CZ30239U1 - A preparation containing stem cells for treatment of inflammatory diseases, post-traumatic reactions and degenerative diseases - Google Patents
A preparation containing stem cells for treatment of inflammatory diseases, post-traumatic reactions and degenerative diseases Download PDFInfo
- Publication number
- CZ30239U1 CZ30239U1 CZ2016-32937U CZ201632937U CZ30239U1 CZ 30239 U1 CZ30239 U1 CZ 30239U1 CZ 201632937 U CZ201632937 U CZ 201632937U CZ 30239 U1 CZ30239 U1 CZ 30239U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- stem cells
- trehalose
- treatment
- diseases
- composition according
- Prior art date
Links
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims description 72
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 title claims description 11
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 title claims description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 title description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 45
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 45
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 239000002121 nanofiber Substances 0.000 claims description 16
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 15
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 12
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 11
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 7
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 7
- 239000003186 pharmaceutical solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 12
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 150000003625 trehaloses Chemical class 0.000 description 5
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000004453 corneal transparency Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 3
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 206010055665 Corneal neovascularisation Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 201000000159 corneal neovascularization Diseases 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000003560 epithelium corneal Anatomy 0.000 description 2
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 2
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 2
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000009958 sewing Methods 0.000 description 2
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- 206010002660 Anoxia Diseases 0.000 description 1
- 241000976983 Anoxia Species 0.000 description 1
- 208000030767 Autoimmune encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 208000028006 Corneal injury Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 description 1
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 description 1
- 102000008299 Nitric Oxide Synthase Human genes 0.000 description 1
- 108010021487 Nitric Oxide Synthase Proteins 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 206010034944 Photokeratitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000007953 anoxia Effects 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002180 anti-stress Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- -1 glucose disaccharide Chemical class 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000018769 loss of vision Diseases 0.000 description 1
- 231100000864 loss of vision Toxicity 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 230000006576 neuronal survival Effects 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 210000004991 placental stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Oblast technikyTechnical field
Technické řešení se týká prostředku, který obsahuje kmenové buňky, k léčení zánětlivých onemocnění, k léčení post-traumatické zánětlivé reakce po poškození nebo úrazu, a také k léčení degenerativních onemocnění.The invention relates to a composition comprising a stem cell for the treatment of inflammatory diseases, for the treatment of a post-traumatic inflammatory reaction after injury or injury, as well as for the treatment of degenerative diseases.
Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Kmenové buňky, například mezenchymální kmenové buňky (MSCs mezenchymal stem cells), mají výrazné imunomodulační, protizánětlivé a antioxidační vlastnosti. Pro tyto vlastnosti jsou využívány v moderní medicíně k léčení různých onemocnění.Stem cells, such as mesenchymal stem cells (MSCs), have potent immunomodulatory, anti-inflammatory and antioxidant properties. Because of these properties, they are used in modern medicine to treat various diseases.
Pro některá terapeutická využití jsou vhodné také limbální kmenové buňky (LSCs, limbal stem cells), které zajišťují za fyziologických podmínek nepřetržitou obnovu rohovkového epitelu.Limbal stem cells (LSCs) are also suitable for certain therapeutic applications, which provide a continuous recovery of the corneal epithelium under physiological conditions.
Například předmětem ochrany patentem EP 2 120 977 Bl jsou kmenové buňky CD10+, CD34-, CD105+ a CD200+ pro léčení zánětlivých střevních onemocnění.For example, the subject of the patent EP 2 120 977 B1 are CD10 +, CD34-, CD105 + and CD200 + stem cells for the treatment of inflammatory bowel diseases.
Patent EP 1 727 892 Bl chrání mezenchymální kmenové buňky pro použití k léčení autoimunitní encefalitidy, sklerózy multiplex nebo zánětlivých onemocnění střeva.EP 1 727 892 B1 protects mesenchymal stem cells for use in the treatment of autoimmune encephalitis, multiple sclerosis or inflammatory bowel diseases.
Patent EP 2 298 863 Bl chrání mezenchymální kmenové buňky k léčení některých zánětlivých fibróz.EP 2 298 863 B1 protects mesenchymal stem cells for the treatment of certain inflammatory fibroses.
Trehalóza, disacharid glukózy, která je syntetizována nižšími organizmy v případech, kdy jsou vystaveny stresu, je známa jako protistresový faktor. Je hojně využívána v humánní medicíně, například pro zabránění úbytku vody v buňkách (dehydrataci), proti vystavení buněk nadměrnému teplu, chladu nebo oxyradikálům, proti hypoxii až anoxii a proti hypoxicko-reoxygenaěnímu poškození.Trehalose, a glucose disaccharide that is synthesized by lower organisms when exposed to stress, is known as an anti-stress factor. It is widely used in human medicine, for example to prevent water loss in cells (dehydration), to expose cells to excessive heat, cold or oxyradicals, to hypoxia to anoxia, and to hypoxic-reoxygenation damage.
