DD151963A1 - PROCESS FOR OBTAINING EGG WHITE BIOMASS - Google Patents

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DD151963A1 DD21321479A DD21321479A DD151963A1 DD 151963 A1 DD151963 A1 DD 151963A1 DD 21321479 A DD21321479 A DD 21321479A DD 21321479 A DD21321479 A DD 21321479A DD 151963 A1 DD151963 A1 DD 151963A1
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Lidija I Kozlova
Olga I Velikoslavinskaja
Radij V Katrusch
Valerija A Rjabchuk
Herbert Gentzsch
Gustav-Adolf Luebbert
Wolfgang Hieke
Joachim Bauch
Guenter Heidenreich
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Petrolchemisches Kombinat
Wissenschaftliches Allunionsfo
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  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
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Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von Eiweiszbiomasse, die einen erhoehten Gehalt an Methionin besitzt. Es handelt sich um eine kontinuierliche Kultivierung von Mikroorganismen, insbesondere durch Hefe auf Kohlenwasserstoffen, die die n Alkane C&ind8! - C&ind35! enthalten, bei Vorhandensein der erforderlichen Quellen an Naehr- und Spurenelementen unter den Bedingungen der Belueftung und nachfolgender Abtrennung der Biomasse, Kohlenwasserstoffe und des waeszrigen Mediums, bei Rueckfuehrung des waeszrigen Mediums in den Kultivierungsprozesz. Es wurde gefunden, dasz zur Erhoehung des Methioningehaltes im Eiweisz das Verhaeltnis der Konzentrationen der n-Alkane C&ind8! - C&ind18! und des Kaliums im Bereich 20 bis 100 : 1 und das Verhaeltnis der Menge an Frischwasser und des rueckzufuehrenden waeszrigen Mediums im Bereich 0,05 bis 0,5 : 0,5 bis 0,95 reguliert werden musz.The invention relates to a method for obtaining Eiweiszbiomasse having an increased content of methionine. It is a continuous cultivation of microorganisms, in particular by yeast on hydrocarbons, the n alkanes C & ind8! - C & ind35! in the presence of the necessary sources of nutrients and trace elements under the conditions of ventilation and subsequent separation of the biomass, hydrocarbons and the aqueous medium, with the return of the aqueous medium in the cultivation process. It has been found that, in order to increase the methionine content in proteins, the ratio of the concentrations of n-alkanes C & ind8! - C & ind18! and the potassium in the range of 20 to 100: 1 and the ratio of the amount of fresh water and the aqueous medium to be returned are controlled in the range of 0.05 to 0.5: 0.5 to 0.95 musz.

Description

-J- Sf3 214-J- Sf3 214

Υerfahren zur Gewinnung von EiweißbiomasseFor the production of protein biomass

C12D - 13/06C12D - 13/06

Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von Eiweißbiomasse der Mikroorganismen, die durch die essentielle Aminosäure Methionin angereichert ist» Es handelt sich um eine kontinuierliche Kultivierung von Mikroorganismen, insbesondere durch Hefe auf Kohlenwasserstoffen, die die n-Alkane CQ — C^r- enthalten, bei Vorhandensein der erforderlichen Quellen an Nähr- und Spurenelementen unter den Bedingungen der Belüftung. Die aus dem Fermentor austretende Biomassesuspension wird in 3 Phasen unterschieden: die wäßrige Phase, die Kohlenwasserstoffphase und die Biomasse. Die die Biomasse enthaltende Phase wird einer weiteren Behandlung nach bekannten Verfahren unterzogen. Die Anwendung der Erfindung ist in der mikrobiologischen Industrie möglich*The invention relates to a method for obtaining protein biomass of the microorganisms, which is enriched by the essential amino acid methionine »It is a continuous cultivation of microorganisms, in particular by yeast on hydrocarbons containing the n-alkanes C Q - C ^ r- included , in the presence of the necessary sources of nutrients and trace elements under the conditions of aeration. The biomass suspension leaving the fermentor is divided into 3 phases: the aqueous phase, the hydrocarbon phase and the biomass. The biomass-containing phase is subjected to further treatment by known methods. The application of the invention is possible in the microbiological industry *

