CZ2016644A3 - A composition containing stem cells for the treatment of post-traumatic inflammatory responses and a method of its manufacture - Google Patents
A composition containing stem cells for the treatment of post-traumatic inflammatory responses and a method of its manufacture Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2016644A3 CZ2016644A3 CZ2016-644A CZ2016644A CZ2016644A3 CZ 2016644 A3 CZ2016644 A3 CZ 2016644A3 CZ 2016644 A CZ2016644 A CZ 2016644A CZ 2016644 A3 CZ2016644 A3 CZ 2016644A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- stem cells
- trehalose
- treatment
- composition
- injury
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Prostředek obsahující kmenové buňky k léčení zánětlivých onemocnění, konkrétně k léčení posttraumatické zánětlivé reakce po poškození nebo úrazu. Použití trehalózy pro výrobu specifických léčiv. Podstata vynálezu spočívá v použití kmenových buněk, zejména mezenchymálních kmenových buněk získaných z kostní dřeně nebo z tukové tkáně nebo limbálních kmenových buněk, upravených trehalózou. Podstatou vynálezu je dále použití trehalózy pro podpůrné léčení zánětlivých onemocnění a posttraumatických reakcí při současném léčení některého z těchto onemocnění pomocí prostředku obsahujícího mezenchymální kmenové buňky. Trehalóza může sloužit také ve formě roztoku, prášku či tablety k podpůrnému léčení zánětlivých onemocnění při léčení těchto onemocnění podáváním kmenových buněk. Prostředek se vyrábí způsobem, který zahrnuje separací kmenových buněk z biologického materiálu a kultivací kmenových buněk v kultivačním médiu.A composition comprising stem cells for the treatment of inflammatory diseases, in particular for the treatment of post-traumatic inflammatory response after injury or injury. Use of trehalose for the manufacture of specific drugs. The subject of the invention is the use of stem cells, in particular mesenchymal stem cells derived from bone marrow or adipose tissue or limbal stem cells treated with trehalose. The invention further relates to the use of trehalose for the supportive treatment of inflammatory diseases and post-traumatic reactions in the concomitant treatment of one of these diseases with a composition comprising mesenchymal stem cells. Trehalose can also serve as a solution, powder or tablet to support the treatment of inflammatory diseases in the treatment of these diseases by administering stem cells. The composition is produced by a process comprising separating the stem cells from the biological material and culturing the stem cells in the culture medium.
Description
Oblast technikyTechnical field
Vynález se týká prostředku, který obsahuje kmenové buňky, k léčeni zánětlivých onemocněni, konkrétně k léčeni posttraumatické zánětlivé reakce po poškozeni nebo úrazu. Vynález se týká dále také způsobu výroby prostředku k léčeni posttraumatické zánětlivé reakce po poškození nebo úrazu.The invention relates to a composition comprising stem cells for the treatment of inflammatory diseases, in particular for the treatment of a post-traumatic inflammatory response after injury or injury. The invention also relates to a method of manufacturing a composition for treating a post-traumatic inflammatory response after injury or injury.
Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Kmenové buňky, například mezenchymální kmenové buňky (MSCs mezenchymal stem cells), mají výrazné imunomodulačni, protizánětlivé a antioxidační vlastnosti. Pro tyto vlastnosti jsou využívány v moderní medicíně k léčení různých onemocněni, včetně degenerativních.Stem cells, such as mesenchymal stem cells (MSCs), have potent immunomodulatory, anti-inflammatory and antioxidant properties. Because of these properties, they are used in modern medicine to treat various diseases, including degenerative diseases.
Pro některá terapeutická využití jsou vhodné také limbálni kmenové buňky (LSCs, limbal stem cells), které zajišťují za fyziologických podmínek nepřetržitou obnovu rohovkového epitelu.Limbal stem cells (LSCs), which provide a continuous recovery of the corneal epithelium under physiological conditions, are also suitable for some therapeutic applications.
Například předmětem ochrany patentem EP 2 120 977 Bl jsou kmenové buňky CD10+, CD34-, CD105+ a CD200+ pro léčeni zánětlivých střevních onemocnění.For example, the subject of the patent EP 2 120 977 B1 are CD10 +, CD34-, CD105 + and CD200 + stem cells for the treatment of inflammatory bowel diseases.
Z čínské patentové přihlášky CN 104 758 923 je znám přípravek pro ošetření poranění nervu přípravkem na bázi mezenchymálních kmenových buněk suspendovaných v roztoku trehalózy.Chinese patent application CN 104 758 923 discloses a composition for treating nerve injury with a composition based on mesenchymal stem cells suspended in a trehalose solution.
Z dokumentu WC^016^069173 je znám způsob přípravy suspenze kmenových buněk, která k potlačení nežádoucího shlukování buněk obsahuje trehalózu.A method for the preparation of a stem cell suspension that contains trehalose to suppress unwanted cell aggregation is known from WC-016-069173.
