CZ309667B6 - Antimikrobiální peptidy odvozené z lidského proteinu ameloblastinu, účinné na mikrobiologických biofilmech - Google Patents
Antimikrobiální peptidy odvozené z lidského proteinu ameloblastinu, účinné na mikrobiologických biofilmech Download PDFInfo
- Publication number
- CZ309667B6 CZ309667B6 CZ2021-572A CZ2021572A CZ309667B6 CZ 309667 B6 CZ309667 B6 CZ 309667B6 CZ 2021572 A CZ2021572 A CZ 2021572A CZ 309667 B6 CZ309667 B6 CZ 309667B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- peptides
- antimicrobial
- antimicrobial peptides
- seq
- biofilm
- Prior art date
Links
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 68
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 68
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title description 9
- 101000891247 Homo sapiens Ameloblastin Proteins 0.000 title description 5
- 102000050672 human AMBN Human genes 0.000 title description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 claims description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 9
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 claims description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 5
- 239000007943 implant Substances 0.000 claims description 4
- 238000011109 contamination Methods 0.000 claims description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010024612 Lipoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010016629 fibroma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011066 hemangioma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 210000001020 neural plate Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 239000000316 bone substitute Substances 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 102100040409 Ameloblastin Human genes 0.000 abstract description 17
- 101710081264 Ameloblastin Proteins 0.000 abstract description 15
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 244000005706 microflora Species 0.000 abstract description 2
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 46
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 11
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 9
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 230000032770 biofilm formation Effects 0.000 description 7
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 7
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- OVHQWOXKMOVDJP-UHFFFAOYSA-N melitin Chemical compound OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(OC4C(C(O)C(O)C(COC5C(C(O)C(O)C(CO)O5)O)O4)O)=C(C=4C=CC(O)=CC=4)O3)=O)=C(O)C=2)OC(C)C1O OVHQWOXKMOVDJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 210000003298 dental enamel Anatomy 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 108010029660 Intrinsically Disordered Proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 230000003214 anti-biofilm Effects 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 3
- -1 O-(Benzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate Chemical compound 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002519 electronic circular dichroism spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 102100034872 Kallikrein-4 Human genes 0.000 description 2
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N Resazurin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3[N+]([O-])=C21 PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 238000012054 celltiter-glo Methods 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 238000002212 electronic circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 2
- 108010074702 enamel matrix proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000016674 enamel mineralization Effects 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 108010024383 kallikrein 4 Proteins 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 2
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000018612 quorum sensing Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- PZEUTLIKVUEDLB-UHFFFAOYSA-N 2-[[[2-[[6-amino-2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[2-[[2-[[2-[2-[[1-[2-[[2-[[2-[[2-[[2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[2-[[2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]propanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]acetyl]amino]-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]propanoylamino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(carbamoylamino)propanoyl]-(3-amino-3-oxopropyl)carbamoyl]amino]pentanediamide Chemical compound CCC(C)C(NC(=O)CN)C(=O)NCC(=O)NC(C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NCC(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(=O)NC(C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CNC(N)=O)C(=O)N(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(N)=O PZEUTLIKVUEDLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHYPPUOVSUINHM-UHFFFAOYSA-N 4-(methylamino)phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.CNC1=CC=C(O)C=C1 OHYPPUOVSUINHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800002011 Amphipathic peptide Proteins 0.000 description 1
- 108010088365 B6 peptide Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 208000032376 Lung infection Diseases 0.000 description 1
- 108060003100 Magainin Proteins 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 1
- 241000657027 Staphylococcus aureus M1 Species 0.000 description 1
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 1
- 206010066901 Treatment failure Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 206010048038 Wound infection Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000003659 bee venom Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000005460 biophysical method Methods 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012200 cell viability kit Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000978 circular dichroism spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000000205 computational method Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000010485 coping Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 208000002925 dental caries Diseases 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- UNTJUYGLKFBQFJ-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diamine;terephthalic acid Chemical compound NCCN.OC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 UNTJUYGLKFBQFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 229940066369 honey bee venom Drugs 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000035992 intercellular communication Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- ZYKJEPLLKJALMH-UHFFFAOYSA-M sodium dodecyl sulfate phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound [Na+].FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1.CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O ZYKJEPLLKJALMH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O thiamine pyrophosphate Chemical compound CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4723—Cationic antimicrobial peptides, e.g. defensins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Řešení se týká antimikrobiálních peptidů odvozených z lidského proteinu ameloblastinu, určených k terapeutickému a biotechnologickému využití, zejména k aplikaci na vrstvy, tzv. biofilmy, pro zabránění růstu specifických kmenů bakteriální mikroflóry, k prevenci či odstranění infekčního agens z povrchu kloubních, zubních a kostních náhrad a k prevenci infikování ortopedických implantátů.
Description
Antimikrobiální peptidy odvozené z lidského proteinu ameloblastinu, účinné na mikrobiologických biofilmech
Oblast techniky
Tato přihláška se týká nových antimikrobiálních peptidů (AMP) odvozených z lidského proteinu ameloblastinu (AMBN), určených k terapeutickému a biotechnologickému využití, zejména k aplikaci na vrstvy, tzv. biofilmy, pro zabránění růstu specifických kmenů bakteriální mikroflóry.
Dosavadní stav techniky
Antimikrobiální peptidy (AMP) lze kategorizovat jako nekonvenční terapeutické molekuly, atraktivní svým potenciálem alternativní léčby vůči narůstajícímu množství infekcí tvořených bakteriemi rezistentními vůči antibiotikům. AMP vynikají svou účinností, širokým spektrem antimikrobiální aktivity, nerozvíjející se rezistencí u mikroorganismů a nízkou akumulací v tkáních. Z těchto důvodů jsou AMP vysoce zajímavé pro farmaceutické společnosti snažící se vyvinout z AMP komerčně dostupné léky. Proto také byly v posledních dvaceti letech provedeny rozsáhlé výzkumy s cílem vyhodnotit potenciál antimikrobiálních peptidů izolovaných z různých přírodních zdrojů, jako jsou obratlovci, rostliny, hmyz a bakterie, k léčbě mikrobiálních infekcí (Wang et al., Nucleic acids research 44(D1): D1087-D1093, 2016; Čeřovský, V.: EP 3570868, US 10,160,785).
