CZ36997A3

CZ36997A3 - Cyklopeptidy stimulující uvolňování růstového hormonu a způsob jejich přípravy

Info

Publication number: CZ36997A3
Application number: CZ97369A
Authority: CZ
Inventors: Jan Rndr. Csc. Hlaváček; Miroslava Ing. Žertová; Rudolf Ing. Ježek
Original assignee: Ústav organické chemie a biochemie AV ČR
Priority date: 1997-02-07
Filing date: 1997-02-07
Publication date: 1998-09-16
Also published as: CZ290347B6

Description

Cyklopeptidy stimulující uvolňování růstového hormonu a způsob jejich přípravy '

Oblast techniky

Vynález se týká cyklopeptidů stimulujících uvolňování růstového hormonu a způsobu jejich přípravy

Dosavadní stav techniky

Cyklické peptidy jsou silné a specifické stimulátory sekrece růstového hormonu (dále jen GH) u rozmanitých živočišných druhů, které mají určité aminokyselinové pořadí.

Mechanismus biologické úlohy GH spočívá v regulaci funkce různých růstových faktorů (GFs, Rothe M., Falanga V.,: Arch. Dermatol. 125, 1390 (1989); Cohen S., Carpenter G.: Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A., 72, 1317 (1975); Lynch S.E., Nixon J.C., Colvin R.B.,

Anthonianes H.N.: Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 84, 7696 (1987); Baxter R.C.: Adv. Clin. Chem. 25, 49 (1986); Gospodarowicz D., Neufeld G., Schweigerer L.: Mol. Cell, Endocrinol. 16, 187 (1986)), které mají komplexní význam pro růst a syntézu buněk. Jsou považovány za důležité mediátory při hojení ran, při fibróze a obměně tkání. Nedostatečná sekrece GH má za následek poruchu funkce GFs a následně omezuje růst a regulaci tkáňového systému v různých organismech. Na druhé straně, zvýšený přísun GH vede ke stimulaci funkce GFs v metabolismu a zlepšuje růst, stav či hojení tkání a orgánů člověka a živočichů (Rothe M.,Falanga V.,:Arch. Dermatol. 125,1390(1989)

Neuroendokrinní systém, kde GH a GFs hrají tak důležitou funkci se uplatňuje rovněž v procesu stárnutí organismu (Meites J., Goya R,, Takahasni S.: Exp. Gerontol. 22, 1 (1987); Fabris N.: Intern. J. Neuroscience, 51, 373 (1990), Ďoubal S.:Mech. Ageing. Dev.in press). Teprve nedávno byly byly popsány účinky nízkých dávek GH na imunitní systém a stárnutí myší (Khansari D.N., Gustad T.: Mech. Ageing Dev. 56, 87 (1991)).

Endogenní sekrece GH může být kromě tzv. releasing faktoru (GRF) z hypothalamu, obsahujícího 44 aminokyselinových zbytků, stimulována i tzv. releasing peptidem : His-DTrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-HI^ (GHRP) složeným pouze ze 6 aminokyselinových zbytků a • ·· · « e ··· * * « · ··*· · ······· · · · ♦·» ·· ·* ·· ·· ·· působícím sekreci GH in vitro i in vivo (Momany F.A., Bowers C.Y., Reynolds G.A., Chang

D., Hong A., Newlander K.: Endocrinology 108, 31 (1981); Bowers C.Y., Momany F.A.,

Reynolds G.A., Hong A.: Endocrinology, 114,1537 (1984)).

Tento hexapeptid amid neinteraguje se stejným receptorovým místem v hypofýze jako GRF a je patrně zapojen do jiného mechanismu sekrece GH (Sartor O., Bowers C. Y., Chang

D.: Endocrinology, 116, 952 (1985); Cheng K, Chán W.W.S., Barrets.Jr. A., Convey D.M., Smith R.G.: Endocrinology 124, 2791 (1989)). U člověka je jeho potence dokonce vyšší než účinek zmíněného GRF (Yellin T.O., Huffman W.F. in Peptides; Chemistry, Structure and Biology. Proč. 11th A.P.S. (Rivier. J.E., Marshall G.R., Eds.), p. 214. ESCOM; Leiden, 1990). Pro svou krátkou aminokyselinovou sekvencí je z praktického hlediska GHRP případně jeho analogy, zajímavější než GRF obsahující desítky aminokyselinových zbytků a mohl by být proto využíván v humánní i veterinární medicíně.

