DD239877A1

DD239877A1 - LONG-TERM CONTROL MATERIAL FOR MULTILAYER HAEMATOLOGICAL TESTS AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF

Info

Publication number: DD239877A1
Application number: DD27909085A
Authority: DD
Inventors: Georg Diederich; Marianne Pulkenat; Eveline Reiter
Original assignee: Schwerin Bezirkskrankenhaus
Priority date: 1985-07-29
Filing date: 1985-07-29
Publication date: 1986-10-08

Abstract

Die Erfindung betrifft ein langzeitstabiles Kontrollmaterial fuer haematologische Mehrfachuntersuchungen und Verfahren zu dessen Herstellung. Dieses Material findet Anwendung in der Qualitaetskontrolle aller medizinischen Laboratorien, die haematologische Labordiagnostik in Form von Zellzaehlungen, Zellgroessenmessungen und Bestimmungen des Haemoglobingehaltes von Blutproben durchfuehren. Ziel der Erfindung ist die Schaffung eines Kontrollmaterials, mit dessen Hilfe die parallele Pruefung von Verfahren zur Bestimmung kennzeichnender Parameter der einzelnen Blutzellarten ueber einen Haltbarkeitszeitraum von mehr als 12 Monaten stabil moeglich ist. Diese Aufgabe wird erfindungsgemaess durch die Verwendung stabilisierter, partikelfreier Haemoglobinloesung als Suspensionsmedium fuer fixierte Blutzellen oder Partikel in Blutzellgroesse geloest. Dabei kann durch weitere chemische Zusaetze zur Suspension die Kontrollqualitaet des Materials erhoeht werden. Weiterhin ist durch Zumischung zweier im Partikelvolumen verschiedener Teilchenpopulationen eine weitgehende Aehnlichkeit mit der Volumenverteilungskurve nativer Humanleukozyten zu Kontrollzwecken simulierbar. Bei der moeglichen Verwendung des Materials fuer Geraetekalibrierungen ist die stets erfolgende Mitverduennung des Haemoglobinanteils der Suspension zur gleichzeitigen Pruefung von notwendig zu justierenden Verduennungsschritten dienlich.The invention relates to a long-term stable control material for multiple haematological investigations and methods for its preparation. This material is used in the quality control of all medical laboratories that perform haematological laboratory diagnostics in the form of cell counts, cell size measurements and haemoglobin content determinations of blood samples. The aim of the invention is to provide a control material with the aid of which the parallel examination of methods for determining characteristic parameters of the individual types of blood cell over a shelf life of more than 12 months is stably possible. This object is achieved according to the invention by the use of stabilized, particle-free hemoglobin solution as a suspension medium for fixed blood cells or particles in blood cell size. It can be increased by further chemical additives to the suspension, the control quality of the material. Furthermore, by mixing in the particle volume of different particle populations a similarity with the volume distribution curve of native human leukocytes can be simulated for control purposes. In the event of possible use of the material for equipment calibration, the co-dewatering of the hemoglobin content of the suspension is always useful for the simultaneous testing of the necessary adjustment steps.

Description

Anwendungsgebiet der Erfindung .Field of application of the invention.

Die Erfindung betrifft ein Material zur Langzeitkontrolle hämatologischer Mehrfachuntersuchungen sowie Verfahren zu dessen Herstellung. Das Material kann zur Qualitätskontrolle in allen medizinischen Laboratorien eingesetzt werden, in denen Blutzellen gezählt und deren Volumina bestimmt werden sowie in denen eine Messung der Hämoglobinkonzentration im Blut erfolgt. Weiterhin ist das Material zur Kalibrierung von hämatologischen Analysengeräten geeignet.The invention relates to a material for the long-term control of hematological multiple examinations and to methods for its production. The material can be used for quality control in all medical laboratories, where blood cells are counted and their volumes are determined and where a measurement of the hemoglobin concentration in the blood takes place. Furthermore, the material is suitable for calibrating hematological analyzers.

Charakteristik der bekannten technischen LösungenCharacteristic of the known technical solutions

