DD216918A1

DD216918A1 - PROCESS FOR OBTAINING OPTIC ALPHA AMINO-ACIDS FROM RACEMATES

Info

Publication number: DD216918A1
Application number: DD25335183A
Authority: DD
Inventors: Kornelia Smalla; Peter Hermann; Ingo Willhardt; Jaroslava Turkova; Jiri Coupek
Original assignee: Univ Halle Wittenberg
Priority date: 1983-07-25
Filing date: 1983-07-25
Publication date: 1985-01-02

Abstract

Die Erfindung bezieht sich auf die Herstellung optisch aktiver a-Aminosaeuren von mmol bis mol-Massstab und darueber hinaus. Dabei wird von Na-Acylderivaten der Racemate von Aminosaeuren und ihrer stereospezifischen Hydrolyse durch Aminoacylase ausgegangen. Die Racematspaltung erfolgt mittels immobilisierter Aminoacylase, wobei an den Traeger besondere Anforderungen bezueglich chemischer und mechanischer Stabilitaet gestellt werden sowie fuer den Immobilisierungsvorgang einfache, effektive, die Enzymaktivitaet erhaltende Schritte zur Anwendung gelangen. Die Immobilisierung der Aminoacylase erfolgt an oberflaechlich mit Epoxidgruppen modifiziertes Copolymerisat von 2-Hydroxyethylmethacrylat und Ethylenbismethacrylat in der Weise, dass mit hohen Salzkonzentrationen von Salzen aus der Gruppe der Eiweissfaellungsmittel guenstige Bedingungen fuer die kovalente Fixierung an den Traeger bei optimaler Erhaltung der Aktivitaet erreicht werden. In dieser Weise kann man Racematspaltungen von a-Aminosaeureracematen zur Gewinnung von optisch aktiven natuerlichen Aminosaeuren als auch radioaktiv- oder stabilisotop-markierten als auch nichtproteinogenen Aminosaeuren nutzen.The invention relates to the preparation of optically active α-amino acids from mmol to molar scale and beyond. It is assumed that Na acyl derivatives of the racemates of amino acids and their stereospecific hydrolysis by aminoacylase. The racemate resolution takes place by means of immobilized aminoacylase, wherein special demands are placed on the wearer with regard to chemical and mechanical stability, and simple, effective, enzyme activity-maintaining steps are used for the immobilization process. The immobilization of the aminoacylase is carried out on superficially modified with epoxy groups copolymer of 2-hydroxyethyl methacrylate and ethylenebismethacrylate in such a way that favorable conditions for covalent fixation to the wearer are achieved with high salt concentrations of salts from the group of protein precipitation with optimal maintenance of activity. In this way it is possible to use racemate cleavages of α-amino acid residues for the purpose of obtaining optically active natural amino acids as well as radioactively or stably isotopically labeled as well as nonproteinogenic amino acids.

Description

a) Titel der Erfindung a) Title of the invention

Verfahren zur Gewinnung optisch aktiver cH-Aminosäuren aus Racematen .Process for obtaining optically active cH-amino acids from racemates.

b) Anwendungsgebiet der Erfindung _x b) Field of application of the invention _x

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung optisch aktiver et-Aminosäuren durch enzymatische Racematspaltung von D,I-AminoSäuregemischen.The invention relates to a method for obtaining optically active et-amino acids by enzymatic racemate resolution of D, I-AminoSäuregemischen.

Bei der chemischen Synthese von et-Aminosäuren werden optisch Inaktive Racemate von L- und D-Isomeren erhalten. Aminosäuren, der !-Konfiguration sind die Bausteine der natürlich vorkommenden Proteine und damit wichtige Intermediate des tierischen und pflanzlichen Stoffwechsels. D-Aminosäuren haben zum Beispiel als Bestandteile von Antibiotika Bedeutung. Protei- \ nogene und nichtproteinogene optisch aktive Aminosäuren sind von wachsendem Interesse für die pharmazeutische Industrie, die Nahrungsmittelindustrie, die biochemische Forschung und für den klinischen Einsatz.In the chemical synthesis of et-amino acids optically inactive racemates of L and D isomers are obtained. Amino acids of the! Configuration are the building blocks of naturally occurring proteins and thus important intermediates of the animal and plant metabolism. For example, D-amino acids are important as constituents of antibiotics. Proteogenic and nonproteinogenic optically active amino acids are of growing interest to the pharmaceutical, food, biochemical, and clinical applications.

