DD231007A1 - PROCESS FOR THE PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO HUMAN INTERFERON ALPHA (HUIFN) - Google Patents
PROCESS FOR THE PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO HUMAN INTERFERON ALPHA (HUIFN) Download PDFInfo
- Publication number
- DD231007A1 DD231007A1 DD26787784A DD26787784A DD231007A1 DD 231007 A1 DD231007 A1 DD 231007A1 DD 26787784 A DD26787784 A DD 26787784A DD 26787784 A DD26787784 A DD 26787784A DD 231007 A1 DD231007 A1 DD 231007A1
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- monoclonal antibodies
- interferon
- human interferon
- alpha
- huifn
- Prior art date
Links
Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikoerpern gegen humanes Interferon-alpha. Das Ziel der Erfindung ist die Herstellung monoklonaler Antikoerper, die fuer die immunchemische Bestimmung und die immunaffinitaetschromatographische Reinigung von menschlichem Interferon-alpha geeignet sind. Das erfindungsgemaesse Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man Milzzellen von Maeusen, die mit Interferon immunisiert wurden, mit Plasmacytomzellen in der Zellkultur fusioniert, die antikoerperbildenden Hybridome selektiert, die Eigenschaften der gebildeten monoklonalen Antikoerper bestimmt, die spezifischen Hybridome auswaehlt und in ueblicher Weise weiter vermehrt. Anwendungsgebiet der Erfindung ist die Medizin und die Biotechnologie.The invention relates to a process for the preparation of monoclonal antibodies to human interferon-alpha. The aim of the invention is the production of monoclonal antibodies suitable for immunochemical determination and immunoaffinity chromatographic purification of human interferon-alpha. The process according to the invention is characterized in that spleen cells of mice which have been immunized with interferon are fused with plasmacytoma cells in the cell culture, the antibody-forming hybridomas are selected, the properties of the monoclonal antibodies formed are determined, the specific hybridomas selected and further increased in a conventional manner. Field of application of the invention is medicine and biotechnology.
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern, die in der biotechnologischen und medizinischen Diagnostik angewendet und für die immunaffinitätschromatographische Reinigung von Interferon-alpha eingesetzt werden können.The invention relates to a process for the preparation of monoclonal antibodies which can be used in biotechnological and medical diagnostics and used for the immunoaffinity chromatographic purification of interferon-alpha.
Interferon-alpha wird von Lymphozyten in Folge einer Virusinfektion gebildet und verhindert dann die Ausbreitung der Virusinfektion auf andere Zellen, indem diese unter der Wirkung von Interferon-alpha einen sogen, antiviralen Status erwerben.Interferon-alpha is produced by lymphocytes as a result of a viral infection and then prevents the spread of viral infection to other cells by acquiring a so-called antiviral status under the action of interferon-alpha.
Monoklonal Antikörper gegen humanes Interferon-alpha gibt es seit 1980 (Secher, D.S. and D.C.Burke, Natur 285,446-450Monoclonal antibodies to human interferon-alpha have existed since 1980 (Secher, D.S. and D. C.Burke, Nature 285, 446-450
Die Herstellung dieser Antikörper erfolgte nach der bekannten Lymphozytenhybridomtechnik (Köhler, G. and C. Milstein, Nature 256,495-497 /1975/). Solche Antikörper werden vorzugsweise für den Interferon-Nachweis bei der gentechnischen Herstellung von Interferon in Mikroorganismen und für die Isolierung und Reinigung der biosynthetisch gewonnenen Interferone eingesetzt.The production of these antibodies was carried out according to the known lymphocyte hybridoma technique (Köhler, G. and C. Milstein, Nature 256, 495-497 / 1975 /). Such antibodies are preferably used for interferon detection in the genetic engineering of interferon in microorganisms and for the isolation and purification of the biosynthetically derived interferons.
Die Interferone sind eine heterogene Stoffklasse (Pesta, S. and S. Baron in Methods in Enzymology/ ed. S. Pestka/ Vol. 78, p.3 Acad. Press 1981), so daß eine Vielzahl monospezifischer Antikörper gebraucht werden, um alle Interferon-alpha-Subtypen spezifisch erkennen zu können.The interferons are a heterogeneous class of substances (Pesta, S. and S. Baron in Methods in Enzymology / ed. S. Pestka / Vol. 78, p.3 Acad. Press 1981), so that a large number of monospecific antibodies are needed to all Specifically detect interferon alpha subtypes.