Naturgemäß befaßt sich die Labordiagnostik in der Hämatologie mit der Untersuchung der Blutzellen. Als vitale Elemente des Organismus haben Blutzellen eine Vielzahl von Eigenschaften, aus deren Kenntnis im speziellen Fall Schlußfolgerungen für Diagnose und Therapie von Krankheiten abgeleitet werden können. Bei der Anwendung von in-vitro-Untersuchungen (z. B. Zellzählung, Zellvolumenmessung, Bestimmung von Zeilinhaltsstoffen) sollten möglichst viele Eigenschaften der Zellen so erhalten bleiben, wie sie im in-vivio-Zustand gegeben sind, um so ein repräsentatives Meßergebnis zu ermöglichen. Die Erhaltung aller Eigenschaften vitaler Blutzellen ist jedoch unter den meist unphysiologischen Verfahrensbedingungen der Laboranalysen kaum zu bewerkstelligen. Noch viel Weniger gelingt es nun, Blutzellen über einen langen Zeitraum haltbar zu machen und dabei in ihren ursprünglichen Eigenschaften zu konservieren. Das wiederum ist aber die entscheidende Voraussetzung für die Schaffung eines vollwertigen Qualitätskontrollmaterials der hämatologischen Labordiagnostik, mit dessen Hilfe endgültige Aussagen über die Richtigkeit und Zuverlässigkeit der Blutzellenanalysen getroffen werden können. Das Problem besteht nun darin, entweder möglichst viele Eigenschaften der nativen Blutzellen zu bewahren und auf eine lange Haltbarkeit der Zellen zu Kontrollzwecken au'Grund fortschreitender Zellalterung und Zellzerfall zu verzichten; oder aber die Zellen mit Hilfe chemischer Methoden sehr lange haltbar zu machen und dabei eine krasse Änderung vieler den Meßvorgang bestimmenden Eigenschaften (Zellform, Verformbarkeit, chemische und physikalische Labilität) in Kauf zu nehmen. Im ersten Fall spricht man von stabilisierten (vital konservierten) Zellen. Eine solche Stabilisierung der unter in-vitro-Bedingungen sehr labilen Blutzellen erreicht man durch bestimmte chemische Zusätze zum Blut bzw. zu gewaschenen Zellfraktionen. Diese Zusätze dienen zur Aufrechterhaltung des Zellstoffwechsels und/oder zur Schaffung eine chemisch/ physikalisch die Zellen erhaltenden und gleichzeitig bakteriostatisch wirksamen Milieus. Die so präparierten Suspensionen stabilisierter Blutzellen sind auf Grund ihrer geringen Haltbarkeit nur acht bis zwölf Wochen als Qualitätskontrollmaterial zu verwenden (Spaethe, R.;M.Ley; A.Lampertu.S. Vavra; Lab.med.8:437-444(1984).Naturally, laboratory diagnostics in hematology is concerned with the study of blood cells. As vital elements of the organism, blood cells have a multitude of properties, from which knowledge in the special case conclusions for diagnosis and therapy of diseases can be derived. When using in vitro studies (eg cell counting, cell volume measurement, determination of cell constituents) as many properties of the cells should be retained as they are given in the in vivo state in order to allow a representative measurement result , The preservation of all the properties of vital blood cells, however, can hardly be achieved under the most unphysiological process conditions of laboratory analyzes. Much less succeeds in preserving blood cells over a long period of time while preserving their original properties. This, in turn, is the key to creating a complete quality control material for hematological laboratory diagnostics, which can be used to make definitive statements about the accuracy and reliability of blood cell analysis. The problem now is either to retain as many native blood cell properties as possible and to dispense with a long shelf life of the cells for control purposes on the basis of progressive cell aging and cell breakdown; or to make the cells with the help of chemical methods for a very long time and thereby take a blatant change many determining the measurement process properties (cell shape, deformability, chemical and physical lability) in purchasing. In the first case one speaks of stabilized (vitally conserved) cells. Such stabilization of the blood cells, which are very unstable under in vitro conditions, is achieved by certain chemical additives to the blood or to washed cell fractions. These additives serve to maintain the cell metabolism and / or to create a chemically / physically preserving the cells and at the same time bacteriostatic milieu. Because of their low durability, the stabilized blood cell suspensions prepared in this way are only to be used as quality control material for a period of eight to twelve weeks (Spaethe, R., M. Ley, A. Lamampu, S. Vavra, Lab.med.8: 437-444 (1984 ).

Im zweiten Falle handelt es sich um fixierte Blutzellen, die in ihren Eigenschaften den entsprechenden nativen Zellen weitgehend unähnlich geworden sind. Eine Fixierung der Blutzellen erreicht man durch chemische Härtung der Zellmembran bzw. der inneren Strukturen der Zellen. Als Reagenzien werden vorzugsweise Aldehyde (Formaldehyd, Glutaraldehyd) sowie auch Schwermetallsalze (Osmiumtetroxid, Uranylacetat) eingesetzt. . . 'In the second case, they are fixed blood cells, which have become largely dissimilar in their properties to the corresponding native cells. A fixation of the blood cells is achieved by chemical hardening of the cell membrane or the internal structures of the cells. The reagents used are preferably aldehydes (formaldehyde, glutaraldehyde) and also heavy metal salts (osmium tetroxide, uranyl acetate). , , '

