CZ307768B6 - 2-β-Anilidovinyl-N-alkylheteroaromatická dimethiniová sůl a její použití jako duální proba pro mitochondriální a lysozomální vizualizaci - Google Patents
2-β-Anilidovinyl-N-alkylheteroaromatická dimethiniová sůl a její použití jako duální proba pro mitochondriální a lysozomální vizualizaci Download PDFInfo
- Publication number
- CZ307768B6 CZ307768B6 CZ2016-682A CZ2016682A CZ307768B6 CZ 307768 B6 CZ307768 B6 CZ 307768B6 CZ 2016682 A CZ2016682 A CZ 2016682A CZ 307768 B6 CZ307768 B6 CZ 307768B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- alkyl
- fluorescence
- dimethinium
- lysosomes
- salt
- Prior art date
Links
- 239000000523 sample Substances 0.000 title claims abstract description 52
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 26
- 238000012800 visualization Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 title abstract description 12
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 title abstract description 12
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 claims abstract description 43
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 claims abstract description 41
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 claims abstract description 36
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 claims abstract description 11
- -1 C1-C8 alkyl sulfonic acid Chemical compound 0.000 claims description 11
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical group I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical group CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical group [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical group [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical group [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical group [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical group [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical group [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical group OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical group OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical group [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000010452 phosphate Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000001494 2-propynyl group Chemical group [H]C#CC([H])([H])* 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 229910052792 caesium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical compound [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 claims description 3
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 3
- 229910052701 rubidium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- IGLNJRXAVVLDKE-UHFFFAOYSA-N rubidium atom Chemical compound [Rb] IGLNJRXAVVLDKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 71
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 33
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 19
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 16
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 14
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 13
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 10
- 239000010981 turquoise Substances 0.000 description 10
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 8
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 6
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 4
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 4
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 3
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- RUVJFMSQTCEAAB-UHFFFAOYSA-M 2-[3-[5,6-dichloro-1,3-bis[[4-(chloromethyl)phenyl]methyl]benzimidazol-2-ylidene]prop-1-enyl]-3-methyl-1,3-benzoxazol-3-ium;chloride Chemical compound [Cl-].O1C2=CC=CC=C2[N+](C)=C1C=CC=C(N(C1=CC(Cl)=C(Cl)C=C11)CC=2C=CC(CCl)=CC=2)N1CC1=CC=C(CCl)C=C1 RUVJFMSQTCEAAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WFOTVGYJMFZMTD-UHFFFAOYSA-N 3',10'-dihydroxyspiro[2-benzofuran-3,7'-benzo[c]xanthene]-1-one Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C(C=CC=1C3=CC=C(O)C=1)=C3OC1=CC(O)=CC=C21 WFOTVGYJMFZMTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGHINSLFCBMCFS-UHFFFAOYSA-N 7h-benzo[c]xanthene Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2C2=C1CC1=CC=CC=C1O2 RGHINSLFCBMCFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000006539 C12 alkyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002490 anilino group Chemical group [H]N(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N anthracene Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C21 MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001454 anthracenes Chemical class 0.000 description 2
- XJHABGPPCLHLLV-UHFFFAOYSA-N benzo[de]isoquinoline-1,3-dione Chemical class C1=CC(C(=O)NC2=O)=C3C2=CC=CC3=C1 XJHABGPPCLHLLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000000695 excitation spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000003269 fluorescent indicator Substances 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 125000002080 perylenyl group Chemical group C1(=CC=C2C=CC=C3C4=CC=CC5=CC=CC(C1=C23)=C45)* 0.000 description 2
- CSHWQDPOILHKBI-UHFFFAOYSA-N peryrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=3C2=C2C=CC=3)=C3C2=CC=CC3=C1 CSHWQDPOILHKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WVIICGIFSIBFOG-UHFFFAOYSA-N pyrylium Chemical class C1=CC=[O+]C=C1 WVIICGIFSIBFOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine thiocyanate Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=C(SC#N)C=C1C(O)=O JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001018 xanthene dye Substances 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000006702 (C1-C18) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004209 (C1-C8) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- FZSXKNJOKINZSF-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-2-yl-1,3-thiazole Chemical class C1=CSC(C=2N=CC=CC=2)=N1 FZSXKNJOKINZSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMEIWXSEUINTRW-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-2-pyridin-2-yl-5-thiophen-2-yl-1,3-thiazole Chemical compound CC=1N=C(SC=1C=1SC=CC=1)C1=NC=CC=C1 SMEIWXSEUINTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JQVIDJJOHLALHF-UHFFFAOYSA-N 5-carboxynaphthofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C1C(C=1C(=C2C=CC(O)=CC2=CC=1)O1)=C2C1=C1C=CC(=O)C=C1C=C2 JQVIDJJOHLALHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWSNLYPKRXALAA-UHFFFAOYSA-N 6-carboxynaphthofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C(C2=C3C(=C4C=CC(=O)C=C4C=C3)OC3=C4C=CC(O)=CC4=CC=C32)=C1 AWSNLYPKRXALAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XHTDRUDMCGDRER-UHFFFAOYSA-N C1=NC=C2NC=NC2=N1.C1=CC=C2NC(=O)C(O)=CC2=C1 Chemical compound C1=NC=C2NC=NC2=N1.C1=CC=C2NC(=O)C(O)=CC2=C1 XHTDRUDMCGDRER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HPJYKMSFRBJOSW-JHSUYXJUSA-N Damsin Chemical compound C[C@H]1CC[C@H]2C(=C)C(=O)O[C@H]2[C@]2(C)C(=O)CC[C@@H]12 HPJYKMSFRBJOSW-JHSUYXJUSA-N 0.000 description 1
- VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N Fe3+ Chemical compound [Fe+3] VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXQIUDNVFVTQLJ-UHFFFAOYSA-N Naphthofluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C(C=CC=1C3=CC=C(O)C=1)=C3OC1=C2C=CC2=CC(O)=CC=C21 IXQIUDNVFVTQLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000013494 PH determination Methods 0.000 description 1
- 206010034972 Photosensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000677647 Proba Species 0.000 description 1
- YDJDNCPUMAZIIG-UHFFFAOYSA-N S1C(=NC2=C1C=CC=C2)C=1C(OC2=CC(=C(C=C2C=1C#N)OC)OC)=O Chemical compound S1C(=NC2=C1C=CC=C2)C=1C(OC2=CC(=C(C=C2C=1C#N)OC)OC)=O YDJDNCPUMAZIIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XISQJDPDCQYNKD-UHFFFAOYSA-N [Ru].N1=CNC2=C1C=CC=C2 Chemical class [Ru].N1=CNC2=C1C=CC=C2 XISQJDPDCQYNKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001545 azulenes Chemical class 0.000 description 1
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N benzo-alpha-pyrone Natural products C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002409 microspectrofluorometry Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 208000007578 phototoxic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000018 phototoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000011546 protein dye Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 1
- 150000003220 pyrenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043267 rhodamine b Drugs 0.000 description 1
- 159000000005 rubidium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
- C07D277/60—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D277/84—Naphthothiazoles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
- C07D277/60—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D277/62—Benzothiazoles
- C07D277/64—Benzothiazoles with only hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals attached in position 2
- C07D277/66—Benzothiazoles with only hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals attached in position 2 with aromatic rings or ring systems directly attached in position 2
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5076—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving cell organelles, e.g. Golgi complex, endoplasmic reticulum
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5076—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving cell organelles, e.g. Golgi complex, endoplasmic reticulum
- G01N33/5079—Mitochondria
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B23/00—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes
- C09B23/16—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain containing hetero atoms
- C09B23/162—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain containing hetero atoms only nitrogen atoms
- C09B23/166—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain containing hetero atoms only nitrogen atoms containing two or more nitrogen atoms
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
2-β-Anilidovinyl-N-alkyl-heteroaromatická dimethiniová sůl a její použití jako duální proba pro mitochondriální a lysozomální vizualizaci2-β-Anilidovinyl-N-alkyl-heteroaromatická dimethiniová sůl obecného vzorce I a II. Tyto sloučeniny mohou být využity jako duální proby pro zobrazování jak mitochondrií, tak lysozomů zároveň, zejména ve fluorescenční mikroskopii.