Z přihlášky EP 2 848 683 Al je známo při podávání suspenze kmenových buněk skrze cévní řečiště přidávat do této suspenze trehalózu za účelem prevence pulmonámí embolie shluklými kmenovými buňkami.It is known from EP 2 848 683 A1, when administering a stem cell suspension through the vascular bed, to add trehalose to this suspension to prevent pulmonary embolism by clustered stem cells.
Z přihlášky WO 2010021714 A2 je známo, že viabilitu placentálních kmenových buněk během zmrazení a opětovného rozmražení je možné zvýšit pomocí některých polysacharidů, mj. dextranu v kombinaci s trehalózou.It is known from WO 2010021714 A2 that the viability of placental stem cells during freezing and thawing can be increased by some polysaccharides, including dextran in combination with trehalose.
V článku Di Guohu, Wang Jiexi, Liu Minxia, Wu Chu-Tse, Han Ying a Duan Haifeng: Development and evaluation of a trehalose-contained solution formula to preserve HUC-MSCs at 4 °C; J Cell Physiol; 2012 Mar; 227 (3): 879-84, je uvedeno, že přítomnost trehalózy v roztoku pro uchovávání mezenchymální ch kmenových buněk výrazně zvyšuje jejich viabilitu při skladování. Podstata technického řešeníIn the article Di Guohu, Wang Jiexi, Liu Minxia, Wu Chu-Tse, Han Ying and Duan Haifeng: Development and evaluation of the trehalose-containing solution to preserve HUC-MSCs at 4 ° C; J Cell Physiol; 2012 Mar; 227 (3): 879-84, it is reported that the presence of trehalose in a mesenchymal stem cell storage solution greatly increases their viability upon storage. The essence of the technical solution
Původci technického řešení zjistili, že při úpravě kmenových buněk přidáním trehalózy dochází k výraznému zlepšení léčebného účinku kmenových buněk pri hojení různých poranění, zánětlivých onemocnění a degenerativních onemocnění. Úprava kmenových buněk trehalózou způsobuje nejen, že jsou kmenové buňky životaschopnější, ale také, že produkují více kvalitních protizánětlivých cytokinů potlačujících nadměrný zánět, produkují více antioxidační ch enzymů omezujících oxidační stres, produkují více parakrynních faktorů umožňujících hojení poškozených tkání (například omezením apoptózy), a také více napomáhají odbourávání škodlivých proteinů, které často vedou k zániku nervových vláken při degenerativních onemocněních.The inventors have found that the treatment of stem cells with the addition of trehalose significantly improves the therapeutic effect of stem cells in the healing of various injuries, inflammatory diseases and degenerative diseases. The treatment of stem cells with trehalose not only makes the stem cells more viable, but also produces more high-quality anti-inflammatory cytokines to suppress excessive inflammation, produce more antioxidant enzymes to reduce oxidative stress, produce more paracrylic factors to heal damaged tissues (eg by reducing apoptosis), they also help to break down harmful proteins, which often lead to nerve fiber death in degenerative diseases.
Prostředek podle technického řešení, určený k léčení zánětlivých onemocnění, k léčení posttraumatických zánětlivých reakcí po poškození nebo úrazu, nebo k léčení degenerativních onemocnění, obsahuje kmenové buňky vždy v kombinaci s trehalózou.The composition according to the invention, for the treatment of inflammatory diseases, for the treatment of post-traumatic inflammatory reactions after injury or injury, or for the treatment of degenerative diseases, always comprises stem cells in combination with trehalose.
-1 CZ 30239 Ul-1 CZ 30239 Ul
Prostředek podle technického řešení může být vytvořen ve formě suspenze kmenových buněk ve farmaceutickém roztoku, který obsahuje s výhodou 1 až 15 % hmotn. , nej výhodněji 3 až 10 % hmotn., trehalózy.The composition according to the invention may be in the form of a stem cell suspension in a pharmaceutical solution, which preferably contains from 1 to 15% by weight. , most preferably 3 to 10% by weight of trehalose.
V prostředku podle zvláštního vytvoření technického řešení, určeném k léčení zánětlivých onemocnění a posttraumatických zánětlivých reakcí po poškození nebo úrazu, může alespoň část z obsažených kmenových buněk být zachycena na nosiči z netkané textilie z nanovláken. Kmenové buňky jsou s výhodou mezenchymální kmenové buňky.In a composition according to a particular embodiment of the invention, intended for the treatment of inflammatory diseases and post-traumatic inflammatory reactions after injury or injury, at least a portion of the stem cells contained can be retained on a nanofiber nonwoven carrier. The stem cells are preferably mesenchymal stem cells.
