CZ304067B6 - Metoda pro stanovení koncentrace uromodulinu v séru a jeho pouzití jako sérového markeru pro diagnózu nefropatie - Google Patents
Metoda pro stanovení koncentrace uromodulinu v séru a jeho pouzití jako sérového markeru pro diagnózu nefropatie Download PDFInfo
- Publication number
- CZ304067B6 CZ304067B6 CZ20110722A CZ2011722A CZ304067B6 CZ 304067 B6 CZ304067 B6 CZ 304067B6 CZ 20110722 A CZ20110722 A CZ 20110722A CZ 2011722 A CZ2011722 A CZ 2011722A CZ 304067 B6 CZ304067 B6 CZ 304067B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- serum
- umd
- uromodulin
- nephropathy
- urine
- Prior art date
Links
- 108010027007 Uromodulin Proteins 0.000 title claims abstract description 95
- 102000018614 Uromodulin Human genes 0.000 title claims abstract description 91
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 50
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 title claims abstract description 40
- 239000003550 marker Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 16
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 29
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 10
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 9
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 8
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 101000749634 Homo sapiens Uromodulin Proteins 0.000 description 6
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 6
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 6
- 102000053430 human UMOD Human genes 0.000 description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 5
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 5
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 102000012192 Cystatin C Human genes 0.000 description 3
- 108010061642 Cystatin C Proteins 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 3
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 3
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 102000003966 Alpha-1-microglobulin Human genes 0.000 description 2
- 101800001761 Alpha-1-microglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 206010029148 Nephrolithiasis Diseases 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- QXDMQSPYEZFLGF-UHFFFAOYSA-L calcium oxalate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)C([O-])=O QXDMQSPYEZFLGF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 208000022437 nephrolithiasis susceptibility caused by SLC26A1 Diseases 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 210000003741 urothelium Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150104773 Apoh gene Proteins 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000034309 Bacterial disease carrier Diseases 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 102000015833 Cystatin Human genes 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108050001049 Extracellular proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000615261 Homo sapiens Multiple coagulation factor deficiency protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102100021387 Multiple coagulation factor deficiency protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102000004264 Osteopontin Human genes 0.000 description 1
- 108010081689 Osteopontin Proteins 0.000 description 1
- 102000015094 Paraproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010064255 Paraproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010037596 Pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009911 Urinary Calculi Diseases 0.000 description 1
- 102100040613 Uromodulin Human genes 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000004856 capillary permeability Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 108050004038 cystatin Proteins 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 210000001038 distal kidney tubule Anatomy 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000007249 familial juvenile hyperuricemic nephropathy Diseases 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000001434 glomerular Effects 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011862 kidney biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013178 mathematical model Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 208000008281 urolithiasis Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/34—Genitourinary disorders
- G01N2800/347—Renal failures; Glomerular diseases; Tubulointerstitial diseases, e.g. nephritic syndrome, glomerulonephritis; Renovascular diseases, e.g. renal artery occlusion, nephropathy
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Pouzití uromodulinu pro prípravu sérového markeru pro in-vitro stanovení nefropatie, pricemz snízení hodnoty uromodulinu indikuje nefropatii.
Description
Metoda pro stanovení koncentrace uromodulinu v séru a jeho použití jako sérového markéru pro diagnózu nefropatie
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu stanovení koncentrace uromodulinu v séru ajeho použití jako sérového markéru pro diagnózu nefropatie. Dále se vynález týká systému pro imunologické testy pro stanovení této koncentrace.
Oblast použití se týká medicíny, zejména lékařské diagnostiky. Přesněji vynález spadá do oblasti diagnostiky nefropatie a stanovení příslušného markéru.
Dosavadní stav techniky
Diagnostika i diferenciální diagnostika nefropatie je v současné době založena především na laboratorním vyšetření kombinace řady parametrů (tzv. multiplex analýzy) a zobrazovacích technikách (scintigrafie, sonografie, CT, NMR). Méně často, i když ne zcela ojediněle, jsou využívány invazivní metody k odhadu poruchy renální morfologie i funkcí (biopsie ledvin, invazivní metody k odhadu glomerulámí filtrace) i k sestavení finální diagnózy.
