CZ390198A3 - Použití inhibitoru NAALADázy při přípravě léčiva pro léčení rakoviny, potlačování růstu nádorových buněk nebo poruchy vztahující se k aktivitě enzymu NAALADázy u zvířete - Google Patents

Abstract

Použití inhibitoruNAALADázy při přípravě léčiva pro léčení rakoviny u zvířete, potlačování růstunádorových buněk u zvířete nebo poruchy vztahující se kaktivitě enzymuNAALADázy u zvířete.Týká se zejménapřípravy léčivapro nový způsob léčení rakoviny, prevence růstu nádorových buněk, inhibice růstu buněk rakoviny prostaty a inhibice NAALADázových enzymů u zvířat. Inhibitor NAALADázymůže být vybrán ze skupiny, do které patří 2-/fosfonomethyl/pentadiovákyselina, 2-/fosfonomethyl/jantarová kyselina, 2-[[/2-karboxyethyl/hydroxyfosfinyl]trethyl]peníandiová kyselina, o-fenantrolin, EGTA EDTA β-NAAG, kyslina quisqualová, Asp-Glu.Glu-Glu, Gly-Glu, gamma-Glu-GlipGluGlu-GIu ajejich farmaceutickypřijatelné soli, hydráty nebo směsi

Description

Vynález se týká použití inhibitoru NAALADázy při přípravě léčiva pro léčení rakoviny, potlačování růstu nádorových buněk nebo poruchy vztahující se k aktivitě enzymu NAALADázy u zvířete.

Dosavadní stav techniky

Rakovina prostaty

Rakovina prostaty je ve Spojených státech amerických nejčastější formou rakoviny a druhou nejčastější příčinou úmrtí na rakovinu u mužů. Podle odhadů, které uvádí American Cancer Society, bylo jen v roce 1996 zjištěno 317 100 nových případů rakoviny prostaty a v témž roce byla rakovina prostaty příčinou 41 400 úmrtí. Výskyt případů onemocnění rakovinou mezi lety 1980 až 1990 vzrostl o 65 % a bude růst se zlepšováním testů používaných při screeningu a s prodlužováním průměrné délky života. Je to způsobeno tím, že dosud muži umírají na jiné nemoci dříve, než se stačí rakovina prostaty vyvinout. Při předpokládaném prodloužení délky života tedy bude mít rakovina více času se rozvinout.

V roce 1993 bylo publikováno molekulární klonování specifického antigenu PSMA (Prostatě Specific Membrane Antigen) jako potencionálního markéru karcinomu prostaty a předpokládaného cílového činidla pro kontrastní zobrazení rakoviny prostaty a pro její cytotoxické léčení. Protilátky PSMA, zejména značení indiem 111a tritiem, již byly popsány a klinicky ···· · ·· ···· ·· ··

2··· ··· ····

- · · ····· ···· • · ·· · ·· ······ ······ ·· •· ··· ·· ··· ·· · · odzkoušeny pro diagnózu a léčení rakoviny prostaty. PSMA je exprimován epithelem vývodu prostaty a je přítomen v plasmě spermatu, prostatické tekutině a v moči. V r. 1996 bylo zjištěno, že exprese PSMA propůjčuje cDNA aktivitu NAALADázy.

Inhibitory NAALADázy

NAAG a NAALADázy mají spojitost s některými lidskými a zvířecími chorobnými stavy, při kterých se vyskytují abnormální glutamátové hladiny a neurotoxicita. Tak například bylo prokázáno, že intrahipokampální injekce NAAG vyvolávají prodloužení záchvatu. Nověji bylo publikováno, že krysy s genetickými sklony k epileptickým záchvatům mají přetrvávající zvýšenou bazální hladinu aktivity NAALADázy. Tato pozorování vedou k hypotéze, že zvýšený přísun synaptického glutamátu zvyšuje náchylnost k záchvatům a nabízejí myšlenku, že inhibitory NAALADázy mohou mít antiepileptické účinky.

NAAG a NAALADáza mají také spojitost s patogenezí ALS a s podobnou chorobou u zvířat, která se označuje zkratkou HCSMA (Hereditary Canine Spinal Muscular Atrophy).Bylo prokázáno, že koncentrace NAAG a metabolitů této látky - NAA, glutamátu a aspartátu - jsou u pacientů trpících chorobou ALS a u psů trpících HCSMA dvakrát až třikrát vyšší oproti zdravým jedincům. Proto mohou být inhibitory NAALADázy užitečné pro omezování rozvoje ALS, jestliže je NAAG příčinou výkyvů CSF koncentrací těchto kyselých aminokyselin a peptidů.

Abnormální hladiny NAAG a aktivity NAALADázy byly také zjištěny po smrti v mozku zemřelých nemocných, kteří trpěli schizofrenií, specificky v prefrontálních a limbických oblastech mozku.

·· · ·· * · ···· ··» · · · · · · · 9 9999 9 · · · · ·····«

9 19 9 9 9

9 9 99 9 9 9 9 9 9 9

-3'Shora uvedená zjištění naznačují, že inhibitory NAALADázy by mohly být použitelné pro léčení glutamátových abnormalit. Nicméně, předložený vynález je založen na překvapivém a nečekaném zjištění, že nové sloučeniny podle vynálezu nejsou pouze účinné inhibitory NAALADáz ale jsou také účinné při léčení chorob prostaty, zejména při léčení rakoviny prostaty. Přestože jsou uváděny výsledky pro rakovinové buňky prostaty, lze předpokládat, že inhibitory NAALADázy budou stejně účinné při léčení při léčení jiných tkání, ve kterých se vyskytují NAALADázové enzymy. Mezi takové tkáně patří tkáně mozku, ledvin a varlat.

Přestože bylo již identifikováno několik inhibitorů NAALADáz, byly dosud použity pouze v neklinickém výzkumu. Mezi tyto inhibitory patří například inhibitory metalopeptidáz jako je o-fenantrolin, chelatační činidla tvořící cheláty s kovy jako jsou EGTA a EDTA a analogy peptidů jako je kyseliny quisqualová a β-NAAG. V souladu s tím je zapotřebí hledat další inhibitory NAALADáz, zejména kvůli možnosti léčení chorob prostaty jako je rakoviny prostaty.

Podstata vynálezu

Podstata tohoto vynálezu spočívá v použití inhibitoru NAALADázy při přípravě léčiva pro léčení rakoviny u zvířete, potlačování růstu nádorových buněk u zvířete a při přípravě léčiva pro léčení poruchy vztahující se k aktivitě enzymu NAALADázy u zvířete. Týká se zejména přípravy léčiva pro nový způsob léčení rakoviny, prevence růstu nádorových buněk, inhibice růstu buněk rakoviny prostaty a inhibice aktivity NAALADázových enzymů u zvířat.

Nádor je vybrán ze skupiny, do které patří: nádory produkující ACTH, akutní lymfocytická leukémie, akutní nelymfocytická leukémie, rakovina kůry nadledvinek, močového měchýře, mozku, prsu, krčku, chronická lymfocytická leukémie, chronická myelocytická leukémie, kolorektální rakovina, kožní lymfom T-buněk, rakovina děložní sliznice, jícnu, Ewingův sarkom, rakovina žlučníku, leukémie vlasových buněk, rakoviny hlavy a šíje, Hodgkinsův lymfom, Kaposiho

9 9

4999 4 • 4

494 4 • ·· ·♦ 4 · • · ·

9 4 9

4 4

994 94

44

4 9 4

4 4 9

494 499

9

44

-3sarkom, rakovina ledvin, jater, plic (malobuněčná a/nebo nemalobuněčná), maligní peritoneální výpotek, maligní pleurální výpotek, melanom, mesotheliom, mnohočetný myelom, neuroblastom, ne-Hodgkinsův lymfom, osteosarkom, *

rakovina vaječníku, rakovina zárodečných buněk vaječníku, rakovina pankreatu, r* „ penisu, retinoblastom, rakovina kůže, měkkých tkání, rakoviny šupinových buněk, rakovina žaludku, varlat, štítné žlázy, trofoblastické novotvary, rakovina uteru, vagíny, vulvy a Wilmův nádor.

V jedné z modifikací tohoto vynálezu je inhibitor NAALADázy vybrán ze skupiny, do které patří:

- (fosfonomethyl) pentandiová kyselina;

- (fosfonomethyl) jantarová kyselina; a

- [[(2-karboxyethyl)hydroxyfosfinylj methyljpentandiová kyselina.

Inhibitor NAALADázy může být rovněž vybrán ze skupiny, do které patří: o-fenantrolin; EGTA; EDTA; kyselina quisqualová; β-NAAG; a jejich farmaceuticky přijatelná sůl, hydrát nebo směs.

Inhibitor NAALADázy dále může být vybrán ze skupiny, do které patří: Asp-Glu; Glu-Glu; Gly-Glu; gamma-Glu-Glu; Glu-Glu-Glu; a jejich farmaceuticky přijatelná sůl, hydrát nebo směs.

Inhibitor NAALADázy může být užíván v kombinaci s další terapeuticky „ účinnou látkou, vybranou ze souboru, do kterého patří: terapeutické hormony, chemoterapeutické prostředky, monoklonální protilátky, antiangiogenní ‘ prostředky, radioaktivně značené sloučeniny a jejich směsi.

Poruchou, týkající se aktivity enzymu NAALADázy, může být benigní hyperplasie prostaty.

Mezi výhodné inhibitory NAALADázy patří sloučeniny vzorce I:

- 4 • · • · · · · · • · · · · · ···· · ·· · • · · · · · · · · • · · · • · ··· · · · ·

kde

Rí je vodík, C-1-C9 alkyl s lineárním nebo rozvětveným řetězcem, C₂-C₉ alkenylová skupina s lineárním nebo rozvětveným řetězcem, C3-C8 cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl nebo An;

X je CH₂, O nebo N a

R₂ je C1-C9 alkyl s lineárním nebo rozvětveným řetězcem, C₂-Cg alkenylová skupina alkyl s lineárním nebo rozvětveným řetězcem, C3-C9 cykloalkyl , C5-C7 cykloalkenyl nebo An, přičemž uvedené alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl a aryl skupiny jsou substituovány karboxylovou kyselinou.

Výhodně je sloučenina vzorce I podle vynálezu přítomna v prostředku podle vynálezu v množství, které je dostačující pro inhibicí aktivity enzymu NAALADázy u živočicha.

Vynález se dále týká způsobu inhibice aktivity enzymu NAALADázy u živočicha, při němž se uvedenému živočichovi podává účinné množství sloučeniny vzorce I.

Stručný popis obrázků na výkresech <

• · · · • · · · ·

- 5 ·· ·· • · · · • · · · • · · · · · • · • · · ·

Obr. 1 je sloupcový graf, který ukazuje růst buněk rakoviny prostaty linie LNCAP při různých koncentracích kyseliny quisqualové na tento růst. Obr. 1 ukazuje vliv sedmidenního působení quisqualátu na růst buněk linie LNCAP. Při ’ koncentracích v rozmezí 1 nmol/l až 1 pmol/l quisqualátu se podle ý těchto výsledků projevila silná závislost poklesu proliferace * ·

LNCAP buněk(která je indikována měřením sníženi poklesu inkorporace [³H]thymidinu) na velikosti dávky testované sloučeniny podle vynálezu.

Obr. 2 je sloupcový graf, který ukazuje růst buněk rakoviny prostaty linie LNCAP při různých koncentracích kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové. Obr. 2 ukazuje vliv sedmidenního působení kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové na růst buněk linie LNCAP. Při koncentracích v rozmezí 100 pmol/l až 10 nmol/l quisqualátu se podle těchto výsledků projevila silná závislost poklesu proliferace LNCAP buněk (která je indikována měřením snížení poklesu inkorporace [3H]thymidinu) na velikosti dávky testované sloučeniny podle vynálezu.

Obr. 3 je křivka, znázorňující odezvu nádorů LNCaP lidské prostaty na denní podávání kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové. Je vynesena průměrná hodnota objemu nádoru jako funkce doby, která uběhla od začátku léčení. Svislé úsečky u jednotlivých hodnot představují grafické vyjádření střední *

relativní odchylky. Tyto výsledky ukazují, že léčení kyselinou 2í (fosfonomethyl)pentandiovou po dobu šesti týdnů vedlo u testovaných živočichů ke statisticky průkaznému rozdílu mezi léčenými skupinami a kontrolními skupinami. V první z uvedených léčených skupin byla zvířata ošetřována denními injekcemi účinné látky (p = 0,04) a ve druhé z těchto skupin byl testovaným zvířatům implantován polymer s obsahem účinné látky (p = 0,02).

• · • · · · • · • ·

- 6 • flfl • · · · · • · · · fl · · • fl flflfl flflfl • fl

Obr. 4 je křivka, znázorňující ve směru osy y. procento přežívajících zvířat, ošetřovaných kyselinou 2-(fosfonomethyl)pentandiovou, v závislosti na počtu dní. Obr. 4 ukazuje vysoké průměrné procento přežívajících zvířat, která byla ošetřena injekcí kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové.

Obr. 5 je křivka, znázorňující závislost růstu nádoru v závislosti na počtu dní, které uběhly od injekce buněk Dunning R3327-G krysám. Buňky rakoviny prostaty byly formou injekce podány krysám v den 0 a počínaje dnem 1 byly denně formou subkutánních injekcí podávány do dne 84. Obr. 5 ukazuje, že růst nádoru se zpomaluje v závislosti na dávce injekcí kyseliny 2-(fosfonomethyl) pentanové.

Obr. 6 je křivka odezvy nádorů krysí prostaty R3327-G na denní podávání kyseliny 2[[(fenylmethyl)hydroxyfosfinyl]methyljpentandiové. Průměrné hodnoty objemů nádorů, vyjádřené jako relativní hodnota, vztažená na objem na začátku léčení (V/V_o) jsou vyneseny jako funkce času. Podávání kyseliny 2-[[(fenylmethyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiové po dobu 2,5 týdnů mělo za následek statisticky průkazný rozdíl v růstu objemu nádorů mezi kontrolní skupinou a zvířaty, jimž byl denně vstřikován 1 pg účinné látky injekcemi přímo do nádoru (P = 0,02).

Podrobný popis vynálezu

Definice použitých termínů „Sloučenina 3“ znamená kyselinu 2-(fosfonomethyl)pentandiovou.

- 7 • · · · • · • · · „Inhibice“ v kontextu s enzymy znamená reversibilní inhibici enzymů a zahrnuje konkurující, nekonkurující a bezkonkurenční inhibici. Konkurující, nekonkurující a bezkonkurenční inhibice se dá rozpoznat studiem vlivu inhibitoru na kinetiku reakce enzymu. Konkurující inhibice je taková, při které se kombinuje inhibitor s enzymem reversibilně vůči enzymu tak, že mu konkuruje v navazování na příslušná aktivní místa normálního substrátu. Afinita mezi inhibitorem a enzymem se dá měřit pomocí inhibiční konstanty K,, která je definována jako:

[E][l]

Ki = [El] kde [E] je koncentrace enzymu, [I] je koncentrace inhibitoru a [El] je koncentrace komplexu enzym-inhibitor, vzniklého reakcí enzymu s inhibitorem. Pokud není uvedeno jinak, K, se zde používá v takovém významu, že znamená afinitu sloučeniny podle vynálezu k NAALADáze. „IC50“ znamená pro určitou látku, koncentraci nebo množství této látky, potřebné k dosažení 50% inhibice cílového enzymu.

Termín „inhibice“ v kontextu s růstem nádoru nebo s růstem nádorových buněk, lze definovat jako zpoždění výskytu primárních a sekundárních nádorů, zpomalení vývoje primárních a sekundárních nádorům zmírnění nebo snížení závažnosti sekundárních efektů choroby, zastavení růstu nádorů, regresi růstu nádorů a podobně. Výjimečně je zde také úplná inhibice uváděna jako prevence.

„NAAG“ znamená N-acetyl-aspartyl-glutamát, který je důležitou peptidickou složkou mozku, s koncentracemi srovnatelnými s hlavním inhibičním neurotransmitérem, kterým je kyselina gama- 8 -

·· ···· 9 9

9 99

9 9 9 • · 9 · • · · · · · • 9

9 9 9 aminomáselná (GABA). NAAG je látka specifická pro neurony, přítomná v synaptických váčcích a uvolňuje se při neurologickém podráždění v několika systémech, u kterých je předpoklad, že jsou glutamergické. Studie naznačují, že NAAG může fungovat jako neurotransmitér a/nebo neuromodulátor v centrální nervové soustavě, nebo jako prekursor neurotransmitéru glutamátu.

NAALADáza znamená N-acetylovaná α-vázaná kyselá dipeptidáza, membránově vázaná metalopeptidáza která katabolizuje NAAG na N-acetylaspartát (NAA) a glutamát:

Katabolismus NAAG NAALADázou

NAALADáza vykazuje vysokou afinitu pro NAAG s hodnotou Km 540 nmol/l. Jestliže NAAG je bioaktivní peptid, pak NAALADáza může sloužit k inaktivaci synaptické činnosti vlivem působení NAAG. Eventuelně, jestliže NAAG funguje jako prekursor pro glutamát, základní funkcí NAALADázy může být regulovat dostupnost synaptického glutamátu.

Farmaceuticky přijatelná sůl znamená sůl sloučeniny podle vynálezu které mají požadovanou farmakologickou účinnost a která není z biologických ani jiných důvodů nevhodná. Může jít o sůl s anorganickými i s organickými kyselinami jako je například • · · · · I • 9 9 • 9 999 ·· · ft 9 ·· ·· » ftft · » ftft · ·· · ··· • · • · ftft acetát, adipát, alginát, aspartát, hydrogensíran butyrát, citrát, benzoát, benzensulfonát, kafrát, kafrosulfonát, cyklopentanpropionát, diglukonát, dodecylsulfát, ethylsulfonát, fumarát, glukoheptanoát, glycerofosfát, hemisulfát, heptanoát, hexanoát, hydrochlorid hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroxyethansulfonát, mléčnan, maleát, methylsulfonát, 2-naftalensulfonát, nikotinát, šťavelan, thiokyanát, tosylát a undekanoát. Příklady bazických solí jsou amoniové soli, soli alkalických kovů jako například sodné a draselné soli, soli kovů alkalických zemin jako například vápenaté a hořečnaté soli, soli s organickými bázemi jako například dicyklohexylaminové soli, N-methyl-Dglukaminové soli a soli s aminokyselinami jako například argininem a lysinem. Zásadité skupiny obsahující dusík mohou být kvarternizovány činidly včetně(nižší alkyl)halogenidů jako například methyl-, ethyl-, propyl- a butyl- chloridů, bromidů a jodidů; dialkylsulfáty jako například dimethyl-, diethyl-, dibutyl- a diamylsulfáty; halogenidy s dlouhým řetězcem jako například deeyl-, lauryl-, myristyl- a stearyl- chloridy, bromidy a jodidy; a aralkyl halogenidy jako například benzyl a fenylethylbromidy.

Termín prevence, pokud se týče růstu nádoru nebo množení nádorových buněk, znamená že se nevyskytl žádný nádor nebo nedošlo k růstu nádorových buněk a pokud již nádor byl vytvořen, tak už dále nerostl ani se nemnožily nádorové buňky.

Termín „choroba prostaty“ se týká rakoviny prostaty jako například adenokarcinom nebo metastatické rakoviny, stavy charakterizované abnormálním vzrůstem buněk epitelu prostaty jako například benigní hyperplasie prostaty a jiné stavy, které vyžadují léčení sloučeninami podle vynálezu.

····

- 10 • · • 9 • ······ ·· ·· •tt · · · · · · · • · ···· · · · · • tttt · ♦· ·«···· tt · ♦ · ♦ · ··· ·· ··· · · · ·

PSA znamená „Prostatě Specific Antigen“, což je odborníkům dobře známý markér rakoviny prostaty. Je to protein produkovaný buňkami prostaty a je často přítomen ve zvýšených koncentracích v krvi mužů s rakovinou prostaty. PSA koreluje s nádorovou zátěží a , slouží jako indikátor rozsahu metastáz a představuje parametr pro posouzení úspěšnosti vývoje po chirurgické terapii, ozáření nebo terapii náhradou androgenu.

„PSMA,, znamená Prostatě Specific Membrane Antigen, což je možný indikátor karcinomu prostaty a hypoteticky by se mohl hodit jako terč pro zobrazování a cytotoxickou terapii rakoviny prostaty. PSMA je exprimován epitelu vývodu prostaty a je přítomný v plazmě spermatu, prostatické tekutině a v moči. Bylo zjištěno, že exprese PSMA propůjčuje cDNA aktivitu NAALADázy.

Termín léčení znamená kterýkoliv proces, úkon, aplikaci, terapii a podobně kdy živočich včetně člověka je předmětem pomoci za účelem zlepšení jeho stavu, přímo nebo nepřímo.

Výhodné inhibitory NAALADázy podle vynálezu

Vynález se týká sloučenin vzorce I

nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, hydrátů nebo jejich směsí, kde:

- 11 • 9 • · ·

999

9999 φ

9 9 999 9 9

9

999

99 + 9 9 9

9 9 9

999 999

9

99

R! je vodík, C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C2-C9 lineární nebo rozvětvený alkenyl, C₃-C₈ cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl, nebo An;

X je CH2, O, nebo NR^ kde Rr je uvedeno výše; a R₂ je C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C₂-C₉ lineární nebo rozvětvený alkenyl, C₃-C₈ cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl nebo Αη přičemž uvedené alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl a aryl skupiny mohou být popřípadě substituovány karboxylovou kyselinou.

Vynález také zahrnuje takové sloučeniny, kde uvedené alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl nebo aryl skupiny mohou být popřípadě substituovány C₃-C₈ cykloalkyl, C₃ nebo C₅ cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl, C1-C4 alkyl, C1-C4 alkenylskupinou, halogenem, hydroxylem, nitroskupinou, trifluormethylem, Ci-C₆ lineárním nebo rozvětveným alkylem nebo alkenylem, C1-C4 alkoxyskupinou, C1-C4 alkenyloxyskupinou, fenoxyskupinou, benzyloxyskupinou nebo An, přičemž An je zbytek vybraný ze skupiny zahrnující 1-naftyl, 2-naftyl, 2-indolyl, 3-indolyl, 4-indolyl, 2-furyl, 3-furyl, tetrahydrofuranyl, 2-thienyl, 3-thienyl, 4-thienyl, 2-, 3-, nebo 4-pyridyl, nebo fenyl, nesoucí jeden až pět substituentů, které jsou nezávisle vybrané ze souboru, do kterého patří vodík, halogen, hydroxyl, nitro, trifluormethyl, Ci-C₆ lineární nebo rozvětvený alkyl nebo alkenyl, C1-C4 alkoxy nebo C_rC4 alkenyloxy, fenoxy a benzyloxy skupina, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, hydráty, nebo jejich směsi.

Ve výhodném provedení je sloučenina vybraná ze souboru, do kterého patří sloučeniny vzorce II:

- 12 9999 • 9 · 99 • · ·

9 9

999

9 9

999 999

Ψ 9

99

Ra

RiOH kde

Ri je vodík, C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C2-C9 lineární nebo rozvětvený alkenylskupina, C3-C8 cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl nebo Αγ_ί a

R₂ je C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C₂-Cg lineární nebo rozvětvený alkenyl, C₃-C₈ cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl, nebo An přičemž uvedené alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl a aryl skupiny mohou být popřípadě substituovány karboxylovou kyselinou.

V jiném výhodném provedení jsou R skupiny alifatické nebo karbocyklické substituenty přičemž jako ilustrativní příklady mohou sloužit sloučeniny vybrané ze skupiny vzorce II:

OH kde

R1 je vodík, C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C₂-Cg lineární nebo rozvětvený alkenyl, C3-C8 cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl, 1 -naftyl, 2-naftyl, nebo fenyl; a

- 13 ·« *··· ·· ,t • φ · ♦ · · · • · ··· · ·· · • · ·· ······ • · · · · ·· ··· ·· · ·

R₂ je CL-Cg lineární nebo rozvětvený alkyl, C₂-Cg lineární nebo rozvětvený alkenyl, C₃-Ce cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl, 1-naftyl, 2-naftyl nebo fenyl, přičemž uvedené alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl 1-naftyl, 2-naftyl nebo fenyl skupiny mohou být popřípadě substituovány karboxylovou kyselinou.

