CZ92593A3 - 2-acetamido-2-deoxy-0-beta-D-glukopyranosidy a 2 acetamido-2-deosy-0-beta-D-galaktopyranosidy námelových alkaloidů a způsob jejich přípravy - Google Patents
2-acetamido-2-deoxy-0-beta-D-glukopyranosidy a 2 acetamido-2-deosy-0-beta-D-galaktopyranosidy námelových alkaloidů a způsob jejich přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ92593A3 CZ92593A3 CZ1993925A CZ92593A CZ92593A3 CZ 92593 A3 CZ92593 A3 CZ 92593A3 CZ 1993925 A CZ1993925 A CZ 1993925A CZ 92593 A CZ92593 A CZ 92593A CZ 92593 A3 CZ92593 A3 CZ 92593A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- acetamido
- deoxy
- elymoclavin
- beta
- lysergol
- Prior art date
Links
- 229960003133 ergot alkaloid Drugs 0.000 title claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 5
- DAVNRFCJMIONPO-UHFFFAOYSA-N elymoclavine Natural products C1=CC(C2C=C(CO)CN(C2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 DAVNRFCJMIONPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- WVVSZNPYNCNODU-CJBNDPTMSA-N Ergometrine Natural products C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@@H](CO)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 WVVSZNPYNCNODU-CJBNDPTMSA-N 0.000 claims abstract description 12
- WVVSZNPYNCNODU-XTQGRXLLSA-N Lysergic acid propanolamide Chemical compound C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@H](CO)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 WVVSZNPYNCNODU-XTQGRXLLSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 229960001405 ergometrine Drugs 0.000 claims abstract description 12
- SAHHMCVYMGARBT-UHFFFAOYSA-N Isochanoclavine I Natural products C1=CC(C(C(NC)C2)C=C(C)CO)=C3C2=CNC3=C1 SAHHMCVYMGARBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- BIXJFIJYBLJTMK-UHFFFAOYSA-N Lysergol Natural products C1=CC(C2=CC(CO)CN(C2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 BIXJFIJYBLJTMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- BIXJFIJYBLJTMK-MEBBXXQBSA-N lysergol Chemical compound C1=CC(C2=C[C@@H](CO)CN([C@@H]2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 BIXJFIJYBLJTMK-MEBBXXQBSA-N 0.000 claims abstract description 11
- UFKTZIXVYHGAES-WDBKCZKBSA-N [(6ar,9r,10ar)-7-methyl-6,6a,8,9,10,10a-hexahydro-4h-indolo[4,3-fg]quinoline-9-yl]methanol Chemical compound C1=CC([C@H]2C[C@@H](CO)CN([C@@H]2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 UFKTZIXVYHGAES-WDBKCZKBSA-N 0.000 claims abstract description 9
- UFKTZIXVYHGAES-UHFFFAOYSA-N trans-dihydrolysergol Natural products C1=CC(C2CC(CO)CN(C2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 UFKTZIXVYHGAES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 claims description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 claims description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- DAVNRFCJMIONPO-UKRRQHHQSA-N Elymoclavine Chemical compound C1=CC([C@H]2C=C(CO)CN([C@@H]2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 DAVNRFCJMIONPO-UKRRQHHQSA-N 0.000 claims description 2
- -1 alkaloid glycosides Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 claims description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 2
- 102000002268 Hexosaminidases Human genes 0.000 claims 1
- 108010000540 Hexosaminidases Proteins 0.000 claims 1
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims 1
- SAHHMCVYMGARBT-HEESEWQSSA-N chanoclavine-I Chemical compound C1=CC([C@H]([C@H](NC)C2)\C=C(/C)CO)=C3C2=CNC3=C1 SAHHMCVYMGARBT-HEESEWQSSA-N 0.000 abstract description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract 1
- IAOSEBXZNXDPEE-UKRRQHHQSA-N elymoclavine Chemical compound C1=CC=C2[C@H]3C=C(CO)CN(C)[C@@H]3CC3=CN=C1[C]32 IAOSEBXZNXDPEE-UKRRQHHQSA-N 0.000 abstract 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 102100030122 Protein O-GlcNAcase Human genes 0.000 description 6
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 4
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 108010055851 Acetylglucosaminidase Proteins 0.000 description 3