Charakteristik der bekannten technischen LösungenCharacteristic of the known technical solutions

Hefeeiweiß, das auf Kohlenwasserstoffen gezüchtet wurde, beinhaltet alle nicht substituierbaren Aminosäuren und ist hinsichtlich der Aminosäurezusammensetzung dem Eiweiß desYeast protein grown on hydrocarbons contains all non-substitutable amino acids and is in terms of amino acid composition the protein of

Hühnereies gleichwertig» Jedoch ist der Gehalt der nichtsubstituierbaren Aminosäure Methionin im Hefeeiweiß um vier- bis fünfmal niedriger als im Eiweiß·eines Hühnereies (Grisdew, LV Ge U0 a* 1974-, Izvestja TSCHA, Ausgabe 2, Seite 86, russ*)*Chicken egg equivalent »However, the content of the non-substitutable amino acid methionine in yeast is four to five times lower than in egg · chicken egg (Grisdew, LV G e U 0 a * 1974-, Izvestja TSCHA, Issue 2, page 86, russ *) *

Zur Erhöhung des Nährwertes des Hefeeiweißes, das als Putter für landwirtschaftliche Nutztiere verwendet wird, ist es erforderlich, zusätzlich in das Putter Methionin zu gebeno Es gibt nur wenige bekannte Verfahren zur mikrobiologischen Gewinnung von Methionin» Bekannt ist ein Verfahren zur Gewinnung eines mit Methionin angereicherten Eiweißpräparates durch die Kultivierung eines bestimmten Stammes von Bakterien der Gattung Micobacterium auf Kohlenwasserstoffen (UdSSR-Urheberschein Nr. 199«796, 1973, Kl« C12K - 1/06)e Weiterhin ist ein Verfahren zur Gewinnung von wasserlöslichem Methionin durch Kultivierung eines bestimmten Bakterienstammes der Art Brevibacterium auf Glukose bekannt (Japanische Patentanmeldung Nr. 6753* 1976, Kl· 36(2)D251).To improve the nutritional value that is used as a putter for farm animals of Hefeeiweißes, it is necessary o to give in addition to the putter methionine There are few known methods for the microbiological production of methionine "is known a method for obtaining an enriched with methionine Protein preparations by cultivating a particular strain of bacteria of the genus Micobacterium on hydrocarbons (USSR Certificate No. 199, 796, 1973, Kl. C12K-1/06). Further, there is a method for obtaining water-soluble methionine by cultivating a particular bacterial strain Art. Brevibacterium on glucose is known (Japanese Patent Application No. 6753 * 1976, Kl. 36 (2) D251).

Bei den bekannten Verfahren vjerden bestimmte Stämme von Bakterien, die durch ein periodisches Verfahren unter sterilen Bedingungen gezüchtet werden, verwendet» Außerdem ist die Abtrennung der Bakterien aus der Kulturflüssigkeit technisch sehr kompliziert, und es existieren auch keine Apparate in industriellem Maßstab für die Abtrennung der Bakterien von der Kulturflüssigkeit, Bekannt ist auch ein Verfahren zur Gewinnung von Biomasse durch Kultivierung bestimmter Stämme von Hefen der Gattung Candida, die äthioninbeständig sind, auf Nährmedien, welche eine begrenzte enge Fraktion der n-Alkane C^.„ - C^g enthalten«In the known methods, certain strains of bacteria grown by a periodic process under sterile conditions are used. In addition, the separation of the bacteria from the culture liquid is technically very complicated, and there are no industrial-scale apparatuses for the separation of the bacteria Also known is a method of recovering biomass by cultivating certain strains of yeasts of the genus Candida which are resistant to etionin to nutrient media containing a limited narrow fraction of the n-alkanes C 1 -C 4.

Bei der periodischen Kultivierung der Hefe Candida petrophyllum, Stamm Nr· 401, Candida tropicalis Hr. 505 und IFO 0589, Candida rugosa Nr · 603 und IFO 0750 unter sterilen Bedingungen auf Nährmedien bei Vorhandensein eines Biosti-In the periodic cultivation of the yeast Candida petrophyllum, strain No. 401, Candida tropicalis Hr. 505 and IFO 0589, Candida rugosa No. 603 and IFO 0750 under sterile conditions on nutrient media in the presence of a biostimulator.

