CZ305332B6 - Použití derivátů pyrazinu a jejich isosterů jako sloučenin vážících se do malého žlábku DNA - Google Patents
Použití derivátů pyrazinu a jejich isosterů jako sloučenin vážících se do malého žlábku DNA Download PDFInfo
- Publication number
- CZ305332B6 CZ305332B6 CZ2013-816A CZ2013816A CZ305332B6 CZ 305332 B6 CZ305332 B6 CZ 305332B6 CZ 2013816 A CZ2013816 A CZ 2013816A CZ 305332 B6 CZ305332 B6 CZ 305332B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- dna
- formula
- compounds
- minor groove
- duplex
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 22
- 150000003216 pyrazines Chemical class 0.000 title 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims abstract description 16
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims abstract description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 17
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000004183 alkoxy alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 4
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 claims description 3
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 claims description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 3
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011593 sulfur Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 abstract 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 10
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- UPBAOYRENQEPJO-UHFFFAOYSA-N n-[5-[[5-[(3-amino-3-iminopropyl)carbamoyl]-1-methylpyrrol-3-yl]carbamoyl]-1-methylpyrrol-3-yl]-4-formamido-1-methylpyrrole-2-carboxamide Chemical compound CN1C=C(NC=O)C=C1C(=O)NC1=CN(C)C(C(=O)NC2=CN(C)C(C(=O)NCCC(N)=N)=C2)=C1 UPBAOYRENQEPJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IDBIFFKSXLYUOT-UHFFFAOYSA-N netropsin Chemical compound C1=C(C(=O)NCCC(N)=N)N(C)C=C1NC(=O)C1=CC(NC(=O)CN=C(N)N)=CN1C IDBIFFKSXLYUOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010042747 stallimycin Proteins 0.000 description 4
- QAXLTZBBDSDRPW-UHFFFAOYSA-N 2-(diethylamino)ethanethiol;hydron;chloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CCS QAXLTZBBDSDRPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- XDRYMKDFEDOLFX-UHFFFAOYSA-N pentamidine Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1OCCCCCOC1=CC=C(C(N)=N)C=C1 XDRYMKDFEDOLFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004448 pentamidine Drugs 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010042309 Netropsin Proteins 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229940058303 antinematodal benzimidazole derivative Drugs 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001556 benzimidazoles Chemical class 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 1H-benzimidazole Chemical compound C1=CC=C2NC=NC2=C1 HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPDOBVFESNNYEE-UHFFFAOYSA-N 1h-indole-7-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC2=C1NC=C2 IPDOBVFESNNYEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRIJSZQFAMLVQV-UHFFFAOYSA-N 4,5-dichlorobenzene-1,2-dicarbonitrile Chemical compound ClC1=CC(C#N)=C(C#N)C=C1Cl SRIJSZQFAMLVQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QUFXYBKGILUJHS-UHFFFAOYSA-N 5,6-dichloropyrazine-2,3-dicarbonitrile Chemical compound ClC1=NC(C#N)=C(C#N)N=C1Cl QUFXYBKGILUJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CGEIWPWUEIMVSD-UHFFFAOYSA-N Cl.Cl.C(C)N(CCSC=1C=C(C(C#N)=CC1SCCN(CC)CC)C#N)CC Chemical compound Cl.Cl.C(C)N(CCSC=1C=C(C(C#N)=CC1SCCN(CC)CC)C#N)CC CGEIWPWUEIMVSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NZFWYVCZQNITSE-UHFFFAOYSA-N Cl.Cl.C(C)N(CCSC=1N=C(C(=NC1SCCN(CC)CC)C#N)C#N)CC Chemical compound Cl.Cl.C(C)N(CCSC=1N=C(C(=NC1SCCN(CC)CC)C#N)C#N)CC NZFWYVCZQNITSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100326341 Drosophila melanogaster brun gene Proteins 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 1