Description
Oblast techniky
Vynález se týká použití systémů založených na 2-P-anilidovinyl-N-alkylheteroaromatických solích (dimethiniových solích) obecného vzorce I a II. Tyto systémy lze využít v oblasti selektivní intracelulární lokalizace. Pomocí těchto systémů lze selektivně vizualizovat jak mitochondrie, tak lysozomy zároveň.
Dosavadní stav techniky
Intracelulární fluorescenční proby pro vizualizaci buněčných organel pomocí fluorescenční mikroskopie jsou považovány za velmi silný nástroj při získávání informací o vlastnostech a chování komplexních biologických systémů na buněčné úrovni (Stephens, D. J.; Allan, V. J. (2003) Light microscopy techniques fór life cell imaging. Science 300, 82-86.; Chalfie, M.; Tu, Y; Euskirchen, G.; Ward, W. W.; Prasher D. C. (1994) Green fluorescent protein as a markér far gene expression. Science 263, 802-805). Existují dvě hlavní skupiny prob. První skupina zahrnuje malé molekuly - chemické struktury s požadovanými vlastnostmi (Stephens, D. J.; Allan, V. J. (2003) Light microscopy techniques far life cell imaging. Science 300, 82-86), ta druhá je založena na využití specificky cílených fluorescenčních proteinů (Chalfie, M.; Tu, Y; Euskirchen, G.; Ward, W. W.; Prasher D. C. (1994) Green fluorescent protein as a markér far gene expression. Science 263, 802-805). Druhá skupina má bohužel jistá omezení, jako je například nižší intenzita fluorescence, nízká fotostabilita, častá cytotoxicita, fototoxicita a neselektivní lokalizace v jádře. Pozornost současného výzkumu se soustředí především na první skupinu látek, tedy jednoduché chemické struktury využitelné ve fluorescenční mikroskopii pro zobrazování v živých buňkách in vitro anebo i celých organismech in vivo. Tato oblast zažívá v posledních letech nebývalý rozmach (Ueno, T.; Nagano, T. (2011) Fluorescentprobes far sensing and imaging. Nat. Methods 8, 642-645.; Spenst, P.; Wírthner, F. (2015) A perylene bisimide cyclophane as a “Turn-On” and “Turn-Off” fluorescence probe. Angew. Chem. 127, 1030310306).
Jednou z velice zajímavých, slibných a dosud téměř neprozkoumaných oblastí je vývoj a využití fluorescenčních prob nazývaných „duální proby“. Mezi tyto látky se řadí zatím pouze několik málo struktur vykazujících duální charakter. Jedná se v podstatě o to, že daná látka vykazuje dvě rozdílná fluorescenčně emisní maxima (separované excitované elektronové stavy) v různých prostředích (Brancato, G.; Signore, G.; Neyroz, P.; Polli, D.; Cerullo, G.; Abbandonato, G.; Nucara, L.; Barone, V.; Beltram, F.; Bizzarri, R. (2015) Duál fluorescence through Kasha's rule breaking: an unconventional photomechanism far intracellular probe design. J. Phys. Chem. B 119, 6144-6154). Jedním z prvních fluorescenčních barviv vykazujících duální charakter byl azulenový derivát (Eber, G.; Grůneis, F.; Schneider, S.; Dorr, F. (1974) Duál fluorescence emission of azulene derivatives in solution. Chem. Phys. Lett. 29, 397-404), jehož syntéza a vlastnosti byly popsány již v roce 1974. Později byly objeveny další látky s těmito vlastnostmi jako například pyryliové sole (Nikolov, P.; Metzov, S. (2000) Peculiarities in the photophysical properties of some 6-styryl-2,4-disubstituted pyrylium salts. J. Photochem. Photobiol. A 135, 13-25), antraceny (Muralidharan, S.; Yates, K. (1992) Bichromophoric anthracene derivatives with duál absorptive and emissive states. Chem. Phys. Lett. 192, 571-575), naftalimidové deriváty (Nandhikonda, P.; Heagy, M. D. (2010) Duál fluorescent N-aryl-2,3- naphthalimides: applications in ratiometric DNA detection and white organic light-emitting devices. Org. Lett. 12, 4796-4799) a kumariny (Brancato, G.; Signore, G.; Neyroz, P.; Polli, D.; Cerullo, G.; Abbandonato, G.; Nucara, L.; Barone, V.; Beltram, F.; Bizzarri, R. (2015) Duál fluorescence through Kashďs rule breaking: an unconventional photomechanism for intracellular probe design. J. Phys. Chem. B 119, 6144-6154).
