CZ301244B6 - Univerzální vakcína k lécbe a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití a zpusob její výroby - Google Patents
Univerzální vakcína k lécbe a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití a zpusob její výroby Download PDFInfo
- Publication number
- CZ301244B6 CZ301244B6 CZ20070791A CZ2007791A CZ301244B6 CZ 301244 B6 CZ301244 B6 CZ 301244B6 CZ 20070791 A CZ20070791 A CZ 20070791A CZ 2007791 A CZ2007791 A CZ 2007791A CZ 301244 B6 CZ301244 B6 CZ 301244B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- borrelia
- vaccine
- ospa
- clinic
- ospc
- Prior art date
Links
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 title claims abstract description 70
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 70
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims description 8
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 claims abstract description 42
- 108700023315 OspC Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 241001148605 Borreliella garinii Species 0.000 claims abstract description 20
- 241001148604 Borreliella afzelii Species 0.000 claims abstract description 19
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 108700006640 OspA Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 17
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 15
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 15
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 8
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 claims description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 3
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims 1
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 abstract description 42
- 241000894007 species Species 0.000 abstract description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract description 2
- 101710105714 Outer surface protein A Proteins 0.000 description 31
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 27
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 21
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 11
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 11
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- 238000012770 revaccination Methods 0.000 description 9
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 7
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 6
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001480843 Ixodes ricinus Species 0.000 description 4
- 241000589970 Spirochaetales Species 0.000 description 4
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 229940042470 lyme disease vaccine Drugs 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 241000908522 Borreliella Species 0.000 description 3
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 3
- 108010033266 Lipoprotein(a) Proteins 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 229940099789 ospa protein Drugs 0.000 description 3
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 2
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000012369 In process control Methods 0.000 description 2
- 102000057248 Lipoprotein(a) Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 238000013494 PH determination Methods 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000010965 in-process control Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101001086191 Borrelia burgdorferi Outer surface protein A Proteins 0.000 description 1
- 206010061591 Borrelia infection Diseases 0.000 description 1
- 101100180402 Caenorhabditis elegans jun-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 description 1
- 206010062488 Erythema migrans Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 description 1
- 108010046732 HLA-DR4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 101710084021 Large envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 101710175243 Major antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 101710105715 Outer surface protein B Proteins 0.000 description 1
- 101710105711 Outer surface protein C Proteins 0.000 description 1
- -1 Revac cation Chemical class 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 208000035056 Tick-Borne disease Diseases 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical group [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000027645 antigenic variation Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 238000009529 body temperature measurement Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000002134 immunopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001012 protector Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 208000007865 relapsing fever Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000009528 severe injury Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 208000016523 tick-borne infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0225—Spirochetes, e.g. Treponema, Leptospira, Borrelia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Univerzální vakcína k lécbe a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití je vytvorena na bázi celobunecných bakterinu nebo bakteriálních lyzátu nebo purifikátu trí nejpatogennejších genomospecies borrelií - Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii, a prípadne dalších, pricemž každá z použitých genomospecies borrelií obsahuje soucasne oba imunogenní protektivní proteiny vnejší membrány OspA a OspC, poprípade obsahuje i další imunogenní protektivní proteiny vnejší membrány. Rešení zahrnuje také zpusob výroby vakcíny.
Description
Univerzální vakcína k léčbě a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití a způsob její výroby
Oblast techniky
Vynález se týká složení univerzální vakcíny k léčbě a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití a způsobu její výroby.
tú
Dosavadní stav techniky
Lymeská borrelióza je chronické multisystémové infekční onemocnění, které je nejčastějším infekčním onemocněním přenášeným členovci (arthropod bom) a to v Evropě i ve Spojených státech. O významu tohoto onemocnění svědčí četnost publikací v časopisech zabývajících se infekční problematikou. Z tohoto pohledu je v poslední dekádě borrelióza svým významem zařazována za syndrom získané imunodeficience, jak je popsáno např. v článku „The biological and sociál phenomenon of Lyme disease“ (Barbour AG, Fish D, Science, 1993 Jun 11; 260(5114):1610-6).