Patent EP 1 727 892 B1 chrání mezenchymální kmenové buňky pro použití k léčení autoimunitní encefalitidy, sklerózy multiplex nebo zánětlivých onemocnění střeva.EP 1 727 892 B1 protects mesenchymal stem cells for use in the treatment of autoimmune encephalitis, multiple sclerosis or inflammatory bowel diseases.
Patent EP některých v y yEP patent of some
2^298|863Β1 chrání mezenchymální kmenové buňky k léčení zánětlivých fibróz.2 ^ 298 | 863-1 protects mesenchymal stem cells for the treatment of inflammatory fibrosis.
Trehalóza, disacharid glukózy, která je syntetizována nižšími organizmy v případech, kdy jsou vystaveny stresu, je známa jako protistresový faktor.Trehalose, a glucose disaccharide that is synthesized by lower organisms when exposed to stress, is known as an anti-stress factor.
Je hojně využívána v humánní medicíně, například pro zabránění úbytku vody v buňkách (dehydrataci) , proti vystavení buněk nadměrnému teplu, chladu nebo oxyradikálům, proti hypoxii až anoxii a proti hypoxicko-reoxygenačnímu poškození.It is widely used in human medicine, for example to prevent water loss in cells (dehydration), to expose cells to excessive heat, cold or oxyradicals, to hypoxia to anoxia, and to hypoxic-reoxygenation damage.
přihláškyapplications
EP 2 848EP 2,848
683 Al je známo při podávání suspenze kmenových buněk skrze cévní řečiště přidávat do této suspenze trehalózu za účelem prevence pulmonární embolie shluklými kmenovými buňkami.683 A1 is known when administering a stem cell suspension through the vascular bed to add trehalose to this suspension to prevent pulmonary embolism by clustered stem cells.
přihláškyapplications
WO 2010/021714 A2 je známo, že viabilitu placentálních kmenových buněk během zmrazení a opětovného rozmražení je možné zvýšit pomocí některých polysacharidů, mj .WO 2010/021714 A2 is known that the viability of placental stem cells during freezing and thawing can be increased by some polysaccharides, inter alia.
dextranu v kombinaci s trehalózou.dextran in combination with trehalose.
• ·• ·
V článku Di Guohu, Wang Jiexi, Liu Minxia, Wu Chu-Tse, Han Ying a Duan Haifeng: Development and evaluation of a trehaló^econtained solution formula to preserve HUC-MSCs at 4^C; J Cell Physiol; 2012 Mar; 227(3):879-84, je uvedeno, že 'přítomnost trehalózy v roztoku pro uchovávání mezenchymálních kmenových buněk výrazně zvyšuje jejich viabilitu při skladování při teplotě 4 °C, přičemž nej lepších výsledků bylo dosaženo s koncentrací mM<5Í3a trehalózy.In the article Di Guohu, Wang Jiexi, Liu Minxia, Wu Chu-Tse, Han Ying, and Duan Haifeng: Development and evaluation of the three-way solution to preserve HUC-MSCs at 4 ^ C; J Cell Physiol; 2012 Mar; 227 (3): 879-84, it is reported that the presence of trehalose in the mesenchymal stem cell storage solution greatly increases their viability when stored at 4 ° C, with best results being obtained with a concentration of mM < 5α and trehalose.
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Původci vynálezu zjistili, že při úpravě kmenových buněk přidáním trehalózy dochází k výraznému zlepšení léčebného účinku kmenových buněk při hojení různých poranění, zánětlivých onemocnění a degenerativních onemocnění. Úprava kmenových buněk trehalózou způsobuje nejen^ že jsou kmenové buňky životaschopnější, ale také, že produkují více kvalitních protizánětlivých cytokinů potlačujících nadměrný zánět, produkují více antioxidačních enzymů omezujících oxidační stres, produkují více parakrynních faktorů umožňujících hojení poškozených tkání (například omezenímThe present inventors have found that the treatment of stem cells with the addition of trehalose significantly improves the therapeutic effect of the stem cells in the healing of various wounds, inflammatory diseases and degenerative diseases. The treatment of stem cells with trehalose not only makes the stem cells more viable, but also produces more high-quality anti-inflammatory cytokines suppressing excessive inflammation, producing more antioxidant enzymes to reduce oxidative stress, producing more paracrylic factors to heal damaged tissues (e.g.
které často také více napomáhají odbourávání škodlivých proteinů, vedou k zániku nervových vláken při degenerativních onemocněních.which often also help to break down harmful proteins, lead to nerve fiber death in degenerative diseases.