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 3
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 3
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010085377 beta-N-Acetylhexosaminidases Proteins 0.000 description 3
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 3
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 description 2
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 description 2
- 150000008270 N-acetylgalactosaminides Chemical class 0.000 description 2
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000002451 electron ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 150000008269 N-acetylglucosaminides Chemical class 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001284077 Perusia Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- SAHHMCVYMGARBT-GJTNBUKJSA-N chanoclavine ii Chemical compound C1=CC([C@@H]([C@H](NC)C2)\C=C(/C)CO)=C3C2=CNC3=C1 SAHHMCVYMGARBT-GJTNBUKJSA-N 0.000 description 1
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910000069 nitrogen hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M sodium;3-acetamido-5-[acetyl(methyl)amino]-2,4,6-triiodobenzoate;(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound [Na+].CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I.O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012956 testing procedure Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003191 uterotonic effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Oblast techniky
Vynález se týká 2-acetamido-2-deoxy-0-e-D-glukopyranosidů ( β-N-acetglukosamiriidů ) a 2-acetamido-2-deoxy-0-fi-D-galaktopy ranosidů (β-N-acetgalaktosaminidů) námelových alkaloidůelymoklavinu, lysergolu, 9,10-dihydrolysergolu, chanoklavinu a ergometrinu, jakož i způsobu jejich přípravy.
Dosavadní stav techniky r
Látky uvedeného typu nebyly dosud připraveny. N-acetylhexosaminidylové zbytky se často vyskytují v mnoha glykokonjugátech a receptorových strukturách (Drickamer K. , Cell 67,1029 (1991). Tyto funkční zbytky působí značné změny fyziologických aktivit různých komplexů.
Námelové alkaloidy tvoří skupinu substancí se značnou strukturální rozmanitostí, různými biologickými aktivitami a rozsáhlým farmakologickým použitím. Většina farmakologicky využívaných látek jsou semisyntetické deriváty přírodních alkaloidů. Napojením β-galaktosylových zbytků na námelové alkaloidy (Křen et al. Tetrahedron Lett. 33, 7233 (1992)) se například podstatně zvyšují imunomodulační účinky alkaloidů ve srovnání s aglykony.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou 2-acetamido~2-deoxy-0-c.-D-glukopyranosidy (β-N-acetglukose.nimidy) a 2-acetamido-2-deoxy-0-C-D-galaktopyranosidy (β-N-acetgalaktosaminidy) námelových alkaloidůelymoklavinu, lysergolu, 9,10-dihydrolysergolu, obecného vzorce I, chanoklavinu obecného vzorce II a ergometrinu obecného vzorce III:
kde poloha dvojné vazby je nebo nebo chybí
(II) ( III )
ve kterých R je Ri nebo R2, přičemž
HO·
HOch2oh
Ri= θ^ψ0 NHAc
HO
OH
I CH2OH
NHAc
Látky obecných vzorců I,II a III se připraví tak, Se na námelové alkaloidy elymoklavin, chanoklavin, lysergol, 9,10-dihydrolysergol a ergometrin se působí β-N-acety1hexosaminidasou - tj. β-N-acety 1 galaktosamiriidasou nebo β-N-acety lglu.kosaminidasou, např. z Aspergillus oryzae nebo z Aspergillus niger v přítomnosti donoru β-N-acety1hexosaminidylového zbytku, např. p-nitrofeny1-β-N-acety1galaktosaminidu p-nitrofeny1-fl-N-acety1hexosaminidu v pufru o pH 4 až 7, načež výsledný N-acety1hexosaminid alkaloidů se z reakční směsi po lyofilizaci izoluje například chromatografií na silikagelu, nebo vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC). Jako reakčního prostředku se používá výhodně fosfátového nebo citrátového pufru.
Látky podle vynálezu. se vyznačují imunomodulačními vlastnostmi a látky obecného vzorce III mají též uterotonické účinky.
Příklady Provedení vynálezu
Dále je vynález blíže objasněn na příkladech provedení, aniž by byl jimi předmět vynálezu, jakkoliv omezen.
