CZ62092A3 - Prostriedok na označovanie bielkovín, nukleových kyselin a iných chemických zlúčenín - Google Patents
Prostriedok na označovanie bielkovín, nukleových kyselin a iných chemických zlúčenín Download PDFInfo
- Publication number
- CZ62092A3 CZ62092A3 CS92620A CS62092A CZ62092A3 CZ 62092 A3 CZ62092 A3 CZ 62092A3 CS 92620 A CS92620 A CS 92620A CS 62092 A CS62092 A CS 62092A CZ 62092 A3 CZ62092 A3 CZ 62092A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- nucleic acids
- chemical compounds
- preparation
- proteins
- mol
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- BEJNERDRQOWKJM-UHFFFAOYSA-N kojic acid Chemical class OCC1=CC(=O)C(O)=CO1 BEJNERDRQOWKJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 235000015895 biscuits Nutrition 0.000 claims 1
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 abstract 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- JXQDOCGFKWWJKP-UHFFFAOYSA-N 2-(azidomethyl)-5-hydroxypyran-4-one Chemical compound OC1=COC(CN=[N+]=[N-])=CC1=O JXQDOCGFKWWJKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 229960004705 kojic acid Drugs 0.000 description 3
- WZNJWVWKTVETCG-UHFFFAOYSA-N kojic acid Natural products OC(=O)C(N)CN1C=CC(=O)C(O)=C1 WZNJWVWKTVETCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229910052747 lanthanoid Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002602 lanthanoids Chemical class 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N nickel Substances [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008836 DNA modification Effects 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 229910052772 Samarium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical class [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NNMXSTWQJRPBJZ-UHFFFAOYSA-K europium(iii) chloride Chemical compound Cl[Eu](Cl)Cl NNMXSTWQJRPBJZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000002795 fluorescence method Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910052746 lanthanum Inorganic materials 0.000 description 1
- FZLIPJUXYLNCLC-UHFFFAOYSA-N lanthanum atom Chemical compound [La] FZLIPJUXYLNCLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- LGQLOGILCSXPEA-UHFFFAOYSA-L nickel sulfate Chemical compound [Ni+2].[O-]S([O-])(=O)=O LGQLOGILCSXPEA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000363 nickel(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical class [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Riešenie sa týká značkovacieho prostriedku na bielkoviny, nukleové kyseliny a iné chemické zlúčeniny, ktorý ako účinnú látku derivády kyseliny kójovej obecného vzorce I, pričom Ri je H,CL,Br,I, R?je N3, CL, Br, I, OH a R3je H.
Description
Prostriedok na označovanie bielkovín, nukleových kyselin a inýčlň chemických zlúčenín
Oblast techniky
Vynález sa týká prostriedku na označovanie bielkovín, nukleových kyselin a iných chemických zlúčenín, který ako účinnú látku obsahuje deriváty kyseliny kojovej. Použitie účinnej látky určuji! podmienky chemických modifikačných reakcií, při ktorých sa kovalentne viaže na bielkoviny, nukleové kyseliny a iné zlúčeníny.
Peterajší stav techniky
Značkované bielkoviny a nukleové kyseliny nachádzajú v súčasnosti uplatnenie v záklaanom výskume a v klinickej praxi. Mčžu to byt protilátka a antigén v různých typoch imunologických skčíšek, alebo sondy nukleových kyselin při hybridizačných pokusech (U. Beisiegel, Electrophoresis 7, 1-19, 1986). Dnes je snaha nahradit radioaktivně látky v týchto skúškach zlúčeninami nerádioaktívnymi ako je to například v systéme biotinstreptavidin /avidin/. Oedným zo spósobov nerádioaktívneho značkovania bielkovín a nukleových kyselin je předkládaný návrh použitia derivátov kyseliny kójovej, pričom sa využívá ich schopnost vytvárat cheláty s kovmi a lantanidmi. Cheláty Eu (okrem chelátov kyseliny kójovej) sa použili na značkovanie bielkovín a nukleových kyselin (Evangelista R. A. et al., Clin. 3iochem. 21, 173, 1988; Hurskai ηεπ, P. et al., Nucl. Acid Res. 19, 1057, 1991). Nevýhodou doteraz používaných chelatačných prostriedkov je to, že sú konj^fátmi minimálně dvoch chemických zlúčenín.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je nerádioaktívny značkovací prostriedokktorý ako účinnú látku obsahuje deriváty kyseliny kojovej všeobecného vzorca I
O
II
pričom R i je H, C1, B r, I ; R 2 je N 7, Cl, Br, I, OH a R je H.
Výhodou použitia derivátov kyseliny kojovsj na označcvanie bislkovín, nukleových kyselin a iných chemických zlúčenín spočívá v tom, že sú to zdraviu neškodné látky, ktoré pósobia priamo na molekuly za vytvárania kovalentných vazieb pri laboratornych teplotách. Naviac prostriedky na báze derivátov kyseliny kójovej obsahujú súčasne chelatačné funkčně skupiny ako aj chemicky reaktivně skupiny na tvorbu kovalentných vazieb s makromolekulami.