Zejména výhodné způsoby využívají sloučeniny, kde R1 je lineární nebo rozvětvená alifatická skupina nebo karbocyklické skupina, R₂ je ethyl, který je substituovaný karboxylovou kyselinou, a X je CH₂, jsou vybrané ze skupiny, do které patří:

2-[[methylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[ethylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[propylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[butylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[cyklohexylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(cyklohexyl)methylhydroxyfosfinyljmethyl]pentandiová kyselina;

2-[[fenylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyljmethyljpentandiová kyselina;

2-[[fenylethylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

- 14 9999 • 9 ····

9 9 999 9 9

9 9

9··

9 99

9 9 9

9 9 9

999 999

9

99

2-[[fenyipropylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[fenyl butyl hyd roxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(4-methyl benzyl) hyd roxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(4-fluorbenzyl) hyd roxyfosf inyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(2-fluorbenzyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(pentafluorbenzyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(4-methoxy benzyl) hyd roxyf osf i nyl] methyl] pentandiová kyselina;

2-[(dihydroxyfosfinyl)methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(3-trifluormethylfenyl) hyd roxyfosf i nyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(2,3,4-trimethoxyfenyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(1 -naftyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(2-naftyl) hyd roxyfosf i nyl] methyl] pentandiová kyselina;

2-[[( 1 -naftyl) methyl hyd roxyf osf i nyl]m ethyl] pentandiová

- 15 ···· ·· *··· ·· ·· • · · · ft · • ··· · · · · • ftft ftftft ··· • · ft ftft • · ··· ft · ftft kyselina;

2-[[(2-naftyl)methylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

- [[(1 - naftyl) ethylhyd roxyfosf iny l]me thy Ijpentandiová kyselina;

2-[[(2-n afty I) ethylhyd roxyfosf i nyl] met hy Ijpentandiová kyselina;

2-[[(1 -nafty l)p ropy Ihyd roxyfosf i nyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(2-naftyl)p ropy Ihyd roxyfosf i nyl]methy Ijpentandiová kyselina;

- [ [ (1 - naftyl) butyl hyd roxyfosf i nyl] methyl] pentandiová kyselina;

2-[[(2-naftyl) butyl hyd roxyfosf i nyl] methyl] pentandiová kyselina;

2-[[(4-f luorfenyl) hyd roxyfosf i nyl] met hy Ijpentandiová kyselina;

2-[[(( hyd roxy)fe nyl methyl) hyd roxyfosf i nyl]methyl] pentandiová kyselina;

2-[[(3-methylbenzyl) hyd roxyfosf i nyl]methyl]pentandiová kyselina; a

2-[[(fenylprop-2-enyl) hyd roxyfosf i nyl] methyl]- 16 • ftftft • ft ftftftft • · • ftftft • « • · • ft ftftft • 4» • ftft ft • »ft · •ftft ftftft • ft ·« ftft pentandiová kyselina;

Zejména jsou výhodné způsoby, které využívají sloučeniny, v kterých Ri je lineární nebo rozvětvená alifatická nebo karbocyklická skupina, R2 je ethyl, který je substituovaný karboxylovou kyselinou, a X je CH₂, které jsou vybrané ze souboru, do něhož patří:

2-[(benzylhydroxyfosfinyl)methyl]pentandiová kyselina;

2-[(feny Ihydroxyfosf i nyl) methyl] pentandiová kyselina;

2-[[((hydroxy)fenyl methyl )hyd roxyfosf i nyljmethyl]pentandiová kyselina;

2-[(butylhydroxyfosf i nyl) methyl] pentandiová kyselina;

2-[[(3-methylbenzyl)hydroxyfosf i nyl] methyl] pentandiová kyselina;

2-[ (3-fe ny I p ropy Ihydroxyfosf i nyl) methyl] pentandiová kyselina;

2-[[(4-fluorfenyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[(methylhydroxyfosfinyl)methyI]pentandiová kyselina;

2-[(feny leth y Ihydroxyfosf i nyl)methyl]pen ta ndiová kyselina;

2-[[(4-methylbenzyl)hyd roxyfosf i nyl] methyl] pentandiová kyselina;

- 17 ··« 4 ·«* <*«·

4«

4 4 • 4 44« ♦ 4 4 ·

4 · ··· »4 4 • 4 • 4 ··· • 4

2-[[(4-fluorbenzyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[.[(4-methoxybenzyl) hyd roxyfosf iny Ijmethyl]pentandiová kyselina;

2-[[(2-f I u orbě nzy I) hyd roxyfosf i nyl] methyl] pentandiová kyselina;

2-[[(pentafluorbenzyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina.

2-(fosfonomethyl)pentandiová kyselina

2-[[(3-trifluormethylfenyl)hydroxyfosfinyl]methyl] pentandiová kyselina;

Zejména výhodné způsoby využívají sloučeniny, kde Ri je lineární nebo rozvětvená alifatická nebo karbocyklická skupina, R₂ je fenyl a X je CH₂, jsou vybrané ze skupiny, do které patří:

3-(methylhydroxyfosfinyl)-2-fenylpropanová kyselina;

3-(ethyIhydroxyfosfinyl)-2-fenylpropanová kyselina

3-(propylhydroxyfosfinyl)-2-fenylpropanová kyselina

3-( butyl hyd roxyfosf i nyl)-2-fenylpropanová kyselina

3-(cyklohexyl hyd roxyfosf i nyl)-2-fenylp ropa nová kyselina

3-((cyklohexyl)methylhyd roxyfosf i nyl)-2-fenyl propan ová kyselina;

- 18 ···· · ·· fefefe· fefe «fe • ·· · · · fefefefe • · fefe fefefe · fefe · • fefefefe fefe fefefe fefefe ······ fefe fefe fefefe fefe fefefe fefe ··

3-(feny I hyd roxyfosf i nyl)-2-fe nyl propanová kyselina

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-fenylpropanová kyselina

3-(fe ny lethy I hyd roxyfosf i nyl)-2-fenyl propanová kyselina

3-(feny l p ro pyl hyd roxyfosf i nyl)-2-fenylp ropa nová kyselina

3-(fenylbutyl hyd roxyfosf i nyl)-2-fenyl propanová kyselina [(2,3,4-t ri meth oxyfenyl)-3-hyd roxyfosf i nyl]-2-f enyl propanová kyselina;

3-[(2-naftyl) hyd roxyfosf i nyl]-2-fenylpropanová kyselina

3-[(2-n afty I) hyd roxyfosf i nyl]-2-fe nyl propanová kyselina

3-[ (1 - nafty I) methyl hyd roxyfosf iny I]-2-fenyl propanová kyselina;

3-[ (2-n afty I )met hyl hyd roxyfosf i nyl]-2-fenyl propanová kyselina;

3-[ (1 - nafty I) et h y I hyd roxyfosf iny I]-2-fenyl propanová kyselina

3-[(2 - n afty I )ethy I hyd roxyfosf i nyl]-2-fenyl propanová kyselina

3-[(1 -naftyl) propy I hyd roxyfosf iny l]-2-f enyl propanová kyselina;

3-[(2-n afty l)p ropy I hyd roxyfosf i nyl]-2-fenyl propanová kyselina;

3-((1 -naftyl) buty I hyd roxyfosf iny l]-2-fenyl propanová kyselina

- 19 • · · · • · • · ·· • · · · • · · · • · · · · · • · • · · ·

3-[(2-naftyl)butylhydroxyfosfinyl]-2-fenylp ropa nová kyselina a

3-[fenyIprop-2-enyIhydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina.

Aniž by však šlo o omezení na některý konkrétní příklad, je vysoce výhodným příkladem sloučenina podle vynálezu, ve které Ri je přímý nebo rozvětvený alifatický nebo karbocyklický zbytek, R₂ je ethyl, substituovaný karboxylovou kyselinou a X je CH₂, kterou je

2-[(benzylhydroxyfosfinyl)methyl]pentandiová kyselina;

Další výhodné sloučeniny podle vynálezu jsou vybrány ze souboru, který sestává z:

hydroxyfosfinyiových derivátů, kde X je CH₂, Ri je lineární nebo rozvětvený alifatický nebo karbocyklický zbytek a R₂ je C₂-Cs alkylový nebo alkenylový řetězec, který je substituovaný karboxylovou kyselinou. Mezi příklady těchto sloučenin patří:

2-[(methyl hydroxyfosf i nyl) methyl] hexandiová kyselina;

2-[(benzyl hydroxyfosf i nyl)methyl]hexand i ová kyselina;

2-[(methyl hydroxyfosf i nyl)methyl]heptandiová kyselina;

2-[(benzylhydroxyfosfinyl)methyl]heptandiová kyselina;

2-[(methyl hydroxyfosf i nyl) met hyljoktandiová kyselina;

2-[(benzylhydroxyfosfinyl)methyl]oktandiová kyselina;

2-[(methylhydroxyfosfinyl)methyl]nonandiová kyselina;

• · · · • ·

- 20 ···· · · · • · · · · · · • · ····· · · · · • · ·· · ·· ······ ······ ·· • · ··· ·· ··· ·· ··

2-[( benzyl hyd roxyfosf i nyl) methy l]n on a ndiová kyselina;

2-[(met hy I hyd roxyf osf i nyl) met hyljdeka ndiová kyselina;

2- [(benzylhyd roxyfosf i nyl)methyl]dekandiová kyselina;

Další výhodné sloučeniny podle vynálezu jsou vybrány ze souboru, který sestává z:

hydroxyfosfinylových derivátů, kde X je CH₂, Ri je benzyl a R₂ je lineární nebo rozvětvená alifatická skupina nebo karbocyklická skupina. Mezi příklady těchto sloučenin patří:

3- (benzyIhydroxyfosfinyl)-2-methylpropanová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-ethylpropanová kyselina;

3-(benzyl hyd roxyfosf i nyl)-2-propylpropa nová kyselina;

3-(benzy I hyd roxyf osf i nyl)-2-bu tyl propanová kyselina;

3-(benzy I hyd roxyfosf i nyl)-2-cyklohexyl propanová kyselina;

3-(benzyl hyd roxyfosf inyl)-2-(cyklohexyl)methylpropanová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-fenylpropanová kyselina;

3-( be nzy I hyd roxyf osf i nyl)-2-benzyl propanová kyselina;

3-(benzylhyd roxyfosf i nyl)-2-fenylethyl propanová kyselina;

3-( ben zy I h yd roxyf osf i ny l)-2-fenyl pro pyl pro pa nová kyselina;

- 21 • · · 9 · 9 • · · * 9 9·· • · · • 9 9 • · 9 9 ·

3-(be nzy I hyd roxyf osf i nyl)-2-fenylbutyl propanová kyselina;

3-(benzyl hyd roxyfosf iny 1)-2-(2,3,4-trimethoxyfenyl) propanová kyselina;

3-(benzyl hyd roxyf osf iny 1)-2-(1 - nafty l)propanová kyselina;

3-(benzyIhydroxyfosfinyl)-2-(2-naftyl)propanová kyselina;

3-(benzyl hyd roxyf osf iny 1)-2-( 1 -naftyl) methyl propanová kyselina;

3-( benzy I hy d roxyfosf i nyl)-2-(2-naftyl) methyl propanová kyselina;

3-( be nzy I hyd roxyf osf i ny 1)-2-(1 - nafty I) e t h y I p ropa nová kyselina;

3-(be nzy I hyd roxyf osf i nyl)-2-(2-nafty l)ethy lp ropa nová kyselina;

3-(benzyl hyd roxyfosf iny 1)-2-(1-naftyl) propyl propanová kyselina;

3-(benzyl hyd roxyf osf iny 1)-2-(2-naftyl) propyl propanová kyselina;

3-(be nzy I hyd roxyfosf iny 1)-2-(1 - nafty I) b u ty lp ropa nová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-(2-naftyl)butylpropanová kyselina; a

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-fenylprop-2-enylpropanová kyselina.

Zejména výhodné způsoby používají sloučeniny, ve kterých Rt je uvedená alkylová, alkenylová, cykloalkylová nebo arylová skupina, která je substituovaná heterocyklickou skupinou, • · · · • ·

- 22 • · • · · · · · · • · · · · · ·· · • · · · · · · ······ «····· · · • · · · · ·· ··· · · · ·

R₂ je ethyl, který je substituovaný karboxylovou kyselinou, a X je CH₂, a které jsou vybrány ze souboru, do něhož patří:

2-[[(2-pyridyl)methyIhydroxyfosfinyljmethyljpentandiová kyselina;

2-[[(3-pyridyl)methylhydroxyfosfinyl]methyl] pentandiová kyselina;

2-[[(4-pyridyl)methyl hydroxyfosfinyljmethyljpentandiová kyselina;

2-[[(3-pyridyl)ethy Ihyd roxyfosf iny Ijmethyljpen ta ndiová kyselina;

2-[[(3-pyridyl) propy Ihyd roxyfosf i nyl] methyl] pentandiová kyselina;

2-[[(tetra hydrof urany l)methylhyd roxyfosf i nyl] methy I]pentandiová kyselina;

2-([(tet ra hydrof urany l)ethylhyd roxyfosf iny IJmethyl]pentandiová kyselina;

-[[(tet ra hydrof urany I) p ropy Ihyd roxyfosf iny Ijmethyl]pentandiová kyselina;

2-[[(2-i ndolyl) methy Ihyd roxyfosf i nyljmethyljpentandiová kyselina;

2-[[(3-indolyl) methy Ihyd roxyfosf i nyl] methyl] pentandiová kyselina;

2-[[(4-indolyl)methy Ihyd roxyfosf i nyljmethyljpentandiová kyselina;

- [ [ (3 - i n d o I y I) et h y Ihyd roxyfosf iny!] methyl] pentandiová kyselina;

2-[[(3-i ndolyl) propy Ihyd roxyfosfinyl]methyl]penta ndiová kyselina;

- 23 • · · · • · ·

2-[[(2-thienyl)methylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(3-thienyl)methylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(4-thienyl)methylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(3-thienyl)ethylhydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2- [[(3-thienyl)propylhydroxyfosfinyl]methyl] pentandiová kyselina a

Zejména výhodné způsoby využívají sloučeniny, kde Ri je uvedená aikylová, alkenylová, cykloalkylová nebo arylová skupina, R2 je fenyl a X je CH2, vybrané ze souboru, do které patří:

3- [(2-pyridyl)methylhydroxyfosfinyi]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(3-pyridyl)methylhydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(4-pyridyl)methylhydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(3-pyridyl)ethylhydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(3-pyridyl)propylhydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(tetrahydrofuranyl)methylhydroxyfosfinyl]-2-fenyl propanová kyselina;

3-[(tetrahydrofuranyl)ethylhydroxyfosfinyl]-2-fenyl propanová kyselina;

- 24 • · · · · · ·· ·· • · · · · · • · · · · ·· · • · · ··· ··· • · · · ·· · · · «· ··

3-[(tet ra hy d rof u ra nyl)p ropy Ihydroxyfosf i nyl]-2-fe nyl propanová kyselina;

- [ (2 - i nd o ly I) met hylhydroxyfosf i nyl]-2-fenyl propanová kyselina;

3-[(3-indolyl)methylhydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(4-i nd o ly l)methylhydroxyfosf i nyl]-2-fenyl propanová kyselina;

3-[(3-indolyl)ethylhydroxyfosfinyl]-2-fenylp ropa nová kyselina;

3-(3-indolyl)propylhydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(2-thienyI)methyIhydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(3-thienyl)methylhydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(4-thienyl)methylhydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(3-t h ie ny I) ethy Ihydroxyfosf i nyl]-2-fenyl propanová kyselina; a

3-[(3-thienyl)propylhydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina.

Zejména výhodné způsoby využívají sloučenin, kde je benzyl, R2 je uvedená alkyl, alkenyl, cykloalkyl, nebo arylová skupina, která je substituovaná heterocyklickou skupinou a X je CH2, které jsou vybrané ze souboru, do kterého patří:

3-(be n zy Ihydroxyfosf i nyl )-2-(2-pyridyl) methy I propanová kyselina;

3-(benzy Ihydroxyfosf i nyl)-2-(3-pyridyl) methyl propanová kyselina;

• · · · · · • · # • · · · · • · · • · · • · · · · • · · · • 4 4 9

9 4 4

444 499

4

4 4 9

3-( be nzy Ihydroxyfosf i nyl)-2-(4-pyridyl) methy Ip ropa nová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-(3-pyridyl)ethylp ropa nová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-(3-pyridyl)propylpropanová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-(tetrahydrofuranýI)methyl propanová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-(tetrahydrofuranyl)ethyl propanová kyselina;

3-(be nzy I hydroxyf osf i nyl)-2-(tetrahydrof uranyl) propyl propanová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-(2-indolyl)methylpropanová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-(3-indolyl)methylpropanová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-(4-indolyl)methylpropanová kyselina;

3-( benzyl hydroxyf osf i nyl)-2-(3-in doly l)ethylpropan o vá kyselina;

3-(benzy lhydroxyfosfinyl)-2-(3-indolyl)p ropy I pro pa nová kyselina;

3-(benzy Ihydroxyfosf i nyl)-2-(2-thienyl) methy Ipropanová kyselina;

3-(benzy Ihydroxyfosf i ny 1 )-2-(3-thienyl) methyl propanová kyselina;

3-( benzyl hydroxyf osf i nyl)-2-(4-thienyl) methyl propanová kyselina;

3-(be nzy Ihydroxyfosf i nyl)-2-(3-thienyl)ethylp ropa nová kyselina;

- 26 ftft · • · · • · · ·· • · • · • · · · · • · · · • · · · • · · · · · • ft • · · · a

3-( benzyl hyd roxyfosfinyl)-2-(3-thienyl)propylpropa nová kyselina.

V dalším výhodném provedení jsou R skupinami heterocyklické substituenty a ilustrativními sloučeninami jsou sloučeniny vzorce II:

kde Ri je Ar-i; a

R₂ je C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C₂-C₉ lineární nebo rozvětvený alkenyl, C₃-C₈ cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl, nebo Ar-ι, přičemž uvedené alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl a arylové skupiny mohou být popřípadě substituovány karboxylovou kyselinou.

Zejména výhodné způsoby sloučeniny podle vynálezu kde R1 je heterocyklická skupina, R₂ je ethyl, který je substituovaný karboxylovou kyselinou a X je CH₂ jsou vybrány ze souboru, do kterého patří:

2-[[(2-pyridyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(3-pyridyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(4-pyridyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(tetrahydrofuranyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

- 27 • · · · · ♦ · * · • · 9 9999 9 99

9 99 9 99 999

9 9 9 · 9

999 99 999 99

2-[[(2-indolyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(3-indolyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(4-indolyl) hydroxyfosfinyljmethyljpentandiová kyselina;

2-[[(2-thienyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2-[[(3-thienyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina;

2- [[(4-thienyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová kyselina a

Sloučeniny podle vynálezu, kde je heterocyklická skupina, R₂ je fenyl a X je CH₂ jsou vybrány ze souboru, do kterého patří:

3- [(2-pyridyl)hydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(3-pyridyl)hydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(4-py rid y l)hydroxyfosf i n y I ]-2-fe nyl propanová kyselina;

3-[(tetrahydrofuranyl)hydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(2-indolyl)hydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(3-indolyl)hydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(4-indolyl)hydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

3-[(2-thienyl)hydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina;

- 28 «9·· 9 99 9999 99 99 • 9« 999 99«9

9 99999 9909

9 99 9 99 999999 • 99 999 99

999 99 999 99 99

3-[(3-thienyl)hydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina; a

3-[(4--thienyl)hydroxyfosfinyl]-2-fenylpropanová kyselina.

Sloučeniny podle vynálezu jsou také výhodně vybrané ze skupiny vzorce II kde

R! je vodík, C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C2-C9 lineární nebo rozvětvený alkenyl, C3-C8 cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl nebo An; a

R₂ je Ar-ι, přičemž uvedená arylová skupina může popřípadě být substituována karboxylovou kyselinou.

Zvláště příklady sloučenin podle vynálezu kde R₂ je heterocyklický zbytek jsou pro odborníka v oboru snadno připravitelné a použitelné podle zde uvedených a známých informací.

3-(benzy I hyd roxyfosf i nyl )-2-(2-pyridyl) propan ová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-(3-pyridyl)propanová kyselina;

3-(benzy I hyd roxyfosf i nyl)-2-(4-pyridyl) pro pa nová kyselina;

3-(benzy I hyd roxyfosf i nyl)-2-(tetra hyd rofuranyl)propa nová kyselina;

3-( benzyl hyd roxyfosf iny 1)-2-(2-i ndolyl)propanová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfiny 1)-2-(3-indolyl)propanová kyselina;

4444 · ·· 444

44 4 4 4 • · · · ··· « · · · ·

4 4 4 4 ·· 4 4 4 ·4 4 · ·

- 29 44 44 • ♦ ·

4 4 · 4 4 · ·

4

4 4

3-( ben zy I hy d roxyfosf iny 1)-2-(4-i nd ο lyl) propanová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-(2-thienyl)p ropa nová kyselina;

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-(3-thienyl)propanová kyselina; a

3-(benzylhydroxyfosfinyl)-2-(4-thienyl)propanová kyselina.

Výhodné sloučeniny jsou také vybrány ze sloučenin obecného vzorce III:

kde

Ri je vodík, C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C2-C9 lineární nebo rozvětvený alkenyl,

C3-C8 cykloalkyl, C₅-C₇ cykloalkenyl, nebo An a

R₂ je C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl,

C2-C9 lineární nebo rozvětvený alkenyl,

C₃-C₈ cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl nebo An, přičemž uvedené alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl a aryl skupiny mohou být popřípadě substituovány karboxylovou kyselinou.

V jiném výhodném provedení jsou R skupiny lineární nebo rozvětvené nebo karbocyklické substituenty a ilustrativní jsou pro ně sloučeniny vzorce III:

····

- 30 R2

Ri^XO^^COOH ftft ftftftft ft ftft • ftftftft • ftft ft • · ft • ft ftftft • ft ·· • ftft · ft · · · • ftftft ftftft • · • ft ftft

OH kde

Ri je vodík, C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C₂-Cg lineární nebo rozvětvený alkenyl,

C3-C8 cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl, 1-naftyl, 2-naftyl, nebo fenyl; a

R₂ je C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, lineární nebo rozvětvený alkenyl, C3-C₈ cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl, 1-naftyl,

2-naftyl nebo fenyl přičemž uvedené alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, 1-naftyl, 2-naftyl nebo fenylové skupiny mohou být popřípadě substituovány karboxylovou kyselinou.