c) Charakteristik der bekannten technischen Lösungen c) C characteristic of the known technical solutions

!-Aminosäuren können nach verschiedenen Verfahren erhalten werden. Heben der Gewinnung aus biologischem Material und der stereospezifischen Synthese durch bestimmte Mikroorganismen ist die chemische Synthese racemischer Aminbsäuregemische und deren anschließende Racematspaltung wirtschaftlich bedeutungsvoll. Physikalisch-chemische, chemische und biochemische Methoden können zur Racematspaltung angev/endet werden (J.P. Greenstein, M. Winitz: Chemistry of the amino acids: J. Wiley & Sons Inc. lew York/London 1961, Vol. I-III).! -Amino acids can be obtained by various methods. Raising the recovery of biological material and the stereospecific synthesis by certain microorganisms, the chemical synthesis of racemic amine acid mixtures and their subsequent racemate resolution is economically significant. Physicochemical, chemical and biochemical methods can be used to resolve racemates (J.P. Greenstein, M. Winitz: Chemistry of the Amino Acids: J. Wiley & Sons Inc. New York / London 1961, Vol. I-III).

Zunehmend gewinnen biochemische Methoden an Bedeutung, die die hohe Stereospezifität von ifinzymen ausnutzen, wobei letztere in löslicher oder trägerfixierter Form zum .Einsatz kommen. Die iSnzyme (z.B. Trypsin, Chymotrypsin, Carboxypeptidaee Aj^Papain, leucinaminopeptidase, L-Aminosäureoxldase) katalysieren stereospezifisch die_v Reaktion nur eines Enantiomeren geeigneter Derivate von D,Jj~Aminosäuren. Aminoacyiase zeichnet sich durch eine hohe Stereospezifität, eine breite Substratspezifitat und eine hohe Substratumsatzrate aus, so daß dieses Enzym zur Racematspaltung von H-acylierten D/L-Arainosäuregemischen besonders geeignet ist. Da Aminoacylase in lösung instabil ist und somit schnell inaktiviert wird, ist die Stabilisierung des Enzyms durch Immobilisierung z.B. an einen festen Träger vorteilhaft. Durch Trägerfixierung wird die Stabilität des Enzyms erheblich erhöht, die leichte Abtrennbarkeit des aktiven trägergebundenen JKnzyms von der Reaktionslösung und seine 7/iederverwendbarkeit wird möglich. · . ,Increasingly, biochemical methods that exploit the high stereospecificity of ifinzymen are gaining in importance, the latter being used in soluble or carrier-fixed form. The iSnzyme (eg, trypsin, chymotrypsin, papain Carboxypeptidaee Aj ^, leucine, L-Aminosäureoxldase) catalyze the stereospecific reaction _v only one enantiomer of suitable derivatives of D, Jj ~ amino acids. Aminoacyiase is characterized by a high stereospecificity, a broad substrate specificity and a high substrate turnover rate, so that this enzyme is particularly suitable for the racemate resolution of H-acylated D / L-amino acid mixtures. Since aminoacylase is unstable in solution and thus rapidly inactivated, the stabilization of the enzyme by immobilization, for example, to a solid support is advantageous. Carrier fixation significantly enhances the stability of the enzyme, allowing easy separation of the active carrier-bound enzyme from the reaction solution and its reusability. ·. .

Durch adsorptive Bindung an Ionenaustauscher kann aktive immobilisierte Aminoacylase nach einem ökonomischen Verfahren erhalten werden (¹T. Tosa, T. Mori, Ii. Fuse, I. Chibata: iönzyrnologia 21» ²|4 (1966); T. Tosa, T. iViori, U. Fuse, I. Chibata: Biotechnol. Bioeng. 2. 603 (1967); T. Tosa, T. Mori, 1. Chibata:By adsorptive binding to ion exchange active immobilized aminoacylase may be obtained for an economical method ⁽¹ T. Tosa, T. Mori, Ii Fuse, I. Chibata. Iönzyrnologia 21 ^"2 | 4 (1966); T. Tosa, T. iViori , U. Fuse, I. Chibata: Biotechnol Bioeng, 2, 603 (1967), T. Tosa, T. Mori, 1. Chibata:

Agr, Biol. Chem. 33, 1053 (1969)). - ·Agr, Biol. Chem. 33, 1053 (1969)). - ·

Der lachteil der nichtkovalenten Bindung der Arainoacylase an Ionenaustauscher besteht darin, daß das Enzym durch Substrat- und Pufferlösungen allmählich eluiert wird, somit in relativ verdünnten Substratlösungen gearbeitet werden muß und die i£Lnsatzdauer beschränkt ist.The salient part of the noncovalent binding of the arainoacylase to ion exchangers is that the enzyme is gradually eluted by substrate and buffer solutions, thus it is necessary to work in relatively dilute substrate solutions and the lifetime is limited.