«3"3

mulators — Maisextrakt — speichert die Hefe in 15 — 18 Stunden in der Biomasse 1,32 - 1,96 % Methionin. Dieses Verfahren kann als Prototyp angesehen werden (Japanisches Patent Nr. 43.876, 1973» Kl· 36(2)D251). Als Mangel dieses Verfahrens ist die Züohtung der Hefe unter sterilen Bedingungen durch ein periodisches Verfahren bei Verwendung streng bestimmter Stämme der Hefe der Gattung Candida und der engen Fraktion der gereinigten n-Alkane mit einem Kettenlängenbereich von C^ - C-o zu nennen.mulators - Maizextrakt - stores the yeast in 15 - 18 hours in the biomass 1.32 - 1,96% methionine. This method can be considered as a prototype (Japanese Patent No. 43,876, 1973 »Kl · 36 (2) D251). A shortcoming of this method is the yeast's feeding under sterile conditions by a periodic procedure using strictly defined strains of the yeast of the genus Candida and the narrow fraction of the purified n-alkanes having a chain length range of C 1 -C 8 -o-o.

Ziel, der ErfindungAim of the invention

Das Ziel der Erfindung ist die Erhöhung des Met Moning ehaltes in der Eiweißbiomasse unter sterilen Bedingungen.The aim of the invention is to increase the Met Moning ehaltes in the Eiweißbiomasse under sterile conditions.

Darlegung des Wesens der Erfindung . Explanation of the essence of the invention .

Die technische Aufgabe der Erfindung besteht darin, Verfahrensparaaeter aufzufinden, die die Gewinnung einer Biomasse mit erhöhtem Gehalt an Methionin unabhängig von sterilen Bedingungen und unter Berücksichtigung eines wesentlich breiteren C - Bereiches der n-Alkane ermöglichen. Überraschend wurde gefunden, daß die Aufgabe so gelöst werden kann, daß im Rahmen der kontinuierlichen Kultivierung von Mikroorganismen, z. B0 Hefe auf Nährmedien, eine Regulierung des Verhältnisses der Menge an Frischwasser und des rückauführenden wäßrigen Mediums sowie das Verhältnis der Konzentration der n~Alkane und des Kaliumions in bestimmten Bereichen erfolgt· Die Regulierung muß so erfolgen, daß das Verhältnis der Menge an Frischwasser und an rückzuführendem wäßrigen Medium im Bereich 0,05 - 0,5 * 0»5 - 0,95 i^nd das Verhältnis der Konzentration der n-AlkaneThe technical object of the invention is to find process parameters which make it possible to obtain a biomass with an increased content of methionine independently of sterile conditions and taking into account a much broader C range of the n-alkanes. Surprisingly, it has been found that the problem can be solved so that in the context of the continuous cultivation of microorganisms, eg. B 0 yeast on nutrient media, a regulation of the ratio of the amount of fresh water and the rejuvenating aqueous medium and the ratio of the concentration of n ~ alkanes and the potassium ion is carried out in certain areas · The regulation must be such that the ratio of the amount of fresh water and to be recycled aqueous medium in the range 0.05 - 0.5 * 0 »5 - 0.95 and the ratio of the concentration of n-alkanes

^8 "" ^18 un<^ ^er ^es ^l^12111^0113 ^jh Bereich 20 - 100 : 1 liegto^ 8 "" ^ 18 un <^ ^ ^ it is ^ l ^ 12111 ^ 0113 ^ jh range 20 - 100: 1 liegto

