DD206842A1

DD206842A1 - METHOD FOR PRODUCING A HAEMATOLOGICAL CONTROL MATERIAL

Info

Publication number: DD206842A1
Application number: DD23664182A
Authority: DD
Inventors: Bernd Olesch; Peter Wartig; Kunz Rauschert
Original assignee: Bernd Olesch; Peter Wartig; Kunz Rauschert
Priority date: 1982-01-11
Filing date: 1982-01-11
Publication date: 1984-02-08

Abstract

DIE ERFINDUNG BETRIFFT DIE HERSTELLUNG EINES HAEMATOLOGISCHEN KONTROLLMATERIALS ZUR BESTIMMUNG DER PARAMETER DES ROTEN BLUTBILDES UND DER LEUKOZYTENZAHL MITTELS ELEKTRONISCHEM TEILCHENZAEHLGERAETS.ZIEL DER ERFINDUNG IST DIE VEREINFACHUNG DER HERSTELLUNG. ES WIRD DIE AUFGABE GELOEST,AUF DER BASIS VON HUMANBLUT EINE SUSPENSION MIT STABILEN BESTANDTEILEN, BEI EINHALTUNG DER ERFORDERLICHEN PARAMETER ZU SCHAFFEN. DIE AUFGABE WIRD GELOEST DURCH ABNAHME DES BLUTES AUF EDTA-KONSERVIERUNGSLOESUNG, SEPARIERUNG DER ERYTHROZYTEN, HAERTUNG DER LEUKOZYTEN DES BUFFY- COAT UND EINSTELLUNG DER GEWUENSCHTEN LEUKOZYTENKONZENTRATION DURCH ENTSPRECHENDES MISCHEN MIT DEM NATIVERYTHROZYTENSEDIMENT.The invention relates to the preparation of a hematological control material for the determination of the parameters of the red blood count and the number of leukocycles by means of an electronic particle counting apparatus. The aim of the invention is to simplify the preparation. THE TASK IS ESTABLISHED ON THE BASIS OF HUMAN BLOOD TO PRODUCE A SUSPENSION WITH STABLE COMPONENTS TO COMPLY WITH THE NECESSARY PARAMETERS. THE TASK IS ESTABLISHED BY ACCEPTING THE BLOOD FOR EDTA PRESERVATION SOLUTION, SEPARATING THE ERYTHROCYTES, INHIBITING THE LEUCOCYTES OF THE BUFFY COAT AND ADJUSTING THE DESIRED LEUKOCYTIC CONCENTRATION THROUGH COMPRISING MIXING WITH THE NATIVERYTHROCYTE SEDIMENT.

Description

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Verfahren zur Herstellung eines hämatologischen Kontrollmaterials Method for producing a hematological control material

Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention

Die Erfindung betrifft die Herstellung eines hämatologischen Kontrollmaterials zur Bestimmung der Parameter des rotes Blutbildes und der Leukozytenzahl mittels elektronischer Teilchenzählgeräte.The invention relates to the production of a hematological control material for determining the parameters of the red blood count and the leucocyte count by means of electronic particle counting devices.

Charakteristik der bekannten technischen LösungenCharacteristic of the known technical solutions