Onemocnění je vyvolané skupinou spirochet souhrnně označovaných jako Borrelia burgdorferi sensu lato. Tato skupina mikroorganismů je tvořena zejména třemi blízce příbuznými subspecies, a to Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii. Zatímco Borrelia burgdorferi sensu stricto je příčinou prakticky všech onemocnění Lymeskou borreliózou na severo25 americkém kontinentu, v Evropě převládají Borrelia garinii a Borrelia afzelii.
Závažné poškození savčího hostitelského organismu, stejně jako problémy spojené s diagnostikou i terapií Lymeské borreliózy jsou významným stimulem pro vývoj efektivních vakcinačních preparátů. Na druhé straně existují i výhrady k vývoji vakcín a jejich použití zejména u lidí. Jde především o to, že onemocnění není přenosné z Člověka na Člověka, je relativně snadno léčitelné antibiotiky a klinická manifestace se závažnými důsledky postihuje pouze část infikovaných pacientů. Navíc je toto onemocnění velmi zřídka fatální. Na místě je proto obava z případných vedlejších účinků nové vakcíny, které by za těchto okolností byly velmi těžko přijatelné, jak je popsáno ve stati „ Experimental immunization against Lyme borreliosis with recombinant Osp proteins: an overview “ (Sadziene A, Barbour AG., Infection. 1996 Mar-Apr;24(2):195-202).
První veterinární vakcína proti borrelióze byla vyvinuta ve Spojených státech v r. 1990 pro psy. Licencována byla vr. 1992, jak je známo z článků Performance of a Borrelia burgdorferi bacterin in borreliosis-endemic are as“ (Levý SA, Lissman BA, Ficke CM., J. Am. Vet. Med.
Assoc. 1993 Jun 1;202(11):1834-8.) nebo „Immunization against Lyme disease?“ (Wormser, GP., Ann Intem Med 123, 627 - 629, 1995).
Vakcína je celobuněčná, chemicky inaktivovaná, aplikovaná s vehikulem obsahujícím polymerové adjuvantní látky. Vakcína je aplikována intramuskulámě dvakrát v intervalu dvou až tří týdnů.
Po roce je doporučena udržovací dávka (booster). Vakcinace domácích zvířat, zejména psů je doporučena bez ohledu na to, zda zvíře bylo infikováno, případně u něho probíhá onemocnění. Příprava této vakcíny vycházela z poznatků získaných v pokusech na hlodavcích. Protektivní efekt celobuněčné vakcíny byl poprvé popsán u křečků.
Vývoj celobuněčné vakcíny pro veterinární účely byl podporován především jednoduchostí přípravy a také nízkou cenou. Tato vakcína však nebyla doporučena pro humánní použití s ohledem na skutečnost, že některé antigeny borrelií zkříženě reagují s lidskými antigeny a nelze proto vyloučit indukci imunopatologických procesů, jak je popsáno ve statích „Molecular mimicry and Lyme borreliosis: a shared antigenic determinant between Borrelia burgdorferi and human tissue“ (Aberer E et al., Ann Neurol. 1989 Dec; 26(6):732-7) nebo „Sérologie response to the
-1CZ 301244 B6
Borrelia burgdorferi flagellin demonstrates an epitope common to a neuroblastoma cell line“.
(Fikrigetal. 1993, Proč Nat Acad Sci U S A. 1993 Jan 1:90(1):183-7).
Určitým varováním bylo např. zjištění, že některé antigeny Borrelia burgdorferi aktivují sety spe5 cifických T lymfocytů, které se podílely na rozvoji arthritidy u křečků, což je popsáno v článku „Involvement of CD4+ T lymphocytes in induction of severe destructive Lyme arthritis in inbred LSHhamsters“ (Lim LC et al., Infect Immun. 1995 Dec; 63(12):4818-25).
Králíci jsou chráněni proti infekci, pokud je imunní sérum připravené imunizací zvířat imunogenío nimi proteiny borreliózového kmene aplikováno před experimentální čelenží. Podání imunního séra po infekci nebrání rozvoji erythema migrans a viscerálním projevům infekce. Podobné výsledky byly zjištěny také u myší a křečků a popsány v „Serum-mediated resolution of Lyme arthritis in mice“ (BartholdSWet al, Lab. Invest. 1996, Jan;74(1):57-67) nebo „Protective and arthritis-resolving activity in sera of mice infected with Borrelia burgdorferi “ (Barthold SW et is al., Clin Infect Dis 1997 Jul; 25 Suppl 1:S9-17.) nebo „Experimental infection of the hamster with Borrelia Burgdorferi“ (Johnson RC et al, Ann Acad Sci. 1988;539:258-63).