Das Verfahren wird unter den Bedingungen der Rückführung des wäßrigen Mediums für das Abtrennen und Eindicken von Biomasse realisierte Bas rückzuführende wäßrige Medium, das unverbrauchte Nährelemente für die Mikroorganismen besitzt, wird für die Herstellung von Nährmedium verwendeto Dadurch wird der Verbrauch an Frischwasser, welches für den Prozeß der Kultivierung von Mikroorganismen gebraucht Yiird, und der Verbrauch an Elementen des Nährmediums erheblich reduziert» ·The process is under the conditions of the return of the aqueous medium for the separation and thickening of biomass realized Bas to be recycled aqueous medium having unconsumed nutrient elements for the microorganisms, is used for the production of nutrient medium o Thus, the consumption of fresh water, which for the Process of cultivating microorganisms needed Yiird, and the consumption of elements of the nutrient medium considerably reduced »·

Nach diesem Verfahren erreicht der Methioningehalt 3»3 % des Gesaiatgehaltes an Aminosäuren in der Biomasse» Der Eiweißgehalt in der Biomasse erreicht 65 %« Im einzelnen läuft das Verfahren zur Gewinnung von Biomasse mit erhöhtem Methioningehalt wie folgt ab: · Im Rahmen der Kultivierung von Mikroorganismen, vorzugsweise Hefe, der Gattung Candida auf einem Nährmedium, werden als Kohlenstoffquelle n-Alkane mit einer Kettenlänge des Kohlenstoffs von CQ - Coc oder eine Erdölfraktion, die bei 200 - 400 UC siedet und n-Alkane Cg - C^c besitzt, verwendet«According to this method, the methionine content reaches 3 »3 % of the total content of amino acids in the biomass» The protein content in the biomass reaches 65% «More specifically, the method for obtaining biomass with increased methionine content is as follows: · In the context of the cultivation of microorganisms , preferably yeast, of the genus Candida on a nutrient medium, are carbon sources of n-alkanes having a carbon chain length of C Q - Coc or a petroleum fraction boiling at 200-400 U C and having n-alkanes Cg - C ^ c, used "

Die Kultivierung der Mikroorganismen erfolgt in Permentoren mit Rührern und Belüften des Mediums bei einer Konzentration des Kohlenwasserstoffs im Nährmedium von 2,5 - 5 %j bezogen auf n~Alkane Cg — C^c* Das wäßrige Nährmedium enthält Stickstoff, Phosphor, Kalzium, Magnesium und andere Quellen für die mineralische Ernährung, die für das Wachstum der Mikroorganismen notwendig sind0 Die Konzentration der Quellen für die mineralische Ernährung im Nährmedium setzt sich aus deren Menge im rückzuführenden wäßrigen Me- dium und zusätzlich der Menge, die mit dem Frischwasser zugeführt wird, zusammen« Dabei wird die Gesamtkonzentration des Kaliumions im Nährmedium so beibehalten, daß sich das Verhältnis der Konzentration der n~Alkane Cg - C^g undThe cultivation of the microorganisms is carried out in perforators with stirrers and aerating the medium at a concentration of the hydrocarbon in the nutrient medium of 2.5- 5% j based on n ~ alkanes Cg - C ^ c * The aqueous nutrient medium contains nitrogen, phosphorus, calcium, magnesium and other sources of mineral nutrition necessary for the growth of the microorganisms 0 The concentration of the mineral nutrient sources in the nutrient medium is determined by their quantity in the aqueous medium to be returned and in addition by the amount supplied with the fresh water. together "The total concentration of potassium ion in the nutrient medium is maintained so that the ratio of the concentration of n ~ alkanes Cg - C ^ g and

des Kaliumions im Bereich 20 - 100 : 1 "befindet* Im Prozeß der Kultivierung wird die Beluftungsintensität des Mediums bei 100 - 250 °m-yh, eier pH-Wert des Mediums bei 3,5 - 5» die Temperatur des Mediums bei 30 -42 0C, die Verdünnungsgeschwindigkeit des Mediums bei 0,13 0,4 h~^ beibehalten*of the potassium ion in the range 20-100: 1 "* In the process of cultivation, the aeration intensity of the medium at 100-250 ° m-yh, or the pH of the medium at 3.5-5", the temperature of the medium at 30 - 42 0 C, maintaining the dilution rate of the medium at 0.13 0.4 h ~ ^ *

Die mikrobiologische Suspension, die aus dem Fermentor abläuft, wird durch bekannte Verfahren eingedickt, dabei wird das abgetrennte wäßrige Medium in den Fermentationsprozeß zurückgeführt und bei der Herstellung des Nährmediums verwendet.The microbiological suspension, which runs out of the fermenter, is thickened by known methods, while the separated aqueous medium is returned to the fermentation process and used in the preparation of the nutrient medium.