AMP byly obecně charakterizovány jako typicky krátké (<100 aminokyselin), kladně nabité, amfifilní peptidy s širokým spektrem antimikrobiální aktivity vůči bakteriím a plísním či kvasinkám, se schopností interagovat s membránami a/nebo pronikat do membrán těchto mikroorganismů (Bahar et al., Pharmaceuticals 6(12): 1543-1575, 2013). Ačkoli tvorba pórů je obecně přijímaným způsobem účinku AMP, nedávný výzkum ukazuje, že některé z těchto peptidů mají další specifické účinky na mikroorganismy, které přispívají k jejich selektivní antimikrobiální aktivitě (Zhang, Song et al., Scientific reports 6(1): 1-13, 2016; Correa, et al. Biomolecules 8(1): 4, 2019). AMP mohou zároveň s antimikrobiálními účinky působit také proti rakovině, či mít antivirové vlastnosti (Felício, et al., Frontiers in chemistry 5: 5, 2017).
V posledních letech bylo věnováno rostoucí úsilí identifikaci nových terapeutických strategií schopných vyrovnat se s infekcemi spojenými s biofilmem. Bakterie organizované v biofilmu vykazují dramaticky sníženou citlivost (až 1000krát) vůči konvenčním antibiotikům, což způsobuje vysokou míru selhání léčby a přetrvávání mnoha typů infekcí (např. plicní infekce u pacientů s cystickou fibrózou, infekce ran, infekce spojené s biomateriály) (Yasir, Willcox et al., Materials 11(12): 2468, 2018).
Vzhledem k časté tvorbě biofilmů na lékařských implantátech, jednou z aktuálně zajímavých aplikací AMP je jejich imobilizace právě na takovýchto zařízeních tak, aby se zabránilo tvorbě bakteriálního biofilmu a rovněž rozvoje (chronických) infekcí spojených s biofilmem. Tato aplikace navíc nabízí řešení k překonání problémů vztahujícím se k systémovému transportu a toxicitě AMP (Hemmati, et al., Molecular Biotechnology: 1-18, 2021). Důležitým přínosem použití AMP jako kovalentních povlaků pro implantovatelné terapeutické materiály je i jejich dlouhodobá stabilita a aktivita po potažení. I když je princip tohoto použití omezený, stále více studií popisuje účinnost proti tvorbě mikrobiálního biofilmu u důležitých druhů plísní a bakterií (např. LL-37 a magainin) a pozoruhodně vysokou dlouhodobou aktivitu potažených peptidů a stabilitu za různých extrémních podmínek (Martins, et al.,Biofouling 37(1): 96-108, 2021).
Přirozeně se vyskytující AMP jsou tedy slibnými kandidáty na léčbu infekcí spojených s mikrobiálním biofilmem nebo invazivních infekcí vyvolaných patogeny, rezistentními vůči v současné době používaným antimykotickým či antimikrobiálním látkám. Syntetické peptidy a
- 1 CZ 309667 B6 peptidomimetika založená na přírodních AMP či jejich derivátech mají potenciál stát se novými (systémovými) terapeutiky, protože překonávají hlavní omezení standardních antibiotik používaných v dnešní době. Některé AMP mohou zabíjet bakterie prostřednictvím disrupce membrány a/nebo tvorby pórů či inhibice dělení bakteriálních buněk. Další potenciál AMP zahrnuje schopnost působit v různých fázích tvorby biofilmu a s různými mechanismy účinku, AMP často vykazují multirezistentní aktivitu proti bakteriálním kmenům (Raheem and Straus 2019, Frontiers in microbiology 10: 2866, 2019). AMP mohou být dále účinné vůči bakteriím mechanismem, kterým zabraňují přilnutí bakteriálních buněk k povrchu substrátu, čímž snižují intercelulární komunikaci tzv. quorum sensing (QS), anebo odstraňují předem vytvořený biofilm; jedná se o tzv. antivirulentní mechanismy působení (Raško et al., Sperandio, Nature Reviews Drug Discovery 9(2): 117-128, 2010). Antibiofilmová aktivita AMP může být také zprostředkována downregulací genů zapojených do motility a inhibice řady buněčných biologických postupů, jako je syntéza buněčných stěn, DNA, RNA a proteinů (Di Somma, et al., Biomolecules 10(4): 6520, 2020). Antibiofilmové aktivity AMP na biofilmech byly dosud studovány méně než účinek AMP na suspenzní populace mikroorganismů. K hodnocení specifické schopnosti AMP narušovat tvorbu biofilmu se používají identifikátory tzv. minimální koncentrace inhibitoru biofilmu (MBIC) minimální inhibiční koncentrace (MIC) a minimální koncentrace eradikace biofilmu (MBEC).
Další velkou výhodou AMP působících na biofilmy je jejich specifický způsob aktivity vykazující nízkou toxicitu pro eukaryotické buňky, což poskytuje příležitost k širokému terapeutickému využití (Cruz et al., BMC microbiology 18(1): 1-9, 2018). Navíc AMP často vykazují synergii s klasickými antibiotiky, neutralizují endotoxiny a jsou velmi aktivní na zvířecích modelech. Rezistence k AMP je relativně vzácná vzhledem k jejich afinitě k záporně nabité části dvouvrstvé lipidové struktury bakteriálních membrán. Kinetika inhibice růstu bakterií účinkem AMP je pak rychlejší ve srovnání s většinou konvenčních antibiotik (de Breij, et al., Science translational medicine 10(423), 2018). Výhody AMP mohou dokonce přesahovat jejich antimikrobiální účinky, neboť dokážou posílit imunitní odpověď k dalšímu boji s patogenní infekcí. Imunitní regulace vyplývá z interakce AMP s receptory hostitelské buňky (Di Somma, et al., Biomolecules 10(4): 6520, 2020).