Příklad 1
Příprava fi-N-acety 1 galak. tosidu elymoklavinu.
Elymoklavin (240 mg, 0,945 mmol), kyselina citrónová (35 mg, 0,42 mmol) a p-nitrofenyl-fi-N-acety1galaktosaminid (150 mg, 0,433 mmol) se za tepla rozpustí v Mcllvainově pufru (10 ml, 0,05 M,pH 4,5). Po ochlazení na 33 °C se ke směsi přidá β-N-acety1hexosa- minidasa s výhodou z Aspergillus oryzae. Tento enzym se připraví z komerční β-galaktosidasy z Aspergillus oryzae (Sigma, grade XI) následovně: 1 g práškové β-galaktosidasy se rozpustí ve 20 ml destilované vody při 0 °C. Roztok se za míchání z při stejné teplotě nasytí síranem amonným dc> 30 X saturace.
doufcei··. . ·' '
d. _ se odstředí a roztok, se dále nasytí síranem amonným do 100 X saturace. Po cca 1 hod stání v lednici se vyloučený precipitát odstředí a uschová v lednici jako suspenze v nasyceném roztoku síranu amonného.
Pro 10 ml reakční směsi se použije množství enzymu odpovídaje! 250 mg původní galaktosidasy.
Glykosylační reakce se sleduje pomoc! /ysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) (kolona Macherey-Nagel Nucleosil 5, C-18, mobilní fáze methanol: voda: amoniak = 40 : 60 : 0,02). Když produkce glykosidu dosáhne maxima, reakce se přeruší povařením a uvolněný p-nitrofenol se odstraní extrakcí etherem
Reakčni směs v methanolu, a dichlormethan : směsí (methanol : 60 : 10 se lyofilizuje, pevný zbytek se rozpustí dělí chromatografií na silikagelu. (methanol : amoniak = 20 : 80 : 0,1), glykosidy se eluu.jí : dichlormethan : ethanol : voda : amoniak - 35 : 8 : 0,1). Výtěžek elymoklavin ft-N-acety 1 gal kaktosaminidu podle HPLC je cca 15 X, izolovaný výtěžek je cca 12,5 X.
Struktura produktu byla potvrzena měřením nukleární magnetické rezonance a hmotovou spektrometrií.
-Acetamido-2-deoxy-0-fi-D-galaktopyranosid elymoklavinu ‘H NMR (400 MHz, CD30D, 25 0C): 2.014 s, 3 H (Ac); 2.583 s, 3 H (N-CH3); 2.656 ddd, 1 Η (H-5, 3(4e,5)=3.9, J(4a,5)=11.7,
3<5,10)=9.3); 2.780 ddd, 1 H (H-4a, 3(2,4a) = 1.7, J(4a,4e)=14.0); 3.050 dddd, 1 H (H-7e, J(7a,7e) = 15. 9, 3(7e,9) = 2.0, 3(7e,10)=4.0, J (7e, 17) = 0.4) , 3.368 dd, 1 H (H-4e); 3.481 ddd, 1 Η (H5',
3(4',5')=1.1, 3(5',6'd)=7.7, 3(5',6'u)=4.1); 3.605 dd, 1 Η (H-3', 3(2',3')=10.7, 3(3',4')=3.3)? 3.634 ddd, 1 H (H-7a, J(7a,9)=0.3,
3(7a ,10)=2.1); 3.705 dd, 1 H (H-6'u, 3 (6' d , 6 ' u ) = 11.6 ) ; 3.810 dd, 1 Η (H-4'); 3.830 m, 1 h (H-10); 3.869 dd, 1 H <H~6'd); 3.983 dd, 1 Η (H-2', 3(1',2')=8.5); 4.222 dddd, 1 H (H-17u, 3(9,17u)=1.0,
3(17d,17u)=12.2); 4.310 ddd, 1 H (H-17d,
3(10,17d)=1.2)5 4.42 ddd, 1 Η (H-12,
6.940 d,
3(10,17u)=l.7, 3(9,17d)=l.0,
H (H-9); 6.933 3(12,14)=0.7); 3(13,14)=8.2);
13C NMR (100 MHz, CD3OD, d, 1 H (H-l ' ) 6.526 m, 1
3(10,12)=1.4, 3(12,13)=7.0,
H (H-2); 7.079 dd, 1 Η (H-13, 1 Η (H-14, 3(10,14)=1.0).