Das wäßrige Medium, das sich beim Eindicken der Biomasse gebildet hat, enthält alle Elemente des Nährmediums, u. a. auch Kaliumionen«, Die Kaliumkonzentration im Nährmedium hängt von der Art der Abtrennung ab. Bei der Abtrennung des wäßrigen Mediums ohne Erhitzen ist der Gehalt an Kalium gleich 50 - 250 mg/1, beim Erhitzen bis zu 70 - 90 0C wächst der Kaliumgehalt bis auf 800 - I3OO mg/1 an· Die Kaliumkonzentration wird im Nährmedium (S^) so reguliert, daß sie in einem bestimmten Verhältnis zu der Konzentration im Nährmedium der n-Alkane Cg - C^g (SCo _ η )> die %&& Bestand der n-Alkane Cg - C^c- gehören, steht. Die fehlende Menge an Kalium im Nährmedium wird durch ein zusätzliches Einführen an Kaliumsalzlösung in das Frischwasser hinzugefügt. Der Überschuß an Kalium wird durch das Verdünnen des Nährmediums mit Frischwasser beseitigt» Dabei wird das Verhältnis von Frischwasser und des Rücklauf wassers'"!Lm" ProzeßThe aqueous medium which has formed during the thickening of the biomass contains all elements of the nutrient medium, including potassium ions. The potassium concentration in the nutrient medium depends on the type of separation. In the separation of the aqueous medium without heating, the content of potassium is 50 - 250 mg / 1, when heated to 70 - 90 0 C, the potassium content increases up to 800 - IOOOO mg / 1 on · The potassium concentration in the nutrient medium (S. ^) are regulated so that they are in a certain ratio to the concentration in the nutrient medium of the n-alkanes Cg - C ^ g (S C o _ η )> the % && inventory of n-alkanes Cg - C ^ c- belong , The missing amount of potassium in the nutrient medium is added to the fresh water by an additional introduction of potassium salt solution. The excess of potassium is eliminated by diluting the nutrient medium with fresh water. "Here, the ratio of fresh water to the return water '"! Lm "process

der Kultivierung von Mikroorganismen im Bereich 0,05 - 0,5 j 0,5 - 0,95 reguliert«,the cultivation of microorganisms in the range 0.05 - 0.5 j 0.5 - 0.95 regulated «,

Die Kohlenstoffquelle in Form der Kohlenwasserstoffe wird entweder unmittelbar in den Kultivierungsprozeß gegeben, oder sie wird vorher mit dem wäßrigen Nährmedium emulgiert. Die Kohlenwasserstoffe werden in den Fermentor oder in das Nährmedium so gegeben, daß sich die Konzentration der n-Alkane Cg - C^c nicht verändert, vorzugsweise 2,5 - 5 The carbon source in the form of the hydrocarbons is either added directly to the cultivation process, or it is previously emulsified with the aqueous nutrient medium. The hydrocarbons are added to the fermentor or to the nutrient medium in such a way that the concentration of the n-alkanes Cg-C ^ c does not change, preferably 2.5-5 %.

Dabei wird die Konzentration der n-Alkane Cg - C^g, die einen bestimmten Teil der Zusammensetzung der n-Alkane Cg ~ Coc bilden, konstant gehalten. Nach der Konzentration der n-Alkane Cg - C^g wird die Kaliumkonzentration im Nährmedium so geregelt, daß das Verhältnis S~ c : Sk = 20 - 100 ϊ 1 und das Verhältnis der Menge an Frischwasser und des Rückführwassers sich im Bereich 0,05 - 0,5 J 0,5 - 0,95 befindet*The concentration of the n-alkanes Cg - C ^ g, which form a certain part of the composition of the n-alkanes Cg ~ Coc, is kept constant. After the concentration of the n-alkanes Cg - C ^ g, the potassium concentration in the nutrient medium is controlled so that the ratio S ~ c : S k = 20 - 100 ϊ 1 and the ratio of the amount of fresh water and the return water is in the range 0, 05 - 0,5 J 0,5 - 0,95 *

