Claims (2)
Erfindungsanspruch:Invention claim:
1. Verfahren zur Herstellung von i-MethyM^-androstadien-S^-dion, gekennzeichnet dadurch, daß man 1-Methyl-5a-androst-1-en-3,17-dion (Metenolon) mit einer Mikroorganismenkultur der Gattungen Norcardia, Mycobacterium oder Fusarium fermentiert.1. A process for the preparation of i-MethyM -androstadien-S ^ -dione, characterized by reacting 1-methyl-5a-androst-1-ene-3,17-dione (metenolone) with a microorganism culture of the genera Norcardia, Mycobacterium or Fusarium fermented.
2. Verfahren zur Herstellung von 1-Methyl-1,4-androstadien-3,17-dion gemäß Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß man 1-Methyl-5o!-androst-1-en-3,17-dion mit einer Mikroorganismenkultur der Spezies Norcardia corallina ATCC 14350, Mycobacterium rhodochvous ATCC 4276 oder Fusarium solani ATCC 12823 fermentiert.2. A process for the preparation of 1-methyl-1,4-androstadiene-3,17-dione according to item 1, characterized in that 1-methyl-5o! -Androst-1-en-3,17-dione with a Microorganism culture of the species Norcardia corallina ATCC 14350, Mycobacterium rhodochvous ATCC 4276 or Fusarium solani ATCC 12823 fermented.
Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 1-Methyl-1,4-androstadien-3,17-dion.The invention relates to a process for the preparation of 1-methyl-1,4-androstadiene-3,17-dione.
Charakteristik der bekannten technischen LösungenCharacteristic of the known technical solutions
Es sind keine Angaben bekannt über Verfahren zur Herstellung von 1-Methyl-1,4-androstadien-3,17-dion.There are no data available on processes for the preparation of 1-methyl-1,4-androstadiene-3,17-dione.
Ziel der ErfindungObject of the invention
Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung eines einfachen und wirtschaftlichen Verfahrens zur Herstellung von 1-Methyl-1 ,4-androstadien-3,17-dion. The aim of the invention is to provide a simple and economical process for the preparation of 1-methyl-1, 4-androstadiene-3,17-dione.
Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, 1-Methyl-1,4-androstadien-3,17-dion durch Fermentation herzustellen. Erfindungsgemäß wird 1-Methyl-5a-androst-1-en-3,17-dion (Metenolon) mit einer Mikroorganismenkultur der Gattungen Norcardia, Mycobacterium oder Fusorium fermentiert.The invention has for its object to produce 1-methyl-1,4-androstadiene-3,17-dione by fermentation. According to the invention, 1-methyl-5a-androst-1-ene-3,17-dione (metenolone) is fermented with a microorganism culture of the genera Norcardia, Mycobacterium or Fusorium.
Dabei wird erfindungsgemäß 1-Methyl-5a-androst-1-en-3,17-dion mit einer Mikroorganismenkultur der Spezies Norcardia corallina ATCC 14350, Mycobacterium rhodochvous ATCC 4276 oder Fusarium solani ATCC 12823 fermentiert. Das erfindungsgemäße Verfahren wird unter den Bedingungen durchgeführt, die man üblicherweise bei der mikrobiologischen Dehydrierung von Substraten mit Mikroorganismen-Kulturen anwendet. So werden zunächst in allgemein üblichen Vorversuchen die günstigsten Fermentationsbedingungen, wie zum Beispiel Auswahl des günstigsten Nährmediums, des geeigneten Substratlösungs- oder Suspensionsmittels, der Substratkonzentration, der technischen Bedingungen wie Temperatur, Belüftung, pH-Wert und der optimalen Zeiten für Germination, Substratzugabe und Substratkontakt am Enzym des Mikroorganismus analytisch, insbesondere dünnschichtchromatographisch, ermittelt. Dabei hat sich gezeigt, daß es zweckmäßig ist, Konzentrationen von etwa 100 bis 2000 mg Substrat pro Liter Nährmedium einzusetzen. Der pH-Wert wird vorzugsweise auf einen Wert im Bereich von 5 bis 7 eingestellt. Die Züchtungstemperatur liegt im Bereich von 20-400C, vorzugsweise von 25-35°C. Zur Belüftung werden vorzugsweise 0,5 bis 5 Liter Luft pro Minute pro Liter Kulturbrühe zugeführt. Die Umwandlung des Substrats wird zweckmäßigerweise durch Analysen von Probeextrakten verfolgt.According to the invention, 1-methyl-5a-androst-1-ene-3,17-dione is fermented with a microorganism culture of the species Norcardia corallina ATCC 14350, Mycobacterium rhodochvous ATCC 4276 or Fusarium solani ATCC 12823. The process according to the invention is carried out under the conditions usually used in the microbiological dehydrogenation of substrates with microorganism cultures. Thus, first in generally customary preliminary tests, the most favorable fermentation conditions, such as selection of the most favorable nutrient medium, the appropriate Substratlösungs- or suspending agent, the substrate concentration, the technical conditions such as temperature, ventilation, pH and the optimal times for germination, substrate addition and substrate contact on the enzyme of the microorganism analytically, in particular by thin-layer chromatography, determined. It has been shown that it is expedient to use concentrations of about 100 to 2000 mg of substrate per liter of nutrient medium. The pH is preferably adjusted to a value in the range of 5 to 7. The cultivation temperature is in the range of 20-40 0 C, preferably from 25-35 ° C. For aeration, preferably 0.5 to 5 liters of air per minute per liter of culture broth are supplied. Conversion of the substrate is conveniently followed by analyzes of sample extracts.