- 240000005373 Panax quinquefolius Species 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 229940121357 antivirals Drugs 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- OKQSSSVVBOUMNZ-UHFFFAOYSA-N diminazene diaceturate Chemical compound CC(=O)NCC(O)=O.CC(=O)NCC(O)=O.C1=CC(C(=N)N)=CC=C1NN=NC1=CC=C(C(N)=N)C=C1 OKQSSSVVBOUMNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229960005501 duocarmycin Drugs 0.000 description 1
- 229930184221 duocarmycin Natural products 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N ethyl (e)-3-[3-amino-2-cyano-1-[(e)-3-ethoxy-3-oxoprop-1-enyl]sulfanyl-3-oxoprop-1-enyl]sulfanylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C\SC(=C(C#N)C(N)=O)S\C=C\C(=O)OCC NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000003574 free electron Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- YZHUMGUJCQRKBT-UHFFFAOYSA-M sodium chlorate Chemical compound [Na+].[O-]Cl(=O)=O YZHUMGUJCQRKBT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Sloučeniny obecného vzorce I pro použití jako látek vážících se do malého žlábku dvoušroubovice DNA (minor groove) a v důsledku toho zvyšujících pevnost vazby komplementárních řetězců DNA účastnících se interakce, a tedy teplotu tání vznikajícího duplexu. Řešení je využitelné zejména pro metody identifikace či kvantifikace nukleových kyselin.
Description
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká látek schopných vsunout se a vázat do malého žlábku dvoušroubovice DNA (minor groove).
Dosavadní stav techniky
Je známo, že molekuly některých sloučenin jsou schopné vsunout se a vázat do malého žlábku dvoušroubovice DNA (minor groove) a v důsledku toho zvyšovat pevnost vazby komplementárních řetězců DNA, účastnících se interakce, a tím teplotu tání vznikajícího duplexu. Pro tyto molekuly se obecně používá anglický termín Minor Groove Binders (MGB).
Rada molekul působících mechanismem vazby do malého žlábku dvoušroubovice DNA je zkoumána, testována a v některých případech i klinicky využívána pro svou schopnost do určité míry blokovat realizaci genetické informace jako terapeutika, především bakteriálních a parazitárních infekcí, ale i jako potenciální antivirotika ěi antineoplastika (WARTELL R. M., LARSON J. E., WELLS R. D. J. Biol. Chem. 1974, vol. 249, p. 6719-6731; ZIMMER C. Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 1975, vol. 15, p. 285-318; NGUYEN B., NEIDLE S., WILSON W. D. Acc. Chem. Res. 2009, vol. 42, p. 11-21; WILSON W. D., TANIOUS F. A., MATHIS A. TEVIS D., HALL J. E., BOYKIN D. W. Biochimie 2008, vol. 90, p. 999-1014; ARAFA R. K., ISMAIL M. A., MUNDE M., WILSON W. D., WENZLER T., BRUN R., BOYKIN D. W. Eur. J. Med. Chem. 2008, vol. 4, p. 2901-2908; BARALDI P. G., BOVERO A., FRUTTAROLO F., PRETI D., TABRIZI M A., PA V ANI M. G., ROMAGNOLI R. Med. Res. Rev. 2004, vol. 24, p. 475-528). Díky vazbě v malém žlábku komplikují transkripci a následně tedy translaci a množení nežádoucích buněk ěi tkání. Z klinicky významných je možno uvést např. pentamidin. Velkou oblastí využití MGB je potom molekulární biologie a diagnostika. Ke stabilizaci duplexů DNA lze využít i látky s interkalační aktivitou (US 4 835 263), MGB jsou však zpravidla k tomuto účelu výhodnější. Mezi nej významnější molekuly z této skupiny patří sloučeniny typu Hoechst (PJURA P. E., GRZESKOWIAK K., DICKERSON R. E. J. Mol. Biol. 1987, vol. 197, p. 257271).
