DD160763A3 - PROCESS FOR THE PRODUCTION OF CONCENTRATE VACCINES - Google Patents
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Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Konzentratvakzinen aus gereinigten Virusantigenen und soll die hierbei bestehenden Maengel hinsichtlich Unschaedlichkeit, Wirksamkeit und oekonomischer Fertigung beseitigen. Zur Herstellung von Konzentratvakzinen wird das Antigen in einem geschlossenen System aus einer bakteriell sterilen Loesung zur Reinigung und Konzentrierung an einen physiologisch unschaedlichen kolloidalen Traeger, vorzugsweise Kalziumphosphat, adsorbiert und das Adsorpt nach Isolierung durch Sedimentation und Dekantieren der ueberstehenden fluessigen Phase direkt mit einem wirksamen Adjuvans vermischt. Hierbei kann die Antigenkonzentration auf den gewuenschten Wert eingestellt werden. Die Erfindung eignet sich vorwiegend fuer die Produktion von Vakzinen aus immunogenen Virusstrukturkomponenten oder inaktivem Virus.The invention relates to a process for the preparation of concentrate vaccines from purified virus antigens and is intended to eliminate the existing defects with regard to unskillfulness, effectiveness and economic production. For the preparation of concentrate vaccines, the antigen is adsorbed in a closed system from a bacterially sterile solution for purification and concentration to a physiologically unshakable colloidal carrier, preferably calcium phosphate, and the adsorpt after isolation by sedimentation and decanting the supernatant liquid phase directly mixed with an effective adjuvant , Here, the antigen concentration can be adjusted to the desired value. The invention is predominantly suitable for the production of vaccines from immunogenic virus structural components or inactive virus.
Description
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a) Titel der Erfindunga) Title of the invention
Verfahren zur Herstellung von Konzentratvakzinen·Process for the preparation of concentrate vaccines
b) Anwendungsgebiet der Erfindungb) Field of application of the invention
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Konzentratvakzinen, insbesondere von inaktivierten Vakzinen gegen Maul- und Klauenseuche (MKS). ,The invention relates to a process for the preparation of concentrate vaccines, in particular of inactivated vaccines against foot-and-mouth disease (FMD). .
c) Charakteristik der bekannten technischen Lösungenc) Characteristic of the known technical solutions
Es ist bekannt, daß bei inaktivierten Virusvakzinen die Wirksamkeit von der Menge und dem Reinheitsgrad des verimpft em immunisierenden Antigens, und die Unschädlichkeit von der Art und Menge der Begleitstoffe abhängen· Es ist nachgewiesen worden, daß vor allem Antibiotika und Gewebe- und Zellbestandteile aus dem Vermehrungssubstrat des Virus für das Auftreten von allergischen Reaktionen der Impflinge verantwortlich sind» Um Virusvakzinen mit ausreichender Reinheit und Konzentration des immunisierenden Antigens herstellen zu können, werden Verfahren benötigt, die eine Anreicherung und Reinigung des immunisierenden. Antigens unter sterilen Bedingungen bewirken und im technischen Maßstab praktikabel sind«It is known that in inactivated virus vaccines the efficacy of the amount and purity of the inoculated em immunizing antigen, and the harmlessness of the type and amount of the accompanying substances depend · It has been demonstrated that especially antibiotics and tissue and cell components from the Propagating substrate of the virus are responsible for the occurrence of allergic reactions of the vaccinee. In order to be able to produce virus vaccines with sufficient purity and concentration of the immunizing antigen, methods are needed which allow an enrichment and purification of the immunizing antigen. Produce antigens under sterile conditions and are practicable on an industrial scale
Es wurde bereits vorgeschlagen, für die »Konzentrierung und Reinigung von Virusantigenen im technischen Maßstab eine Fällung durch Bolyäthylenglykol (MORROW u.a., 1974; BAYRA-MOGLU ue ε.β, 1974 ϊ LEI9 1974) öder Polyäthylenoxid (ADAMOWICZ u»a», 1974) durchzufuhren. Bei diesen Verfahren müs en die Sedimente der Virusantigene durch Zentrifugation oder Filtration abgetrennt werden, -wodurch zusätzliche MaßnahmenIt has already been proposed for the "concentration and purification of viral antigens on the industrial scale precipitation by Bolyäthylenglykol (MORROW, among others, 1974;. Bayra-MOGLU u e ε β, 1974 ϊ LEI 9 1974) (barren polyethylene oxide ADAMOWICZ u" a " 1974). In these methods, the sediments of the viral antigens must be separated by centrifugation or filtration, whereby additional measures