Bei der kovalenten Knüpfung des iSnzyms an den Träger werden stabile chemische Bindungen ausgebildet, so daß bei relativ hohen Substratkonzentrationen gearbeitet werden kann. Für Aminoacylase sind eine Reihe spezieller Verfahren zur kovalenten Trägerfixierung oder JäLnschluß in polymeres netzwerk bekannt (T. Sato, T. Mori, T. Tosa, I, Chibata: Arch.- Biochem. Biophys. 1£T, 788 (1971), I. Ohibata, T. Tosa, T. Sato,, T. Mori, Y. Matsuo: Proc. IV. IFS: Ferment. Technol. Today, 383 (1972); H. Maskova, T. Barth, B. Jirovsky, I. Rychlik: Coil. Czechosiov. Chem. Commun. 38, 943 (1973); H.H. Weetall, CC. Detar:In the covalent formation of the iSnzyms to the support stable chemical bonds are formed, so that you can work at relatively high substrate concentrations. For aminoacylase, a number of specific methods for covalent carrier fixation or termination in polymeric networks are known (T. Sato, T. Mori, T. Tosa, I., Chibata: Arch. Biochem., Biophys., 1, 788 (1971), I. Ohibata, T. Tosa, T. Sato, T. Mori, Y. Matsuo: Proc IV. IFS: Ferment, Technol. Today, 383 (1972); H. Maskova, T. Barth, B. Jirovsky, I. Rychlik: Coil, Czechosiov Chem., Commun., 38, 943 (1973), HH Weetall, CC, Detar:

Biotechn. Bioeng. ^6, 1537 (1974);.B. Szajani, K. Ivony, L. Boross: Act a Biochim. et Biophys. Acad. Sei, Hung. 1j5, 295 ' (1980); I. Willhardt, P. Hermann: DD WP 123188 (1981). Die Mangel zur Herstellung der erwähnten !covalent fixierten \ Aminoacylasepräparate beziehen sich einmal auf die Verwendung von zum Teil modifizierten Biopolymeren, deren Nutzungsdauer durch z.B. mikrobieilen Abbau begrenzt wird, zum anderen auf teilweise ökonomisch und arbeitstechnisch aufwendige, zum Teil gesundheitsschädliche Verfahren, die zur Aktivierung des Trägers dienen. Das betrifft z.B. Träger auf Kohlenhydratbasis, Aktivierungsschritte unter Verwendung löslicher Carbodiimide oder Brbmcyan.Biotech. Bioeng. ^ 6, 1537 (1974); B. Szajani, K. Ivony, L. Boross: Act a Biochim. et biophys. Acad. Be, Hung. 1j5, 295 '(1980); I. Willhardt, P. Hermann: DD WP 123188 (1981). The shortcomings of preparing the covalently-fixed \ aminoacylase preparations referred to once relate to the use of partially modified biopolymers whose useful life is limited by e.g. Microbieilen degradation is limited, on the other to partially economical and laborious consuming, sometimes harmful processes that serve to activate the carrier. This concerns e.g. Carbohydrate-based carriers, activation steps using soluble carbodiimides or Brbmcyan.