Kontrollmaterialien für die Eichung elektronischer Teilchenzählgeräte zur Bestimmung hämatologischer Parameter sowie die Kontrolle der Präzision der mit diesen Geräten erhaltenen Meßergebnisse sind bekannt. Zur Herstellung von geeigneten Standardsuspensionen für die Qualitätskontrolle wurden unterschiedliche Substanzen erprobt, wie z.B. Pollen (GABRIELI, E.R. u. WERiDHEIMBR, M., Amer. J. elin. Path. 36. (1962), 277 - 280, Latexpartikel (SCHEIDT, R.A., Amer. J. elin. Path. ^5 (1961), 293 - 294, andere nicht native Polymerteilchen (HUMMEL, K.A., Bibl. haemat. (Basel) 1_8 (1964), 21 - 22, formalinbehandelte Erythrozyten (BEIiEDEK, E., Bibl. haemat. (Basel) 2_4 (1966) 67 - 70. Die Stabilisierung der Erythrozyten kann nach Entfernung der Leukozyten auch mit Chlorkohlensäureethylester vorgenommen werden (DORHHEIM, G., Z. med. Labortechn. JJ₁ (1970), 148 - 153. Alle diese Präparationen liefern lediglich ein Kontrollmaterial für die Teiichenzählung der Erythrozyten bzw. die erythrozytaren Parameter (RBC, MCH, MCHC, PCY, MCV). Eine gleichzeitige Qualitätskontrolle der Leukozyten-Control materials for the calibration of electronic particle counting devices for the determination of hematological parameters as well as the control of the precision of the measurement results obtained with these devices are known. For the preparation of suitable standard suspensions for quality control, various substances were tested, such as pollen (GABRIELI, ER and WERiDHEIMBR, M., Amer J. Elin, Path., 36. (1962), 277-280, latex particles (SCHEIDT, RA Amer. J. elin. Path. ^ 5 (1961), 293-294, other non-native polymer particles (HUMMEL, KA, Bibl. Haemat. (Basel) 1_8 (1964), 21-22, formalin-treated erythrocytes (BEIiEDEK, E , Bibl. Haemat. (Basel) 2_4 (1966) 67-70. The erythrocytes can also be stabilized after removal of the leucocytes with chloroformate (DORHHEIM, G., Z. med., Laboratory Techn., JJ ₁ (1970), 148) - 153. All these preparations provide only a control material for the counting of erythrocytes or the erythrocytic parameters (RBC, MCH, MCHC, PCY, MCV).

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zahlen (WBC) wurde durch Zumischen von fixierten Vogelerythrozyten zur stabilisierten Erythrozytensuspension nach Entfernen der Leukozyten erreicht (z.B. DADE CH-60) oder, wie in DE-OS 2830524 beschrieben, indem eine mittels Polyoxyethylen-20-sorbitanmonolaureat behandelte Vollblutprobe mit Formaldehydlösung bei 55° G bis 62⁰G 2 Minuten lang inkubiert wird. Sin Kontrollmaterial für die hämatologische Qualitätskontrolle mittels elektronischer Teilchenzählgeräte, das auch die Thrombozyten erfaßt, wird nach DE-OS 2923957 durch Zumischen einer mit Harnstoff behandelten Thrombozytensuspension zu einem im Handel erhältlichen Kontrollreagenz (BAIiER Haem-G, DADE CH-60 oder COULTER 4 G) erhalten. Auch die separate Herstellung eines Leukozytenstandards durch Pixierung von Humanleukozyten mit Glutaraldehyd wurde beschrieben (ΈΤΕΤΗΑΕΟΈΰ,D· u» PETCHCLAT, B., Amer. J. elin. Path. 63. (1975), 32 - 34. Die oben beschriebenen Verfahren erfassen entweder nur die Erythrozyten als Blutzellen oder sind wegen der angestrebten Universalität der Anwendung der nach ihnen hergestellten Kontrollmaterialien für elektronische Teilchenzählgeräte, die neben den Parametern des roten Blutbildes auch Leukozyten und Thrombozyten umfassen, vergleichsweise aufwendig.(WBC) was achieved by admixing fixed avian erythrocytes to the stabilized erythrocyte suspension after removal of the leukocytes (eg DADE CH-60) or, as described in DE-OS 2830524, by using a polyoxyethylene 20 sorbitan monolaureat treated whole blood sample with formaldehyde solution at 55 ° G is incubated to 62 ⁰ G for 2 minutes. Sin control material for hematological quality control by electronic particle counting devices, which also detects the platelets, according to DE-OS 2923957 by admixing a treated with urea platelet suspension to a commercially available control reagent (BAIiER Haem-G, DADE CH-60 or COULTER 4 G) receive. Also, the separate production of a leukocyte standard by glutaraldehyde human leukocyte ligation has been described ( ΈΤΕΤΗΑΕΟΈΰ, D ·u », PETCHCLAT, B., Amer J. Elin, Path., 63, (1975), 32-34.) The methods described above are either only the erythrocytes as blood cells or are because of the desired universality of the application of the control materials prepared for them for electronic particle counting devices, which include in addition to the parameters of the red blood cell also leukocytes and platelets, relatively expensive.