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zur Erhaltung der Sterilität der Antigenpräparate sowie zur Entfernung von Resten des Fällungsmittels erforderlich werden, Darüberhinaus bestehen Bedenken hinsichtlich einer sicheren Inaktivierung der Virusaggregate, die bei der DIspergierung der VirusSedimente entstehen· Ein technisch bespnders einfacher Weg zur Konzentrierung von Virusantigenen wird bei der Herstellung von Abhebervakzinen beschriften, bei denen das Virus an das gleichzeitig als Ad-juvans dienende Adsorbens gebunden wird und der Überstand nach Sedimentation des Adsorpts durch Dekantieren entfernt wird» Bei der Verwendung von Aluminiumhydroxid (MITBV'u.a.-, 1966) oder'Bentonit(BAYiIAMOGLU u. YALIM, 1974) ist der Reinigung?effekt unbefriedigend. Virusvakzinen, in dönen das Antigen durch Adsorption an Kalziumphosphat konzentriert worden ist (Französisches Patent Nr, 122284), besitzen eine unbefriedigende Wirksamkeit,There is also concern about the safe inactivation of viral aggregates resulting from the dispersion of the virus sediments. A technically attractive simple way of concentrating viral antigens will be used in the preparation of vaccine vaccines in which the virus is bound to the adsorbent simultaneously serving as Ad-juvans and the supernatant is removed by sedimentation of the adsorbent by decantation »When using aluminum hydroxide (MITBV'u.a.-, 1966) or'Bentonite (BAYiIAMOGLU u YALIM, 1974), the cleaning effect is unsatisfactory. Virus vaccines in which the antigen has been concentrated by adsorption on calcium phosphate (French Patent No. 122284) have unsatisfactory effectiveness,
d) Ziel der Erfindungd) Object of the invention
Ziel der Erfindung ist es, die sich bei der Herstellung von Konzentratvakzinen ergebenden Mangel hinsichtlich Unschädlichkeit, Wirksamkeit und Ökonomischer Fertigung zu beseitigen«The aim of the invention is to eliminate the shortcomings in the production of concentrate vaccines with regard to harmlessness, effectiveness and economic production. "
e) Darlegung des Wesens der Erfindunge) Presentation of the essence of the invention
- Die technische Aufgabe, die durch die Erfindung gelöst wird. - . ' ; . V- The technical problem which is solved by the invention. -. '; , V
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein technisch einfach au realisierendes Verfahren zur Herstellung von Konzentratvaksiinen aus gereinigten Virusantigenen zu ent« wickelnj bei denen die Konzentrierung und Reinigung des Virusantigens sowie dessen weitere Verarbeitung zur fertigen Vakaine unter sterilen Bedingungen in einem geschlossenen System ohne zwischenzeitliche Isolierungsschritte vorgenommen wird« Die nach diesem Verfahren hergestellten Vakzinen sollen mit Sicherheit nicht infektiös seinj bei den Impflingen keine allergischen Erscheinungen hervorrufen und, gegebenenfalls nach Anreicherung des Antigens, einen sicheren Impfschutz bewirken*It is an object of the present invention to provide a technically simple process for producing concentrate vaccines from purified virus antigens in which the concentration and purification of the viral antigen and its further processing into finished vaccines are carried out under sterile conditions in a closed system without intermediate isolation steps "The vaccines prepared by this method should certainly not be infectious and cause no allergic reactions in the vaccinee and, if necessary after enrichment of the antigen, provide safe vaccination protection *
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- Merkmale der Erfindung .Features of the invention.
Bs wurde gefunden, daß man zu einem technisch einfach realisierbaren Verfahren zur Herstellung von Konzentratvakzin^n aus gereinigten Virusantigenen gelangt, wenn man das Antigen aus einer bakteriell sterilen Lösung an einen physiologisch unschädlichen kolloidalen Träger, vorzugsweise Kalziumphosphat, absorbiert und das Adsorpt nach Isolierung durch Sedimentation und Dekantieren der überstehenden ' flüssigen Phase direkt mit einem wirksamen Adjuvans vermischt, wobei die Antigenkonzentration auf den gewünschten Wert eingestellt werden kann»Bs it was found that one arrives at a technically easily feasible process for the preparation of concentrate vaccine ^ n from purified virus antigens, when the antigen from a bacterially sterile solution of a physiologically innocuous colloidal carrier, preferably calcium phosphate absorbed and the adsorpt after isolation by sedimentation and decanting the supernatant liquid phase directly with an effective adjuvant, whereby the antigen concentration can be adjusted to the desired value. "
Bakteriell sterile Lösungen des Virusantigens, die frei von Zelltrümmern und Zeil- oder Virusaggregaten sind, durch die eine sichere Inaktivierung virulenter Virusantigene beeinträchtigt werden kann, können wahlweise durch Filtration oder Homogenisierung mit organischen Lösungsmitteln, die nicht mit Wasser mischbar sind, hergestellt werden· Die Adsorption des Virusantigens an den kolloidalen Träger zwecks Reinigung und Konzentrierung des immunisierenden Antigens wird vorteilhaft als Adsorptionsfällung bei niedrigen Temperaturen durchgeführt, wobei der kolloidale Träger in der Viruslösung selbst durch Zufügen der Lösungen gebildet wird.Bacterially sterile solutions of the viral antigen which are free of cell debris and cell or viral aggregates capable of impairing safe inactivation of virulent viral antigens can optionally be prepared by filtration or homogenization with organic solvents that are immiscible with water. Adsorption the viral antigen on the colloidal carrier for purification and concentration of the immunizing antigen is advantageously carried out as adsorption precipitation at low temperatures, the colloidal carrier being formed in the virus solution itself by adding the solutions.