d) Ziel der Erfindung d) Object of the invention

Ziel der Erfindung ist die Gewinnung optisch aktiver Aminosäuren durch Spaltung von Racematen mittels immobilisierter Aminoacylase nach einem wirtschaftlichen Verfahren, das sowohl im Laboratoriumsmaßstab im .umol- bis mol-Bereich unter Einbeziehung Stabilisotop oder radioaktiv markierter wie auch nichtproteinogener Aminosäuren problemlos durchführbar ist, als auch die Slöglichkeit einer Maßstabvergrößerung beinhaltet. Dabei sollen die oben geschilderten Mangel der bekannten Verfahren zur Immobilisierung, insbesondere die Verwendung von Biopolymeren als Träger, umgangen werden. Zugleich sollen hohe Anforderungen an die mechanische und chemische Stabilität, die Resistenz gegen mikrobiellen Abbau sowie an günstige hydrodynamische Eigenschaften gestellt werden. Zum anderen sollen die alB nachteilig beschriebenen Aktivierungsschritte des Trägers entfallen. · .The aim of the invention is the recovery of optically active amino acids by cleavage of racemates by immobilized aminoacylase by an economical method that is easily practicable both laboratory scale in .umol- to mol-range including stabil isotope or radioactively labeled as well as nonproteinogenic amino acids, as well as the Slöglichkeit a scale magnification includes. In this case, the above-described deficiency of the known immobilization methods, in particular the use of biopolymers as carriers, should be avoided. At the same time, high demands are to be placed on the mechanical and chemical stability, the resistance to microbial degradation and on favorable hydrodynamic properties. On the other hand, the activation steps of the carrier which are described disadvantageously are to be omitted. ·.

e) Darlegung des Wesens der Erfindung e) Presentation of the essence of the invention

Der firfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Arainoacylase, die zur Racematspaltung eingesetzt werden soll, mit guten Aktivitätsausbeuten und einer langen biochemischen Lebensdauer kovalent an ein oberflächlich epoxidiertes, makroporöses, sphärisches Copolymerisat von 2-Hydroxyethylmethacrylat und Ethylenbismethacrylat zu binden. Pur die kovalente Fixierung der Aminoacylase an das Copolymerisat soll eine vorherigeThe invention is based on the object of arainoacylase, which is to be used for racemate resolution, with good activity yields and a long biochemical lifetime to covalently bind to a superficially epoxidized, macroporous, spherical copolymer of 2-hydroxyethyl methacrylate and ethylenebismethacrylate. Pur the covalent fixation of the aminoacylase to the copolymer should a previous

Modifizierung mit aminogruppenhaltigen verbindungen und eine Aktivierung durch Reagenzien wie lösliches Carbodiimid, BrCH, Glutaraldehyd entfallen.Modification with amino-containing compounds and activation by reagents such as soluble carbodiimide, BrCH, glutaraldehyde omitted.

Erfindungsgemäß erfolgt die Immobilisierung der Aminoacylase in einem einfachen Sinschrittverfahren, wobei in Puffer (pH-Wert 7,0 - 8,5; Of05 - 0,2 mol/1) gelöste Aminoacylase und Träger (Epoxidierungsgrad: 0,7 - 2,0 mmol/g; Korngröße: 100 200,um; Ausschlußgrenzen: 200 000 - 5 000 000) in einem geeigneten Verhältnis über mehrere Stunden (5 - 40 Stunden) bei einer Temperatur im Bereich von 273 - 283 K geschüttelt werden. Entscheidend für die Aktivität der trägergebundenen Aminoacylase ist die Gegenwart hoher Salzkonzentrationen (wie z.B. Amraoniumsulfat, Ammoniumphosphat, 1,0 - 1,7 mol/1) während des Kupplungsschrittes. Auf diese Weise wird die Aminoacylase stabilisiert und nur unter diesen Bedingungen eine aktive immobilisierte iSnzympräparation erhalten.According to the invention, the immobilization of the aminoacylase is carried out in a simple Sinschrittverfahren, wherein in buffer (pH 7.0 - 8.5, Of05 - 0.2 mol / 1) dissolved aminoacylase and carrier (degree of epoxidation: 0.7 - 2.0 mmol grain size: 100-200, exclusion limits: 200,000-5,000,000) in a suitable ratio over several hours (5-40 hours) at a temperature in the range of 273-283 K be shaken. Crucial to the activity of the supported aminoacylase is the presence of high salt concentrations (such as ammonium sulfate, ammonium phosphate, 1.0-1.7 mol / l) during the coupling step. In this way, the aminoacylase is stabilized and obtain an active immobilized iSnzympräparation only under these conditions.

Die an das Copolymerisat gebundene Aminoacylase wird mit U-Acyl-D,!-Aminosäuren in bekannter Weise im Batch- oder im Säulenverfahren zur Reaktion gebracht. Uach Abtrennung der aktiven trägergebundenen Aminoacylase von der Reaktionslösung erfolgt die Gewinnung der L-Aminosäure nach bekanntem Verfahren. Die von Aminoacylase nicht umgesetzte H^-Acyl-D-Aminosäure kann chemisch hydrolysiert und so die D-Aminosäure erhalten werden, oder die N^-Acyl-D-Aminosäure wird racemisiert und erneut einer Racematspaltung unterworfen.The aminoacylase bound to the copolymer is reacted with U-acyl-D,! -Amino acids in a known manner in a batch or column process. After separation of the active carrier-bound aminoacylase from the reaction solution, the recovery of the L-amino acid by known method. The unreacted aminoacylase H ^ acyl-D-amino acid can be chemically hydrolyzed to obtain the D-amino acid, or the N ^ acyl-D-amino acid is racemized and subjected to racemate resolution again.

