DD237223A1 - TEST STRIP FOR DETERMINING THE ETHANOL CONTENT IN LIQUIDS AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF - Google Patents
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- DD237223A1 DD237223A1 DD27622485A DD27622485A DD237223A1 DD 237223 A1 DD237223 A1 DD 237223A1 DD 27622485 A DD27622485 A DD 27622485A DD 27622485 A DD27622485 A DD 27622485A DD 237223 A1 DD237223 A1 DD 237223A1
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Abstract
Die Erfindung betrifft einen Teststreifen zur Bestimmung des Ethanolgehaltes insbesondere in einer biologischen Koerperfluessigkeit. Die Erfindung ermoeglicht ohne apparative Voraussetzungen an jedem beliebigen Einsatzort im Routinebetrieb den Ethanolgehalt zu bestimmen und gilt auch fuer schwerverletzte oder bewusstlose Patienten. Der erfindungsgemaesse Teststreifen ist gekennzeichnet durch ein saugfaehiges Material, das mit Reagenzien impraegniert ist, die Umsetzung von Ethanol zu Acetaldehyd und die anschliessend ausgewertete Farbreaktion, die Formazanbildung, bewirken. Als Reagenzien dienen Alkoholdehydrogenase (ADH), gegebenenfalls ADH-Inhibitoren, Nikotinadenindinukleotid, Tetrazoliumsalze, Meldolablau oder aehnliche Verbindungen der allgemeinen Formel I und Puffer (p H 5 bis 9) sowie falls benoetigt, Antioxydationsmittel, Netzmittel und Mittel zur Verhinderung eines chromatographischen Effektes. Hauptanwendungsgebiet der Erfindung ist die Medizin, insbesondere fuer klinische und forensische Probleme, z. B. Verkehrspolizei, und verwandte Grenzgebiete. Formel IThe invention relates to a test strip for determining the ethanol content, in particular in a biological body fluid. The invention makes it possible to determine the ethanol content without any equipment requirements at any location in routine operation and also applies to seriously injured or unconscious patients. The test strip according to the invention is characterized by an absorbent material which has been impregnated with reagents, the conversion of ethanol to acetaldehyde and the subsequently evaluated color reaction, the formazan formation. The reagents used are alcohol dehydrogenase (ADH), optionally ADH inhibitors, nicotinic adenine dinucleotide, tetrazolium salts, Meldolablau or similar compounds of general formula I and buffer (p H 5 to 9) and if necessary, antioxidants, wetting agents and means for preventing a chromatographic effect. Main field of application of the invention is medicine, especially for clinical and forensic problems, eg. B. traffic police, and related border areas. Formula I
Description
in der R ein Sauerstoffatom oder eine GruppeR is an oxygen atom or a group
in der R1 und R2 unabhängig voneinander je ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe bedeuten, X ein Sauerstoff- oder Schwefelatom und Y ein Wasserstoffatom oder eine OH-Gruppe bedeutet, handelt.wherein R 1 and R 2 each independently represent a hydrogen atom or an alkyl group, X represents an oxygen or sulfur atom and Y represents a hydrogen atom or an OH group is.
3. Teststreifen nach Punkt 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Teststreifen zusätzlich einen durch Imprägnieren des saugfähigen Materials mit einem ADH-Inhibitor, insbesondere Pyrazol, erhaltenen trockenen Rückstand enthält.3. test strip according to item 1 and 2, characterized in that the test strip additionally contains a obtained by impregnating the absorbent material with an ADH inhibitor, in particular pyrazole, dry residue.
4. Teststreifen nach Punkt 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß der Teststreifen zusätzlich einen durch Imprägnieren eines saugfähigen Materials mit4. test strip according to item 1 to 3, characterized in that the test strip additionally by impregnating an absorbent material with
(1) einem nichtionischen Netzmittel, insbesondere Tween 80 oder Triton X 100 und/oder(1) a nonionic wetting agent, in particular Tween 80 or Triton X 100 and / or
(2) einem Mittel zur Verhinderung eines chromatographischen Effektes und/oder(2) a means for preventing a chromatographic effect and / or
(3) einem Antioxydationsmittel erhaltenen trockenen Rückstand enthält.(3) a dry residue obtained from an antioxidant.
5. Teststreifen nach Punkt 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß der Teststreifen einen durch Imprägnieren des saugfähigen Materials mit einem Mittel zur Verbesserung der Auflösung derTetrazoliumsalze, insbesondere Dimethylformamid, erhaltenen trockenen Rückstand enthäit.5. Test strip according to items 1 to 4, characterized in that the test strip contains a dry residue obtained by impregnating the absorbent material with a composition for improving the dissolution of the tetrazolium salts, in particular dimethylformamide.
6. Teststreifen nach Punkt 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß der Teststreifen einen durch Imprägnieren des saugfähigen Materials mit einem Phosphatpuffer pH 5,5, der die Auflösung der Tetrazoliumsalze verbessert, erhaltenen trockenen Rückstand enthält.6. Test strip according to items 1 to 5, characterized in that the test strip contains a dry residue obtained by impregnating the absorbent material with a phosphate buffer pH 5.5, which improves the resolution of the tetrazolium salts.