Před časem jsme objevili, že GHRP také výrazně zpomaloval proces stárnutí myší v experimentu trvajícím 10 měsíců (Hlaváček J., Smékal O., Barth T., Ďoubal S., Robinson I.; Peptides 1992 (Schneider C.H. and EberleA.N., Eds.), p. 741, ESCOM, 1993).

Na základě výpočtů (Momany F.A., Bowers C.Y., Reynolds G.A., Hong A., Newlander

K.: Endocrinology, 114, 1531 (1984)), byla pro GHRP navržena pseudocyklická konformace umožněná flexibilním zbytkem alaninu v centrální části molekuly a stabilizovaná interakcí mezi aromatickými zbytky aminokyselin opačné chirality v amino- (His, D-Trp) a karboxy(Trp,D-Phe) terminální části. Navržená konformace je spojována s účinkem GHRP na stimulaci uvolňování GH.

Výše uvedené poznatky nás vedly k myšlence kovalentně fixovat výše uvedenou pseudocyklickou konformaci. Proto jsme syntetizovali řadu cyklopeptidů (I) podle schématu hlava k ocasu a sledovali jejich účinek na uvolňování GH do plasmy. Některé z analogů vykazují agonistický účinek lineárního hexapeptid amidu, což potvrzuje naši představu, že cyklické uspořádání je relevantní pro interakci cyklopeptidů s odpovídajícím receptorem a nebrání následujícím procesům, které vedou k sekreci GH. Navíc, při dlouhodobém experimentu na myších (10 měsíců), byl jeden z cyklických analogů dokonce účinnější než GHRP při zpomalení procesu stárnutí u experimentálních zvířat.

»» » · · * 9 A « • ·♦ · · ··· · « ««

V · ··» ·· · ♦ ··· 9 · . «··»·»« »·» ·♦· ·· ·· ·· ·· ··

Tyto peptidy a jejich kombinace působí přímo na přední lalok hypofýzy za specifického spouštění GH a jsou potenciálními analogy GHRP s protahovaným účinkem. Některé z nich rovněž v dlouhodobém testu zpomalují pochody vedoucí ke stárnutí experimentálních zvířat.

Podstata vynálezu ' Cyklické peptidy stimulující uvolňování růstového hormonu obecného vzorce I

A - B - C

II ' 1

F - E - D kde A = L- a D- His, L- a D- Cys

B + D - L-a D-Trp, L-a D-Tle, L-a D-Neo

C = L-aD-Ala

E = L- a D- Tic, L- a D- Lys

F - L- a D- Lys nebo je cyklus tvořen disulfidovými případně thiomethylenovými vazbami mezi postranními řetězci zbytků Cys nebo D-Cys

Způsob přípravy cyklopeptidů podle vynálezu spočívá v tom, že se N -Fmoc-N^E -Boc - Lys připojený na polymérní nosič, s výhodou chlormethylovou Merrifieldovu pryskyřici nebo její kysele labilnější hydroxymethylové modifikace postupně kondenzuje s aktivními hydroxybenztrialovými estery N - Fmoc- aminokyselin v přítomnosti diisopropylethylaminu, přičemž kondenzační reakce se nechá proběhnout v syntetickém cyklu za přídavku dimethylsulfoxydu a v závěrečném stupni se peptid odštěpí z pryskyřice působením slabě alkalického činidla s následným okyselením nebo 1% TFA kyselinou a N“ Fmoc chránící skupina se v každém kroku syntézy odštěpí působením píperidinu v dimethylformamidu.

Peptidy jsou syntetizováný podle obecného postupu modifikacemi standartních metodik napolymérním nosiči nebo v roztoku. V prvním případě se ke karboxyterminální