Optimální neinvazivní screeningový ukazatel pro hodnocení renálních funkcí však chybí. Pro odhad významnějších z postižení se využívá stanovení cystatinu C či kreatininu v různých matematických modelech, nicméně í jejich kombinace umožní odhad až významnějších forem nefropatie. Pro odhad incipietních postižení renálních funkcí či morfologie jsou často využívány kombinace stanovení různých proteinů v moči. Diferenciální diagnostika typu proteinurie je jednou z nedílných součástí diagnostiky onemocnění ledvin. Příčinou proteinurie bývá buď zvýšená kapilární permeabilita pro proteiny s překročením kapacity tubulů pro jejich zpětnou resorpci (tzv. glomerulámí proteinurie), porucha zpětné resorpce filtrovaných bílkovin (tzv. tubulární proteinurie), extrémní zvýšení některého proteinu v krvi (tzv. prerenální proteinurie) či zánětlivé a cytolytické procesy v urotraktu (tzv. postrenální proteinurie). Diagnostiky se k vyšetření proteinurie a jejího typu obvykle využívá stanovení indexu bílkovina/kreatinin v moči, elektroforetické vyšetření moči, vyšetření albuminu a jeho poměru ke kreatininu v moči, výpočet indexu selektivity proteinurie, stanovení α-1-mikroglobulinu, lehkých řetězců imunoglobulinů, ev. paraproteinu v moči.
Nevýhodou těchto analýz je, že jejich diagnostická efektivita nebývá dostatečná a výsledky jsou často zavádějící.
V současné nefrologii tak chybí diagnostický parametr, který by splňoval úlohu screeningového ukazatele (robustnost, dostatečná diagnostická efektivita). Nejen proto je intenzivně hledán parametr, který by umožnil jednoduchým stanovením odhad přítomnosti, ev. etiologie nefropatie již v časném stadiu.
Tamm Horsfallův protein (inhibitor hemaglutinace, THF) byl před 50 lety izolován v moči u lidí.
Sikri et al. (1981) lokalizovali THP v epiteliálních buňkách v tlustých vzestupných raméncích Hanleyovy kličky a svinutých distálních tubulech ledvin.
Muchmore and Decker (1985) izolovali zmočí těhotných žen glykoprotein 85kDa známý jako Tamm Horsfallův urinární glykoprotein, pro nějž navrhli jméno uromodulin (dále také jen UMD), a to především díky své schopnosti inhibovat antigenem indukovanou proliferaci T buněk a monocytámí cytotoxitu. Ukázali, že uromodulin (UMD) potlačuje antigen-specifickou proliferaci in-vitro. Uromodulin (UMD) je nejhojnější protein v normální lidské moči. O pár let později
- 1 CZ 304067 B6 bylo sekvenací zjištěno {Pernica et al), že UMD je totožný s THF. THF se skládá z 616 AMK, obsahuje 48 cysteinových residuí a 24 disulfidových můstků (86-90 kDa).
Lidský urinární glykoprotein (HGP92) odštěpený z Tamm Horsfallova proteinu (THP) byl purifikován Fontánem et al. (1995), kteří navrhli, že imunostimulační vlastnosti Tamm Horsfallova proteinu byly důsledkem jeho kontaminace proteinem HGP92.
Santambrogio et al. (2008) popsali C-terminální štěpení vylučované formy zralého proteinu ledvin.
Jovine et al. (2002) uvádí, že zóna pellucida (ZP), oblast, která se vyskytuje u mnoha eukaryontních extracelulárních proteinů a je přítomna v uromodulinu (UMD), umožňuje polymeraci proteinů do filamentů.
V posledních letech bylo zjištěno, že UMD je produkován vzestupným i sestupným raménkem i Henleyovou kličkou tubulů (u krys nalezen i v astrocytech) a vylučován do moče v koncentraci kolem 50 mg/1. Uromodulin inhibuje bakteriální kolonizaci močového traktu, tvorbu močových kamenů, váže a aktivuje leukocyty a hraje zřejmě roli také v nepropustnosti tlustého vzestupného raménka Henleovy kličky pro vodu. Ovlivňuje pravděpodobně adhezi patogenů {E.coli) v urotelu, má signální účinky a interaguje s cytokiny. Současně se zdá, že inhibuje agregaci krystalů kalcium oxalátu v moči a ovlivňuje transport iontů (Na i Cl) v tubulech.
V rámci experimentálních modelů bylo zjištěno, že mutace genu pro UMD bývá spojena s výskytem familiární hypertrofické nefropatie (FJHN) či modeullary kidney disease (MCFD2). Myši, u kterých byl gen pro UMD odstraněn byly predisponovány k infekci E.coli, což je považováno za důkaz, že UMD snižuje adhezi E.coli na urotelu. Současně trpí často kalcium oxalátovou urolitiázou a nefrokalocinózou (UMD obsahuje vazebné domény pro Ca2+, které inhibují krystalizací kalcium oxalátu); pokles UMD v moči vede tedy logicky až k nefrokalocinóze.