- 1 CZ 307768 B6
Rovnováha mezi jednotlivými fluorescenčními maximy fluoroforu silně závisí na jeho okolním prostředí (chemické struktury), jako je například použité rozpouštědlo, teplota, pH, viskozita, polarita, tvorba vodíkových vazeb, nábojová hustota a strukturní motiv cílového vazebného místa. (Spenst, P.; Wírthner, F. (2015) A perylene bisimide cyclophane as a “Turn-On” and “Turn-Off”fluorescenceprobe. Angew. Chem. 127, 10303-10306; Lippert, E.; Luder, W.; Moll, F.; Nagele, W.; Boos, H.; Prigge, H.; Seibold-Blankenstein, I. (1961) Umwandlung von elektronenanregungsenergie. Angew. Chem. 73, 695-706. Bilokin’ M. D.; Shvadchak, V. V.; Yushchenko, D. A.; Duportail, G.; Mély, Y.; Pivovarenko, V. G. (2009) Dual-fluorescence probe of environment basicity (hydrogen bond accepting ability) displaying no sensitivity to polarity J Fluoresc 19, 545-553; Motyka, K.; Vaňková, B.; Hlaváč, J.; Šoural M.; Funk, P. (2011) Purine scaffold effect on fluorescence properties of purine-hydroxyquinolinone bisheterocycles. J Fluoresc 21, 2207-2212; Richter, C.; Schneider, C.; Quick, Μ. T.; Volz, P.; Mahrwald, R.; Hughes, J.; Dick, B.; Alexiev, U., Ernsting, N. P. (2015) Dual-fluorescence pH probe for biolabelling. Phys. Chem. Chem. Phys. 17, 30590-30597; Reers, M.; Smiley, S. T.; MottolaHartshorn, C.; Chen, A.; Fin, M.; Chen, L. B. (1995). Mitochondrial membrane potential monitored by JC-1 dye. Methods Enzymol. 260, 406-417; Okamoto, A.; Tainaka, K.; Nishiza, K.; Saito I. (2005) Monitoring DNA structures by duál fluorescence of pyrene derivatives J. Am. Chem. Soc. 127, 13128-1312; Sun, X.; Liu, P.; Wu L.; Liu B. (2015) Graphene-quantum-dotsbased ratiometric fluorescent probe for visual detection of copper ion. Analyst 140, 6742-6247; Haidekker, M. A.; Theodorakis, E. A. (2010) Environment-sensitive behavior of fluorescent molecular rotors. J. Biol. Eng. 4, 11.
Aplikace již známých duálních prob zahrnuje například značení proteinů (Richter, C.; Schneider, C.; Quick, Μ. T.; Volz, P.; Mahrwald, R.; Hughes, J.; Dick, B.; Alexiev, U., Ernsting, N. P. (2015) Dual-fluorescence pH probe for bio-labelling. Phys. Chem. Chem. Phys. 17, 3059030597), biokonjugáty (Zhang, Z.; Kao, J.; D’Avignon, A.; Achilefu, S. (2010) Understanding dichromic fluorescence manifested in certain ICG analogs. Pure Appl Chem. 307-311), měření membránového potenciálu pomocí 3-hydroxyflavinových prob PPZ8 a F8N1S) (Shynkar, V. V.; Klymchenko, A. S.; Duportail, G.; Demchenko, A. P.; Mely, Y. (2005) Two-color fluorescent probes for imaging the dipóle potential of cell plasma membranes. Bioch. Biophys. Acta 1712, 128-136)., měření mitochondriálního membránového potenciálu probou JC-1 (Reers, M.; Smiley, S. T.; Mottola-Hartshorn, C.; Chen, A.; Lín, M.; Chen, L. B. (1995). Mitochondrial membrane potential monitored by JC-1 dye. Methods Enzymol. 260, 406-417) a MitoCaptureTR (Plásek, J.; Sigler, K. (1996) Slow fluorescent indicators of membrane potential: a survey of different approaches to probe response analysis. J Photochem Photobiol B. 33, 101-124), pH stanovení za použití benzo[c]xanthenového barviva SNAFL-1 (Brook, P. F.; Lawry, J.; Cooke, I. D.; Barratt, C. L. (1996) Measurement of intracellular pH in human spermaloz.oa by flow cytometry with the benzo[c]xanthene dye SNAFL-1: a novel, single excitation, duál emission, molecular probe. Mol Hum Reprod. 2, 18-25), 5- a 6-karboxynaftofluoresceinu v polyakrylamidovém gelu (Song, A.; Parus, S.; Kopelman, R. (1997) High-performance fiber-optic pH microsensors for practical physiological measurements using a dual-emission sensitive dye. Anal. Chem. 69, 863-867), akridinové oranže (Millot, C.; Millot, J. M.; Morjani, H.; Desplaces, A.; Manfait, M. (1997) Characterization of acidic vesicles in multidrug-resistant and sensitive cancer cells by aeridine orange staining and confocal microspectrofluorometry. J Histochem Cytochem. 45, 1255-1264), xanto-BODIPY připojeného ke glykolované karboxylové kyselině (Han, J.; Loudet, A.; Barhoumi, R.; Burghardt, R. C.; Burgess, K. (2009) A ratiometric pH reportér for imaging protein-dye conjugates in living cells. J Am Chem Soc. 131, 1642-1643) a IA-SNARF (Richter, C.; Schneider, C.; Quick, Μ. T.; Volz, P.; Mahrwald, R.; Hughes, J.; Dick, B.; Alexiev, U., Ernsting, N. P. (2015) Dual-fluorescence pH probe for bio-labelling. Phys. Chem. Chem. Phys. 17, 30590-30597). Dále lze zmínit monitorování intracelulámí viskozity pomocí prob založených na antracenu a anilinu (Liu, T.; Liu, X.; Spring, D. R.; Qian, X.; Cui, J.; Xu, Z. (2014) Quantitatively mapping cellular viscosity with detailed organelle information via a designed PET fluorescent probe. Sci Rep. 4, 5418) a stanovení glutationu a cysteinu/homocysteinu (Yang, X.F.; Huang, Q.; Zhong, Y.; Li, Z.; Li, H.; Lowry, M.; Escobedo, J. O.; Strongin, R. M. (2014) A
-2CZ 307768 B6 duál emission fluorescent probe enables simultaneous detection of glutathione and cysteine/homocysteine. Chem Sci 5, 2177-2183). Duální proby jsou využívány také pro stanovení koncentrací bioanalytů přímo v živých buňkách: např. Zn2+ pomocí fluoresceinu/naftofluoresceinu (Chang, C. J.; Jaworski, J.; Nolan, E. M.; Sheng, M.; Lippard, S. J. (2004) A tautomeric zinc sensor for ratiometric fluorescence imaging: application to nitric oxide-induced release of intracellular zinc. Proč Nati Acad Sci USA. 101, 1129-1134) a 4metyl-2-(2-pyridyl)-5-(2-thiofenyl)thiazolu) (Zheng, Μ. H.; Hu, X.; Yang Μ. Y.; Jin, J. Y. (2015) Ratiometically fluorescent sensing of Zn(II) based on dual-emission of 2-pyridylthiazole derivatives. J Fluoresc 25, 1831-1834), Cu2+ (Lys-Cu založeném na 1,8-naftalimidu a rhodaminu B) (Ren, M.; Deng, B.; Wang, J.-Y.; Liu, Z.-R.; Lín, W. (2015) A dual-emission fluorescenceenhancedprobe for imaging copper(II) ions in lysosomes. J. Mater. Chem. B 3, 6746-6752), Cd2+ (pomocí BODIPY proby), (Peng, X.; Du, J.; Fan, J.; Wang, J.; Wu, Y.; Zhao, J.; Sun, S.; Xu, T. (2007) A selective fluorescent sensor for imaging Cd2+ in living cells. J. Am. Chem. Soc. 129, 1500-1501), Pb2+/Fe2+/Zn2+ (benzimidazolové rutheniové komplexy) (Kumar, A.; Singh, A. K.; Gupta, T. (2013) A stimuli-responsive smartprobe for selective monitoring of multiple-cations via differential analyses. Analyst 138, 3356-3359) a Hg2+/Fe3+ (rhodaminové-azacrown etherové konjugáty) (Zhang, X.; Shiraishi, Y.; Hirai, T. (2008) Fe(III)- and Hg(II)-selective duál channel fluorescence of a rhodamine-azacrown ether conjugate. Tetrahedron Eett 49, 4178-4181).
