for / use in stimulation and bleaching and b) a preparation for combating malignant cells

a) Es werden 3,23g N-Acetyl-D-glucosamin, 200mg Biotin, 375mg Kallumdihydrogenphosphat und 1,8g Magnesiumsulfat in Wasser gelöst, so daß ein Endvolumen von 100ml erhalten wird. Diese Lösung wird 72 Stunden bei 55⁰C in einem geschlossenen Behälter gehalten. Der Iniiali des Behälters wird dann abgekühlt und gerade oberhalb des Gefrierpunktes gehalten. Während der folgenden 24 Stunden scheidet sich ein im wesentlichen kristalliner Niederschlag ab. Dieser wird durch Zentrifugieren abgetrennt. Der feste Niederschlag wird mit Wasser (oder Ethanol) gewaschen. Dieser Feststoff wies keine signifikante hemmende Aktivität auf N-Acetyl-D-glucosaminidase auf, hatte jedoch im Gegonsatz dazu eine kräftig verstärkende Wirkung auf ihr B-Isoenzym. Der Feststoff war im Wasser unlöslich, aber löslich in Lipiden. Nach der Behandlung von Patienten mit diesem Feststoff an Orten, an denen die Heilung verzögert erfolgte, wurdo eine schnelle Regeneration von Hautzellen beobachtet. Folglich wird durch vorhergehend beschriebene Stufen ein Mittel .iu: Verfügung ^stellt, daß die Heilung stimuliert.a) 3.23 g of N-acetyl-D-glucosamine, 200 mg of biotin, 375 mg of potassium dihydrogen phosphate and 1.8 g of magnesium sulfate are dissolved in water, so that a final volume of 100 ml is obtained. This solution is kept for 72 hours at 55 ⁰ C in a closed container. The Iniiali of the container is then cooled and kept just above the freezing point. During the following 24 hours, a substantially crystalline precipitate separates out. This is separated by centrifugation. The solid precipitate is washed with water (or ethanol). This solid had no significant inhibitory activity on N-acetyl-D-glucosaminidase but, in contrast, had a potent enhancing effect on its B-isoenzyme. The solid was insoluble in water but soluble in lipids. After treating patients with this solid at sites of delayed healing, rapid regeneration of skin cells was observed. Consequently, by previously described steps, a means is provided which stimulates healing.

b) Der Überstand, der nach der Abtrennung des festen Stoffes, wie es oben beschrieben worden ist, zurückbleibt, wurde wieder in einen geschlossenen Behälter überführt und inkubiert. Danach wurde er gefriergetrocknet. Das so erhaltene Material wies eine spezifische, nicht-konkurrierende Inhibition sowohl des A- als auch des B-Isoenzyms vcn N-Acetyl-D-glucosamiiiidase auf. Wenn dieser Stoff zu Gewebekulturen bösartiger Zeilen, z. B. von Landschutz-Zellen oder H jla-Zellen, zugegeben wird, wurde dadurch eine Reihe von dosierungsabhängigen Wirkungen erzielt, unter anderem die Zerstörung des normalen, anti-adhesiven Mechanismus der Zellen und die Inhibierung von deren Wachstum. Eine derartige Behandlung führte auch zu einer Zerstörung der Zellen und zur Erzeugung vieler, nicht lebensfähiger subzel!¹ lärer Fragmente. Wenn diese Präparation Patienten mit terminaler Malignitat verabreicht wird, bekämpft sie die Wucherung des bösartigen Prozesses und erhöht die Überlebenschance ohne andere Therapie über die Prognose hinaus, die für die Anwenc'upg üblicher Methoden gegeben worden war.b) The supernatant remaining after separation of the solid as described above was returned to a closed container and incubated. After that he was freeze-dried. The resulting material exhibited specific, non-competitive inhibition of both the A and B isoenzyme of N-acetyl-D-glucosamine amidase. When this substance is added to tissue cultures of malignant cells, e.g. Of land-protection cells or hjla cells, a number of dosage-dependent effects have been achieved thereby, including the destruction of the normal, anti-adhesive mechanism of the cells and the inhibition of their growth. Such treatment also resulted in cell destruction and the generation of many, non-viable subzel! ¹ laryng fragments. When administered to patients with terminal malignancy, it combats the proliferation of the malignant process and increases the chances of survival without any other therapy beyond the prognosis given for the use of common methods.

Beispiel 2: Verfahren zur Herstellung alner Präparation zur Regulierung der Höhe der Aktivität von Zellen bei der Regeneration von Gewebe noch einer Verletzung oder EntzündungExample 2: A method for preparing any preparation for regulating the level of activity of cells in the regeneration of tissue nor injury or inflammation