Podobné efekty UMD byly prokázány i v rámci humánních studií. Mutace UMD vedla u lidí k poklesu UMD v moči, vzniku kalcium oxalátové urolitiázy až k renálnímu selhání. Současně bylo zjištěno, že UMD funguje jako aktivátor granulocytů, které hrají roli v primární obraně proti infekci, a jeho nedostatek v moči vede k uroinfekci. Snížení UMD v moči vedlo i k tubulární atrofii a intersticiální infiltraci, kdy byla prokázána existence souvislosti mezi nízkým UMD a chronickou renální insuficiencí, údaje se však ve studiích lišily a nebyly konzistentní.
V nedávné době však bylo prokázáno, že zvýšené močové koncentrace uromodulinu jsou také spojeny s jedním z polymorfismů genu UMD a zvyšují významně riziko vývoje chronické renální insuficience (Kottgen A, Hwang S-J, Larson MG, et al. Uromodulin levels associate with a common UMD variant and risk for incident CKD. J Am Soc Nephrol 2010;21:337-344).
V dokumentu US 2011091915 je popsán způsob testování onemocnění ledvin na základě stanovení lidského uromodulinu a imunoglobulinu A ve vzorku moči. Dále je zde popsána testovací souprava zahrnující protilátky proti lidskému uromodulinu a imunoglobulinu A. Bylo ukázáno, že pacienti s onemocněním ledvin měli v moči vyšší koncentrace uromodulinu.
Cílem vynálezu je včasné rozpoznání nebo sledování poruchy ledvin nefropatie. Úkolem vynálezu tedy je poskytnout způsob pro včasné rozpoznání nebo sledování nefropatie, sérový markér pro tuto diagnostiku a systém pro imunologické testy, kterým je možné stanovit vhodný parametr, který by splňoval úlohu screeningového ukazatele pro posuzování rizik a sledování průběhu v diagnostice a léčbě poruchy ledvin (nefropatie) podobně, jako tomu bylo u způsobu a systému pro rozpoznání metabolického syndromu popsaném v EPI904082.
-2 CZ 304067 B6
Podstata vynálezu
Na základě rozsáhlého výzkumu a testování bylo zjištěno, že v séru zdravých jedinců je UMD přítomno a navíc hodnoty UMD v séru jsou u zdravých jedinců vyšší než u osob s nefropatií. Vynález je tedy založen na této překvapivé skutečnosti, která je v naprostém nesouladu s dosud nabytými znalostmi a literárními údaji.
Tudíž vynález se týká způsobu diagnózy nefropatie spočívající v tom, že je stanovena koncentrace lidského uromodulinu v séru, která je následně využita jako indikátor nefropatie.
Původním předpokladem bylo nalézt sérový markér poškození ledviny, který se nevyskytuje v séru za normálních podmínek u zdravých jedinců a je striktně ledvinového původu. Jeho výskyt v séru by poukazoval na poškození ledviny ajeho únik do cirkulace krve. Překvapivě se ukázalo, že uromodulin, kterýje klasickým močovým proteinem a v séru nebyl očekáván a tudíž dosud ani měřen, se nejen v séru zdravých jedinců vyskytuje, ale že je jeho hladina statisticky velmi významně snížena, oproti předpokládanému zvýšení, u pacientů trpících nefropatiemi ve srovnání se zdravými jedinci.
S výhodou jsou při provádění způsobu pro diagnózu nefropatie pro stanovení koncentrace lidského uromodulinu v séru použity systémy pro imunologické testy, zejména v kombinaci s optickým nebo biosenzorickým vyhodnocením, které umožňují jednoduché a rychlé stanovení koncentrace UMD v séru. K tomuto účelu lze přitom použít nejrůznější systémy, s jejichž pomocí se dá koncentrace UMD stanovit, např. paralelní nebo po sobě jdoucí měření koncentrací, jestliže se provede kalibrace stanovenými, popř. známými koncentracemi UMD, titrací nebo použitím různých stanovených koncentrací u vychytávacích molekul, které se vážou na pevnou fázi/materiál nosiče a mají afinitu k UMD nebo z něho odvozeným strukturám.
Vhodné jsou přitom takové metody, které zahrnují materiály nosiče, na jejichž povrchu se imobilizují substance, které jsou vhodné ke stanovení UMD v séru. Jako materiál nosičů jsou vhodné jakékoli materiály, na jejichž povrchu se dají imobilizovat molekuly nebo materiály pro biofyzikální imobilizaci. Pro aplikaci způsobu podle tohoto vynálezu jsou vhodné zejména materiály nosičů s alespoň částečně planámě vytvořenými povrchy, např. skleněné nebo umělohmotné čipy nebo destičky pro metodou ELISA, protože umožňují zvláště jednoduchou aplikaci způsobu podle tohoto vynálezu, např. např. pomocí skenerů nebo ELISA readerů. Vedle planámích povrchů jsou pro stanovení koncentrace UMD zvláště vhodné i plochy dna jamek destiček pro metodu ELISA.
