DD246471A1 - MEDIUM FOR THE DILUTION AND LIQUID CONSERVATION OF EBERSPERMA - Google Patents
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Abstract
Medium zur Verduennung und Fluessigkonservierung von Ebersperma, das durch Zusatz des SH-Gruppentraegers Cystein und Optimierung der osmotischen Verhaeltnisse eine stabilisierende Wirkung auf die Spermienmembran und somit einen positiven Effekt auf die Vitalitaet und Befruchtungsfaehigkeit der Spermien ausuebt und dadurch eine 80stuendige Lagerung des konservierten Spermas erlaubt. Das Medium weist folgende Bestandteile ad 1 000 ml Aqua bidest. auf:Glukose, wasserfrei36,0 -44,0 g vorzugsweise 40,0 gNatriumzitrat2H2O 3,33- 4,07 g vorzugsweise 3,7 gNatriumhydrogencarbonat 1,08- 1,32 g vorzugsweise 1,2 gChelaplex III (AeDTA,Dinatriumdihydrogenaethy-lendiamintetraazetat) 1,8 - 2,2 g vorzugsweise 2,0 gL-Cysteinhydrochlorid 0,04- 0,06 g vorzugsweise 0,05 gZugesetzt werden der Verduennerloesung 0,5 g Streptomyzin und 500 000 IE Penizillin.Medium for the seduction and preservation of boar semen by the addition of the SH-Gruppenentraegers cysteine and optimizing the osmotic conditions a stabilizing effect on the sperm membrane and thus a positive effect on the vitality and fertilization ability of the sperm exercise and thereby a 80stuendige storage of the preserved sperm. The medium has the following components ad 1 000 ml of bidistilled water. glucose: anhydrous 36.0-44.0 g preferably 40.0 g sodium citrate 2H 2 O 3.33-4.07 g preferably 3.7 g sodium bicarbonate 1.08-1.32 g preferably 1.2 g Chelaplex III (AeDTA, disodium dihydrogen ethylenediamine tetraacetate ) 1.8-2.2 g, preferably 2.0 g L-cysteine hydrochloride 0.04-0.06 g, preferably 0.05 g. The dilution of the diluent is supplemented with 0.5 g streptomycin and 500 000 IU penicillin.
Description
ad 1000ml Aqua bidest. mit Zusatz von 0,5g Streptomyzinsulfat und 500000IE Penizillin G und die Einstellung des pH-Wertes erfolgtauf 6,8-7,0.ad 1000ml water redist. with the addition of 0.5 g of streptomycin sulfate and 500,000 IU of penicillin G and adjustment of pH to 6.8-7.0.
Für die Lagerung des Eberspermas von der Gewinnung bis zur Insemination werden die Ejakulate mit einem Verdünnungsmedium versetzt und bis auf 15°C abgekühlt. Als Konservierungsmedien werden verschiedene Modifikationen eines Glukose-Natriumzitrat-Verdünners, wie z. B. das IVT-Medium, eingesetzt. Zunehmend wird ein auf PLISKO zurückgehendes ÄDTA-haltiges Medium genutzt, von dem ebenfalls mehrere Modifikationen angewand werden, z. B. die Medien nach SADOV-NIKOVA, SILAEVA und SERDJUKFor storage of boar semen from extraction to insemination, the ejaculates are mixed with a diluent and cooled down to 15 ° C. As preservative media, various modifications of a glucose-sodium citrate diluent, such as. As the IVT medium used. Increasingly, an ÄDTA-containing medium originating from PLISKO is used, of which also several modifications are applied, eg. For example, the media are SADOV-NIKOVA, SILAEVA and SERDJUK
Das Medium nach PLISKO hat die folgende Zusammensetzung (Erfindungsbeschreibung SU 183901): The medium according to PLISKO has the following composition (description of the invention SU 183901):
Glukose, wasserfrei 60 gGlucose, anhydrous 60 g
Chelaton(ÄDTA,Trilon-B) 3,7 gChelaton (ÄDTA, Trilon-B) 3.7 g
4%igeNaOH-Lösung 8 ml4% NaOH solution 8 ml
35,7%igeZitratlösung (Trinatriumzitrat) 10 ml35.7% citrate solution (trisodium citrate) 10 ml
Aquadest. 1000 mlAqua Dest. 1000 ml
Bei Verwendung dieser Rezeptur kann das Ebersperma auf 3 χ 109 vorwärtsbewegliche Spermien je Besamungsdosis von 100 ml einstufig verdünnt, bei 15-170C gelagert und bis zu 30 h nach der Spermagewinnung inseminiert werden.When using this formula, the boar sperm can be diluted to 3 × 10 9 sperm per movement sperm per insemination dose of 100 ml in one stage, stored at 15-17 0 C and inseminated up to 30 h after sperm extraction.