7. Teststreifen nach Punkt 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß das saugfähige Material aus Papier, cellulosischen Fasern für die Papierherstellung, Polymere, Gelschichten oder Kombinationen dieser Materialien besteht, wobei auch spezielle Vorbehandlungen mit eingeschlossen werden.7. Test strip according to item 1 to 6, characterized in that the absorbent material consists of paper, cellulosic fibers for papermaking, polymers, gel layers or combinations of these materials, including special pre-treatments are included.
8. Verfahren nach Punkt ι dis 7, dadurch gekennzeichnet, daß die Tränkung des saugfähigen Materials mit mindestens zwei Tränklösungen getrennt voneinander an im wesentlichen getrennten, sich nicht berührenden Stellen erfolgt.8. The method according to point ι dis 7, characterized in that the impregnation of the absorbent material with at least two impregnation solutions separated from each other at substantially separate, non-contacting points takes place.
9. Verfahren nach Punkt 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß die Tränkung des saugfähigen Materials mit einer einzigen Tränklösung oder mehreren Tränklösungen hintereinander an ein- und derselben Stelle vorgenommen wird.9. The method according to item 1 to 7, characterized in that the impregnation of the absorbent material with a single impregnation solution or several impregnation solutions is carried out one behind the other at one and the same point.
Die Erfindung betrifft einen Teststreifen zur einfachen und schnellen Bestimmung des Ethanolgehaltes in Flüssigkeiten, insbesondere in biologischen Körperflüssigkeiten.The invention relates to a test strip for the simple and rapid determination of the ethanol content in liquids, in particular in biological body fluids.
Verfahren zur Schnellbestimmung des Ethanolgehaltes sind bekannt. Sie beruhen fast überwiegend auf der Bestimmung des Ethanolgehaltes in der Ausatemluft. Alle Verfahren, die bis jetzt bekannt sind, weisen mehrere Nachteile auf.Methods for rapid determination of the ethanol content are known. They are based almost exclusively on the determination of the ethanol content in the exhaled air. All of the methods known so far have several disadvantages.
Die Atem-Ethanol-Prüfröhrchen sind umständlich in der Handhabung, erlauben nur eine grobe Einschätzung des Ethanolgehaltes, sind bei schwerverletzten, bewußtseinsgetrübten oder bewußtlosen Patienten nicht einsetzbar, da sie eine aktive Mitarbeiterfordern. Sie sind nur für eine einmalige Anwendung geeignet, so daß ihr Einsatz in großer Anzahl beträchtliche Kosten verursacht.The breath-ethanol test tubes are cumbersome to handle, allow only a rough estimate of the ethanol content, are not applicable to seriously injured, unconscious or unconscious patients, as they require an active employee. They are only suitable for a single use, so that their use in large numbers causes considerable costs.
Außerdem ist in der Praxis der gesetzmäßige Zusammenhang zwischen Ethanolgehalt der Ausatemluft und dem eigentlich interessierenden Blutethanolspiegel beim Atem-Ethanol-Prüfröhrchen nicht immer in ausreichendem Maße gegeben. Dieser Nachteil kann durch Infrarot-Meßgeräte, die die Ethanolkonzentration in ausgeatmeter tiefer Lungenluft messen, weitgehend vermieden werden. Diese Ethanolbestimmung erfolgt zwar schnell und genau, erfordert aber eine aktive Teilnahme des Patienten.In addition, in practice, the legal relationship between the ethanol content of the exhaled air and the actually interesting Blutethanolspiegel the respiratory ethanol test tube is not always given sufficiently. This disadvantage can be largely avoided by infrared measuring instruments that measure the ethanol concentration in exhaled deep lung air. Although this ethanol determination is fast and accurate, but requires active participation of the patient.
Ein weiterer erheblicher Nachteil dieser Infrarot-Meßgeräte besteht im hohen Anschaffungspreis.Another significant disadvantage of these infrared measuring instruments is the high purchase price.
Die Bestimmung des Ethanolgehaltes in der flüssigen Phase erfordert bei den bisher bekannten Verfahren neben einer relativ langen Analysendauer bestimmte apparative Voraussetzungen, die e'men Transport der Geräte von Emsatzort zu Finsatzort äußerst erschweren bzw. verhindern. Ebenfalls treten hohe Anschaffungskosten für diese Geräte auf.The determination of the ethanol content in the liquid phase requires in the hitherto known methods in addition to a relatively long analysis time certain apparatus requirements that complicate e'men transport devices from Emsatzort to Finsatzort extremely difficult or prevent. There are also high initial costs for these devices.
Bekannt ist ein Teststreifen zur Bestimmung des Ethanolgehaltes, der die oben beschriebenen Nachteile vermeidet, wie z.B.A test strip is known for the determination of the ethanol content, which avoids the disadvantages described above, such as e.g.
nicht ausreichende oder zu grobe Differenzierung des Ethanolgehaltes, hoher Anschaffungspreis und den teilweise nur stationär möglichen Einsatz. Die Ethanolkonzentration wird hier über eine Farbreaktion, bei der Tetrazoliumsalze zu stark gefärbten Formazan-Farbstoffen reduziert werden, bestimmt. Eine entscheidende Rolle spielt bei diesem Teststreifen das Enzym Diaphorase, das die Umsetzung der Tetrazoliumsalze zu den Formazanen bewirkt. Diese Diaphorase ist bereits bei Zimmertemperatur von beschränkter Haltbarkeit und sehr teuer, so daß eine Substitution der Diaphorase durch einen anderen Elektronenüberträger mit günstigeren Eigenschaften hinsichtlich Haltbarkeit bei Raumtemperatur und geringeren Kosten erforderlich ist.Insufficient or too coarse differentiation of the ethanol content, high purchase price and sometimes only stationary possible use. The ethanol concentration is determined here by a color reaction in which tetrazolium salts are reduced to strongly colored formazan dyes. A crucial role in this test strip is the enzyme diaphorase, which causes the conversion of tetrazolium salts to formazans. This diaphorase is already at room temperature of limited durability and very expensive, so that a substitution of Diaphorase by another electron transfer agent with more favorable properties in terms of durability at room temperature and lower cost is required.