Die Immobilisierung von Aminoacylase an oberflächlich epoxidiert es Copolymerisat von 2,-Hydroxyethyimethacrylat und JSthylenmethacrylat erlaubt eine kurzfristige Präparation. Die fiinschrittkupplungsreaktion ist einfach, gefahrlos und wirtschaftlich. Aufgrund einer guten Langzeitstabilität (z.B. Aktivität nach 4 Wochen_85 % der Ausgangsaktivität, nach 12 Wochen 57,5 %, nach 5 Monaten 33,25 % der Ausgangsaktivität) kann das Knzym mehrfach und über einen längeren Zeitraum zur Racematspaltung eingesetzt werden.The immobilization of aminoacylase on the surface epoxidized copolymer of 2-hydroxyethyimethacrylate and J-methylmethacrylate allows a short-term preparation. The step-coupling reaction is simple, safe and economical. Due to a good long-term stability (eg activity after 4 weeks_85 % of the starting activity, after 12 weeks 57.5 %, after 5 months 33.25 % of the starting activity), the Knzym can be used several times and over a longer period of time for racemate resolution.

f) Ausf ührunpisbei spiel f) Execution game

Als Enzymquelle dient 2.B. Schweineniere aus der nach einem bekannten Verfahren (S.U. Birnbaum, L. Levintow, R.B. Kingsley, J.tf. Greenstein: J. Biol. Ohem. Jl^i, 455 (1952)) die Aminoacyiaseaktivität angereichert und durch Lyophilisation ein Trockenpulver erhalten wird, das im Kühlschrank mehrere Jahre aktiv bleibt.The enzyme source is 2.B. Pig kidney from which the aminoacyanase activity is enriched by a known method (SU Birnbaum, L. Levintow, RB Kingsley, J. Greenstein: J. Biol. Ohem., Jl ^ i, 455 (1952)) and a dry powder is obtained by lyophilization, that stays active in the fridge for several years.

1. Beispiel: Teiigereinigte Aminoacylase wird in ü,1 mol/1 Phosphatpuffer pH = 7,0 - 8,5 gelöst und in Gegenwart von Konzentrationen an Diammoniumhydrogenphosphat, die unterhalb der Grenze der Ausfällung des Proteins liegen, an ein Copolymerisat von 2-I-Iydroxyethylmethacrylat und Ethylenbismethacrylat (Ausschlußvoluraen: 200 000 - 700 000, Korngröße: 100 - 200 Atm, Epoxidierungsgrad: 1,5 - 2,0 mmol/g) bei Temperaturen von 273 bis 283 K gebunden. Wach einer Kupplungsdauer von z.B. 20 Stunden wird der Träger abgesäugt und durch Waschen mit 1 mol/1 NaCi, Substratlösung und Phosphatpuffer verschiedener lonenstärke adsorptiv gebundenes Protein entfernt. Die am Träger gebundene Aminoacylase wird im Batch-Verfahren mit einer 0,01 - 0,05 mol/1 Chloracetyl-JDjL-Phenyialanin-lösung, die auf einen pH-Wert von 7,0 - 8,5 eingestellt ist, bei Temperaturen von 303 - 328 K zur Reaktion gebracht. Bach vollständiger Deacylierung der L-Form wird der Träger abgesaugt und in wäßriger Substratlösung unter Thymolzusatz aufbewahrt. Die Reaktionslösung enthält L-Phenylalanin, Chloracetat und Chloracetyl-D-Phenyialanin und wird über einen stark sauren Kationenaus tauscher in der H⁺-I?orm getrennt. Während Chloracetyl-D-Phenylalanin und Ohloressigsäure das Harz passieren, wird das am Ionenaustauscher fixierte L-Phenylalanin anschliessend mit wäßrigem Ammoniak eluiert und aus dieser Lösung in kristalliner Form gewonnen.Example 1: Teiigereinigte aminoacylase is dissolved in ü, 1 mol / 1 phosphate buffer pH = 7.0 - 8.5 and in the presence of concentrations of diammonium hydrogen phosphate, which are below the limit of precipitation of the protein, to a copolymer of 2-I -Hydroxyethyl methacrylate and ethylenebismethacrylate (exclusion volracies: 200,000-700,000, grain size: 100-200 atm, degree of epoxidation: 1.5-2.0 mmol / g) bound at temperatures of 273-283K. Wake up a coupling time of, for example, 20 hours, the carrier is sucked off and removed by washing with 1 mol / 1 NaCi, substrate solution and phosphate buffer of various ionic strength adsorptively bound protein. The aminoacylase bound to the support is batch-mixed with a 0.01-0.05 mol / l chloroacetyl-JDjL-phenyialanine solution adjusted to a pH of 7.0-8.5 at temperatures of 303 - 328 K reacted. Bach complete deacylation of the L-form, the carrier is aspirated and stored in aqueous substrate solution with addition of thymol. The reaction solution contains L-phenylalanine, chloroacetate and chloroacetyl-D-phenyialanine and is separated via a strongly acidic cation exchanger in the H ⁺ -Irm. While chloroacetyl-D-phenylalanine and Ohloressigsäure pass through the resin, the fixed at the ion exchanger L-phenylalanine is then eluted with aqueous ammonia and recovered from this solution in crystalline form.