:5 °C>: 23.45 q (Ac) ; 27.49 t (C-4),
41.20 q (N-CH3), 42.03 d (C-10), 54.54 d (C-2'>, 53.05 t (C-7),
63.40 t <C-6'), 66.13 d (C-5), 70.22 d (C-4'), 73.20 t (C-17), (C-3'), 77.47 d (C-5'), 102.43 d
111.61 5 (C-3), 113.33 d (C-12), (C-9), 127.73 5 ·_·.. j o d d (C-14), 123.71 d (C-13),
124.83 (C-l'), 110.40 120.04 d (C-2), (C-l6),
131.88 s (C-8), 134.25 s (C-ll), 135.59 s (C-15), 174.28 s (C=0).
EI-MS : m/z, (7) 457 < M+, 0.27),
| z. 5 ·_'·» | 1341, | 117) | , 238 | ( 12), |
| 237. | 1392, | 38) , 2 | 36.1329 | (Ci 6 Hl6 N2 , |
| (74) | , 234 | ( 18) , | 133 (21) | , 232 (12) |
| 221 . | 1 (.'7 9, | 16 ) , 2 | 20 (15), | 219.0921 |
| 22) , | 207 | <7) , | 205 < 8), | 192 (15) |
| 167. | 0735, | 15), | 154.06 | 54 (CiiHs |
59.0304 (C2 H5 NO), vypeč teno 59.037 43.0184, 32).
Proton i zaváný molekulami ion Čivy počteno 458.2291).
253.1350 (Cí6Hí7N20, vypočteno 237.1416 (C16H17N2,' vypočteno vypočteno 236.1313, 100), 235 , 221.1035 (CisHisNa, vypočteno (CieHíiNs, vypočteno 219.0922, , 167.0712 <Cí2H<?N, vypočteno
N, vypočteno 154.0657, 28),
1,6), 43.0180 (C2H3O, vypočteno
MS(NH3): 458.2319 <024Η31Ν304,
Příklad 2
Příprava N-acety1ga1aktosaminidů lysergolu, 9,10-dihydrolysergolu, chanoklavinu a ergometrinu.
Glykosylace uvedených alkaloidů se provádí stejně jako je uvedeno v příkladu 1, s tím rozdílem, že se použijí ekvimolární množství dalších alkaloidů. Výtěžky (vztaženo na aglykon) N-acety1galaktosaminidů lysergolu (127), dihydrolysergolu (107), chanoklavinu (147), ergometrinu (9,57). Uvedené látky byly izolovány a spektrálně charakterizovány jak je uvedeno v příkladu
1.
Příklad 3
Příprava β-N-acety1glukosaminidu elymoklavinu
Elymoklavin (240 mg, 0,945 mmol), kyselina citrónová (85 mg, 0,42 mmol ) a ρ-nitrofenyΙ-β-N-acety1glukosaminid (150 mg, 0,438) se za tepla rozpustí v Mcllvainově pufru (10 ml, 0,05 M, pH 4,5). Po ochlazení na 33 °C se ke směsi přidá β-N-acety1hexosaminidasa s výhodou z Aspergellus oryzae připravený dle postupu uvedeného v přikladu 1.
Pro 10 ml reakční směsi se použije množství enzymu odpovídající 500 mg původní galaktosidasy.
Glykosylační reakce se sleduje pomocí HPLC (kolona Macherey-Nagel Nucleosil 5, C-18, mobilní fáze methanol : voda : amoniak = 40 s 60 : 0,02). Když produkce glykosidu dosáhne maxima, reakce se přeruěi povařením, uvolněný p-nitrofenol se odstraní extrakcí etherem. Reakční směs se lyofilizuje, pevný zbytek se rozpustí v methanolu a dělí chromatografií na silikagelu (methanol : dichlormethan : amoniak 20 : 80 ; 0,1), glykosidy se eluují směsí (methanol ; dichlormethan : ethanol : voda ; amoniak = 35 : 60 : 10 : 8 : 0,1). Výtěžek elymoklavin β-N-acety1glukosaminidu podle HPLC je cca 11,5 Z, izolovaný výtěžek je cca 9,5%.