Eine Verlängerung der Lagerungsdauer des flüssigkonservierten Eberspermas auf 50 h wurde durch die Einführung eines zweistufigen Konservierungsverfahrens (Tierzucht 78,1974, S. 543-544) erreicht. Dabei wird für die erste Verdünnungsstufe ein modifiziertes ÄDTÄ-Medium, das eine den Spermienstoffwechsel hemmende Wirkung ausübt, verwendet. Der Zweitverdünner ist ein modifizierter IVT-Verdünner mit erhöhtem pH-Wert, der die Spermien vor der Insemination reaktiviert.An extension of the storage period of the liquid-conserved boar semen to 50 h was achieved by the introduction of a two-stage preservation method (Tierzucht 78, 1974, pp. 543-544). In this case, for the first dilution step, a modified ADTA medium, which exerts a sperm metabolism-inhibiting effect, is used. The second diluent is a modified IVT diluent with elevated pH, which reactivates the sperm prior to insemination.
Mit diesem Verfahren wurden in der Besamungspraxis hohe und stabile Befruchtungsergebnisse bei einer Lagerungsdauer bis zu 50 h erzielt. Die Forderung nach einer Lagerungsdauer bis zu 80 h konnte jedoch mit dieser Verfahrensvariante nicht erfüllt werden.With this method, high and stable insemination results were achieved in the insemination practice with a storage time of up to 50 h. However, the requirement for a storage period of up to 80 hours could not be met with this process variant.
Das Ziel der Erfindung bestand deshalb darin, die Vitalität der Eberspermien so zu verbessern, damit bis zu einer Lagerungsdauer von 80 h hohe Befruchtungsergebnisse gewährleistet werden. Die Aufgabe der Erfindung bestand darin, ein Medium zur Verdünnung und Flüssigkonservierung von Ebersperma zu entwickeln, das die in den Spermien bei der Lagerung ablaufenden Alterungsvorgänge so verzögert, daß eine 80stündige Einsatzdauer des flüssigkonservierten Spermas ohne Verringerung der Befruchtungsfähigkeit der Spermien möglich ist. Dazu war es nötig, die.Spermienmembran zu stabilisieren, damit ihre Funktionstüchtigkeit länger aufrechterhalten wird. Das wurde erreicht durch Zusatz des SH-Gmppenträgers Cystein sowie durch optimalere Gestaltung der osmotischen Verhältnisse im Verdünnungsmedium durch eine veränderte Mengendosierung der bekannten Verdünnerkomponenten.The aim of the invention was therefore to improve the vitality of the boar sperm so that high fertilization results are ensured up to a storage period of 80 h. The object of the invention was to develop a medium for the dilution and liquid preservation of boar semen, which delays the aging processes occurring in the sperm during storage so that a duration of use of the liquid-conserved sperm of up to 80 hours is possible without reducing the fertilization ability of the sperm. For this it was necessary to stabilize the sperm membrane in order to maintain its functionality for a longer time. This was achieved by adding the SH-Gmppenträgers cysteine and by optimizing the osmotic conditions in the dilution medium by changing the amount of dosage of the known thinner components.
Ein Medium folgender Zusammensetzung erfüllt die gestellten Anforderungen:A medium of the following composition fulfills the requirements:
Glukose, wasserfrei (C6Hi2O6) 36,0-44,Og Natriumzitrat (Na3C6H5O7 · 2 H2O) 3,3-4,1 gGlucose, anhydrous (C 6 Hi 2 O 6 ) 36.0-44, Og sodium citrate (Na 3 C 6 H 5 O 7 .2H 2 O) 3.3-4.1 g
Dinatriumdihydrogenäthylendiamintetraazetat 1,8-2,2 gDisodium dihydrogenated ethylenediaminetetraacetate 1.8-2.2 g
(ChelaplexIII.ÄDTA, C10H14O8N2Na2 2 H2O(ChelaplexIII.ÄDTA, C 10 H 14 O 8 N 2 Na 2 O 2 H 2
L-Cysteinhydrochlorid (C3H7NO2 SH Cl H2O) 0,04-0,06 gL-cysteine hydrochloride (C 3 H 7 NO 2 SH Cl H 2 O) 0.04-0.06 g
ad 1000 ml Aqua bidest.ad 1000 ml of water redist.
Der pH-Wert wird auf 6,8-7,0 eingestellt.The pH is adjusted to 6.8-7.0.
Das Verdünnungsmittel gemäß der Erfindung wird als Erstverdünner mit einem Zusatz von Antibiotika in einer zweistufigen Verfahrensweise eingesetzt und ermöglicht so die Verwendung des konservierten Spermas bis zu 80Stunden.The diluent according to the invention is used as a first diluent with an addition of antibiotics in a two-step procedure and thus allows the use of the preserved sperm up to 80 hours.