Dabei sind die Reaktionsbedingungen (Konzentration des Adsorptionsmittels, pH-Wert und Ionenkonzentration des Mediums ) entsprechend den charakteristischen Eigenschaften des Antigens sowie der Art und Konzentration der Begleitstoffe zu modifizieren, um eine quantitative Adsorption < des Antigens und einen optimalen Reinigungseffekt zu erzielen. Während der Adsorptionsfällung gegebenenfalls auftre- , tende unerwünschte Veränderungen des pH-Wertes der Viruslösung lassen sich vorteilhaft dadurch vermeiden, daß die zur Fällung verwendete Lösung mehrwertiger Kationen mit einer solchen Menge eines alkalisch reagierenden Stoffes, vorzugsweise Tris oder Natriumhydroxid versetzt wird, daß die während der Reaktion entstehenden Wasserstoffionen neutralisiert werden,In this case, the reaction conditions (concentration of the adsorbent, pH and ion concentration of the medium) according to the characteristic properties of the antigen and the nature and concentration of the accompanying substances to modify in order to achieve a quantitative adsorption <of the antigen and an optimal cleaning effect. During the Adsorptionsfällung possibly auftre- tende undesirable changes in the pH of the virus solution can be advantageously avoided by the solution used for the precipitation of multivalent cations with an amount of an alkaline substance, preferably tris or sodium hydroxide is added, that during the Reaction resulting hydrogen ions are neutralized,
Bei der Verwendung von virulentem Virus als Antigen kann When using virulent virus as an antigen can
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dessen Inaktivierung mittels chemischer oder physikalischer Methoden wahlweise vor bzw. nach der Adsorption an den kolloidalen Träger oder vorzugsweise nach dem Mischen mit dem Adjuvans bei optimalen Bedingungen (pH-Wert und Temperatur-); durchgeführt werden.its inactivation by means of chemical or physical methods optionally before or after adsorption to the colloidal carrier or preferably after mixing with the adjuvant under optimal conditions (pH and temperature); be performed.
Das Vermischen des an den kolloidalen Träger gebundenen Virusantigens mit einem Adjuvans bzw. Adjuvansgemisch, bevorzugt Aluminiumhydroxid, Saponin oder DBAE-Dextran, führt zu Virusvakzinen, die nicht infektiös und frei von allergie rzeugend^n bzw, -auslösenden Substanzen sind. Durch das Mischen des an den kolloidalen Träger, bevorzugt Kalziumphosphat, adsorbierten Antigens mit einem zusätzlichen Adjuvans entsteht eine Kombination mit erhöhter Adjuvanswirkung. Die Wirksamkeit der Vakzinen, die auf die beschriebene Weise hergestellt worden sind, liegt über jener von Vakzinen, in denen unbehandeltes Antigen mit den gleichen Adjuvanzien verarbeitet worden ist· Das hier beschriebene Verfahren zur Herstellung von Kbnzentratvakzinen aus gereinigten Virusantigenen läßt sich von der Bereitstellung der sterilen geklärten bzw. vorgereinigten Viruslösung bis zum Abfüllen der inaktivierten Vakzine in einem geschlossenen System ohne zusätzliche technologische Operation, die über das Überleiten steriler Lösungen bzw. Suspensionen hinausgehen, realisieren.Mixing the virus antigen attached to the colloidal carrier with an adjuvant mixture, preferably aluminum hydroxide, saponin or DBAE-dextran, results in virus vaccines that are non-infectious and free of allergy-causing substances. By mixing the antigen adsorbed to the colloidal carrier, preferably calcium phosphate, with an additional adjuvant, a combination with increased adjuvant effect is produced. The efficacy of the vaccines prepared in the manner described is greater than that of vaccines in which untreated antigen has been processed with the same adjuvants. The method described herein for the production of concentrated vaccines from purified viral antigens can be distinguished from the provision of the sterile clarified or pre-cleaned virus solution to fill the inactivated vaccine in a closed system without additional technological operation beyond going over the sterile solutions or suspensions realize.
f) Ausführungsbeispielef) embodiments
1« Herstellung einer gereinigten trivalenten Vakzine gegen Maul- und Klauenseuche.1 «Preparation of a purified trivalent vaccine against foot-and-mouth disease.