Ziel der ErfindungObject of the invention

Die Erfindung hat den Zweck, ein Kontrollmaterial für die hämatologische Analytik mittels elektronischer Teilchenzähl- geräte ohne Thrombozytenzählung in einem einfachen Verfahren herzustellen und die Qualität hämatologischer Untersuchungen zu erhöhen. .The invention has the purpose of producing a control material for hematological analysis by means of electronic particle counting devices without platelet counting in a simple process and to increase the quality of hematological examinations. ,

Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, auf der Basis von Humanblut ein Kontrollmaterial für die Parameter RBC, HB, PCV, MCV, MCHC, RVD-und WBC herzustellen, das direkt verwendbar istThe invention is based on the object of producing, on the basis of human blood, a control material for the parameters RBC, HB, PCV, MCV, MCHC, RVD and WBC which is directly usable

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und dessen Bestandteile nicht zur Aggregation oder Agglutination -neigen, leicht suspendierbar und stabil sind. Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe dadurch gelöst, daß auf EDIA-Stabilisator agenommenes Humanblut zentrifugiert, Plasma und Buffy-coat separat entfernt werden, das Buffycoat, das noch viele Erythrozyten enthält, zentrifugiert und der Überstand verworfen wird, das Sediment in Erythrozytenkonservierungslösung aufgeschwemmt und mit Fonnalin-Natriumchlorid-Lösung zur Fixierung der Leukozyten versetzt wird· Die fixierten Leukozyten werden gewaschen und mit Thiomersal enthaltender Erythrozytenkonservierungslösung aufgeschwemmt. Diese Suspension gehorteter Leukozyten wird mit dem Erythrozytensediment, das von der Konservierungslösung und Resten des Buffy-coat befreit wurde, im gewünschten Mischungsverhältnis vereinigt. Das so gewonnene Material wird nach gründlicher Durchmischung in kalt sterilisierte Plaströhrchen abgefüllt. Alle Arbeiten v/erden im aseptischen Arbeitsraum durchgeführt. Die Erfindung wird nachfolgend durch ein Ausführungsbeispiel erläutert, aber nicht eingeschränkt.and its components are not prone to aggregation or agglutination, are easily suspendable and stable. According to the invention, this object is achieved by centrifuging human blood taken on EDIA stabilizer, removing plasma and buffy coat separately, centrifuging the buffy coat, which still contains many erythrocytes, and discarding the supernatant, flooding the sediment into erythrocyte preservation solution and using Fonnalin. Sodium chloride solution is added to fix the leukocytes. The fixed leukocytes are washed and flooded with thiomersal-containing erythrocyte preservation solution. This suspension of hoarded leukocytes is combined with the erythrocyte sediment which has been freed from the preservation solution and residues of the buffy coat in the desired mixing ratio. The material thus obtained is filled after thorough mixing in cold sterilized Plaströhrchen. All work is carried out in the aseptic workroom. The invention is explained below by an embodiment, but not limited.

Ausführungsbeispielembodiment

Auf EDTA-Stabilisator abgenommenes Humanblut (1 Teil Stabilisatorlösung und 8 Teile Blut) wird spätestens 1 h nach der Abnahme in einer Kühlzentrifuge K 70 bei 1800 U min ' und 4° C 30 min zentrifugiert. Anschließend wird das Plasma zur Weiterverarbeitung entfernt und das Buff-Goat von mehreren Bluten in einer 500-ml-Blutkonservenflasche gesammelt. Die l/lischung enthält noch sehr viele Erythrozyten. Die Leukozyten - Thrombozyten - Erythrozyten- Mischung wird bei 1800 U min "¹ und 4° G in einer K 70-Zentrifuge 30 min zentrifugiert. Der Überstand wird verworfen, das Sediment in 100 ml Erythrozyten-Konservierungslösung aufgeschwemmt und mit der gleichen Menge FOrmalin-KaCl-Gemisch (1 Teil 30 proz< Formalin und 3 Teile 0,9 proz. NaGl-Lösung) versetzt. An-Human blood taken from EDTA stabilizer (1 part stabilizer solution and 8 parts blood) is centrifuged at 1800 rpm and 4 ° C. for 30 minutes at the latest 1 h after collection in a refrigerated centrifuge K 70. Subsequently, the plasma is removed for further processing and the buff-goat is collected from several bleeds in a 500 ml blood-conserving bottle. The oil mixture still contains many erythrocytes. The leukocyte-platelet-red cell mixture is centrifuged for 30 minutes at 1800 rpm " ¹ and 4 ° C. in a K 70 centrifuge, the supernatant is discarded, the sediment is suspended in 100 ml of erythrocyte preservation solution and washed with the same amount of formolin. KaCl mixture (1 part 30 percent formalin and 3 parts 0.9 percent NaGl solution).