Prostředek podle zvláštního vytvoření technického řešení, určený k léčení zánětlivých onemocnění a poranění oční rohovky, může obsahovat limbální kmenové buňky, s výhodou na nosiči z nanovláken.The composition according to a particular embodiment of the invention, intended for the treatment of inflammatory diseases and corneal injury, may comprise limbal stem cells, preferably on a nanofiber carrier.
Prostředek podle technického řešení se vyrábí způsobem, který zahrnuje separaci kmenových buněk z biologického materiálu a kultivaci kmenových buněk v kultivačním médiu. Kultivace buněk se provádí obvyklým způsobem při teplotě kolem 37 °C. Podle technického řešení se získané kmenové buňky suspendují ve farmaceutickém roztoku, například pufru PBS, s obsahem 1 až 15 % hmotn., s výhodou 3 až 10 % hmotn. trehalózy.The composition of the present invention is produced by a method comprising separating the stem cells from the biological material and culturing the stem cells in the culture medium. Cell cultivation is carried out in a conventional manner at a temperature of about 37 ° C. According to the invention, the stem cells obtained are suspended in a pharmaceutical solution, for example PBS, containing 1 to 15% by weight, preferably 3 to 10% by weight. trehaloses.
Alternativně se může kultivace kmenových buněk provádět v kultivačním médiu s obsahem trehalózy. Pro aplikace, které počítají s nosičem z nanovláken, se kultivace kmenových buněk může v části doby kultivace v kultivačním médiu s obsahem trehalózy provádět v přítomnosti nosiče z nanovláken.Alternatively, the stem cell culture may be performed in a trehalose-containing culture medium. For applications involving a nanofiber carrier, the stem cell culture can be performed in the presence of a nanofiber carrier in part of the culture time in the trehalose-containing culture medium.
Léčebné použití trehalózy v kombinaci s kmenovými buňkami vykazuje při léčení zánětlivých onemocnění, posttraumatických reakcí a degenerativních onemocnění vyšší účinky, než jaké bylo možno očekávat na základě znalostí účinků obou složek používaných samostatně.The therapeutic use of trehalose in combination with stem cells in the treatment of inflammatory diseases, post-traumatic reactions and degenerative diseases is superior to that expected from the knowledge of the effects of both components used alone.
Příklady uskutečnění technického řešeníExamples of technical solutions
Pro vytvoření přípravku podle technického řešení v následujících příkladech provedení jsou kmenové buňky, získané způsobem odborníkovi známým, suspendovány v roztoku pufru PBS obsahujícím trehalózu.To form the formulation of the invention in the following examples, the stem cells obtained by a method known to the person skilled in the art are suspended in a PBS buffer containing trehalose.
Obsah kmenových buněk je zpravidla 5 x 105 až 1 x 107 MSCs/ml farmaceutického roztoku. Při intravenozní aplikaci se může podávat například 1 x 106 MSCs/kg hmotnosti pokusného zvířete. Příklad 1The stem cell content is generally 5 x 10 5 to 1 x 10 7 MSCs / ml pharmaceutical solution. For intravenous administration, for example, 1 x 10 6 MSCs / kg animal weight can be administered. Example 1
Z komerčně dostupného polymeru kyseliny mléčné (PLA, polylaktid) byla připravena nanovlákna ve formě netkané textilie. Z této netkané textilie byly vyříznuty vzorky ve formě čtverců o rozměrech přibližně 15x15 mm, které byly přeneseny na kultivační desky s kulturami mezenchymálních kmenových buněk získaných z kostní dřeně králíka. Inkubace mezenchymálních kmenových buněk v přítomnosti trehalózy ve styku s netkanou textilií z nanovláken byla prováděna po dobu 24 hodin, aby kmenové buňky mohly ulpět na struktuře nanovláken jakožto nosiči. Kultivační roztok pro pokusy podle technického řešení obsahoval 3 % hmotn. trehalózy, pro srovnávací pokusy byla inkubace prováděna bez přítomnosti trehalózy.From commercially available lactic acid polymer (PLA, polylactide) nanofibres were prepared in the form of nonwoven fabric. Samples of approximately 15x15 mm squares were cut from this nonwoven fabric and transferred to culture plates with mesenchymal stem cell cultures derived from rabbit bone marrow. Incubation of mesenchymal stem cells in the presence of trehalose in contact with the nonwoven nanofiber fabric was performed for 24 hours to allow the stem cells to adhere to the nanofiber structure as a carrier. The culture solution according to the invention contained 3 wt. For comparative experiments, incubation was performed in the absence of trehalose.
Králičí oči byly poleptány 1 N hydroxidu sodného NaOH aplikovaného pomocí filtračního papírku nasátého hydroxidem, načež byly oči propláchnuty proudem vody. U každého králíka bylo poškozeno pouze pravé oko. (Oči zcela zdravých králíků (mimo pokus) sloužily pro srovnání.Rabbit eyes were burned with 1 N NaOH applied with a filter paper soaked in hydroxide, and the eyes were rinsed with a stream of water. Only the right eye was damaged in each rabbit. (Eyes of completely healthy rabbits (out of experiment) served for comparison).