Weiterhin sind Versuche bekannt, unter Verwendung von Phenazinmethosulfat (PMS) geeignete Teststreifen zur Ethanolbestimmung herzustellen, die jedoch keine befriedigenden Ergebnisse brachten. Phenazinmethosulfat verliert innerhalb von 14 Tagen bei Lichteinwirkung 70 bis 80% seiner Wirksamkeit, so daß die Herstellung eines geeigneten Teststreifens, der bereits alle für eine Farbreaktion nötigen Reagenzien enthält, nicht möglich ist.Furthermore, experiments are known using phenazine methosulfate (PMS) to produce suitable test strips for ethanol determination, but did not bring satisfactory results. Phenazine methosulfate loses within 14 days of exposure to light 70 to 80% of its effectiveness, so that the preparation of a suitable test strip, which already contains all the reagents necessary for a color reaction, is not possible.
Ziel der Erfindung ist die Schaffung eines Teststreifens zur schnellen Bestimmung des Ethanolgehaltes in Flüssigkeiten, insbesondere Körperflüssigkeiten, wie z. B. Speichel, Harn, Serum, Plasma, Blut usw., welcher eine hohe diagnostische Relevanz in der Notfalldiagnostik bei Ethanolbeteiligung oder zum Ausschluß einer Ethanolbeteiligung aufweist und damit der qualitativen Verbesserung der medizinischen Betreuung dient.The aim of the invention is to provide a test strip for rapid determination of the ethanol content in liquids, in particular body fluids such. As saliva, urine, serum, plasma, blood, etc., which has a high diagnostic relevance in emergency diagnostics in ethanol involvement or to the exclusion of ethanol participation and thus serves the qualitative improvement of medical care.
Eine weitere Bedeutung des Teststreifens, gemäß der Zielstellung ist für forensische Belange vorhanden. So benötigt die Verkehrspolizei Hilfsmittel zur schnellen und genauen Feststellung des Alkoholisierungsgrades verdächtiger Verkehrsteilnehmer.Another meaning of the test strip, according to the objective is available for forensic matters. For example, the traffic police need tools to quickly and accurately determine the degree of alcoholism of suspicious road users.
Die Erfindung stellt sich die Aufgabe, einen Teststreifen zu schaffen, der bei Anwendung an jedem beliebigen Einsatzort eine diagnostisch spezifische, empfindliche, schnelle und einfache Bestimmung des Ethanolgehaltes gestattet unter Verwendung von Reagenzien, die bei großer Haltbarkeit unter Einsatzbedingungen ständig zur Verfügung stehen bzw. billig auf einfachem Weg hergestellt werden könnenThe object of the invention is to provide a test strip which, when used at any place of use, allows a diagnostically specific, sensitive, rapid and simple determination of the ethanol content using reagents that are constantly available or inexpensive at high durability under conditions of use can be made in a simple way
Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß Verbindungen der allgemeinen Formel According to the invention the object is achieved in that compounds of the general formula
in der R ein Sauerstoffatom oder eine GruppeR is an oxygen atom or a group
in der R1 und R2 unabhängig voneinander je ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe bedeuten kann, X ein Sauerstoff- oder Schwefelatom und Y ein Η-Atom oder eine OH-Gruppe bedeuten, als Elektronenüberträger von großer Stabilität beiin which R 1 and R 2 independently of one another can denote a hydrogen atom or an alkyl group, X represents an oxygen or sulfur atom and Y denotes an Η-atom or an OH-group, as electron transfer agent of great stability
Raumtemperatur und gegenüber Licht für die Farbreaktion Tetra^oliumsaiz zu Formazonfarbstoff bei der Ethanolbestimmung eingesetzt werden. Bevorzugt werden diejenigen Verbindungen der obigen allgemeinen Form el, in denen R1 und R2 eine Methylgruppe und X ein Sauerstoffatom ist.Room temperature and compared to light for the color reaction tetra-olazole to formazonfarbstoff be used in the ethanol determination. Preferred are those compounds of the above general formula el in which R 1 and R 2 are a methyl group and X is an oxygen atom.
Die erfindungsgemäß verwendeten Verbindungen besitzen einen Benzolring in Stellung 2,3 bzw. 2,1 des Phenoxazin- bzw.The compounds used in the invention have a benzene ring in position 2,3 or 2,1 of the phenoxazine or
Phenthiazinringgerüstes, der durch eine OH-Gruppe substituiert sein kann, die vorzugsweise in Position 2' oder 3' steht.Phenthiazine ring skeleton which may be substituted by an OH group which is preferably in position 2 'or 3'.