Durch ihre große Stabilität gegenüber chemischen und physikalischen Einflüssen wird bei den fixierten Blutzellen eine wesentlich längere Haltbarkeit als bei den stabilisierten Blutzellen erzielt (Lombarts, A. J. P. F., and B. Leijnse: Clin. Chim. Acta [1983]: 7.9-83). Diese lange Haltbarkeit (1 Jahr und länger) bei gleichzeitigem Mangel blutzellähnlicher Eigenschaften weisen auch künstliche und biologische Partikel bei ihrem Einsatz als Kontrollmaterial für hämatologische Zwecke auf. Ein weiteres Problem der Qualitätskontrolle hämatologischer Laboruntersuchungen ist die Prüfung der Richtigkeit und Zuverlässigkeit von Mehrfachanalysen. Aus dem Untersuchüngsgut Blut können nach dem heutigen Stand der Technik eine Vielza'hl von parallelen Messungen an den verschiedenen Zellpppulationen in einem Arbeitsgang vorgenommen werden. Diese multiparametrische Arbeitsweise moderner Analysengeräte verlangt auch eine gleichzeitige Kontrolle aller Meßstrecken eines Gerätes mit einem Mehrfachparameter-Kontrollmaterial. Ein solches Material bietet weiterhin für die noch vielerorts geübten Einzelparameter-Messungen den Vorteil, nur eine Kontrollmaterialart für verschiedene Verfahren einsetzen zu können.Their high stability against chemical and physical influences results in a significantly longer shelf-life in the fixed blood cells than in the stabilized blood cells (Lombarts, A.J.P.F., and B. Leijnse: Clin. Chim. Acta [1983]: 7.9-83). This long shelf life (1 year and longer) combined with lack of blood cell-like properties also includes artificial and biological particles when used as a control material for hematological purposes. Another problem of quality control of haematological laboratory examinations is the verification of the correctness and reliability of multiple analyzes. According to the current state of the art, it is possible to carry out a multitude of parallel measurements on the different cell lobules in one operation from the blood to be examined. This multiparametric operation of modern analyzers also requires simultaneous control of all measuring sections of a device with a multi-parameter control material. Furthermore, such a material offers the advantage of being able to use only one type of control material for different methods for the individual parameter measurements practiced in many places.

Ebenfalls in den Problemkreis der Sicherung von Richtigkeit und Zuverlässigkeit hämatologischer Analysen fällt die Aufgabe der ordnungsgemäßen Kalibrierung der Analysengeräte. Wirklich gelöst ist dieses Problem nur für die fotometrische Bestimmung des Hämoglobirigehaltes von Blutproben. Hier gibt es international verbindliche Standards (WHO-Standard). Für die Zählung und Größenbestimmung der Blutzellen arbeitet man im Hinblick auf die Gerätekalibrierung hoch an unterschiedlichen Lösungsmodellen. Die wichtige Voraussetzung der Langzeitstabilität erfüllen bisher nur Suspensionen von Latexteilchen (Jakschik, J.; Lab. med.8:420-423 [1984]. Dagegen erhält man den günstigsten Bezug auf die tatsächlichen Blutzelleigenschaften nur bei der Methode der Primäreichung mit Frischblut (Gilmer, P.R., et al.; Amer. J.CIin.Path.68 [1977], 185-190). Es sind zur Zeit nun folgende Kontrollmaterialien für hämatologische Laboruntersuchungen bekannt:The problem of ensuring the accuracy and reliability of hematological analyzes is also the task of properly calibrating the analyzers. This problem is really solved only for the photometric determination of the hemoglobin content of blood samples. There are internationally binding standards (WHO standard). For the counting and size determination of the blood cells one works with different device models with regard to the device calibration. To date, only suspensions of latex particles fulfill the important requirement of long-term stability (Jakschik, J .; Lab Med.8: 420-423 [1984].) In contrast, the most favorable reference to the actual blood cell properties is obtained only with the method of primary administration with fresh blood (Gilmer , PR, et al., Amer J.CIin.Path.68 [1977], 185-190) At present, the following control materials for hematological laboratory studies are known:

— Hämoglobinlösungen (Dade Hb-Control)- hemoglobin solutions (Dade Hb-Control)

— Suspensionen stabilisierter Blutzellen (WP G 01 N 206842)- Suspensions of stabilized blood cells (WP G 01 N 206842)

— Suspensionen fixierter Blutzellen (WP A 61 K 2161 93)- Suspensions of fixed blood cells (WP A 61 K 2161 93)

— Suspensionen von biologischen Materialien (z. B. Pollen)- Suspensions of biological materials (eg pollen)

— Suspensionen von künstlich produzierten Partikeln (z. B. Latex) mit blutzellähnlichen Dimensionen (DE-OS 2722897) Hämoglobinlösungen sind Einzelparameter-Kontrollen. Sie gestatten die Kontrolle des Hämoglobingehaltes (Hb) hämolysierter Blutproben. Die als Mehrfachparameter-Kontrollen ausgelegten Suspensionen stabilisierter Erythrozyten ermöglichen erstens eine Prüfung des ganzen Verfahrens der Hämoglobinbestimmung (einschließlich Zell-Lyse); zweitens kann man mit ihrer Hilfe auch die Zählung (RBC) und Volumenmessung (RDV = Volumenverteilungskurve der roten Blutzellen, abgeleitet z. B.:Suspensions of artificially produced particles (eg latex) with blood cell-like dimensions (DE-OS 2722897) Hemoglobin solutions are single-parameter controls. They allow control of the hemoglobin content (Hb) of hemolysed blood samples. Firstly, the suspensions of stabilized erythrocytes designed as multi-parameter controls allow testing of the whole procedure of hemoglobin determination (including cell lysis); secondly, with their help, the count (RBC) and volume measurement (RDV = volume distribution curve of the red blood cells, derived eg:

