DD246471B1 - MEDIUM FOR LUBRICATION AND LIQUID CONSERVATION OF EBERSPERMA - Google Patents

MEDIUM FOR LUBRICATION AND LIQUID CONSERVATION OF EBERSPERMA Download PDF

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Annemarie Zeuner
Karl Mudra
Friedhelm Conrad
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Vvb Tierzucht Inst Fuer Kuenst
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Description

ad 1 000ml Aqua bidest. mit Zusatz von 0,5g Streptomyzinsulfat und 500000IE Penizillin Gad 1 000ml water redist. with the addition of 0.5g streptomycin sulfate and 500000IE penicillin G

Anwendungsgebietfield of use

Die Erfindung betrifft ein wirksameres und wirtschaftlicheres Mittel zur Verdünnung und Konservierung von Ebersperma in flüssiger Form bei 15-17°C, das zur künstlichen Besamung von Sauen eingesetzt wird.The invention relates to a more effective and economical means of diluting and preserving boar semen in liquid form at 15-17 ° C, which is used for the artificial insemination of sows.

Charakteristik der bekannten LösungCharacteristic of the known solution

Für die Lagerung des Eberspermas von der Gewinnung bis zur Insemination werden die Ejakulate mit einem Verdünnungsmedium versetzt und bis auf 15°C abgekühlt und gelagert. Als Konservierungsmedien werden verschiedene Modifikationen von Glukose-Natriumzitrat-Verdünnern, wie z. B. das IVT-Medium eingesetzt. Zunehmend wird ein auf PLISKO zurückgehendes ÄDTA-haltiges Medium genutzt (Erfindungsbeschreibung SU 183901}. Bei Anwendung dieses PLISKO-Verdünners kann das Ebersperma auf 3 χ 10э vorwärtsbewegliche Spermien je Besamungsdosis von 100 ml einstufig verdünnt, bei 15-170C gelagert und bis zu 30 h nach der Spermagewinnung inseminiert werden. Eine Verlängerung der Lagerungsdauer des flüssigkonservierten Eberspermas auf 50 h wurde durch die Einführung eines zweistufigen Konservierungsverfahrens (Tierzucht 78,1974, 543-544) erreicht. Dabei wird für die erste Verdünnungsstufe ein modifiziertes ÄDTA-Medium, das eine den Spermienstoffwechsel hemmende Wirkung ausübt, verwendet. Der Zweitverdünner ist ein modifizierter IVT-Verdünner mit erhöhtem pH-Wert, der die Spermien vor der Insemination reaktiviert.For storage of boar semen from extraction to insemination, the ejaculates are mixed with a dilution medium and cooled to 15 ° C and stored. As preservative media, various modifications of glucose-sodium citrate diluents, such as. B. the IVT medium used. Increasingly, a returning on Pliško EDTA-containing medium is used (Invention description SU 183901}. Using this Pliško Thinner the boar semen can be applied to 3 χ 10 э forward motile sperm per insemination dose of 100 ml, single-stage, stored at 15-17 0 C and up to An extension of the storage period of the fluid-conserved boar semen to 50 h was achieved by the introduction of a two-stage preservation method (animal breeding 78, 1974, 543-544), whereby a modified AEDTA medium is used for the first dilution stage. The second diluent is a modified IVT diluent with elevated pH, which reactivates the sperm prior to insemination.

Die Forderung nach einer Lagerungsdauer des flüssigkonservierten Eberspermas bis zu 80 Stunden zur effektiveren Gestaltung des Verfahrens und Einsparung von Energieträgern konnte mit dieser Verfahrensvariante jedoch nicht erfüllt werden. Auch im internationalen Maßstab wird flüssigkonserviertes Ebersperma ohne Abfall der Befruchtungsergebnisse nur bis zu 50 Stunden eingesetzt.The requirement for a storage period of liquid-conserved boar semen up to 80 hours for more effective design of the process and saving of energy could not be met with this process variant. Even on an international scale, liquid preserved boar semen is used only for up to 50 hours without waste of fertilization results.

Ziel der ErfindungObject of the invention

Die Überlebensfähigkeit und Vitalität der Eberspermien ist so zu verbessern, damit bis zu einer Lagerungsdauer von 80 Stunden hohe Befruchtungsergebnisse gewährleistet werden. Die 80stündige Einsatzdauer des konservierten Spermas ermöglicht eine Rationalisierung des biotechnischen Verfahrens künstliche Besamung beim Schwein durch eine effektivere Arbeit in den Besamungseberstationen und in den sauenhaltenden Betrieben sowie eine Einsparung an Vergaserkraftstoff durch eine Transportoptimierung bei der Spermazustellung.The viability and vitality of the boar sperm should be improved in order to ensure high fertilization results up to a storage time of 80 hours. The 80-hour duration of use of the preserved semen makes it possible to rationalize the biotechnical process of artificial insemination in pigs through more effective work in the insemination centers and in the sowing farms, as well as a reduction in carburettor fuel by optimizing the transport of semen.

Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention

Die Aufgabe der Erfindung bestand darin, ein Medium zur Verdünnung und Flüssigkonservierung von Ebersperma zu entwickeln, das die in den Spermien bei der Lagerung ablaufenden Alterungsvorgänge so verzögert, daß eine 80stündige Einsatzdauer des flüssigkonservierten Spermas ohne Verringerung der Befruchtungsfähigkeit der Spermien möglich ist. Dazu war es nötig, die Spermienmembran zu stabilisieren, damit ihre Funktionstüchtigkeit langer aufrechterhalten wird. Das wurde erreicht durch Zusatz des SH-Gruppenträgers Cystein sowie durch optimalere Gestaltung der osmotischen Verhältnisse im Verdünnungsstrom durch eine veränderte Mengendosierung der bekannten Verdünnerkomponenten. Ein Medium folgender Zusammensetzung erfüllt die gestellten Anforderungen (g/l):The object of the invention was to develop a medium for dilution and liquid preservation of boar semen, which delays the aging processes occurring in the sperm during storage so that an 80-hour use of the liquid-conserved sperm without reducing the fertility of the sperm is possible. For this it was necessary to stabilize the sperm membrane, so that their functionality is maintained longer. This was achieved by adding the SH-group carrier cysteine and by optimizing the osmotic conditions in the dilution stream by changing the amount of the known thinner components. A medium of the following composition meets the requirements (g / l):

GlUkOSe(C6H12O6)Glucoses (C 6 H 12 O 6 ) 36,0-44,Og36.0 to 44, Og Natriumzitrat (Na3C6H5O7 · 2 H2O)Sodium Citrate (Na 3 C 6 H 5 O 7 · 2 H 2 O) 3,3-4,1 g3.3-4.1 g Natriumhydrogenkarbonat (NaHCO3)Sodium bicarbonate (NaHCO 3 ) 1,1-1,3g1,1-1,3g Chelaplex III (C10H14O8N2Na2 2 H2O)Chelaplex III (C 10 H 14 O 8 N 2 Na 2 2 H 2 O) 1,8-2,2 g1.8-2.2 g L-CysteinhydrochloridL-cysteine hydrochloride (C3H7NO2SHCI · H2O)(C 3 H 7 NO 2 SHCl · H 2 O) 0,04-0,06 g0.04-0.06 g

Das Verdünnungs- und Konservierungsmittel gemäß der Erfindung wird als Erstverdünner mit einem Zusatz von 500000IE Penizillin G und 0,5g Streptomyzinsulfat als keimhemmendem Mittel in einer zweistufigen Verfahrensweise eingesetzt und ermöglicht so die Verwendung des konservierten Spermas bis zu 80 Stunden.The diluent and preservative according to the invention is used as a first diluent with the addition of 500000 IU of penicillin G and 0.5 g of streptomycin sulfate as a germinating agent in a two-step procedure and thus allows the use of the preserved sperm up to 80 hours.

Ausführungsbeispieleembodiments Beispiel 1example 1

Folgende Varianten des Verdünnungsmediums wurden in vitro hinsichtlich ihrer Wirkung auf die Überlebensfähigkeit und Resistenz der Spermien sowie die Erhaltung ihrer normalen Akrosomenmorphologie (NAR) geprüft:The following variants of the dilution medium were tested in vitro for their effect on the survival and resistance of sperm and the maintenance of their normal acrosome morphology (NAR):

Substanz (g/l)Substance (g / l) II IlIl IIIIII Glukoseglucose 36,036.0 40,040.0 44,044.0 Natriumzitratsodium citrate 3,33.3 3,73.7 4,14.1 ChelaplexlllChelaplexlll 1,81.8 2,02.0 2,22.2 Natriumhydrogenkarbonatsodium bicarbonate 1,11.1 1,21.2 1,31.3 L-CysteinhydrochloridL-cysteine hydrochloride 0,040.04 0,050.05 0,060.06

Mit diesen Zusammensetzungen werden folgende Überlebungsraten (HP) und Thermoresistenz (TRT) — sowie NAR-Werte nach 80 Stunden Lagerung des konservierten Spermas im Vergleich zum alten Verdünner — 50h gelagert — erreicht:With these compositions, the following survival rates (HP) and thermoresistance (TRT) - and NAR values are stored after 80 hours storage of the preserved sperm in comparison to the old diluent - 50 h:

Kriteriumcriteria 00 Variantenvariants IlIl 41,741.7 IIIIII alterolder 6060 II des neuen Verdünnersof the new thinner Verdünnerthinner 120120 45,045.0 33,333.3 23,723.7 HPHP 180180 (Anteil vorwärts(Share forward 240240 91,591.5 beweglicherPortable 300300 36,736.7 Spermien %)Sperm%) χ 0-300χ 0-300 91,791.7 37,537.5 89,389.3 89,789.7 NAR %NAR% 35,835.8 40,040.0 40,040.0 25,425.4 TRTTRT 35,035.0 34,234.2 50,050.0 31,931.9 (Anteil vo r-(Share of 36,736.7 25,825.8 42,542.5 31,431.4 wärtsbewegl.wärtsbewegl. 33,333.3 22,522.5 36,736.7 30,530.5 Spermien nachSperm after 29,229.2 32,832.8 27,527.5 25,325.3 ...min Inkuba... min Inkuba 25,825.8 23,323.3 25,325.3 tion bei 40 0Ction at 40 0 C 32,632.6 32,532.5 28,728.7