6 0 · 6 6 6 • »« 6···· 6 0«· « · 666 66 *· 666 · · • 66 666· 666

66660 «· 00 60 60 aminokyselině připojené na polymérní nosič s výhodou chlormethylovou Merrifieldovu pryskyřici nebo její kysele labilnější hydroxymethylové modifikace postupně připojují N Fmoc-aminokyseliny v trojnásobném přebytku. Jejich karboxylové skupina je aktivována pomocí diisopropylkarbodiimidu (dále jen DIC) a N-hydroxybenztriazolu (dále jen HOBt) jako HOBt ester a kondenzace prováděna v přítomnosti dimethylformamidu (dále jen DMF) resp. N-methylpyrrolidonu (dále jen NMP). Syntetický cyklus pro požadované připojení aminokyseliny zahrnuje odštěpení N“-Fmoc chránící skupiny působením 20% piperidinu v DMF (5+20 min), pětinásobné promytí peptidyl-pryskyřice DMF, 2-propanolem, DMF resp; NMP. Acylační reakce zpravidla vyžaduje cyklus 2 hod, přičemž po 40 min se přidá dimethylsulfoxid (15% v reakční směsi). Dokončení reakce je kontrolováno ninhydrinovým testem ( Kaiser E., Colescott R.L., Bossinger C.D., Cook Ρ.Ί.: Anal. Bochem. 34, 595 (1970)) a změnou zbarvení bromfenolové modři (Krchňák V., Vágner J., Šafář P., Lebl M.; Collect. Czech. Chem. Commun. 53, 2542 (1988)). V případě nekompletní kondenzace (pod 99%) je přidáno BOP činidlo ve trímolárním přebytku s DIEA a reakce prodloužena o 1 hod. Nekompletní kondenzace i po této operaci je eliminována acylační reakcí s 25% acetanhydridem v DMF po dobu 5-10 min.

Peptid se odštěpí z pryskyřice mírně alkalickým vodným roztokem 0.1 M NaOH ve směsi rozpopuštědel MeOH a dioxan, během 3 min, přičemž štěpení se provede celkem třikrát. Poté se roztok okyselí octovou kyselinou k regeneraci karboxylové funkce. V případě ; kysele labilní pryskyřice se peptid odštěpí působením 1% TFA. Surový produkt analogu GHRP se odsolí na koloně s náplní biogelu Sephadex G-10 za použití O.2M octové kyseliny. Po lyofilizaci se peptid dále čistí gelovou filtrací na Sephadexu G-25 v 0.2M octové kyselině, preparativní kontinuální průtokovou elektroforesou ( Prusík Z., Kasička V., Mudra P., Štěpánek J., Smékal O., Hlaváček J.: Electrophoresis 11, 932 (1990)). v 0,5M octové kyselině a nakonec preparativní vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (dále jen HPLC). Preparativní HPLC byla prováděna na zařízení fy Spectra Physics s kolonou Vydac C18 při gradientu: 0-30% MeOH, 10 min a 30-80%MeOH, 40 min v 0.05% trifluoroctové kyselině, průtoková rychlost 3ml/min s detekcí při 222 resp. 254 nm. Analytická kontrola čistoty produktů byla prováděna pomocí TLC v systémech S1(2-butanol-98% HCOOH-voda, 75:13.5:11.5), S2(2-butanol-25% vodnš amoniak-voda, 85:7.5:7.5), S3(1-butanol-octová • ··· • »· • · * * · » · * · ··· · a ··· · a a · « · * $ »·· · ·· «* ·· ♦· kyselina-voda, 4:1:1) a S4(1-butanol-pyridin-octová kyselina-voda, 15:10:3:6) dále elektroforesou na papíře Whatman 3MM při potenciálovém spádu 2QV/cm, 1hod v 1M octové kyselině (pH 2.4) a v pufru pyridin-acetát (pH 5.7) a pomocí analytické KPLC (kolona Vydac

C18, 20-80% MeCN/0.5% trifluoroctová kyselina, 60 min, průtok Iml/min, detekce 222 a 280 nm), aminokyselinové analýzy na přístroji Durrum Instrum. Corp. USA, po hydrolýze peptidu v 6M-HCI, 20 hod při 110°C a hmotové spektrometrie na přístroji VG Analytical, England.

V dalším je vynález a obecný experimentální postup blíže objasněn v příkladech provedení aniž se tím jakkoli omezuje.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Ν-Γηιο<:-Ν''-ΒοοΙ/8νΙ-4-οχχηΊβίίιγΙθηίβηνΙ-ρΓγ8Κγλοβ

Merrifieldova pryskyřice (substituce 0.7mmol/g, 2% kopolymér s divinylbenzenem, Fluka, 2.8g) byla promyta DMF, vodou, vysušena ve vakuu a promyta benzenem. K pryskyřici byl přidán roztok césné soli připravené z N -Fmoc-N -Boc-Lys-OH (3.42g) a Cs₂COg (3.1g) mícháním obou komponent ve směsi DMF-voda, 3 hod a celá směs byla míchána 48 hod při

40°C. Po odstranění rozpouštědla byl polymerní materiál s navázanou aminokyselinou promyt na fritě EtOH a DCM a po vysušení bylo 1.67g použito pro postupnou výstavbu peptidového řetězce.