Strukturně jsou MGB poměrně různorodé, uvedenou aktivitu vykazují molekuly typu heterocyklických oligoamidů (netropsin, distamycin a jejich analogy), diamidino- resp. diguanidinosubstituované látky (pentamidin, berenil, 4',6-diamidino-2-fenylindol; LARSEN T. A., GOODSELL D. S., CASCIO D., GRZESKOWIAK K., DICKERSON R. E. J. Biomol. Struct. Dyn. 1989, vol. 7, p. 477-491) i méně bazické deriváty benzimidazolu (Hoechst sloučeniny), případně kombinace uvedených struktur (SHENG J., GAN J., HUANG Z. Med. Res. Rev. 2013, vol. 33, no. 5, p. 1119-1173). Předpokladem vazby do malého žlábku DNA je vhodné prostorové zakřivení molekuly, schopnost vytvářet van der Waalsovy a vodíkové vazby s exocyklickými skupinami a heterocyklickými dusíky nukleových bází a výhodou je vzhledem k anionickému charakteru nativních řetězců DNA bazicita MGB molekul (KIELKOPF C. L., WHITE S., SZEWCZYK J. W., TURNER J. M., BAIRD E. E., DERVAN P. B. REES D. C. Science 1998, vol. 282, p. 111-115; SQUIRE C. J., BAKER L. J., CLARK G. R., MARTIN R. F., WHITE J. Nucleic Acids Res. 2000, vol. 28, p. 1252-1258; NEIDLE S., MANN J„ RAYNER E., BARON A., BOAHEN Y., SIMPSON LJ., SMITH N. J., FOX K. R., HARTLEY J. A., KELLAND L. R. Chem. Commun. 1999, p. 929-930). Jednotlivé typy vazeb se uplatňují u molekul MGB v různé míře; van der Waalsovy vazby jsou základem interakce látek typu Hoechst s DNA, naproti tomu vodíkové vazby jsou klíčové u oligoamidů (netropsin, distamycin). Mezi MGB patří jak molekuly s poměrně flexibilní strukturou, jejichž příkladem je pentamidin, tak i poměrně rigidní, např. již zmíněné deriváty benzimidazolu. Relativně novější aplikací MGB s velkým významem pro praxi
-1 CZ 305332 B6 je jejich využití ke stabilizaci duplexů nukleových kyselin, vznikajících při molekulárně biologických a genetických metodách, využívaných pro detekci cílové sekvence DNA, mutací, apod. K tomuto účelu je patentováno využití přírodních látek typu distamycinu ajeho derivátů či jiných oligoamidických molekul (US 5 955 590; US 6 949 367). Publikovány byly i duplex stabilizující konjugáty oligonukleotidů s analogy barviva Hoechst 33258 (RAJUR S. B., ROBLES J., WIEDERHOLT K., KUIMELIS R. G„ MCLAUGHLIN L. W. J. Org. Chem. 1997, vol. 62, p. 523529) nebo DAPI.
V současné době existuje za tímto účelem několik přímých chemických modifikací nukleových kyselin a minimálně u dvou z nich byla jejich komercionalizace úspěšná. Jedná se o tzv. Locked nucleic acids (LNA, O2'-C4'-methylenenovou skupinou přemostěný cyklus ribosy, např. Metabion GmbH; www.metabion.com/) a Bridged Nucleic Acids (BNA, O2'-C4'-methylenaminoskupinou přemostěný cyklus ribosy, např. Biosynthesis lne.; http://www.biosyn.com/).