Podstata vynálezu tedy spočívá v použití kmenových buněk, zejména mezenchymálních kmenových buněk získaných z kostní dřeně nebo z tukové tkáně nebo limbálních kmenových buněk, upravených trehalózou, k léčení zánětlivých onemocnění včetně posttraumatické zánětlivé reakce po poškození nebo úrazu. Trehalóza je podle vynálezu obsažena ve farmaceutickém roztoku β ♦ v koncentraci 1 až 15 % hmotn.,Accordingly, the present invention relates to the use of stem cells, in particular mesenchymal stem cells derived from bone marrow or adipose tissue or limbal stem cells treated with trehalose, for the treatment of inflammatory diseases including post-traumatic inflammatory reaction after injury or injury. According to the invention, trehalose is present in the pharmaceutical solution β ♦ in a concentration of 1 to 15% by weight,
s výhodou 3 až 10 % hmotn., trehalózy.preferably 3 to 10% by weight of trehalose.
Prostředek podle vynálezu, určený k léčení zánětlivých onemocnění, zejména k léčení posttraumatických zánětlivých reakcí po poškození nebo úrazu, obsahuje kmenové buňky vždy v kombinaci s trehalózou. Trehalóza je podle vynálezu obsažena ve farmaceutickém roztoku v koncentraci 1 až 15 % hmotn., s výhodou 3 až 10 % hmotn., trehalózy. Kmenové buňky jsou přítomny ve formě suspenze ve farmaceutickém roztoku s obsahem trehalózy, přičemž alespoň část z obsažených kmenových buněk je zachycena na nosiči z netkané textilie z nanovláken.The composition according to the invention for the treatment of inflammatory diseases, in particular for the treatment of post-traumatic inflammatory reactions after injury or injury, always comprises stem cells in combination with trehalose. According to the invention, trehalose is present in the pharmaceutical solution in a concentration of 1 to 15% by weight, preferably 3 to 10% by weight, of trehalose. The stem cells are present in the form of a suspension in a trehalose-containing pharmaceutical solution, wherein at least a portion of the stem cells contained is retained on a nanofiber nonwoven carrier.
Prostředek podle vynálezu se vyrábí způsobem, který zahrnuje separaci kmenových buněk z biologického materiálu a kultivaci kmenových buněk v kultivačním médiu. Kultivace buněk se provádí obvyklým způsobem při teplotě kolem 37 °C. V průběhu kultivace buněk se zpravidla provádí pasážování, tedy enzymatické odloučení buněk, výměna kultivačního roztoku a přenesení buněk na větší kultivační plochu. Kmenové buňky se rozmíchají v roztoku pufru a odstředí se. Podle vynálezu se získané kmenové buňky suspendují v médiu pro uchovávání a transport kmenových buněk, které obsahuje 1 až 15 % hmotn., s výhodou 3 až 10 % hmotn. trehalózy. Kultivace kmenových buněk se alespoň v části doby kultivace v kultivačním médiu s obsahem trehalózy provádí v přítomnosti nosiče z nanovláken.The composition of the invention is produced by a method comprising separating the stem cells from the biological material and culturing the stem cells in the culture medium. Cell cultivation is carried out in a conventional manner at a temperature of about 37 ° C. During cell cultivation, passage, i.e., enzymatic cell separation, exchange of the culture solution, and transfer of the cells to a larger culture area is generally performed. Stem cells are mixed in buffer solution and centrifuged. According to the invention, the stem cells obtained are suspended in a medium for storing and transporting the stem cells, which contains 1 to 15% by weight, preferably 3 to 10% by weight. trehaloses. The culturing of the stem cells is carried out in the presence of a nanofiber carrier at least part of the culture time in the trehalose-containing culture medium.
Léčebné použití trehalózy v kombinaci s kmenovými buňkami vykazuje při zánětlivých onemocnění, zejména posttraumatických reakcí, vyšší účinky^ než jaké bylo možno • · očekávat na základě znalosti samostatně.The therapeutic use of trehalose in combination with stem cells in inflammatory diseases, particularly post-traumatic reactions, has greater effects than could be expected on the basis of knowledge alone.
cislcu.tec.fi<žf}ícislcu.tec.fi <žf} í
Příklady provadoaj vynálezuExamples of the invention
Přiklad 1Example 1
účinků obou složek používaných dřeně byla provedena odběrového setu gentamicinem. PoThe effects of both components of the pulp used were performed by gentamicin collection set. After
Aspirace kostní která je součástí roztok s heparinem a prostor pro sterilní zpracování smíchán s infuzním roztokem Gelofusinu odpovídalo 25 % aa!The aspiration of the bone which is included in the heparin solution and the sterile treatment space mixed with the Gelofusin infusion solution corresponded to 25% aa!