Vzhledem k tomu, že v oboru dentálních náhrad jsou využívány mnohé anorganické matrice (titan, keramika) nabízí se možnost tyto materiály pokrýt vrstvou funkčních peptidů se specifickou aktivitou působení vůči bakteriálním kmenům v dutině ústní, způsobujícím typické infekce. Logické řešení nabízí analýza proteinů přirozeně se vyskytujících v ústní dutině, které vykazují možnou antimikrobiální aktivitu, a to především vůči biofilmu. Proteiny matrice zubní skloviny jsou dobře známé jako prekurzory jejího vzniku (Bartlett, International Scholarly Research Notices, 2013) a byly již dříve popsány v literatuře pro indukci tvorby skloviny. Proteiny matrice zubní skloviny a její deriváty jsou rovněž známé svou podporou hojení ran v měkkých tkáních, jako jsou kůže a sliznice (WO 9943344 A2, Gestrelius). Popsání podpory hojení tkaní za pomoci těchto proteinů indikovalo možnou širší antimikrobiální aktivitu proteinů matrice zubní skloviny či jejích štěpů (peptidů). Peptidy vznikající jako štěpy těchto proteinů jsou produktem enzymatického působení proteáz, z nichž nejvýznamnější jsou kalikrein-4 (KLK4) a enalysin (MMP20) (Bartlett, International Scholarly Research Notices, 2013). Jedním ze signifikantních proteinů matrice zubní skloviny je ameloblastin (AMBN). Jedná se o fosfoprotein, klasifikovaný výpočetními a biofyzikálními metodami jako vnitřně neuspořádaný (IDP) (Stakkestad, Lyngstadaas et al., Frontiers in physiology 8: 531, 2017) a tím pádem dobře přístupný pro štěpení proteázami. Na základě teoretických a experimentálních analýz AMBN a jeho derivátů byly identifikovány peptidy se specifickou antimikrobiální aktivitou vůči bakteriálním biofilmům, které jsou prezentovány v tomto vynálezu.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje nové antimikrobiální látky, odvozené z lidského proteinu ameloblastinu (AMBN), které byly cíleně upraveny za využití bioinformatických analýz a
- 2 CZ 309667 B6 molekulárního modelování a poté připraveny ve formě syntetických analogů.
Předmětem vynálezu jsou antimikrobiální peptidy o vzorcích:
AP 4.9. QGSTIFQIARLISHGPMG (A, SEKV. ID. Č.:1),
AP 4.9.1. QGHTIFQIARLISHGPM (B, SEKV. ID. Č.:2),
AP 5.10. STIFQIARLISHGPMPQNKQSPG (c, SEKV. ID. Č.:3), a
AP 5.10.1 STIFQIARLISHGAMAQNKQSP (D, SEKV. ID. Č.:4).
Předkládaný vynález rovněž zahrnuje uvedené antimikrobiální peptidy A, B, C a D pro použití jako léčiva v medicíně, zejména jako doplněk léčby onkologických onemocnění.
Onkologická onemocnění zahrnují tvorbu karcinomů zejména v oblasti dutiny ústní, jako jsou například mezenchymové benigní karcinomy fibrom, lipom, hemangiom a podobně, maligní karcinomy fibrosarkom, myelom a kostní nádory, či karcinomy neuroektodermové.
Předkládaný vynález také zahrnuje uvedené antimikrobiální peptidy A, B, C a D pro použití v biotechnologických aplikacích k prevenci růstu bakteriální kontaminace, zvláště pak k prevenci či k odstranění infekčních agens z povrchu kloubních, zubních či kostních náhrad používaných v medicíně (titanových, keramických apod.).
Předkládaný vynález dále zahrnuje uvedené antimikrobiální peptidy A, B, C a D pro výrobu prostředku k prevenci či odstranění infekčního agens z povrchu kloubních, zubních a kostních náhrad a k prevenci infikace ortopedických implantátů.
Primární role AMBN je proteinová matrice pro výstavbu zubní skloviny. Studie naznačující, že proteiny a deriváty matrice zubní skloviny podporují hojení ran v měkkých tkáních, ukázaly na možnou přítomnost proteinů či peptidů s antimikrobiální aktivitou.
Z lidského proteinu ameloblastinu (AMBN, UniProtKB - Q9NP70, AMBN_HUMAN) byly pomocí bioinformatických analýz identifikovány a poté analyzovány sekvence krátkých úseků, peptidů a jejich mutovaných analog, které byly označeny jako (A): AP4.9, (B): AP 4.9.1., (C): AP 5.10. a (D): AP 5.10.1. Peptid vzorce (B), AP4.9.1, představuje analog peptidů (A), Ap4.9, s obměnou jedné aminokyseliny, a peptid vzorce (D), AP5.10.1, představuje analog peptidů (C), AP5.10., s obměnou dvou aminokyselin. Peptidy A, B, C a D vykazují antimikrobiální účinek na mikrobiální biofilmy specifických kmenů bakterií vyskytujících se v ústní dutině.
Objasnění výkresů
Obrázek 1 předkládá ECD spektra peptidů A, SEKV. ID. Č.: 1; B, SEKV. ID. Č.: 2; C, SEKV. ID. Č.: 3; D, SEKV. ID. Č.: 4 v přítomnosti 0 %, 10 %, 30 % a 50 % (obj./obj.) TFE ve vodě MQ. CD spektra byla vyjádřena jako molární elipticita Q (deg cm2dmol-1) na jedno reziduum.