Z MGB využívají molekuly nezveřejněné struktury komerčně např. firmy Exiqon A/S (http://www.exiqon.com/lna-technology), Nanogen lne. (a) http://nanogen.com b) http://www.groovebiopharma.com/?q=node/10) a Applied Biosystems lne. (nyní Life Technologies Corp.; http://www.lifetechnologies.com/cz/en/home.html). Podobné modifikace jsou nyní široce využívány v molekulární biologii. Potenciál těchto látek, vázaných na syntetické molekuly nukleových kyselin, je tedy zejména jejich použití ve vývoji a výrobě diagnostik a potenciálně také jako nová genová terapeutika. Dosud se ve světovém měřítku k tomuto účelu používají 2 až 3 takové molekuly, nejsou však vhodné pro všechny aplikace, neboť jsou do značné míry sekvenčně specifické. Nejčastěji používaný je pravděpodobně CDPI3 (trimer-amid l,2-dihydro-(3//)-pyrrolo[3,2e]indol-7-karboxylové kyseliny) a několik jeho derivátů. Základní struktura, odvozená ze struktury duokarmycinů, je známa již řadu let, její syntéza je poměrně komplikovaná a problematická může být i stabilita (BOGER D. L„ C0LEMAN R. S., INVERGO B. J. J. Org. Chem. 1987, vol. 52, no. 8, p. 1521-1530). Použití podléhá patentové ochraně, je velmi nákladné a CDPI3 také není vhodný pro všechny aplikace (US 5 801 155, US 6 084 102, US 7 582 739 B2, US 2011/0172289 Al). Není běžně dostupný jako modifikující chemikálie, pouze ve formě již kompletně nasyntetizovaných oligonukleotidových sond (US 7 205 105 B2). Lze ho využít pro modifikaci oligonukleotidů na 3'- nebo 5'-konci oligonukleotidu (US 2013/0030166 Al).
O dosažení vyšší stability duplexu DNA se snaží kromě uvedených i další technologie, např. vazba organických polyaminů (http://www.metabion.com/products/zna.php; NOIR R., KOTERA M., PONS B., REMY J. S., BEHR J. P. J. Am. Chem. Soc. 2008, vol. 130, p. 13500-13505; US 8 465 921).
Většina chemických sloučenin používaných jako sloučeniny vážící se do malého žlábku dvoušroubovice DNA jsou flexibilní molekuly obsahující několik aromatických jader spojených můstky (např. distamycin) nebo naopak malé rigidní molekuly typu benzimidazolu s vlastní fluorescencí, která může v některých aplikacích využívajících fluorescenční barviva s emisí v nižších vlnových délkách rušit stanovení. Přetrvává potřeba poskytnout sloučeniny vážící se do malého žlábku dvoušroubovice DNA, které by byly flexibilní, ale zároveň snadno připravitelné, s nízkou molekulovou hmotností a bez vlastní fluorescence.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je in vitro použití látek obecného vzorce I jako sloučenin vážících se do malého žlábku dvoušroubovice DNA. Jsou to bazické molekuly na bázi aromatického kruhu substituovaného dvěma CN skupinami a dále substituovaného flexibilními uhlíkovými řetězci obsahujícími heteroatom, které jsou schopné vhodného prostorového zakřivení molekuly a díky přítomnosti volných elektronových párů tvorby vodíkových vazeb s dusíky nukleových bází. Vynález se týká sloučenin obecného vzorce I
-2 CZ 305332 B6
NC CN
Y-(H2C)--X X-(CH2)h-Y (I), kde A a B vzájemně nezávisle značí N nebo CH;
X je vybrán ze skupiny obsahující kyslík, síru;
η = 1 až 10;
Y je vybrán ze skupiny obsahující NH2, NH(alkyl), N(alkyl)2, NH(hydroxyalkyl), N(hydroxyalkyl)2, NH(alkyloxyalkyl), N(alkyloxyalkyl)2, NH(hydroxyalkyloxyalkyl), N(hydroxyalkyloxyalkyl)2;
přičemž alkyl obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku a cykloalkyl obsahuje 3 až 8 atomů uhlíku.
Vynález se dále týká solí sloučenin obecného vzorce I vytvořených reakcí substituentu Y s anorganickou kyselinou, s výhodou vybranou ze skupiny zahrnující HCI, H2SO4, H3PO4 a HNO3.