V první skupině byly na poškozené oči přeneseny nosiče z nanovláken s králičími mezenchymálními dřeňovými buňkami, podle technického řešení inkubovanými v přítomnosti trehalózy, (buňkami dolů k povrchu poškozeného oka), nosiče byly pomocí čtyř stehů přichyceny ke spojivce, oči zavřeny a víčka sešita k sobě pomocí tří stehů. Po čtyřech dnech víčka rozešita, nosiče z nanovláken odstraněny a oko ponecháno bez dalšího léčení až do 15. dne, kdy byla pokusná zvířata utracena a oči vyšetřeny morfologický, imunohistochemicky, biochemicky a pachymetricky. Veškeré pokusy na zvířatech byly prováděny tak, aby zvíře netrpělo, za použití celkové anestezie.In the first group, nanofiber carriers with rabbit mesenchymal marrow cells were transferred to damaged eyes according to the invention incubated in the presence of trehalose (cells down to the damaged eye surface), the carriers were attached to the conjunctiva by four stitches, eyes closed and eyelids stitched together using three stitches. After four days the eyelids were sewn, nanofiber carriers removed and the eye left without further treatment until day 15, when the test animals were sacrificed and the eyes examined morphologically, immunohistochemically, biochemically and pachymmetrically. All animal experiments were performed in a way that the animal did not suffer under general anesthesia.
-2CZ 30239 Ul-2EN 30239 Ul
Ve druhé skupině bylo stejně postupováno jako v první, s tím rozdílem, že nano vlákna byla napuštěna fyziologickým roztokem se 3 % hmotn. trehalózy, bez kmenových buněk.In the second group, the same procedure was followed as in the first, except that the nano fibers were impregnated with saline with 3 wt. trehalose, without stem cells.
Ve třetí skupině bylo postupováno stejně jako v první, s tím rozdílem, že nano vlákna nesla kmenové buňky bez trehalózy.In the third group the procedure was the same as in the first one, with the difference that the nano fibers carried stem cells without trehalose.
Ve čtvrté skupině bylo postupováno stejně, jako v první skupině, ale nanovlákna byla samotná (bez kmenových buněk a bez trehalózy).In the fourth group the procedure was the same as in the first group, but the nanofibers were alone (without stem cells and without trehalose).
V páté skupině byly oči stejně poškozené jako v první skupině, ale neléčeny.In the fifth group, the eyes were as damaged as in the first group, but not treated.
V 15. den pokusu byly oči vyšetřeny pomocí imunohistochemie a biochemie pro-zánětlivých cytokinů. Regenerace epitelu byla hodnocena morfologicky a imunohistochemií epiteliálních buněk. Neovaskularizace byla posuzována prostřednictvím kvantifikace cév v jednotlivých sektorech rohovky. Transparence rohovky byla hodnocena makroskopicky (fotograficky) a pachymetricky, kvantifikací hodnot středových tlouštěk rohovek.On day 15 of the experiment, eyes were examined by immunohistochemistry and biochemistry of pro-inflammatory cytokines. Epithelial regeneration was evaluated morphologically and by immunohistochemistry of epithelial cells. Neovascularization was assessed through vascular quantification in individual corneal sectors. Corneal transparency was evaluated macroscopically (photographically) and pachymmetrically, by quantifying the values of the median corneal thickness.
Byly zjištěny následující výsledky:The following results were found:
V očích poškozených a neléčených byl rozvinutý zánět, rohovka bez epitelu, transparence ztracena, rohovka vaskularizována. Podobný obraz byl po aplikaci samotného nosiče z nanovláken, pouze rohovka byla částečně reepitelizována.In the eyes of the injured and untreated, there was developed inflammation, cornea without epithelium, transparency lost, cornea vascularized. A similar image was after application of the nanofiber carrier alone, only the cornea was partially re-epithelized.
Po aplikaci nosiče z nanovláken se samotnou trehalózou byla rohovka pokryta nepravidelným epitelem, zánět byl částečně redukován. Neovaskularizace rohovky byla snížena. Stejný obraz byl zjištěn po aplikaci nosiče z nanovláken se samotnými kmenovými buňkami.After application of the nanofiber carrier with trehalose itself, the cornea was covered with irregular epithelium, the inflammation was partially reduced. Corneal neovascularization was reduced. The same image was found after application of nanofiber carrier with stem cells alone.
Po aplikaci kombinace mezenchymálních kmenových buněk s trehalózou byla rohovka regenerována pravidelným epitelem, transparence rohovky byla obnovena z 90 %, neovaskularizace rohovky byla signifikantně potlačena.After application of a combination of mesenchymal stem cells with trehalose, the cornea was regenerated by regular epithelium, corneal transparency was restored to 90%, corneal neovascularization was significantly suppressed.