Mezi slibné aplikace duálních fluorescenčních prob patří intracelulámí vizualizace dvou rozdílných buněčných organel jednou strukturou, kdy každá z organel je detekována při jiné vlnové délce. V současné době je situace taková, že jedna proba selektivně vizualizuje (barví) jednu organelu. Takovýto typ duálních prob byl popsán zatím v jediném případě, publikovaném v roce 2011 Eoudetem et al. (Eoudet, A.; Ueno, Y.; Wu, L.; Jose, J.; Barhoumi, R.; Burghardt, R.; Burgess, K. (2011) Organelle-selective energy transfer: a fluorescent indicator of intracellular environment. Bioorg Med Chem Lett. 21, 1849-1851). Jedná se o konjugát kationického cyaninového barviva s BODIPY pro vizualizaci lysozomů (zelená fluorescence) a mitochondrií (červená fluorescence). Další práce popisující duální lokalizaci malé organické proby je z roku 2015 od Brancata et al. (Brancato, G.; Signore, G.; Neyroz, P.; Polli, D.; Cerullo, G.; Abbandonato, G.; Nucara, L.; Barone, V.; Beltram, F.; Bizzarri, R. (2015) Duál fluorescence through Kashďs rule breaking: an unconventional photomechanism for intracellular probe design. J. Phys. Chem. B 119, 6144-6154), kde popisují, že látka 3-(benzo[d]thiazol-2-yl)-6,7dimethoxy-2H-chromen-2-one-4-karbonitril vykazuje duální emisi, ale autoři neuvádějí, v jakých buněčných organelách se látka nachází, což snižuje výpovědní hodnotu dané práce.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou dimethiniové sole založené na 2-P-anilidovinyl-Nalkylheteroaromátech obecné struktury I a II a jejich použití. Tyto látky jsou funkční pro použití v oblasti selektivní intracelulámí lokalizace jako duální proby pro specifickou vizualizaci lysozomů a mitochondrií. Pomocí těchto fluorescenčních prob lze selektivně detekovat lysozomy jako organely se zelenou (respektive tyrkysovou) fluorescencí a mitochondrie jako organely s červenou fluorescencí. Barvení mitochondrií je možné kombinovat se značením dalších buněčných organel, jako je např. endoplazmatické retikulum anebo Golgiho komplex. Tyto proby jsou snadno připravitelné, kompatibilní s živými systémy, selektivní a mají požadované vlastnosti pro to, aby našly uplatnění ve fluorescenční mikroskopii pro biologické studie jako duální proby.
-3 CZ 307768 B6
R
R
Předmětem vynálezu je 2-P-anilidovinyl-N-alkyl-heteroaromatická dimethiniová sůl pro použití jako duální proba pro mitochondriální a lysozomální vizualizaci, obecného vzorce I
O ; (>R Y X (I)
kde R je H, F, Cl, Br, I, OH, alkyl Cl až C12, glykolový řetězec s počtem 1 až 8 glykolových (OCH2CH2-) opakujících se jednotek končících O-alkyl substituentem Cl až C12 nebo -OH skupinou, alkyl Cl až C8 sulfonová kyselina nebo její odpovídající lithné nebo sodné, nebo draselné, nebo česné, nebo rubidné soli, allyl, propargyl, benzyl, nebo jejich kombinace;
kde Y je alkyl Cl až C18;
kde X je acetát, bromid, fluorid, fosfát, hexafluorfosfát, hydrogensulfát, chlorid, chloristan, jodid, mravenčan, nitrát, sulfát, tetrafluorborát;
a obecného vzorce II
R γΑ-··γ ΗΟΑΥ^'Υ
R Y (II) kde R, Y a X mají výše uvedený význam.
Fluorescenční vlastnosti těchto prob jsou určovány aromatickým systémem, substituenty R, Y neovlivňují fluorescenci, proto je možná jejich poměrně značná variabilita. Bylo zjištěno, že dimethiniové soli je možné inkubovat do koncentrace 500 nM s buněčnými liniemi, s výhodou s buněčnými liniemi U-2 OS, HeLa, MCF-7, HaCaT, HEK293T a 4T1. Pro dosažení co nejúčinnější vizualizace mitochondrií a lysozomů a minimálního nespecifického barvení se ukázala 100 až 200 nM koncentrace dimethiniových solí. Přípravy prob založených na 2-βanilidovinyl-N-alkyl-heteroaromátech jako duálních prob pro zobrazování lysozomů a mitochondrií jsou doloženy následujícími příklady.