sedimentovala 10 -X 30 minut a trepanobioptickou jehlou, obsahujícího fyziologický transportu kostní dřeně do biologického materiálu byl vzorek Gelofusinu. Množství přidaného objemu kostní dřeně. Směs vrstva prstence mononukleárních buněk byla odebrána. V odebrané vrstvě buněk byla analyzována buněčnost směsi hematologickým analyzátorem. Do každé z připravených kultivačních lahví o ploše 75 cm2 bylo přidáno 10 ml kompletního kultivačního media (médium Alpha MEM Eagle obsahující 5% lidský destičkový lyzát a gentamicin) a definované množství suspenze izolovaných buněk (10 mil WBC) pro nasazení primokultury. Kultivace buněk probíhala při teplotě 37 ± 2 °C. V průběhu kultivace buněk probíhala průběžná výměna kompletního kultivačního média s případným oplachem buněk pomocí 10 ml pufru PBS na jednu kultivační láhev. Dle množství rostoucích buněk probíhalo jejich pasážování, tedy řízené enzymatické odloučení adherujících buněk a jejich přenesení na větší kultivační plochu. Tento proces vždy začal optickou kontrolou kultury pod mikroskopem; optimální pro růst kultury bylo dosažení 80% pokrytí buněk kultivačního dna. Pro pasážování bylo nutné odsátí kultivačního media, oplach kultury 10 ml pufru PBS a přidání 1 ml roztoku enzymu TrypLE Select CTS. Kultivační lahve • ·sedimented for 10 -X 30 minutes and the trepanobioptic needle containing the physiological transport of bone marrow into the biological material was a Gelofusin sample. The amount of bone marrow volume added. The mononuclear cell ring layer mixture was removed. In the harvested cell layer, the cellularity of the mixture was analyzed by a hematology analyzer. 10 ml of complete culture medium (Alpha MEM Eagle medium containing 5% human platelet lysate and gentamicin) was added to each of the 75 cm 2 culture flasks prepared and a defined amount of isolated cell suspension (10 mil WBC) for primoculture deployment. The cells were cultured at 37 ± 2 ° C. During cell culture, the complete culture medium was continuously exchanged with optional cell rinsing with 10 ml PBS buffer per culture flask. Depending on the number of growing cells, their passage, that is, the controlled enzymatic separation of adherent cells and their transfer to a larger cultivation area. This process has always begun by optical inspection of the culture under a microscope; optimal for the growth of the culture was to achieve 80% coverage of the culture bottom cells. Passage required aspirating the culture medium, rinsing the culture with 10 ml of PBS buffer and adding 1 ml of TrypLE Select CTS enzyme solution. Culture bottles • ·
byly cca 4 minuty inkubovány při 37 ± 2 °C. Správný průběh enzymatické reakce byl kontrolován pod mikroskopem. Pokud se buňky pohybovaly s proudící kapalinou po poklepání kultivační lahve, byl do každé lahve přidán 1 ml infuzního roztoku 20% HSA (Lidský sérový albumin) a 6 ml pufru PBS. Tato směs byla promíchána jemným nasátím a vysátím z pipety a byla převedena do centrifugační zkumavky a centrifugována (230 g, 5 minut). Peleta /were incubated at 37 ± 2 ° C for about 4 minutes. The correct course of the enzymatic reaction was checked under a microscope. If cells were moving with flowing fluid after tapping the culture flask, 1 ml of 20% HSA (Human Serum Albumin) Infusion Solution and 6 ml PBS buffer were added to each flask. This mixture was mixed by gentle suction and pipet suction and transferred to a centrifuge tube and centrifuged (230 g, 5 minutes). Pellet /
buněk byla resuspendována v kompletním kultivačním mediu a suspenze buněk rozdělena na požadované množství kultivačních lahví. Třetím pasážováním buněk bylo dosaženo finální suspenze buněk. Ta byla navíc ještě jednou promyta pufrem PBS a centrifugována (230 g, 5 minut).Pro vytvoření přípravku podle k jednoho provedení vynálezu byla peleta získaná výše uvedeným postupem resuspendována v roztoku pufru PBS obsahuj ícim trehalozu.The cells were resuspended in complete culture medium and the cell suspension was divided into the required number of culture flasks. The third passage of the cells resulted in a final cell suspension. In addition, it was washed once more with PBS and centrifuged (230 g, 5 minutes). To form a formulation according to one embodiment of the invention, the pellet obtained as above was resuspended in a PBS buffer containing trehalose.
Obsah kmenových buněk je zpravidla 5 x 105 až 1 x 107 MSCs/ml. Při intravenozní aplikaci se může podávat například 1 x 106 MSCs/kg hmotnosti pokusného zvířete.The stem cell content is generally 5 x 10 5 to 1 x 10 7 MSCs / ml. For intravenous administration, for example, 1 x 10 6 MSCs / kg animal weight can be administered.