Příklady uskutečnění vynálezu
Seznam uvedených zkratek:
ACPs
AMP
APD
CD
ECD spektrum
HBTU peptidy s účinkem proti rakovině (z angl. Anti Cancer Peptides) antimikrobiální peptidy (z angl. Antimicrobial Peptides) databáze antimikrobiálních peptidů (z angl. Antimicrobial Peptides Database) cirkulární dichroismus elektronický cirkulární dichroismus
O-(Benzotriazol-1 -yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium hexafluorofosfát
- 3 CZ 309667 B6 hc50
IC5O IDP MBIC50 MBEC50 MIC50 MMP N-Fmoc PBS PMSF SDS SDS-PAGE TEV RP-HPLC RT
EDTA MQ voda koncentrace, při níž je lyžována polovina červených krvinek (hernolýza) inhibiční koncentrace při 50% cytotoxicitě vnitřně neuspořádaný protein (z angl. Intrinsically Disordered Protein) minimální koncentrace pro 50% inhibici biofilmu minimální koncentrace pro 50% eradikaci biofilmu minimální inhibiční koncentrace k 50% snížení nárůstu suspenzních buněk metaloproteázy fluorenylmethyloxykarbonyl (chránící skupina pro organické syntézy) fosfátový pufr fenylmethylsulfonylfluorid dodecylsíran sodný elektroforéza v polyakrylamidovém gelu virus tabákové mozaiky vysoceúčinná kapalinová chromatografie na nepolárním sorbentu při teplotě místnosti (z angl. room tempearture) ethylendiamin tereftalová kyselina ultrafiltrovaná voda od firmy Merck
Studie probíhaly na bakteriálních kmenech: Enterococcus faecalis DBM 3075, CNCTC 5530, CNCTC 5483, M-1; Staphylococcus aureus CNCTC 5670 (ATCC 12600), CNCTC 6271 (ATCC 43300), 3178 (ATCC 29213); a Escherichia coli DBM 3125 (ATCC 10536), DBM 3138, B (tabulka č 1 až 3). Antimikrobiální efekt identifikovaných AMP je doprovázený velmi mírnou cytotoxickou aktivitou a téměř nulovou hemolytickou aktivitou (tabulka č. 4 a 5). Peptidy A, B, C a D vykazují antimikrobiální vlastnosti pouze na biofilmech specifických bakteriálních kmenů, antimikrobiální aktivita AMP v roztoku nebyla prokázána jako signifikantní. Tento fakt naznačuje na možné přirozené působení peptidových štěpů AMBN proti mikrobiálním filmům přítomným například na zubní sklovině. Sekundární struktura AMPs je ve vodném prostředí neuspořádaná, ale snadno přechází na α-helikální strukturu v přítomnosti sloučenin indukujících a-helix, jako je trifluorethanol (obrázek č. 1, tabulka č. 6). Potenciál tvořit indukovanou helikální strukturu AMPs ukazuje na možnost antimikrobiální aktivity mechanismem tvorby helikálních pórů v membráně buňky a jejího narušení. Avšak silnějším faktorem je zřejmě specifické působení peptidů na tvorbu konkrétních bakteriálních kmenů tvořících biofilmy. Předkládané peptidy vykázaly významnou antimikrobiální aktivitu vůči biofilmu, testovanou pomocí eradikace a adheze.
Tabulka 1: Vliv studovaných antimikrobiálních peptidů A, B, C a D na suspenzní růst zástupců druhu Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus a Escherichia coli. (MIC50 - minimální koncentrace pro 50% inhibici)
| MIC50 (pmol.r1) | ||||
| A | B | c | D | |
| E. faecalis DBM 3075 | ★ | * | * | ik |
| CNCTC 5530 | * | Λ | fc | * |
| CNCTC 5483 | * | * | * | |
| M-1 | * | * | ·* | |
| S. aureus CNCTC 5670 | * | * | 200 | 200 |
| DBM 3138 | * | i | * | * |
| CNCTC 6271 | ★ | * | A | |
| M-1 | * | * | -k | * |
| E. goIí DBM 3125 | ★ | -λ | 300 | 150 |
| DBM 3138 | A | ★ | * | * |
| CCM 4787 | * | λ | * | 300 |
| B | * | *· | * | * |
*nebylo stanoveno ve studovaném koncentračním rozmezí (50 až 300 pmol.l1)
-4 CZ 309667 B6
Tabulka 2: Vliv peptidů A a B na tvorbu biofilmu a eradikaci zralého biofilmu Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus a Escherichia coli.
| MBICsd | A (μπιοΙ.Ι'1) | MBECso | B (pmol.l-1) | ||||||
| MBICbo | MBECso | MBICso | MBICeo | MBECso | MBECso | ||||
| E. faecalis | DBM 3075 | 200 | 300 | 50 | 150 | 200 | 150 | ft | |
| CNCTC 5530 | 300 | * | ft | * | 300 | ft | ft | ft | |
| CNCTC 5483 | 300 | * | ft | ft | 300 | ft | ft | ft | |
| M-1 | 300 | * | ft | ft | 300 | ft | ft | * | |
| S. aureus | CNCTC 5670 | 150 | * | 300 | ft | 200 | ft | 50 | ft |
| DBM 3138 | 300 | * | ft | ft | 150 | ft | ft | ft | |
| CNCTC 6271 | 200 | * | ft | ft | 200 | ft | 300 | ft | |
| M-1 | * | ft | ft | ft | ft | ft | ft | ||
| E. coli | DBM 3125 | * | 100 | ft | 150 | ★ | 100 | ft | |
| DBM 3138 | 150 | 150 | 150 | ft | 150 | ft | 160 | ft | |
| CCM 4787 | 300 | * | ft | ft | ft | ft | ft | ft | |
| B | 50 | 100 | 200 | ft | 150 | 150 | 150 | ft |
*nebylo stanoveno ve studovaném koncentračním rozmezí (50 až 300 pmol.l1)
Tabulka 3: Vliv peptidů C a D na tvorbu biofilmu a eradikaci zralého biofilmu Enterococcus ίο faecalis, Staphylococcus aureus a Escherichia coli.
-5 CZ 309667 B6
C (jjmot.l·1) D fpmol l·1)
| MBICao | MBICsa | MBECso | MBECa: | MBICw | MBlCeo | MBEC^c | MBECeo | |
| E. DBM | 200 | 300 | • | * | 200 | 300 | 300 | * |
| faecalis 3075 CNCTC | * | a | • | A | A | * | A | |
| 5530 CNCTC | A | * | * | * | * | * | t | |
| 5483 M-1 | * | * | 200 | * | 300 | * | 300 | A- |
| S. CMCTC | 200 | * | * | * | 300 | * | * | |
| aureus 5670 DBM | * | Ir | A | ★ | * | * | A | Sr |
| 3138 CNCTC | 300 | 300 | 300 | * | 300 | 300 | 300 | * |
| 6271 M-1 | 300 | * | λ | 300 | * | A | * | |
| E. coli DBM | A | * | * | * | 300 | A | * | * |
| 3125 DBM | 200 | * | * | * | 150 | A | A | * |
| 3138 CCM | A | * | 300 | * | 300 | * | 200 | a- |
| 4787 B | 150 | 150 | Λ | 50 | 200 | * | * |
*nebylo stanoveno ve studovaném koncentračním rozmezí (50 až 300 pmol.l1)
Příklad 1
Identifikace peptidů
Antimikrobiální peptidy byly identifikovány ze sekvence AMBN (AMBN, UniProtKB - Q9NP70, AMBN HUMAN) kombinací různých přístupů bioinformatických nástrojů, sloužících k predikci antimikrobiální aktivity krátkých proteinových sekvencí. Analýzou bylo predikováno celkem šest krátkých úseků, z nichž následně vykázaly signifikantní antimikrobiální aktivitu na biofilmech dva peptidy A a C. Z těchto peptidů byly poté navrženy dva jejich analogy označené jako B a D pomocí racionálního designu metodami molekulového modelování. Navržené analogy C a D vykazují vyšší antimikrobiální aktivitu na biofilmech než peptidy A a B.