Erfindungsgemäß bevorzugte Verbindungen sind das 7-Dimethylamino- 1,2-bezonphenoxazin (Meldolablau),7-Dimethylamino-2'-hydroxy-1,2-benzophenoxazin, T-Dimethylamino-S'-hydroxy-i^-benzophenoxazin, 7-Amino-1,2-benzophenoxazin, 2,3-Benzophenoxazin und 7-Dimethylamino-1,2-benzophenthiazin.Compounds preferred according to the invention are 7-dimethylamino-1,2-bezonphenoxazine (Meldola blue), 7-dimethylamino-2'-hydroxy-1,2-benzophenoxazine, T-dimethylamino-S'-hydroxy-1,2-benzophenoxazine, 7-amino 1,2-benzophenoxazine, 2,3-benzophenoxazine and 7-dimethylamino-1,2-benzophenthiazine.
Das erfindungsgemäße Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß als Elektronenüberträger Meldolablau (7-Dimethylamino-1,2-benzophenoxazin) oder eine andere vorhergehend definierte Verbindung zur Anwendung kommt und wird in Konzentrationen von etwa 0,0001 bis etwa 0,020 Gewichtsteilen, vorzugsweise etwa 0,00015 bis 0,006 Gewichtsteilen, bezogen auf 100 Teile wäßriger Lösung bzw. Pufferlösung verwendet.The process according to the invention is characterized in that the electron transfer agent used is meldola blue (7-dimethylamino-1,2-benzophenoxazine) or another previously defined compound and is used in concentrations of about 0.0001 to about 0.020 parts by weight, preferably about 0.00015 used to 0.006 parts by weight, based on 100 parts of aqueous solution or buffer solution.
Das zweite Reagenz, das zur Herstellung der erfindungsgemäßen Teststreifen verwendet wird, ist ein Tetrazoliumsalz. Diese Elektronenträgerkomponente verleiht der Fläche des Teststreifens, die letztlich mit der Untersuchungsprobe behandelt wird, eine Farbe (Formazanfarbstoff) derart variierender Intensität, daß sich hierdurch die Konzentration des Ethanols ermitteln läßt.The second reagent used to prepare the test strips of the invention is a tetrazolium salt. This electron carrier component imparts a color (formazan dye) of varying intensity to the area of the test strip which is ultimately treated with the test sample in order to determine the concentration of the ethanol.
Geeignete Salze sind beispielsweise MTT [3-(4,5-Dimethylthiazolyl-2)-2,5-diphenyltetrazolium], JNT[2-(4-Jodphenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyltetrazolium],TTC[2,3,5-Triphenyltetrazolium], Nitroblautetrazolium, Blautetrazolium u.dgl.Suitable salts are, for example, MTT [3- (4,5-dimethylthiazolyl-2) -2,5-diphenyltetrazolium], JNT [2- (4-iodophenyl) -3- (4-nitrophenyl) -5-phenyltetrazolium], TTC [ 2,3,5-triphenyltetrazolium], nitroblue tetrazolium, blue tetrazolium and the like.
Diese Salze werden der Tränklösung in Konzentrationen von etwa 0,01 bis etwa 0,5 Gewichtsteilen, vorzugsweise 0,05 bis 0,2 Gewichtsteilen zugesetzt, und zwar bezogen auf 100 Teile wäßriger Lösung bzw. Pufferlösung. Die Löslichkeit der Tetrazoliumsalze in der Tränklösung kann durch Zusatz geeigneter Löslichkeitsverbesserer, wie beispielsweise Dimethylformamid u. dgl. in Konzentrationen von etwa 0,1 bis etwa 5,0 Gewichtsteilen, vorzugsweise etwa 0,5 bis 4,0 Gewichtsteilen, bezogen auf 100 Teile wäßriger Lösung bzw. Pufferlösung erhöht werden.These salts are added to the impregnating solution in concentrations of about 0.01 to about 0.5 parts by weight, preferably 0.05 to 0.2 parts by weight, based on 100 parts of aqueous solution or buffer solution. The solubility of the tetrazolium salts in the impregnation solution can be improved by addition of suitable solubility improvers, such as, for example, dimethylformamide and the like. Like. In concentrations of about 0.1 to about 5.0 parts by weight, preferably about 0.5 to 4.0 parts by weight, based on 100 parts of aqueous solution or buffer solution can be increased.
Es findet folgender Reaktionsablauf statt:The following reaction sequence takes place:
ithanol + NAD AOIH4 Acetaldehyd + NADH + H + HADH + HTT + H + . Hsldolablag. MAD+ + Formazanethanol + NAD AOIH 4 acetaldehyde + NADH + H + HADH + HTT + H + . Hsldolablag. MAD + + formazan
Obiger Gleichung ist zu entnehmen, daß außerdem für die erfindungsgemäßen Teststreifen das Enzym Alkoholdehydrogenase zur Anwendung kommt, das im folgenden als ADH bezeichnet wird.It can be seen from the above equation that, in addition, for the test strips according to the invention, the enzyme alcohol dehydrogenase is used, which is referred to below as ADH.