Jako systém pro imunologické testy se tedy nabízí zejména Enzyme-Linked Immunoabsorbent Assay (ELISA) nebo obdobné systémy, které používají barvivém značené molekuly, čímž je umožněna zvláště vysoká senzitivita systému ke stanovení koncentrace UMD. Materiál nosiče, na kterém je imobilizována jedna nebo více substancí, např. protilátky s afinitou k UMD nebo odvozeným molekulám, se přitom uvede do kontaktu se sérem (případně jinou tělní tekutinou), nebo s roztoky, které sérum obsahují, takže UMD, resp. odvozená forma/sekvence, který se v roztoku se sérem případně nalézá, se může se substancemi v blízkosti povrchu materiálu nosiče asociovat. K tomu může být sérum rozpuštěno v inkubačním roztoku, např. blokačním pufru, který například zmenšením nespecifických interakcí vede ke zlepšení poměru signál-šum. K prokázání asociovaného UMD nebo odvozených molekul na povrchu se na materiál nosiče nanese, většinou po nějakém mycím kroku, rozpuštěná substance, zejména anti-UMD protilátka, přičemž rozpuštěná substance použitá k prokázání UMD má rovněž afinitu k UMD a váže se na UMD asociovaný v blízkosti materiálu nosiče.
Detekce průkazní substance/protilátky navázané na UMD, popř. na z něho odvozené molekuly, může proběhnout nejrůznějším způsobem.
-3 CZ 304067 B6
Průkazní substance, popř. anti-UMD protilátka již může být opatřena nějakým značením, např. barvivém, zejména fluorescenčním barvivém, nebo nějakým enzymem, který může opticky přeměnit substrát. Průkazní substance, zejména protilátka, může být ovšem rovněž opatřena nějakou molekulou, např. biotinem, která má zase afinitu k jiné značené látce.
Není-li průkazní substance/anti-UMD protilátka sama značena, jsou vhodné zejména značené sekundární protilátky, které se přidají většinou po nějakém mycím kroku a které průkazní substanci/anti-UMD protilátku na povrchu materiálu nosiče zviditelní, případně umožní následné optické vyhodnocení.
Podstatou vynálezu je tedy také použití uromodulinu jako sérového markéru pro diagnózu nefropatie.
Byl vyvinut ELISA test určený k stanovení uromodulinu v séru i moči. Stanovení uromodulinu v séru (LMD-S) má vynikající efektivitu pro odhad nefropatie (lepší než ostatní běžně užívané parametry). Další nezanedbatelnou výhodou je to, že test nefropatie je možné provádět kdykoli a získat tak bezprostřední výsledky, neboť krev (sérum) je možné kdykoli a snadno vyšetřovaným osobám odebrat.
Přehled obrázků na výkresech
Vynález bude osvětlen pomocí obrázků, kde obr. 1 znázorňuje hodnoty koncentrace UMD v séru u zdravých jedinců a u pacientů trpících nefropatií u první provedené studie, obr. 2 znázorňuje hodnoty koncentrace UMD v moči u zdravých jedinců a u pacientů trpících neuropatií u první provedené studie, obr. 3 znázorňuje jednotlivé naměřené hodnoty koncentrace UMD v séru u zdravých jedinců a u pacientů trpících neuropatií s vyznačením hodnoty 125,4 yig/l získané při ROC analýze, obr. 4 znázorňuje příslušnou ROC křivku, obr. 5 znázorňuje hodnoty koncentrace UMD v séru u zdravých jedinců a u pacientů trpících nefropatií u druhé provedené studie, obr. 6 znázorňuje uromodulin RD172163100 na 12% SDS-PAGE, obr. 7 znázorňuje 12% SDS-PAGE separaci anti-lidských uromodulinových protilátek, obr. 8 znázorňuje příslušné purifikační chromatogramy, obr. 9 znázorňuje distribuci koncentrací uromodulinu v závislosti na věku a pohlaví u zdravých dospělých osob.
Příklady provedení vynálezu
Jako reprezentativní nelimitující ilustrace vynálezu se uvádějí následující příklady.
Příklad 1:
Použití ELISA testu pro stanovení uromodulinu (UMD) v tělních tekutinách jako markéru nefropatie.
Bylo vyšetřeno 127 osob, 66 mužů, 61 žen. Z toho 15 zdravých kontrol, 112 pacientů nefirologické ambulance nemocnice Prostějov (DM nefropatie, pyelonefritida, CR1 NS, intersticiální nefropatie), kteří se nelišili skladbou pohlaví ani věkovou strukturou.
U všech byl vyšetřen UMD v séru i moči, ApoH v moči, osteopontin v moči, TFF1-3 v séru a moči, urea, kreatinin, ionty, bílkovina a albumin v moči, Al MG v moči, cystatin C v séru.