Die Durchführung des Kultivierungsprozesses der Mikroorganismen, vorzugsweise Hefe der Gattung Candida, nach dem erfindungsgemäßen Verfahren ermöglicht in einem nichtkontinuierlichen und nichtsterilen Prozeß eine Biomasse der Mikroorganismen mit einem Eiweißgehalt bis zu 65 %» bei einem Methioningehalt bis zu 3»3 % äes Gesamtgehaltes, an Aminosäure im Eiweiß, zu bekommen« Nach dem bisher bekannten Verfahren erhält man in der Biomasse innerhalb von 15 - 18 Stunden des periodischen KuI-tivierens unter sterilen Bedingungen streng definierter Stämme der Hefe der Gattung Candida bis zu 2 % Methionin. Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren erhält man in der gleichen Kultivierungszeit um 7 - 10 mal mehr Methionin. Das erfindungsgemäße Verfahren wird durch folgende Ausführungsbeispiele veranschaulicht:Carrying out the cultivation process of the microorganisms, preferably yeast of the genus Candida, by the method according to the invention makes it possible in a non-continuous and non-sterile process to obtain a biomass of the microorganisms having a protein content of up to 65% and a methionine content of up to 3% to 3% of the total amino acid content In the protein known to be obtained in the biomass within 15- 18 hours of periodic KuI-tivierenens under sterile conditions of strictly defined strains of the yeast of the genus Candida up to 2% methionine. In the method according to the invention is obtained in the same culture time by 7 - 10 times more methionine. The method according to the invention is illustrated by the following exemplary embodiments:

Ausführungsbeispiele Beispiel 1Exemplary embodiments Example 1

Die Hefe Candida guilliermondii wurde in einem Fermentor mit einem Arbeitsvolumen von 75 t, ausgerüstet mit einem Rührer und einem kontinuierlichen Belüftungssystem, auf Erdölfraktionen, die im Bereich von 240 - 360 0C sieden, kultiviert« Der Gehalt an n-Alkanen Cg - C^c in der Kohlenwasserstofffraktion betrug 20 %, davon entfallen 70 % auf die n-Alkane Cß - C^p»The yeast Candida was guilliermondii in a fermentor with a working volume of 75 tonnes, equipped with a stirrer and a continuous aeration system, petroleum fractions in the range of 240 - boiling 360 0 C, cultured "The content of n-alkanes Cg - C ^ c in the hydrocarbon fraction was 20%, of which 70 % is attributed to the n-alkanes C ß - C ^ p »

In tien Ferment or wurden laufend 19 t/h Nährmedium, das aus einem Kohlenwasserstoffgemisch und einer wäßrigen Lösung der Mineralsalze "bestand, gegeben. Die Kohlenwasserstoffkonzentration im Nährmedium betrug 3 %j bezogen auf die n-Alkane Cg - C^c oder 2,1 %, bezogen auf die n-Alkane C8 ~ C18·In tien Ferment or were constantly 19 t / h of nutrient medium, which consisted of a hydrocarbon mixture and an aqueous solution of mineral salts. "The hydrocarbon concentration in the nutrient medium was 3% j based on the n-alkanes Cg - C ^ c or 2.1 %, based on the n-alkanes C 8 ~ C 18 ·

Die wäßrige Lösung der Salze diente als Quelle des Stickstoffs, Phosphors, Kaliums, Magnesiums und der Spurenelemente. Das Verhältnis des Frischwassers und des Rücklaufwassers im Nährmedium betrug 0,35 * 0,65« Die Kaliumkonzentration betrug im Frischwasser 1060 mg/1, im rückführenden wäßrigen Medium 200 mg/1, die gesamte Kaliumionenkönzentration im Nährmedium 500 mg/1.The aqueous solution of the salts served as a source of nitrogen, phosphorus, potassium, magnesium and trace elements. The ratio of the fresh water and the return water in the nutrient medium was 0.35 * 0.65. The potassium concentration in fresh water was 1060 mg / l, in the returning aqueous medium 200 mg / l, the total potassium ion concentration in the nutrient medium 500 mg / l.