Popsaný experiment prokázal zvýšený léčebný účinek mezenchymálních kmenových buněk kombinovaných s trehalózou.The described experiment demonstrated an increased therapeutic effect of mesenchymal stem cells combined with trehalose.
Pro ověření zvýšeného léčebného účinku kmenových buněk v kombinaci s trehalózou byly, obdobně, jako je výše popsáno na příkladu králičích dřeňových buněk, inkubovány v přítomnosti kultivačního roztoku obsahujícího 3 % hmotn. trehalózy lidské mezenchymální kmenové buňky z kostní dřeně, nebo lidské tukové kmenové buňky, nebo lidské limbální kmenové buňky. Také s těmito lidskými kmenovými buňkami se při pokusu na poleptaném králičím oku rohovka zhojila pomocí kmenových buněk kombinovaných s trehalózou lépe než pomocí samotných kmenových buněk. Výsledky makroskopické, morfologické, imunohistochemické a biochemické byly shodné jako po aplikaci králičích mezenchymálních buněk.To verify the increased therapeutic effect of the stem cells in combination with trehalose, they were incubated in the presence of a culture solution containing 3 wt. trehaloses of human mesenchymal stem cells from bone marrow, or human fat stem cells, or human limbal stem cells. Also with these human stem cells, the corneal healing was better with stem cells combined with trehalose than with stem cells alone in an etched rabbit eye experiment. The macroscopic, morphological, immunohistochemical and biochemical results were the same as after the application of rabbit mesenchymal cells.
Příklad 2Example 2
Pro ověření zvýšeného účinku mezenchymálních kmenových buněk v kombinaci s trehalózou, obdobně, jako je výše popsáno na příkladu králičích dřeňových buněk, byly inkubovány v přítomnosti kultivačního roztoku obsahujícího 3 % hmotn. trehalózy lidské mezenchymální kmenové buňky z kostní dřeně, nebo lidské tukové kmenové buňky, nebo lidské limbální kmenové buňky. Také s těmito lidskými kmenovými buňkami se v pokusu na poleptaném králičím oku (jako v příkladu 1) rohovka zhojila pomocí kmenových buněk kombinovaných s trehalózou lépe než pomocí samotných kmenových buněk. Výsledky makroskopické, morfologické, imunohistochemické, biochemické a fyzikální byly shodné jako po aplikaci králičích mezenchymálních buněk (s trehalózou).To verify the increased effect of mesenchymal stem cells in combination with trehalose, similarly as described above in the example of rabbit marrow cells, they were incubated in the presence of a culture solution containing 3 wt. trehaloses of human mesenchymal stem cells from bone marrow, or human fat stem cells, or human limbal stem cells. Also with these human stem cells, in an etched rabbit eye experiment (as in Example 1), the cornea healed better using stem cells combined with trehalose than with stem cells alone. The results of macroscopic, morphological, immunohistochemical, biochemical and physical were the same as after the application of rabbit mesenchymal cells (with trehalosis).
Příklad 3Example 3
Zvýšeného léčebného účinku mezenchymálních kmenových buněk (nebo tukových mezenchymálních kmenových buněk, nebo limbálních kmenových buněk), inkubovaných na nanovlákenném nosiči (bez trehalózy) bylo též dosaženo po nakapání 3% roztoku trehalózy na kmenové buňky na nosiči a po aplikování nosiče na poleptané oko (jako v příkladu 1).The increased therapeutic effect of mesenchymal stem cells (or adipose mesenchymal stem cells, or limbal stem cells) incubated on a nanofibrous carrier (without trehalose) was also achieved by instillation of a 3% trehalose solution on the carrier stem cells and after application of the carrier to the burned eye. in Example 1).
-3CZ 30239 Ul-3EN 30239 Ul
Příklad 4Example 4
Zvýšeného léčebného účinku mezenchymálních kmenových buněk (nebo tukových mezenchymálních kmenových buněk nebo limbálních kmenových buněk), inkubovaných na nanovlákenném nosiči (bez trehalózy), bylo též dosaženo po našití nanovlákenného nosiče s kmenovými buňkami na poleptané oko (jako v příkladu 1) a nakapání 3% roztoku trehalózy na rubovou stranu našitého nosiče (10 kapek po dobu 1 min) před sešitím víček.The increased therapeutic effect of mesenchymal stem cells (or fat mesenchymal stem cells or limbal stem cells) incubated on a nanofibrous carrier (without trehalose) was also achieved after sewing the nanofibrous stem cell carrier onto the burned eye (as in Example 1) and instillation of 3% solution of trehalose on the reverse side of the sewn carrier (10 drops for 1 min) before sewing the lids.