Die Erfindung hat das Ziel, monoklonal Antikörper gegen menschliches Interferon-alpha mit geeigneter Affinitätskonstante und großer Spezifität herzustellen. Solche Antikörper sollen zur Entwicklung eines Testbesteckes für menschliches Interferon-alpha und für die Präparation von Immunsorbentien zur immunaffinitätschromatographischen Reinigung von Interferon eingesetzt werden.The aim of the invention is to produce monoclonal antibodies against human interferon-alpha with appropriate affinity constant and high specificity. Such antibodies will be used to develop a test kit for human interferon alpha and for the preparation of immunosorbents for immunoaffinity chromatographic purification of interferon.
Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern gegen humanes Interferon-alpha ist dadurch gekennnzeichnet, daß man Milzzellen von Balb/c-Mäusen, die mit gereinigtem HuIFN bis zum Erscheinen von Serumantikörpern immunisiert werden, mit Maus-Myelomzellen in der Zellkultur hybridisiert und die erhaltenen Hydridome in Mikrotestplatten aussät. Die antikörperproduzierenden Hybridomklone werden zunächst mit einem Immunodot-Assay nachgewiesen. Dafür wird HuIFN auf kleine Nitrozellulosefilter aufgetragen, das so behandelte Filter mit den Hybridomüberständen inkubiert; nach Waschung erfolgt die Inkubation mit Anti-Anitkörper-Enzymkonjugat und schließlich wird das Filter mit dem Enzymsubstrat behandelt. Die antikörperproduzierenden Hybridome werden kloniert und erfindungsgemäß auf ihre Verwendungsfähigkeit für immunchemische Bestimmungsmethoden und in der Immunaffinitätschromatographie geprüft. Die spezifischen Hybridomklone werden ausgewählt, weiter vermehrt, in flüssigem Stickstoff gelagert und bei Bedarf für die Produktion von monoklonalen Antikörpern entweder in Ascitesflüssigkeit auf Mäuse transplantiert oder in Zellkultur vermehrt. Wesentliche Voraussetzung zur Durchführung der Erfindung ist der Antikörper-Hemmtest zur Bestimmung der Spezifität der einzelnen monoklonalen Antikörper hinsichtlich ihrer Erkennung der verschiedenen antigenen Determinanten auf den Interferonmolekülen.The process according to the invention for the production of monoclonal antibodies against human interferon-alpha is characterized in that spleen cells of Balb / c mice immunized with purified HuIFN until the appearance of serum antibodies are hybridized with mouse myeloma cells in the cell culture and the obtained Hydridomes in microtest plates. The antibody-producing hybridoma clones are first detected by immunodot assay. For this purpose HuIFN is applied to small nitrocellulose filters, the filter thus treated is incubated with the hybridoma supernatants; after washing, incubation with anti-antibody-enzyme conjugate is carried out and finally the filter is treated with the enzyme substrate. The antibody-producing hybridomas are cloned and tested according to the invention for their usefulness in immunochemical methods of determination and in immunoaffinity chromatography. The specific hybridoma clones are selected, further propagated, stored in liquid nitrogen and either transplanted to mice in ascites fluid as needed for production of monoclonal antibodies or propagated in cell culture. An essential prerequisite for carrying out the invention is the antibody-inhibition test for determining the specificity of the individual monoclonal antibodies with regard to their recognition of the various antigenic determinants on the interferon molecules.
Dieser Test kann folgendermaßen durchgeführt werden:This test can be performed as follows:
Anti-Maus-Immunglobulin-Antikörper werden an eine feste Phase gebunden, danach erfolgt die Inkubation mit einem monoklonalen Antikörper, der eine bestimmte Determinante erkennt. Anschließend wird mit normalem Mausserum behandelt und danach mit 125J-IFN im Gemisch mit einem zu testenden anderen monoklonalen Antikörper inkubiert. Wird keine Radioaktivität an die feste Phase gefunden, haben beide Antikörper die gleiche Spezifität. Die Erfindung ermöglicht die Herstellung spezifischer Antikörper gegen humanes Interferon-alpha, seine Subtypen und gentechnisch hergestellte modifizierte Formen und damit die Entwicklung von rationellen Testkits für die Medizin und Biotechnologie sowie für die Herstellung von effektiven Immunsorbentien zur Immunaffinitätschromatographie, die bei der industriellen Herstellung von humanem Interferon-alpha für medizinische Zwecke unbedingt gebraucht werden.Anti-mouse immunoglobulin antibodies are bound to a solid phase followed by incubation with a monoclonal antibody which recognizes a particular determinant. It is then treated with normal mouse serum and then incubated with 125 I-IFN in admixture with another monoclonal antibody to be tested. If no radioactivity is found on the solid phase, both antibodies have the same specificity. The invention enables the production of specific antibodies against human interferon-alpha, its subtypes and genetically engineered modified forms and thus the development of rational test kits for medicine and biotechnology as well as for the production of effective immunosorbents for immunoaffinity chromatography, which in the industrial production of human interferon -alpha be used for medical purposes.