MC = mittleres Zellvolumen) der Erythrozyten nachvollziehen und drittens die Bestimmung des Hämatokrit (PVC) sowie der abgeleiteten Parameter MCH (mittlerer Hämoglobingehalt des Einzelerythrozyten) und MCHC (mittlere korpuskulare Hämoglobinkonzentration) kontrollieren. Durch Zusatz von fixierten Vogel- oder Säugerblutzellen wird gleichzeitig eine Kontrollmöglichkeit für die Leukozytenzählung (WBC) gegeben. Es wurden auch Verfahren zur Herstellung von Materialien beschrieben, die darüber hinaus noch stabilisierte oder fixierte Thrombozyten zur Kontrolle der Thrombozytenzahl (PBC) und des Thrombozytenvolumens (PVD = Volumenverteilungskurve der Thrombozyten, abgeleitet z.B.: MPV = mittleres Zellvolumen) enthatten (DE-OS 2923957). Die Haltbarkeit all dieser Mehrfachparameter-Kontrollen beträgt maximal 8-12 Wochen. Reine Suspensionen fixierter Blutzellen sind meist als Einzelparameter-Kontrollen im Gebrauch. Sie weisen ebenso wie Hämoglobinlösungen eine Haltbarkeit von über 12 Monaten auf. Eine für die parallele Zählung von Leukozyten und Thrombozyten präparierte Kontrollsuspension aus fixierten Blutzellen wurde mit einer Stabilität von fünf Monaten beschrieben (Lombarts, A.F.P.F., and. Leijnse; Clin.Chim.Acta 130 [1983]; 95-102).MC = average cell volume) of the erythrocytes and, thirdly, the determination of the hematocrit (PVC) and the derived parameters MCH (mean hemoglobin content of the single erythrocyte) and MCHC (mean corpuscular hemoglobin concentration). The addition of frozen avian or mammalian blood cells simultaneously provides a means of controlling the leukocyte count (WBC). Methods have also been described for the preparation of materials which additionally contain stabilized or fixed platelets for controlling the platelet count (PBC) and the platelet volume (PVD = volume distribution curve of the platelets, derived eg: MPV = average cell volume) (DE-OS 2923957) , The shelf life of all these multiple parameter controls is a maximum of 8-12 weeks. Pure suspensions of fixed blood cells are mostly in use as single-parameter controls. Like hemoglobin solutions, they have a shelf life of over 12 months. A fixed blood cell control suspension prepared for parallel counting of leukocytes and platelets has been described to have a stability of five months (Lombarts, A.F.P.F., and Leijnse, Clin.Chim.Acta 130 [1983], 95-102).

Es gibt also keine langzeitstabilen Kontrollmaterialien für hämatologische Mehrfachuntersuchungen. Alle bekannten Mehrfachparameterkontrollen sind nicht langzeitstabil. Und die bekannten langzeitstabilen Kontrollmaterialien erlauben nurdie Kontrolle eines Einzelparameters (z. B. Hämolysat für Hb) oder weniger, auf nur eine Zellart bezogene Parameter (z. B. fixierte Erythrozyten für RBC und MCV).There are therefore no long-term stable control materials for hematological multiple examinations. All known multiple parameter controls are not long-term stable. And the known long-term stable control materials allow only control of a single parameter (eg, hemolysate for Hb) or less, on parameters related to only one cell type (e.g., fixed erythrocytes for RBC and MCV).

Keines der bekannten Kontrollmaterialisten ermöglicht langzeitstabil die gleichzeitige Prüfung von Parametern aller drei Zellsysteme des Blutes (Erythrozyten, Leukozyten, Thrombozyten). Ebenfalls fehlen langzeitstabile Kontrollen für die Parameterkombinationen Erythrozyten/Leukozyten bzw. Erythrozyten/Trombozyten. Weiterhin ist kein Material beschrieben, das für die Kalibrierung mehrerer Meßstrecken von hämatologischen Vielfachanalysatoren bzw. parallel zur Eichung von verschiedenen Einzelparameter-Geräten geeignet wäre.None of the known control materialists allows the long-term stability of the simultaneous testing of parameters of all three cell systems of the blood (erythrocytes, leukocytes, platelets). Long-term stable controls for the parameter combinations erythrocytes / leucocytes or erythrocytes / platelets are also missing. Furthermore, no material is described which would be suitable for the calibration of several measuring sections of hematological multiple analyzers or parallel to the calibration of various single-parameter devices.