Struktura produktu byla potvrzena měřením nukleární magnetické rezonance a hmotovou spektrometrií.
E1 y m o k 1 a v i n v - a c e t a m .i d o - 2 -- d e o x y - 0 - β - D - g 1 u k o p y r a n o s i d
| 1H NMR <400 MHz, CD;-, OD, | 5 θ C): 2.017 | 5 , | 3 H (Ac ) ; 2.570 s, 3 | |||
| H (N-CH3); 2.639 ddd, 1 | H | (H-5, | 3 (4e, | 5) | =3.9, 3 (4a, 5)=11.7, | |
| 3 ( | 5,10)=9.3); 2.762 ddd, | 1 | H (H-4a | , | 3 (2, 4a)=1.6, 3 (4a, | |
| 4e) | =13.9); 3.022 dddd, | 1 | H | (H-7e, | 3 | (7a, 7e)=15,9, 3 <7e, |
| 9) = | Í.2, 3 (7e, 10)=3.8, | 3 | <7e, | 17u)=í. | 0) ; | 3.254 dd, 1 Η (H-4', |
(3', 4')=8.4, 3 (4', 5')=9.6); 3.273 ddd, 1 Η (H-5', 3 (5',
6'd)=í.8, 3 (5', 6'u)=6.6); 3.334 dd, 1 H <H-4e); 3.471 dd, 1
Η (H-3', J (2', 3-)=10.3)5 3.609 ddd, 1 H (H-7a, 3 (7a, 8)=0.7,
J (7a, 10)=0.7); 3.668 dd, 1 H (H-6'u, 3 (6'd, 6'u)=11.9); 3.725 dd, 1 Η (H-2', 3 ď, 2')=B.5); 3.816 m, 1 H (H-10); 3.930 dd, 1 H (H-6'd); 4.207 ddd, 1 H <H-17u, 3 (17d, 17u)=12.3, (9,17u))0; 3 (10, 17u)=1.6>; 4.278 ddd, i H <H-17d, 3 (9,
17d)=1.3, 3 (10, 17d)=1.2); 4.453 d, 1 Η <Η—1'> 5 6.519 m, 1
H (H—9); 6.918 ddd, 1 Η (H-12, 3 (10, 12)=0.7, 3 (12, 13)=7.1, (12, 14)=0.8); 6.924 d (H-2); 7.076 dd, 1 Η (H-13, 3 (13,
14)=8.1); 7.171 ddd, 1 Η (H-14, 3 (10, 14)=0.7).
i3C NMR (100 MHz, CD30D,25 °C): 23.44 g (Ac ) , 27.36 t (C-4), d
s .14 q .62 t . 38 d (C-14), 3.74 d (C-8), (N-Me), 41.97 d (C-10), 57.59 d (C-2'), 57.88 <C-6'>, 66.07 d (C-5), 72.72 d <C-4'), 73.28 t (C-3'), 78.59 d (C-5'>, 102.13 d (C-l'),
111.43 s (C-3), 113.38 d (C-12), 120.13 (C-13), 124.87 d (C-9), 127.67 s (C-16),
134.00 s (C-lí), 135.54 s (C-15), 173.98 ε (C=D) (C-7), (C-17),
110.48 (C-2),
131.67
EI-MS :m/z (7.) 457 (M+,0.2X), 253.1330 (Cí6Hí7N20, vypočteno
253.1341, 337.), 238 (23), 237.1400 (Ci6H17N2 , vypočteno
237.1392, 51), 236.1335 (Ο1ώΗιώΝ2, vypočteno 236.1313, 100), 235 (92), 234 (31), 233 (60), 232 (29), 221.1045 (C1EHi3N2, vypočteno 221.1079, 19), 220 (21), 219.0921 (CisHnNa, vypočteno 219.0922,
22), 207 (9), 205 (11), 192 (9), 167.0694 (Ci2H9N, vypočteno
167.0735, 6), 154.0622 (CnHgN, vypočteno 154.0657, 10), 59.0337 (C2HsN0, vypočteno 59.0371, 5), 43.0187 (C2H3O, vypočteno
43.0184, 15).