Příklad 2Example 2
Z komerčně dostupného polymeru kyseliny mléčné (PLA, polylaktid) byla připravena nanovlákna ve formě netkané textilie. Z této netkané textilie byly vyříznuty vzorky ve formě čtverců o rozměrech přibližně 15 x 15 mm, které byly přeneseny na kultivační desky s kulturami mezenchymálních kmenových buněk získaných z kostní dřeně králíka. Inkubace mezenchymálních kmenových buněk v přítomnosti trehalózy ve styku s netkanou textilií z nanovláken byla prováděna po dobu 24 hodin, aby kmenové buňky mohly ulpět na struktuře nanovláken jakožto nosiči. Kultivační roztok pro pokusy podle vynálezu obsahoval 3 % hmotn.From commercially available lactic acid polymer (PLA, polylactide) nanofibres were prepared in the form of nonwoven fabric. Samples of approximately 15 x 15 mm squares were cut from this nonwoven fabric and transferred to culture plates with mesenchymal stem cell cultures derived from rabbit bone marrow. Incubation of mesenchymal stem cells in the presence of trehalose in contact with the nonwoven nanofiber fabric was performed for 24 hours to allow the stem cells to adhere to the nanofiber structure as a carrier. The culture solution for the experiments according to the invention contained 3 wt.
trehalózy, př ítomnosti pro srovnávací pokusy byla trehalózy.trehalose, the presence for comparative trials was trehalose.
inkubace prováděna bez byly poleptány INVhydroxiduincubation carried out without INV-hydroxide being etched
Králičí oči r yrK sodného NaOH aplikovaného pomocí filtračního papírku nasátého hydroxidem, načež byly oči propláchnuty proudem vody. U každého králíka bylo poškozeno pouze pravé oko. Oči zcela zdravých králíků (mimo pokus) sloužily pro srovnání.Rabbit eyes of sodium NaOH applied with hydroxide-filtered filter paper were then rinsed with a stream of water. Only the right eye was damaged in each rabbit. The eyes of completely healthy rabbits (out of experiment) served for comparison.
V první skupině byly na poškozené oči přeneseny nosiče z nanovláken s králičími mezenchymálními dřeňovými buňkami, podle vynálezu inkubovanými v přítomnosti trehalózy, (buňkami dolů k povrchu poškozeného oka), nosiče byly pomocí čtyř stehů přichyceny ke spojivce, oči zavřeny a víčka sešita k sobě pomocí tři stehů. Po čtyřech dnech víčka rozešita, nosiče z nanovláken odstraněny a oko ponecháno bez dalšího léčení až do 15. dne, kdy byla pokusná zvířata utracena a oči vyšetřeny morfologicky, imunohistochemicky, biochemicky a pachymetricky. Veškeré pokusy na zvířatech byly prováděny tak, aby zvíře netrpělo, za použití celkové anestezie.In the first group, nanofiber carriers with rabbit mesenchymal marrow cells incubated in the presence of trehalose (cells down to the surface of the damaged eye) were transferred to the damaged eyes, the carriers were attached to the conjunctiva with four stitches, eyes closed and the eyelids stitched together three stitches. After four days the eyelids were spread, the nanofiber carriers were removed and the eye left without further treatment until day 15, when the test animals were sacrificed and the eyes examined morphologically, immunohistochemically, biochemically and pachymmetrically. All animal experiments were performed in a way that the animal did not suffer under general anesthesia.
Ve druhé skupině bylo stejně postupováno jako v první, s tím rozdílem, že nanovlákna byla napuštěna fyziologickým roztokem se 3 % hmotn. trehalózy, bez kmenových buněk.In the second group the procedure was the same as in the first one, with the difference that the nanofibres were impregnated with saline solution with 3 wt. trehalose, without stem cells.
Ve třetí skupině bylo postupováno stejně jako v první, s tím rozdílem, že nanovlákna nesla kmenové buňky bez trehalózy.In the third group the procedure was the same as in the first one, with the difference that nanofibres carried stem cells without trehalose.
Ve čtvrté skupině bylo postupováno stejně, jako v první skupině, ale nanovlákna byla samotná (bez kmenových buněk a bez trehalózy).In the fourth group the procedure was the same as in the first group, but the nanofibers were alone (without stem cells and without trehalose).
V páté skupině byly oči stejně poškozené jako v první skupině, ale neléčeny.In the fifth group, the eyes were as damaged as in the first group, but not treated.
V 15. den pokusu byly oči vyšetřeny pomocí imunohistochemie a biochemie pro-zánětlivých cytokinů. Regenerace epitelu byla hodnocena morfologicky a imunohistochemií epiteliálních buněk. Neovaskularizace byla posuzována prostřednictvím kvantifikace cév v jednotlivých sektorech rohovky. Transparence rohovky byla hodnocena makroskopicky (fotograficky) a pachymetricky, kvantifikací hodnot středových tlouštěk rohovek.On day 15 of the experiment, eyes were examined by immunohistochemistry and biochemistry of pro-inflammatory cytokines. Epithelial regeneration was evaluated morphologically and by immunohistochemistry of epithelial cells. Neovascularization was assessed through vascular quantification in individual corneal sectors. Corneal transparency was evaluated macroscopically (photographically) and pachymmetrically, by quantifying the values of the median corneal thickness.