Object of the invention

Mit der Schaffung langzeitstabiler Qualitätskontrollen für die hämatologische Mehrfachanalyse wird das bestehende Kontrollregime, das auf dem kontinuierlichen Bezug von nur begrenzt haltoaren Materialien in Abonnementslieferung beruht, wesentlich erweitert und verbessert. Da die deklarierten Sollwerte langzeitstabiler Materialien auch über viele Kontrollperioden hinweg stabil bleiben, wird so die Sicherheit der Analytikerhöht und die Abhängigkeit von zufälligen Fehlern und systematischen Trends der einzelnen, begrenzt haltbaren Kontrollmaterialchargen entscheidend verringert.With the creation of long-term stable quality controls for hematological multiple analysis, the existing control regime, which relies on the continued acquisition of only limited-use materials in subscription delivery, is significantly expanded and improved. As the declared target values of long-term stable materials remain stable over many control periods, the reliability of the analyst and the dependence on random errors and systematic trends of the single, limited shelf life of control material are significantly reduced.

Auf Grund des langfristig stabilen Meßverhaltens der erfindungsgemäßen Materialien sind diese ebenfalls zur Kalibrierung von Meßgeräten einsetzbar. Weiterhin kann mit diesem Material die Qualitätskontrolle hämatologi&cher Parameter auch in kleinen Laboratorien kostengünstig durchgeführt werden.Due to the long-term stable measurement behavior of the materials of the invention, these are also used for the calibration of measuring instruments. Furthermore, the quality control of haematological parameters can also be carried out inexpensively in small laboratories with this material.

Explanation of the essence of the invention

Aufgabe der Erfindung ist es, ein Kontrollmaterial für hämatologische Laboruntersuchungen und Verfahren zu dessen Herstellung zu entwickeln. Dabei soll aus diesem Material die stabile Kontrolle mehrerer Parameter zur Untersuchung verschiedener Blutzellarten über einen Zeitraum von mindestens zwölf Monaten gewährleistet sein. Das Material muß möglichst blutäquivalente Merkmale aufweisen, wie z. B. ähnliche Viskosität und eine gute Resuspendierbarkeit der Partikel. Die Kontrollqualität soll mit dem zu schaffenden Material gegenüber den bisher bekannten langzeitstabilen Einzelparameter-Kontrollen verbessert werden.The object of the invention is to develop a control material for hematological laboratory examinations and methods for its production. It should be ensured from this material, the stable control of several parameters for the study of various blood cell types over a period of at least twelve months. The material must have blood equivalents as possible, such. B. similar viscosity and a good resuspendability of the particles. The control quality should be improved with the material to be created compared to the previously known long-term stable individual parameter controls.

Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe gelöst durch die Verwendung von Hämoglobinlösungen als Suspensionsmedium für fixierte Blutzellen oder andere biologische oder künstliche Partikel, die den Blutzellen vergleichbare Partikelvolumina aufweisen. Damit ist von vornherein die langzeitstabile Kontrolle der Hämoglobinbestimmung als Parameter für die Kenntnis der Erythrozytenkonzentration im Blut sowie die gleichzeitige langfristige stabile Prüfmöglichkeit der Zählung und Volumenmessung wenigstens einer anderen Blutzellart (Leukozyten und/oder Thrombozyten) gegeben. Die zugesetzten Partikel können gehärtete Vogel- oder Säugererythrozyten oder andere Partikel in Leukozytengröße zur Kontrolle der Parameter WBC und WVD (Volumenverteilungskurve der Leukozyten) sein. Ebenfalls ist die Suspendierung von fixierten Thrombozyten oder von kleinen fixierten Säugererythrozyten oder aber von anderen Partikeln in Thrombozytengröße zur gleichzeitigen Kontrolle der Parameter Hb, PBC und PVD möglich. Erfindungsgemäß kann die Kontrollstabilität der genannten Materialien durch Zusätze von Polyäthylenglykol weiter erhöht werden. Gemäß dem Gegenstand der Erfindung wird weiterhin eine bessere Kontrollmöglichkeit der abgeleiteten Parameter der WVD (z. B. Lymphozytenzahl) durch den Einsatz einesAccording to the invention, this object is achieved by the use of hemoglobin solutions as suspension medium for fixed blood cells or other biological or artificial particles which have comparable particle volumes to the blood cells. This is from the outset the long-term stable control of hemoglobin determination as a parameter for the knowledge of the erythrocyte concentration in the blood and the simultaneous long-term stable testing possibility of counting and measuring the volume of at least one other type of blood cell (leucocytes and / or platelets). The added particles may be hardened avian or mammalian erythrocytes or other leukocyte-sized particles to control WBC and WVD (leukocyte volume distribution curve) parameters. It is also possible to suspend fixed platelets or small fixed mammalian erythrocytes or other platelet-sized particles for simultaneous control of Hb, PBC and PVD parameters. According to the invention, the control stability of said materials can be further increased by additions of polyethylene glycol. In accordance with the subject matter of the invention, furthermore, a better control possibility of the derived parameters of the WVD (eg lymphocyte count) by the use of a