Předmětem vynálezu je použití látek obecného vzorce I nebo jejich solí vzniklých reakcí substituentu Y s anorganickou kyselinou, s výhodou vybranou ze skupiny zahrnující HCI, H2SO4, H3PO4 a HNO3, jako látek vážících se do malého žlábku dvoušroubovice DNA (minor groove). V důsledku toho tyto látky zvyšují pevnost vazby komplementárních řetězců DNA účastnících se interakce (Minor Groove Binder (MGB)), vedoucí ke zvýšení teploty tání duplexu DNA.
Nově bylo zjištěno, že látky obecného vzorce I je možné použít jako látky vážící se do malého žlábku dvoušroubovice DNA. Jejich předností je snadná příprava, nízká molekulová hmotnost, bazicita a flexibilita a absence vlastní fluorescence. Lze je použít například v kombinaci s vhodnými dvojicemi oligonukleotidů jako systém interní kontroly v analýze teploty tání pro real-time PCR, kde má význam sledovat vliv látek v reakci na teplotu tání (např. u analýz genetických polymorfismů), přičemž sekvence oligonukleotidů se volí tak, aby nebyly komplementární s DNA sekvencemi běžně se vyskytujícími v přírodě. Sloučeniny je dále možné použít v kombinaci s dvojicemi vhodných oligonukleotidů například v metodách srovnání vlivu dalších sloučenin na zvýšení teploty tání duplexu a experimentech zjišťujících závislost vlivu na zvýšení teploty tání duplexu na sekvenci oligonukleotidů. Vynález je rovněž užitečný pro metody identifikace či kvantifikace nukleových kyselin.
Objasnění výkresů
Obr. 1 znázorňuje graf zvýšení teploty tání duplexu DNA v závislosti na koncentraci testované sloučeniny II.
Obr. 2 ukazuje graf zvýšení teploty tání duplexu DNA v závislosti na koncentraci testované sloučeniny III.
-3 CZ 305332 B6
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1
Příprava a charakterizace sloučeniny vzorce II
NC CN
Roztok 2-(diethylamino)ethanthiol-hydrochloridu (3,56 g, 21 mmol) ve vodě (20 ml) se smísil s 1M roztokem NaOH (43,5 ml, 43,5 mmol) a míchal se při pokojové teplotě 10 minut. Poté se přidal najednou roztok 5,6-dichlorpyrazin-2,3-dikarbonitrilu (2 g, 10 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) a směs se míchala dále 30 minut při pokojové teplotě. Ke směsi se následně přidal diethylether (50 ml), organická fáze se oddělila a vodná promyla ještě dvakrát diethyletherem. Orga15 nické fáze byly spojeny, odpařeny, znovu rozpuštěny v diethyletheru a přefiltrovány. Dále byl roztok třikrát vytřepán s okyselenou vodou (HC1). Vodná fáze byla zneutralizována (do mírně bazické reakce) roztokem NaOH a produkt byl třikrát vytřepán do diethyletheru. Organická fáze byla vysušena (Na2SO4), odpařena a produkt byl přečištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu (aceton/diethylether 1:1). Frakce s čistým produktem nebyly odpařeny, ale produkt byl ihned převeden na dihydrochlorid probubláním plynným HC1. Byla získána bílá pevná látka, která poskytla čistý produkt po překrystalizování ze směsi methanol/diethylether. Výtěžek: 3,95 g (84 %). Data pro dihydrochlorid 5,6-bis[2-(diethylamino)ethylsulfanyl]pyrazin-2,3-dikarbonitrilu: T.t. 215 až 217 °C za rozkladu. IČ (KBr) 2995, 2983, 2927, 2587, 2560, 2455, 2237(CN), 1486, 1459, 1317, 1160, 1140, 983. I3C NMR (CD3OD) δ 9,5, 25,3, 50,4, 114,8, 128,5, 159,9.