Na detekciu kcn^átov sa využívá schopnost derivátov kyseliny koj ověj vytvárat komplexy s kovmi a lantanidmi Eu a Sm (Petrola, R., Ann. Acad. Sci. Finnica, Ser A II - Chemica 215, Helsinky 1987), ktoré sa dajú stanovit vysokocitlivými fluorescenčnými metodami při citlivosti ΙΟ-^ mol.l-^ Eu (Yamaha S., Anal. Chim. Acta 127, 195, 1981). Syntéza derivátov kyseliny kójovej sa nože robit běžnými postupmi přípravy organických zlúčenín (Durden, 3. A. et al., 3. Chem. Eng. Data 9, 228, 1964).
Příklady uskutočnenia vynálezu
Příklad 1
Příprava kyseliny kojovej ako východiskcvej látky
Na tekutej živnej pode s obsahom asimilovateíného uhlíka, dusíka a živných solí sa kultivuje kmen AspeToillus tamarii mutant VIII (CCM F - 781), alebo Aspercillus tamarii mutant III (CCM F - 780 ) jednotlivo alebo v .zmesi a kyselina kojcvá sa izoluje zahuštěním ultrsf iltr.Q-vaného media s následnou kryštalizéciou, získá sa kyselina kcjová s výtažkom 35g na 100o cukru.
Příklad 2
Označovanie hovadzieho sérového albuminu a jeho detekcia ionami dvojmocných kovov
0,2 ml roztoku 5-hydroxy-2-(azidometyl)-4H-pyran-4-onu v 50¾ -2 -1
0?Ης0Η o koncentrácii 5,10 rnol.l sa zmiešalo s 0,4 ml roztoku hovadzieho sérového albuminu (10-°mol.l v 0,1 mol. 1 fosfátového tlmivého roztoku pH 6,5 v malej polystyrénovéj skúmavke. Obsah skúmavky sa ozařoval UF svetlom (Chirana, Zsr 7) počas 60 minut. Modifikovaná bielkovina sa vyzrážala přídavkem 2,4 ml čistého etylalkoholu a nechala stát 90 minut při -15 °C. Vyzrážaná bielkovina sa separovala centrifugovaním při 10 000 g, dvakrát sa v skúmavke premyla čistým etanolom a nakoniec vysušila vo vákuu pri 50 °C. Suchý bielkovinový zvyšok v skúmavke sa rozpustil pri laborstornej teplote v 0,4 ml 0,1 mol.?;.-’’' fosfátového tlmivého roztoku pH 6,5. Dokaž modifikácie bielkoviny pomocou 5-hydroxy-2-(azidometyl)-4H-pyran-4-onom sa urobil zmiešaním rovnakých objemov roztoku bielkoviny a 0,02 rnol.l-''· roztokov solí síranu meďnateho. síranu nikelnatého a síranu zinočnatého.
| K a t i ó n | Konc. bielkoviny (rnol.l ) | Sfarbenie chelátu |
| Cu + 2 | 10-6 | modré |
| Ni + 2 | 10-6 | zelené |
| Zn+“ | 10-é | biele |
Příklad 3
Označovanie hovadzieho sérového albuminu a jeho detekcia lantan i d m i
Podmienky pokusu sú tie isté ako v příklade 2. V tomto prípa· _ 1 de sa na detekciu používá 0,02 rnol.l chlorid eurdpitý - E u Cl.
Vznikla zrazenina chelátu sa separovala centrifugáciou pri 10 000 g, premyla dvakrát s 0,5 ml čistého etanolu a vysušila vo vákuu pri 50 °C. Vysušená zrazenina chelátu modifikovanej bielkoviny sa suspendovala v 0,4 ml 0,1 mol.l-^ fosfátového tlmivého roztoku pH 6,5, ktorá po ožiarení s UF svetlom vydávala intenzívně fluorescenčně žiarenie. Tvorba chelátu Eu dokázala fotoinduktívnu modifikáciu bielkoviny pomocou azido-derivátu kyseliny kojovej.
Příklad 4
Označovanie enzymu glukoamylázy a jeho detekcia ionami dvojmocných kovov
0,2 ml roztoku 5-hydroxy-2-(azidometyl)-4H-pyran-4-onu v -2 -1
50¾ etanole o koncentrácii 5.10 mol.l sa zmiešalo o 0,4 ml roztoku čistého enzymu glukoamylázy o koncentrácii 0,475 mg/ml v 0,1 mol.1'1 fosfátovom tlmivom roztoku pH 6,5 v malej polystyrénovej skúmavke. Obsah skúmavky sa ozařoval s UF svetlom počas 60 minut. Stupen modifikácie sa sledoval pomocou gélovej filtrácie na FPLC - Superose 12 H 10/30 ekvilibrovanej s 0,1 mol.l fosfátovým tlmivým roztokom pH 6,5, ako aj sledováním enzýmovej aktivity. Výsledky FPLC jednozačne dokázali, že enzým bol modifikovaný, pričom jeho retenčný čas mal hodnotu 16,9 minut oproti 29,4 minutám enzýmu nemodifikovaného. Modifikovaný enzým nemal už žiadnu akti-2 +7 vitu a jeho prostetická skupina reagovala s ionami Cu , Ni “ ,
Zn a Eu podobné ako sa to popisuje v príkladoch 2 a 3.