Příklad 5Example 5
U poleptaného oka bylo dosaženo zvýšeného léčebného účinku mezenchymálních kmenových buněk (nebo tukových mezenchymálních kmenových buněk nebo limbálních kmenových buněk) po přidání 3% roztoku trehalózy a po intravenózní aplikaci králíkovi s poleptaným okem jako v příkladu 1.In the burned eye, an increased therapeutic effect of mesenchymal stem cells (or fat mesenchymal stem cells or limbal stem cells) was achieved after the addition of a 3% trehalose solution and after intravenous administration to a rabbit with a burned eye as in Example 1.
Příklad 6Example 6
Zvýšené léčebné účinky kmenových buněk (mezenchymálních dřeňových nebo tukových) nebo limbálních kmenových buněk po adici 3% roztoku trehalózy ke kmenovým buňkám byly pozorovány také po jejich subkonjunktivální aplikaci do oka s poškozenou rohovkou louhem sodným jako v příkladu 1.Increased therapeutic effects of stem cells (mesenchymal medulla or adipose) or limbal stem cells upon addition of a 3% trehalose solution to the stem cells were also observed after their subconjunctival administration to the eye with damaged caustic soda as in Example 1.
Příklad 7Example 7
Ozařování králičích očí UVB paprsky po dobu 5 dnů (denní dávka záření 1.01 J/cm2) způsobila fotokeratitidu, zvýšenou hydrataci rohovky a ztenčení rohovkového epitelu. Transparence rohovky byla ztracena. 15. den po ozařování byly neléčené rohovky ulcerovány, nebo se hojily neprůhlednou jizvou. Rohovky byly vaskularizovány. Jestliže byly na rohovky aplikovány okamžitě po posledním ozáření mezenchymální kmenové buňky (dřeňové nebo tukové) v roztoku obsahujícím 3 % hmotn. trehalózy, rohovky se zhojily s 90 % návratem transparence. Vředy se nevytvořily v žádné léčené rohovce. Za použití metodiky obdobné jako v příkladu 1 bylo zjištěno, že aplikace kmenových buněk v kombinaci s trehalózou přinesla lepší výsledky než aplikace samotné trehalózy. Při užití samotné trehalózy nebo samotných kmenových buněk byly některé rohovky ulcerovány a vaskularizovány. Při lokální aplikaci kmenových buněk s trehalózou na ozářené oko byla trehalóza s výhodou kombinována s kyselinou hyaluronovou. Kapáním nebo subkonjunktivální injekcí byla podávána suspenze obsahující 2 χ 106 MSCs/0,5 ml v roztoku obsahujícím 3 % hmotn. trehalózy a 0,4 % hmotn. kyseliny hyarulonové. Mikroskopické a biochemické vyšetření prokázalo, že oxidační poškození, způsobené UVB zářením, je signifikantně inhibováno aplikací kmenových buněk s trehalózou. Kmenové buňky měly zvýšený antioxidační účinek.Irradiation of rabbit eyes with UVB rays for 5 days (daily dose of 1.01 J / cm 2 ) caused photokeratitis, increased corneal hydration and thinning of the corneal epithelium. Corneal transparency was lost. On day 15 after irradiation, untreated corneas were ulcerated or healed with an opaque scar. The corneas were vascularized. If mesenchymal stem cells (pulp or fat) were applied to the cornea immediately after the last irradiation in a solution containing 3 wt. trehaloses, corneas healed with a 90% return to transparency. Ulcers did not form in any treated cornea. Using a methodology similar to Example 1, it was found that application of stem cells in combination with trehalose yielded better results than application of trehalose alone. Using trehalose alone or stem cells alone, some corneas were ulcerated and vascularized. When topically applied stem cells with trehalose to the irradiated eye, trehalose was preferably combined with hyaluronic acid. A suspension containing 2 × 10 6 MSCs / 0.5 ml in a solution containing 3% w / w was administered by drip or subconjunctival injection. % of trehalose and 0.4 wt. hyarulonic acid. Microscopic and biochemical examinations have shown that oxidative damage caused by UVB radiation is significantly inhibited by the application of stem cells with trehalose. Stem cells had an increased antioxidant effect.