Příklad 2
Syntéza peptidů
Všechny peptidy v této studii byly chemicky syntetizovány a purifikovány na >97% čistotu. Peptidy byly solubilizovány v destilované vodě a jejich koncentrace byly stanoveny pomocí aminokyselinové analýzy.
Peptidy odvozené z AMBN (AMBN, UniProtKB - Q9NP70, AMBN HUMAN), označené jako A, B, C a D, byly syntetizovány technikou syntézy peptidů na pevné fázi podle standardního protokolu V-Fmoc. Byly připraveny na pryskyřici TentaGel S RAM (431 mg s 0,24 mmol/g substitucí) na automatickém syntetizátoru peptidů PS3 (Protein Technologies, Tucson, AZ). Aminokyseliny chráněné V-Fmoc (10 ekv.) byly spojeny za použití 0,4 mol.11 V-methylmorfolinu v ΛζΑ-dimethylformamidu (DMF, 20 ekv.) a HBTU (10 ekv.) v V-methyl-2-pyrrolidonu. Deprotekce α-aminoskupiny byly provedeny pomocí 20% (obj./obj.) piperidinu v DMF. Peptidy byly zcela zbaveny ochrany a odštěpeny z pryskyřice směsí TFA/H20//triisopropylsilan (92,5:5:2,5) po dobu 2 hodin a poté vysráženy fórc-butylmethyletherem. Všechny peptidy byly purifikovány pomocí RP-HPLC (Jasco lne.) na (5 pm, 250 x 20 mm) YMC-Pack ODS-AM koloně. Identita a čistota syntetických peptidů byly potvrzeny pomocí Agilent 1260 HPLC (Agilent Technologies) spojené s ESI-TOF Agilent 6530 (Agilent Technologies) s technologií Agilent Jet Stream. Čistota všech
-6CZ 309667 B6 peptidů byla >97 %.
Příklad 3
Použité mikroorganismy a podmínky kultivace
Byly studovány tři druhy mikroorganismů, které se vyskytují v ústní dutině nebo způsobují zubní kaz:
Enterococcus faecalis DBM 3075 je klinický izolát z Fakultní nemocnice Bulovka v Praze a byl poskytnut z Ústavu biochemie a mikrobiologie, VŠCHT Praha. Kontrolní kmeny E. faecalis pro testování antimikrobiálních léčiv CNCTC 5530 (ATCC 51299) a CNCTC 5483 (ATCC 29212) byly získány z České národní sbírky typových kultur. E. faecalis M-1 představuje klinický izolát z Fakultní nemocnice Motol v Praze.
Staphylococcus aureus CNCTC 5670 (ATCC 12600) představuje typový kmen získaný z České národní sbírky typových kultur v Praze. Ze stejné sbírky byl rovněž získán methicillin-rezistentní kmen S. aureus CNCTC 6271 (ATCC 43300). Dále byl studován k methicillinu citlivý kmen S. aureus DBM 3178 (ATCC 29213) poskytnutý Ústavem biochemie a mikrobiologie, VŠCHT Praha a S. aureus M-1 izolovaný z infikované kloubní náhrady ve Fakultní nemocnici Motol v Praze.
Kontrolní kmeny pro testování antibiotik Escherichia coli DBM 3125 (ATCC 10536) a DBM 3138 (ATCC 8739) byly poskytnuty Ústavem biochemie a mikrobiologie, VŠCHT Praha. Dále byly studovány kmen E. coli CCM 4787 (sérovar 0157:H7) a E.coli CCM 7372 (kmen B) získané z České sbírky mikroorganismů Masarykovy university v Brně.
Před provedením experimentů studujících antimikrobiální a antibiofilmový účinek studovaných peptidů na mikrobiální buňky byl každý mikroorganismus zaočkován do tekutého média, v případě E. faecalis a S. aureus do trypton-sojového bujónu a v případě E. coli do Luria-Bertanni média, a kultivován při 37 °C a 150 rpm (otáček za minutu) po dobu 24 h.
Příklad 4
Studium účinku AMP na suspenzní růst mikroorganismů
Vliv AMP na suspenzní růst mikroorganismů byl posouzen pomocí kultivace v mikrokultivačním zařízení Bioscreen C (LabSystems, Finsko), jak popsala Maťátková a spol (Matatkova et al., Int J Anal Chem, 8195329, 2017). Ve zkratce, připravené inokulum (viz příklad 3) bylo upraveno na optickou denzitu OD600nm = 0,1 (CFU/ml = 2,5x107) a následně bylo v objemu 30 pl smícháno s 290 pl příslušného média a roztoku testovaného peptidu v polystyrenové mikrotitrační destičce Honeycomb 2 (Growth Curves, USA). Kultivace buněk probíhala v mikrokultivačním zařízení po dobu 24 h při 37 °C a 150 rpm. Každých 30 min byla proměřena optická denzita obsahu jamek a z výsledných dat byly sestaveny růstové křivky odrážející suspenzní růst buněk v každé jamce mikrotitrační destičky. Každý experiment obsahoval kontrolní vzorky bez přídavku antimikrobiálních látek a všechny experimenty byly provedeny v technických triplikátech. Z naměřených dat byla následně stanovena minimální inhibiční koncentrace (MIC50), tedy taková nejnižší koncentrace studované látky, která již způsobila alespoň 50% pokles nárůstu suspenzních buněk po 24 h kultivaci.
Příklad 5
Studium účinku AMP na tvorbu biofilmu a eradikaci již zralého biofilmu mikroorganismů
Vliv AMP na tvorbu biofilmu byl studován v polystyrenových mikrotitračních destičkách dle postupu popsaného ve Vaňková a spol (Vaňkova et al., World J Microbiol Biotechnol, 36(7):101,
- 7 CZ 309667 B6
2020). Ve zkratce, připravené inokulum (viz příklad 3) bylo upraveno na OD600nm = 0,8 (CFU/ml = 2x108) a následně bylo v objemu 210 pl smícháno s 70 pl příslušného růstového média a roztoku studovaného peptidu v polystyrénové mikrotitrační destičce TPP96 (TPP, Švýcarsko). Biofilm byl tvořen staticky při 37 °C po dobu 24 h.