Nefropatie byla identifikována nefrologem a definována jako přítomnost minimálně tří znaků z: zvýšený kreatinin v séru, GF dle MDRD nebo cystatinu C < 1 ml/s, zvýšený cystatin v séru, zvýšený index albumin/kreatinin v moči, zvýšený alfa-1 mikroglobulin v moči.
-4CZ 304067 B6
Poté byly porovnány koncentrace UMD v séru a moči u zdravých jedinců a pacientů trpících neuropatií. Výsledky porovnání byly následující:
UMD v séru - vyšetření ukázalo, že zdraví jedinci měli hodnoty koncentrace UMD v séru významně vyšší než pacienti trpící nefropatií (241 vs. 70,6 pg/I, při p<0,01). Na obr. 1 jsou znázorněna nalezená rozmezí hodnot koncentrace UMD v séru.
UMD v moči - vyšetření ukázalo, že zdraví jedinci měli hodnoty koncentrace UMD v moči zpravidla významně vyšší než pacienti trpící nefropatií (11165 vs. 4860 pg/l, p<0,01). Na obr. 1 jsou znázorněna nalezená rozmezí hodnot koncentrace UMD v moči. Ovšem vzhledem k nezanedbatelnému přesahu hodnot naměřených u zdravých jedinců a pacientů trpících nefropatií má stanovení koncentrace UMD v moči nižší vypovídací schopnost.
Další popis se tedy týká pouze měření a vyhodnocování koncentrace UMD v séru.
Pro statistické vyhodnocení měření UMD v séru byla použita ROC analýza se stanovením senzitivity a specifičnosti, kdy bylo zjištěno následující: senzitivita 92%, specifičnost 100%, AUC 99% pro UMD-S pro postižení ledvin při hodnotě nad 125,4 pg/l. Uvedené hodnoty jsou znázorněny na obr. 3 a na obr. 4 je pak znázorněna příslušná ROC křivka.
Dále byla provedena analýza pomocí logistické postupné (stepwise) regrese (dg ano/ne, měřené ukazatele)
Vybrán pouze UMD-S (p<0,01), Ods 0,95
Korektně zařazeno 96,1 % pacientů.
AUC ROC 0,98 (0,965-0,99)
Skutečnost
Predikce
Procento korektně (zařazených
80,00%
110 98,21%
Procento korektně zařazených případů 96,06%
Spolehlivé se tedy ukázalo, že hodnoty UMD v séru jsou u zdravých jedinců vyšší než u osob s nefropatií.
Stanovení uromodulinu v séru má tedy vynikající efektivitu pro odhad nefropatie (lepší než výše uvedené parametry) a zařazuje ve čtyřpolní tabulce korektně více než 96 % vyšetřovaných.
Příklad 2:
Obdobná studie, i když menšího rozsahu, byla provedena také na První lékařské fakultě v Praze. Bylo vyšetřeno 7 osob postižených nefropatií a stejné množství zdravých jedinců. I přes relativně
-5CZ 304067 B6 malý počet zúčastněných osob dává studie zajímavé výsledky, které odpovídají nálezu v příkladu 1.
Poté byly porovnány koncentrace UMD v séru u zdravých jedinců a pacientů trpících neuropatií. 1 toto vyšetření ukázalo, že zdraví jedinci měli hodnoty koncentrace UMD v séru významně vyšší než pacienti trpící neuropatií a žádný zdravý jedinec neměl koncentraci uromodulinu v séru nižší než kterýkoli nemocný, viz obr. 5.
Popis proteinu použitého ke zvýšení protilátek
U výše uvedených studií byl použit přírodní protein izolovaný z lidské moči, obsažený v ELISA testu RD172163100 od BioVendor.
Na obr. 6 je znázorněn uromodulin RDI72163100 na 12% SDS-PAGE, přičemž první sloupec představuje M.W. markér- 14, 21, 31,45, 66, 97 kDa2, druhý sloupec pak redukovaný a zahřátý vzorek (5pg / pruh3) a třetí sloupec neredukovaný a nezahřátý vzorek (5pg / pruh).
Výrobní postup
Protein byl purifikován z lidské moči, jak dříve popsal Santambrogio et al. (2008). V krátkosti, 400 ml moči odebrané od několika mužů bylo smícháno s ekvivalentním objemem 1,6M NaCl a mícháno 16 hodin při 3 až 9 °C. Poté byla suspenze odstředěna, oddělen supernatant, a sraženina byla rozpuštěna v 100 ml 0,58M NaCl a míchána po dobu 5 hodin při 3 až 9 °C. Načež byla suspenze odstředěna, supernatant oddělen, pevná složka resuspendována v 100 ml 0,58M NaCl a ihned znovu odstředěna. Výsledná pevná složka byla rozpuštěna v deionizované vodě a několikrát dialyzována proti deionizované vodě. Protein byl vysušen mrazením z deionizované vody, 0,3 ml per vial, při počáteční koncentraci 0,3 mg/ml.