Příklad 8Example 8
Poranění míchy je jedno z nejhorších traumat, vyřazující postižené lidi z jejich kariémího postupu a pracovního uplatnění, často vede k úplné invaliditě a vyřazení ze společenského života. Poškození míchy vede ke ztrátě citlivosti a ochrnutí svalů pod úrovní poškození. Na zvířecích modelech se kmenové buňky, např. MSCs, ukázaly být velmi prospěšné v léčení takovýchto poškození. Především se zmenšila velikost léze a zlepšila se hybnost i citlivost zvířat. Intravenózní nebo intratekální implantace MSCs redukovala zánětlivou posttraumatickou reakci, došlo k zachování většího objemu bílé hmoty míšní a většímu obnovení funkce míchy. V klinické studii podané kmenové buňky rovněž vykazují částečné zlepšení. Původci technického řešení zjistili, že trehalóza aplikovaná společně s kmenovými buňkami vede ke zvýraznění protizánětlivého a antioxidačního působení kmenových buněk v místě poškození. Byly signifikantně redukovány následky hypoxicko-reoxygenačního poškození. Jedním z mechanizmů bylo snížení indukce a aktivace syntáz oxidu dusnatého v místě poškození.Spinal cord injury is one of the worst traumas, excluding disabled people from their career advancement and employment, often leading to total disability and social exclusion. Spinal cord damage leads to loss of sensitivity and paralysis of muscles below the level of damage. In animal models, stem cells, such as MSCs, have proven to be very beneficial in treating such lesions. Above all, the size of the lesion was reduced and the momentum and sensitivity of the animals improved. Intravenous or intrathecal implantation of MSCs reduced the inflammatory post-traumatic reaction, retained a greater volume of white spinal cord mass and increased spinal cord function. In the clinical study, the administered stem cells also show a partial improvement. The inventors have found that trehalose applied together with the stem cells leads to an enhancement of the anti-inflammatory and antioxidant action of the stem cells at the site of injury. The consequences of hypoxic-reoxygenation damage were significantly reduced. One mechanism was to reduce the induction and activation of nitric oxide synthases at the site of injury.
Příklad 9Example 9
Neurodegenerativní onemocnění, např. amyotrofická laterální skleróza (ALS), je progresivní onemocnění, způsobující degeneraci a ztrátu mozkových a spinálních motoneuronů, ovládajících vůlí ovlivnitelné svalové pohyby. Je to onemocnění fatální, u něhož selhávají dosud dostupnéNeurodegenerative diseases, such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS), are progressive diseases that cause degeneration and loss of brain and spinal motoneurons that control the muscular movements that can be affected. It is a fatal disease in which the currently available failures
-4CZ 30239 Ul konvenční léčebné metody. Kmenové buňky, např. MSCs, v experimentech na zvířecích modelech ALS, např. při jejich intratekální aplikaci, zmírnily průběh onemocnění a zvýšily dobu přežití experimentálních zvířat. V klinické studii bylo po implantaci MSCs pozorováno zpomalení průběhu choroby.-439 30239 U1 Conventional Treatment Methods. Stem cells, such as MSCs, in experiments on animal models of ALS, for example, in their intrathecal administration, attenuated the course of the disease and increased the survival time of the experimental animals. In clinical trials, slowing of disease progression was observed after implantation of MSCs.
Nyní byly na zvířecích modelech provedeny experimenty, při kterých byla ke kmenovým buňkám přidána trehalóza. Při aplikaci kombinace kmenových buněk s trehalózou podle tohoto provedení technického řešení byl pozorován lepší účinek než při aplikaci samotných kmenových buněk. Akumulace toxických abnormálních bílkovin v buňkách byla snížena pravděpodobně zvýrazněnou autofágií (katabolického procesu, zahrnujícího degradaci dysfunkčních buněčných komponent pomocí lyzozómů), což vedlo ke zvýšenému přežití neuronů a ke zlepšení průběhu onemocnění.Experiments have now been performed in animal models in which trehalose has been added to the stem cells. A better effect was observed when administering the combination of stem cells with trehalose according to this embodiment than when using the stem cells alone. The accumulation of toxic abnormal proteins in the cells was reduced by probably enhanced autophagy (a catabolic process involving degradation of dysfunctional cellular components by lysosomes), resulting in increased neuronal survival and improved disease progression.
Příklad 10Example 10
Degenerativní onemocnění zadního segmentu oka, například neurodegenerativní onemocnění sítnice, obzvláště makulámí degenerace sítnice a diabetická retinopatie jsou nebezpečná onemocnění, která často vedou k úplné ztrátě zraku. V experimentálních studiích a prvních klinických vyšetřeních bylo zjištěno, že po subretinální nebo injekční intravitreální aplikaci prostředku podle vynálezu dojde ke zlepšení mikroskopického i klinického obrazu sítnice. Vynikajících výsledků bylo dosaženo podáním přípravku obsahujícího suspenzi mezenchymálních kmenových buněk z kostní dřeně ve farmaceutickém roztoku s obsahem 6 % hmotn. trehalózy. Prostředek podle vynálezu se může výhodně kombinovat s kortikoidy nebo protizánětlivými léčivy, klinicky užívanými při individuálních indikacích těchto degenerativní ch onemocnění.Degenerative diseases of the posterior segment of the eye, for example neurodegenerative diseases of the retina, especially macular degeneration of the retina and diabetic retinopathy are dangerous diseases that often lead to complete loss of vision. In experimental studies and early clinical investigations, it has been found that microscopic and clinical imaging of the retina is improved upon subretinal or injectable intravitreal administration of the composition of the invention. Excellent results were obtained by administering a composition comprising a suspension of mesenchymal stem cells from the bone marrow in a pharmaceutical solution containing 6 wt. trehaloses. The composition of the invention may advantageously be combined with corticoids or anti-inflammatory drugs clinically used in individual indications of these degenerative diseases.