Zejména výhodnými sloučeninami vzorce III podle vynálezu kde R1 je lineární nebo rozvětvená alifatická nebo karbocyklická skupina a R₂ je ethyl, který je substituovaný karboxylovou kyselinou jsou:

2-[[m ethy Ihydroxyfosf i nyl] oxy] pentandiová kyselina;

2-[[ethylhydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[p ropy Ihydroxyfosfinyljoxy] pentandiová kyselina;

2-[[b uty Ihydroxyfosf i nyljoxy] pentandiová kyselina;

2-[[cyklohexylhyd roxyfosf i nyljoxy] pentandiová kyselina;

- 31 • · · · · ·· · • · · ·· · ··· • · · · · ·· ··· ·· 99

2-[[(cyklo hexyl) methyl hyd roxyfosfinyl]oxy]penta n diová kyselina;

2-[[fenylhydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[fenylethylhydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[fenyl propyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[fenylbutylhydroxyfosfinyljoxy]pentandiová kyselina;

2-[[(4-methyl benzyl) hyd roxyfosf i nyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(4-fluorbenzyl)hydroxyfosfinyl]oxy] pentandiová kyselina;

2-[[(2-f I uo rbenzyl) hyd roxyfosf i nyljoxy] pentandiová kyselina;

2-[[(pentafluorbenzyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(meth oxy benzyl) hyd roxyfosf i nyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(4-fluorfenyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[( (hyd roxy)feny I methyl) hyd roxyfosf i nyl]oxy] pentandiová kyselina;

2-[[(3-methy I benzyl) hyd roxyfosf i nyl] oxy] pentandiová kyselina;

2-[(fosfono)oxy]pentandiová kyselina oo ···· · ·· ···· ·· ·· “ O “ · · · 9 9 9 9 9 9 9

1 11 111 1 9 9 9

9 9 9 9 19 999 999

9 9 9 9 9 9 9

111 91 119 19 99

2-[[(3-triflu o rmethylfenyl)hydroxyfosfinyl]oxy]penta ndiová kyselina;

2-[[(2,3,4-trimethoxyfe nyl) hyd roxyfosf i nyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(1 - naftyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(2-naftyl) hyd roxyfosf i nyl]oxy]-pentand i ová kyselina;

2-[[(1 - nafty l)m ethyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]penta ndiová kyselina;

2-[[(2-n aftyl) methyl hyd roxyf osf i nyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[ (1 - nafty I) et h y I hyd roxyf osf i nyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(2- nafty I) ethyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]penta ndiová kyselina;

2-[[ (1 -nafty I) p ropy I hyd roxyfosfinyl]oxy]penta ndiová kyselina;

2-[[(2-naftyl)p ropy I hyd roxyfosf i nyl]oxy]penta ndiová kyselina;

- [[ (1 - naftyl)butylhydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(2-naftyl)butylhydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina; a

2-[[(fenylprop-2-enyl) hyd roxyfosf i nyl]oxy]penta ndiová kyselina οο ···· · ·« ···· ·· ·· *J \J 9 · · ··· 9 9 9 9

9 9 9 999 9 9 9 9

9 99 · ·· »99999

9 9 9 9 9 9 ·

Φ 99 9 99 999 9 9 9 9

Zejména výhodné sloučeninami vzorce III podle vynálezu kde je lineární nebo rozvětvená alifatická nebo karbocyklické skupina a R₂ je ethyl, který je substituovaný karboxylovou kyselinou jsou vybrány ze souboru, do kterého patří:

2-[(benzylhydroxyfosfinyl)oxy]pentandiová kyselina;

2-[(fenylhydroxyfosfinyl)oxy]pentandiová kyselina;

2-[[((hydroxy)fenylmethyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[(butylhydroxyfosfinyl)oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(3-methylbenzyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[(3-fenylpropylhydroxyfosfinyl)oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(4-fluorfenyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[(methylhydroxyfosfinyl)oxy]pentandiová kyselina;

2-[(fenylethylhydroxyfosfinyl)oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(4-methylbenzyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(4-fluorbenzyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(4-methoxybenzyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

- 34 • fefefe fe · «

fe fe · • fe · • fe fefefe· • fefe • fefe·· fefefe · • · · • fe fefefe • fe fefe fe fefe fe

Λ fefe · fefefe fefefe • fe • fe fefe

2-[[(2-fluorbenzyl)hydroxyfosfinyl]oxyjpentandiová kyselina; a

2-[[(pentafluorbenzyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[(fosfono)oxy]pentandiová kyselina

2-[[(3-trifluormethylfenyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

Sloučeniny podle vynálezu, ve kterých Ri je lineární nebo rozvětvená alifatická nebo karbocyklická skupina, R2 je fenyl a X je kyslík, jsou vybrány ze souboru, do kterého patří:

2-[[methylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[ethy I hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-fenyletha nová kyselina;

2-[[p ropy I hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-feny let hanová kyselina;

2-([butyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-fenyletha nová kyselina;

2-[[cyklohexyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-fenyleth a nová kyselina;

2-[[(cyklohexyl)methylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[fenylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[benzyIhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

- 35 ···· • · ·· • ·· ··*« ·· 99 ·· · · · ···« • · · ··« · · · · • 9 * · 4 4 999 999

9 4 4 4 4

444 44 999 49 99

2-[[fenylethylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[fenyl pro pyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[fenylbutylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(2,3,4-trimethoxyfenyl)-3-hydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[ [ (1 - nafty I) hyd roxyfosf iny I] oxy]-2-feny let ha nová kyselina;

[ [ (2 - n afty I) hyd roxyfosf i nyl] oxy]-2-feny let ha nová kyselina;

2[[( 1 -nafty I) methyl hyd roxyfosf iny l)]oxy]-2-feny let ha nová kyselina;

2-[[(2-naftyl)methylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

- [[ (1 - nafty I) et h y I hyd roxyfosf iny l]oxy]-2-feny let ha nová kyselina;

2-[[(2-n afty I) et h y I hyd roxyfosf i nyl] oxy]-2-feny let ha nová kyselina;

2-[[(1 - naftyl) propyl hyd roxyfosfiny l]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(2-naftyl; propyl hyd roxyfosfiny l]oxy]-2-fenyletha nová kyselina;

- [ [ (1 - naftyl) butyl hyd roxyfosf inyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(2-naftyl) butyl hyd roxyfosf iny l]oxy]-2-fenyletha nová kyselina; a

2-[[fenylprop-2-enyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-feny let han ová kyselina • · • · • · · ·

• · · · · · • · · • · · · · • · ·

Aniž by se omezoval rozsah vynálezu na jakýkoliv konkrétní příklad, je třeba uvést, že vysoce výhodnou sloučeninou podle vynálezu kde Ri je lineární nebo rozvětvená alifatická skupina nebo karboxylová skupina, R₂ je ethyl, který je substituovaný karboxylovou kyselinou a X je kyslík, je

2-[[benzylhyd roxyfosf i nyljoxyjpen ta ndiová kyselina.

Další zvláště výhodné sloučeniny podle vynálezu jsou vybrané ze souboru, do kterého patří fosfonátové deriváty, kde X je kyslík, Ri je lineární nebo rozvětvená alifatická nebo karbocyklická skupina a R₂ je C₂-C₈ alkylový nebo alkenylový řetězec, který je substituovaný karboxylovou kyselinou. Příklady jsou:

2-[(m ethy I hyd roxyfosf i nyl) oxy] hexa ndiová kyselina;

2-[(be nzy I hyd roxyfosf i nyl)oxy] hexa ndiová kyselina;

2-[(m ethy I hyd roxyfosf i nyl) oxy] hepta ndiová kyselina;

2-[(be nzy I hyd roxyf osf i nyl)oxy]hepta ndiová kyselina;

2-[(methylhydroxyfosfinyl)oxy]okta ndiová kyselina;

2-[ (be nzy I hyd roxyfosf i nyl)oxy]okta ndiová kyselina;

2-[(met hy I hyd roxyfosf i nyl)oxy]nona ndiová kyselina;

2-[(benzylhydroxyfosfinyl)oxy]nonandiová kyselina;

2-[(m ethyl hyd roxyf osf i nyl) oxyjdeka ndiová kyselina;

• · ···· ·· · · • · · · · · ···· · ·· ·

- 37 2-[(benzylhydroxyfosfinyl)oxy]dekandiova kyselina;

Další zvláště výhodné sloučeniny vynálezu jsou vybrané ze souboru, do kterého patří: fosfonátové deriváty, kde X je kyslík, Ri benzyl a R₂ je přímá nebo rozvětvená alifatická nebo karbocyklická skupina. Příklady jsou:

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2 kyselina;

2-[[benzyl hyd roxyfosfinyl]oxy]-2

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2 methylethanová kyselina;

ethylethanová kyselina;

propylethanová kyselina;

butylethanová kyselina;

cyklohexylethanová kyselina;

(cyklohexyl)methylethanová fenylethanová kyselina;

benzylethanová kyselina;

fenylethylethanová kyselina;

fenylpropylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylbutylethanová kyselina;

·· ··

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(2,3,4-trimethoxyfenyl)ethanová kyselina;

2-[[benzyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-(1 - nafty l)ethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(2-naftyl)ethanová kyselina;

2-[[benzy I hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-(1 - nafty l)methyleth a nová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(2-naftyl)methylethanová kyselina;

2-[[benzy I hyd roxyf osf i nyl]oxy]-2-(1 - nafty l)ethyleth a nová kyselina;

2-[[benzyl hyd roxyfosf i ny I] oxy]-2-(2-naftyl)ethyletha nová kyselina;

2-[[benzyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-(1 - nafty l)p ropy letha nová kyselina;

2-[[benzyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-(2-naftyl)p ropy let ha nová kyselina;

2-[[benzylhyd roxyfosfinyl]oxy]-2-( 1 - naftyl)butylethanová kyselina;

2-[[be nzy I hyd roxyf osf i nyl]oxy]-2-(2-naftyl) buty letha nová kyselina; a

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylprop-2-fenylethanová kyselina.

Zejména výhodné způsoby využívají sloučeniny, v nichž Ri je uvedená alkyl, alkenyl, cykloalkyl nebo aryl skupina

- 39 substituovaná heterocyklickou skupinou, R₂ je ethyl substituovaný karboxylovou kyselinou a X je kyslík, vybrané ze souboru, do kterého patří:

2-[[(2-py ridyl) methyl hydroxyfosf i nyl] oxy] pen ta ndiová kyselina;

2-[[ (3-py ridyl) methyl hydroxyfosf i nyljoxyjpen ta ndiová kyselina;

2-[[(4-pyridyl)methylhydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(3-py ridyl)ethyl hydroxyfosf i nyl] oxy] penta ndiová kyselina;

2- [[ (3-py ridyl) propyl hydroxyfosf i nyl] oxy] pen ta ndiová kyselina;

- [ [ (tet ra hydrof urany l)methyl hydroxyfosf i nyl] oxy]pentandiová kyselina;

2- [[(tet ra hydrof urany I) eth y I hydroxyfosf i nyljoxy]pentandiová kyselina;

2-[[(tet ra hydrof urany I) propyl hydroxyfosf i nyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(2-indolyl)methylhydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(3-indolyl)methylhyd roxyfosf i nyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(4-indolyl)methylhyd roxyfosf i nyl] oxy] penta ndiová kyselina;

2-[[(3-indolyl)ethylhydroxyfosfinyí]oxy]pentandiová kyselina;

- 40 • · · • · • · • ·

9 9 ··· • · • · · · •

9

2-[[(3-indolyl)propylhydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(2-thienyl)methylhydroxyfosfinyl]oxy]pentandíová kyselina;

2-[[(3-thie nyl) methyl hyd roxyfosf i nyljoxyjpen ta ndiová kyselina;

2-[[(4-thie nyl) methyl hyd roxyfosf i nyljoxyjpen ta ndiová kyselina;

- [ [ (3-t hienyl)ethyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]penta ndiová kyselina; a

2-[[ (3-thie nyl) propyl hyd roxyfosf i nyljoxyjpenta ndiová kyselina.

Zejména výhodné způsoby využívají sloučeniny, v nichž FU je uvedená alkyl, alkenyl, cykloalkyl nebo arylová skupina, která je substituovaná heterocyklickou skupinou, R2 je fenyl a X je kyslík, vybrané ze souboru, do kterého patří:

2-[[(2-pyridyl)methylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

-[[ (3-py ridy I) methyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-f eny leth a nová kyselina;

2-[[(4-pyridy()methylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(3-py ridy I) ethyl hyd roxyfosf iny l]oxy]-2-feny leth anová kyselina;

4. ···· · ·· ♦ ··· «· »t

- ♦ ♦· ··· ···· • · ····· ···· • · · · · · · ······ o · · · · · · · ·· ··· ·· ··· ·· m

2-[[(3-pyridyl)propylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(tetrahydrofuranyl)methylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenyl ethanová kyselina;

2-[[(tetrahydrofuranyl)ethylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenyl ethanová kyselina;

2-[[(tetrahydrofuranyl)propyIhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenyl ethanová kyselina;

2-[[(2-ind o ly I) methy Ihydroxyfosf i nyl]oxy]-2-fenyletha nová kyselina;

2-[[(3-indolyl)methylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(4-indolyl)methylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

- [ [ (3 - i n d olyl)ethy Ihydroxyfosf i nyl]oxy]-2-feny let ha nová kyselina;

2-[[(3-indolyl)propylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(2-thienyl)methylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(3-thienyl) methyl hyd roxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina;

* · ·· * ·♦ ······ ♦ ·· · · · · · ·· ··· ·· ··· ·· «·

2-[[(4-thienyl) methyl hydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina:

2-[[(3-thienyl)ethylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina; a

2-[[(3-thienyl)propylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-fenylethanová kyselina.

Zejména výhodné způsoby využívají sloučenin, kde Ri je benzyl, R2 je shora uvedená alkyl, alkenyl, cykloalkyl nebo arylová skupina, která je substituována heterocyklickou skupinou a X je kyslík, vybraných ze souboru, do kterého patří:

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(2-pyridyl)methylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(3-pyridyl)methylethanová kyselina:

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(4-pyridyl)methylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(3-pyridyl)ethylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(3-pyridyl) propy let ha nová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-tetrahydrofuranyl)methylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-tetrahydrofuranyl)ethylethanová kyselina;

• · · · · · • 9

9 9 9

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2 kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2 kyselina;

2-[[benzy Ihyd roxyfosf i nyl]oxy]-2 kyselina;

2-[[benzy Ihyd roxyfosf i nyl]oxy]-2 kyselina;

2-[[ be nzy Ihyd roxyfosf i nyl]oxy]-2 kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2 kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2 kyselina;

2-[[benzy Ihyd roxyfosf i nyl]oxy]-2 kyselina;

2-[[ben zy Ihyd roxyfosf i nyl]oxy]-2 kyselina;

tet ra h yd rofuranyl)p ropy let ha nová (2-indolyl)methyl ethanová (3-i ndo lyl) methyl ethanová (4-indolyl)m ethyl ethanová (3-indolyl) ethyl ethanová (3-indolyl)propylethanová (2-thienyl)methylethanová (3-thienyl)methylethanová (4-thienyl)methylethanová

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(3-thienyl)ethylethanová kyselina;

a

2-[[benzy Ihyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-(3-thienyl)p ropy lethanová kyselina.

• · • ·

V jiném výhodném provedení je Ri aromatický nebo heterocyklický substituent a ilustrativními příklady sloučenin podle tohoto provedení jsou sloučeniny vzorce III:

R2

Ri'COOH

OH kde

Rt je Ar-ι a

R₂ je C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C₂-C_g lineární nebo rozvětvený alkenyl, C₃-C₈ cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl, nebo An, přičemž uvedené alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl a arylové skupiny mohou být popřípadě substituovány karboxylovou kyselinou.

Zejména výhodné sloučeniny, kde R1 je heterocyklická skupina, R₂ je ethyl, který je substituován karboxylovou kyselinou a X je kyslík, jsou vybrané ze souboru, do něhož patří:

2-[[(2-pyridyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(3-pyridyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(4-pyridyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

- 45 ·· ···· ·· ·· • · · · · · · • · · · « < « · « • · · · » · · · · * · 9 9 9 · · • · · « · * «· « ·

2-[[(tetrahydrofuranyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(2-indolyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(3-indolyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(4-indolyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(2-thienyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina;

2-[[(3-thienyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina; a

2-[[(4-thienyl)hydroxyfosfinyl]oxy]pentandiová kyselina

Výhodné jsou také sloučeniny vybrané ze skupiny vzorce III:

O

Ri-P

R2 'COOH

OH kde

Ri je vodík, C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl,

C₂-Cg lineární nebo rozvětvený alkenyl, C3-C9 cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl nebo An; a

R₂ je Ar! přičemž uvedená arylová skupina může být popřípadě substituována karboxylovou kyselinou.

Konkrétní příklady sloučenin podle vynálezu kde R1 je aromatický nebo heterocyklický zbytek jsou pro odborníky v oboru

- 46 «« snadno připravitelné a použitelné podle zde uvedených i známých technik.

Sloučeniny podle vynálezu, kde Ri je benzyl, R₂ je heterocyklické skupina a X je kyslík, jsou vybrány ze souboru, do kterého patří:

2-[[be nzy Ihydroxyfosf i nyl]oxy]-2-(2-pyridyl)eth a nová kyselina;

2-[[benzy I hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-(3-pyridyl)et ha nová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(4-pyridyl)ethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(tetrahydrofuranyl)ethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(2-indolyl)ethanová kyselina;

2-[[benzy Ihydroxyfosf i nyl]oxy]-2-(3-ind o ly I) eth a nová kyselina;

2-[[benzy I hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-(4-ind oly I) ethan ová kyselina;

-[[benzyl hyd roxyfosf i nyl]oxy]-2-(2-thienyl)eth a nová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(3-thienyl)ethanová kyselina; a

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]oxy]-2-(4-thienyl)ethanová kyselina.

Výhodné fosforamidátové sloučeniny podle vynálezu jsou vybrané ze sloučenin vzorce IV:

···· kde • · · · · · · • * ♦ · · « • · · 9 · · · • 9 9 9 · · • 9 4 4 ·· ·4 ·4·

OH

R2 ^N^^COOH

Rl

IV

Ri je vodík, C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C₂-C₉ lineární nebo rozvětvený alkenyl C₃-C₈ cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl, nebo Ar_n a

R₂ je C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C₂-C₉ lineární nebo rozvětvený alkenyl, C₃-C₈ cykloalkyl, C₅-C₇ cykloalkenyl, nebo An, přičemž uvedené alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl a arylové skupiny mohou být popřípadě substituovány karboxylovou kyselinou.

Ve výhodném provedení jsou R skupiny alifatické nebo karbocyklické substituenty a ilustrativní jsou sloučeniny, které náležejí do skupiny vzorce IV:

^N^^COOH

Rl

OH kde

R1 je vodík, C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C₂-Cg lineární nebo rozvětvený alkenyl, C₃-C₈ cykloalkyl, C5-C7 cykloalkenyl, 1-naftyl, 2-naftyl, nebo fenyl; a

R₂ je C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C₂-C₉ lineární nebo rozvětvený alkenyl, C₃-C₈

- 48 ft ft ft · ftft cykloalkyl, C₅-C₇ cykloalkenyl, 1-naftyl, 2-naftyl, nebo fenyl přičemž uvedené alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl a 1-naftyl, 2-naftyl, nebo fenyl; aryl skupiny mohou být popřípadě substituovány karboxylovou kyselinou.

ft ft • ftft · ft · * »·· • « ft * • ft ·· • · ♦ · • ftft · • ftft ftftft • « • · · ·

Zejména výhodnými sloučeninami vzorce IV, ve kterém Ri je alifatická nebo karbocyklická skupina, R₂ je ethyl, který je substituovaný karboxylovou kyselinou a NRi je aminoskupina, jsou sloučeniny, vybrané ze souboru, do kterého patří:

2-[[methylhydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[ethylhydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[propyl hydroxyfosfínyljaminojpentandiová kyselina;

2-[[butylhydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[cyklohexylhydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(cyklohexyl) methyl hyd roxyfosf i nyljaminojpentandiová kyselina;

2-[[fenylhydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[fenylethyl hyd roxyfosfi nyljaminojpentandiová kyselina;

- [ [f e n y I propyl hyd roxyfosf i nyljaminojpentandiová kyselina;

• 4 ·· • 4 4 ·

4 4 4

444 444

4

9 4

- 49 • 4 4 9 · ♦ · *· 4 4 4 • 4 44··

4 4 « « »

4 4 4 •44 94 ···

2-[[fenylbutyl hyd roxyfosf iny l]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(4-m ethy I benzy I) hyd roxyfosf i nyl]am i no] pentandiová kyselina;

2-[[(4-fluorbenzyl) hyd roxyfosfinyl]ami nojpentandiová kyselina;

2-[[(2-f I u orbě nzy I) hyd roxyfosfinyl]am i no] pentandiová kyselina;

2-[[(pentafluorbenzyl)hydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(m ethoxy benzyl) hyd roxyfosf i nyl]am i no]pentandiová kyselina;

2-[[(4-fluorfenyl)hydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[((hydroxy)feny Imethyl) hyd roxyfosf i nyl]am i no]-pentandiová kyselina;

2-[[(3-methy I benzyl) hyd roxyfosf i nyl]am i no] pentandiová kyselina;

2-[(fosfono)amino]pentandiová kyselina

2-[[(3-trifluormethylfenyl)hydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(2,3,4-t ri met h oxyf eny I) hyd roxyfosf i n y 1 ] a mi no] pentandiová kyselina;

- [ [ (1 -nafty I) hyd roxyfosf iny l]am i nojpentandiová kyselina;

- 50 • flflfl fl* flflflfl • fl ©flflfl fl t flflfl • flfl fl • ·

2-[[(2-naftyl)hydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

- [ [ (1 - naftyl) methy Ihyd roxyfosf iny l]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(2-naftyl)methylhydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(1 - naftyl) ethy Ihyd roxyfosf iny l]am i no] pentandiová kyselina;

2-[[(2-n afty I )ethy Ihyd roxyfosf i nyl]am i no] pentandiová kyselina;

2-[[( 1 -naftyl) propy Ihyd roxyfosf iny l]a mi no] pentandiová kyselina;

2-[[(2-naftyl)propylhyd roxyfosf i nyl]a mi no] pentandiová kyselina;

2-[[( 1 - nafty I) b u ty Ihyd roxyfosf iny l]am i no] pentandiová kyselina;

2-[[(2-nafty I) b uty I hyd roxyfosf i nyl]am i no] pentandiová kyselina;

2-[[(fe ny I p ro p-2-e ny I) hyd roxyfosf i ny l]a mi no] pentandiová kyselina;

Zejména výhodnými sloučeninami vzorce IV podle tohoto vynálezu, kde Ri je lineární nebo rozvětvená alifatická nebo karbocyklická skupina, R₂ je ethyl, který je substituovaný karboxylovou kyselinou a NRi je aminoskupina, jsou vybrané ze souboru, do kterého patří:

2-[(benzylhydroxyfosfinyl)amino]pentandiová kyselina;

2-[(fenyl hyd roxyfosf i nyl)am i no]penta nd iová kyselina.

9 · •99 999

9

9· ··

- 51 ···· · ·» ·*· • ·· · · · • · · · ·♦· • · * · · ♦ · · · · ·· ·«· ·· ···

2-[[(( hyd roxy)fenyl methyl) hyd roxyfosf iny l]am i n ojpenta ndiová kyselina;

2-[(butylhydroxyfosfinyl)amino]pentandiová kyselina;

2-[[(3-methy I benzy I) hyd roxyf osf i nyljam i no] pentandiová kyselina;

2-[(3-fenyl propyl hyd roxyfosfinyl)am i no] penta ndiová kyselina;

2-[[(4-f I uo rfeny I) hyd roxyf osf i nyl]a mi no] penta ndiová kyselina;

2-[(methy I hyd roxyfosf i nyl)a mi no] penta ndiová kyselina;

2-[(fenylethylhydroxyfosfinyl)amino]pentandiová kyselina;

2-[[(4-m ethyl benzy I) hyd roxyfosf i nyljam i n o] pentandiová kyselina;

2-[[(4-fluorbenzyl)hydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(4-meth oxy be nzy I) hyd roxyfosf i nyl]am i no] penta ndiová kyselina;

2-[[(2-fluorbenzyl)hydroxyfosfinyl]]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(pentafluorbenzyl) hyd roxyfosf i nyl]am i no]penta ndiová kyselina.

2-[(fosfono)amino]pentandiová kyselina; a

2-[[(3-trifluormethylfenyl) hyd roxyfosfinyl]amino] penta ndiová kyselina

Sloučeniny podle vynálezu, ve kterých Ri je lineární nebo rozvětvená alifatická nebo karbocyklická skupina, R₂ je ·«

9 9 ·

9 9 9 • 9 9 9 9· • 9 ·· 99

- 52 9999

9

9

9 • 9 ····

9 9 999

9

9

999 fenyl a X je aminoskupina, jsou vybrány ze souboru, do kterého patří:

2-[[methyl hyd roxyfosf i nyljam i no]-2-fenyleth ano vá kyselina;

2-[[ethy I hyd roxyfosf i nyljam i no]-2-feny let ha nová kyselina;

2-[[propylhydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[butyl hyd roxyfosf i nyljam i no]-2-fenyletha nová kyselina;

2-[[cyklohexyl hyd roxyfosf i nyljam i no]-2-fenyleth ano vá kyselina;

2-[[(cyklohexyl) methyl hyd roxyfosf i nyljam i no]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[fenyl hyd roxyfosf i nyljam ino]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]aminoj-2-fenylethanová kyselina;

2-[[feny let hyl hyd roxyfosf i nyljam i no]-2-fenyletha nová kyselina;

2-[[fenylpropylhydroxyfosfinyl]aminoj-2-fenylethanová kyselina;

2-[[fenylbutylhydroxyfosfinyljamino]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(2,3,4-trimethoxyfenyl)-3-hyd roxyfosfiny Ijam i no]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(1 - nafty I) hyd roxyfosf i nyl Jam i no]-2-feny leth a nová kyselina;

2-[[(2-naftyl) hyd roxyfosf iny l]amino]-2-fenylethanová kyselina;

(-o ··*; * ** ···· ·» ·· • · ·♦♦·· fefe·· · · · · · ·· fefe···· ••••fefe · · ·· ··· ·· fefefe fefe fefe

2-[[(1-nafty l)methyl hyd roxyfosf iny l)]am i no]-2-fenyl ethanová kyselina;

2-[[(2-naftyl)methyl hyd roxyfosf iny l]amino]-2-fenyl ethanová kyselina;

2-[[(1 - nafty I) ethyl hyd roxyfosf iny I ] a mi no]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(2-n afty I) eth y I hyd roxyfosf i nyl]am i no]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(1 - naftyl) propy I hyd roxyfosf iny l]a mi no]-2-fenyleth ano vá kyselina;

2-[[(2-naftyl; propyl hyd roxyfosf iny l]amino]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(1 - naftyl) buty I hyd roxyfosf iny l]am i no]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(2-naftyl)butyl hyd roxyfosf i nyl]am i no]-2-fenylethanová kyselina; a

2-[[fenylprop-2-enylhydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina.