Těmito experimentálními poznatky byla naznačena možnost vývoje bezpečné subjednotkové vakcíny. Hlavními kandidátními antigeny pro takovou vakcínu se staly vnější povrchové proteiny (outer surface proteins Osp) označované jako OspA, B, C a D. Intenzivně byl studován zejména protein OspA. Protektivní efekt této subjednotkové vakcíny byl potvrzen experimentálně u myší, křečků a králíků a popsán v článcích „Protection of mice against the Lyme disease agent by immunizing with recombinant OspA'* (Firking E et al, Science 1990 Oct 26; 250(4980):553-6) nebo „Long-term protection of mice from Lyme disease by vaccination with OspA “ (Firking E et al, Infect Immun. 1992 Mar; 60(3):773-7). Laboratorní testy potvrdily, že aplikace tohoto proteinu ve formě purifikovaného, lipidovaného rekombinantního proteinu indukuje protektivní imunitu při parenterálním podání a chrání proti infekci borreliemi podanými nejen injekční cestou, ale též s pomocí klíštěcího vektoru. Potvrdilo se také, že infekční klíšťata sající na takto imunizovaných zvířatech ztrácejí svou infekciozítu, což je popsáno v „Safety and immunogenicity of a recombinant outer surface protein A Lyme vaccine (Keller D et al, JÁMA. 1994 Jun 8;271(22): 1764-8) nebo „Elimination of Borrelia burgdorferi from vector ticks feeding on OspAimmunized mice“ (Firking E etal, Proč Nati Acad Sci USA. 1992 Jun 15;89(12):5418-21).
V nepřítomnosti lipidové jednotky vyžaduje indukce tvorby protilátek adjuvantní efekt Freundo35 va kompletního adjuvans, nebo jiného imunitního adjuvans, jak je popsáno ve stati „Role of attached lipid in immunogenicity of Borrelia burgdorferi OspA “ (Erdile IF et al, Infect Immun. 1993 Jan;61 (1):81-90), To naznačuje dvojí možný efekt vakcinace:
(1) spirochetyjsou inaktivovány již v organismu klíštěte a je tak zabráněno transmisi infekce, (2) spirochety mohou být inaktivovány krátce po vstupu do hostitelského organismu ještě před antigenní variací a útlumem exprese antigenů Osp A.
K verifikaci protektivního efektu antigenů OspA byly připraveny dva různé konstrukty a vakcinační formule:
1, Nativní a čistý rekombinantní OspA, popsaný v „Recombinant outer surface protein a from
Borrelia burgdorferi induces antibodies protective against spirochetal infection in mice“ (Simon MM etal, J. infect Dis. 1991 Jul; 164(1):123-32)
2. OspA inkorporovaný do genomu BCG (Calmette, Guérín). OspA se exprimoval jako membrá50 nově asociovaný lipoprotein, což je známo z článku „Protective immunity elicited by rBCG vaccines“ (Stover CK et al, Dev Biol Stand. 1994;82:163-70). V této formě byl testován při intraperitoneální aplikaci a také při intranasálním podání, jak je publikováno v „Systemic and mucosal immunity induced by BCG vector expressing outer-surface protein A of Borrelia burgdorferi“ (Langermann Set al, Nátuře. 1994 Dec 8;372(6506):552-5). Při této formě
-2CZ 301244 B6 aplikace byly dlouhodobě indukovány specifické IgG i IgA protilátky, což je patrné z článku „ Protective immunity elicited by recombinant bacille Calmette-Guerin (BCG) expressing outer surface protein A (OspA) lipoprotein: a candidate Lyme disease vaccine“ (Stover CK et aí, J Exp Med. 1993 Jul 1;178(1):197-209).