Vliv AMP na eradikaci již zralého biofilmu byl studován analogicky uvedenému postupu. Nejprve byl kultivován samotný biofilm bez přidané antimikrobiální látky. Inokulum bylo v tomto případě upraveno na OD600nm = 0,6 (CFU/ml = 1,5x108) a pipetováno do jamek mikrotitrační destičky v objemu 200 pl. Kultivace probíhala 24 h při 37 °C staticky. Vytvořený biofilm byl promyt fyziologickým roztokem a byly k němu pipetovány příslušné roztoky studovaných peptidů a růstové médium do finálního objemu 200 pl. Kultivace probíhala, jak popsáno výše. Všechny experimenty obsahovaly kontrolní vzorky bez přídavku antimikrobiální látky a blank (vzorky bez suspenze buněk). Všechny experimenty byly provedeny v technickém triplikátu.
Příklad 6
Stanovení metabolické aktivity buněk biofilmu
Metabolická aktivita buněk biofilmu byla stanovena pomocí resazurinu. K promytému biofilmu bylo pipetováno 25 pl roztoku D-glukosy (180 g/l ve fyziologickém roztoku), 25 pl roztoku resazurinu (0,15 g/l ve fyziologickém roztoku) a 100 pl fyziologického roztoku. Biofilm byl fluorimetricky změřen hned, nebo v případě E. coli inkubován 30 min při 37 °C a následně změřen. Intensita fluorescence byla stanovena při 545/575 nm v destičkovém spektrofotometru Infinite M200 Pro Reader (Tecan, Švýcarsko). Z výsledných dat bylo odečteno průměrné pozadí (intensita fluorescence blanku) a vypočítán průměr a směrodatná odchylka, které byly pro lepší srovnání kmenů i peptidů převedeny na relativní procenta. Experimenty byly provedeny v technických triplikátech.
Na základě stanovené metabolické aktivity byly určeny parametry vyjadřující antibiofilmovou účinnost studovaných látek. Minimální koncentrace inhibující biofilm (MBIC50, resp. MBICsc) představuje nejnižší studovanou koncentraci dané látky, která již způsobí 50%, resp. 80% pokles metabolické aktivity buněk biofilmu tvořeného v přítomnosti dané látky. Analogicky, minimální koncentrace eradikující biofilm (MBIC50, resp. MBEC80) představuje nejnižší studovanou koncentraci dané látky, která již způsobí 50% resp. 80% pokles metabolické aktivity buněk zralého biofilmu eradikovaného danou látkou.
Příklad 7
Hemolytická esej
Hemolytická aktivita studovaných antimikrobiálních peptidů byla hodnocena in vitro za použití lidské krve. Pro testování hemolýzy byla použita čerstvá krev odebraná do zkumavky s citrátem sodným jako antikoagulans. Melitin, amfipatický peptid z jedu včely medonosné, byl použit jako pozitivní kontrola, protože vykazuje lytickou aktivitu proti různým buňkám (včetně červených krvinek) v submikromolárních koncentracích. Hemolytická aktivita testovaných látek pak byla vztažena k hemolýze, vyvolané 0,5% Tritonem X-100, který při této koncentraci způsobil 100% hemolýzu. Koncentrace, při níž je lyzována polovina červených krvinek (hodnota hemolytické aktivity HC50), představuje ukazatel toxicity testovaných peptidů.
Plná krev (1 ml) zředěná v PBS (9 ml) byla odstředěna (800 x g, 15 min., RT) a následně byla peleta červených krvinek pětkrát promyta 10 ml PBS (800 x g, 15 min., RT). Po odstranění supernatantu byla promytá peleta červených krvinek naředěna PBS na koncentraci 0,5 % (obj./obj.) a 50 pl vzniklé suspenze bylo přeneseno do 96 jamkové mikrotitrační destičky. Poté bylo přidáno 50 pl dvakrát koncentrovaných roztoků peptidů (testované antimikrobiální peptidy v koncentracích 12,5 až 300 pmol.l-1, Melitin 0,024 až 50 pmol.l-1 výsledně, dvojkové ředění), samotný PBS a 0,5%
- 8 CZ 309667 B6
Triton X-100. Mikrotitrační destička se vzorky byla inkubována 60 minut při 37 °C a odstředěna (1000 x g, 15 min., RT). 40 μΐ supernatantu z každé jamky bylo následně přeneseno do transparentní 384 jamkové destičky. Absorbance supernatantu byla změřena při 415 nm pomocí čtečky mikrotitračních destiček (Cytation 3, BioTek, USA).
Tabulka 4: Hemolytická aktivita AMP A, B, C a D, měřená v oblasti 12,5 až 100 (300) pmol.l-1 na vzorku lidské krve a vyjádřená jako HC50.
Peptid
A
B
C
D Melitin
Hemolytická aktivita HC50 (pmol.l-1) »> 300 » 300 »> 300 - 300 0,79
Příklad 8
Testy cytotoxicity s použitím lidských endoteliálních buněk HUVEC a HCT 116
Buněčné kultury:
Primární lidská buněčná kultura HUVEC (endoteliální buňky lidské pupečníkové žíly, Lonza) byla udržována v růstovém médiu pro endoteliální buňky EGM™-2 (Lonza) doplněném 10% (obj./obj.) tepelně inaktivovaným fetálním bovinním sérem (FBS) při 37 °C ve zvlhčené atmosféře s 5 % CO2. Dvakrát týdně, když buňky dosáhly 80 až 90% konfluence, byly subkultivovány pomocí roztoku 0,25% trypsinu/0,53 mmol.l-1 EDTA pro další pasáž.
Lidská buněčná linie rakoviny tlustého střeva HCT 116 (ATCC) byla udržovaná v růstovém médiu McCoy's 5A (Sigma Aldrich) doplněném 10% (obj./obj.) tepelně inaktivovaným fetálním bovinním sérem (FBS) ve zvlhčené atmosféře s 5 % CO2. Dvakrát týdně, když buňky dosáhly 80 až 90% konfluence, byly subkultivovány pomoci 0,25% roztoku trypsinu/0,53 mmol.l-1 EDTA pro další pasáž.