Přiklad 2 cyklo(D-His-Trp-Ala-D-Trp-Phe-Lys)

N^a-Fmoc chránící skupina z navázaného Lys(Boc) podle příkladu 1 byla odštěpena 20% piperidinem v DMF (5 + 20min) a po promytí polymérního materiálu DMF, 2-propanolem a opět DMF byl produkt acylován postupně N -Fmoc deriváty Phe (0.75g, 2hod), D-Trp (0.46g, 3hod), Ala (0.57g, 2hod), Trp (0.38g, 3hod) a D-His(Boc) (O.42g, 2hod). Fmoc skupina byla odštěpena 20% piperidinem v DMF a všechny kondenzace probíhaly působením DIC v přítomnosti HOBt v DMF. Částečně chráněný hexapeptid byl posléze odštěpen z pryskyřice ·· · 9 · * * · · 9 9

9 9 9* 9 9 «9 ··· 9 9 · · · · · 999

9·«·· · · 9 9 9 9 9 v prostředí vodného 0.1M NaOH v MeOH-dioxan (3x50 ml) při teplote místnosti a od polymérního materiálu oddělen filtrací a promytím 50 ml DMF, DCM a MeOH. Získáno 0,52g surového produktu, který byl cyklizován působením difenylfosforylazidu v přítomnosti 1M roztoku K2HPO4. Po cyklizaci byl produkt čištěn gelovou filtrací na Sephadexu G-10 a G-25 v 0.2M octové kyselině a pomocí HPLC. Aminokyselinová analýza: His 0.93, Aía 0.98, Trp 1.72, Phe 1.05, Lys 1.0. Pro θ₅₆Η₆₉Ν₁₁Ο_1θ (1056.2) byt zjištěn /M+H/⁺ 1057.1. V posledním stupni byl cyklopeptid rozpuštěn ve směsi TFA(90)-anisol(5)-ethandithiol(5) s přídavkem 100 mg indolu a roztok po 1 hod odpařen do sucha za vakua, zbytek extrahován etherem, rozpuštěn ve 3M octové kyselině a roztok promyt 3x etherem a po zředění vodou lyofilizován. Surový produkt byl čištěn semipreparativní HPLC v gradientu mobilní fáze 5090% MeOH v 0.05% TFA, 30 min (retenční čas 5.21 min). Pro C^Hg^N^Og (856.02) byl stanoven /M+H/+ = 857. Aminokyselinová analysa: Lys(1), Phe)1.O3), Trp(1.84), Ala(1.04), His 0.96; E_G|_y ²·⁴ 1.18. E_His ^{5 7} °·⁸².

Přiklad 3 cyklo(His-D-Trp-Ala-Trp-D-Tic-Lys)

Fmoc-Lys(Boc)-oxymethylenfenyl-resin (0.62g) byla po odštěpení Fmoc-chránící skupiny 20% piperidinem v DMF postupně acylována HOBt estery Fmoc derivátů D-Tic (0.6g, 3 hod), Trp (0.7g, 4hod), Ala (0.3g, 2hod), D-Trp (O.7g, 3hod) a His(Boc) (0.73g, 2hod). Částečně chráněný hexapeptid byl odštěpen z pryskyřice jako v příkladu 2 a cyklizován rovněž pomocí difenylfosforylazidu v přítomnosti K₂HPO₄. Po odštěpení Boc chránících skupin jako v příkladu 2 byl cyklohexapeptid čištěn preparativní HPLC za použití gradientu mobilní fáze 50-90% MeOH v 0.05% TFA_f 30 min, s retenčním časem 5.64. Aminokyselinová analysa: His 0.94, Trp 1.56, Ala 1.08, TicO.93, Lys 1.0 . E_G)y ²'⁴ 1.16, .EHjs^{5 7} 0.82. Pro C47H₅₃N₁₁0₆(868.0) stanoven /M+H/⁺ = 868.4 • ·· • · ··» • β ·· « · * · ♦* ·♦ • · ··

Příklad 4 cyklo(His-D-Neo-Ala-Trp-D-Phe-Lys)