Molekulární ion protonizovaný MSCI : 458.2300 (C24H3iN30* , vypočteno 458.2291)
Příklad 4
Příprava β-N-acetylglukosaminidu elymoklavinu pomocí β-N-acety1glukosaminidas různého původu
Příprava β-N-acety1glukosaminidu elymoklavinu se provádí jak je uvedeno v příkladu 3 s tím rozdílem, že místo β-N-acety1hexosaminidasy z Aspergillus oryzae se použije s výhodou β-N-acety1glukosaminidasa z Aspergillus niger (Sigma) v množství 26 U/ml a Mcllvainův pufr o pH 4,0 nebo β-N-acety1glukosaminidasa z hovězích ledvin (Sigma) v množství 13 U/ml a Mcllvainův pufr o pH 4,25.
r. r
Příklad 5
Příprava N-acetylglukosaminidů lysergolu, 9,10-dihydrolysergolu, chanoklavinu a ergometrinu
Glykosylace uvedených alkaloidů se provádí stejně jako je uvedeno v příkladu 3 nebo 4 s tím rozdílem, že se použijí ekvimolární množství dalších alkaloidů, aglykon, dle postupu v příkladu 3) lysergolu (9%), dihydrolysergou (8%), ergometrinu (7,5%). Uvedené látky byly
Výtěžky (vztaženo na
N-acetylglukosaminidů chanoklavinu (11%), izolovány a spektrálně charakterizovány jak je uvedeno v příkladu 1.
Chanoklavin, kde R=R2 3e charakterizován hmotovým spektrem m/z (%): 460 (M+H)+, 442(2), 428(2), 257(10), 239(100), 204(3) a
NMR spektrem (400 MHz, CD^OD, 25°C) protonovým: 7,033 (H-2), 2,952 (H-4a), 3,347 (H-4e), 3,189 (H-5), 1,893 (H-7a), 1,893 (H-9), 4,083 (H-10), 6,713 (H-12), 7,073 (H-13),
4,370 (H-17d), 4,079 (H-17u), 2,603 (NCH-j), 4,467 (H-2 ), 3,487 (H-3 ), 3,284 (H-4 ), 3,258 (H-5 ),
3,907 (H-6 d), 3,701 (H-6 u), 1,755 (Ac)
Ergometrin, kde R=R2 íe charakterizován hmotovým spektrem m/z (%): 529 (M+H)+, 511(2), 497 (1), 326 (100), 308 (2), 204(4) a NMR spektrem (400 MHz, CD^OD, 25 °C) protonovým: 6,986 (H-2),
2,710 (H-4ab)), 3,590 (H-4eb)), 3,106 (H-5), 2,835 (H-7a), 3,205
6,452 (H-9), 7,193 (H-12), 7,119 (H-13), (N-Me), 4,150 (H-a), 1,186 (Η-β), 3,881 (Η-β d), 3,579 (Η-β u), 4,433 (H-l ), 3,768 (H-2 ), 3,481 (H-3 ), 3,322 (H-4 ), 3,310 (H-5 ), 3,914 (H-6 d), 3,704 (H-6 u), 2,014 (Ac) (H-7e), 5.458 7,207 (H-14), (H-l ), 3,676 (H-7e), 3,634 (H-8),
7,219 (H-14), 2,662
Biologické testy nových látek
Nově připravené glykosidy námelových alkaloidů byly testovány na imunomodulační aktivitu, tj., především na posílení imunitního systému v obraně proti nádorovým onemocněním.