Es wird in Konzentrationen im Bereich zwischen 0,01 bis 2,0 Gewichtsteilen, bezogen auf 100 Teile wäßriger Lösung bzw. Pufferlösung verwendet.It is used in concentrations in the range of 0.01 to 2.0 parts by weight based on 100 parts of aqueous solution or buffer solution.
Ein weiteres Reagenz des erfindungsgemäßen Teststreifens ist Nikotinamidadenindinukleotid, das im folgenden als NAD bezeichnet wird. Es wird in Konzentrationen im Bereich zwischen 0,1 bis 2,0 Gewichtsteilen, vorzugsweise von 0,2 bis 1,0 Gewichtsteilen, bezogen auf 100 Teile wäßriger Lösung bzw. Pufferlösung, verwendet. Dieses Reagenz wirkt als Oxydationsmittel, welches das Tetrazoliumsalz NADH in den gefärbten Formazanfarbstoff umwandelt, wobei es selbst in reduziertes NAD (NADH) übergeht.Another reagent of the test strip of the invention is nicotinamide adenine dinucleotide, which will be referred to as NAD hereinafter. It is used in concentrations ranging from 0.1 to 2.0 parts by weight, preferably from 0.2 to 1.0 parts by weight, based on 100 parts of aqueous solution or buffer solution. This reagent acts as an oxidizing agent that converts the tetrazolium salt NADH into the colored formazan dye, thereby transforming itself into reduced NAD (NADH).
Für eine bessere farbliche Differenzierung von unterschiedlichen Ethanolkonzentrationen, insbesondere oberhalb 0,5mg Ethanol/g der Flüssigkeitsprobe, wird die zusätzliche Anwesenheit von kompetitiven Inhibitoren für die enzymatische Reduktion des Ethanols zu Acetaldehyd vorgeschlagen. Derartige Inhibitoren sind bekannt.For a better color differentiation of different ethanol concentrations, in particular above 0.5 mg ethanol / g of the liquid sample, the additional presence of competitive inhibitors for the enzymatic reduction of the ethanol to acetaldehyde is proposed. Such inhibitors are known.
Es handelt sich dabei um chemische Verbindungen, wie beispielsweise Pyrazol, 4-Methylpyrazol, 4-Brompyrazol, 4-Jodpyrazol, Ethanolamin, Tribrommethanol, 5-Hydroxymethylfurfurol, 1,2-Propandiol, 3-o-Toloxy-1,2-propandiol, o-Phenanthrolin, Äthylendiamintetraessigsäure, Natriumazid, Natriumsulfid u.dgl.These are chemical compounds such as pyrazole, 4-methylpyrazole, 4-bromopyrazole, 4-iodopyrazole, ethanolamine, tribromethanol, 5-hydroxymethylfurfurol, 1,2-propanediol, 3-o-toloxy-1,2-propanediol, o-phenanthroline, ethylenediaminetetraacetic acid, sodium azide, sodium sulfide and the like.
Diese Inhibitoren können in Mengen von etwa 0,001 bis etwa 0,10 Gewichtsteilen, vorzugsweise etwa 0,005 bis 0,05 Gewichtsteilen, bezogen auf 100 Teile wäßriger Lösung bzw. Pufferlösung zugesetzt werden.These inhibitors may be added in amounts of about 0.001 to about 0.10 parts by weight, preferably about 0.005 to 0.05 parts by weight, based on 100 parts of aqueous solution or buffer solution.
Es ist möglich, während der Herstellung des Teststreifens diesen mit einem Stabilisator zu versetzen, so daß man den Teststreifen längere Zeit lagern und zu einem späteren Zeitpunkt verwenden kann. Dies läßt sich durch Einarbeiten eines bekannten Antioxydationsmittels für das Tetrazoliumsalz erreichen.It is possible during the manufacture of the test strip to provide it with a stabilizer so that the test strip can be stored for a longer time and used at a later time. This can be achieved by incorporating a known antioxidant for the tetrazolium salt.
Beispiele geeigneter derartiger Antioxydationsmittel sind alkylierte Phenole, wie 2,6-ditertiäres Butyl-p-cresol, butyliertes Hydroxytoluol^-t-Butylcatechol, Octadecyl-S.S-di-t-butyl^-hydroxyhydrocinnamat.Alkyliden-bisphenole, wie2,2'-Methyienbis (S-t-buyl-4-methylphenol), 4,4'-Butylidenbis (e-t-butyl-S-methyl-phenol), Thiobisphenole, wie 4,4'-Thiobis (6-t-butyl-3-methylphenol), 2,2'-Thiobis (ö-t-butyl^-methylphenol), Polyphenole, wie Tetrakis [methylen-(3,5-di-t-butyl-4-hydroxyhydrocinnamat)] methan, 1,3,5-Trimethyl-2,4,6-tris(3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzyl) benzol, Ester, wie Ditridecylthiodipropionat, Distearylthiodipropionat, Dilauryltl.iodipropionat, Amine, wie diaryl- oder dialkylsubstituierte p-Phenylendiamine, Diphenylamin, N-Phenyl-alpha-naphthylamin; organische Phosphite, wie Dibutylphosphit, Didecylphosphit, Dioctylphosphit Ferner lassen sich hierfür auch Phenothiazine, Hydroxybenzophenon, p-Dimethylamino-nitrobenzol, Thiodipropionsäure und dergleichen verwenden.Examples of suitable such antioxidants are alkylated phenols such as 2,6-ditertiary butyl-p-cresol, butylated hydroxytoluene ^ -t-butylcatechol, octadecyl-SS-di-t-butyl ^ -hydroxyhydrocinnamate. Alkylidene bisphenols such as 2,2 ' Methylbis (st-buyl-4-methylphenol), 4,4'-butylidenebis (et-butyl-S-methyl-phenol), thiobisphenols, such as 4,4'-thiobis (6-t-butyl-3-methylphenol), 2,2'-thiobis (o-t-butyl-methylphenol), polyphenols such as tetrakis [methylene (3,5-di-t-butyl-4-hydroxyhydrocinnamate)] methane, 1,3,5-trimethyl- 2,4,6-tris (3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzyl) benzene, esters such as ditridecyl thiodipropionate, distearyl thiodipropionate, dilauryl thiodipropionate, amines such as diaryl- or dialkyl-substituted p-phenylenediamines, diphenylamine, N- phenyl-alpha-naphthylamine; Organic phosphites such as dibutyl phosphite, didecyl phosphite, dioctyl phosphite. Phenothiazines, hydroxybenzophenone, p-dimethylamino-nitrobenzene, thiodipropionic acid and the like can also be used for this purpose.