Byly zjištěny následující výsledky:The following results were found:
V očích poškozených a neléčených byl rozvinutý zánět, rohovka bez epitelu, transparence ztracena, rohovka vaskularizována. Podobný obraz byl po aplikaci samotného nosiče z nanovláken, pouze rohovka byla částečně reepitelizována.In the eyes of the injured and untreated, there was developed inflammation, cornea without epithelium, transparency lost, cornea vascularized. A similar image was after application of the nanofiber carrier alone, only the cornea was partially re-epithelized.
Po aplikaci nosiče z nanovláken se samotnou trehalózou byla rohovka pokryta nepravidelným epitelem, zánět byl částečně redukován. Neovaskularizace rohovky byla snížena. Stejný obraz byl zjištěn po aplikaci nosiče z nanovláken se samotnými kmenovými buňkami.After application of the nanofiber carrier with trehalose itself, the cornea was covered with irregular epithelium, the inflammation was partially reduced. Corneal neovascularization was reduced. The same image was found after application of nanofiber carrier with stem cells alone.
Po aplikaci kombinace mezenchymálních kmenových buněk s trehalózou byla rohovka regenerována pravidelným epitelem, transparence rohovky byla obnovena z 90 %, neovaskularizace rohovky byla signifikantně potlačena.After application of a combination of mesenchymal stem cells with trehalose, the cornea was regenerated by regular epithelium, corneal transparency was restored to 90%, corneal neovascularization was significantly suppressed.
Popsaný experiment prokázal zvýšený léčebný účinek mezenchymálních kmenových buněk kombinovaných s trehalózou.The described experiment demonstrated an increased therapeutic effect of mesenchymal stem cells combined with trehalose.
Pro ověřeni zvýšeného léčebného účinku kmenových buněk v kombinační s trehalózou byly, obdobně jako je výše popsáno na přikladu králičích dřeňových buněk, inkubovány v přítomnosti kultivačního roztoku obsahujícího 3 % hmotn. trehalózy lidské mezenchymální kmenové buňky z kostní dřeně, nebo lidské tukové kmenové buňky, nebo lidské limbální kmenové buňky. Také s těmito lidskými kmenovými buňkami se při pokusu na poleptaném králičím oku rohovka zhojila pomocí kmenových buněk kombinovaných s trehalózou lépe než pomocí samotných kmenových buněk. Výsledky makroskopické, morfologické, imunohistochemické a biochemické byly shodné jako po aplikaci králičích mezenchymálních buněk.To verify the increased therapeutic effect of the stem cells in combination with trehalose, they were incubated in the presence of a culture solution containing 3 wt. trehaloses of human mesenchymal stem cells from bone marrow, or human fat stem cells, or human limbal stem cells. Also with these human stem cells, the corneal healing was better with stem cells combined with trehalose than with stem cells alone in an etched rabbit eye experiment. The macroscopic, morphological, immunohistochemical and biochemical results were the same as after the application of rabbit mesenchymal cells.
Příklad 3Example 3
Pro ověření zvýšeného účinku mezenchymálních kmenových buněk v kombinaci s trehalózou, obdobně jako je výše popsáno na přikladu králičích dřeňových buněk, byly inkubovány v přítomnosti kultivačního roztoku obsahujícího 3 % hmotn. trehalózy lidské mezenchymální kmenové buňky z kostní dřeně, nebo lidské tukové kmenové buňky, nebo lidské limbální kmenové buňky. Také s těmito lidskými kmenovými buňkami se v pokusu na poleptaném králičím oku (postupováno jako v příkladu 2) rohovka zhojila pomocí kmenových buněk kombinovaných s trehalózou lépe než pomocí samotných kmenových buněk. Výsledky makroskopické, morfologické, imunohistochemické, biochemické a fyzikální byly shodné jako po aplikaci králičích mezenchymálních buněk (s trehalózou).To verify the increased effect of mesenchymal stem cells in combination with trehalose, as described above in the example of rabbit marrow cells, they were incubated in the presence of a culture solution containing 3 wt. trehaloses of human mesenchymal stem cells from bone marrow, or human fat stem cells, or human limbal stem cells. Also with these human stem cells, in an etched rabbit eye experiment (as described in Example 2), the cornea healed better with stem cells combined with trehalose than with stem cells alone. The results of macroscopic, morphological, immunohistochemical, biochemical and physical were the same as after the application of rabbit mesenchymal cells (with trehalosis).