1. Herstellung der Hybridome1. Preparation of hybridomas
Balb/c-Mäuse werden mehrfach in mehrwöchigen Abständen mit etwa 106IU HulFN-alphai.p. und in die Fußsohlen immunisiert. Die Fusion der Milzzellen einer immunisierten Maus mit Maus-Plasmacytomzellen P3/X63-Ag8-6.5.3. (hergestellt von Kearny, I. F. et al., J. Immunolgy 123,1548-1550 /1979/) erfolgt nach bekannten Verfahren (Köhler, G. and C. Milstein, Nature 256,495-497 /1975/); Hudson, L and F. C. Hay: Practical Immunology, 2. Auflage Oxford 1980). Die Hybridome werden in einem Selektivmedium angezüchtet. Die Klonierung und weitere Bearbeitung der Hybridome erfolgt in 96 well-Mikrotiterplatten.Balb / c mice are treated several times at several weekly intervals with about 10 6 IU HulFN-alphai.p. and immunized into the soles of the feet. Fusion of spleen cells of an immunized mouse with mouse plasmacytoma cells P3 / X63-Ag8-6.5.3. (manufactured by Kearny, IF et al., J. Immunolgy 123, 1548-1550 / 1979 /) is prepared by known methods (Kohler, G. and C. Milstein, Nature 256, 495-497 / 1975 /); Hudson, L and FC Hay: Practical Immunology, 2nd edition Oxford 1980). The hybridomas are grown in a selective medium. The cloning and further processing of the hybridomas takes place in 96 well microtiter plates.
2. Das Screening der angezüchteten Hybridome erfolgte mit einem Immunodot-Assay und mit einem Festphasen-Bioassay.2. The screening of the cultured hybridomas was carried out with an immunodot assay and with a solid phase bioassay.
3. Der Antikörperhemmtest und die Bestimmung der Affinität werden mit den Kulturüberständen der verschiedenen Hybridomklone auf Anti-Interferon-Spezifität durchgeführt.3. The antibody inhibition test and affinity determination are performed on the culture supernatants of the various hybridoma clones for anti-interferon specificity.
Eigenschaften der von den erhaltenen Hybridomklonen produzierten monoklonalen Antikörpern:Properties of Monoclonal Antibodies Produced by the Obtained Hybridoma Clones:
-2- B/ö /7-2- B / ö / 7
Monoklonal Antikörper Eigenschaften ZIM-IIB2 ZIM-IIG7Monoclonal antibody properties ZIM-IIB2 ZIM-IIG7
IgD-Klasse IgGI IgGIIgD class IgGI IgGI
Affinität (1/MoI) >108 noch nicht getestetAffinity (1 / MoI)> 10 8 not tested yet
Interferon-Subtypenspezifität noch nicht bestimmbar noch nicht bestimmbarInterferon subtype specificity not yet determinable yet undeterminable
Antigendeterminante I noch nicht bestimmtAntigen determinant I not yet determined
Eignung zur Immunaffinitäts-Suitability for immunoaffinity
chromatographie sehr gut noch nicht bestimmtchromatography very good not yet determined
4. Herstellung der Antikörper Die Gewinnung der Antikörper erfolgt aus der Kulturflüssigkeit der kultivierten oder aus der Ascitesflüssigkeit der transplantierten Hybridomzellen entsprechend üblicher Verfahren.4. Production of the antibodies The antibodies are obtained from the culture fluid of the cultured or from the ascites fluid of the transplanted hybridoma cells in accordance with customary procedures.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD26787784A DD231007A1 (en) | 1984-10-01 | 1984-10-01 | PROCESS FOR THE PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO HUMAN INTERFERON ALPHA (HUIFN) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD26787784A DD231007A1 (en) | 1984-10-01 | 1984-10-01 | PROCESS FOR THE PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO HUMAN INTERFERON ALPHA (HUIFN) |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD231007A1 true DD231007A1 (en) | 1985-12-18 |
Family
ID=5560932
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD26787784A DD231007A1 (en) | 1984-10-01 | 1984-10-01 | PROCESS FOR THE PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO HUMAN INTERFERON ALPHA (HUIFN) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD231007A1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7582445B2 (en) | 2001-02-22 | 2009-09-01 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