Získání protilátek a zpracování
Polyklonální anti-uromodulinové protilátky byly vyrobeny a podrobeny afinitní purifikaci při imunizaci ovcí. Dvě ovce byly imunizovány podle následujícího schématu:
| 1. den | 1 x podkožně | 300 pg antigenu + CFA, 1:1 |
| 14. den | 1 x podkožně | 300 pg antigenu + ICFA, 1:1 |
| 28. den | lx podkožně | 300 pg antigenu + ICFA, 1:1 |
| 56.den | 1 x podkožně | 300 pg antigenu + ICFA, 1:1 |
| 66. den | odběr krve | 500 ml krve |
| 67. až 127. den | přestávka | |
| 128. den | 1 x podkožně | 300 pg antigenu + ICFA, 1:1 |
| 138. den | odběr krve | 500 ml krve |
CFA - complete Freund adjuvant, kompletní Freundův adjuvant (Sigma)
IFCA - incomplete Freund adjuvant, nekomplentní Freundův adjuvant (Sigma)
Získání séra
Krev ovcí byla odstřeďována 20 minut při 4 °C a 2 400 G, získané sérum bylo uskladněno při 20 °C.
Afinitní purifikace
Vytvoření afinitní kolony - Poros AL (Applied Biosystems), 0.5 g, byla naplněna 1 mg uromodulinu (Biovender) podle pokynů výrobce.
-6CZ 304067 B6
Purifikace protilátky byla provedena ve dvou krocích:
-afinitní purifikace - protilátky byly navázány na afinitní kolonu v 0,lM PBS, pH 7,4 a eluovány 0,1 PBS, 13mM HCI, 0,15 mM NaCl.
- finální čištění bylo provedeno na koloně s imobilizovaným proteinem G (Applied Biosystems). Afinitně purifikované protilátky byly navázány na kolonu s proteinem G v 0,lM PBS, pH 7,4, a eluovány 0,1 PBS, 13mM HCI, 0,15 mM NaCl.
Testování protilátek - Purifikované protilátky byly odděleny ve 12% SDS-PAGE a obarveny Coomassie modří.
Titrační stanovení nepřímou ELISA - Mikrotitrační destička (Nunc) byla naplněna uromodulinem 25 mg/jamku. Purifikované protilátky byly pipetovány v počáteční koncentraci 1 mg/ml a naředěny 1 : 3 v sadách. Titr byl definován jako roztok protilátky, který měl absorbanci menší než 1,5.
Ovce - titr: 30 000
Na obr. 7 je pak zobrazena 12% SDS-PAGE separace anti-lidských uromodulinových protilátek, kde představuj i pruh l:MWstd.:97, 66, 45,31,21, 14 kDa pruh 2: Anti-lidské uromodulinové protilátky 2,5 pg/pruh, redukující
Na obr. 8 jsou znázorněny purifikační chromatogramy, kde představují
A- chromatogram afinitní purifikace
B- chromatogram purifikace proteinu G
Vývoj ELISY
Naplnění mikrotitrační destičky:
Mikrotitrační destička byla naplněna afinitně purifikovanou ovčí protilátkou (BioVendor, 2 pg/ml v uhlovodíkovém pufru 0,lM) a uskladněna přes noc při 4 °C. Po 16 až 20 hodinách plnění přes noc při 4 °C byly destičky omyty TBS-Tween. Neobsažená místa na mikrotitračních destičkách byla zablokována blokačním pufrem (TBS - 0,5 % BSA - 4 % sacharózy) a inkubována při laboratorní teplotě po dobu 1 hodiny.
Konjugát:
Afinitně purifikovaná ovčí protilátka (BioVendor) byla konjugována s Biotin-LC-LC-NHSsulfo, kat. č. 21338 podle pokynů výrobce a použita v konečné koncentraci 0,25 pg/ml.
Byl použit streptavidin-HRP konjugát od Roche comp. (kat. č. 11089153).
Kalibrátor:
Přírodní lidský uromodulin byl lyofilizován a použit jako hlavní standard v počáteční koncentraci 320 ng/ml.