Příklad 4Example 4
Zvýšeného léčebného účinku mezenchymálních kmenových buněk (nebo tukových mezenchymálních kmenových buněk, nebo limbálních kmenových buněk), inkubovaných na nanovlákenném nosiči (bez trehalózy) bylo též dosaženo po nakapání 3% roztoku trehalózy na kmenové buňky na nosiči a po aplikování nosiče na poleptané oko (jako v příkladu 2) .The increased therapeutic effect of mesenchymal stem cells (or adipose mesenchymal stem cells, or limbal stem cells) incubated on a nanofibrous carrier (without trehalose) was also achieved by instillation of a 3% trehalose solution on the carrier stem cells and after application of the carrier to the burned eye. in Example 2).
Příklad 5Example 5
Zvýšeného léčebného účinku mezenchymálních kmenových buněk (nebo tukových mezenchymálních kmenových buněk, nebo limbálních kmenových buněk), inkubovaných na nanovlákenném nosiči (bez trehalózy) bylo též dosaženo po našití nanovlákenného nosiče s kmenovými buňkami na poleptané oko (jako v příkladu 2) a nakapání 3% roztoku trehalózy na rubovou stranu našitého nosiče (10 kapek po dobu 1 min) před sešitím víček.The increased therapeutic effect of mesenchymal stem cells (or fat mesenchymal stem cells, or limbal stem cells) incubated on nanofibrous carrier (without trehalose) was also achieved after seeding the nanofibrous stem cell carrier on the burned eye (as in Example 2) and 3% instillation. solution of trehalose on the reverse side of the sewn carrier (10 drops for 1 min) before sewing the lids.
Příklad 6 (provedení odchylné od vynálezu, bez použití nosiče)Example 6 (Embodiment different from the invention, without using a carrier)
U poleptaného oka bylo dosaženo zvýšeného léčebného účinku mezenchymálních kmenových buněk (nebo tukových mezenchymálních kmenových buněk, nebo limbálních kmenových buněk) po přidání 3% roztoku trehalózy a po intravenózní aplikaci králíkovi s poleptaným okem jako v příkladu 2.In the cauterized eye, an increased therapeutic effect of mesenchymal stem cells (or adipose mesenchymal stem cells, or limbal stem cells) was achieved by the addition of a 3% trehalose solution and intravenous administration to a caustic rabbit as in Example 2.
Příklad 7Example 7
Zvýšené léčebné účinky mezenchymálních kmenových buněk (dřeňových, nebo tukových), nebo limbálních kmenových buněk po adici 3% roztoku trehalózy ke kmenovým buňkám byly pozorovány také po jejich subkonjunktivální aplikaci do oka s poškozenou rohovkou louhem sodným jako v příkladu 2. Pro urychlení hojení se trehalo^za může s výhodou kombinovat s antiflogistiky (steroidními nebo nesteroidními), nebo s antibiotiky, nebo s jinými látkami, např. s antioxidačními enzymy.Increased therapeutic effects of mesenchymal stem cells (pulp or fat) or limbal stem cells after addition of a 3% trehalose solution to the stem cells were also observed after their subconjunctival administration to the eye with damaged caustic soda as in Example 2. To accelerate healing It may advantageously be combined with anti-inflammatory drugs (steroidal or non-steroidal), or with antibiotics, or with other substances, e.g., antioxidant enzymes.
« 9 •9 «· • ·· •· • ·9 9 9 9 · · · ·
Přiklad 8Example 8
Ozařováni králičích očí UVB paprsky po dobu 5 dnů (denní dávka záření 1.01 J/cm2) způsobila fotokeratitidu, zvýšenou hydrataci rohovky a ztenčení rohovkového epitelu. Transparence rohovky byla ztracena. 15. den po ozařování byly neléčené rohovky ulcerovány, nebo se hojily neprůhlednou jizvou. Rohovky byly vaskularizovány. Jestliže byly na rohovky aplikovány okamžitě po posledním ozáření mezenchymální kmenové buňky (dřeňové nebo tukové) v roztoku obsahujícím 3 % hmotn. trehalózy, rohovky se zhojily s 90% návratem transparence. Vředy se nevytvořily v žádné léčené rohovce. Za použití metodiky obdobné jako v příkladu 2 bylo zjištěno, že aplikace kmenových buněk v kombinaci s trehalózou přinesla lepší výsledky než aplikace samotné trehalózy. Při užití samotné trehalózy nebo samotných kmenových buněk byly některé rohovky ulcerovány a vaskularizovány. Při lokální aplikaci kmenových buněk s trehalózou na ozářené oko byla trehalóza s výhodou kombinována s kyselinou hyaluronovou. Kapáním nebo subkonjunktivální injekcí byla podávána suspenze obsahující 2 x 10*^MSCs/0,5 ml v roztoku obsahujícím 3 % hmotn. trehalózy aIrradiation of rabbit eyes with UVB rays for 5 days (daily dose of 1.01 J / cm 2) caused photokeratitis, increased corneal hydration and thinning of the corneal epithelium. Corneal transparency was lost. On the 15th day after irradiation, untreated corneas were ulcerated or healed with an opaque scar. The corneas were vascularized. When mesenchymal stem cells (marrow or fat) were applied to the cornea immediately after the last irradiation in a solution containing 3 wt. trehaloses, corneas healed with a 90% return to transparency. Ulcers did not develop in any treated cornea. Using a methodology similar to Example 2, it was found that the application of stem cells in combination with trehalose yielded better results than the administration of trehalose alone. Using trehalose alone or stem cells alone, some corneas were ulcerated and vascularized. When topically applied stem cells with trehalose to the irradiated eye, trehalose was preferably combined with hyaluronic acid. A suspension containing 2 x 10 6 MSCs / 0.5 ml in a solution containing 3 wt. trehalose and
vyšetření prokázalo, že oxidační poškození, způsobené UVB zářením, je signifikantně inhibováno aplikací kmenových buněk s trehalózou. Kmenové buňky měly zvýšený antioxidační účinek.examination showed that oxidative damage caused by UVB radiation is significantly inhibited by the administration of stem cells with trehalose. Stem cells had an increased antioxidant effect.