Diphenyldecylphosphit, Ditetradecylphosphit, Phenyldidecylphosphit, Phenylneopentylphosphit, Tridecylphosphit, Trilauryltrithiophosphit, Triphenylphosphit, Trisnonylphosphit, sowie zahlreiche andere bekannte Antioxydationsmittel, wozu auch Chinone gehören, wie beispielsweise Hydrochinon, Hydrochinonmonomethyläther, Mono-t-butyl-hydrochinon, 2,5-Di-t-Butylhydrochinon, Toluhydrochinon, 2,5-Di-t-amylhydrochinon und dergleichen.Diphenyldecylphosphite, ditetradecylphosphite, phenyldidecylphosphite, phenylneopentylphosphite, tridecylphosphite, trilauryltrithiophosphite, triphenylphosphite, trisnonylphosphite, as well as numerous other known antioxidants including quinones such as hydroquinone, hydroquinone monomethyl ether, mono-t-butyl-hydroquinone, 2,5-di-t-butylhydroquinone , Toluhydroquinone, 2,5-di-t-amylhydroquinone and the like.
Die obigen Antioxydationsmittel werden in Mengen von etwa 0,01 bis 2,0 Gewichtsteilen, vorzugsweise etwa 0,02 bis 1,0 Gewichtsteilen, bezogen auf 100 Teile Lösung bzw. Pufferlösung, eingesetzt, und sie können zusammen mit dem Tetrazoliumsalz, vor diesem oder nach dem Aufbringen dieses Tetrazoliumsalzes, angewandt werden.The above antioxidants are used in amounts of about 0.01 to 2.0 parts by weight, preferably about 0.02 to 1.0 parts by weight, based on 100 parts of solution or buffer solution, and they may be used together with the tetrazolium salt, before this or after application of this tetrazolium salt.
Für eine gleichförmige Verteilung der Bestandteile des erfindungsgemäßen Teststreifens über die Oberfläche der saugfähigen Bahn können alle geeigneten nichtionischen Netzmittel verwendet werden, die dem Fachmann bekannt sind. Die Anwesenheit bestimmter Netzmittel, wie z. B. Tween 80 oder Triton X 100, erhöht nicht nur die gleichförmige Verteilung der Bestandteile, sondern beschleunigt auch die Reduktion der Tetrazoliumsalze.For a uniform distribution of the constituents of the test strip according to the invention over the surface of the absorbent web, it is possible to use all suitable nonionic wetting agents which are known to the person skilled in the art. The presence of certain wetting agents, such. Tween 80 or Triton X 100, not only increases the uniform distribution of ingredients but also accelerates the reduction of tetrazolium salts.
Eine ähnliche Beschleunigung bewirkt auch eine Zugabe von Polyvinylpyrrolidon. Diese Materialien werden in Mengen von etwa 0,01 bis etwa 1,0 Gewichtsteilen, vorzugsweise etwa 0,02 bis 0,1 Gewichtsteilen, bezogen auf 100 Teile wäßriger Lösung bzw. Pufferlösung verwendet.A similar acceleration also causes an addition of polyvinylpyrrolidone. These materials are used in amounts of about 0.01 to about 1.0 parts by weight, preferably about 0.02 to 0.1 parts by weight, based on 100 parts of aqueous solution or buffer solution.
Um eine chromatographische Bewegung des Farbstoffes durch den Celluloseträger zu verhindern, können in die Teststreifen ferner Materialien eingearbeitet werden, wie z. B. Polymethacrylsäure, Carboxymethylcellulose, Copolymere von Maleinsäure, Methylvinylether, Silikonöle, Alaune u.dgl. Diese Materialien werden in Mengen von etwa 0,1 bis etwa 3,0 Gewichtsteilen, vorzugsweise etwa 0,5 bis 2,5 Gewichtsteilen, bezogen auf 100 Teile wäßriger Lösung bzw. Pufferlösung verwendet.In order to prevent a chromatographic movement of the dye by the cellulose carrier, further materials can be incorporated into the test strip, such. Polymethacrylic acid, carboxymethyl cellulose, copolymers of maleic acid, methyl vinyl ether, silicone oils, alums and the like. These materials are used in amounts of about 0.1 to about 3.0 parts by weight, preferably about 0.5 to 2.5 parts by weight, based on 100 parts of aqueous solution or buffer solution.