-
1984
- 1984-10-01 DD DD26787784A patent/DD231007A1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7582445B2 (en) | 2001-02-22 | 2009-09-01 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
| US7910707B2 (en) | 2001-02-22 | 2011-03-22 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
| US8349331B2 (en) | 2001-02-22 | 2013-01-08 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
| US8557967B2 (en) | 2001-02-22 | 2013-10-15 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69432629T2 (en) | ANTIBODIES AGAINST BETA AMYLOID OR DERIVATIVES AND THEIR USE | |
| EP0158599B1 (en) | Monoclonal antibodies and hybridoma cells, process for preparing them and their use | |
| EP0260610A2 (en) | Monoclonal antibodies against human tumour necrotic factor (TNF), and their use | |
| US4599306A (en) | Monoclonal antibodies which specifically bind to human immune interferon | |
| DE3218312A1 (en) | MONOCLONAL ANTIBODIES, HYBRIDOMA CELL CLONES, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF AND THEIR USE FOR DETECTING BREAST CANCER AND MALIGNER LYMPHOGRANULOMATOSIS | |
| EP0119476A2 (en) | Hybrid cell lines that produce immunoglobin, their use and process for preparing them | |
| EP0195331B1 (en) | Monoclonal antibodies against atrial natriuretic peptides | |
| DD231007A1 (en) | PROCESS FOR THE PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO HUMAN INTERFERON ALPHA (HUIFN) | |
| EP0470565A1 (en) | Peptides with antigenic determinant characteristic for alpha 1-microglobulin | |
| EP0262571B1 (en) | Monoclonal antibodies against ifn-omega, process for preparing them and their use in the purification and detection of ifn-omega | |
| DE60014616T2 (en) | ANTIBODY AGAINST PLAZENTAPROTEIN 13 | |
| DE3524585C2 (en) | ||
| EP0133551A2 (en) | Monoclonal antibody which recognizes a structure which is common to the human interleukin-2 (TCGF) and to the light chain lambda of human immunoglobulin, and hybridoma cell lines producing this monoclonal antibody | |
| DD254593A1 (en) | PROCESS FOR THE PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST HUMAN INTERFERON ALPHA | |
| EP0657470A2 (en) | Monoclonal antibodies against in vivo glycated albumin | |
| DD259635A1 (en) | PROCESS FOR PREPARING MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST HUMAN INTERLEUKIN-2 | |
| DE4216200A1 (en) | Prodn. of monoclonal antibodies to human interferon alpha-2 - by hybridoma method with selection by ELISA assay, used in medical diagnostics, therapy monitoring and research, etc. | |
| DE3616324C2 (en) | Monoclonal antibodies | |
| DE4213497A1 (en) | New human interferon gamma (HIFNG) monoclonal antibodies - produced by immunising mice with spleen cells from mice having high serum antibody titre for HIFNG, followed by immobilised HIFNG | |
| DD283154A5 (en) | PROCESS FOR PREPARING MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST HUMAN INTERFERON ALPHA 1 | |
| DD265291A3 (en) | Process for the preparation of monoclonal antibodies to human interferon alpha-1 | |
| DD224770A1 (en) | METHOD FOR THE PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST CARCINOEMBRYONAL ANTIGEN (CEA) | |
| DD241823A3 (en) | Process for the preparation of monoclonal antibodies against alpha-fetoprotein | |
| DD279266A1 (en) | PROCESS FOR THE PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO HUMAN INTERFERON ALPHA-1 (HUIFN ALPHA-1) | |
| WO1992004463A1 (en) | Cd58-specific monoclonal antibodies and their use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RPI | Change in the person, name or address of the patentee (searches according to art. 11 and 12 extension act) | ||
| ENJ | Ceased due to non-payment of renewal fee |