Gemisches fixierter Blutzellen oder anderer Partikel in Leukozytengröße erreicht, da so eine der zweigipfligen Volumenverteilungskurve nativer Humanleukozyten weitgehend entsprechende WVD simuliert werden kann. Auch die Kontrollqualität reiner Suspensionen von fixierten Erythrozyten zur Kontrolle der Parameter RBC und RVD wird erfindungsgemäß durch die Verwendung von Hämoglobinlösungen als Suspensionsmedium wesentlich verbessert, da eine leichtere Resuspendierbarkeit des Zellsediments gegeben ist.Mixture of fixed blood cells or other particles in leukocyte size achieved, since so a bimodal volume distribution curve of native human leukocytes largely corresponding WVD can be simulated. The control quality of pure suspensions of fixed erythrocytes for the control of the parameters RBC and RVD is also significantly improved according to the invention by the use of hemoglobin solutions as suspension medium, since there is an easier resuspensibility of the cell sediment.

Im Hinblick auf die Herstellungsverfahren für die genannten langzeitstabilen Kontrollmaterialien für hämatologische Mehrfachuntersuchungen besteht das Wesen der Erfindung in der primären Herstellung blutäquivalent konzentrierter Hämoglobinlösungen aus Säugererythrozyten (speziell Humanerythrozyten). Dabei wird erfindungsgemäß nach Hämolyse der gewaschenen Erythrozyten und Stabilisierung des Hämolysats eine stufenweise oder direkte Ultrafiltration bzw. Zentrifugation des Materials durchgeführt. Hierdurch werden die Membranreste der Erythrozyten bis zu einer minimalen Größe entfernt, die wiederum davon bestimmt wird, welche gehärteten Zellen der Hämoglobinlösung anschließend zugesetzt werden sollen. So muß man für die Herstellung eines Kontrollmaterials, mit dessen Hilfe die Parameter Hb, WBC und WVD geprüft werden, alle Zellreste der hämolysierten Erythrozyten abfiltrieren (bzw. abzentrifugieren), die eine Zählung und Volumenmessung der Leukozyten durch ihre Größe noch beeinträchtigen können. Sollen weiterhin Partikel in Thrombozytengröße zugesetzt werden, so muß man durch die Ultrafiltration (bzw. Zentrifugation) auch alle in der ursprünglichen Hämoglobinlösung enthaltenen Partikel entfernen, die gleich groß oder größer als die kleinsten fixierten Thrombozyten sind.With regard to the manufacturing processes for the long-term stable control materials for hematological multiple examinations, the essence of the invention is the primary production of blood-equivalent concentrated hemoglobin solutions from mammalian erythrocytes (especially human erythrocytes). In this case, according to the invention, after hemolysis of the washed erythrocytes and stabilization of the hemolysate, a stepwise or direct ultrafiltration or centrifugation of the material is carried out. As a result, the membrane residues of the erythrocytes are removed to a minimum size, which in turn is determined by which hardened cells are to be subsequently added to the hemoglobin solution. For example, for the preparation of a control material used to test the parameters Hb, WBC and WVD, it is necessary to filter (or spin off) any cell debris from hemolyzed erythrocytes which may still affect the size and volume of leukocytes by volume. If particles of platelet size are also to be added, ultrafiltration (or centrifugation) must be used to remove all particles in the original hemoglobin solution which are equal to or larger than the smallest fixed platelets.

Embodiment 1

Die Erythrozyten einer Blutkonserve werden in einer geeigneten, nicht lysierenden Pufferlösung mehrmals gewaschen. Das zuletzt verbleibende Erythrozytensediment wird bis zu einem Volumen, das durch die im fertigen Kontrollmaterial gewünschte Hb-Konzentration festzulegen ist, mit destilliertem Wasser aufgefüllt. Dabei ist ebenfalls die nachfolgende Zugabe von Stabilisatoren für das Hämolysat sowie die noch zuzusetzende Menge an Konzentrat gehärteter Zellen oder anderer Partikelsuspensionen zu berücksichtigen. Die Hämolyse der roten Blutzellen kann durch mehrmaliges Einfrieren und Auftauen vervollständigt werden. Nach erfolgter Hämolyse werden dem Hämolysat geeignete Stabilisatoren zugesetzt (z. B. Natriumazid, Natriumnitrit, Di met hy Isu Ifoxid, Kalziumzyanid).The erythrocytes of a blood reserve are washed several times in a suitable, non-lysing buffer solution. The last remaining erythrocyte sediment is made up to a volume to be determined by the Hb concentration desired in the final control material with distilled water. The subsequent addition of stabilizers for the hemolysate and the amount of concentrate of hardened cells or other particle suspensions still to be added must also be taken into account. The hemolysis of the red blood cells can be completed by repeated freezing and thawing. After hemolysis, suitable stabilizers are added to the hemolysate (for example, sodium azide, sodium nitrite, dimethyl hypochlorite, calcium cyanide).