Beispiel 2Example 2

Vorzugsweie kommt folgende Rezeptur für das Medium zur Anwendung:Preferably, the following formulation is used for the medium:

Glukoseglucose 40,0 g40.0 g Natriumzitratsodium citrate 3,7 g3.7 g ChelaplexlllChelaplexlll 2,0 g2.0 g Natriumhydrogenkarbonatsodium bicarbonate 1,2g1.2g L-CysteinhydrochloridL-cysteine hydrochloride 0,05 g0.05 g

Die Verdünnerbestandteile werden in Aqua bidest. von 35-400C ad 1000ml gelöst, 0,5g Streptomyzinsulfat und 500000IE Penizillin G werden zugefügt. Dieses Konservierungsmittel wird dem originären filtrierten Ebersperma in einer Menge zugesetzt, daß 6 x 109 vorwärtsbewegliche Spermien pro 100ml enthalten sind, wobei auf Temperaturgleichheit von Verdünner und Sperma zu achten ist. Dieses verdünnte Sperma wird bei 15-17°C gelagert. Vor der Insemination werden 50ml des verdünnten Spermas mit 50ml Zweitverdünner versetzt und innerhalb 80h nach Spermagewinnung versamt. Das auf diese Weise konservierte Sperma zeigt gegenüber dem bisher eingesetzten Verdünner sowohl bessere Spermienüberlebensraten als auch dem bis zu 30 h gelagerten Sperma gleichwertige Befruchtungsergebnisse:The thinner components are redistilled in Aqua. of 35-40 0 C dissolved in 1000 ml, 0.5 g of streptomycin sulfate and 500000IE of penicillin G are added. This preservative is added to the original filtered boar semen in an amount containing 6 x 10 9 sperm per 100 ml of forward motile sperm, ensuring equality of thinner and sperm. This diluted semen is stored at 15-17 ° C. Before insemination, 50 ml of the diluted sperm are mixed with 50 ml of secondary diluent and within 80 hours sperm collected. The semen conserved in this way shows, compared to the thinner used up to now, better sperm survival rates as well as fertilization results stored up to 30 h:

alterolder neuernew Verdünnerthinner Verdünnerthinner Anteil vorwärtsbeweglicherProportion of forward mobile Spermien nach 30 hSperm after 30 h 54%54% 50 h50 h 48%48% 56%56% 80 h80 h 52%52% (= HP von 220 Ejakulaten)(= HP of 220 ejaculates) bis 30 huntil 30 h 50-8Oh50-8Oh Anzahl ErstbesamungenNumber of first inseminations 970970 972972 Trächtigkeitsrate (%)Pregnancy rate (%) 84,784.7 82,482.4 lebend geborene Ferkel/Wurflive born piglet / litter 10,8010,80 10,7910.79

Claims (1)

Mittel zur Verdünnung und Flüssigkonservierung von Ebersperma bestehend aus Glukose, Natriumzitrat, Natriumhydrogenkarbonat, Chelaplex IM und L-Cysteinhydrochlorid sowie dem Zusatz von Antibiotika, gekennzeichnet dadurch, daß die einzelnen Bestandteile in folgenden Konzentrationen enthalten sind:Composition for dilution and liquid preservation of boar semen consisting of glucose, sodium citrate, sodium bicarbonate, chelaplex IM and L-cysteine hydrochloride and the addition of antibiotics, characterized in that the individual constituents are present in the following concentrations: GlUkOSe(C6H12Oe) 36,0-44,OgGlucoses (C 6 H 12 Oe) 36.0-44, Og Natriumzitrat (Ma3C6H5O7 · 2 H2O) 3,3-4,1 gSodium citrate (Ma 3 C 6 H 5 O 7 .2H 2 O) 3.3-4.1 g Dinatriumdihydrogenäthylendiamin-Dinatriumdihydrogenäthylendiamin- tetraazetat (C10H14O8N2Na2 · 2 H2O) 1,8-2,2 gtetraacetate (C 10 H 14 O 8 N 2 Na 2 .2H 2 O) 1.8-2.2 g Natriumhydrogenkarbonat (NaHCO3) 1,1-1,3 gSodium bicarbonate (NaHCO 3 ) 1.1-1.3 g L-CysteinhydrochloridL-cysteine hydrochloride (C3H7NO2SHCI-H2O) 0,04-0,06 g(C 3 H 7 NO 2 SHCl-H 2 O) 0.04-0.06 g
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