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schließend erfolgt eine Inkubation für 20 h im. Wasserbad bei 37° C, Nach Härtung der zellulären Bestandteile werden diese dreimal mit ,je 400 ml 0,9 proz. Na-Cl-Lösung gewaschen«, Das gewaschene Sediment v/ird mit 400 ml Erythrozytenkonser^/ierungslösung, der 200 mg Thiomersal zugegeben wurden, aufgeschwemmt. Man bestimmt die Leukozytenzahl (WBC) des Sediments und nimmt eine solche Verdünnung' mit o.g. Konservierungslösung vor, daß die Endkonzentration an Leukozyten nach Mischung mit dem buffycoat-freien Erythrozytensediment im gewünschten Bereich liegt. Letzteres wird vor der Vereinigung mit der Leukozytensuspension von der Konservierungslösung befreit, wobei noch vorhandene Reste an Buffy-coat mit entfernt werden. Zur Erzielung einer Leukozytenkonzentration von 5000 bis S000/ul werden 200 ml Erythrozytensediment und 100 ml Leukozytensuspension vereinigt. Nach gründlichem Durchmischen wird das so gewonnene Kontrollmaterial in mittels Ethylenoxid sterilisierten Plaströhrchen mit Stopfen in Portionen von 5 bis 8 ml abgefüllt. Das Kontrollmaterial ist bei 4° C mindestens 48 d haltbar. Dabei weisen die' Parameter RBC, PCV,. MCV, MCH, MCHC, HB, RVD sowie WBC eine zeitliche Konstanz im Rahmen der Präzision der elektronischen Teilchenzählgeräte und Analysenautomaten, z.B. Hämatologischer Analysenautomat PHiI-1, auf.closing followed by incubation for 20 h in. Water bath at 37 ° C, After curing of the cellular components, these are three times with, each 400 ml 0.9 percent. The washed sediment is washed up with 400 ml of erythrocyte preservative solution to which 200 mg of thiomersal have been added. Determine the leukocyte count (WBC) of the sediment and take such a dilution 'with o.g. Preservation solution that the final concentration of leukocytes after mixing with the buffycoat-free erythrocyte sediment is in the desired range. The latter is freed from the preservation solution before being combined with the leukocyte suspension, while remaining residues of buffy coat are also removed. To obtain a leukocyte concentration of 5000 to S000 / μl, 200 ml of erythrocyte sediment and 100 ml of leukocyte suspension are combined. After thorough mixing, the control material thus obtained is filled in ethylene oxide-sterilized tubes with plugs in portions of 5 to 8 ml. The control material is stable for at least 48 d at 4 ° C. The 'parameters RBC, PCV,. MCV, MCH, MCHC, HB, RVD and WBC have a temporal consistency within the precision of the electronic particle counting and analyzing machines, e.g. Hematological analyzer PHiI-1, on.

Claims

238-641 δ 5 claim for invention.

1. A process for the preparation of a control material for hematological analysis by means of electronic ueilchenzählgeräte and analysis machines on the basis of a human Nativblutes, characterized in that whole blood is taken on conventional EDTA preservation solution, the erythrocytes are separated and freed from buffy coat, the leukocytes of the buffy coat with pormalin-sodium chloride solution and combined to set the desired leukocyte concentration with the U-lot red cell sediment.

Method according to item 1, characterized in that the leukocyte hardening with pormalin-sodium chloride is carried out at 37 ° C for 20 h,

3 «procedure. Item 1, characterized in that the control material is produced with regard to the erythrocytic parameters and the leucocyte number both for the normal and for any pathological areas *