N“-Fmoc chránící skupina z navázaného Lys(Boc) byla odštěpena 20% piperidinem v DMF (5 + 20min) a po prornytí polymérního materiálu DMF, 2-propanolem a opět DMF byl produkt acylován postupně N-Fmoc deriváty D-Phe (0.75g, 2hod), Trp (0.46g, 3hod), Ala (0.57g, 2 hod), D-Neo (0.31 g, 2hod) a His(Boc) (O.42g, 3hod). Fmoc skupina byla odštěpena jako v předchozích případech. Všechny kondenzace probíhaly působením DIC v přítomnosti HOBt v DMF. Částečně chráněný hexapeptid byl uvolněn z pryskyřice jako v příkladu 2 a cyklizován rovněž pomocí difenylfosforylazidu v přítomnosti K2HPO4. Po odštěpení Boc chránících skupin jako v příkladu 2 měl cyklohexapeptid aminokyselinové složení: His 0.94, Neo 0.97, Trp 0.82, Ala 1.08, Phe 0.93, Lys 1.0 . E_G|y ^{2 4} 1.12, E_Hjs ⁵⁷ 0.79. Pro C^H^N ^θθθ(796.97) byl zjištěn /M+H/⁺ = 797 Preparativní HPLC poskytla při použití gradientu mobilní fáze 50-90% MeOH v 0.05% TFA, 30 min čistý produkt III s retenčním časem 6.68.

Příklad 5

Nⁿ-Fmoc-N⁶-Boc>Lys-2-methoxy>4-alkoxybenzylalkohol-pryskyffce

K Sasrin pryskyřici (substituce 0.9mmol/g, Bachem, 1 g) v DMF byl za míchání přidán aktivní ester vytvořený reakcí Fmoc-Lys(Boc)-OH (1.15g) s HOBt (0.76g) a komplexu pentafluorfenol/DCC (3.74g) při 0°C , 30 min a dimethylaminopyridin (30 mg). pH směsi bylo upraveno na 7 přídavkem DIEA (1.2 ml) a po 4 dnech míchání pří teplotě místnosti byla pryskyřice s navázanou aminokyselinou odsáta na fritě a promyta 5x 10 ml DMF, EtOH, iPrOH a MeOH a sušena v exikátoru do konstatní váhy. Vážením (1,24g) a stanovením Fmoc skupiny byla zjištěna substituce 0.57 mmol aminokyseliny na 1g pryskyřice. Nezreagované OH-CH₂skupiny linkeru byly acetylovány směsí acetanhydrid (1.3 ml)-DIEA(2 ml)-DCM(8 ml) a po 1 hod pryskyřice odsáta na fritě a promyta 3x 10 ml DCM, iPrOH a DMF. Po odštěpeni Fmoc skupiny 20% piperidinem v DMF a prornytí 5x10 mí DMF byl materiál připraven pro postupnou výstavbu peptidového řetězce jako v příkladu 1.

·· ·

Příklad 6 cyklo(His-D-Trp-Ala-_v/CH₂-O/-D-Phe-Tirp-Lys)

Produkt popsaný v příkladu 5 byt acylován postupně Fmoc-Trp-OH (0.62g, 2hod), Fmoc-Ala(CH2O)-D-Phe-OH (0.74g, 8hod), Fmoc-D-Trp (0.62g, 2 hod) a Fmoc-His(Boc) (O.72g, 2 hod). Fmoc skupina byla odštěpena jako v předchozích případech. Všechny kondenzace probíhaly působením DIC v přítomnosti HOBt v DMF. Částečně chráněný hexapeptid byl posléze odštěpen z pryskyřice působením 1% TFA v DCM (4x20 ml, 15 min) při teplotě místnosti. Získáno 0.35g surového produktu, který byl cyklizován působením difenylfosforylazidu v přítomnosti 1M roztoku K2HPO4. Po cyklizaci byl produkt čištěn gelovou filtrací na Sephadexu G-10 a G-25 v 0.2M octové kyselině a pomocí HPLC. Aminokyselinová analýza: His 0,93, Trp 1.72, Lys 1.0. Částečně chráněný cyklopeptid byl rozpuštěn ve směsi TFA(90%)-anisol(5%)-ethandithiol(5%) s přídavkem 100 mg indolu a roztok po 1 hod odpařen do sucha za vakua, zbytek extrahován etherem, rozpuštěn ve 3M octové kyselině a roztok promyt 3x etherem a po zředění vodou lyofilizován. Surový produkt byl čištěn semipreparativní HPLC v gradientu mobilní fáze 50-90% MeOH v 0.05% TFA, 30 min (retenční čas 8.32 min) a pro C^qH^N^qOq(843.0) byl zjištěn (M+H)⁺ = 843.4.