Dále jsou předmětem vynálezu následující sloučeniny:
2-P-anilidovinyl-N-alkyl-heteroaromatická dimethiniová sůl obecného vzorce I
-4CZ 307768 B6
(I) nebo obecného vzorce II
NH (Π) kde R je H, F, Cl, Br, I, OH, alkyl Cl až C12, glykolový řetězec s počtem 1 až 8 glykolových (OCH2CH2-) opakujících se jednotek končící O-alkyl substituentem Cl až C12 nebo -OH skupinou, alkyl Cl až C8 sulfonová kyselina nebo odpovídající její lithné nebo sodné, nebo draselné, nebo česné, nebo rubidné soli, allyl, propargyl, benzyl, nebo jejich kombinace;
kde Y je alkyl Cl až C18 vyjma C2, pokud R je H;
kde X je acetát, bromid, fluorid, fosfát, hexafluorfosfát, hydrogensulfát, chlorid, chloristan, jodid, mravenčan, nitrát, sulfát, tetrafluorborát.
Objasnění výkresů
Obr. 1.: Lokalizace látky 1 v mitochondriích a lysozomech buněk odvozených z karcinomu děložního čípku (HeLa). Panel mikroskopických snímků: A, E) průchozí světlo; B, F) látka 1 v mitochondriích HeLa buněk (červená emise fluorescence); C, G) látka 1 v lysozomech buněk HeLa (tyrkysová emise fluorescence); D, H) překryv snímků.
Obr. 2.: Lokalizace látky 2 v mitochondriích a lysozomech buněk odvozených z karcinomu děložního čípku (HeLa). Panel mikroskopických snímků: A) průchozí světlo; B) látka 2 v mitochondriích HeLa buněk (červená emise fluorescence), C) látka 2 v lysozomech buněk HeLa (tyrkysová emise fluorescence), D) překryv snímků.
Obr. 3.: Lokalizace látky 1 v mitochondriích a lysozomech buněk odvozených z osteosarkomu (U-2 OS). Panel mikroskopických snímků: A) procházející světlo; B) látka 1 v mitochondriích U-2 OS buněk (červená emise fluorescence), C) látka 1 v lysozomech buněk U-2 OS (tyrkysová emise fluorescence), D) překryv snímků.
Obr. 4.: Kolokalizace dvou mitochondriálních sond v mitochondriích. Lokalizace látky 1 v mitochondriích (B) a lysozomech (C) buněk odvozených z karcinomu děložního čípku (HeLa, snímek A v procházejícím světle), mitochondriální sonda MitoTracker Green™ v mitochondriích (D) a překryv snímků (E).
Obr. 5.: Kolokalizace látky 1 a lysozomální sondy LysoTracker® Blue v lysosomech.
Lokalizace látky 1 v lysozomech (1), lokalizace lysozomální sondy LysoTracker® Blue (LT-B) v lysozomech a překryv snímků. Panel mikroskopických snímků buněk 4T1.
Obr 6.: Lokalizace látky 2 a lysozomální sondy LysoTracker® Bluev lysosomech. Lokalizace látky 2 v lysozomech (2), lokalizace lysozomální sondy LysoTracker® Blue (LT-B) v lysozomech a překryv snímků. Panel mikroskopických snímků buněk 4T1.
Obr. 7.: Barvení mitochondrií, lysozomů a jader živých buněk. Lokalizace látky 1 v mitochondriích (B) a lysozomech (C) buněk odvozených z osteosarkomu (U-2 OS), snímek (A) v procházejícím světle, překryv snímků B a C (D) a překryv snímku D a barvením jader buněk U-2 OS pomocí DAPI (E).
Obr. 8.: Složení Dulbeccem modifikovaného Eaglova média s obsahem glukózy.
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1
Příprava a charakterizace látky 1 spadající pod obecný vzorec I.
Látka 1; Kvartemí heteroaromatická sůl, 2-methyl-3-propylnaftho[2,l-ď|thiazol-3-ium jodid (410 mg, 1,11 mmol) a ((lE)-2-fenyl-2-azavinyl)fenylamin (220 mg, 1,12 mmol) byly smíchány a taveny při 160 °C. Produkt byl získán jako hydrojodid, výtěžek 403 mg, 77 %. Charakterizace látky pomocí NMR je následující:
H NMR (500 MHz, DMSO) δ: 11.39 (s, 1H), 8.74 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 8.28 (d, J =9.0 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 8.13 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 9.05Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.78 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.68 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.46 (m, 4H), 7.21 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 4.47 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 1.87 (sextet, J = 7.1 Hz, 2H), 1.04 (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C-NMR (126 MHz, DMSO) δ: 168.4, 149.2, 139.4, 139.2, 130.9, 130.3, 130.1, 129.6, 129.3, 127.7, 126.5, 125.5, 123.6, 121.9, 117.5, 113.7, 90.3, 49.0, 21.5, 11.2.; HRMS: vypočítáno pro C22H21N2S = 345.1420, nalezeno: 345.1427.
Struktura látky 1, dimethiniové sole 1, (E)- 2-(2-(fenylamino)eten-l-yl)-3-propylnaftho[2,lď|thiazol-3-ium jodid
Fluorescenční maxima látky 1 dokládá tabulka 1.
Tabulka 1. Fluorescenční excitační a fluorescenční emisní maxima látky 1 v prostředí methanolu (MeOH) a lmM fosfátového pufiru (PBS, pH 7,34).
| Látka | Prostředí | Lxmax1“1 [nm] | kemmax^ [nm] |
| 1 | MeOH | 450 | 481 |
| PBS | 448 | 486 a 626 |
[a] Xexmax - vlnová délka maxima fluorescence excitačního spektra [b] Xemmax - vlnová délka maxima fluorescence emisního spektra
Příklad 2
Příprava a charakterizace látky 2 spadající pod obecný vzorec II.
Látka 2; Kvartemí heteroaromatická sůl, 2-methyl-3-propyl-5-hydroxy-benzo[ď|thiazol-3-ium jodid (372 mg, 1,11 mmol) a ((lE)-2-fenyl-2-azavinyl)fenylamin (220 mg, 1,12 mmol) byly smíchány a taveny při 160 °C. Produkt byl získán jako hydrojodid, výtěžek 341 mg, 70 %. Charakterizace látky pomocí NMR je následující:
H NMR (500 MHz, DMSO) δ 11.30 (s, 1H), 10.27 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.7 Hz, 12H), 7.43 (d, J = 4.0 Hz, 4H), 7.26 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.19 (m, 1H), 6.99 (dd, J = 8.7, 2.0 Hz, 1H), 6.34 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 4.30 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.80 (sextet, J = 7.2 Hz, 2H), 1.00 (t, J = 7.3 Hz, 3H). 13C-NMR (126 MHz, DMSO) δ 169.75, 158.29, 148.79, 142.04, 139.02, 129.72, 124.83, 123.89, 117.16, 114.99, 114.59, 100.83, 89.95, 48.19, 20.63, 10.95.; HRMS: vypočítáno pro C18H19N2OS = 311.1213, nalezeno: 311.1218.