Aniž by se omezoval rozsah vynálezu na jakýkoliv konkrétní příklad, je třeba uvést, že vysoce výhodnou fosforamidátovou sloučeninou podle vynálezu, ve které Ri je karbocyklická skupina, R₂ je ethyl substituovaný karboxylovou kyselinou a X je aminoskupina je

2-[[benzylhydroxyfosfinyljaminojpentandiová kyselina.

- 54 9 9 • 9 9 9

9 9 * •99 999

9

9 99

9 ·· »·««

999

99

Další specificky výhodné sloučeniny podle vynálezu jsou vybrané ze souboru, do kterého patří fosforamidátové deriváty, v nichž a X je aminoskupina, Ri je alifatická nebo karbocyklická skupina a R₂ je C₂-Cs alkylový nebo alkenylový řetězec, substituovaný karboxylovou kyselinou. Příklady jsou:

2-[(methylhydroxyfosfinyl)amino]hexandiová kyselina;

2-[(benzylhydroxyfosfinyl)amino]hexandiová kyselina;

2-[(methylhydroxyfosfinyl)amino]heptandiová kyselina;

2-[(benzylhydroxyfosfinyl)amino]heptandiová kyselina;

2-[(methylhydroxyfosfinyl)amino]oktandiová kyselina;

2-[(benzylhydroxyfosfinyl)amino]oktandiová kyselina;

2-[(methylhydroxyfosfinyl)amino]nonandiová kyselina;

2-[(benzylhydroxyfosfinyl)amino]nonandiová kyselina;

2-[(methylhydroxyfosfinyl)amino]dekandiová kyselina;

2-[(benzylhydroxyfosfinyl)amino]dekandiová kyselina;

Další specificky výhodné sloučeniny jsou vybrané ze souboru, do kterého patří fosforamidátové deriváty, v nichž a X je aminoskupina, Ri je benzyl a R₂ je lineární nebo rozvětvená alifatická skupina nebo karbocyklická skupina. Příklady jsou:

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-methylethanová kyselina;

• fcfc · • fc fcfcfc· fc fc fc fcfcfc • · • fc • fcfc • fc fcfc • fcfc fc • fcfc · fcfcfc · « · • · • fc fcfc

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino] kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzy Ihydroxyfosf i nyljam i no]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino] ethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino] kyselina;

2-ethylethanová kyselina;

2-propylethanová kyselina;

2-butylethanová kyselina;

2-cyklohexylethanová kyselina;

2-(cyklohexyl)methylethanová

2-fenylethanová kyselina;

2-benzylethanová kyselina;

2-fenylethylethanová kyselina;

2-fenylpropylethanová kyselina;

2-fenylbutylethanová kyselina;

2-(2,3,4-trimethoxyfenyl)2-(1-naftyl)ethanová kyselina;

2-(2-naftyl)ethanová kyselina;

2-(l-naftyl)methylethanová • ftftft • · • · ·« · ·· ftftftft • ft • ··· • · · • ft · • ft ftftft ftft ftft • · o · • · · ft ftftft ftftft • · ftft ftft

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(2-naftyl)methylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-( 1 - naftyl)ethylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(2-naftyl)ethylethanová kyselina;

2-[[benzyl hyd roxyfosfinyl]amino]-2-(1 - nafty l)p ropy let ha nová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(2-naftyl)propylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(1 -naftyl)butylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(2-naftyl)butylethanová kyselina; a

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylprop-2-enylethanová kyselina.

Zejména výhodné způsoby využívají sloučenin, kde Ri je uvedená alkylová, alkenylová, cykloalkylové nebo arylová skupina, která je substituovaná heterocyklickou skupinou, R₂ je ethyl, který je substituovaný karboxylovou kyselinou a X je aminoskupina, které jsou vybrány ze souboru, do kterého patří:

2-[[(2-pyridyl) methy Ihydroxyfosfinylja mi no] pentandiová kyselina;

- 57 • · ··· · · · · • · · · · ·«· »·· • · · · · · ··» ·· «·· ·· ..

2-[[(3-pyridyI) met h ylh yd roxyfosf inyl]a m i nojpen ta nd iová kyselina;

2-[[(4-pyridyl) methyl hyd roxyfosf i nyl] amino] pentandiová kyselina;

2-[[(3-pyridyl)ethyl hyd roxyfosf inyljam i no] pentandiová kyselina;

2-[[(3-pyridyl)propyl hydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(tet ra hyd rofuranyl)m ethyl hyd roxyfosf inyljam i no] pentandiová kyselina;

2-[[(tetrahydrofuranyl)ethyl hyd roxyfosf i nyl] amino] pentandiová kyselina;

2-[[(tetra hydrof uranyl) propyl hyd roxyfosf inyl]am i nojpentandiová kyselina;

2-[[(2-i ndo ly I) methyl hyd roxyf osf i nyl]am i no]pentand iová kyselina;

2-[[(3-i nd o lyl) methyl hyd roxyf osf inyljam i nojpentandiová kyselina;

2-[[(4-indolyl)methylhydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(3-ind oly I) ethyl hyd roxyfosf i nyl]amino]pentandiová kyselina;

2-( [ (3-i nd o ly I) p rop y I hyd roxyf osf i nyl]am i no] pentandiová kyselina;

2-[[(2-thienyl)methylhyd roxyfosf i nyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(3-thie nyl) methyl hyd roxyfosf inyljam i no] pentandiová kyselina;

2-[[(4-thienyl)methyl hyd roxyfosfinyl]am i nojpentandiová kyselina;

- 58 • · · · • · • · • · • · · • · · · • · • · · · • · • · • · ·

2-[[(3-t h ie ny I )et h y I hydroxyfosf i nyl]am i n o] pen ta ndiová kyselina; a

2-[[(3-thienyl)propylhydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina.

Zejména výhodné způsoby využívají sloučenin, kde Ri je uvedená alkylová, alkenylová, cykloalkylová nebo arylová skupina, která je substituovaná heterocyklickou skupinou, R₂ je fenyl a X je aminoskupina, vybraných ze souboru, do kterého patří:

2-[[(2-pyridyl)methylhydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[ (3-py r i dy I )m et hyihyd roxyfosf i nyl] a mi no]-2-fenyl ethan ová kyselina;

2-[[(4-py ridy I) meth yl hydroxyfosf i nyl]am i no]-2-fenyleth a nová kyselina;

2-[[(3-pyridyl)ethylhydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(3-py ridyl) p ropy lhydroxyfosfinyl]am i no]-2-fenyletha nová kyselina;

2-[[(tetrahydrofuranyl)methylhydroxyfosfinyl]amino]-2-fenyl ethanová kyselina;

2-[[(tetrahyd rotu raný l)ethylhyd roxyfosf inyljam i no]-2-fenyl ethanová kyselina;

- 59 ·· · · • · • · · • · · · · · • 4 • · · ·

-2-fenyl

2-[[(tetra hyd rof u ra n y I) propy Ihyd roxyfosf iny l]am i n o] ethanová kyselina;

2-[[(2-indolyl) methyl hyd roxyfosf iny l]amino]-2-fenyletha nová kyselina;

2-[[(3-indo lyl) methyl hyd roxyfosf i nyl]am i no]-2-feny let h a nová kyselina;

2-[[(4-i ndo ly I) met hy Ihyd roxyfosf i nyl]am i no]-2-fenyleth a nová kyselina;

2-[[(3-indolyl)ethylhydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(3-i ndo lyl) propy Ihyd roxyfosf iny l]amino]-2-fenyletha nová kyselina;

- [ [ (2-t h ie ny I) met hy Ihyd roxyfosf i nyl]am i no]-2-feny let ha nová kyselina;

2-[[(3-thienyl)methylhydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(4-thienyl)methylhydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(3-thienyl)ethylhyd roxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina; a

2-[[(3-thienyl)propylhydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina • · · · ·

- 60 Zejména výhodné způsoby využívají sloučenin, kde Ri je benzyl, R₂ je uvedená alkyl, alkenyl, cykloalkyl nebo arylová skupina, která je substituovaná heterocyklickou skupinou a X je aminoskupina, které jsou vybrány ze souboru, do kterého patří:

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(2-pyridyl)methylethanová kyselina:

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(3-pyridyl)methylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(4-pyridyl)methylethanová kyselina;

2-[[benzyl hyd roxyfosfinyl]amino]-2-(3-pyridyl)ethyletha nová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(3-pyridyl)propylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]am i n o]-2-(tet ra hydrof uranyl) methylethanová kyselina;

2-[[benzyl hyd roxyfosfinyl]amino]-2-(tetrahydrofu raný I) et h y I ethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(tetrahydrofuranyl)propylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]am i no]-2-(2-indolyi) methylethanová kyselina;

• · · · · 4 • 4 ·· ·· • · · · · 4 • · > · · · · > · 4 ) · 4 • · · · ·

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(3-indolyl)methylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(4-indolyl)methylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(3-indolyl)ethylethanová kyselina;

2-[[benzy Ihydroxyfosf i nyl]am i no]-2-(3-indolyl)propyleth ano vá kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(2-thienyl)methylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(3-thienyl)methylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(4-thienyl)methylethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(3-thienyl)ethylethanová kyselina;

a

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(3-thienyl)propylethanová kyselina.

- 62 • · · · • · · · · • · ·

V dalším výhodném provedení je Ri heterocyklický substituent, přičemž ilustrativní jsou sloučeniny, které náležejí do skupiny vzorce IV:

RI

IV

OH kde

R-ι je An a

R₂ je Cj-Cg lineární nebo rozvětvený alkyl, C₂-Cg lineární nebo rozvětvený alkenyl, C3-C₈ cykloalkyl, C₅-C₇ cykloalkenyl, 1-naftyl, 2-naftyl, nebo fenyl přičemž uvedené alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl nebo arylové skupiny mohou být popřípadě substituovány karboxylovou kyselinou.

Zejména výhodné sloučeniny, ve kterých Ri je heterocyklická skupina, R₂ je ethyl, který je substituovaný karboxylovou kyselinou a X je amino skupina, jsou vybrané ze souboru, do kterého patří:

2-[[(2-pyridyl)hydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(3-py ridy I) hyd roxyfosf i nyljam i no] pentandiová kyselina;

2-[[(4-pyridyl)hydroxyfosfinyljamino]pentandiová kyselina;

2-[[(tetrahydrofuranyl)hydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

- 63 • · • · · · · ·

2-[[(2-i ndo ly I) hyd roxyfosf iny Ija m i no] penta nd io vá kyselina;

2-[[(3-indolyl)hydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina

2-[[(4-indolyl)hydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(2-thienyl) hyd roxyfosf i nyl]amino]pentandiová kyselina;

2-[[(3-thienyl) hyd roxyfosf i nyl]amino]pentandiová kyselina; a

2-[[(4-thienyl)hydroxyfosfinyl]amino]pentandiová kyselina.

Sloučeniny podle vynálezu, kde Ri je a heterocyklická skupina, R₂ je fenyl a X je aminoskupina, jsou vybrány ze souboru, do kterého patří:

2-[[(2-py ridy I) hyd roxyfosf i nyljam i no]-2-fenyletha nová kyselina;

2-[[(3-pyridyl) hyd roxyfosf i nyl]amino]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(4-py rid yl) hyd roxyfosf i nyljam i no]-2-fenyletha nová kyselina;

2-[[(tetrahydrofuranyl)hydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(2-indolyl) hyd roxyfosf i nyljam i no]-2-fenyleth a nová kyselina;

2-[[(3-indolyl) hyd roxyfosf i nyljam i no]-2-fenyleth a nová kyselina;

2-[[(4-ind o lyl) hyd roxyfosf i nyljam inoj-2-fenyleth ano vá kyselina;

• · ··· ·

- 64 • · ··· · · · ···· • · ····· · · · · • · · · · ·· ······ ······ · · • · ··· «· ··· · · ··

2-[[(2-thienyl)hydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina;

2-[[(3-thienyl)hydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina; a

2-[[(4-thienyl)hydroxyfosfinyl]amino]-2-fenylethanová kyselina.

Také jsou výhodné sloučeniny, vybrané ze skupiny vzorce IV:

OH

COOH

IV kde

Ri

R₂ je vodík, C1-C9 lineární nebo rozvětvený alkyl, C2-C9 lineární nebo rozvětvený alkenyl, C₃-C₈ cykloalkyl, C₅-C₇ cykloalkenyl nebo An je An přičemž uvedená aryl skupina je substituována karboxylovou kyselinou.

Konkrétní příklady sloučenin podle vynálezu kde R2 je aromatický nebo heterocyklický zbytek jsou pro odborníky v oboru snadno připravitelné a použitelné podle zde uvedených i známých technik.

Sloučeniny podle vynálezu, ve kterých R1 je benzyl, R2 je heterocyklická skupina a X je amínoskupina jsou vybrány ze souboru, do kterého patří:

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]-2-(2-pyridyl)ethanová kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amíno]-2-(3-pyridyl)ethanová kyselina;

• · · · • · · • · · • · ··· · • · • · ·♦

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino] kyselina;

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyljamino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-[[benzylhydroxyfosfinyl]amino]

2-(4-pyridyl)ethanová kyselina;

2-(tetrahydrofuranyl)ethanová

2-(2-indolyl)ethanová kyselina;

2-(3-indolyl)ethanová kyselina;

2-(4-indolyl)ethanová kyselina;

2-(2-thienyl)ethanová kyselina;

2-(3-thienyl)ethanová kyselina; a

2-(4-thienyl)ethanová kyselina.

Syntézy sloučenin

Syntézy sloučenin podle vynálezu mohou být také provedeny normálními technikami organické chemie s pomocí obecných postupů znázorněných na schématech l-IX. Prekursory sloučenin se mohou připravovat způsoby známými v oboru, jako například těmi, které jsou popsány v publikaci Jackson et al. (J. Med. Chem. 39-(2), 619-622, Design, Synthesis, and Biological Activitv of Inhibitor Neuropeptidase N-Acetylated α-Linked Acidic

Dipeotidase) nebo například v Froestl et al. (J. Med. Chem., 1995, 38, 3313-3331, Phosphinic Acid Analoques GABA).

• ft · ·

- 66 • ft ftftft · ·· ft ft · · • ftftftft · ftft · •ft ft ·· ftftft · · · • ftft ftft • ft ftftft ftft · ·

SCHÉMA I

NaH, THF

-►

R'-X

HCI, Reflux ->.

H-R'

HO

Výroba sloučenin obsahujících substituovanou skupinu R je snadno zvládnutelná pomocí známých způsobů. Dále jsou způsoby syntézy esterů kyseliny fosfinové také popsány v J. Med. Chem., 1988, 31, 204-212, a lze je nalézt dále na schématu II.

- 67 • ft · · • ft • ft ftftftft ftft ftft ftftft ftftftft • ftftftft · ftft · • ft · ftft ftftft ftftft • ftft ftft • ft ftftft ftft ftft

SCHÉMA II

Metoda A Q

NaHlPO*		1
R-CH—CHa ->- R—	—(CH2)2 -	—I	3
AIBN
H2SO4
EtOH		OH

III

A. R’ =	(CH2)Ph	H.	n-C7H15	0 l|
B.	(CH2)4Ph	I.	n-C8Hi7 R'·	-Ρ-
C.	(CH2)5Ph	J.	n-CgHi9	ΟΗ
D.	(CH2)4-(P-F-Ph)	K.	n-CioH2i
E.	(C H2)4-(3pyridy 1)	L.	CH2-(CH)(CH3)C4H9
F.	n-CsH 11	M.	CH2-(CH3)CH(CH3)2
G.	η-ΟδΗ i 3

O

1. HO* I

R'-?(OEt)z ->- R'-P-H

Metoda B

Cl-P(OEt>

R'-MgX -*

2. aq.NaOH | OH

N. R’ = n-C₄H₉

O. CH(CH₃)C₅Hh

Vychází se ze shora zmíněných esterů fosfinové kyseliny a různými cestami se mohou připravit sloučeniny podle vynálezu. Například obecná cesta byla nedávno popsána v J.

- 68 9999 9 99 9999 99 99

99 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 999 9 9 9 9

9 9 9 · · 9 999 999

9 9 9 9 9 9 9

999 99 999 99 99

Med. Chem., 1996, 39, 619-622, a je uvedena dále v následujícím Schématu III.

1. TMSC1, EtN H -

COOBn

COOBu

H2 Pd/C

-►

OH

SCHÉMA III

Jiná cesta pro přípravu sloučenin podle vynálezu je uvedena dále ve schématu IV a schématu V. Schéma IV a Schéma V také ukazují, jaké deriváty fosfinových kyselin se používají jako výchozí látka na přípravu sloučenin podle vynálezu a R skupinou může pochopitelně být každá chemicky nahraditelná skupina, zvolená podle zásad, které jsou odborníkům zřejmé. Mezi tyto R skupiny patří, ne však výlučně, substituenty, uvedené ve schématu II a v popisu.

• ft ftftft

COiBn

RORi

-H

1. TMSC1, EtN ²· r^^CCteBn ^^CChBn

RORi 'COzBn • ft ·· • ftft · • · ft · • ftft ftftft

Hz, Pd/C HzO

R

SCHÉMA IV

O

H-P-H

0-NH4⁺

i) HMDS Vf ii) hq Jl

RBr -► R-p-H iii) BnOH, EDC

OBn

o

4

SCHÉMA V

- 70 • •fl· • · flfl • flfl flflflfl flfl flfl • fl flflfl flflflfl fl flfl flflfl » flfl fl • flfl · flfl flflfl flflfl • flflfl flfl flflfl flfl flflfl flfl flfl

Jinou cestou přípravy sloučenin podle vynálezu je aromatická substituce v poloze Ri a další syntéza podle následujícího schématu VI:

O

H-P-H

OH

1, TMSCI, ElN f^^COiBn ^^COzBn

DCC, BnOH THF

SCHÉMA VI

Jinou cestou přípravy sloučenin podle vynálezu je aromatická substituce v poloze R₂ a je uvedena v následujícím schématu VII:

• · · · • · · · · · · • ···· · · · · • · ·· ··· ···

(Βη)(ΒηΟ)Ρ(Ο)Η

Bu»NHSO»

SCHÉMA VII

- 72 Příprava sloučenin podle vynálezu, ···· · ·· · ··· • · · φφφ · φ · φ • φ · · · φ · φφφφ • · · φ φ φφ φφφφφφ φφφφφφ · · •Φ φφφ φφ φφφ φφ · · ve kterých

X je NR! je znázorněna na schématu Vlil:

OH

Hz, Pd/C, HO

-►

SCHÉMA Vlil

- 73 • ·· · · · · · · • · · · • · ··· · · ··

Příprava sloučenin podle vynálezu, ve kterých

X je kyslík je znázorněna na dále uvedeném schématu IX ····

O

R-P-H

Ha, Pd/C, HO ->.

1. DCC, DMAP, THF

2. NalCU

SCHÉMA IX

Farmaceutické prostředky podle vynálezu

Vynález se také týká farmaceutických prostředků, které obsahují:

(i) terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce I, II, III nebo IV a (ii) farmaceuticky přijatelný nosič.

V dalším výhodném provedení podle vynálezu obsahují farmaceutické prostředky dále obsahují terapeuticky účinnou látku, vybranou ze skupiny zahrnující terapeutické hcrmony, chemoterapeutika, monoklonální protilátky, antiangiogenézně účinné látky, sloučeniny značené pomocí radionuklidú, antineoplastické přípravky a jejich směsi. Výhodné příklady terapeutických hormonů jsou diethyIstíIbestrol (DES), leuprolid,

9 9 9

9 9

999 999

9

9 9 9 ·· · ·

v flutamid, cyproteron acetát, ketokonazol a aminoglutetimid. Příklady antineoplastických prostředků jsou 5-f I uoru raci I, vinblastin sulfát, estramustin fosfát, suramin a stroncium 89. Příklady chemoterapeutik jsou buserelin, chlortranisen, fosforečnan chromitý, cisplatin, cyklofosfamid, dexametason, doxorubicin, estradiol, estradiolvalerát, konjugované a esterifikované estrogeny, estron, et h i n y les t ra d i o I, floxuridin, goserelin, hydroxymočovina, melphalan, metotrexat, mitomycin a prednison.

V dalších výhodných provedeních je sloučenina vzorce I, II, III nebo IV přítomna v takovém množství, které je dostatečné pro inhíbici NAALADázové aktivity u živočicha nebo pro léčení choroby prostaty živočicha.

Způsob přípravy farmaceutických prostředků

V dalším výhodném provedení vynález také řeší způsob přípravy farmaceutického prostředku či léku, který obsahuje sloučeninu podle vynálezu pro léčení chorob.

Způsoby použití sloučenin podle vynálezu

i) Způsob inhibice enzymatické aktivity NAALADázy

Vynález se dále týká způsobu inhibice enzymatické aktivity NAALADázy u živočicha, který zahrnuje podávání účinného množství sloučeniny vzorce I, II, III nebo IV uvedenému živočichovi.

ii) Způsob léčení nemoci prostaty

- 75 • · · · • · • · flfl · • · · • flfl flflfl • · flfl · · • · flflfl

Vynález se dále týká způsobu léčení choroby prostaty u živočicha, který zahrnuje podávání účinného množství sloučeniny I, II, III nebo IV uvedenému živočichovi.

Ve výhodném provedení je léčenou chorobou rakovina prostaty jako je adenokarcinom prostaty, benigní hyperplasie prostaty nebo stav prostaty vyžadující podávání sloučenin podle vynálezu, jako je například intraepitheliální novotvar prostaty (zkratka „PIN“ podle „prostatic intraepithelial neoplasia“).

iii) Způsob léčení rakoviny

Kromě rakoviny prostaty se mohou pomocí sloučenin podle vynálezu léčit i jiné formy rakoviny, přičemž jako příklady, aniž by byl tím jakkoliv rozsah chorob omezen, lze uvést choroby vybrané ze souboru, do kterého patří: nádory produkující ACTH, akutní lymfocytická leukémie, akutní nelymfocytická leukémie, rakovina kůry nadledvinek, močového měchýře, mozku, prsu, krčku, chronická lymfocytická leukémie, chronická myelocytická leukémie, kolorektální rakovina, kutánní lymfom T-buněk, rakovina děložní sliznice, jícnu, Ewingův sarkom, rakovina žlučníku, leukémie vlasových buněk, rakoviny hlavy a šíje, Hodgkinsův lymfom, Kaposiho sarkom, rakovina ledvin, jater, plic (malobuněčná a/nebo nemalobuněčná), maligní peritoneální výpotek, maligní pleurální výpotek, melanom, mesotheliom, mnohočetný myelom, neuroblastom, ne-Hodgkinsův lymfom, osteosarkom, rakovina vaječníku (zárodečných buněk), rakovina pankreatu, penisu, retinoblastom, rakovina kůže, měkkých tkání, rakoviny šupinových buněk, rakovina žaludku, varlat, štítné žlázy, trofoblastické novotvary, rakovina uteru, vagíny, vulvy a Wilmův nádor.