Příklad 7 í l

H-Cys-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Cys-OH

Do roztoku Fmoc-Cys(Trt)-OH (0.96g) v DCM(20ml) a DMF(1ml) byla za míchání při teplotě místnosti přidána chlortritylová pryskyřice (2g, subst. 1.3 mmol Cl/g, NovaBiochem, Švýcarsko) a po 5 min 0.26 ml a po dalších 5 min 0.52 ml DIEA. Po 60 min míchání byla reakce stopnuta přídavkem MeOH (2 ml) a po 10 min rozpouštědlo odfiltrováno a na fritě pryskyřice s navázanou aminokyselinou promyta 3x20 ml DCM, DMF, iPrOH, DMF, iPrOH, MeOH, etheru a sušena nad KOH v exikátoru. Vážením a stanovením Fmoc skupiny byla zjištěna substituce 0.54 mmol/g pryskyřice. Poté byla odštěpena Fmoc chránící skupina 5%, • · ·· • · t » ·* »« · · « v » · »· ·· resp. 20% piperidinem ve směsi DCM/DMF 1:1 {10+15 min) a po 4x promytí DMF byl produkt acylován postupně N -Fmoc deriváty D-Phe (0.75g, 2hod), Trp (0.46g, 3hod), Ala (0.57g, 2hod), D-Trp (0.38g, 3hod) a Cys(Trt) (O.72g, 2hod). Fmoc skupina byla odštěpena 20% piperidinem v DMF a všechny kondenzace probíhaly působením DIC v přítomnosti HOBt v DMF. Částečně chráněný hexapeptid byl posléze uvolněn z pryskyřice a současně uzavřena disulídová vazba mezi oběma Cys zbytky působením jodu (0.76 g) ve směsi rozpouštědel: AcOH (1.2mi), TFE(2.4 ml), DÓM (8.4 ml), 10 min při teplotě místnosti. Roztok byl extrahován 10 ml 0.1% Na₂S20g do odbarvení roztoku, který byl posléze odpařen a zbytek rozpuštěn ve 3M AcOH a lyofilizován. Surový produkt byl čištěn semipreparativní HPLC v gradientu mobilní fáze 5%-90% ACN v 0.05% TFA, 30 min (retenční čas 24.3 min) a pro C₄qH₄₄NqO₇S₂ ¢843.0) byl zjištěn /M+H/⁺ = 813.3. Aminokyselinová annalýza: Ala(1), Trp(1.64), Phe(1.03), Cys(2.02).

Průmyslová využitelnost

Látky podle vynálezu mohou být využity v humánní a veterinární medicíně při ovlivnění imunitního systému v souvislosti s regulací funkce některých růstových faktorů za účelem zpomalování pochodů uplatňovaných v procesu stárnutí.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1.Cyklické peptidy stimulující uvolňování růstového hormonu obecného vzorce I

A - B - C

I I I

F - E - D kde A = L- a D- His, L- a D- Cys

B+ D = L-a D-Trp, L-a D-Tle, L-a D-Neo C = L- a D- Ala

E = L-a D-Tic, L-a D- Lys F = L- a D- Lys nebo je cyklus tvořen disulfidovými případně thiomethylenovými vazbami mezi postranními řetězci zbytků Cys nebo D-Cys.
2. Způsob přípravy cykíopeptidů podle nároku 1., vyznačující se tím, že se N“ - Fmoc-N^E - Boc - Lys připojený na polymémí nosič postupně kondenzuje s aktivními hydroxybenztrialovými estery N“ - Fmoc- aminokyselin v přítomnosti diisopropylethylaminu, přičemž kondenzační reakce se nechá proběhnout v syntetickém cyklu za přídavku dimethylsulfoxydu a v závěrečném stupni se peptid odštěpí z pryskyřice působením slabě alkalického činidla s následným okyselením nebo 1% TFA kyselinou a N - Fmoc chránící skupina se v každém kroku syntézy odštěpí působením piperidinu v dimethylformamidu.