Claims (7)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2016-644A CZ307325B6 (en) | 2016-10-14 | 2016-10-14 | A composition containing stem cells for the treatment of post-traumatic inflammatory responses and a method of its manufacture |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2016-644A CZ307325B6 (en) | 2016-10-14 | 2016-10-14 | A composition containing stem cells for the treatment of post-traumatic inflammatory responses and a method of its manufacture |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2016644A3 true CZ2016644A3 (en) | 2018-06-06 |
| CZ307325B6 CZ307325B6 (en) | 2018-06-06 |
Family
ID=62240881
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2016-644A CZ307325B6 (en) | 2016-10-14 | 2016-10-14 | A composition containing stem cells for the treatment of post-traumatic inflammatory responses and a method of its manufacture |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ307325B6 (en) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008511672A (en) * | 2004-08-30 | 2008-04-17 | セレゲン，インコーポレーテッド | Cultured three-dimensional tissue and use thereof |
| JP5341059B2 (en) * | 2010-11-09 | 2013-11-13 | 株式会社大塚製薬工場 | Stem cell suspension |
| CN104758923A (en) * | 2015-03-11 | 2015-07-08 | 黑龙江天晴干细胞股份有限公司 | Stem cell preparation for treating nerve injury and preparation method thereof |
-
2016
- 2016-10-14 CZ CZ2016-644A patent/CZ307325B6/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ307325B6 (en) | 2018-06-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230405180A1 (en) | Mesenchymal stem cell-hydrogel-biodegradable or mesenchymal stem cell-hydrogel-undegradable support composition for skin regeneration or wound healing | |
| CN103702674B (en) | Composition, purposes and the preparation of platelet cracking content | |
| KR101310578B1 (en) | Methods of using adipose tissue-derived cells in the treatment of cardiovascular conditions | |
| TWI547561B (en) | Stem cells suspension | |
| CN108653327B (en) | Preparation method of secretory platelet-rich gel for treating chronic skin injury | |
| JP2017507114A (en) | Methods for inducing angiogenesis | |
| CN109929799B (en) | Human umbilical cord mesenchymal stem cell exosome and preparation method and application thereof | |
| JP2020191861A (en) | Umbilical cord mesenchymal stem cells mscs and culture methods and applications thereof | |
| CN109893541B (en) | Application of exosome derived from menstrual blood stem cells in preparation of medicine for treating intrauterine adhesion | |
| WO2015061839A1 (en) | Cell culture method | |
| CN110904037A (en) | Extraction method and application of exosome derived from amniotic mesenchymal stem cells | |
| WO2020045642A1 (en) | Composition and method for preserving or culturing ocular cells | |
| US20170175080A1 (en) | Compositions and methods for cell culture | |
| JP2022033694A (en) | Application of nano vesicle derived from stem cell in preparation of scar repair formulation | |
| KR20100101715A (en) | Dermal filler composition | |
| CZ2016644A3 (en) | A composition containing stem cells for the treatment of post-traumatic inflammatory responses and a method of its manufacture | |
| CN112494494B (en) | Novel pharmaceutical application of BML-28-4 | |
| CN107468708A (en) | A kind of preparation method of Stem Cell Activity factor gel and the application in Hard agglut wound treatment | |
| KR20140041263A (en) | Compositions for preventing or treating sterility caused by endometrial disorder | |
| RU2455357C1 (en) | Cell product for auto- and allografting prepared of human umbilical cord, and method for preparing thereof | |
| CN113616677A (en) | Methods and compositions for inhibiting cytokine storm | |
| CN112516146B (en) | Novel medicinal application of AZ191 | |
| CN113234670B (en) | Separation and culture method of adult mouse atrial myocytes | |
| CN112603914B (en) | New application of phenylephrine hydrochloride medicament | |
| CN107693841A (en) | It is a kind of to be used to treat dressing of diabetes and preparation method thereof |