Postup testování:
Mononukleární buňky z periferní krve (PBMC) byly získány z r c f r r r t-e * r p r f č f r r r r r r ,' r r .
p ' ' r r '
- 9a heparinizované krve (Heparin, Spofa, ČR, 5 IU/ml) po separaci na hustotním gradientu Ficoll-Hypaque (Lymphoprep, Sigma, USA). Buňky byly resuspendovány v kompletním kultivačním mediu. Aktivované NK-obohacené lymfoblasty byly připraveny po 10 denní kultivaci v PBMC kultuře RPMI8866 B lymfoblastoidních buněk ozářených^-zářením o dávce 50 Gy (Perusia B., Ramoni C., Anegon A., Cuturi M.C., Faust J., Trinchieri G.: Nat.Immun. Cell Growth Regul. 6, 171, (1987).
Dlouhodobé kultivace byly prováděny v mediu RPMI-1640 obohaceném L-glutaminem a antibiotiky a dále 10% fetálním telecím šerem (Biocom, Brno ČR). Inkubace byla prováděna při 37°C ve zvlhčované atmosféře obsahující 5% CO2. Nádorové cílové buňky pro stanovení aktivity NK-bunék: K562 [ECACC,#85011407], lidské myeloidní leukemické lymfoblasty RÁJI [ECACC,^85011413], lidské T-buněčné leukemické lymfoblasty byly získány ze sbírky ECACC (Salisbury, UK).
Efektorové buňky v koncentraci 2.105/ml byly inkubovány s cílovými buňkami označenými 51Cr v konc. l.l04/ml po 4 hodiny na mikrotitrační destičce. Po inkubaci byla radioaktivita supernatantu odečítána pomocí ^-scintilátoru. Všechny testy byly prováděny třikrát. Samovolné uvolnění radiaktivního chrómu bylo měřeno po inkubaci bez efektorových buněk. Procento specifické lyse bylo vypočteno dle následujícího vzorce:
exp.cpm-spont.cpm % cytotoxicity = _ x 100 max.spm-spont.cpm kde, exp.cpm (= počet rozpadů za minutu) je průměrná hodnota cpm v přítomnosti efektorových buněk, spont.cpm je uvolnění radioaktivity bez efektorových buněk a max. cpm je 40% celkového radioaktivního chrómu inkorporovaného do cílových nádorových buněk.
Γ (* * r < r c <- r - f r- r r - 9b -
Claims (2)
- Testované glykosidy alkaloidu byly přidávány k efektorovým buňkám v různých koncentracích 10-6 až 10-15 M a byl měřen jejich efekt ve srovnání s kontrolami (bez přídavku těchto látek).Při testování nových látek bylo dosaženo následujících výsledků:
- 2-Acetamido-2-deoxy-0-^B-D-glukopyranosid elymoklavinu a 2-acetamido-2-deoxy-O-^-D-galaktopyranosid elymoklavinu zvyšují cytotoxicituPBMC buněk (třída bílých krvinek) vůči NK-senzitivním (K562) aNK-rezistentním (RAJI)l nádorovým liniím, ve srovnání se samotným ai elymoklavinem, o 20/-50%. Účinnější látkou se jeví 2-acetamido-2-deoxy-0-^5-D-glukopyranosid elymoklavinu.Průmyslová využitelnostZpůsobu podle vynálezu lze využít především ve farmacii a imunologii >1. 2-ýScetamido-2-deo>;y-0-fi-D~glukopyranosidy a 2-acetamino-2-deoxy-O-e-D-galaktopyranosidy námelových alkaloidů elymoklavinu, lysergolu, 9,10-dihydrolysergolu obecného vzorce I, chanoklavinu obecného vzorce II a ergometrinu obecného vzorce III:HN (II)CONHCH (III ) ve kterých R je Ri nebo R2, přičemžRjHOHOCH2OHNHAcOHR2 — harcUuj i/ola. Qc Způsob přípravy Pátek elymoklavin, lysergol, ergometrin působí podle teadu 1 vyznačený tím, že se na 9,10-dihydrolysergol, chanoklavin nebo N-acety 1 hexosaminidasou. v přítomnosti p-nitrofenyΙ-β-N-acety1galaktosaminidu nebo p-nitrofenyΙ-β-Nacety lglukosaminidu v pufru o pH 4 až 7 za teploty 4 až 35^C, načež se produkt izoluje například chromatografií na silikagelu nebo vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ1993925A CZ286395B6 (en) | 1993-05-18 | 1993-05-18 | 2-acetamido-2-deoxy-0-beta-D-glukopyranosides and 2 acetamido-2-deoyy-0-beta-D-galactopyranosides of ergot alkaloids and process of their preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ1993925A CZ286395B6 (en) | 1993-05-18 | 1993-05-18 | 2-acetamido-2-deoxy-0-beta-D-glukopyranosides and 2 acetamido-2-deoyy-0-beta-D-galactopyranosides of ergot alkaloids and process of their preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ92593A3 true CZ92593A3 (cs) | 2000-02-16 |