Dann erfolgt die Abtrennung der Membranreste der lysierten roten Blutzellen mittels Ultrafiltration. Für den nachfolgenden Einsatz als kombiniertes Kontrollmaterial der Hb-Bestimmung und der Zählung und Volumenmessung von Leukozyten empfiehlt sich die stufenweise Filtration durch Membranfilter bis zur Porengröße von 0,8 μΐη. Ist eine Abtrennung der Membranreste über Zentrifugation vorgesehen, so kann der Zentrifugationsvorgang dann als abgeschlossen betrachtet werden, wenn in dem Hämolysat mit einem gängigen elektronischen Leukozytenzählverfahren keine Partikel in Leukozytengröße mehr nachweisbar sind. Zum Abschluß der Präparation wird dem Hämolysat eine gewünschte Menge an Partikeln in Leukozytengröße (bezogen auf eine hämolysierte Blutprobe!) zugesetzt. Diese Partikel können sowohl fixierte Human- oder Vogelerythrozyten als auch andere biologische Materialien (z. B. Pollen) oder künstliche Partikel sein. Zur besseren Kontrolle der WVD ist der Einsatz einer Mischpopulation aus zwei im Partikelvolumen verschiedenen Chargen eines Materials möglich.Then, the separation of the membrane residues of the lysed red blood cells by means of ultrafiltration. For the subsequent use as a combined control material for Hb determination and counting and volume measurement of leucocytes, stepwise filtration through membrane filters up to a pore size of 0.8 μΐη is recommended. If a separation of the membrane residues via centrifugation is provided, the centrifugation process can then be considered as complete if no particles in leucocyte size are detectable in the hemolysate with a conventional electronic leukocyte counting method. At the end of the preparation, a desired amount of leukocyte-sized particles (based on a hemolyzed blood sample) is added to the hemolysate. These particles can be either fixed human or avian erythrocytes as well as other biological materials (eg pollen) or artificial particles. For better control of the WVD, it is possible to use a mixed population of two different batches of a material in the particle volume.

Das erhaltene Kontrollmaterial ist bei einer Haltbarkeit von mindestens 12 Monaten zur Prüfung der Parameter Hb, WBC und WVD geeignet. Es wird in allen Verfahrensvarianten wie das als Untersuchungsgut verwendete antikoagulierte Vollblut behandelt. Das beschriebene Kontrollmaterial eignet sich weiterhin zur Kalibrierung von Leukozytenzählgeräten. Hierbei kann die parallel erfolgende Verdünnung des Hämoglobinanteils der Kontrollsuspension als Referenzwert für die Überprüfung von Verdünnungsschritten herangezogen werden.The obtained control material is suitable for testing the parameters Hb, WBC and WVD with a shelf life of at least 12 months. It is treated in all process variants, such as the anticoagulated whole blood used as the examination material. The described control material is also suitable for the calibration of leukocyte counting devices. In this case, the parallel dilution of the hemoglobin content of the control suspension can be used as a reference value for the verification of dilution steps.

Embodiment 2

Bis auf die notwendigen Schritte der Ultrafiltration ist die Herstellung des Hämolysats dem Ausführungsbeispiel 1 zu entnehmen. Für den nachfolgenden Einsatz als kombiniertes Kontrollmaterial der Hb-Bestimmung und der Zählung und Volumenmessung der Thrombozyten muß die stufenweise Filtration um eine weitere Ultrafiltration mit Membranfiltern der Porengröße 0,2μηη ergänzt werden.Except for the necessary steps of ultrafiltration, the preparation of the hemolysate is shown in the embodiment 1. For subsequent use as a combined control material of Hb determination and counting and volume measurement of platelets, the stepwise filtration must be supplemented by a further ultrafiltration with membrane filters of pore size 0.2μηη.

Zum Abschluß der Präparation wird dem Hämolysat eine gewünschte Menge an Partikeln in Thrombozytengröße zugesetzt. Diese Partikel können sowohl fixierte Humanthrombozyten oder Säugererythrozyten als auch andere biologische Materialien oder künstliche Partikel (z. B. Latex) sein. Bei der Verwendung von fixierten Humanthrombozyten werden die Kontrolleigenschaften des Materials verbessert, wenn vor der Zugabe der Partikel im Hämolysat bis zu 20% Polyethylenglykol 6000 gelöst werden.At the conclusion of the preparation, a desired amount of platelet-sized particles is added to the hemolysate. These particles can be either fixed human platelets or mammalian erythrocytes, as well as other biological materials or artificial particles (eg, latex). When using fixed human platelets, the control properties of the material are improved if up to 20% of polyethylene glycol 6000 is dissolved before addition of the particles in the hemolysate.