Verhältnis der Konzentrationen Sn : S1 = 42 : 1Ratio of the concentrations S n " : S 1 = 42: 1

υ8 ~ °18 * υ 8 ~ 18 ° *

Die übrigen Parameter der Kultivierung sind:The remaining parameters of cultivation are:

—1-1

Geschwindigkeit des Verdünnen des Mediums 0,25 b- » Belüftungsintensität 100 m^/t h, pEM?ert des Mediums 4 - 4,5» Temperatur des Mediums 32 - 34 0C.Speed of dilution of the medium 0.25 b- »Ventilation intensity 100 m ^ / th, pem ‡ density of the medium 4 - 4.5 » Temperature of the medium 32 - 34 0 C.

Die Suspension der Hefe wurde aus dem Fermentor zum Eindicken in das Aufrahmgefäß, wo bis zu 65 % der wäßrigen Phase abgetrennt wurde, danach in die Separatoren, wo 15 20 % der wäßrigen Phase abgetrennt wurden, geleitet. Rund 10 % des wäßrigen Mediums, das in den Fermentor gegeben wurde, wurden von der Gesamtmenge durch die Verdampfung der Biomasse abgetrennt. Das wäßrige Medium, das in den Stadien des Eindickens der Biomasse abgetrennt wurde, wurde in den Kultivierungsprozeß der Hefe zurückgeführt. Die bis zu 20 - 25 % Trockensubstanz eingedickte Hefesuspension wurde in einem Zerstäubertrockner weitergetrocknet. Die so getrocknete Biomasse wurde auf Eiweißgehalt und Aminosäure untersucht«The yeast suspension was passed from the fermentor to thicken in the creaming vessel where up to 65 % of the aqueous phase was separated, then into the separators where 15 % of the aqueous phase was separated. About 10 % of the aqueous medium added to the fermentor was separated from the total by the evaporation of the biomass. The aqueous medium separated in the stages of thickening the biomass was returned to the cultivation process of the yeast. The yeast suspension thickened to 20-25% dry substance was further dried in a spray dryer. The dried biomass was examined for protein content and amino acid. «

~ TO ~~ TO ~

Beispiel 2Example 2

Die Hefe C0 guilliermondii wurde analog dem Beispiel 1 kultiviert«The yeast C 0 guilliermondii was cultured analogously to Example 1

Der Unterschied besteht darin, daß das Verhältnis Cß ϊ Cg. gleich 105 J 1 war, d« ho die Kaliumionenkonzentration im liährmedium betrug 200 mg/1. Die Kaliumionenkonzentration in dem rückzniührenden wäßrigen Medium betrug 200 mg/1, in der Frischwasserlösung ebenfalls 200 mg/le Die Bioiaasse enthielt 55 ϊ 8 % Eiweiß, Der Methioningehalt betrug 1,8 % vom Gesamtanteil der Aminosäuren,The difference is that the ratio C β ϊ Cg. equal to 105 J was 1, d "h o the potassium ion concentration in liährmedium was 200 mg /. 1 The potassium ion concentration in the aqueous medium to be backfilled was 200 mg / l, in the fresh water solution also 200 mg / l e The bio-alumina contained 55 ϊ 8 % protein, the methionine content was 1.8 % of the total amount of amino acids,