*H NMR (CD3OD) δ 4,85 (s, 2H, NH), 3,80 - 3,68 (m, 4H, S-CH2), 3,54 - 3,43 (m, 4H, N-CH2), 3,36(q, 8H, 7=7,3 Hz,N-CH2), 1,42 (t, 12H,J=7,4 Hz, CH3).
Příklad 2
Příprava a charakterizace sloučeniny vzorce III
-4CZ 305332 B6
NC CN
K bezvodému uhličitanu draselnému (7,7 g, 57 mmol) byl přidán dimethylsulfoxid (100 ml) a směs byla ponořena do ultrazvukové lázně na 30 minut. Poté byl do směsi přidán hydrochlorid 2(diethylamino)ethanthiolu (3,39 g, 20 mmol). Po úplném rozpuštění hydrochloridu 2-(diethylamino)ethanthiolu byl do směsi přidáván po částech 4,5-dichlorftalonitril (1,576 g, 8 mmol) po dobu 2 hodin. Reakce se zřetelně zabarvovala do žluté barvy. Poté byla reakční směs míchána 24 hodin za pokojové teploty. Po ukončení reakce byla suspenze převedena do kádinky s ledem a vodou. Produkt se vysrážel a byl následně odfiltrován. Kvůli potenciálně špatné stabilitě byl produkt převeden na stabilnější dihydrochlorid a dále čištěn v této formě. Vysušený produkt byl rozpuštěn v diethyletheru (100 ml) a za stálého míchání byl roztok sycen plynným HC1 (vyvíjen pomocí NaCl + H2SO4). Vysrážený dihydrochlorid byl odfiltrován a získaný produkt následně překrystalizován ze směsi isopropanol (70 ml): ethanol (200 ml). Bylo připraveno 2,46 g bílé, pevné krystalické látky, což odpovídá výtěžku 66 %. Data pro dihydrochlorid 4,5-bis[2-(diethylamino)ethylsulfanyl]ftalonitrilu: T.t. 239 až 244 °C za rozkladu, elementární analýza (%) pro C20H32Cl2N4S2: C 51,82; H 6,96; N 12,09; S 13,84; nalezeno: C 51,55; H 6,91; N 12,25; S 13,28. *H NMR (300 MHz, D2O) δ (ppm) 7,94 (s, 2H, ArH), 3,60 - 3,42 (m, 8H, CH2), 3,31 (q, 9H, J = 7,3 Hz, CH2), 1,31 (t, 12H, J = 7,3 Hz, CH3). 13CNMR (75 MHz, D2O) δ (ppm) 142,9; 131,8; 116,3; 113,1; 50,4; 48,4; 27,1; 8,8.
Příklad 3
Metoda stanovení vlivu látek na zvýšení teploty tání duplexu DNA a k použití látek obecného vzorce (I)
Metoda se provádí ve vodném prostředí za přítomnosti pufru pro Taq polymerázu, používaném běžně pro PCR. V roztoku jsou přítomny 2 navzájem komplementární oligonukleotidy. Jeden je značen fluoroforem na 5'-konci (FAM) a druhý zhášečem na 3'-konci (BHQ-1). Stanovení teploty tání duplexu se provádí v přístroji pro real-time PCR, kde dochází k postupnému zvyšování teploty ze stavu, kdy jsou oligonukleotidy vázány v duplexu, až do teploty, kdy jsou oligonukleotidy denaturovány. Denaturace je doprovázena zvýšením fluorescence, neboť vzdálenost mezi zhášečem a fluoroforem je v denaturovaném stavu větší a nedochází ke zhášení fluoroforu zhášečem.