2. Die Kupplung erfolgt unter Bedingungen wie im Beispiel 1, nur in Gegenwart von (ML^SO. anstelle von Ammoniumphosphat an ein Copolymerisat von 2-Hydroxyethylmethacrylat (Ausschlußvolumen: 800 000 ~ 5 000 000, Korngröße: 100 - 200.um, Epoxidierungsgrad: 0,7 - 1,2 mmol/g).2. The coupling is carried out under conditions as in Example 1, only in the presence of (ML) SO 4 instead of ammonium phosphate to a copolymer of 2-hydroxyethyl methacrylate (exclusion volume: 800,000 ~ 5,000,000, particle size: 100-200 μm, degree of epoxidation : 0.7-1.2 mmol / g).

Der viie in Beispiel 1 gewaschene Träger wird in eine geeignet dimensionierte temperierte Säule gefüllt. Elhe Acetyl-D,L-Methionin-lösung optimaler Konzentration (0,01 - 0,1 mol/1),The carrier washed in Example 1 is filled into a suitably dimensioned tempered column. Elhe acetyl-D, L-methionine solution of optimal concentration (0.01 - 0.1 mol / l),

die auf einen pH-Wert von 7,0 - 8,5 eingestellt wurde, passiert bei einer Temperatur von 303 - 328 K mit einer bestimmten Geschwindigkeit (S 100 % Hydrolyse des,Acetyl-L-Methionin) die Säule. Das Sluat enthält L-filethionin, Essigsäure und Acetyl-D-Methionin und wird wie in Beispiel 1 aufgearbeitet. Das Acetyl-D-Methionin aus dem eingeengten sauren iSluat kann nach bekanntem Verfahren erneut racemisiert oder einer Hydrolyse unterworfen werden, die D-Äiethionin ergibt. Das mit wäßrigem Ammoniak eluierte !-Methionin wird nach dem Einengen in kristalliner Form erhalten.which has been adjusted to a pH of 7.0-8.5, passes at a temperature of 303-328 K at a certain rate (S 100 % hydrolysis of, acetyl-L-methionine) the column. The sluate contains L-filethionine, acetic acid and acetyl-D-methionine and is worked up as in Example 1. The acetyl-D-methionine from the concentrated acidic iSluate can be racemized or subjected to hydrolysis by known method, which yields D-Äiethionin. The eluted with aqueous ammonia! -Methionine is obtained after concentration in crystalline form.

Claims

invention claim

1. A process for the recovery of optically active L-et-amino acids and D-ot-amino acids by racemate resolution of the 1-acyl derivatives of corresponding D, L- dL -amino acids by enzymatic catalysis using immobilized Aminoacyiäse characterized in that the racemate to a superficial with JSpoxidgruppen modified copolymer of 2-hydroxyethyl methacrylate with ethylenebismethacrylate covalently bound aminoacylase is applied.

2. The method according to claim 1, characterized in that the binding of the aminoacylase to the carrier in the presence of salts from the group of alkali and ammonium salts of polyvalent anions, whose concentrations are slightly below the precipitation limit of the aminoacylase.