Die oben zusammen mit den Komponenten, die dem erfindungsgemäßen Teststreifen zugesetzt werden können, angegebenen Konzentrationen beziehen sich auf die Lösungen dieser Bestandteile, mit denen der saugfähige Träger lediglich gesättigt wird, und betreffen nicht die Menge einer jeden Komponente, die evtl. auf dem saugfähigen Träger vorhanden ist.The concentrations given above together with the components which can be added to the test strip according to the invention relate to the solutions of these constituents which merely saturate the absorbent carrier and do not relate to the amount of each component which may be present on the absorbent carrier is available.
Dies bedeutet, daß durch Sättigen des saugfähigen Trägers mit einer spezifischen Konzentration einer bestimmten Komponente in Lösung nicht einfach auch die gleiche Prozentmenge der in der Lösung vorhandenen Komponente auf dem saugfähigen Träger erhalten werden muß. Es zeigt sich, daß die obigen Lösungskonzentrationen im allgemeinen ausreichen, damit das saugfähige Material nach entsprechender Sättigung hiermit über eine ausreichende Menge der jeweiligen Komponente verfügt und ein funktionsfähiger Teststreifen gemäß der Erfindung erhalten wird, wobei die Absorptionsfähigkeit des saugfähigen Materials charakteristisch ist für Materialien, die normalerweise zu diesem Zweck verwendet werden. Dieses saugfähige Material ist an sich nicht Gegenstand der Erfindung, sondern lediglich eine Komponente des gesamten erfindungsgemäßen Teststreifens.This means that by saturating the bibulous carrier with a specific concentration of a particular component in solution, it is not simply necessary to obtain the same percentage of the component present in the solution on the bibulous carrier. It is found that the above solution concentrations are generally sufficient for the saturable material after adequate saturation to have a sufficient amount of the particular component and to obtain a functional test strip according to the invention, the absorbency of the absorbent material being characteristic of materials which normally used for this purpose. This absorbent material is not the subject of the invention per se, but merely a component of the entire test strip according to the invention.
Beispiele von für eine Anwendung geeigneten Puffern sind Semicarbazid-Glykokoll-Puffer, Trispuffer, Phosphatpuffer, Phthalatpuffer, Citrat-Phosphat-Puffer, Borat-Succinat-Puffer u. dgl. Der bevorzugte Puffer ist Semicarbazid-Glykokoll-Puffer und zwar in einer 0,025 bis 0,2 molaren Konzentration.Examples of buffers suitable for an application are semicarbazide glycine buffer, Tris buffer, phosphate buffer, phthalate buffer, citrate-phosphate buffer, borate-succinate buffer, and the like. The preferred buffer is semicarbazide glycine buffer, in a 0.025 to 0.2 molar concentration.
Der erfindungsgemäße Teststreifen ist ein wesentlicher Beitrag zur Verbesserung der medizinischen Betreuung und Versorgung.The test strip according to the invention is an essential contribution to the improvement of medical care and care.
Mittels einer einfachen, schnellen und spezifischen Methode kann vorzugsweise in Speichel, Harn, Serum, Plasma und Blut der Ethanolgehalt bestimmt werden.By means of a simple, rapid and specific method, the ethanol content can be determined preferably in saliva, urine, serum, plasma and blood.
Die Erfindung besitzt weiterhin eine große Bedeutung für forensische Belange, wie z.B. Feststellung des Alkoholisierungsgrades Verdächtiger verkehrsteilnehmer oder bei der Untersuchung und Aufklärung von Straftaten.The invention also has great importance for forensic matters, such as e.g. Determination of degree of alcoholization Suspects or in the investigation and investigation of criminal offenses.