Zvyšování teploty tání probíhá v přírůstcích 0,2 °C každých 5 s. Ve stejných intervalech je měřena fluorescence v každé z 96 jamek na destičce. Výsledkem je záznam, kdy na ose xje teplota a na ose y fluorescence. Derivací změny fluorescence podle teploty získáme graf, kde maxima odpovídají teplotě tání duplexu. Na jedné desce se vyhodnocuje škála koncentrací (200 μΜ až 32 nM) analyzované látky a látky lze mezi sebou porovnat podle koncentrace, ve které účinně zvyšují teplotu tání. Pro analýzu se mohou použít různé dvojice oligonukleotidů. Výsledky stanovení vlivu látek vzorce II a III na zvýšení teploty tání duplexu DNA jsou uvedeny na obr. 1 a 2.
Claims (3)
1. Použití in vitro sloučenin obecného vzorce I
NC CN
Y-(H2C)--X X-(CH2)h-Y (I), kde A a B vzájemně nezávisle značí N nebo CH;
X je vybrán ze skupiny obsahující kyslík, síru;
η = 1 až 10;
Y je vybrán ze skupiny obsahující NH2, NH(alkyl), N(alkyl)2, NH(hydroxyalkyl), N(hydroxyalkyl)2, NH(alkyloxyalkyl), N(alkyloxyalkyl)2, NH(hydroxyalkyloxyalkyl), N(hydroxyalkyloxyalkyl)2, přičemž alkyl obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku a cykloalkyl obsahuje 3 až 8 atomů uhlíku; a/nebo jejich solí vytvořených reakcí substituentu Y s anorganickou kyselinou, jako látek vážících se do malého žlábku dvoušroubovice DNA.
2. Použití látky obecného vzorce I a/nebo její soli podle nároku 1 pro zvýšení pevnosti vazby komplementárních řetězců DNA účastnících se interakce, a tedy teploty tání vznikajícího duplexu.
3. Použití látky obecného vzorce I a/nebo její soli podle nároku 1 pro metody identifikace či kvantifikace nukleových kyselin.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2013-816A CZ305332B6 (cs) | 2013-10-25 | 2013-10-25 | Použití derivátů pyrazinu a jejich isosterů jako sloučenin vážících se do malého žlábku DNA |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2013-816A CZ305332B6 (cs) | 2013-10-25 | 2013-10-25 | Použití derivátů pyrazinu a jejich isosterů jako sloučenin vážících se do malého žlábku DNA |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2013816A3 CZ2013816A3 (cs) | 2015-05-06 |
| CZ305332B6 true CZ305332B6 (cs) | 2015-08-05 |
Family
ID=53266796
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2013-816A CZ305332B6 (cs) | 2013-10-25 | 2013-10-25 | Použití derivátů pyrazinu a jejich isosterů jako sloučenin vážících se do malého žlábku DNA |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ305332B6 (cs) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4460403A (en) * | 1977-12-22 | 1984-07-17 | Kyowa Gas Chemical Industry Co., Ltd. | 2,3-Dicyano 6 phenyl pyrazine herbicides |
| WO2002101007A2 (en) * | 2001-06-13 | 2002-12-19 | Genesoft Pharmaceuticals, Inc | Antipathogenic benzamide compounds |
| US20060003349A1 (en) * | 1998-04-03 | 2006-01-05 | Epoch Biosciences, Inc. | Tm leveling compositions |
| WO2008038018A1 (en) * | 2006-09-30 | 2008-04-03 | University Of Strathclyde | Novel minor groove binders |
-
2013
- 2013-10-25 CZ CZ2013-816A patent/CZ305332B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4460403A (en) * | 1977-12-22 | 1984-07-17 | Kyowa Gas Chemical Industry Co., Ltd. | 2,3-Dicyano 6 phenyl pyrazine herbicides |
| US20060003349A1 (en) * | 1998-04-03 | 2006-01-05 | Epoch Biosciences, Inc. | Tm leveling compositions |
| WO2002101007A2 (en) * | 2001-06-13 | 2002-12-19 | Genesoft Pharmaceuticals, Inc | Antipathogenic benzamide compounds |