- 76 • · · · « · • · · · ttt • ·

Sloučeniny podle vynálezu jsou zejména vhodné pro léčení takových tkání, ve kterých jsou přítomny NAALADázové enzymy. Mezi tyto tkáně patří prostata stejně jako mozek, ledviny a varlata.

Pro pacienty, kteří netrpí při zahájení léčení pokročilou nebo metastázující rakovinou, je okamžité použití léků na bázi inhibitoru NAALADázy vhodnou terapií před chirurgickým zásahem i před radiační terapií i po něm při riziku návratu nebo metastáz (na základě zjištění vysokých hodnot PSA, vysokého Gleasonova čísla, místně silně rozvinuté choroby a/nebo při zjištění nádoru při patologickém zkoumání chirurgicky odebraného vzorku tkáně). Cílem je u těchto pacientů zpomalit růst potenciálních metastatických buněk z primárního nádoru v průběhu radioterapie a operace a zpomalit růst nádorových buněk, které zbyly po primárním nádoru, protože nebyly rozpoznatelné.

Pro pacienty, kteří trpí při zahájení léčby pokročilou nebo metastázující formou rakoviny, se používají léky na bázi inhibitoru NAALADázy jako průběžný doplněk, nebo jako náhražka hormonální ablace. Cílem je u těchto pacientů zpomalení růstu rakovinných buněk z neléčeného primárního nádoru i z existujících metastatických lesí.

Dále se může sloučenina podle vynálezu použít při pooperační terapii, kdy použité léky a metody mohou být zejména účinné pro snížení pravděpodobnosti opětného vzniku nádoru z buněk, které byly rozsety a nebylo možno je odstranit při chirurgickém výkonu .

iv) Diagnostické soupravy

- 77 • 4 • · • 4 · 4 • · · · · ·

4 · • · · · · • · · ·

4 · • 4 · 4 4 • 4 4 4 • 4 4 4 • 444 444

4

4 4 4

Součástí vynálezu je také vyřešení diagnostické soupravy k provádění způsobů podle vynálezu. Tato souprava může obsahovat sloučeniny a/nebo kompozice obsahující sloučeniny podle vynálezu. Sloučeniny značené rad ion úklidy a monoklonálni protilátky se mohou použít takovým způsobem, že poskytují diagnostickou informaci. Příklady diagnostické informace a použití jsou stanovení typu choroby, progrese určité choroby, lokalizace buněk, které jsou cílové pro inhibitor NAALADázy, sloučeninu značenou radionuklidem nebo monoklonálni protilátku a podobná diagnostická použití, která jsou odborníkům v oboru známá.

Způsob podávání

Při způsobu léčení podle vynálezu se mohou sloučeniny podle vynálezu podávat orálně, parenterálně, inhalací spreje, topicky, rektálně, nasálně, bukálně, vaginálně nebo prostřednictvím implantovaného zásobníku. Podávají se v dávkovačích formulacích obsahujících běžné netoxické farmaceuticky přijatelné nosiče, adjuvanty a vehikula. Termín „parenterálně“, jak je zde užíván, znamená i subkutánní, intravenózní, intramuskulární, intraperitoneální, intratekální, intraventrikulární, intrasternální či intrakraniáIni injekce a infúze. Invazivní techniky jsou výhodnější, zejména přímé podávání do nervové napadené tkáně.

Aby mohly být sloučeniny podle vynálezu terapeuticky účinné jako cíle v centrální nervové soustavě, musí při periferním podání snadno pronikat přes překážku, kterou tvoří rozhraní krevmozek. Sloučeniny, které se přes tuto bariéru nemohou dostat, lze účinné podávat intraventrikulární cestou.

- 78 • · · · · • · · • a> · • « · · · ·· ·· • · · · · · 9 * · · • · • · ··

Sloučeniny mohou být také podávány formou sterilních injekčních přípravků, například jako sterilní injekční vodné nebo olejovité suspense. Tyto suspenze se mohou formulovat technikami, které jsou v oboru známé a lze v nich používat dispersní nebo smáčecí přísady a suspendační činidla. Sterilními injekčními přípravky mohou být také sterilní injekční roztoky nebo suspense v netoxických, parenterálně přijatelných rozpouštědlech či ředidlech, například může jít o roztok v 1,3-butandiolu. Mezi přijatelná vehikula a rozpouštědla, která lze použít, patří voda, Ringerův roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Dále lze používat sterilní stabilní oleje, které se běžně používají, nebo různá suspenzní prostředí. Pro tento účel je vhodný každý směsný, stabilní olej, jako například syntetické mono- nebo diglyceridy. Pro přípravu injekcí lze použít mastné kyseliny, jako například kyselinu olejovou, a jejich glyceridové deriváty, včetně olivového oleje a ricinový olej, zejména jejich polyoxyethylované formy. Tyto olejové roztoky nebo suspense mohou také obsahovat rozpouštědla na bázi alkoholů s dlouhými řetězci nebo dispergační přísady.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být také podávány orálně ve formě kapslí, tablet, vodných suspensí nebo roztoků. Tablety mohou obsahovat nosiče jako je laktóza a obilný škrob a/nebo kluzné přísady jako je stearát hořečnatý. Kapsle mohou obsahovat ředidla včetně laktózy a sušeného obilného škrobu. Vodné suspense mohou obsahovat v kombinaci s účinnou látkou emulgační a suspendační činidla. Orální dávkové formy mohou dále obsahovat sladidla a/nebo příchutě a/nebo barviva.

Sloučeniny podle vynálezu se dále mohou podávat rektálně ve formě supositorií. Tyto prostředky se mohou připravovat smísením účinné sloučeniny s nedrá zdivý mi • · 11 · 1 9 1 11

111 1111

9 19 9 1 91 1

- 79 • · · »

9 excipienty, které jsou při pokojové teplotě pevné, ale při rektální teplotě kapalné, aby se v konečníku roztavily a uvolnily účinnou látku. Mezi tyto excipienty patří kakaové máslo, včelí vosk a polyethylenglykoly.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být také podávány topícky, zejména když jsou léčené tkáně či celé orgány touto cestou přístupné, například při neurologických poruchách očí, kůže nebo nižší části střevního traktu.

Pro povrchovou aplikaci na oči nebo oftalmoterapeutické použití se mohou sloučeniny formulovat jako mikronizované suspenze nebo výhodně jako roztoky v izotonickém slaném sterilním roztoku s upraveným pH, s přísadou nebo bez přísady stabilizačních látek jako je benzylalkoniumchlorid. Alternativně mohou být sloučeniny podle vynálezu formulovány do mastí jako je petrolatum. Pro povrchovou aplikaci na kůži se dají sloučeniny podle vynálezu formulovat do vhodných mastí, kde je účinná látka dispergována nebo rozpuštěna například ve směsi jednoho nebo více následujících materiálů: minerální olej, kapalné petrolatum, bílá vazelína, propylenglykol, sloučenina polyoxyethylenu a polyoxypropylenu, emulgační vosk a voda. Alternativně lze sloučeninu podle vynálezu formulovat do vhodných tekutých krémů nebo normálních krémů, obsahujících účinnou látku dispergovanou nebo rozpuštěnou například ve směsi jednoho nebo několika následujících materiálů: minerální olej, sorbitan monostearát, polysorbát 60, cetylesterový vosk, cetylarylalkohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol a voda.

Povrchová aplikace do nižšího střevního traktu se dá provádět prostřednictvím formulací vhodných jako supositoria (viz shora) nebo formou klystýru.

- 80 *··· * ·· fcfc·· ·· fcfc • ·· fc « t fc··· fc fcfc··· · · · · fc fc 4 9 9 94 994999

9 9 fcfcfc ·· fcfc fcfcfc ·· fcfcfc <· ··

Sloučeniny podle vynálezu se mohou podávat v jednotlivé dávce, v několika oddělených dávkách nebo kontinuální infuzí. Pokud se podává malé množství, snadno pronikající a relativně stabilní účinné sloučeniny, lze je podávat kontinuálně infuzí. Výhodné je při tom použití čerpadla zejména podkožně.

Prostředky a způsoby podle vynálezu mohou také využívat technologii řízeného uvolňování. Tak například lze inhibitory NAALADázy inkorporovat do polymerní matrice pro pozvolné uvolňování v průběhu několikadenního období. Takovéto filmy pro pozvolné uvolňování jsou v oboru dostatečně známé. Příklady polymerů, obvykle používaných k tomuto účelu, které lze použít i pro sloučeniny podle vynálezu k přípravě prostředků podle vynálezu, jsou nedegradovatelný ethylenvinylacetátový kopolymer a degradovatelné kopolymery kyseliny mléčné a kyseliny glykolové. Užitečné mohou být i některé hydrogely jako je polyhydroxyethylmethakrylát nebo polyvinylalkohol

Dávkování

Při léčení shora uvedených chorob jsou použitelné opakované dávky asi 0,1 mg až asi 10 000 mg účinné sloučeniny, výhodně asi 0,1 mg až asi 1 000 mg. Přesná dávka u konkrétního pacienta kolísá v závislosti na mnoha faktorech, mezi které patří mimo jiné i účinnost konkrétní použité sloučeniny, věk, tělesná hmotnost, zdravotní stav, pohlaví a dieta pacienta, doba podávání, rychlost vylučování, použitá kombinace léků, závažnost léčené choroby a forma podávání. Výsledky získané in vitro mohou představovat vodítko pro navržení dávky u pacienta.

- 81 Studie na pokusných zvířatech mohou také pomoci, a to zejména při stanovení dávky pro léčení rakoviny. Způsob, jakým se dávka stanoví je v oboru dostatečně známý.

• · · · · • ·· • # • · » · · • · · · · • · · · · · • * · • · · · • · · • · · • « · a · • · · · ♦ t · » • · · ·

9·9 899

9

9 8 8

Ve výhodném provedení se sloučeniny podle vynálezu podávají v lyofilizované formě. V takovém případě se obvykle lyofilizují ampule s obsahem 1 až 100 mg sloučeniny podle vynálezu, společně s nosičem a pufrem, jako jsou například mannitol a fosforečnan sodný. Sloučenina se může rekonstituovat před podáváním ve stejných ampulích přidáním bakteriostatické vody.

Jak bylo už uvedeno, lze podávat sloučeniny podle vynálezu v kombinaci s jedním nebo více terapeutickými látkami, včetně chemoterapeutik. Tabulka I ukazuje známé průměrné dávky pro vybraná chemoterapeutika. Přesné dávky těchto účinných látek závisejí na dalších faktorech, jak bylo již shora uvedeno.

- 82 -	···· · ·· fefefe • fefe ♦ * · • · · fefefefe fe fefefefe • fefe · · • fe fefefe ·· · fefe
TABULKA 1
CHEMOTERAPEUTICKÁ LÁTKA	STŘEDNÍ DÁVKA
Asparagináza	1 0 000 jednotek
Bleomycin sulfát	15 jednotek
Karboplatin	50-450 mg
Karmustin	100 mg
Cisplatin	1 0-50 mg
Cladribin	10 mg
Cyklofosfamid (lyofilizovaný)	100 mg-2 g
Cyklofosfamid (nelyofilizovaný)	100 mg-2 g
Cytarabin (lyofilizovaný prášek)	100 mg-2 g
Dakarbazin	100 mg-200 mg
Daktinomycin	0,5 mg
Daunorubicin	20 mg
D ieth y lsti 1 best rol	250 mg
Doxorubicin	10-150 mg
Etidronat	300 mg
Etoposid	100 mg
Floxuridin	500 mg
Fludarabin fosfát	50 mg
Fluoruracil	500 mg-5 g
Goserelin	3,6 mg
Granisetron hydrochlorid	1 mg
Idarubicin	5-10 mg
Ifosfamid	1-3 g
Leukovorin (Ca súl)	50-350 mg
Leuprolid	3,75-7,5 mg
Mechlorethamin	1 0 mg
Med roxy progesteron	1 g
Melphalan	50 g
Metotrexat	20 mg-1 g

fl · · flflflfl · · ·· flfl flflfl flflflfl • · flflflfl · ·· ·

CHEMOTERAPEUTICKÁ LÁTKA	STŘEDNÍ DÁVKA
Mitomycin	5-40 mg
Mitoxantron	20-30 mg
Ondansetron hydrochlorid	40 mg
Paclitaxel	30 mg
Pamidronát dvojsodný	30-*90 mg
Pegaspargáza	750 jednotek
Plikamycin	2 500 pg
Streptozocin	1 g
Thiotepa	1 5 mg
Teniposid	50 mg
Vinblastin	1 0 mg
Vincristin	1 -5 mg
Aldesleukin	22 milionů jednotek
Epoetin alfa	2 000 -10 000 jednotek
Filgrastim	300-480 pg
Imunoglobulin	500 mg-10 g
Interferon alfa-2a	3-36 milionů jednotek
Interferon alfa-2b	3-50 milionů jednotek
Levamisol	50 mg
Oktreotid	1 000-5 000 pg
Sargramostim	250-500 pg

Léčebný režim

Při způsobech podle vynálezu lze použít libovolného režimu podávání léku, který může být zopakován, pokud se tím dosáhne účinného léčení. Mezi tyto možné režimy patří i předběžné podávání a/nebo souběžné podávání s dalšími léky.

· Φ Φ Φ Φ Φ ·· • φ φ φ φ * φ • φφφφ · · · φ •Φ φ φφ φφφφφφ φφφ φ · φφ φφφ ·φ ♦·

Pro pacienty s rakovinou prostaty, kteří nemají pokročilou nebo metastázující formu, je vhodné podávání sloučenin podle vynálezu (i) před chirurgickou nebo radiační terapií pro snížení rizika metastáz; (ii) v průběhu operace nebo souběžně s radiační terapií; a/nebo (iii) po chirurgické nebo radiační terapii pro snížení rizika recidivy a pro inhibici růstu residuálních nádorových buněk.

Pro pacienty s pokročilou nebo metastázující formou rakoviny prostaty, je vhodné podávat sloučeniny podle vynálezu jako kontinuální doplněk nebo jako náhrada hormonální ablace za účelem zpomalení růstu nádorových buněk jak u neléčeného primárního nádoru, tak i existujících metastatických lézí.

Způsob podle vynálezu přichází zejména v úvahu pokud nemohou být rozseté buňky odstraněny chirurgicky. Mohou se také uplatnit při pooperačním doléčování, aby se zmenšila možnost opětného vzniku nádoru z roztroušených buněk.

Kombinace s jiným léčením (i) Chirurgie a radiační léčebné metody

Chirurgie a ozařování se obecně používá u pacientů s lokalizovanou rakovinou prostaty ve věku pod 70 let a očekává se, že budou žít dalších alespoň 10 let. Zhruba 70% nově zjištěných rakovin prostaty padá do této kategorie pacientů. Asi 90% těchto pacientů (65% všech pacientů) se operuje a asi 10% pacientů (7% všech pacientů) se léčí ozařováním.

Histopatologické testování chirurgicky odebraných vzorků ukazuje, že asi 63% pacientů, kteří podstoupili operaci

- 85 ···· ·· ···· ·· ·· • ♦ · ♦ · · · • · ··· · ·· · ·· · · · ♦♦···· • · · · · ·· ·♦· ·· ·· (40% všech pacientů) má místně rozšířené nádory nebo místní (v mízních uzlinách lokalizované) metastázy, které nebyly při původní diagnóze zjištěny. Tito pacienti jsou silně ohroženi recidivou. Nyní je situace taková, že asi u 40% těchto pacientů se do pěti let po operaci rakovina opět vyvine. Výsledky po ozařování jsou dokonce ještě méně povzbudivé. Asi u 80% pacientů, u kterých bylo použito ozařování jako hlavní terapeutická metoda, nemoc dále přetrvává nebo se opět do pěti let vyvine v původní formě nebo ve formě metastáz.

V současné době se u pacientů s rakovinou prostaty, kteří podstoupí operaci a ozařování většinou nepoužívá žádné okamžité následné terapie. Spíše se u nich sleduje v krátkých intervalech, zda nedochází ke zvýšení hladiny PSA (Prostatic Specific Antigen), což je základní indikační veličina, která udává, zda došlo k recidivě nemoci nebo k rozvoji metastáz.

Shora uvedené statistické údaje jasně dokládají příležitost k použití sloučenin podle vynálezu v kombinaci s chirurgickou a/nebo radiační terapií.

(ii) Hormonální terapie

Hormonální ablace je nejúčinnější paliativní metoda pro 10% pacientů s metastatickou formou rakoviny prostaty. Hormonální ablace podáváním léků a/nebo orchiktomií má za cíl blokovat hormony, které podporují růst a metastázy rakoviny prostaty. U téměř všech pacientů se v průběhu času stávají nádory i metastázy necitlivé vůči hormonální terapii. Asi 50% pacientů s metastatickou formou umírá do tří lez po stanovení diagnózy a 75% pacientů s metastatickou formou rakoviny umírá v průběhu pěti let po diagnóze. Aby se předešlo tomuto

99 » 9 9 9

- 86 • · · · • · ··· · • 9 9 9 99

9 ·· nepříznivému stavu a počtu metastáz, lze používat průběžné doplňkové léčení sloučeninami podle vynálezu.

(iii) Chemoterapie

Přestože chemoterapie je u některých forem rakoviny úspěšná, má jen malou terapeutickou hodnotu při léčení rakoviny prostaty, kde je obecně ponechána jako poslední možnost. V souladu s tím je možno považovat terapii rakoviny prostaty kombinací chemoterapie s metodami podle vynálezu za mimořádnou. Nicméně, pokud se tyto dvě metody kombinují, mělo by být léčení rakoviny prostaty účinnější, než chemoterapie samotná.

(iv) Imunoterapie

Sloučeniny podle vynálezu se dále mohou používat při léčení rakoviny prostaty v kombinaci s monoklonálními protilátkami. Takovéto kombinované léčení se zejména hodí pro pacienty s postižením pánevních lymfatických uzlin, z nichž přežívá po 5 letech jen 34%. Příkladem takovéto monoklonální protilátky je antiprostatická protilátka, specifická pro buněčnou membránu.

Vynález lze také využít pro imunoterapii, založenou na polyklonálních nebo monoklonálních činidlech, odvozených od protilátek. Činidla, odvozená od monoklonálních protilátek jsou výhodnější. Tato činidla jsou v oboru dobře známá a patří mezi ně monoklonální protilátky značení radionuklidy, jako například monoklonální protilátky s navázaným stronciem 89.

• 4 » W ř 4 4 * f 4 4 4

444 444

- 87 4

4

4 použít podle » · ·

4 4···

4« 4

4 4

999 44 ·*· (v) Kryoterapie

Způsoby léčení podle vynálezu se také mohou k léčení rakoviny prostaty společně s kryoterapií.

Experimentální studie

Následující experimentální studie sloučenin vynálezu a strukturálně příbuzných sloučenin zřetelně dokládá, že sloučeniny podle vynálezu jsou netoxické a jsou účinné inhibitory aktivity NAALADázy, jsou účinné jako léky glutamátových abnormalit a pro léčení nemocí prostaty.

Toxicita inhibitorů NAALADázy in vivo

Pro stanovení toxikologických vlastností inhibice NAALADázy in vivo byla podána injekčně skupině myší 2(fosfonomethyl)pentandiová kyselina, která je strukturně podobným inhibitorem NAALADázy s vysokou účinností, v dávkách 1,5, 10, 30, 100, 300 a 500 mg/kg tělesné hmotnosti. Myši byly následujících 5 dní pozorovány. Poměr přeživších jedincí při každé dávce je uveden v následující tabulce II. Výsledky ukazují, že inhibitor NAALADázy je vůči myším netoxický a naznačují, že sloučeniny podle vynálezu by mohly být podobně netoxické vůči lidem při podávání terapeuticky účinných dávek.

• ftftft

- 88 ft* ♦ ··· ft · • · · · ft·· • ft ·· • · · · « · · · • ftft ft· · ft · • ft ··

TABULKA II

TOXIKOLOGICKÉ ÚČINKY INHIBITORU NAALADÁZY

Dávka mg/kg: 1 5 10 30 100 300 500 % přežití po 5 dnech: 100 100 100 100 100 100 66,7

In vitro test aktivity NAALADázy

In vitro inhibice aktivity NAALADázy byla testována u následujících sloučenin. Výsledky jsou uvedeny v následujících tabulkách lll(a), lll(b) a lll(c).

TABULKA lll(a)

AKTIVITA INHIBITORU NAALADÁZY IN VITRO

Sloučenina

Kí (nmol/l)

2-(fosfonomethyI)pentandiová kyselina 2-(fosfonomethyl)jantarová kyselina 2-( (2-karboxyethyl) hyd roxyfosf iny ljmethyljpentandiová) kyselina

0,275 ± 0,08 700,00 ± 67,3

1,89 ±0,19

2-(fosfonomethyl)pentandiová kyselina projevuje silnou inhibiční vliv na aktivitu NAALADázy, charakterizovaný hodnotami K, = 0,27 nmol/l (Tabulka lll(a)). Tato aktivita uvedené sloučeniny je >1000 • * · • 9 · ·· · 9 99

99 b · · · · · ·

999 999

9

99

Jelikož 2• 9 9

9

9 9

9 9

999 inhibitory, je strukturně podobná z výsledků usoudit, že mohly být potenciálními

- 89 krát účinnější než dříve popsané (fosfonomethyl)pentandiová kyselina sloučeninám podle vynálezu, lze sloučeniny podle vynálezu by také inhibitory aktivity NAALADázy. Srovnávací test 2-(fosfonomethyl)sukcinové kyseliny ukazuje, že glutamátový analog, připojený k fosfonové kyselině, vnáší do sloučeniny výraznou NAALADázově inhibiční aktivitu. Výsledky také ukazují, že kyselina 2-[(2-karboxyethyl)hydroxyfosfino]methyl]pentandiová, která má v postranním řetězci karboxylové kyseliny zbytek podobný aspartátovému zbytku, který se nachází u NAAG, vykazuje nižší NAALADázově inhibiční aktivitu než kyselina 2-(fosfonomethyl)pentandiová.

Tabulka III (b),

Další sloučeniny demostrují inhibiční účinnost vůči NAALADáze jsou uvedeny níže v tabulce lll(b) Výsledky, uvedené v tabulce lll(b) ukazují význačné K, aktivity řady příbuzných sloučenin. Tyto sloučeniny mají NAALADázově inhibiční aktivitu pokud Ri obsahuje alifatickou skupinu, alifatickou substituovanou aromatickou skupinu a aromatickou substituovanou.

• fc

- 90 fc fc fc fcfcfc

Tabulka III (b) ln vitro aktivita inhibitorů NAALADázy ·«·· • · • fc

• fc fcfc·· • · fc fcfcfc •

fc · fc · fcfc fcfcfc • · « fcfc • fcfc • fcfc • fc fcfc

Ki(nM)

Sloučenina

231

532

O

II

-P

OH

COzH

COzH

1100

148

148

190

Další výsledky, uvedené v následující tabulce lll(c), ukazují významné K, aktivity sloučenin podle vynálezu. Tyto sloučeniny vykazují schopnost inhibice NAALADázy v případě, kdy Ri znamená alifatický zbytek, který je substituovaný (benzyl) zbytkem, který je dále substituovaný dalším substituentem.

• Φ ·· • · · · φ φ φ φ φφφ φφφ • · ·· φφ

- 91 Tabulka lll(c) in vitro aktivita inhibitorů NAALADázy »··· • · φφ «

·· · • · • φ φ • · ΟΦΦ • ·Φ·Φ • · • φφφ • φ φ φ • ···

Ki Hodnota (nM)

Sloučenina

Ki - 6SnM

Ki - 70nM

Ki - 90nM

Ki - 175nM

F

F

Ki - 38nM

- 92 • ftft ♦ · · · • · · · ft ftft · • ftft ftftft • · • ft ftft

Protokol testu aktivity NAALADázy in vitro

Množství [³H]GIu uvolněné z [³H]NAAG v 50 mmol/l Tris-CI pufru bylo měřeno 15 minut při 37° C s použitím 30-50 pg synaptosomálního proteinu. Substrát a produkt byly znovu děleny kapalnou chromatografií na anexu. Opakované testy byly prováděny tak, aby nebylo navázáno více než 20% NAAG, což je reprezentativní lineární oblast aktivity. V paralelních testovacích trubicích byl umístěn quisqualát (100 pmol/l), čímž byla potvrzena specifičnost měření.