NÁROKY NA OCHRANUPROTECTION REQUIREMENTS
Claims (7)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2016-32937U CZ30239U1 (en) | 2016-10-14 | 2016-10-14 | A preparation containing stem cells for treatment of inflammatory diseases, post-traumatic reactions and degenerative diseases |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2016-32937U CZ30239U1 (en) | 2016-10-14 | 2016-10-14 | A preparation containing stem cells for treatment of inflammatory diseases, post-traumatic reactions and degenerative diseases |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ30239U1 true CZ30239U1 (en) | 2017-01-10 |
Family
ID=57793830
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2016-32937U CZ30239U1 (en) | 2016-10-14 | 2016-10-14 | A preparation containing stem cells for treatment of inflammatory diseases, post-traumatic reactions and degenerative diseases |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ30239U1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018149426A1 (en) * | 2017-02-14 | 2018-08-23 | Ustav Experimentalni Mediciny Av Cr, V.V.I. | Pharmaceutical preparation for the prevention and treatment of inflammatory and degenerative diseases |
-
2016
- 2016-10-14 CZ CZ2016-32937U patent/CZ30239U1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018149426A1 (en) * | 2017-02-14 | 2018-08-23 | Ustav Experimentalni Mediciny Av Cr, V.V.I. | Pharmaceutical preparation for the prevention and treatment of inflammatory and degenerative diseases |
| CZ307851B6 (en) * | 2017-02-14 | 2019-06-26 | Ústav experimentální medicíny AV ČR, v. v. i. | Medicinal product to prevent and treat inflammatory and degenerative diseases |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI79554C (en) | FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV HYALURONSYRAFRAKTIONER MED FARMACEUTISK AKTIVITET. | |
| CA2588044C (en) | Ophthalmic compositions and methods for treating eyes | |
| JP2611159B2 (en) | Hyaluronic acid pharmacologically active fraction, method for producing the same and pharmaceutical composition | |
| Yu et al. | Mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles as a new therapeutic strategy for ocular diseases | |
| Sung et al. | Treatment of traumatic optic neuropathy using human placenta-derived mesenchymal stem cells in Asian patients | |
| Chu et al. | The effects of scleral collagen cross-linking using glyceraldehyde on the progression of form-deprived myopia in guinea pigs | |
| CZ30239U1 (en) | A preparation containing stem cells for treatment of inflammatory diseases, post-traumatic reactions and degenerative diseases | |
| CN109010375A (en) | A kind of collyrium | |
| KR101211969B1 (en) | Compositions for treating ophthalmoxerosis comprising extract of fish eye as active ingredients | |
| KR101778746B1 (en) | Composition for promoting the differentiation of human mesenchymal stem cell | |
| RU2644701C1 (en) | Method of conservative treatment of adapted penetrating wounds of the cornea | |
| CN107970211B (en) | Preoperative cornea flushing fluid, preparation method and application thereof | |
| Brunelli et al. | Excision of sclerocorneal limbus in dogs and resulting clinical events: study of an experimental model | |
| WO2010083636A1 (en) | An eyedrops of the deproteinized calf blood extract | |
| CN106267163A (en) | A kind of pharmaceutical composition treating skin trauma and pharmaceutical preparation thereof | |
| KIM et al. | A clinical study of industrial ocular injuries | |
| Shiffman | Fat tissue embolism following fat transfer | |
| RU2788097C2 (en) | Therapeutic and neuroprotective peptides | |
| RU2733392C1 (en) | Combined ophthalmic agent | |
| CZ2016644A3 (en) | A composition containing stem cells for the treatment of post-traumatic inflammatory responses and a method of its manufacture | |
| Ishak et al. | Matrix regeneration therapy: a solution to enhance healing in fungal keratitis | |
| Almeida | persistant thymus. Bol. da Sot. de Med. | |
| Su | Effect of panretinal photocoagulation on retinal nerve fiber layer thickness and visual field in diabetic retinopathy | |
| Lixi et al. | Marine Natural Products Rescuing the Eye: A Narrative Review | |
| Bansal et al. | Reversal of Methanol-Induced Blindness in Adults by Autologous Bone Marrow-Derived Stem Cells: A Case Series. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG1K | Utility model registered |
Effective date: 20170110 |
|
| ND1K | First or second extension of term of utility model |
Effective date: 20200909 |
|
| MK1K | Utility model expired |
Effective date: 20231014 |