| WO2008038018A1 (en) * | 2006-09-30 | 2008-04-03 | University Of Strathclyde | Novel minor groove binders |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2013816A3 (cs) | 2015-05-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6999976B2 (ja) | Ｒｎａ配列の簡便検出法 | |
| Sparano et al. | Fluorescent sensors for specific RNA: a general paradigm using chemistry and combinatorial biology | |
| US20100092971A1 (en) | Compound having structure derived from mononucleoside or mononucleotide, nucleic acid, labeling substance, and method and kit for detection of nucleic acid | |
| Wang et al. | A highly selective coumarin-based chemosensor for the sequential detection of Fe3+ and pyrophosphate and its application in living cell imaging | |
| CA2762233C (fr) | Compose anticancereux et composition pharmaceutique le contenant | |
| Liu et al. | Direct and two-step bioorthogonal probes for Bruton's tyrosine kinase based on ibrutinib: a comparative study | |
| Ostrynska et al. | Design and synthesis of novel protein kinase CK2 inhibitors on the base of 4-aminothieno [2, 3-d] pyrimidines | |
| Rath et al. | Synthesis of amides from (E)-3-(1-chloro-3, 4-dihydronaphthalen-2-yl) acrylic acid and substituted amino acid esters as NorA efflux pump inhibitors of Staphylococcus aureus | |
| CA3142242A1 (en) | Fluorescent complexes comprising two rhodamine derivatives and a nucleic acid molecule | |
| AU2006294600A1 (en) | Alkoxy indolinone based protein kinase inhibitors | |
| Gröger et al. | Guanidiniocarbonyl-pyrrole-aryl conjugates as nucleic acid sensors: Switch of binding mode and spectroscopic responses by introducing additional binding sites into the linker | |
| Huang et al. | Synthesis, DNA binding and photocleavage study of novel anthracene-appended macrocyclic polyamines | |
| Kovalska et al. | Synthesis of novel fluorescent styryl dyes based on the imidazo [1, 2-a] pyridinium chromophore and their spectral-fluorescent properties in the presence of nucleic acids and proteins | |
| Tumir et al. | Interactions of novel phenanthridinium–nucleobase conjugates with complementary and non‐complementary nucleotides in aqueous media | |
| CZ305332B6 (cs) | Použití derivátů pyrazinu a jejich isosterů jako sloučenin vážících se do malého žlábku DNA | |
| Nuñez et al. | Synthesis and DNA binding profile of monomeric, dimeric, and trimeric derivatives of crystal violet | |
| TWI321131B (en) | Dna labeling reagents, acridinium-9-carboxamide derivatives and process of preparing dna labeling compounds | |
| Maity et al. | Synthesis of fluorescent D-amino acids with 4-acetamidobiphenyl and 4-N, N-dimethylamino-1, 8-naphthalimido containing side chains | |
| CZ2020154A3 (cs) | Deriváty akridinu a antracenu jako sloučeniny interkalující se do DNA a jejich použití | |
| WO2006018164A2 (de) | Fluoreszenzbasierende kinetische bestimmung der aktivität von transglutaminasen | |
| Halder et al. | A flavonol that acts as a potential DNA minor groove binder as also an efficient G-quadruplex loop binder | |
| Wu et al. | Synthesis of a novel fluorescent probe and investigation on its interaction with nucleic acid and analytical application | |
| Aavula et al. | Synthesis and Fluorescence of N, N, N‐Trimethyl‐2‐[methyl (7‐nitrobenzo [c][l, 2, 5] oxadiazol‐4‐yl) amino] ethanaminium Iodide, a pH‐Insensitive Reporter of Organic Cation Transport. | |
| JP4464614B2 (ja) | バルジ塩基認識分子およびバルジ塩基検出方法 | |
| Chandramohan et al. | Synthesis, characterization and pharmacological assessment of alkylated sulfonyl piperazines |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20191025 |