Testy vlivu inhibitorů NAALADázy na rakovinu in vitro

Na obr. 1 a 2 jsou uvedeny výsledky testování vlivu inhibitorů NAALADázy na kulturu buněčné linie rakovinných buněk. Při tomto testu se na buňky LNCaP (linie buněk rakoviny prostaty) působí quisqualovou kyselinou (v koncentracích v rozmezí 10 nmol/l až 1 pmol/l) a kyselinou 2-(fosfonomethyl)pentandiovou (v koncentracích mezi 100 pmol/l až 10 nmol/l). V následující tabulce IV jsou uvedeny výsledky měření inkorporovaného 3H-thymidinu pro každou koncentraci kyseliny quisqualové a kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové.

Na obr. 1 a 2 jsou tyto výsledky znázorněny graficky a je konkrétně ukázáno snížení proliferace a zvýšení thymidinu při testech buněk, na které se působilo inhibitory NAALADázy.

• · · ·

- 93 Inkorporace 3H-thymidinu (dpm/jamka) • · ·· · · ··

TABULKA IV

Dávka

Kontrola 1 0 pmol/l 100 pmol/l 1 nmol/l 10 nmol/l 1 00 nmol/l 1 pmol/l

Kyselina quisqualová	Kyselina 2-(fosfono- methyl)pentandiová
4813 ±572	4299 ± 887
--	3078 ± 1006
--	2062 ± 595
3668 ± 866	1001 ± 52
2137 ± 764	664 ± 366
1543 ±312	--
1295 ± 181	--

Výsledky ukazují, že proliferace buněk LNCaP (jak byla naměřena pomocí inkorporace 3H-thymidinu) průkazně klesá v závislosti na růstu koncentrace inhibitorů NAALADázy. Z těchto výsledků plyne, že sloučeniny podle vynálezu by mohly být použitelné pro léčení rakoviny, zejména rakoviny prostaty.

Protokol testu in vitro na rakovinu

Do kultivačního prostředí RPMI 1640 s obsahem 10 % fetálního telecího séra (FCS) se umístí buňky ve 24 jamkových destičkách a ponechají se množit 24 hodin před přidáním kyseliny quisqualové (10'^{9 *} až 10'⁶) nebo kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové (10'¹¹ až 10‘⁹) po dobu 7 dnů. Sedmý den byly buňky po dobu 4 hodin syceny 3H-thymidinem, rozmělněny a byla změřena jejich radioaktivita. Uvedené hodnoty představují průměr +/- střední relativní odchylka ze 6 oddělených jamek pro ·· ···· ·· ·· • · · · · · · • ···· · ·· · ·· · ·· ··· ··· • · · · · ·· · ·· · · · · každé měření. Veškeré experimenty byly alespoň dvakrát opakovány.

Pro stanovení nespecifických cytostatických účinků kyseliny quisqualové a 2-(fosfonomethyl)pentandiové bylo použito simultánního testování na neNAALADázové linii buněk rakoviny prostaty, DU145 (Carter et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, (93) 749-753, 1996). Vzhledem k tomu, že působení kyselinou quisqualovou a 2-(fosfonomethyl)pentandiovou nemělo na růst těchto buněk žádný signifikantní účinek, znamená to, že za cytostatický účinek na linie buněk rakoviny prostaty je odpovědný výlučně inhibice aktivity NAALADázy těchto testovaných činidel.

Použité buněčné linie a tkáňové kultury

LNCaP buňky byly získány od Dr. William Nelsona z Johns Hopkins School of Medicine of Baltimore, MD. Buňky DU145 byly získány z American Type Culture Collection (Rockville, MD). Buňky byly kultivovány na substrátu RPMI 1640, doplněném 5% tepelně inaktivovaném fetálním telecím séru, 2 mmol/l glutaminu, 100 jednotek/ml penicilinu a 100 pg/ml streptomycinu (Paragon) ve zvlhčovaném inkubátoru při 37°C v atmosféře o složení 5% CO₂ a 95% vzduchu.

Měření inkorporace Γ3Η1 thymidinu

Buňky byly rozmíchány v koncentraci 1x10³ buněk/ml v živném roztoku RPMI 1640 a nasazeny do 24 jamkových destiček v množství 500 pl na jednu jamku. Po 24 hodinách inkubace byla přidána v různých koncentracích kyselina quisqualová (Sigma) nebo testovaný potenciální inhibitor NAALADázy - kyselina 2-(fosfonomethyl)pentandiová

- 95 • 4 4444 44 44

4 4 4 4 4

444 4 44 4

44 444 444

4 4 4

444 44 44 (syntetizovaná způsobem podle publikace Jackson et al., J. Med. Chem. 39-(2) 619-622) a destičky byly opět vráceny do inkubátoru. 3., 5. a 7. den byl přidán čerstvý kultivační substrát a čerstvé přísady. 8. den od nasazení, byly jamky podrobeny opakovanému působení 1 pCi ³H-thymidinem (New England Nuclear) po dobu 4 hodin. Kultivační roztok se pak odstraní a jamky se 2 krát promyjí solankou s fosfátovým pufrem (pH = 7,4). Obsah každé jamky se pak převede do 250 pl 0,2 N NaOH a umístí do scintilačních nádobek. Přidá se směs 5 ml UltimaGold (Packard) a změří se radioaktivita pomocí počítače radioaktivních částic Beckman LS 6001.

Čistota a/nebo identita všech připravovaných sloučenin se stanovuje chromatografií na tenké vrstvě, vysokotlakovou chromatografií (HPLC), hmotovou spektrografií a elementární analýzou. Spektra protonové nukleární magnetické rezonance (NMR spektra) jsou získána pomocí spektrometru Bruker. Chemické posuny jsou vyjadřovány v ppm relativně vůči tetramethylsilanu jako vnitřnímu standardu. Analytická chromatografie na tenké vrstvě (TLC) se provádí na deskách GHLF, předem upravených nanesením silikagelu (Analtech, Newark, DE). Vyvolání skvrn na deskách se provádí v ultrafialovém světle pomocí kyseliny fosfomolybdenové v ethanolu a/nebo jodplatinátu. Mžiková chromatografie se provádí na „Kieselgelu 60“, 230-400 mesh (E. Merck, Darmstadt,

Německo). Rozpouštědla a činidla mají čistotu, odpovídající úrovni HPLC. Reakce se provádějí při teplotě okolí a pod dusíkovou atmosférou, pokud není uvedeno jinak. Roztoky se odpařují za sníženého tlaku na rotačním odpařováku Buchi.

In vivo testy s linií LNCaP vyhodnocované xenografií nádoru

- 96 ft ft • ftftft • ft • ftftft • ftft

Na obr. 3 a 4 jsou uvedeny výsledky testu, při kterém byly samcům holých myší podkožně do pravého boku vstříknuty buňky LNCaP rakoviny lidské prostaty. Poté byla myším denně podávána jako inhibitor NAALADázy kyselina 2-(fosfonomethyl)pentandiová intratumorálními injekcemi (0,25 pg/den) počínaje okamžikem, kdy nádor dosáhl objemu asi 50-70 mm³. Další skupina byla podrobena působení silikonového polymeru s obsahem kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové, která se uvolňovala rychlostí asi 0,25 pg/den přímo do nádoru. Polymer s obsahem kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové byl dvakrát týdně měněn. Po dobu 42 dní počínaje prvním dnem ošetřování byl sledován objem nádoru.

EXPERIMENTÁLNÍ POSTUPY

Buněčné linie

LNCaP je linie buněk rakoviny lidské prostaty, která byla získána v roce 1973 z pleurálního výpotku pacienta, který byl 3 měsíce před odebráním rakovinných buněk za účelem získání buněčné linie léčen S-FU, doxorubicinem, metotrexatem a CTX. Tato linie je pozitivní na androgenový receptor a byla již použita pro screening léků proti rakovině, které mají povahu antagonistů hormonů. Linie buněk LNCaP byla kultivována v RPMI s 1,5 g NaHCO₃/l, 10% fetálního hovězího sera (FBS) a 2 mmol/l glutaminu a ponechána při 37°C ve zvlhčovaném inkubátoru s atmosférou 5% CO₂/O₂. Do živného prostředí nebyla přidána žádná antibiotika.

Model nádoru na zvířatech ·· · ·

1

11 ·

- 97 • · · · •11 9 9 1

1 ··

Samci myší NCr (nu/nu) staří 4-5 týdnů byli zakoupeni od firmy Taconic (Germantown, NY). Zvířata byla umístěna po čtyřech do souboru klecí, větraných přes sterilní filtrační papír. Čtyři pracovní dny před pokusem byly myši ponechány v karanténě. Teplota byla udržována na 22 ± 2,8 °C a relativní vlhkosti 35-70% a bylo použito dvanáctihodinového cyklu světlo/tma. Myši byly krmeny sterilním, autoklávovaným, značkovým krmivém Purina v množství ad libitum. Pitná voda byla okyselena a sterilizována v autoklávu a zdroj vody byl recirkulován, deionizován, podroben působení UV-záření a filtrován přes filtr o velikosti pórů 5-pm.

Po ukončení karantény zvířat byly krysám podány podkožní injekcí do pravého ramene 1 x 10⁷ buňky LNCaP v Matrigelu™ (objem jedné injekce 0,1 ml). Rozměry nádoru a tělesná hmotnost byly měřeny dvakrát týdně pomocí posuvného měřítka Vernier ve třech rovinách a objem nádoru (V) byl vypočítán podle vzorce V = n(x.y.z)/6, kde x, y a z jsou rozměry nádoru minus tloušťka kůže. Po ukončení experimentu byly myši usmrceny inhalováním CO₂ a následnou cervikální dislokací.

Farmaceutické prostředky

Kyselina 2-(fosfonomethyl)pentandiová byla připravena ve vodném roztoku o koncentraci 2,5 mg/ml. Polymer obsahující kyselinu 2-(fosfonomethyl)pentandiovou byl připraven rozetřením 140 mg NaCl na jemný prášek a smísením tohoto prášku s 5mg kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové a 350 mg silikonového gelu. Směs byla rozprášena do podoby tenkého filmu a ponechána 24 hodin sušit. Materiál byl pro účely podkožní aplikace nasekán na kousky o hmotnosti 1-1,5 mg.

- 98 Testy léčivých účinků

Když dosáhl objem nádorů předem zvolené hodnoty (průměrně 50-70 mm³), byly myši náhodně rozděleny do skupin po šesti až osmi jedincích. Veškeré testované látky byly podávány denně minimálně po dobu 4 týdnů. Kyselina 2-(fosfonomethyl)pentandiová byla podávána intratumorálně denně v objemu 0,05 ml s obsahem 0,025 pg 2-(fosfonomethyl)pentandiové kyseliny v jedné injekční dávce.

Polymer s obsahem kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové (10 pg účinné látky/mg polymeru) byl implantován podkožně. Myši byly podrobeni anestézii metafanem a malé naříznutí (< 2 mm) bylo provedeno poblíž nádoru. Po implantaci byl řez uzavřen svorkou na rány. Polymer byl dvakrát týdně vyměněn za čerstvý.

Nádor byl měřen dvakrát týdně minimálně po dobu 8 týdnů od prvního ošetření. Pro každý měřený čas byl vypočten objem nádoru. Srovnání jednotlivých skupin v jednotlivých časech bylo prováděno nepárovým dvojitým t-testem a výsledky byly analyzovány pomocí analýzy variance (ANOVA).

Systemická toxicita byla stanovena ze snížení tělesné hmotnosti po podávání. Myši byly usmrceny na konci dalšího následujícího intervalu nebo dříve, pokud objem jejich nádoru dosáhl 1600 mm³ nebo nádory ulcerovaly.

Statistická analýza

Statistická analýza, jak je shora uvedeno, byla prováděna pomocí JMP (SAS Institute lne., Cary, NC).

• · · ·

- 99 • · · · · · ·· · · • · · « · · · · · · • · ····· · · · · • · ·· · ·· ······ ···»·· · · • · · · · · · · · · · · ··

In vivo testy na krysách s buňkami Dunning 83327

Na obr. 5 a 6 jsou znázorněny výsledky testů na syngenních samcích krys, kterým byly injekčně podány podkožně do obou boků buňky rakoviny prostaty Dunning R3327-G. Při prvním testu byla zjišťována schopnost kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové zpomalovat růst nádoru při denním podávání léku (1, 3 10 a 30 mg/kg) formou podkožních injekcí. Injekční podávání kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové a měření nádoru bylo prováděno 12 týdnů. Při druhém testu byla zjišťována schopnost kyseliny 2-[[fenylmethyl)hydroxyfosfinyljmethyljpentandiové kyselina při podávání léku intratumorálně (0,1, 1, 10 a 100 pg) poté, co objem nádoru dosáhl výchozího objemu 80-290 mm³. Objemy nádoru byly poté monitorovány 42 dní počítáno od začátku podávání léku.

EXPERIMENTÁLNÍ POSTUPY

Buněčné linie

R3327-G je buněčná linie získaná z androgensenzitivního papilárního adenokarcinom, odvozeného z spontánně vytvořeného nádoru prostaty. Buňky R3327-G byly namnoženy v živném prostředí RPMI, 10% fetálního hovězího séra (FBS), 2 mmol/l L-glutaminu a 10'⁸ mol/l dexametazonu. Kultury byly ponechány při 37°C ve zvlhčovaném inkubátoru s atmosférou 5% CO2/O2. Antibiotika nebyla do kultivačního prostředí přidávána.

Model nádoru na zvířatech

Π Π ···· · ·1 ···· ·· ··

I U U · · · ··· ·♦♦· • · ····· · · · · • · ·· · · · ······ ······ · · ·· ··· ·· ··· ·· ··

Krysí samci staří 8-10 týdnů, byli zakoupeni od Harlan Sprague Dawley (Indianapolis, V). Zvířata byla umístěna po čtyřech do souboru klecí, větraných přes sterilní filtrační papír. Čtyři pracovní dny před pokusem byly myši ponechány v karanténě. Teplota byla udržována na 22 ± 2,8 °C a relativní vlhkosti 35-70% a bylo použito dvanáctihodinového cyklu světlo/tma. Krysy byly krmeny sterilním, autoklávovaným, schváleným krmivém Purina v množství ad libitum.

Po ukončení karantény zvířat byly krysám podkožní injekcí podány do obou boků 1 χ 10⁷ buňky R3327-G (objem jedné injekce 0,1 ml). Rozměry nádoru a tělesná hmotnost byly měřeny dvakrát týdně pomocí posuvného měřítka Vernier ve třech rovinách a objem nádoru (V) byl vypočítán podle vzorce V = n(x.y.z)/6, kde x, y a z jsou rozměry nádoru minus tloušťka kůže. Nádory se začaly objevovat 4-5 týdnů po injekci nádorových buněk. Po ukončení experimentu byly krysy usmrceny inhalováním CO₂.

Farmaceutické prostředky

Denně byl bezprostředně před injekcí připravován čerstvý injekční preparát kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové ve vodném fyziologickém roztoku desetinásobným zředěním zásobního roztoku kyseliny 2-(fosfonomethyl)pentandiové ve vodě o koncentraci 2,5 mg/ml, který byl připravován jednou týdně čerstvý.

Testy léčivých účinků

Kyselina 2-(fosfonomethyl)pentandiová byla podávána podkožně injekcemi od 14. dne po implantaci buněk denně po ···· • · ··»·

- 101 ···

44 • · · • · 4

444 444

4

44 dobu 12 týdnů. Při testování kyseliny 2-[[fenylmethyl)hydroxyfosfinyljmethyljpentandiové bylo léčivo nebylo podáváno dokud nádor nedosáhl předem stanovené velikosti (průměrného objemu 90 až 29 mm³). Po této době byly krysy rozděleny do skupin po pěti jedincích. Podávání bylo pak u všech testů, při nichž se podávala kyselina 2-[[(fenylmethyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiová, prováděno denně intratumorálními injekcemi po dobu 6 týdnů.

Nádor byl měřen dvakrát týdně minimálně po dobu 8 týdnů od prvního ošetření. Pro každý měřený čas byl vypočten objem nádoru. Srovnání jednotlivých skupin v jednotlivých časech bylo prováděno nepárovým dvojitým t-testem a výsledky byly analyzovány pomocí analýzy variance (ANOVA). Při testování kyseliny 2-[[(fe nyl methyl) hyd roxyfosf i nyl] methyl] penta n dika rboxylové byly jednotlivé objemy (V) nádorů vyjadřovány jako podíl objemu (VO) nádoru v prvním dnu léčení.

Statistická analýza

Statistická analýza, jak je shora uvedeno, byla prováděna pomocí JMP (SAS Institute lne., Cary, NC)

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady jsou ukázkou výhodných provedení způsobů použití a přípravy sloučenin podle vynálezu a neomezují rozsah vynálezu. Pokud není uvedeno jinak, procenta jsou počítána tak, že 100% je výsledná formulace.

Příklad 1

Příprava 2-í(methvlhvdroxvfosfinvl)methyl]pentandiové kyseliny

- 102 fe · · · • fefe fe fefe • fefefefe • · • · fefe fefefe • fe fefe • fefe « • fefe · • fefe fefefe • fe • fe fefe

Schéma IV R = CH₃,Ri = CH₂Ph

Methyl-O-benzylfosfinová kyselina

Dichlormethylfosfit (10,0 g, 77 mmol) v 80 ml suchého diethyléteru byl v atmosféře dusíku ochlazen na -20°C. Po kapkách byl pak k tomuto roztoku po kapkách přidán v průběhu 1 hodiny při teplotě udržované v rozmezí 0°C až 10°C roztok benzylalkoholu (23 g, 213 mmol) a triethylaminu (10,2 g, 100 mmol) v 40 ml diethyléteru. Po ukončení přidávání byla celá směs zahřáta na pokojovou teplotu a přes noc míchána. Získaná směs byla zfiltrována a filtrační koláč byl promyt 200 ml diethyléteru. Organické podíly byly spojeny a zahuštěny za sníženého tlaku, což poskytlo 25 g čisté a bezbarvé kapaliny. Tato kapalina byla čištěna mžikovou chromatografií a eluována činidlem o složení 1:1 hexan/ethylacetát s gradientem ethylacetátu. Vhodné frakce byly spojeny a odpařeny, což poskytlo kyselinu methyl Obenzylfosfinovou (1, R = CH3, Ri = CH₂Ph, 6,5 g, 50%) jako čirý a bezbarvý olej. Rf 0,1 (1:1, hexan/EtOAc).

¹H NMR(d6-DMSO): 7,4 ppm (m,5H), 7,1 ppm (d,1H), 5,0 ppm (dd,2H), 1,5 ppm (d,3H)

2₁4-Di(benzvloxvkarbonvl)butvl(methvl)-O-benzylfosfinová kyselina

Kyselina methyl-O-benzylfosfinová (3,53 g, 20,7 mmol) v 200 ml dichlormethanu byla pod atmosférou dusíku ochlazena na -5°C. Poté byl jehlou přidán triethylamin (3,2 g, 32 mmol) a následně trimethylsilylchlorid (2,9 g, 27 mmol). Reakční směs byla míchána a ohřátá na pokojovou teplotu v průběhu 1 hodiny. Poté byl přidán dibenzylester kyseliny 2-methylenpentandiové (2, 6,0 g, 18,5 mmol) v 10 ml dichlormethanu. Reakční směs pak byla míchána na při pokojové teplotě přes noc. Reakční směs byla ochlazena na 0°C a bylo k ní přidáno trimethylaluminum (9 ml, 18 ·· · · ♦ * · · · · • ·

- 103 • « ·· ♦ · · · · · ···· · ·· · • ·· · · · · · · • · · · · • · ··* ·· · · mmol, 2,0 mol/l v dichlormethanu). Obsah baňky byl míchán 72 hodin a vzniklý čirý světle žlutý roztok byl zahřát na 5°C a zředěna pomalým přidáním 5% kyseliny chlorovodíkové. Reakční směs byla ohřátá na pokojovou teplotu a vzniklá organická vrstva byla oddělena. Organická vrstva byla promyta 5% kyselinou chlorovodíkovou a vodou. Organické podíly byly sušeny (MgSO₄) a odpařeny za sníženého tlaku, což poskytlo 8 g čirého světle žlutého oleje. Olejovitý produkt byl čištěn na silikagelu a gradientově eluován činidlem o výchozím složení 1:1 hexany/ethylacetát s gradientem do 100% ethylacetátu. Vhodné frakce byly spojeny a odpařeny, což poskytlo 2,4d i(benzy loxy ka rbonyl)butyl( met hyl)-O-benzylfosf i novou kyselinu (3, R = CH₃,R₁ = CH₂Ph 0,8 g, 8%) jako čirý a bezbarvý olej . Rf 0,5 (ethylacetát).

¹H NMR(CDCI₃):7,4 ppm (m,15H), 5,1 ppm (m,6H), 3,0 ppm (m, 1H), 2,4 ppm (m,3H),2,1 ppm (m,3H), 1,5 ppm (dd,3H)

Elementární analýza

Vypočteno pro: C₂₈H₃₁O₆P. 0,5H₂O: C 68.01, H 6,32

Nalezeno: C 66,85,H 6,35

2-f (Met hyihyd roxyf osf i nyl) met hyll penta ndiová kyselina

2,4-di(benzyloxykarbonyl)butyl(methyl)-O-benzylfosfinová kyselina (0,8 g, 1,6 mmol) v 20 ml vody s obsahem 100 mg 10% Pd/C byla hydrogenována při tlaku 276 kPa 4 hodiny. Směs byla filtrována na celitu a odpařena ve vysokém vakuu, což poskytlo kyselinu 2-[(methylhydroxyfosfinyl)methyl]pentandiovou (4, R = CH₃) 0,28 g, 78% jako čirý a bezbarvý viskózní olej.

¹H NMR (D₂O): 2,5 ppm (m,1H), 2,2 ppm (t,2H), 2,0 ppm (m,1H), 1,7 ppm (m,3H), 1,3 ppm (d,3H)

Elementární analýza:

Vypočteno: pro C₇Hi₃O6P 0,2H₂O: C 36,92 H 5,93

Nalezeno: C 37,06 H 6,31

- 104 ·· ··«· ft· ·· • · ft · · · · • ···· · ftft · •ft · ·· ··· ··· • · · · · • ····· ·· ··

Příklad 2

Příprava 2-[(butvlhvdroxvfosfinvl)methyllpentandiové kyseliny

Schéma IV R = n-butyl, Ri = H

Kyselina butylfosfinová

Diethylchlorfosfit (25g, 0,16mol) v 60 ml suchého éteru byl ochlazen na 0°C pod dusíkovou atmosférou. Poté byl po kapkách v průběhu 2 hodin přidán butylmagneziumchlorid (80 ml, 0,16 mol, éterový roztok o koncentraci 2,0 mol/l) přičemž byla udržována teplota směsi 0°C. Po ukončení přidávání byla viskózní bílá směs zahřívána 1 hodinu na 30°C. Suspense byla zfiltrována pod dusíkovou atmosférou a filtrát byl odpařen za sníženého tlaku. Čirá světle žlutá kapalina pak byla rozmíchána v 15 ml vody a dále míchána na při pokojové teplotě. Poté byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková (0,5 ml) a byla pozorována exotermní reakce. Reakční směs byla pak míchána dalších 15 minut a extrahována dvěma 75 ml podíly ethylacetátu. Organické podíly byly spojeny, sušeny (MgSO₄) a odpařeny, což poskytlo čirou a bezbarvou kapalinu. K této kapalině byl přidán NaOH (40 ml, 20 mol/l) a získaná směs byla míchána 1 hod. Reakční směs pak byla promyta diethyléterem a okyselena na pH 1,0. Požadovaná látka byla získána z okyseleného extraktu dvěma 100 ml podíly ethylacetátu. Organické podíly byly spojeny, sušeny (MgSO₄) a odpařeny za sníženého tlaku, což poskytlo kyselinu butylfosfinovou (1, R=n-butyl, Ri = H, 10g, 51%) jako čirou a bezbarvou kapalinu.