Struktura látky 2, dimethiniové sole 2, (E)-5-hydroxy-2-(2-(fenylamino)eten-l-yl)-3-propylbenzo[í/]thiazol-3-ium jodid
Fluorescenční maxima látky 2 dokládá tabulka 2.
Tabulka 2. Fluorescenční excitační a fluorescenční emisní maxima látky 2 v prostředí methanolu (MeOH) a lmM fosfátového pufiru (PBS, pH 7,34).
| Látka | Prostředí | kexmax[í>] [nm] | kemrnax^ [nm] |
| 2 | MeOH | 426 | 484 |
| PBS | 425 | 474 a 498 |
[a] Xexmax - vlnová délka maxima fluorescence excitačního spektra [b] Xemmax - vlnová délka maxima fluorescence emisního spektra
Příklad 3
Selektivní lokalizace látek 1 a 2 v lysozomech (tyrkysová emise fluorescence) a v mitochondriích (červená emise fluorescence)
Příprava zásobního roztoku
Vzhledem k nízké rozpustnosti látek 1 a 2 ve vodě byly sloučeniny rozpuštěny v dimetylsulfoxidu, dimetylformamidu, methanolu a ethanolu. Koncentrace zásobních roztoků, které byly uchovávány ve tmě při -20 °C, byla 10 mM. Před použitím byly roztoky za nepřístupu světla temperovány na laboratorní teplotu (cca 23 °C) a řádně promíchány.
Příprava buněk pro značení mitochondrií
Buňky linie HeLa byly kultivovány v DMEM médiu (Dulbeccem modifikované Eaglovo médium s vysokým obsahem glukózy - složení viz obrázek 8 - D5671, Sigma USA) doplněném o 10% fetální bovinní sérum (FBS, Thermo Scientific, USA). Buňky byly udržovány v logaritmické fázi růstu a kultivovány za standardních podmínek (37 °C, 5% CO2, 95% vlhkosti). Pro mikroskopické experimenty bylo inokulováno 100 000 buněk na kultivační misky se skleněným dnem (průměr 35 mm, MatTek, USA). Buňky byly inkubovány za standardních podmínek po dobu 16 h.
Buňky odvozené od linie osteosarkomu (U-2 OS) byly kultivovány v DMEM médiu (Dulbeccem modifikované Eaglovo médium s obsahem glukózy - složení viz obrázek 8 - D5546, Sigma USA) doplněném o 10% fetální bovinní sérum (FBS, Thermo Scientific, USA). Buňky byly udržovány v logaritmické fázi růstu a kultivovány za standardních podmínek (37 °C, 5% CO2, 95% vlhkosti). Pro mikroskopické experimenty bylo inokulováno 100 000 buněk na kultivační misky se skleněným dnem (průměr 35 mm, MatTek, USA). Buňky byly inkubovány za standardních podmínek po dobu 24 h
Buňky odvozené od buněčné linie 4T1 byly kultivovány v DMEM médiu (Dulbeccem modifikované Eaglovo médium s vysokým obsahem glukózy - složení viz obrázek 8 - D5796, Sigma USA) doplněném o 10% fetální bovinní sérum (FBS, Thermo Scientific, USA). Buňky byly udržovány v logaritmické fázi růstu a kultivovány za standardních podmínek (37 °C, 5% CO2, 95% vlhkosti). Pro mikroskopické experimenty bylo inokulováno 100 000 buněk na kultivační misky se skleněným dnem (průměr 35 mm, MatTek, USA). Buňky byly inkubovány za standardních podmínek po dobu 16 h.
Barvení mitochondrií a lysozomů v živých buňkách pomocí látek 1 a 2
Dvě sady připravených Hela buněk a buněk linie U-2 OS podle popisu výše byly dvakrát omyty předehřátým (37 °C) fosfátovým pufrem (PBS; pH 7,4) a 10 min. inkubovány s dimethiniovou solí 1 nebo 2 ze zásobního roztoku dimethylsulfoxidu, o koncentraci 200 nM v kompletním kultivačním médiu. Po barvení byly buňky dvakrát omyty fosfátovým pufrem a inkubovány v čerstvém kompletním médiu bez fenolové červeně.
Fluorescenční mikroskopie
Buňky byly po inkubaci s dimethiniovou solí 1 nebo 2 omyty fosfátovým pufrem a pozorovány pomocí inverzního fluorescenčního mikroskopu CellAR (Olympus, Japonsko) za použití 60x (numerická apertura 1,4), a lOOx imersního objektivu (Olympus, Japonsko). V závislosti na spektroskopických vlastnostech testované látky byl použit fluorescenční filtr TR1TC, Texas Red, RFP (pro mitochondrie) a FITC, CFP (pro lysozomy). Lokalizace dimethiniových solí v živých buňkách odvozených z buněčné linie HeLa a U-2 OS byla studována v reálném čase. Snímky z mikroskopu jsou zobrazeny na obrázcích 1, 2 a 3. Snímky z fluorescenčního mikroskopu ukazují lokalizaci látky 1 a 2 v mitochondriích a lysozomech buněk odvozených z karcinomu děložního čípku (HeLa) a buněk linie U-2 OS. Snímky dokládají červenou emisní fluorescenci mitochondrií a tyrkysovou emisní fluorescenci lysozomů po použití látky 1 nebo látky 2.
Příklad 4
Kolokalizace látky 1 a mitochondriální sondy MitoTracker Green™ v mitochondriích
-8CZ 307768 B6
Buňky linie HeLa byly připraveny podle příkladu 3 a barveny roztokem dimethiniové sole 1, jak je popsáno v příkladu 3 ve formě zásobního roztoku s dimethylformamidem, o koncentraci v kultivačním médiu 150 nM. Po barvení byly buňky dvakrát omyty fosfátovým pufrem a barveny 120nM roztokem mitochondriální sondy MitoTracker Grccn™ (Thermo Scientific, USA) rozpuštěné v kompletním kultivačním médiu. Inkubace buněk probíhala za standardních kultivačních podmínek (37 °C, 5 % CO2, 95 % vlhkost) po dobu 10 min. Buňky byly dvakrát omyty fosfátovým pufrem a inkubovány s čerstvým kompletním médiem bez fenolové červeně a mikroskopovány.