| CZ286395B6 CZ286395B6 (en) | 2000-04-12 |
Family
ID=5462475
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ1993925A CZ286395B6 (en) | 1993-05-18 | 1993-05-18 | 2-acetamido-2-deoxy-0-beta-D-glukopyranosides and 2 acetamido-2-deoyy-0-beta-D-galactopyranosides of ergot alkaloids and process of their preparation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ286395B6 (cs) |
-
1993
- 1993-05-18 CZ CZ1993925A patent/CZ286395B6/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ286395B6 (en) | 2000-04-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Miller et al. | Isolation, structure and synthesis of kinetin, a substance promoting cell division1, 2 | |
| KOSUGE et al. | Studies on cardiac principle of aconite root | |
| DE3382626T2 (de) | Markierte modifizierte nucleotide und polynucleotide, verfahren zu ihrer herstellung, verwendung und aufspuerung. | |
| CA1121290A (en) | Amino sugar derivatives | |
| EP0014815A2 (de) | Peptidderivate, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte sowie pharmazeutische Präparate mit einer dieser Verbindungen | |
| EP1097937A1 (en) | N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics | |
| EP0025495A1 (de) | Lipophile Muramylpeptide, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung | |
| Ganguly et al. | Immunomodulatory effect of Tylophora indica on Con A induced lymphoproliferation | |
| Sinz et al. | Isolation and characterization of a novel quaternary ammonium-linked glucuronide of lamotrigine. | |
| US4199572A (en) | N-Substituted amino glycoside compounds, their production, and their use as medicaments | |
| Bauch et al. | Aromatic metabolites in cell suspension cultures of Galium mollugo L. | |
| TS’O et al. | An integrated and comparative study of the antiviral effects and other biological properties of the polyinosinic acid-polycytidylic acid and its mismatched analogues | |
| US4603137A (en) | Immunosuppressive chromone alkaloid | |
| US3919193A (en) | 3-Deazaguanosine and derivatives thereof | |
| US4169141A (en) | 1-Peptidyl derivatives of di-O-aminoglycosyl-1,3-diaminocyclitol antibacterial agents | |
| Kelley et al. | Furanose-pyranose isomerization of reduced pyrimidine and cyclic urea ribosides | |
| Argoudelis et al. | MICROBIAL TRANSFORMATION OF ANTIBIOTICS. III CONVERSION OF CLINDAMYCIN TO 1'-DEMETHYLCLINDAMYCIN AND CLINDAMYCIN SULFOXIDE BY STREPTOMYCES SPECIES | |
| FI75173C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya cytostatiskt verkande antracyklinderivat. | |
| DE69713514T2 (de) | Festphasenträgeroberfläche die toxin-bindende oligosaccharide enthalten | |
| EP0348947B1 (en) | Prevention or elimination of mycoplasma contamination of animal or plant cell culture | |
| CZ92593A3 (cs) | 2-acetamido-2-deoxy-0-beta-D-glukopyranosidy a 2 acetamido-2-deosy-0-beta-D-galaktopyranosidy námelových alkaloidů a způsob jejich přípravy | |
| LAATSCH et al. | Oligomycin F, a new immunosuppressive homologue of oligomycin A | |
| Khwaja et al. | 8-Substituted derivatives of adenosine cyclic 3', 5'phosphate require an unsubstituted 2'-hydroxyl group in the ribo configuration for biological activity | |
| PL80273B1 (cs) | ||
| Takahashi et al. | Potent induction of the adaptive response by a weak mutagen, methyl iodide, in Escherichia coli |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 19930518 |