Testy cytotoxicity:
Ke zjištění cytotoxicity testovaných antimikrobiálních peptidů byl použit kit CellTiter-Glo® Luminiscent Cell Viability Assay (Promega). Buňky byly kultivovány podle výše uvedeného popisu a experiment byl proveden podle návodu výrobce. 10 000 buněk HUVEC (50 pl) bylo přeneseno do každé z jamek bílé 96 jamkové destičky (BD Biosciences™). Buňky pak byly kultivovány po dobu 24 hodin před přidáním 50 pl dvakrát koncentrovaných roztoků testovaných peptidů nebo samotného EGM™-2 média (kontrolní vehikulum) do každé jamky. Po dalších 72 hodinách bylo do každé jamky přidáno 100 μΐ činidla CellTiter-Glo® (Promega) a 96 jamková destička byla míchána 2 minuty při 400 otáčkách za minutu na orbitální třepačce ve tmě. Následně byl luminiscenční signál ponechán 10 min stabilizovat při teplotě místnosti. Luminiscence byla zaznamenána pomocí mikrotitračního luminometru (Cytation 3, BioTek, USA). V tomto testu intenzita luminiscence přímo koreluje s počtem živých buněk. Získané údaje byly normalizovány a hodnoty IC50 byly vypočteny nelineární regresní analýzou za předpokladu sigmoidální křivky odezvy na koncentraci s proměnlivým Hillovým sklonem (software GraphPadPRISM® 7).
Tabulka 5: Cytotoxická aktivita AMP A, B, C a D, měřená v oblasti 12,5 až 100 (300) pmol.l-1 na HCT116 a HUVEC buněčných liniích, vyjádřená jako IC50.
-9CZ 309667 B6
Cytotoxická aktivita ICso (μιτοΙ.I'1)
| Peptid /buněčná linie | HCT116 | HUVEC |
| A | »> 100 | »> 300 |
| B | >» 100 | >300 |
| C | >» 100 | »> 300 |
D »> 1 DO ~ 300
Příklad 9
Měření cirkulárního dichroismu (CD)
Spektra elektronického cirkulárního diochroismu (ECD) všech AMP byla naměřena pomocí spektrometru Jasco J-815 CD (Jasco Corporation, Tokio, Japonsko) ve spektrálním rozsahu 200 až 300 nm s použitím křemenné cely o délce 0,1 cm při RT. Experimentální uspořádání bylo následující: rozlišení kroku 0,5 nm, rychlost 10 nm/min, doba odezvy 16 s a šířka pásma 1 nm. Koncentrace vzorku byla udržována konstantní 0,1 mg/ml v MQ vodě (pH = 7,5). Vzorky byly také měřeny se směsí trifluorethanolu (TFE) (0 %, 25 % a 50 % obj./obj. TFE). Po korekci základní linie byla konečná spektra vyjádřena jako molární elipticita 0 (degcm2dmol-1) na jedno aminokyselinové residuum. Obsah sekundární struktury byl stanoven pomocí online programu pro analýzu cirkulárního dichroismu Dichroweb software (Lee Whitmore a B. A. Wallace, Nucleic Acids Res., 32: W668 - W673, 2004). Obsah sekundární struktury všech analyzovaných AMP prokázal jejich nestrukturovaný charakter s potenciálem tvořit helikální strukturu se zvyšující se koncentrací TFE. Výsledky měření CD jsou uvedené na obr. č. 1 a v tab. č. 6.
Tabulka 6: Vypočítaná incidence (%) sekundárního strukturálního obsahu. Peptidy A, B, C a D byly studovány CD spektroskopií v přítomnosti 0 %, 10 %, 30 % a 50 % (obj./obj.) TFE v MQ vodě.
| Sekundární struktura, % | |||||
| AMP | TFE, % | alfa-helix | beta-list | smyčka | nestrukturovaná |
| A | 0 | 6% | 32% | 24% | 38% |
| A | 25 | 9% | 31% | 24% | 36% |
| A | 50 | 25% | 23% | 23% | 30% |
| B | 0 | 6% | 35% | 23% | 0% |
| B | 25 | 7% | 35% | 23% | 35% |
| B | 50 | 34% | 14% | 23% | 28% |
| C | 0 | 6% | 37% | 23% | 35% |
| C | 25 | 8% | 36% | 23% | 34% |
| C | 50 | 34% | 13% | 24% | 30% |
| D | 0 | 5% | 38% | 22% | 35% |
| D | 25 | 6% | 40% | 22% | 32% |
| D | 50 | 25% | 26% | 19% | 29% |
- 10CZ 309667 B6
Průmyslová využitelnost
Nové antimikrobiální peptidy jsou uvažovány pro selektivní využití na mikrobiálních biofilmech, 5 k prevenci růstu bakteriální a fungální kontaminace, například kloubních náhrad či jiných implantátů. Aplikace antimikrobiálních peptidů je použitelná v oblasti medicíny a biotechnologií.
Claims (5)
1. Antimikrobiální peptidy maj ící vzorce: QGSTIFQIARLISHGPMG A, SEKV. ID. Č.: 1,
QGHTIFQIARLISHGPM B, SEKV. ID. Č.: 2,
STIFQIARLISHGPMPQNKQSPG C, SEKV. ID. Č.: 3, a STIFQIARLISHGAMAQNKQSP D, SEKV. ID. Č.: 4.
2. Antimikrobiální peptidy A, B, C a D podle nároku 1 pro použití jako léčiva, zejména jako antimikrobiální léčiva.
3. Použití antimikrobiálních peptidů A, B, C a D podle nároku 1 jako doplňku při léčbě onkologických onemocnění týkajících se tvorby karcinomů v oblasti dutiny ústní, jako jsou mezenchymové benigní karcinomy fibrom, lipom a hemangiom, maligní karcinomy fibrosarkom, myelom a kostní nádory, či karcinomy neuroektodermové.
4. Použití antimikrobiálních peptidů A, B, C a D podle nároku 1 v biotechnologických aplikacích při prevenci růstu bakteriální kontaminace, zvláště pak při prevenci či odstranění infekčních agens z povrchu kloubních, zubních či kostních náhrad používaných v medicíně.