Es wurden 3,2g N-Acetyl-ü-glucosamin, 10mg Biotin, 375mp Kaliumdihydrogenphosphat und 1,8g Magnesiumsulfat derart in Wasser gelöst, daß 100 ml einer Lösung bereitgestellt wurdan, die in einen geschlossenen Behälter gegeben wurden und bei einer Temperatur von 70 bis 80⁰C 72 Stunden lang verblioben. Die so erhaltene Lösung wurde abgekühlt und gefriergetrocknet. Das so erhaltene Material wies eine nicht-konkurrieren Je spezifische Inhibierung des Isoenzyms A der N-Acetyl-D-glucosaminidase und einen unterschiedlichen Grad p.n konkurrierender Aktiviiri in Bezug auf die Inhibierung ausschließlich des Isoenzyms B auf. Die Zugabe dieses Materials zu Fibroblast-Kulturen führte zu 6^!ner dosisabhängigen Inhibierung der Vermehrung der Fibroblasten von etwa 50%, ohne die Zellen abzutöten. Wer.ⁿ dieses Material Rennpferden mit kürzlich davongetragenen Verletzungen verabreicht wurde, führte das zu einer Verminderung der Schwellungen und erleichterte den Heilungsprozess. Bei Untersuchungen über einen längeren Therapiezeitraum wurde das Mittel bei 47 Fällen 35 Pferden, die meistens unter Verletzungen der unteren Deugemuskelsehne des Vorderfußes litten, verabreicht, eine Erkrankung, die häufig zu permanenter Invalidität führt, manchmal sogar in einem Maße, die eine Notschlachtung des Pferdes notwendig macht. Alle 35 Pferde kpnnten dem Rennbetrieb wie der zur Verfügung gestellt werden, üblicherweise in einem Gesundheitszustand wie vor der Verletzung.3.2 g of N-acetyl-glucosamine, 10 mg of biotin, 375 ml of potassium dihydrogen phosphate and 1.8 g of magnesium sulfate were dissolved in water so as to provide 100 ml of a solution placed in a closed container and at a temperature of 70 to 80 ⁰ C for 72 hours verblioben. The resulting solution was cooled and freeze-dried. The resulting material exhibited a non-compete Je specific inhibition of isoenzyme A of N-acetyl-D-glucosaminidase and a different degree of competitive competing activity with respect to inhibition of isoenzyme B alone. The addition of this material to fibroblast cultures resulted in 6 ^! a dose-dependent inhibition of the proliferation of fibroblasts of about 50%, without killing the cells. Who. ^When this material was given to racehorses with recent injuries, it reduced swelling and facilitated the healing process. In studies over a prolonged period of therapy, the remedy was administered in 47 cases to 35 horses, most of whom suffered injuries to the lower frontal deugemus tendon, a condition that often leads to permanent disability, sometimes even to the extent that necessitates emergency slaughter of the horse makes. All 35 horses could be provided as part of racing, usually in a state of health as before the injury.

Die systeme Verwendung beim Menschen kann erwartet werden, es bedarf jedoch weiterer Beweise, daß diese Präparationan nicht toxisch sind. Die äußere Anwendung der aktiven Bestandteile in einer neutralen Salbongrundlage unter der Aufsicht eines konsultierten plastischen Chirurgen hat jedoch den Beweis dafür erbracht, daß sie in der Lage sind, die Bildung übermäßigen Gewebewachstums an Wanden zu bekämpfen.The systems of use in humans can be expected, but further evidence is needed that these preparations are not toxic. However, the external application of the active ingredients in a neutral salve base under the supervision of a consulted plastic surgeon has provided evidence that they are able to combat the formation of excessive tissue growth on walls.

Claims

A process for the preparation of a preparation for use in the regulation of tissue growth, characterized in that a solution is prepared

a) at least one N-acetyl-D-glycosamine or an oligomer thereof or a deacetylated derivative thereof or a substitution product of these compounds,

b) at least one compound from the series biotin, an analogue of biotin or a derivative of the bioine or a biologically active radical and

c) a divalent metal cation including a pharmaceutically acceptable anion, this solution is kept at elevated temperature for a longer time, then the liquid is freeze-dried, whereby a reagent is obtained, which finds application in the regulation of tissue growth.

2. The method according to claim 1, characterized in that the preparation for regulating the Gewebewachstums

a) at least one N-acetyl-D-glycosamine or an oligomer thereof or a deacetylated derivative thereof,

b) at least one biotin or an analogue or a derivative of biotin or a biologically active residue thereof and

c) a divalent metal cation including a pharmaceutically acceptable anion.

3. The method according to claim 1 or 2, characterized in that the metal cation is Mg, Ca or Mn.

4. The method according to claim 1,2 or 3, characterized in that the glycosamine residue is that of D-glucosamine.

5. The method according to claim 2, characterized in that the cation is Mg ²⁺ .

6. The method according to claim 1, characterized in that prior to the freeze-drying of the solution, the method further comprises the following steps are performed: cooling the solution to a temperature just above the freezing point of the solution to cause the formation of a crystalline precipitate thereof Separation of this precipitate for use as a further active reagent in the regulation of tissue growth.

7. The method according to claim 6, characterized in that the liquid remaining after the separation of the solid precipitate is incubated for a certain time prior to freeze-drying, so that a reagent is obtained, which is used for the regulation of Gewebewachscums.

8. The method according to claim 1, characterized in that the solution is heated to a temperature in the range of 50 to 60 ⁰ C.

9. The method according to claim 1, gekonnzeichnet in that the solution is heated to a temperature in the range of 70 to 80 ⁰ C.

10. The method according to any one of claims 1 to 9, characterized in that the heated solution is held at elevated temperature for about three days.

11. The method according to claim 1, characterized in that the cooled solution is centrifuged to assist in the recovery of the crystalline precipitate contained therein.