¹H NMR (d6-DMSO): 6,9 ppm(d, 1H), 1,6 ppm(m,2H), 1,4 ppm (m,4H), 0,9 ppm (t,3H) ·· ft ftft · • ftft · ftftft ftftft • · • ft ftft ft

- 105 • · ft · •ft ftftft· • ft ft · • ft

• ftft ftftft

Butvl[2,4-di(benzvloxvkarbonvl)butyl1fosfinová kyselina

Butylfosfinová kyselina (2,0g, 16mmol) v 80 ml suchého dichlormethanu byla pod dusíkovou atmosférou ochlazena na 0°C, byl přidán triethylamin (6,7 g, 66 mmol) a následně trimethylsilylchlorid (58 ml, 58 mmol, 1,0 mol/l v dichlormethanu). Reakční směs byla míchána na 0°C 10 minut a pak byl přidán dibenzyl-2-methylenpentandioát (2) (6,4 g, 20 mmol) v 20 ml dichlormethanu. Pak byla odstraněna chladící lázeň, reakční směs byla ohřátá na teplotu místnosti a míchána přes noc. Reakční směs pak byla ochlazena na 0°C a zředěna pomalým přidáním 5% kyseliny chlorovodíkové. Dichlormethanová vrstva pak byla oddělena a promyta 5% kyselinou chlorovodíkovou a solankou. Organická vrstva byla sušena (MgSO₄) a odpařena, což poskytlo čirou světlou nazlátlou kapalinu. Kapalina byla čištěna mžikovou chromatografií a eluována činidlem o složení 3:1 hexan/ethylacetát s obsahem 5% kyseliny octové. Vhodné frakce byly spojeny a odpařeny, což poskytlo kyselinu butyl[2,4-di(benzyloxykarbonyl)butyl]fosfinovou (3, R=n-butyl, Ri = H) (2,9 g, 40%) jako čirý a bezbarvý olej.

Rf 0,12 (3:1, Hex./EtOAc 5% AcOH).

¹H NMR (d6-DMSO): 7,3 ppm (m, 10), 5,0 ppm (s,4H), 2,7 ppm (m, 1H) 2,3 ppm (y, 2H), 1,8 ppm (m, 2H), 1,3 ppm (m, 4H), 0,8 ppm (t, 3H)

2-[(Butyl hyd roxyfosf i nyl) met hyllpentandiová kyselina

Kyselina butyl[2,4-di(benzyloxykarbonyl)butyl]fosfinová (2,9g, 6,5 mmol) v 30 ml vody s obsahem 0,32 g 10% Pd/C byla hydrogenována v hydrogenačním autoklávu Parr při tlaku 276 kPa 4,5 hodiny. Reakční směs byla filtrována přes Celit odpařena ve vysokém vakuu , což poskytlo kyselinu 2-[(butylhydroxyfosfinyl)methyl]pentandiovou (4, R = n-butyl) (0,75 g, 43%) jako čirý a bezbarvý viskózní olej.

4»···

- 106 • fcfc ··*· fcfc fc* • fc fcfcfc · · · · • · * · ··· · · · ·

4 4 ♦ · fcF ··· ’·· • •fcfc·· ·· fcfc fcfcfc fcfc ··· fc· «· ¹H NMR (D₂O): 2,4 ppm (m, 1H), 2,1 ppm (t, 2H), 1,9 ppm (m, 1H), 1,6 ppm (m, 3H), 1,4 ppm (m, 2H), 1,1 ppm (m,4H), 0,6 ppm (t, 3H)

Elementární analýza:

Vypočteno C10H19O5P. 0,5 H₂O: C 43,64, H 7,32:

Nalezeno C 43,25, H 7,12

Příklad 3

Příprava 2-f(benzvlhvdroxyfosfinvl)methvl1pentandiové kyseliny

Schéma IV R=CH₂Ph, R^H

Kyselina benzylfosfinová kyselina

Diethylchlorfosfit (25 g, 0,16 mol) ve 100 ml suchého diethyléteru byl ochlazen na O°C pod dusíkovou atmosférou. Poté byl po kapkách přidán během dvou hodin roztok benzylmagneziumchloridu (80 ml, 0,16 mol, 2,0 mol/l roztok v Et₂O) přičemž byla udržována teplota pod 10°C. Vzniklý viskózní roztok, který byl dále míchán 1 hodinu při pokojové teplotě. Reakční směs byla filtrována pod dusíkovou atmosférou a filtrát byl odpařen za sníženého tlaku, což poskytlo a čirou a bezbarvou kapalinu. Získaná kapalina byla míchána a bylo k ní přidáno 15 ml vody a 0,5 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Byla pozorována exotermní reakce. V míchání se pokračovalo dalších 30 minut, načež byla směs extrahována ethylacetátem. Organické podíly byly spojeny, promyty solankou, sušeny (MgSO₄) a odpařeny. K získané čiré světlé nazlátlé kapalině byla přidán hydroxid sodný (50 ml, 2,0 mol/l NaOH). Směs byla hodinu míchána a promyta diethyléterem. Vodná vrstva byla okyselena na pH 1,0 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a extrahována ethylacetátem. Organické podíly byly spojeny, sušeny (MgSO₄) a odpařeny,což poskytlo benzylfosfinovou

- 107 ···· • · · · · · · · · ·· · · · · · · ··· • · · · · ·· · · · · · · · kyselinu (I, R = CH2Ph, Ri = H) (8 g, 32%) jako čirý světlý nazlátlý olej .

¹H NMR (d6-DMSO): 7,3 ppm (m, 5H), 6,9 ppm 1d, 1H), 3,1 ppm (d, 2H)

Benzvl[2₁4-di(benzvloxykarbonvl)butvl1fosfinová kyselina

Kyselina benzylfosfinová (2,3 g, 15 mmol) ve 150 ml suchého dichlormethanu byla ochlazena na 0°C pod dusíkovou atmosférou a byl k ní přidán triethylamin (6,5 g, 65 mmol) a následně trimethylsilylchlorid (5,8 g, 54 mmol), přičemž byla teplota reakční směsi udržována na 0°C. Po 30 minutách byl přidán dibenzyl-2-methylenpentandioát (2) v 20 ml dichlormethanu v průběhu 5 minut. Reakční směs byla ponechána ohřát na pokojovou teplotu a míchána přes noc. Čirý roztok byl ochlazen na 0°C a zředěn 5% kyselinou chlorovodíkovou a solankou, sušen (MgSO₄) a odpařeny , což poskytlo čirou žlutou kapalinu. Čištění mžikovou chromatografií a elucí činidlem o složení 1:1 hexan/ethylacetát s obsahem 10% kyseliny octové poskytlo 2,0 g (28%) benzyl[2,4-di(benzyloxykarbonyl)butyl]fosfinové kyseliny (3, R = CH₂Ph,Ri = H⁺) jako čirý světle žlutý olej. Rf 0,37 (1:1 Hex./EtOAc, 10%AcOH).

¹H NMR (d6-DMSO): 7,2 ppm(m,15H), 5,0 ppm(s,4H),3,0 (d,2H),2,8 ppm(m, 1 H),2,3 ppm(t,2H), 1,9 ppm(m,2H), 1,7 ppm(t, 1 H)

2-[( Benzyl hyd roxyfosphinyl)meth yll pentandiová kyselina

Kyselina Benzyl[2,4-d i (benzyl oxy karbony I) b u ty I ]f osf inová (0,5g, 1,0 mmol) v 20 ml vody s obsahem 120 mg 10% Pd/C byla hydrogenována na hydrogenačním autoklávu Parr při tlaku 276 kPa 6 hodin. Filtrace přes Celit a následné odpaření rozpouštědla ve vysokém vakuu poskytlo 0,17 g (57%) 2-[(benzyl- 108 *· ·· • · · · • · · · • · · · · · · • · ·· ·· hyd roxyf osf i n y I) m eth y I ] pe n ta n d i o vé kyseliny (4,R = CH₂Ph) jako bílá pevná látka.

¹H NMR (D₂O): 7,1 ppm (m,5H), 2,9 ppm (d,2H), 2,4ppm (m,1H),

2,1 ppm (t,2H), 1,8ppm (m,1H), 1,6ppm (m,3H)

Elementární analýza:

Vypočteno pro Ci3H-i₇O₆P: C, 52,00 H, 5,71:

Nalezeno: C, 51,48 H, 5,70

Příklad 4

Příprava 2-[(fenvlethvlhvdroxvfosfinyl)methvl1pentandiové kyseliny

Schéma IV R = CH₂CH₂Ph,R₁ = H

Fenylethylfosfinová kyselina

Diethylchlorfosfit (15,6 g,0,1 mol) ve 100 ml suchého diethyléteru byl pod dusíkovou atmosférou ochlazen na 5°C a poté byl přidán v průběhu 2 hodin fenylethylmagnesiumchlorid (100 ml, 0,1 mol, 1,0 mol/l v THF), přičemž byla teplota směsi držena na hodnotě mezi 0 a10°C. Vzniklá viskozní bílá směs byla míchána při pokojové teplotě přes noc. Reakční směs byla pak filtrována pod dusíkovou atmosférou a filtrát odpařen za sníženého tlaku, což poskytlo čirou a bezbarvou kapalinu. Kapalina byla míchána a bylo přidáno 15 ml vody a poté 0,5 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Byla pozorována exotermní reakce a v míchání se pokračovalo 15 minut. Poté byla směs extrahována ethylacetátem. Organické podíly byly spojeny, promyty solankou, sušeny (MgSO₄) a odpařeny. Ke zbylá čiré kapalině byl přidán hydroxid sodný (40 ml, 2,0 mol/l NaOH), směs byla míchána 1 hod a promyta jednou diethyléterem. Vodná vrstva byla okyselena na pH 1,0 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a extrahována ethylacetátem. Organické podíly ft · • ftftft

- 109 ftftft · · • · · • · ftftft • · * · • ft · byly spojeny, sušeny (MgSO₄) a odpařeny, fenylethylfosfinovou kyselinu.

(1 ,R = CH₂CH₂Ph, Ri = H)(9,8 g, 58%) jako čirý světle žlutý olej .

¹H NMR (d6-DMSO):7,2 ppm (m,5H), 6,9 ppm (d,1H), 2,8 ppm (m,2H), 1,9 ppm (m,2H)

2₁4-Di(benzvloxvkarbonvl)butvl(fenvlethyl)fosfinová kyselina

Kyselina fenylethylfosfinová (1,0 g, 5,9 mmol) v 50 ml suchého dichlormethanu byla ochlazena na -5°C pod dusíkovou atmosférou a byl k ní přidán triethylamin (2,3g, 23 mmol) a následně trimethyIsilylchlorid (2,2 g, 21 mmol) přičemž byla reakční teplota udržována na 0°C. Po 10 minutách byl přidán ke směsi v průběhu 10 minut dibenzyl-2-methylenpentandioát (2). Reakční směs byla ponechána ohřát na pokojovou teplotu a míchána přes noc. Čirý roztok byl ochlazen na 0°C a zředěn 5% kyselinou chlorovodíkovou, načež byla oddělena organická vrstva. Organická vrstva byla promyta solankou, sušena (MgSO₄) a zahuštěna odpařením rozpouštědla, což poskytlo čirou světlou nazlátlou kapalinu. Čištění mžikovou chromatografií a elucí činidlem o složení 1:1 Hexan/EtOAc s obsahem 5% AcOH vyneslo 1,2g (41%) 2,4-di(benzyloxykarbonyl)butyl(fenylethyl)fosfinové kyseliny (3, R = CH₂CH₂Ph, Ri = H) jako čirý a bezbarvý olej.

¹H NMR (d6-DMSO): 7,2 ppm(m,15H),5.O ppm (s,4H),3,3 ppm (m,1H), 2,8 ppm(m,4H), 2,3 ppm(m,2), 1,8 ppm(m,4H)

2₁4-[(Fenvlethvlhvdroxyfosfinvl)methvnpentandiová kyselina

Kyselina 2,4-Di(benzy loxy karbonyl)butyl (fenyl ethyl)fosfinová (1,1 g, 2,2 mmol) v 20 ml vody s obsahem 120 mg 10%

Pd/C byla přes noc hydrogenována v hydrogenačním autoklávu ► ftft « • · « • ftft · · 1 • 4 • ft ·· což poskytlo

-110• · • * · · ···· · ·· · • · · ······ • · · · ·«· ·· ··

Parr při tlaku 276 kPa. Filtrace přes Celit s následným zahuštěním odpařením rozpouštědla poskytlo 0,8 g (114%)

2- [ (fe ny leth y I hyd roxyfosf i nyl) met hyljpen ta ndiové kyseliny (4, R = CH₂CH₂Ph) jako bílé pevné látky.

¹H NMR(D₂O): 7,2 ppm (m,5H), 2,7 ppm (m,2H), 2,5 ppm (m,1H), 2,3 ppm (t,2H), 1,9 ppm (m,6H), 1,5 ppm (t,1 H)

Elementární analýza:

Vypočteno C14H19O6P 0,75H₂0,0,5 AcOH: C 50,35 H 6,34

Nalezeno: C 50,26 H 5,78

Příklad 5

Příprava 2-íf(3-fenvlpropylhydroxy)fosfinyljmethyHpenta ndiové kyseliny

Schéma IV, R=CH₂CH₂CH₂Ph, Ri = H

3- Fenvlpropylfosfinová kyselina

K třískám kovového hořčíku (2,44 g, 0,10 mol) v 20 ml suchého diethyléteru bylo pod dusíkovou atmosférou přidáno několik krystalků jodu. Do přikapávací nálevky, byl umístěn fenylpropylbromid (20,0 g, 0,10 mol) v 80 ml diethyléteru.

K předloženým hořčíkovým třískám bylo přidáno 10 ml roztoku bromidu a bylo zaháleno míchání. Po několika minutách, když byl spotřebován jod, byl přidán další podíl fenylpropylbromidu přičemž byla udržována teplota 35°C. Po ukončení přidávání (1,5 hodin ) byla baňka se směsí hermeticky uzavřena a uložena při 5°C.

Diethylchlorfosfit (15,7 g, 0,1 mol) v 50 ml suchého diethyléteru byl ochlazen na 5°C pod dusíkovou atmosférou. Poté byl po kapkách přidán fenylpropylmagneziumbromid (100 ml, 0,1 mol, 1,0 mol/l roztoku v Et₂O) v průběhu 2 hodin, přičemž byla udržována a teplota mezi 0 až 10°C. Vzniklá viskozní bílá směs byla míchána dalších 30 minut. Reakční směs byla filtrována pod • · · ·

- 111 • · · · · · · · ·· • · · · · · · • ft··· · ·· · ·· · ·· ······ • t · · · ·· ··· ·· · · dusíkovou atmosférou a filtrát byl odpařen za sníženého tlaku, což poskytlo a čirou a bezbarvou kapalinu. To této kapalině bylo přidáno 20 ml vody a poté 0,5ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Byla pozorována exotermní reakce a v míchání se pokračovalo 20 minut, načež byla směs extrahována ethylacetátem. Organické podíly byly spojeny, promyty solankou, sušeny (MgSO₄) a zahuštěny odpařením. K získané čiré kapalině byl přidán hydroxid sodný (40 ml, 2,0 mol/l NaOH), výsledný roztok byl míchán 1 hodinu a pak promyt diethyléterem. Vodná vrstva byla okyselena na pH 1,0 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a dvakrát extrahována ethylacetátem. Organické podíly byly spojeny, sušeny (MgSO₄) a zahuštěny odpařením, což poskytlo 3-fenylpropylfosfinovou kyselinu (1, R=CH2CH2CH2Ph, R1=H) (9,8 g, 53%) jako čirou a bezbarvý olej .

¹H NMR (d6-DMSO): 7,2 ppm (m,5H), 6,9 ppm (d,1H), 2,6 ppm (t,2H), 1,7 ppm (m,2H), 1,6 ppm (m,2H)

2,4-Di(benzvloxvkarbonvl)butvl(3-fenvlpropyl)fosfinová kyselina

Kyselina 3-fenylpropylfosfinová (1,0 g, 5,4 mmol) v 50 ml suchého dichlormethanu byla ochlazena na -5°C pod dusíkovou atmosférou, byl k ní přidán triethylamin (2,2 g, 22 mmol) a poté trimethyIsiIyIchIorid (2,1 g, 19 mmol), přičemž byla reakční teplota udržována na 0°C. Po 10 minutách byl přidán dibenzyl 2-methylenpantandioát (2) v 10 ml dichlormethanu v průběhu 10 minut. Reakční směs byla zahřáta na teplotu místnosti a míchána přes noc. Získaný čirý roztok byl ochlazen na 0°C a zředěn 5% kyselinou chlorovodíkovou, načež byla organická vrstva oddělena, promyta solankou, sušena (MgSO₄) a zahuštěna odpařením, což poskytlo a čirou žlutou kapalinu. Čištění mžikovou chromatografií a elucí činidlem o složení 4:1 hexan/ethylacetát s

-112• · ·· ·· · · • · obsahem 5% kyseliny octové poskytlo 1,5g (56%) kyseliny 2,4di(benzyloxykarbonyl)butyl(3-fenylpropyl)fosfinové (3, R = CH₂CH₂CH₂Ph, Ri = H) jako čirý světle žlutý olej .

Rf 0,58 (1:1 Hex./EtOAc, 5%AcOH);

¹H NMR (d6-DMSO): 7,2 ppm (m,15H), 5,0 ppm (s,4H), 2,7 ppm (m, 1H), 2,5 ppm (m,5H), 2,2 ppm (m,2H), 1,8ppm (m,3H), 1,6 ppm (m,2H)Elementární analýza:

Vypočteno C₂9H₃₃O₆P. 1,3H₂O: C 65,48 H 6,75

Nalezeno: C 65,24 H 6,39

2-f(3-Fenyl pro pyl hyd roxyfosf i nvDmethylIpentandiová kyselina

2,4-Di(benzyloxykarbonyl)butyl(3-fenylp ropy l)f osf i nová kyselina (15) (1,4 g,2,8 mmol) v 20 ml vody s obsahem 150 mg 10% Pd/C byla hydrogenována v hydrogenačním autoklávu Parr při tlaku 276 kPa přes noc. Filtrace přes Celit s následným zahuštěním formou odpaření ve vysokém vakuu poskytlo 0,8 g (89%) 2-[(3-fe nyip ropy Ihydroxyfosfi nyl) methyljpen ta ndikarboxy lové kyseliny (4, R = CH₂CH₂CH₂Ph) ve formě světle žlutého viskózního oleje ).

¹H NMR (D₂O): 7,4 ppm (m,5H), 2,7 ppm (m,3H), 2,4 ppm (t,3H), 1,8 ppm (m,7H);

Elementární analýza:

Vypočteno C₁₅H₂₁O₆P.0,75 H₂O.0,75 AcOH: C 51,23 H 6,64

Nalezeno: C 50,85 H 6,02

Příklad 6

Příprava 2-f[(4-methvlbenzvl)hvdroxyfosfinvDmethvnpentandiové kyseliny

Schéma V, Sloučenina 5 « · • · • · · · • · • flflfl

-113• flfl · • · · · • · · · » · fl · • fl flfl

K živě míchanému amoniumfosfinátu (8,30 g, 100 mmol), byl přidán hexamethyldisilazan (21,1 ml, 100 mmol) a výsledná suspense byla míchána při 105 °C 2 hodiny. K suspensi pak byl po kapkách přidán roztok 4-methylbenzylbromidu (5,00 g, 27,0 mmol) při 0° C. Reakční směs byla míchána na rotačním odpařováku po dobu 19 hod. Reakční směs pak byla rozpuštěna v dichlormethanu (50 ml) a promyta 1N HCI (50 ml). Organická vrstva byla oddělena, sušena Na₂SO₄ a zahuštěna, což poskytlo 4,72 g bílé pevné látky. Ta byla rozpuštěna v dichlormethanu (50 ml) a benzylalkoholu (3,24 g, 30 mmol), byl přidán roztok 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu (DCC) (6,19 g, 30 mmol) teplota byla udržována na 0° C a suspenze byla míchána na rotačním odpařováku 14 hodin, načež byla rozpouštědla odstraněna za sníženého tlaku a zbytek byl rozmíchán v EtOAc. Výsledná suspense byla filtrována a filtrát byl zahuštěn. Zbytek byl čištěn silikagelovou chromatografií (gradientově eluce hexany/EtOAc 4:1 až 1:1), což poskytlo 2,40 g 4-methylbenzyl-O-benzylfosfinové kyseliny (2, R= 4-methylbenzyl) jako bílou pevnou látku (34% výtěžek): Rf 0,42 (EtOAc); ¹H NMR (DMSO-Ó6) delta 2,30 (s, 3 H), 3,29 (d, J = 16,6 Hz, 2 H), 5,2 (m, 2 H), 7,0 (d, J = 543 Hz, 1 H), 7,1-7,2 (m, 4 H), 7,3-7,4 (m, 5 H).

K roztoku 4-methylbenzyl-O-benzylfosfinové kyseliny (2, R= 4-methylbenzyl) (2,16 g, 8,3 mmol) v THF (15 ml) byl přidán hydrid sodný (0,10 g, 60% disperse v oleji) a poté dibenzyl 2-methylenpentandioát při 0 °C. Směs byla míchána na rotačním odpařováku 4 hodiny a pak byla rozpuštěna v EtOAc (50 ml) a nalita do 1N HCI (50 ml). Organická vrstva byla oddělena, sušena Na₂SO₄ a zahuštěna. Tento materiál byl čištěn silikagelovou gradientovou chromatografií (hexany/EtOAc, od 4:1 do 1:1), což poskytlo 3,41 g 2,4-di(benzyloxykarbonyl)butyl(4-methylbenzyl)-o-114-benzylfosfinové kyseliny (4, R = 4-methylbenzyl) ve formě bezbarvého oleje (70% výtěžek): Rf 0,61 (EtOAc);

¹H NMR (CDCI₃) delta 1,6-1,8 (m, 1 H), 1,9-2,0 (m, 2 H), 2,1-2,4 (m, 6H), 2,7-2,9 (m, 1 H), 3,05 (dd, J = 9,0, 16,8 Hz, 2 H), 4,85,1 (m, 6 H), 7,0-7,1 (m, 4 H), 7,2-7,4 (m, 15 H).

K roztoku 2,4-di(benzyloxykarbonyl)butyl(4-methylbenzyl)-o-benzylfosfinové kyseliny (0,70 g, 1,2 mmol) v ethanolu (30 ml) byl přidán Pd/C (5%, 0,10 g) a suspenze byla 18 hodin protřepávána ve vodíkové atmosféře (345 kPa). Suspenze pak byla filtrována přes Celit a zahuštěna za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn v destilované vodě (5 ml), dělen na koloně s náplní pryskyřice AG 50W-X8 (H⁺ forma) a lyofilizován, což poskytlo 0,21 g 2-[[(4-methy!benzyl)hydroxyfosfinyl]methyl]pentandiové kyseliny (5, R = 4-methylbenzyl) ve formě bílé pevné látky (55% výtěžek):

Rf 0,62 (i-PrOH:H₂O, 7:3) ;

¹H NMR (D₂O) delta 1,7-1,9 (m, 3H), 2,0-2,2 (m, 1 H), 2,33 (dt, J = 1,7 Hz, 7,4 Hz, 2 H), 2,55-2,70 (m, 1 H), 3,12 (d, J = 16,5 Hz, 2 H), 7,0-7,1 (m, 2 H), 7,2-7,3 (m, 2 H).

Analýza: Vypočteno pro C₇H₁₇0₆P*0,30H₂0: C, 52,60; H, 6,18

Nalezeno: C, 52,60; H, 6,28

Příklad 7

Příprava 2-ff(4-Fluorbenzvl)hvdroxvfosfinvnmethyllpentandikarboxylové kyseliny (R = 4-fluorbenzyl):

Schéma V, příprava je stejná jako ve shora uvedeném příkladu, kde R = methylbenzyl:

Rf 0,64 (i-PrOH: H₂O, 7:3); ¹H NMR (D₂O) delta 1,7-1,9 (m, 3 H),

2,0-2,2 (m, 1 H), 2,3-2,4 (m, 2 H), 2,55-2,70 (m, 1 H), 3,12 (d, J =

16,5 Hz, 2 H), 7,0-7,1 (m, 2 H), 7,2-7,3 (m, 2 H).