1125 g Ka2HBX χ 2HgO werden in 200 1 Wasser gelöst und durch Autoklavieren sterilisiert. 500 1 einer Mischung von MKS «»Zellkulturvirus aus 3 serologischen Typen, die durch Homogenisieren mit Chloroform und anschließende Zentrifugation partiell gereinigt und keimfrei gemacht worden sind, werden zu der Phosphatlösung gegeben und auf eine Temperatur 100C abgekühlt. Durch Zugabe von 60 1 einer Trisgepufferten CaCl2-Losung (0,1 M CaCl2; 0,025 M Tris) wird in der Lösung hydratisiertes Kal'ziumphosphat ausgefällt, das das Virus aus der Lösung adsorbiert. Durch Zugabe von1125 g of Ka 2 HBX χ 2HgO are dissolved in 200 l of water and sterilized by autoclaving. 500 l of a mixture of MKS cell culture virus from 3 serological types, which have been partially purified by chloroform homogenization and subsequent centrifugation and germ-free, are added to the phosphate solution and cooled to a temperature 10 0 C. By adding 60 l of a Tris-buffered CaCl 2 solution (0.1 M CaCl 2 , 0.025 M Tris), hydrated calcium phosphate is precipitated in the solution, which adsorbs the virus from the solution. By adding
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Säure oder Alkali ist zu sichern, daß während der Adsorptionsphase ein pH-Wert von 7,3 eingehalten wird. Nach Sedimentation des Adsorpts bei niedrigen Temperaturen wird der klare Überstand mit den nicht adsorbierten Begleitstoffen durch Abhsbern vollständig entfernt und das Sediment mit 900 1 einer sterilen 1%igen Suspension von Aluminiumhydroxid in einer 0,07 m gepufferten UaCl-Lb"sung gemischt, die 1,500 g Saponin und 1.600 g Glykokoll enthält. Die Suspension wird mit soviel UaOH versetzt, daß die fertige Vakzine nach Einstellung eines Formaldehydgehaltes von 190 mgA und Auffüllen' auf ein Gesamtvolumen von 1000 1 einen pH-Wert von mindestens 8,2 besitzt. Die Inaktivierung des Virus erfolgt 24 Stunden bei 25 °C.Acid or alkali must be ensured that a pH of 7.3 is maintained during the adsorption phase. After sedimentation of the adsorbent at low temperatures, the clear supernatant with the non-adsorbed by-products is completely removed and the sediment is mixed with 900 l of a sterile 1% suspension of aluminum hydroxide in a 0.07 m buffered UaCl solution which is 1.500 The suspension is treated with enough UaOH so that the finished vaccine has a pH of at least 8.2 after setting a formaldehyde content of 190 mgA and filling to a total volume of 1000 l Virus is 24 hours at 25 ° C.
2, Herstellung einer monovalenten Konzentratvakzine gegen Maul- und Klauenseuche mit erhöhtem Antigengehalt,2, production of a monovalent concentrate vaccine against foot-and-mouth disease with increased antigen content,
500 1 MKS-Zellkulturvirus eines serologischen Typs werden unter den gleichen Bedingungen, wie im 1, Ausführungsbeispiel beschrieben, gereinigt und konzentriert. Das Adsorpt wird mit 150 g Saponin und 160 g Glykokoll versetzt und nach Auffüllen auf 100 1 bei pH 8,2 und einem Formaldehydgehalt von 190 mgA 24 Stunden bei 25°C inaktiviert.500 l of a serological type MKS cell culture virus are purified and concentrated under the same conditions as described in FIG. 1, embodiment. The adsorbent is mixed with 150 g of saponin and 160 g of glycine and inactivated after filling to 100 1 at pH 8.2 and a formaldehyde content of 190 mgA for 24 hours at 25 ° C.
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DD160763A3 true DD160763A3 (en) | 1984-03-07 |
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DD (1) | DD160763A3 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1994001118A1 (en) * | 1992-07-02 | 1994-01-20 | Cambridge Biotech Corporation | Methods for enhancing drug delivery with modified saponins |
-
1978
- 1978-06-05 DD DD20578078A patent/DD160763A3/en unknown
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1994001118A1 (en) * | 1992-07-02 | 1994-01-20 | Cambridge Biotech Corporation | Methods for enhancing drug delivery with modified saponins |
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