Fluorescenční mikroskopie
HeLa buňky byly po inkubaci s dimethiniovou solí 1 a následném obarvení mitochondriální sondou MitoTracker Grccn™ podle postupu výše omyty fosfátovým pufrem a pozorovány pomocí inverzního fluorescenčního mikroskopu CellAR (Olympus, Japonsko) za použití 60x (numerická apertura 1,4), a lOOx imersního objektivu (Olympus, Japonsko). V závislosti na spektroskopických vlastnostech testované látky byl použit fluorescenční filtr TRITC, Texas Red, RFP (pro mitochondrie) a FITC, CFP (pro lysozomy). Lokalizace dimethiniových solí v živých buňkách odvozených z buněčné linie HeLa byla studována v reálném čase. Snímky z mikroskopu jsou zobrazeny na obrázku 4. Snímky z fluorescenčního mikroskopu ukazují kolokalizaci látky 1 v mitochondriích a lysozomech buněk odvozených z karcinomu děložního čípku (HeLa) spolu s komerční mitochondriální sondou MitoTracker Grccn™. Snímky dokládají červenou emisní fluorescenci mitochondrií, tyrkysovou emisní fluorescenci lysozomů po použití látky 1 a zelenou emisní flourescenci mitochondriální sondy MitoTracker Grccn™. Po překryvu snímků je patrný i překryv lokalizace látky 1 a mitochondriální sondy.
Příklad 5
Kolokalizace látky 1 a lysozomální sondy LysoTracker® Blue DND-22 v lysosomech
4T1 buňky byly připraveny podle příkladu 3 a barveny roztokem dimethiniové sole 1, jak je popsáno v příkladu 3 ve formě zásobního roztoku s methanolem, o koncentraci v kultivačním médiu 300 nM po dobu 30 min. Po barvení byly buňky dvakrát omyty fosfátovým pufrem a barveny po dobu 30 min. 500nM roztokem sondy pro lysozomy LysoTracker® Blue DND-22 (Thermo Scientific, USA) rozpuštěné v kompletním médiu; buňky byly inkubovány za standardních kultivačních podmínek (37 °C, 5 % CO2, 95 % vlhkost). Poté byly buňky omyty fosfátovým pufrem a inkubovány v čerstvém kompletním kultivačním médiu bez fenolové červeně a mikroskopovány.
Fluorescenční mikroskopie
4T1 buňky byly po inkubaci s dimethiniovou solí 1 a následném obarvení lysozomální sondou LysoTracker® Blue podle postupu výše omyty fosfátovým pufrem a pozorovány pomocí inverzního fluorescenčního mikroskopu CellAR (Olympus, Japonsko) za použití 60x (numerická apertura 1,4), a lOOx imersního objektivu (Olympus, Japonsko). V závislosti na spektroskopických vlastnostech testované látky byl použit fluorescenční filtr FITC, CFP (pro lysozomy). Lokalizace dimethiniových solí v živých buňkách odvozených do buněčné linie 4T1 byla studována v reálném čase. Snímky z mikroskopu jsou zobrazeny na obrázku 6. Snímky z fluorescenčního mikroskopu ukazují kolokalizaci látky 1 v lysozomech buněk odvozených z buněčné linie 4T1 spolu s komerční lysozomální sondou LysoTracker® Blue. Snímky dokládají tyrkysovou emisní fluorescenci lysozomů po použití látky 1 a modrou emisní flourescenci lysozomální sondy LysoTracker® Blue. Po překryvu snímků je patrný i překryv lokalizace látky 1 a lysozomální sondy.
Příklad 6
-9CZ 307768 B6
Barvení mitochondrií, lysozomů a jader živých buněk pomocí látky 1 a jaderné sondy DAPI
U2-OS buňky byly připraveny podle příkladu 3 a barveny roztokem dimethiniové sole 1, jak je popsáno v příkladu 3 ve formě zásobního roztoku s ethanolem, o koncentraci v kultivačním médiu 100 nM. Po obarvení byly buňky dvakrát omyty fosfátovým pufrem a barveny 5 min. roztokem jaderné sondy 4,6'-diamidino-2-fenylindolu (DAPI, 5 pg/ml) v kompletním médiu. Buňky byly inkubovány za standardních kultivačních podmínek (37 °C, 5 % CO2, 95 % vlhkost). Poté byly buňky omyty fosfátovým pufrem a inkubovány v čerstvém kompletním kultivačním médiu bez fenolové červeně a mikroskopovány.
Fluorescenční mikroskopie
U2-OS buňky byly po inkubaci s dimethiniovou solí 1 a následném obarvení jadernou sondou DAPI podle postupu výše omyty fosfátovým pufrem a pozorovány pomocí inverzního fluorescenčního mikroskopu CellAR (Olympus, Japonsko) za použití 60x (numerická apertura 1,4), a lOOx imersního objektivu (Olympus, Japonsko). V závislosti na spektroskopických vlastnostech testované látky byl použit fluorescenční filtr TRITC, Texas Red, RFP (pro mitochondrie) a FITC, CFP (pro lysozomy). Lokalizace dimethiniových solí v živých buňkách odvozených z buněčné linie U-2 OS byla studována v reálném čase. Snímky z mikroskopu jsou zobrazeny na obrázku 7. Snímky z fluorescenčního mikroskopu ukazují kolokalizaci látky 1 v mitochondriích a lysozomech buněk odvozených z buněčné linie U-2 OS spolu s komerční jadernou sondou DAPI. Snímky dokládají červenou emisní fluorescenci mitochondrií, tyrkysovou emisní fluorescenci lysozomů po použití látky 1 a modrou emisní fluorescenci jaderné sondy DAPI. Po překryvu snímků jsou jasně viditelné jednotlivé organely.
Průmyslová využitelnost
2-P-Anilidovinyl-N-alkyl-heteroaromatické sole jsou využitelné jako prostředek pro fluorescenční mikroskopii. Jejich využití spočívá především v tom, že je lze použít jako duální proby pro selektivní značení jak lysozomů, tak i mitochondrií buněk, přičemž lysozomy jsou těmito látkami zbarvovány zeleně (respektive tyrkysové) a mitochondrie červeně.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (3)
1. 2-P-Anilidovinyl-N-alkylheteroaromatická dimethiniová sůl obecného vzorce I (I) nebo obecného vzorce II
- 10CZ 307768 B6
R
HO (II) kde R je H, F, Cl, Br, I, OH, alkyl Cl až Cl2, glykolový řetězec s počtem 1 až 8 glykolových (-OCH2CH2-) opakujících se jednotek končící O-alkyl substituentem Cl až C12 nebo -OH skupinou, alkyl Cl až C8 sulfonová kyselina nebo odpovídající její lithné nebo sodné, nebo draselné, nebo česné, nebo rubidné soli, allyl, propargyl, benzyl, nebo jejich kombinace;
kde Y je alkyl Cl až C18 vyjma C2, pokud R je H;
kde X je acetát, bromid, fluorid, fosfát, hexafluorfosfát, hydrogensulfát, chlorid, chloristan, jodid, mravenčan, nitrát, sulfát, tetrafluorborát.