• ft · · • ·

-115• ftft ft · ftftft • · ft · · · » · ft • · · · · • ft · • · · ftft ftftft • ft ftft • ftft · • ftft · • ftft ftftft • · • · ftft

Analýza: Vypočteno pro Ci3Hi₆FO₅P*0,25H2O: C, 48,38; H, 5,15 Nalezeno: C, 48,38; H, 5,15

Příklad 8

Příprava 2-f [(4-Met hoxybenzyl) hyd roxyfosf i nyllmethyllpentandiové kyseliny (R = 4-methoxybenzyl):

Schéma V, příprava jako v předešlém příkladu, kde R = methylbenzyl:

Rf 0,56 (i-PrOH:H₂O, 7:3) ; ¹H NMR (D₂O) delta 1,8-1,9 (m, 3 H), 2,0-2,2 (m, 1 H), 2,3-2,4 (m, 2 H), 2,55-2,70 (m, 1 H), 3,16 (d, J = 16,7 Hz, 2 H), 3,81 (s, 3 H), 6,98 (d, J - 8,7 Hz, 2 H), 7,25 (d,J = 8,7 Hz, 2H).

Analýza: Vypočteno pro Ci4Hig07P*0,30H₂0: C, 50,09; H, 5,89 Nalezeno: C, 49,98; H, 5,80.

Příklad 9

Příprava 2-[f (2-f lu orbě nzyl) hyd roxyfosf i nyllmethyllpe ntand i karboxylové kyseliny (R = 2-fluorbenzyl):

Schéma V, příprava jako ve shora uvedeném příkladu, ve kterém R = methylbenzyl:

Rf 0,67 (i-PrOH:H20, 7:3) ; ¹H NMR (D₂O) delta 1,8-1,9 (m,

H), 2,0-2,2 (m, 1 H), 2,3-2,4 (m; 2 H), 2,55-2:70 (m, 1 H),

3,28 (d, J = 16,6 Hz, 2 H), 7,1-7,5 (m, 4 H).

Analýza: Vypočteno pro C₁₃Hi₆F0₆P*0,10H₂0: C 48,79; H 5,10 Nalezeno: C, 48,84; H, 5,14

Příklad 10

Příprava 2-[f(pentafluorbenzvl)hvdroxvfosfinvnmethyl|pentandiové kyseliny (R = pentafluorbenzyl):

Schéma V, příprava jako ve shora uvedeném příkladu, ve kterém R = methylbenzyl:

• »· 9

-1163 H), • · · · · a · • · 9 · » 99 ···

9*·9 * · · · •99 9· 99*

Rf 0,69 (i-PrOH:H₂O, 7:3); ¹H NMR (D₂O) delta 1,8-2,0 (m

2,1-2,3 (m, 1 H), 2,3-2,5 (m, 2 H), 2,7-2,9 (m, 1 H), 3,29 (d, J = 15,4 Hz, 2 H),

Analýza: Vypočteno pro Ci3Hi₂F₅O6P*0,45H₂O: C 39,20; H 3,26 Nalezeno: C 39,17; H 3,28.

Příklad 11

Příprava 2-[(methyl hyd roxyfosf i nvDmethyljpentandiové kyseliny

Schéma VI, Sloučenina 9

2,4-Di(benzvloxvkarbonvl)butylfosfinová kvselina (6)

Suchá fosfinová kyselina (100 g, 1,52 mol) byla rozpuštěna ve 100 ml chloroformu a byl k ní přidán triethylamin (155 g, 1,52 mol). Reakční směs byla odpařena a přenesena do třílitrové baňky s obsahem 750 ml chloroformu. Roztok byl míchán pomocí mechanického míchadla a baňka byla ochlazena na 0°C. Ke vzniklému čirému roztoku byl přidán triethylamin (277 g, 2,72 mol) a poté trimethylsilylchlorid (281 g, 2, 58 mol). Po přidání veškerého t r i met h y I s i ly I ch I o rid u byl během 20 minut přikapán dibenzyl 2-methylenpentandioát (2) v 150 ml chloroformu. Chladící lázeň byla odstraněna a směs byla ohřátá na pokojovou teplotu. Po 6 hodinách byla viskózní směs zfiltrována, filtrát ochlazen na 0°C a zředěn 5% kyselinou chlorovodíkovou. Organická vrstva byla odstraněna a vodná vrstva byla extrahována chloroformem, organické podíly byly spojeny, sušeny (MgSO₄) a odpařeny za sníženého tlaku, což poskytlo 55 g kyseliny 2,4-di(benzyloxy- karbonyljbutylfosfinové (6) ve formě světle žluté kapaliny. Získaná surová kapalina byla čištěna mžikovou chromatografií a eluována pomocí činidla o složení 3:1 hexany/ethyl acetát s obsahem 5% kyseliny trif luoroctové, což poskytlo 40 g (7%) požadovaného produktu.

-117Rf 0,28 (3:1 Hex./EtOAc 5% TFA);

¹H NMR (CDCI₃) : 7,3 ppm (m, 10H) , 7,2 ppm (d, 1H) , 5,12 ppm (s, 2H), 2,9 ppm (m, 1H), 2,4 ppm (t, 2H), 2,2 ppm (m, 1H) ,2.0 ppm (m, 3H)

2.4- Di(benzvloxvkarbonvl)butvlbenzylfosfinová kyselina (7)

K roztoku kyseliny 2,4-di-(benzyloxykarbonyl)butylfosfinové (6) (19,3 g, 49,4 mmol) v tetrahydrofuranu byl přidán benzylalkohol a dimethylaminopyridin (0,5 g). Poté byl přidán ke směsi dicyklohexylkarbodiimid (DCC, 12g, 58 mmol), načež se vytvořila bílá sraženina. Po 30 minutách byla bílá suspenze zfiltrována a filtrát zahuštěn odpařením za sníženého tlaku. Vzniklý čirý a bezbarvý olej byl čištěn mžikovou chromatografií a eluován s použitím činidla o složení 1:1 Hex./EtOAc, což poskytlo

2.4- di(benzyloxykarbonyl)butylbenzylfosfinové kyseliny (7) (11,5 g, 47%) ve formě čirého a bezbarvého oleje. Rf. 0,16 (1:1 Hex./EtOAc);

¹H NMR (CDCI₃): 7,3 ppm (m,15H), 7,2 ppm (d,1H), 5,0 ppm (m,6H), 2,9 ppm (m,1H), 2,2 ppm (m,3H), 1,9 ppm (m,3H)

2.4- Di(benzyloxvkarbonvl)butvl[hvdroxv(fenyl)methvl1benzvlfosfinová kyselina (8)

2,4-Di(benzyloxykarbonyI)butylbenzylfosfinová kyselina (7) v 5 ml suchého THF byla přidána po kapkách k míchané chlazené (0°C) směsi hydridu sodného (0,09 g, 2,3 mmol) v 15 ml THF. Po 15 minutách byl přidán jehlou benzaldehyd (0,23 g, 2,2 mmol), přičemž byla teplota udržována na 0°C. Po 30 minutách byla směs zředěna vodou a extrahována dvěma podíly dichlórmethanu. Organické podíly byly spojeny a odpařeny, což poskytlo čirý bezbarvý olej. Olej byl chromatografován na silikagelu a eluován v soustavě rozpouštědel o složení 1:1 Hex./EtOAc. Vhodné frakce byly spojeny a odpařeny, což poskytlo

-1189 · 9 · · « ’

99 • 999

0,4 g (33%) 2,4-di-(benzyloxykarbonyl)butyl[hydroxy(fenyl)methyljbenzylfosfinové kyseliny (6) jako čirý a bezbarvý olej.

Rf 0,18 (1:1 Hex./EtOAc);

¹H NMR (CDCI₃): 7,3 ppm (m,20H), 5,2 ppm (m,1H), 4,9 ppm (m,6H), 2,8 ppm (dm,1H), 2,2 ppm (m,3H), 1,9 ppm (m,3H)

2-ÍÍHydroxv(fenvl) methyl! hyd roxyfosf i nyl methyl! pentandiová kyselina (9)

2,4-Di(benzyloxykarbonyl)butyl[hydroxy(fenyl)methyl]benzylfosfinová kyselina (6) (0,37 g, 0,6 mmol) v 25ml vody s obsahem 0,10g 10% Pd/C byla hydrogenována při tlaku 276 kPa po dobu 6 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a lyofilizována, což poskytlo 2-[[hydroxy(fenyl)methyl]hydroxyfosfinylmethyljpentandiovou kyselinu (9) (0,14 g, 70%) jako bílou pevnou látku.

¹H NMR (D₂O): 7,4 ppm (m,5H), 5,0 ppm (d, 1 H), 2,7 ppm (m,1H), 2,4 ppm (m,2H), 2,2 ppm (m,1H), 1,9ppm (m,3H) Elementární analýza:

Vypočteno pro Ci3Hi₇O7P.0,6H₂O: C 47,74 H 5,61

Nalezeno: C 47,73 H 5,68

Příklad 12

Příprava dibenzyl 2-methvlenpentandioátu

Schéma III.

Benzylakrylát (500 g, 3 mol) byl pod dusíkovou atmosférou zahříván na 100°C, přívod tepla byl poté zastaven a byl po kapkách přidán HMPT (10 g, 61 mmol) přičemž byla udržována teplota 135-145°C. Po ukončení přidávání byla směs ochlazena na pokojovou teplotu a byla k ní přidána kaše oxidu křemičitého („siliky“) se směsí rozpouštědel o složení 5:1 Hex/EtOAc. Pak byla směs přenesena na kolonu s obsahem

-119···»·< · · ·· Φ·· ·♦ »·* ·· ·· suchého oxidu křemičitého. Kolona pak byla promyta směsným rozpouštědlem o složení 1:1 Hex/EtOAc a rozpouštědlo s vymytou požadovanou sloučeninou bylo shromážděno a odpařeno. Získaná čirá žlutá kapalina byla destilována ve vysokém vakuu (200 pmHg), což poskytlo 8 g první frakce, destilující do 45°C, a potom požadovaný produkt, destilující při 180 až 185°C (212 g, 42 %) jako čirou a bezbarvou kapalinu.

¹H NMR (CDCb) 7,3 ppm (3, 10H) 6,2 ppm (s, 1H); 5,5 ppm (s, 1H); 5,2 ppm (s, 2H); 5,1 ppm (s,2H); 2,6 ppm (m, 4H).

Příklad 13

Příprava dibenzyl 2-í[bis(benzvloxv)fosforvHmethvl1pentandioátu

Schéma III

Dibenzylfosfit (9,5 g, 36 mmol) v 350ml dichlormethanu byl ochlazen na 0°C. K tomuto míchanému roztoku bylo přidáno trimethylaluminum (18,2ml, 2,0M roztok v hexanu, 36,4mmol). Po 30 minutách byl přidán (1) v průběhu 10 minut po kapkách (6,0g, 37 mmol) v 90 ml dichlormethanu. Čirý a bezbarvý roztok pak byl ohřát na pokojovou teplotu přes noc ponechán pod mícháním. Reakční směs pak byla zředěna pomalým přidáním 5% HCI. Po míchání dalších 1,5 hodin byla oddělena nižší organická vrstva a vodná vrstva byla extrahována jednou 100ml dichlormethanu. Organické podíly byly spojeny, sušeny (MgSO₄) a odpařeny, což poskytlo čirou světlou nazlátlou kapalinu, která byla chromatografována na silikagelu (4cmx30cm) a eluována s gradientem systémem rozpouštědel (Hexane/EtOAc) (gradient 4:1 až 1:1) frakce s obsahem požadovaného produktu byly spojeny a zahuštěny odpařením, což poskytlo 2 (7,1 g, 42%) jako čirou a bezbarvou kapalinu, která pak byla destilována na zařízení Kughleror při 0,5 mm Hg a 195-200°C. Destilát byl odstraněn a zbylý světlý nazlátlý olej byl chromatografován na

- 120 • φ φφφ · • φ φφ φ •· φφφφ * φ φ φφφ φ · φ φ φφ φφφ

silikagelu (1:1, Hex./EtOAc), což poskytlo 2,9 g sloučeniny (2) jako čirý a bezbarvý olej. TLC Rf 0,5 (1:1, Hex./EtOAc).

¹H NMR (CDCIs ) 7,1-7,4 (m, 20H); 5,05 (s, 2H); 4,8-5,03 (m, 6H); 2,8 (1H); 2,22-2,40 (m, 3H); 1,80-2,02 (m, 3H).

Příklad 14

Příprava 2-(fosfonomethyl)pentandiové kyseliny.

Schéma lil

Benzylpentandioát (2,9g, 4,9mmol) byl smíšen s 20ml methanolem s obsahem 0,29g (6 mol %) 10% Pd/C. Tato směs byla hydrogenována v hydrogenačním autoklávu Parr při tlaku 276 kPa po dobu 24 hodin, filtrována a odpařena, což poskytlo (3) (1,0 g, 90%) jako čirý, lehce nazlátlý viskózní olej.

¹H-NMR (H₂O) 2,6-2,78-(m, 1 H); 2,25-2,40-(m,2H); 1,75-2,15-(m, 4H).

Příklad 15

Pacient má diagnózu adenokarcinom prostaty. Lze ho tudíž léčit podáváním inhibitorů NAALADázy, které jsou uvedeny v příkladech 1 až 3, přímou injekcí do nádoru. Po tomto prvním léčení se pacientovi může popřípadě podávat stejný či odlišný inhibitor NAALADázy přerušovaným nebo kontinuálním způsobem pomocí subdurálního čerpadla. Dá se očekávat, že adenokarcinom se dále vyvíjet nebude.

Příklad 16

Pacient má diagnózu adenokarcinom prostaty. Lze ho tudíž léčit podáváním inhibitorů NAALADázy, které jsou uvedeny v příkladech 1 až 3, přímou injekcí do nádoru. Po tomto prvním léčení se pacientovi může popřípadě podávat stejný či odlišný inhibitor NAALADázy přerušovaným nebo kontinuálním způsobem

99 · 9

9 9

999 ft·· • ft ·· ftft

- 121 •••ί .

• ft ·· · ·· ···· • · • · · · ft 9 9

999 implantací systému obsahujícího biokompatibilní, polymemí matrici, ze které se uvolňuje účinná látka. Dá se očekávat, že adenokarcinom se dále vyvíjet nebude.

Příklad 17

Pacient má diagnózu benigní hyperplasie prostaty. Lze ho tudíž léčit podáváním inhibitorů NAALADázy, které jsou uvedeny v příkladech 1 až 3, přímou injekcí do nádoru. Po tomto prvním léčení se pacientovi může popřípadě podávat stejný či odlišný inhibitor NAALADázy přerušovaným nebo kontinuálním způsobem injekcemi, pomocí subdurálního čerpadla nebo implantací polymemí matrice. Dá se očekávat, že buňky hyperplasie prostaty se nebudou měnit na rakovinu.

Příklad 18

Pacient má diagnózu adenokarcinom prostaty. Adenokarcinom se jeví jako nemetastázující. Adenokarcinom je odstranitelný operativně. Po postoperačním zotavení lze pacientovi podávat lokálně inhibitor NAALADázy přerušovaným nebo kontinuálním způsobem injekcí, subdurálním čerpadlem nebo implantací polymemí matrice, ze které se uvolňuje účinná látka. Dá se očekávat, že adenokarcinom se dále vyvíjet nebude.

Příklad 19

Pacient má diagnózu metastázující adenokarcinom prostaty. Adenokarcinom projevuje sklon k metastázám, ale dosud není indikována operace jako nejvhodnější terapeutická metoda. Nádorová tkáň je odstranitelná operativně. Pacientovi lze lokálně podávat zde popsaný inhibitor NAALADázy, zhruba počínaje první diagnózou a podávání může po operaci pokračovat. Po pooperačním zotavení se může u pacienta udržovat stejná hladina inhibitoru NAALADázy periodickým lokálním podáváním. Pacient

- 122 • fcfcfc • · fc·· fcfc fcfc· • fc fc · fc fc • fcfc • · fcfc · fcfc· · • fc · fcfc ··* ♦ fc ·♦ • ·· · • ·· · • ··· fcfc· • fc • fc fcfc může být pečlivě sledován, zda se neprojevují nežádoucí vedlejší účinky podávání inhibitoru NAALADázy Dá se očekávat, že se další nádory dále nevyvinou. Pokud se při operaci zjistí přítomnost malých částí nádorové tkáně, lze očekávat, že se dále vyvíjet nebudou.

Příklad 20

Pacient má nádory produkující ACTH. Lze ho tudíž léčit podáváním inhibitorů NAALADázy, které jsou uvedeny v příkladech 1 až 3, přímou injekcí do nádoru. Po tomto prvním léčení se pacientovi může popřípadě podávat stejný či odlišný inhibitor NAALADázy přerušovaným nebo kontinuálním způsobem injekcemi, pomocí subdurálního čerpadla nebo implantací polymerní matrice, ze které se uvolňuje účinná látka. Dá se očekávat, že růst nádoru nebo jeho buněk se zpomalí nebo zastaví a žádné další nádory produkující ACTH se nevyskytnou.

Příklad 21

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je akutní lymfocytová leukémie.

Příklad 22

Léčení popsané v příkladu pacienta je akutní nelymfocytická leukémie.

kdy diagnóza

Příklad 23

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina kůry nadledvinek.

·* flflflfl • · • flflfl

- 123 příkladu 9 kdy nemetastázující fl fl··· fl fl fl· • · fl • fl ·· • flfl · • · · · • flfl ··· ··· • · · * • fl ·♦· ·* ·♦

Příklad 24

Léčení popsané v pacienta je metastázující nebo močového měchýře.

diagnóza rakovina

Příklad 25

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina mozku.

Příklad 26

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina prsu.

Příklad 27
pacienta rakovina.	je	Léčení popsané v příkladu 9 kdy	diagnóza cervikální
metastázující nebo	nemetastázující
pacienta	je	Příklad 28 Léčení popsané v metastázující nebo	příkladu 9 kdy nemetastázující	diagnóza chronická

lymfocytová leukémie.

	Příklad 29	kdy	diagnóza
Léčení popsané	v	příkladu 9
pacienta	je metastázující nebo	nemetastázující	chronická
myelocytická leukémie.
	Příklad	30
	Léčení popsané	v	příkladu 9	kdy	diagnóza
pacienta	je metastázující nebo	nemetastázující	rakovina

konečníku a tlustého střeva.

- 124 99

9 9 ·

9 9 9

999 999 ·

• 9 99 ··· · · ·« ·

99 999

9 99 99· • · · 9 · ·

9 9 9 9 9

9· 9 99 ·9 · · ·

Příklad 31

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující kožní lymfom Tbuněk.

Příklad 32

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina děložní sliznice.

Příklad 33

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina jícnu.

Příklad 34

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující Ewingův sarkom.

Příklad 35

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina žlučníku.

Příklad 36

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující leukémie vlasových buněk.

Příklad 37

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina hlavy a krku.

• Φ φφ φ φ φ φ φ φ φ φ φφφ φφφ φ φ φφ φφ

- 125 ····

·« φφφ · • · » • · · φφ • · · • · · • Φ φφφ

Příklad 38

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující Hodgkinsův lymfom.

Příklad 39

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující Kaposiho sarkom.

Příklad 40

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina ledvin.

Příklad 41

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina jater.

Příklad 42

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina plic (malobuněčná a/nebo nemalobuněčná).

Příklad 43

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující maligní výpotek pobřišnice.

Příklad 44

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující maligní výpotek pohrudnice.

Příklad 45

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující melanom.

- 126 • ΦΦΦ • · ·♦ ··«· φ φ φ • · ··· φ φ ·

8 ΦΦ • Φ Φ Φ • Φ · Φ

9 98 8

Φ ·

Φ · ΦΦ

Příklad 46

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující mesotheliom.

Příklad 47

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující roztroušený myelom.

Příklad 48

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující neuroblastom.

Příklad 49

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující ne-Hodgkinsův lymfom.

Příklad 50

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující osteosarkom.

Příklad 51

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina vaječníku (a/nebo rakovina zárodečných buněk vaječníku).

Příklad 52

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina pankreatu.

- 127 • fefefe fe fe· fefefefe ·· ·· » ·« ··« * · · · fe fe <···« fefefefe • · fefe » fefe fefe fefefe · • fefe··· fefe • fe fefefe fefe fefefe fefe fefe

Příklad 53

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina penisu.

Příklad 54

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující retinoblastom.

Příklad 55

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina kůže.

Příklad 56

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující sarkom měkkých tkání.

Příklad 57

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující karcinom dlaždicovitých buněk.

Příklad 58

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo ne metastázující rakovina žaludku.

Příklad 59

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující testikulární rakovina.

Příklad 60

- 128 • ftftft ft ftft ftftft ftft · • ftft · • ftft ftftft ftftft ftftft ftft • ft ftftft ftft ftft • ft ftftftft • « • ftftft

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina štítné žlázy.

Příklad 61

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující trofoblastický novotvar.

Příklad 62

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina dělohy.

Příklad 63

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina pochvy.

Příklad 64

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující rakovina vulvy.

Příklad 65

Léčení popsané v příkladu 9 kdy diagnóza pacienta je metastázující nebo nemetastázující Wilmův nádor.

Vynález byl popsán a je zřejmé, že existuje v mnoha obměnách v různých směrech. Tyto obměny nelze chápat jako odklon od hlavní myšlenky vynálezu ani neznamenají únik z jeho rozsahu, neboť veškeré tyto modifikace jsou součástí vynálezu, jak je definován v následujících nárocích.

4

4944

4 4

449

444 44

-129'-

Claims (9)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Použití inhibitoru NAALADázy při přípravě léčiva pro léčení rakoviny u zvířete.
2. 2. Použití inhibitoru NAALADázy při přípravě léčiva pro potlačování růstu nádorových buněk u zvířete.
3. 3. Použití inhibitoru NAALADázy při přípravě léčiva pro léčení poruchy vztahující se k aktivitě enzymu NAALADázy u zvířete.
4. 4. Použití podle nároků 1,2 nebo 3, kde nádor je vybrán ze skupiny, do které patří: nádory produkující ACTH, akutní lymfocytická leukémie, akutní nelymfocytická leukémie, rakovina kůry nadledvinek, močového měchýře, mozku, prsu, krčku, chronická lymfocytická leukémie, chronická myelocytická leukémie, kolorektální rakovina, kožní lymfom T-buněk, rakovina děložní sliznice, jícnu, Ewingův sarkom, rakovina žlučníku, leukémie vlasových buněk, rakoviny hlavy a šíje, Hodgkinsův lymfom, Kaposiho sarkom, rakovina ledvin, jater, plic (malobuněčná a/nebo nemalobuněčná), maligní peritoneální výpotek, maligní pleurální výpotek, melanom, mesotheliom, mnohočetný myelom, neuroblastom, ne-Hodgkinsův lymfom, osteosarkom, rakovina vaječníku, rakovina zárodečných buněk vaječníku, rakovina pankreatu, penisu, retinoblastom, rakovina kůže, měkkých tkání, rakoviny šupinových buněk, rakovina žaludku, varlat, štítné žlázy, trofoblastické novotvary, rakovina uteru, vaginy, vulvy a Wilmův nádor.
5. 5. Použití podle nároků 1,2 nebo 3, kde inhibitor NAALADázy je vybrán ze skupiny, do které patří:

   2 - (fosfonomethyl) pentandiová kyselina;

   2 - (fosfonomethyl) jantarová kyselina; a

   2 - [[(2-karboxyethyl)hydroxyfosfinyl] methyljpentandiová kyselina.

   • · ··>· • «· ·· ·· ·· · · 9 111

   119 1111 • · 11 m ··· • · · « · ·♦· ·» ·· *··

   -130'
6. 6. Použití podle nároků 1, 2 nebo 3, kde inhibitor NAALADázy je vybrán ze skupiny, do které patří: o-fenantrolin; EGTA; EDTA; kyselina quisqualová; β-NAAG; a jejich farmaceuticky přijatelná sůl, hydrát nebo směs.
7. 7. Použití podle nároků 1, 2 nebo 3, kde inhibitor NAALADázy je vybrán ze skupiny, do které patří: Asp-Glu; Glu-Glu; Gly-Glu; gamma-Glu-Glu; GluGlu-Glu; a jejich farmaceuticky přijatelná sůl, hydrát nebo směs.
8. 8. Použití podle nároků 1, 2 nebo 3, kde inhibitor NAALADázy je užíván v kombinaci s další terapeuticky účinnou látkou, vybranou ze souboru, do kterého patří: terapeutické hormony, chemoterapeutické prostředky, monoklonální protilátky, antiangiogenní prostředky, radioaktivně značené sloučeniny a jejich směsi.
9. 9. Použití podle nároku 3, kde porucha týkající se aktivity enzymu NAALADázy je benigní hyperplasie prostaty.