Die für diese Fermentation benötigten Mikroorganismen stehen der Fachwelt bei anerkannten Mikroorganismen-Sammlungen zur freien Verfügung. Geeignete Stämme sind Norcardien, wie Norcardia corallina ATCC 14350, Mycobacterien, wie Mycobacterium rhodochvous ATCC 4276 oder Fusarien, wie Fusarium solani ATCC 12823. Nach erfolgter Fermentation werden die Fermentationsprodukte in an sich bekannter Weise isoliert. Die Isolierung kann zum Beispiel in der Weise erfolgen, daß man die Fermentationsansätze mit einem nicht mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel wie Äthylacetat, Butylacetat oder Methylisobutylketon, extrahiert, die Extrakte einengt und die so erhaltenen Rohprodukte gegebenenfalls durch Chromatographie und/oder Kristallisation reinigt.The microorganisms required for this fermentation are at the disposal of experts in recognized microorganism collections. Suitable strains are Norcardia, such as Norcardia corallina ATCC 14350, mycobacteria, such as Mycobacterium rhodochvous ATCC 4276 or Fusariums, such as Fusarium solani ATCC 12823. After fermentation, the fermentation products are isolated in a manner known per se. The isolation can be carried out, for example, by extracting the fermentation mixtures with a water-immiscible organic solvent such as ethyl acetate, butyl acetate or methyl isobutyl ketone, concentrating the extracts and optionally purifying the resulting crude products by chromatography and / or crystallization.
Ausführungsbeispielembodiment
Die nachfolgenden Ausführungsbeispiele dienen zur Erläuterung des erfindungsgemäßen Verfahrens.The following exemplary embodiments serve to explain the method according to the invention.
Beispiel 1example 1
Ein 21 Erlenmeyerkolben,der500mleiner30 Minuten bei 120°C im Autoklaven sterilisierten Nährlösung, bestehend aus 0,5% Dextrose Monohydrat, 0,5% Hefeextrakt, 0,2% Corn steep liquor und 0,1 % Pepton, pH 7,5 wird mit einer Schrägargarkultur des Stammes Norcardia corallina ATCC 14350 beimpft und 48 Stunden auf einem Rotationsschüttler bei 300C geschüttelt. Mit 250 ml dieser Anzuchtskultur wird ein 2Ol Vorfermenter beimpft, der mit 151 eines 30 Min. bei 121 °C und 1,1 bar Überdruck sterilisierten Nährmediums der gleichen Zusammensetzung wie die Anzuchtskultur beschickt ist. Unter Zugabe von Silicon SH als Antischaummittel wird bei 29°C und 0,7 bar Überdruck unter Belüftung (15 l/Min.) und Rühren (220 U/Min) 24 Stunden germiniert.A 21 Erlenmeyer flask containing 500mL autoclaved nutrient broth at 120 ° C for 30 minutes, consisting of 0.5% dextrose monohydrate, 0.5% yeast extract, 0.2% corn steep liquor and 0.1% peptone, pH 7.5, is added a Schrägargarkultur the strain Norcardia corallina ATCC 14350 inoculated and shaken for 48 hours on a rotary shaker at 30 0 C. With 250 ml of this seed culture, a 2Ol Vorfermenter is inoculated with 151 of a 30 min. At 121 ° C and 1.1 bar pressure sterilized nutrient medium of the same composition as the seed culture is loaded. With the addition of silicone SH as an antifoam agent at 29 ° C and 0.7 bar overpressure with aeration (15 l / min) and stirring (220 rev / min) germinated for 24 hours.
Danach werden 0,91 dieser Vorfermenterkultur unter sterilen Bedingungen entnommen und damit ein 2Ol Hauptfermenter beimpft, der 141 sterilisierte Nährlösung der gleichen Zusammensetzung wie die Vorfermenterkultur enthält. Nach einer Anwachsphase von 6 Stunden unter Vorfermenterbedingungen wird eine sterilfiltrierte Lösung von 4,5g Metenolon in 60ml Dimethylformamid zugegeben und weiter gerührt und belüftet.Thereafter, 0.91 of this Vorfermenterkultur be removed under sterile conditions and thus inoculated a 2Ol main fermenter containing 141 sterilized nutrient solution of the same composition as the Vorfermenterkultur. After a growth phase of 6 hours under Vorfermenterbedingungen a sterile-filtered solution of 4.5 g of metenolone in 60 ml of dimethylformamide is added and stirred and aerated.