Nakonec byly sestaveny následující charakteristiky testů:
a) Typická standardní křivka pro lidský uromodulin: v rámci ELISA vykazoval dolní limit detekce menší než 0,12 ng/ml uromodulinu
b) Linearita (tabulka 1)
-7CZ 304067 B6
| Vzorek | Ředění | Naměřeno (ng/ml) | Očekáváno (ng/ml) | Výtěžnost N/O (%) |
| 1 | - | 437,55 | - | - |
| 1:2 | 215,25 | 218,78 | 98,4 | |
| 1:4 | 110,70 | 109,39 | 101,2 | |
| 1:8 | 54,60 | 54,69 | 99,8 | |
| 2 | - | 423,00 | - | - |
| 1:2 | 212,05 | 211,50 | 100,3 | |
| 1:4 | 108,10 | 105,75 | 102,2 | |
| 1:8 | 51,65 | 52,88 | 97,7 |
Tabulka 1
c) Výtěžnost přídavku (tabulka 2)
| Vzorek | Naměřeno (ng/ml) | Očekáváno (ng/ml) | Výtěžnost N/O (%) |
| 1 | 94,45 | - | - |
| 480,60 | 494,45 | 97,2 | |
| 282,95 | 294,45 | 96,1 | |
| 187,90 | 194,45 | 96,6 | |
| 2 | 104,35 | - | - |
| 506,40 | 504,35 | 100,4 | |
| 281,20 | 304,35 | 92,4 | |
| 186,55 | 204,35 | 91,3 |
Tabulka 2
d) Vnitrolaboratorní preciznost (Tabulka 3)
| Vzorek | Průměr (ng/ml) | SD (ng/ml) | CV (%) |
| 1 | 314,98 | 8,93 | 2.8 |
| 2 | 136,08 | 1,68 | 1,2 |
Tabulka 3
-8CZ 304067 B6
e) Mezilehlá přesnost (Tabulka 4)
| Vzorek | Průměr (ng/ml) | SD (ng/ml) | CV (%) |
| 1 | 166,07 | 8,59 | 5,2 |
| 2 _ | 433,47 | 32,76 | 7,6 |
Tabulka 4
f) Vliv pohlaví na hladiny uromodulinu je uveden v tabulce 5
| Pohlaví | Věk (roky) | n | Průmě r | SD | Min. | Max. |
| Uromodulin(ng/ml) | ||||||
| Muži | 23-29 | 10 | 233,29 | 76,82 | 80,95 | 330,50 |
| 30-39 | 19 | 197,48 | 86,56 | 62,65 | 382,65 | |
| 40-49 | 22 | 203,56 | 79,20 | 37,30 | 393,85 | |
| 50-65 | 7 | 184,34 | 31,92 | 139,5 0 | 229,75 | |
| Ženy | 22-29 | 9 | 215,11 | 77,84 | 123,0 0 | 406,70 |
| 30-39 | 14 | 269,14 | 110,6 1 | 92,90 | 501,15 | |
| 40-49 | 17 | 220,60 | 56,53 | 107,7 0 | 312,05 | |
| 50-61 | 5 | 206,24 | 73,34 | 88,20 | 282,25 |
Tabulka 5
Distribuce koncentrací uromodulinu v závislosti na věku a pohlaví u zdravých dospělých osob jsou uvedeny na obrázku 9. Z obrázku je patrné, že koncentrace UMD je rovnoměrně rozdělena a na pohlaví nebo věku osoby nezávisí.
-9CZ 304067 B6
Průmyslová využitelnost
Vynález nalezne široké použití v medicíně, konkrétně lékařské diagnostice. Použití způsobu pro stanovení koncentrace uromodulinu v séru jako markéru nefropatie a systému pro imunologické testy pro stanovení této koncentrace umožní snadné a bezprostřední odhalení nefropatie u vyšetřovaného pacienta a tím dává možnost zavést v krátké době příslušná opatření.