2. Použití 2-P-anilidovinyl-N-alkylheteroaromatické dimethiniové soli obecného vzorce I nebo II podle nároku 1 jako duální proby pro vizualizaci lysozomů a mitochondrií vedle sebe ve fluorescenční mikroskopii.
3. Použití 2-P-anilidovinyl-N-alkylheteroaromatické dimethiniové soli (I) kde R je Η, Y je alkyl C2, X je acetát, bromid, fluorid, fosfát, hexafluorfosfát, hydrogensulfát, chlorid, chloristan, jodid, mravenčan, nitrát, sulfát, tetrafluorborát jako duální proby pro vizualizaci lysozomů a mitochondrií vedle sebe ve fluorescenční mikroskopii.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2016-682A CZ307768B6 (cs) | 2016-11-02 | 2016-11-02 | 2-β-Anilidovinyl-N-alkylheteroaromatická dimethiniová sůl a její použití jako duální proba pro mitochondriální a lysozomální vizualizaci |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2016-682A CZ307768B6 (cs) | 2016-11-02 | 2016-11-02 | 2-β-Anilidovinyl-N-alkylheteroaromatická dimethiniová sůl a její použití jako duální proba pro mitochondriální a lysozomální vizualizaci |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2016682A3 CZ2016682A3 (cs) | 2018-05-09 |
| CZ307768B6 true CZ307768B6 (cs) | 2019-04-24 |
Family
ID=62068377
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2016-682A CZ307768B6 (cs) | 2016-11-02 | 2016-11-02 | 2-β-Anilidovinyl-N-alkylheteroaromatická dimethiniová sůl a její použití jako duální proba pro mitochondriální a lysozomální vizualizaci |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ307768B6 (cs) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2369509A (en) * | 1940-12-04 | 1945-02-13 | Eastman Kodak Co | Polymethine compounds and process for preparing them |
| US5183813A (en) * | 1992-02-19 | 1993-02-02 | Sterling Winthrop Inc. | Antiarrhythmic agents |
-
2016
- 2016-11-02 CZ CZ2016-682A patent/CZ307768B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2369509A (en) * | 1940-12-04 | 1945-02-13 | Eastman Kodak Co | Polymethine compounds and process for preparing them |
| US5183813A (en) * | 1992-02-19 | 1993-02-02 | Sterling Winthrop Inc. | Antiarrhythmic agents |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Brancato, Giuseppe, et al. "Dual Fluorescence through Kasha’s Rule Breaking: An Unconventional Photomechanism for Intracellular Probe Design." The Journal of Physical Chemistry B 119.20 (2015): 6144-6154. * |
| Bříza, Tomáš, et al. "Optical sensing of sulfate by polymethinium salt receptors: colorimetric sensor for heparin." Chemical Communications 16 (2008): 1901-1903. * |
| Loudet, Aurore, et al. "Organelle-selective energy transfer: A fluorescent indicator of intracellular environment." Bioorganic & medicinal chemistry letters 21.6 (2011): 1849-1851. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2016682A3 (cs) | 2018-05-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liu et al. | A coumarin–indole-based near-infrared ratiometric pH probe for intracellular fluorescence imaging | |
| Guy et al. | Convergent preparation and photophysical characterization of dimaleimide dansyl fluorogens: elucidation of the maleimide fluorescence quenching mechanism | |
| Ge et al. | A simple fluorescent probe for monitoring pH in cellsbased on new fluorophorepyrido [1, 2-a] benzimidazole | |
| WO2015153813A1 (en) | Azetidine-substituted fluorescent compounds | |
| Hou et al. | Sensitive detection and imaging of endogenous peroxynitrite using a benzo [d] thiazole derived cyanine probe | |
| Lin et al. | Highly selective, red emitting BODIPY-based fluorescent indicators for intracellular Mg 2+ imaging | |
| Dai et al. | A quick response fluorescent probe based on coumarin and quinone for glutathione and its application in living cells | |
| Cui et al. | A novel polarity-sensitive fluorescent probe for lighting up lipid droplets and its application in discriminating dead and living zebrafish | |
| CA3004831A1 (en) | Fluorochromes for organelle tracing and multi-color imaging | |
| Liu et al. | ICT-based near infrared fluorescent switch-on probe for nitric oxide bioimaging in vivo | |
| Sabouri et al. | Construction of a Highly Sensitive Thiol‐Reactive AIEgen‐Peptide Conjugate for Monitoring Protein Unfolding and Aggregation in Cells | |
| Chen et al. | FRET-based sensor for visualizing pH variation with colorimetric/ratiometric strategy and application for bioimaging in living cells, bacteria and zebrafish | |
| CN111004246B (zh) | 监测线粒体自噬的罗丹明类pH荧光探针及制备和应用 | |
| Liu et al. | A squaraine-based red emission off–on chemosensor for biothiols and its application in living cells imaging | |
| Jin et al. | Novel near-infrared pH-sensitive cyanine-based fluorescent probes for intracellular pH monitoring | |
| Dong et al. | Two-photon fluorescence visualization of lysosomal pH changes during mitophagy and cell apoptosis | |
| Zhang et al. | Hemicyanine based naked-eye ratiometric fluorescent probe for monitoring lysosomal pH and its application | |
| Reddy et al. | Luminescent Trimethoprim–Polyaminocarboxylate Lanthanide Complex Conjugates for Selective Protein Labeling and Time-Resolved Bioassays | |
| Li et al. | A lysosomal probe for monitoring of pH in living cells and ovarian tumour | |
| CN105062467B (zh) | 一种转子型的双红线粒体荧光探针及其应用 | |
| Niu et al. | A novel pH fluorescent probe based on indocyanine for imaging of living cells | |
| Tian et al. | A series of water-soluble pyridinium derivatives with two-photon absorption in the near infrared region for mitochondria targeting under stimulated emission depletion (STED) nanoscopy | |
| JP6456592B2 (ja) | 蛍光寿命イメージングプローブ | |
| Shi et al. | Highly lipophilic coumarin fluorophore with excimer-monomer transition property for lipid droplet imaging | |
| Wang et al. | Fluorescent probes based on aza-Nile Red for visualizing mitochondrial polarity fluctuation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20191102 |