5. Použití antimikrobiálních peptidů A, B, C a D podle nároku 1 pro výrobu prostředku účinného při prevenci či odstranění infekčního agens z povrchu kloubních, zubních a kostních náhrad a při prevenci infikace ortopedických implantátů.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2021-572A CZ309667B6 (cs) | 2021-12-16 | 2021-12-16 | Antimikrobiální peptidy odvozené z lidského proteinu ameloblastinu, účinné na mikrobiologických biofilmech |
| PCT/CZ2022/050133 WO2023109991A1 (en) | 2021-12-16 | 2022-12-15 | Antimicrobial peptides derived from human ameloblastin protein, effective on microbial biofilms |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2021-572A CZ309667B6 (cs) | 2021-12-16 | 2021-12-16 | Antimikrobiální peptidy odvozené z lidského proteinu ameloblastinu, účinné na mikrobiologických biofilmech |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2021572A3 CZ2021572A3 (cs) | 2023-06-28 |
| CZ309667B6 true CZ309667B6 (cs) | 2023-06-28 |
Family
ID=85122043
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2021-572A CZ309667B6 (cs) | 2021-12-16 | 2021-12-16 | Antimikrobiální peptidy odvozené z lidského proteinu ameloblastinu, účinné na mikrobiologických biofilmech |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ309667B6 (cs) |
| WO (1) | WO2023109991A1 (cs) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20180011725A (ko) * | 2016-07-25 | 2018-02-02 | 시즈오카켄 | 간외 담관암, 간내 담관암, 또는 담낭암의 진단용 바이오 마커 |
| WO2021046498A1 (en) * | 2019-09-08 | 2021-03-11 | University Of Kansas | Mitigation of peri-implantitis by design and stability of bifunctional peptides with antimicrobial properties |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100150985A1 (en) * | 2008-04-24 | 2010-06-17 | George Just | Dental Implant, Endodontic Instrument, and Dental Filling Material Coated with a Peptide-Based Antimicrobial and Methods of Using and Making the Same |
-
2021
- 2021-12-16 CZ CZ2021-572A patent/CZ309667B6/cs unknown
-
2022
- 2022-12-15 WO PCT/CZ2022/050133 patent/WO2023109991A1/en unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20180011725A (ko) * | 2016-07-25 | 2018-02-02 | 시즈오카켄 | 간외 담관암, 간내 담관암, 또는 담낭암의 진단용 바이오 마커 |
| WO2021046498A1 (en) * | 2019-09-08 | 2021-03-11 | University Of Kansas | Mitigation of peri-implantitis by design and stability of bifunctional peptides with antimicrobial properties |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BEYELER, MICHAEL, ET AL.: "Identification of a fibronectin interaction site in the extracellular matrix protein ameloblastin", EXPERIMENTAL CELL RESEARCH, vol. 316, no. 7, pages 1202 - 1212, XP093019751, ISSN: 0014-4827, DOI: 10.1016/j.yexcr.2009.12.019 * |
| KOIDOU, VASILIKI P., ET AL.: "Peptide coatings enhance keratinocyte attachment towards improving peri-implant mucosal seal", BIOMATERIALS SCIENCE, vol. 6, no. 7, pages 1936 - 1945, XP093019739, ISSN: 2047-4830, DOI: 10.1039/C8BM00300A * |
| LIN, PING, ET AL.: "The antibacterial effects of an antimicrobial peptide human β-defensin 3 fused with carbohydrate-binding domain on Pseudomonas aeruginosa PA14", CURRENT MICROBIOLOGY, vol. 71, no. 2, pages 170 - 176, XP093019753, ISSN: 0343-8651, DOI: 10.1007/s00284-015-0814-x * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2021572A3 (cs) | 2023-06-28 |
| WO2023109991A1 (en) | 2023-06-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11548912B2 (en) | Antimicrobial compounds | |
| JP6220398B2 (ja) | ヒルの全唾液抽出物 | |
| US9085608B2 (en) | Treatment of biofilms | |
| Liu et al. | Effect of the antimicrobial decapeptide KSL on the growth of oral pathogens and Streptococcus mutans biofilm | |
| Lin et al. | Truncated antimicrobial peptides from marine organisms retain anticancer activity and antibacterial activity against multidrug-resistant Staphylococcus aureus | |
| EP3280722B1 (en) | Antimicrobial peptides and their use for the treatment of topical infections | |
| Zhang et al. | Modification of the surface of titanium with multifunctional chimeric peptides to prevent biofilm formation via inhibition of initial colonizers | |
| Libardo et al. | Hybrid peptide ATCUN-sh-Buforin: Influence of the ATCUN charge and stereochemistry on antimicrobial activity | |
| Pizzo et al. | Novel bioactive peptides from PD-L1/2, a type 1 ribosome inactivating protein from Phytolacca dioica L. Evaluation of their antimicrobial properties and anti-biofilm activities | |
| CN101970459A (zh) | 抗微生物化合物 | |
| Winfred et al. | Antimicrobial activity of cationic peptides in endodontic procedures | |
| Park et al. | Bactericidal activities and action mechanism of the novel antimicrobial peptide Hylin a1 and its analog peptides against Acinetobacter baumannii infection | |
| Rapireddy et al. | RTD-1Mimic Containing γPNA Scaffold Exhibits Broad-Spectrum Antibacterial Activities | |
| Lundy et al. | Natural antimicrobials in the dental pulp | |
| Ben Hur et al. | Antimicrobial peptides against multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa biofilm from cystic fibrosis patients | |
| Singh et al. | Lipidated α/Sulfono-α-AA heterogeneous peptides as antimicrobial agents for MRSA | |
| Thankappan et al. | Antimicrobial and antibiofilm activity of designed and synthesized antimicrobial peptide, KABT-AMP | |
| Masadeh et al. | The antimicrobial effect against multi-drug resistant bacteria of the SK4 peptide: A novel hybrid peptide of cecropin-A and BMAP-27 | |
| Ramalho et al. | The synthetic antimicrobial peptide IKR18 displays anti-infectious properties in Galleria mellonella in vivo model | |
| CZ309667B6 (cs) | Antimikrobiální peptidy odvozené z lidského proteinu ameloblastinu, účinné na mikrobiologických biofilmech | |
| Al Tall et al. | The design and functional characterization of a novel hybrid antimicrobial peptide from Esculentin-1a and melittin | |
| CN112625106A (zh) | 一种抗菌多肽化合物、合成方法及其应用 | |
| Li et al. | Development of Antibacterial Peptides with Membrane Disruption and Folate Pathway Inhibitory Activities against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus | |
| CN113952339A (zh) | 化合物fdefa1在制备革兰氏阳性球菌抑制剂中的用途 | |
| CN106478811B (zh) | 虎纹蛙蛋白酶抑制肽及其基因和在制药中的应用 |