Die Hefe C4, guilliermondii wurde analog dem Beispiel 1 auf Erdölfraktionen, die im Bereich 280 - 370 0C sieden, kultivierte Der Gehalt an n-Alkanen Cg - C^c lautete in der Kohlenwasserstofffraktion 16 %, davon betrugen die n-Alkane Cg ~ C-g 27 %* Die Kohlenwasserstoffkonzentration im Mhrmedium betrug 3 %» bezogen auf die n-Alkane Cg - C^c oder 0,8 % umgereclinet auf die n-Alkane Cg-C ^g0 Die Kaliumkonzentrat ion im HährmediuEi betrug 500 mg/1. Der Unterschied bestand darin, daß der Prozeß der Fermentation nur aoi Frischwasser verwirklicht wurde, ohne Rückführung des wäßrigen Mediums, do he daß das Verhältnis der Mengen an Frischwasser und des rückzuführenden wäßrigen Mediums 1 : O war, das Verhältnis der Konzentrationen imThe yeast C 4 was guilliermondii analogously to Example 1 petroleum fractions in the range 280 - boiling 370 0 C, cultured, the content of n-alkanes Cg - C ^ c was in the hydrocarbon fraction 16%, of which amounted to the n-alkanes Cg ~ Cg 27% * The hydrocarbon concentration in the medium was 3% with respect to the n-alkanes Cg-C ^ c or 0.8% converted to the n-alkanes Cg-C ^ g 0 The potassium concentration in the medium was 500 mg / 1. The difference was that the process of fermentation was only realized aoi fresh water without recirculation of the aqueous medium, d o h e that the ratio of the amounts of fresh water and the recirculated aqueous medium is 1: O was the ratio of the concentrations in the

Hährmedium S^ „ : Slr = 16 ! 1, ^8 °18 KHährmedium S ^ ": S lr = 16! 1, ^ 8 ° 18 K

Die Biomasse enthielt 53,2 % Eiweiß.The biomass contained 53.2% protein.

Der Methioningehalt betrug 1,5 % vom Gesamtanteil der Aminosäurenβ The methionine content was 1.5% of the total amount of amino acids β

1313

Die Ergebnisse der Beispiele sind in der folgenden Tabelle zusammengefaßt:The results of the examples are summarized in the following table:

Beispiel 1 Beispiel 2 Beispiel 3Example 1 Example 2 Example 3

Verhältnis der Menge an Frischwasser und dem rückzuführenden Wasser 0,35:0,65 0,35:0,65 1:0Ratio of the amount of fresh water and the recirculating water 0.35: 0.65 0.35: 0.65 1: 0

Verhältnis der Konzentration im Nährmedium C s K 42:1 105:1 16:1Ratio of the concentration in the nutrient medium C s K 42: 1 105: 1 16: 1

Eiweißgehalt in derProtein content in the

Biomasse in % 63,7 55*8 53,2Biomass in% 63.7 55 * 8 53.2

Methioningehalt am Gesaiatgehalt der Aiaino-Methionine content in the total content of aiaino

säuren in % 3,0 1,8acids in% 3.0 1.8

Claims (1)

/ίΟ/ ίΟ Erfindungsanspruchinvention claim Verfahren zur Gewinnung von. Eiweißbiomasse, angereichert mit Methionin, durch Kultivierung von Mikroorganismen, vorzugsweise Hefe, auf Kohlenwasserstoffen, die n««Alkane Gg «» Cnc besitzen, bei Anwesenheit der notwendigen Nahrstoffquellen und unter Bedingungen der Belüftung mit nachfolgender Abtrennung der Biomasse, Kohlenwasserstoffe und des wäßrigen Mediums, Rückführung des wäßrigen Mediums in den Kultivierungsprozeß, gekennzeichnet dadurch, daß zur Erhöhung des Methioningehaltes im Eiweiß das Verhältnis der Konzentrationen der n-Alkane Cg ~ C^g und des Kaliums im Bereich 20 - 100 : 1 und das Verhältnis der Menge an Frischwasser und des rückzuführenden wäßrigen Mediums in Bereich 0,05 —0,5 » 0,5 ~ 0,95 reguliert wird»Method for obtaining. Proteinaceous biomass fortified with methionine, by cultivating microorganisms, preferably yeast, on hydrocarbons containing "alkanes" Cnc, in the presence of the necessary nutrient sources and under conditions of aeration, with subsequent separation of the biomass, hydrocarbons and the aqueous medium, Recycling of the aqueous medium in the cultivation process, characterized in that to increase the methionine content in the protein, the ratio of the concentrations of n-alkanes Cg ~ C ^ g and potassium in the range 20 - 100: 1 and the ratio of the amount of fresh water and the recirculated aqueous medium is regulated in the range of 0.05 -0.5 "0.5 ~ 0.95»
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