Příklad 5
Označovanie DNA a jej detekcia ionami dvojmocných kovov alebo europiom
0,2 ml roztoku 5-hydroxy-2-(azidometyl)-4H-pyran-4-onu v - ? _ i
50¾ etanole o koncentrácii 5.10 mol.l sa zmiešalo s 0,4 ml roztoku DNA bakteriofága lambda (c = 1 mg/ml) v 0,1 mol.l Tris HC1 pH 7,2 'v malej póly styrénové j skúmavke. .Obsah skúmavky sa ožaroval UF svetlom pri podmienkach uvedených v predchadzajúcich príkladoch . Modifikovaná lambda DNA sa vyzrážala prídavkom
2,4 ml čistého etsnolu a nechala stát 4 hodiny při teplote -15 C. Vyzrsžaná DNA sa oddělila centrifuoáciou při 10 000 g a dvakrát premyla čistým etanolom a nakoniec vvsusila vo vakuu pri 50 °C. Potom sa rozpustila v 0,4 ml 0,01 mo1.1 Tris HC1 pH 7,2 pri 1 aboratornej teplote. Dokaž modifikácie lambda DNA sa urobil pomGcou tvorby chelátov, tak ako sa to popisuje v predchádzajúcich příkladech.
Priemv5s1ns využitelnost
Značkovacie prostriedky podlá vynálezu je možné využívat v oblasti základného a aplikovaného základného výskumu, medicínskej praxe a všade tam, kde sú potřebné značkované bielkoviny, nukleové kyseliny a iné chemické zlúčeniny. Používajú sa vo formě r o ztokov spolu s inými chemickými reagenciami potřebnými na chemičku modifikáciu určitej chemickej zlúčeniny.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS92620A CZ62092A3 (cs) | 1992-03-03 | 1992-03-03 | Prostriedok na označovanie bielkovín, nukleových kyselin a iných chemických zlúčenín |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS92620A CZ62092A3 (cs) | 1992-03-03 | 1992-03-03 | Prostriedok na označovanie bielkovín, nukleových kyselin a iných chemických zlúčenín |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ62092A3 true CZ62092A3 (cs) | 1993-12-15 |
Family
ID=5338629
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS92620A CZ62092A3 (cs) | 1992-03-03 | 1992-03-03 | Prostriedok na označovanie bielkovín, nukleových kyselin a iných chemických zlúčenín |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ62092A3 (cs) |
-
1992
- 1992-03-03 CZ CS92620A patent/CZ62092A3/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5985566A (en) | Platinum-containing compounds, methods for their preparation and applications thereof | |
| US5198537A (en) | Digoxigenin derivatives and use thereof | |
| US6306587B1 (en) | Template-directed photoligation | |
| US4898951A (en) | Compounds used as intermediates in the preparations of non-radioactive biological probes | |
| US5580990A (en) | Pt-containing compound, process for its preparation, and application of such compounds | |
| AU644150B2 (en) | Electrochemiluminescent assays | |
| EP0243429B1 (de) | D-luciferin-derivate und deren verwendung | |
| EP0131830B1 (en) | Labelled nucleic acid probes and adducts for their preparation | |
| JPS62188970A (ja) | 液相核酸サンドイツチアツセイおよびそこで有用なポリヌクレオチドプロ−ブ | |
| HK1006858B (en) | Method and reagents for detecting nucleic acid sequences | |
| US20110014721A1 (en) | Hydrophilic chemiluminescent acridinium labeling reagents | |
| US5552280A (en) | Hydrophobic nucleic acid probes | |
| JP2010166914A (ja) | ヌクレオチドを標識付けする方法、標識ヌクレオチド及び有用な中間体 | |
| AU724320B2 (en) | Methods for the production of platinum-based linkers between labels and bio-organic molecules, for labelling bio-organic molecules, for detecting biological substances of interest and diagnostic test kits | |
| US5395938A (en) | Biotinylated chemiluminescent labels and their conjugates, assays and assay kits | |
| EP1539702B1 (en) | Hydrophilic chemiluminescent acridinium labeling reagents | |
| CZ62092A3 (cs) | Prostriedok na označovanie bielkovín, nukleových kyselin a iných chemických zlúčenín | |
| JP3253181B2 (ja) | ジゴキシゲニン試薬を用いた核酸の光化学的標識 | |
| AU737441B2 (en) | Trans-platinum compound, and diagnostic kit | |
| EP0155854B1 (en) | Non-radioactive biological probes | |
| JP3454847B2 (ja) | ハイブリダイゼーション法 | |
| JPH06507318A (ja) | 染色体構造および転位の検出方法 | |
| JPH10104230A (ja) | 核酸等の検出方法，並びに標識物質及び検出物質 | |
| JP2005534738A (ja) | アクリドン及びキナクリドンの寿命色素を用いるタンパク質の部位特異的標識 | |
| JP2003194824A (ja) | 蛍光性物質および蛍光標識方法 |