Die in der nachfolgenden Tabelle angeführten Verbindungen wurden zur Bestimmung des Ethanolgehaltes verwendet. Für die Tränkung des saugfähigen Materials, hier Filterpapier, zur Herstellung des Teststreifens wurden folgende Lösungen bzw. Substanzen verwendet: Tränklösungen der Reagenzien in Wasser bzw. PufferThe compounds listed in the table below were used to determine the ethanol content. For the impregnation of the absorbent material, here filter paper, for the preparation of the test strip, the following solutions or substances were used: impregnation solutions of the reagents in water or buffer
Meldolablau (c = 0,02 mg/ml)Meldola blue (c = 0.02 mg / ml)
NAD (c = 5,0 mg/mi)NAD (c = 5.0 mg / ml)
MTT (c= 1,0 mg/ml)MTT (c = 1.0 mg / ml)
ADH (c = 5,0 mg/ml)ADH (c = 5.0 mg / ml)
Pyrazol. . . . (c = 0,1 mg/ml) Ausgangs- bzw. ZusatzstoffePyrazole. , , , (c = 0.1 mg / ml) starting materials or additives
Tris-Puffer pH 8,7 (0,1 mol/l)Tris buffer pH 8.7 (0.1 mol / l)
Phosphatpuffer pH 5,5 (0,15mol/l)Phosphate buffer pH 5.5 (0.15 mol / l)
Dimethylformanid (c = 25mg/ml)Dimethylformanide (c = 25mg / ml)
Tween 80 (c = 0,4mg/ml)Tween 80 (c = 0.4 mg / ml)
2,6-ditertiäres Butyl-p-cresol (c = 10 mg/ml)2,6-di-tertiary butyl-p-cresol (c = 10 mg / ml)
Polymethacrylsäure (c = lOmg/ml)Polymethacrylic acid (c = 10 mg / ml)
Nach Tränkung der Papierstreifen mit den oben aufgeführten Reagenzien und Stoffen entweder an einer Stelle hintereinander oder getrennt voneinander an im wesentlichen getrennten, sich nicht berührenden Stellen, werden die Papierstreifen durch Lufttrocknung von anhaftender Feuchtigkeit befreit. Nach Benetzung des Teststreifens mit einer ethanolhaltigen Flüssigkeit, beispielsweise Speichel, erfolgt nach 2 min der Vergleich der ausgebildeten blauen Farbflecke mit einer Vergleichsskala. Die Vergleichsskala wurde vorher durch Messung von Ethanolstandardlösungen im Bereich 0,15 bis 3,0mg/g erhalten. Die festgestellten Farbtiefen und -differenzen zwischen den einzelnen Meßpunkten blieben über einen längeren Zeitraum konstant.After impregnation of the paper strips with the reagents and substances listed above, either at one point in succession or separately from one another at substantially separate, non-contacting points, the paper strips are freed of adherent moisture by air drying. After wetting the test strip with an ethanol-containing liquid, for example saliva, the comparison of the formed blue color spots with a comparison scale takes place after 2 minutes. The comparative scale was previously obtained by measuring ethanol standard solutions in the range of 0.15 to 3.0 mg / g. The observed color depths and differences between the individual measuring points remained constant over a longer period of time.
Die in der nachfolgenden Tabelle angeführten Verbindungen wurden zur Bestimmung des Ethanolgehaltes verwendet. Für die Tränkung des saugfähigen Materials, hier Polymere, zur Herstellung des Teststreifens wurden folgende Lösungen bzw. Substanzen verwendet: Tränklösung der ReagenzienThe compounds listed in the table below were used to determine the ethanol content. For the impregnation of the absorbent material, here polymers, for the production of the test strip, the following solutions or substances were used: impregnation solution of the reagents
Meldolablau (c = 0,05 mg/ml)Meldola blue (c = 0.05 mg / ml)
NAD (c = 5,0 mg/ml)NAD (c = 5.0 mg / ml)
INT (c= 1,2 mg/ml)INT (c = 1.2 mg / ml)
ADH (c= 10 mg/ml)ADH (c = 10 mg / ml)
Semicarbazid-Glykokoll-Puffer pH 8,6Semicarbazide glycolline buffer pH 8.6
(Semicarbazid 0,075mol/l) (Glykolkoll 0,075mol/l)(Semicarbazide 0.075 mol / l) (glycol 0.075 mol / l)
Triton X 100 (c = 0,4mg/ml)Triton X 100 (c = 0.4 mg / ml)
Alle Substanzen wurden zu einer gemeinsamen Tränklösung vereinigt. In diese Tränklösung taucht man den Polymerstreifen, welcher dann anschließend durch Lyophilisation von anhaftender Flüssigkeit befreit wird. Als ethanolhaltige Flüssigkeit kommt Urin zur Anwendung. Die Auswertung der roten Farbflecke erfolgt analog Ausführungsbeispiel 1.All substances were combined to a common watering solution. In this impregnation solution immersed the polymer strip, which is then subsequently freed by lyophilization of adhering liquid. Urine is used as the ethanol-containing fluid. The evaluation of the red color spots is carried out analogously to Example 1.
Claims (5)
INT[2-(4-Jodphenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyl tetrazolium],MTT [3- (4,5-dimethylthiazolyl-2) -2,5-diphenyl-tetrazolium] and / or
INT [2- (4-iodophenyl) -3- (4-nitrophenyl) -5-phenyltetrazolium],
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD27622485A DD237223A1 (en) | 1985-05-13 | 1985-05-13 | TEST STRIP FOR DETERMINING THE ETHANOL CONTENT IN LIQUIDS AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF |
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|---|---|---|---|
| DD27622485A DD237223A1 (en) | 1985-05-13 | 1985-05-13 | TEST STRIP FOR DETERMINING THE ETHANOL CONTENT IN LIQUIDS AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
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| DD237223A1 true DD237223A1 (en) | 1986-07-02 |
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ID=5567718
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Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD237223A1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0608022A1 (en) * | 1993-01-19 | 1994-07-27 | Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. | Multilayer analytical element containing primary amine buffer and method for the determination of ethanol |
| WO2010142322A1 (en) * | 2009-06-08 | 2010-12-16 | Protea Biopharma N.V. | Methods and kits for detecting, diagnosing and monitoring diseases |
-
1985
- 1985-05-13 DD DD27622485A patent/DD237223A1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0608022A1 (en) * | 1993-01-19 | 1994-07-27 | Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. | Multilayer analytical element containing primary amine buffer and method for the determination of ethanol |
| WO2010142322A1 (en) * | 2009-06-08 | 2010-12-16 | Protea Biopharma N.V. | Methods and kits for detecting, diagnosing and monitoring diseases |
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