Das so hergestellte Kontrollmaterial ist bei einer Haltbarkeit von mindestens 12 Monaten zur Prüfung der Parameter Hb, PBC und PVD geeignet. Es wird in allen Verfahrensvarianten der Hb-Bestimmung wie das als Untersuchungsgut verwendete antikoagulierte Vollblut behandelt. Bei der Kontrolle von Verfahren zur Zählung und Volumenmessung von Thrombozyten sind alle Verdünnungsschritte wie beim Vollblut nachvollziehbar, jedoch können Probenvorbereitungsverfahren über Zentrifugation oder Sedimentation nicht in die Prüfung miteinbezogen werden. .The control material produced in this way is suitable for testing the parameters Hb, PBC and PVD with a shelf life of at least 12 months. It is treated in all process variants of the Hb determination as the anticoagulated whole blood used as the examination material. When controlling platelet count and volume measurement procedures, all dilution steps are the same as in whole blood, but sample preparation procedures by centrifugation or sedimentation may not be included in the test. ,

Das beschriebene Kontrollmaterial eignet sich weiterhin zur Kalibrierung von Thrombozytenzählgeräten. Hierbei kann man die parallel erfolgenden Verdünnung des Hämoglobinanteils der Kontrollsuspension als Referenzwert für die Überprüfung von Verdünnungsschritten nutzen.The described control material is also suitable for calibrating platelet counting devices. In this case, it is possible to use the parallel dilution of the hemoglobin content of the control suspension as a reference value for the verification of dilution steps.

Embodiment 3

Durch Zumischen einer gemischten Menge an Partikeln in Leukozytengröße (siehe Ausführungsbeispiel 1) zu einem Kontrollmaterial für die Parameter Hb, PBC und PVD (siehe Ausführungsbeispiel 2) erhält man ein langzeitstabiles Kontrollmaterial für die hämatologischen Untersuchungen zur Bestimmung der Parameter Hb, WBC, WVD, PBC und PVD. Auch dieses Kontrollmaterial ist mindestens für den Zeitraum von 12 Monaten stabil. Alle weiteren Eigenschaften ergeben sich aus Kombination in der in den Ausführungsbeispielen 1 und 2 dargestellten Charakteristika der jeweiligen Kontrollmaterialien.By admixing a mixed amount of leukocyte-sized particles (see Example 1) to a control material for the parameters Hb, PBC and PVD (see Example 2), a long-term stable control material for the hematological examinations for determining the parameters Hb, WBC, WVD, PBC is obtained and PVD. Also, this control material is stable for at least 12 months. All other properties result from combination in the characteristics of the respective control materials shown in the embodiments 1 and 2.

Embodiment 4

Durch Zumischen einer gewünschten Menge an Partikeln in Erythrozytengröße (fixierte Erythrozyten, Pollen, künstliche Partikel) zu einem nach Ausführungsbeispiel 1 hergestellten HSmolysat erhält man ein langzeitstabiles Kontrollmaterial für die Parameter RBC und RVD (speziell MCV). Es ist vorteilhaft, die Hämoglobin konzentration hierbei sehr niedrig zu halten. Die Konzentration der suspendierten Partikel sollte günstigerweise zwischen 2,0 und 3,0Tpt/l betragen. Das Material ist mindestens für 12 Monate stabil. Es eignet sich auch zur Kalibrierung von Geräten zur Erythrozytenzählung und Erythrozytenvolumenmessung.By admixing a desired amount of erythrocyte-sized particles (fixed erythrocytes, pollen, artificial particles) to a HSmolysate prepared according to Example 1, a long-term stable control material for the parameters RBC and RVD (especially MCV) is obtained. It is advantageous to keep the hemoglobin concentration this very low. The concentration of the suspended particles should desirably be between 2.0 and 3.0 t / l. The material is stable for at least 12 months. It is also suitable for calibrating devices for erythrocyte counting and red blood cell volume measurement.

Claims

Claim for invention: ι

1. A long-term stable control material for hematological multiple studies, characterized by the use of stabilized and ultrafiltered or particle-free centrifuged hemoglobin solution as a suspension medium to which fixed blood cells of birds or mammals and / or fixed blood cells of human origin and / or biological or artificial particles of blood cell size are added.

2. Control material according to item 1, characterized in that suspension-stabilizing substances (eg., Polyethylene glycol 6000) are added.

3. Control material according to item 1 and 2, characterized in that for the control of the derived parameters of the leukocyte volume distribution curve (WVD) a mixture of fixed blood cells or other particles in blood cell size is added.

4. A process for the preparation of control material according to items 1, 2 and 3, characterized by primary preparation of blood-equivalent concentrated, stabilized hemoglobin solutions, which are then ultrafiltered or particle-free centrifuged and followed by the required for the control purposes amounts of fixed blood cells or others

'Adds particles in blood cell size.