Ausführungsbeispielembodiment
Vorzugsweise kommt folg ende Rezeptur für das Medium zur Anwendung:Preferably, the following formulation is used for the medium:
Glukose, wasserfrei (C6H12O6) 40,0 g Natriumzitrat (Na3C6H5O7 2 H2O 3,7 gGlucose, anhydrous (C 6 H 12 O 6 ) 40.0 g sodium citrate (Na 3 C 6 H 5 O 7 2 H 2 O 3.7 g
Chelaplex III (C10H14O8N2Na2 · 2 H2O) 2,0 gChelaplex III (C 10 H 14 O 8 N 2 Na 2 .2 H 2 O) 2.0 g
Natriumhydrogencarbonat (NaHCO3) 1,2 gSodium hydrogencarbonate (NaHCO 3 ) 1.2 g
L-Cysteinhydrochlorid (C3H7NO2SH Cl-H2O) 0,05 g .L-cysteine hydrochloride (C 3 H 7 NO 2 SH Cl-H 2 O) 0.05 g.
Die Verdünnerbestandteile werden in Aqua bidest. von 35-40°Cad 1000 ml gelöst, 0,5g Streptomyzinsuifat und 500000IE Penizillin G werden zugefügt. Dieses Konservierungsmittel wird dem originären filtrierten Ebersperma in einer Menge zugesetzt, daß 6 χ 109 vorwärtsbewegliche Spermien pro 100 ml enthalten sind, wobei auf Temperaturgleichheit von Verdünnerund Sperma zu achten ist. Dieses vorverdünnte Sperma wird bei 15-17°C gelagert. Vor der Insemination werden 50 ml des gelagerten erstverdünnten Spermas mit 50 ml Zweitverdünner versetzt und innerhalb 80 h nach Spermagewinnung versamt. Das auf diese Weise konservierte Sperma zeigte gegenüber dem bisher eingesetzten Verdünner sowohl bessere Spermienüberlebensraten als auch dem bis zu 30 h gelagerten Sperma gleichwertige Befruchtungsergebnisse:The thinner components are redistilled in Aqua. of 35-40 ° cc 1000 ml dissolved, 0.5 g streptomycin sulfate and 500000IE penicillin G are added. This preservative is added to the original filtered boar sperm in an amount to contain 6 × 10 9 sperm per 100 ml of motile sperm, taking care to ensure that the thinner and sperm are equal in temperature. This pre-diluted sperm is stored at 15-17 ° C. Before insemination, 50 ml of stored first-diluted sperm are mixed with 50 ml of secondary diluent and concealed within 80 h after sperm extraction. The semen conserved in this way showed better sperm survival rates compared to the thinner used up to now, as well as equivalent fertilization results for the sperm stored up to 30 h:
Anteil vorwärtsbeweglicher Spermien nachProportion of motile sperm following
(= Halteproben von 220 Ejakulaten)(= Holding samples of 220 ejaculates)
Anzahl Erstbesamungen Trächtigkeitsrate (%) lebend geborene Ferkel/WurfNumber of first inseminations Pregnancy rate (%) live born piglets / litter
Claims (1)
L-Cysteinhydrochlorid (C3H7NO2SH Cl · H2O) 0,04-0,06 g(C 10 H 14 O 8 N 2 Na 2 -2 H 2 O)
L-cysteine hydrochloride (C 3 H 7 NO 2 SH Cl • H 2 O) 0.04-0.06 g
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| DD246471A1 true DD246471A1 (en) | 1987-06-10 |
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| DD (1) | DD246471B1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19728161A1 (en) * | 1997-07-02 | 1999-01-07 | Guenter Prof Dr Kamp | Diluent for boar sperm |
| FR2877575A1 (en) * | 2004-11-05 | 2006-05-12 | Union Nationale Des Cooperativ | PROTECTIVE ENVIRONMENT FOR SEMEN |
-
1986
- 1986-03-10 DD DD28772386A patent/DD246471B1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (4)
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| DE19728161A1 (en) * | 1997-07-02 | 1999-01-07 | Guenter Prof Dr Kamp | Diluent for boar sperm |
| DE19728161C2 (en) * | 1997-07-02 | 2000-06-29 | Guenter Kamp | Thinner and method of preserving boar semen |
| FR2877575A1 (en) * | 2004-11-05 | 2006-05-12 | Union Nationale Des Cooperativ | PROTECTIVE ENVIRONMENT FOR SEMEN |
| WO2006051200A1 (en) * | 2004-11-05 | 2006-05-18 | Union Nationale Des Cooperatives Agricoles D'elevage Et D'insemination Animale | Seed protection medium |
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