Claims (1)
1. Použití uromodulinu pro přípravu sérového markéru pro in-vitro stanovení nefropatie, přičemž snížení hodnoty uromodulinu indikuje nefropatii.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20110722A CZ304067B6 (cs) | 2011-11-11 | 2011-11-11 | Metoda pro stanovení koncentrace uromodulinu v séru a jeho pouzití jako sérového markeru pro diagnózu nefropatie |
| PCT/CZ2012/000033 WO2013067979A1 (en) | 2011-11-11 | 2012-04-16 | Method for determination of the concentration of uromodulin in serum and it's use as a serologic marker for the diagnosis of nephropathy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20110722A CZ304067B6 (cs) | 2011-11-11 | 2011-11-11 | Metoda pro stanovení koncentrace uromodulinu v séru a jeho pouzití jako sérového markeru pro diagnózu nefropatie |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2011722A3 CZ2011722A3 (cs) | 2013-05-22 |
| CZ304067B6 true CZ304067B6 (cs) | 2013-09-18 |
Family
ID=46201038
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20110722A CZ304067B6 (cs) | 2011-11-11 | 2011-11-11 | Metoda pro stanovení koncentrace uromodulinu v séru a jeho pouzití jako sérového markeru pro diagnózu nefropatie |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ304067B6 (cs) |
| WO (1) | WO2013067979A1 (cs) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2022023020A (ja) | 2020-07-10 | 2022-02-07 | 亮介 臼井 | 血中ウロモジュリン濃度を測定することによる妊娠高血圧症候群及びｈｅｌｌｐ症候群を含む産科的緊急症に罹患する蓋然性を予測する方法 |
| CN116754755A (zh) * | 2023-04-04 | 2023-09-15 | 重庆医科大学国际体外诊断研究院 | 基于手机人工智能算法对尿液中糖尿病肾病早期损伤标志物的定量检测的方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2295966A1 (en) * | 2008-06-02 | 2011-03-16 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | IgA NEPHROPATHY DETECTION METHOD AND DETECTION KIT |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2614340A1 (en) | 2005-07-21 | 2007-06-07 | Biovendor Laboratory Medicine, Inc. | Method for determining the concentration of the adipocytic form of the fatty acid binding protein (a-fabp, fabp4, p2) |
-
2011
- 2011-11-11 CZ CZ20110722A patent/CZ304067B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2012
- 2012-04-16 WO PCT/CZ2012/000033 patent/WO2013067979A1/en not_active Ceased
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2295966A1 (en) * | 2008-06-02 | 2011-03-16 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | IgA NEPHROPATHY DETECTION METHOD AND DETECTION KIT |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Kidney Blood Press Res 2010 (33) s. 393-398 (s. 393) * |
| Nephrol Dial Transplant 2010 (25) s. 1896-1903 (s. 1896) * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2011722A3 (cs) | 2013-05-22 |
| WO2013067979A1 (en) | 2013-05-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101939964B1 (ko) | 급성 신장 손상의 발견 또는 감시 방법, 장치 및 키트 | |
| RU2462719C2 (ru) | Диагностика септических осложнений | |
| JP5603083B2 (ja) | 炎症性大腸炎及び慢性膵炎の診断のために、膵臓の酵素原顆粒由来の糖タンパク質２（ｇｐ２）との免疫反応を介して体液から抗体を検出する方法 | |
| JP7598843B2 (ja) | 腎疾患及び歯周疾患を検出及び診断するための方法及び組成物 | |
| US11041864B2 (en) | Method for prediction of prognosis of sepsis | |
| KR20160123279A (ko) | 질병에 대한 위독하거나 생명을 위협하는 반응 및/또는 치료 반응의 초기 확인을 위한 바이오마커 | |
| EP0840126B1 (en) | Marker and immunological reagent for dialysis-related amyloidosis, diabetes mellitus and diabetes mellitus complications | |
| JP2005106694A (ja) | 敗血症早期検出及び重篤度評価 | |
| ES2361663T3 (es) | Procedimiento para el diagnóstico o el control de un error sacarometabólico. | |
| WO2018055209A2 (en) | Method for the diagnosis of acute pancreatitis (ap) by detection of glycoprotein 2 isoform alpha (gp2a) | |
| JP2010521694A (ja) | 腎傷害のための診断テスト | |
| AU770114B2 (en) | Urinary trypsin inhibitor to diagnose AIDS | |
| CZ304067B6 (cs) | Metoda pro stanovení koncentrace uromodulinu v séru a jeho pouzití jako sérového markeru pro diagnózu nefropatie | |
| US9506923B2 (en) | Method of diagnosing surgical site infections | |
| RU2523413C1 (ru) | СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РЕВМАТОИДНОГО АРТИРИТА ПО НАЛИЧИЮ АНТИТЕЛ К МОДИФИЦИРОВАННОМУ ЦИНТРУЛЛИНИРОВАННОМУ ВИМЕНТИНУ (Anti-MCV) В РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ | |
| JP6158825B2 (ja) | テネイシンｃおよび関節リウマチにおけるその使用 | |
| EP1141717A1 (en) | Diagnosis of sepsis using the lps-binding moiety of alkaline phosphatase | |
| CN116802500A (zh) | 用于治疗肾损伤和肾衰竭的方法和组合物 | |
| US20210405048A1 (en) | Diagnosing Sepsis or Bacteremia by Detecting Peptidoglycan Associated Lipoprotein (PAL) in Urine | |
| RU2413467C1 (ru) | Способ диагностики увеита при ревматоидном артрите и болезни бехтерева | |
| US8999338B2 (en) | Method for diagnosis for multiple sclerosis involving anti1-receptor antibody | |
| Rhodes | Biochemical and physiological properties of Tamm-Horsfall glycoprotein from cats and sheep | |
| JP2010271295A (ja) | 測定試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20141111 |