V současné době jsou jediným producentem takové vakcíny pro humánní použití Spojené státy americké, Vakcína byla schválena Food and Drug Administration (FDA) 21. 12. 1998 a je popsána ve studii „ Vaccination against Lyme disease with recombinant Borrelia burgdorferí outer-surface lipoprotein A with adjuvant. Lyme Disease Vaccine Study Group“ (Steere AC et aí, N Engl J Med. 1998 Jul 23;339(4):209-15). Jde o výrobek LYMErix firmy SmithKline Beecham. Podle třetí fáze klinických zkoušek poskytuje vakcína 80-90% ochranu, jak je prokazováno ve stati „A vaccine consisting of recombinant Borrelia burgdorferí outer-surface protein A to prevent Lyme disease. Recombinant Outer-Surface Protein A Lyme Disease Vaccine Study Consortium“ (Sigal LH et aí, N Engl J Med. 1998 Jul 23;339(4):216-22. Erratum in: N is Engl J Med 1998 Aug 20;339(8):571).
I když je vakcína již v distribuci, je pod permanentní kontrolou s ohledem na minimum znalostí o dlouhodobém použití tohoto preparátu. Vakcína je aplikována injekčně třikrát v průběhu 12 měsíční periody (0, 1, 12) pro dosažení maxima imunitní odpovědi. Efektivnost vakcíny popisuje např. Wahlberg, který uvádí, že po dvou dávkách rekombinantního OspA proteinu vázaného na aluminium hydroxid ve fosfátovém pufru byla účinnost vakcíny 50% (1 rok), po třech vakcinačních dávkách (20 měsíců) byla účinnost 79%. Protilátkový titr klesal poměrně rychle a po dvou letech byl na úrovni prvního roku vakcinace (efektivnost 50%). Detaily o „booster“ efektu nejsou k dispozici. Doposud není povoleno aplikovat vakcínu dětem pod 15 let a lidem trpícím autoimunitním onemocněním, zejména artritidou. V souboru 5765 vakcinovaných jedinců se u dvou osob s fenotypem HLA-DR4 vyvinula arthritida, jak bylo zveřejněno v článku „Guarded endorsement for Lyme disease vaccine “ (Marwick C, JAMA, 1998 Jun 24;279(24):1937-8).
Komerčně dostupná vakcína je připravena z proteinu OspA z Borrelia burgdorferí sensu stricto.
Vzhledem k tomu, že tato bakterie je dominantním infekčním původcem Lymeské borreliózy na severoamerickém kontinentu, může být vakcína relativně efektivní pro obyvatelstvo USA.
V evropských podmínkách však toto onemocnění vyvolávají zejména tří patogenní subspecíes, a to Borrelia burgdorferí sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii. U všech těchto kmenů je na evropském kontinentu popsána antigenni variabilita. V evropských podmínkách je proto vakcína připravená pouze z kmene Borrelia burgdorferi sensu stricto pro humánní i veterinární použití nepoužitelná. Při vývoji účinné formy vakcíny byly využity i nové trendy ve vakcinačních technologiích, kde například účinná DNA vakcína je publikována ve statích „Protective immunization with plasmid DNA containing the outer surface lipoprotein A gene of Borrelia burgdorferi is independent of an eukaryotic promotér“ (Simon MM et aí, Eur J Immunol. 1996 Dec;
26(12):2831-40) nebo „DNA vaccines expressing a fusion product of outer surface proteins A and Cfrom Borrelia burgdorferi induce protective antibodies suitable for prophylaxis but not for resolution of Lyme disease“ (Wallich R. et aí, Infect Immun. 2001 Apr;69(4) :2130-6).
Jiným možným východiskem je připravit vakcínu z proteinu OspC, který je exprimován na povrchu mikroorganismů v těle hostitele a podle literárních dokladů má humorální imunita proti tomuto proteinu protektivní charakter, jak je popsáno v „Protective immunization with plasmid DNA containing the outer surface lipoprotein A gene of Borrelia burgdorferi is independent of an eukaryotic promotér“ (Simon MM etal, Eur. J. Immunol. 26, 2831-2840,1996),
OspC je hlavním membránovým antigenem vyjádřeným v časné fázi infekce. U Borrelia burgdorferi sensu stricto je OspC vysoce variabilní. Epidemiologickou analýzou a sekvenováním genů pro OspC u jednotlivých izolátů a doplněním s GeneBank bylo pro tento antigen zjištěno 21 alelických skupin označovaných A-U, jak je popisováno v „Four clones of Borrelia burgdorferi sensu stricto čase invasive infection in humans“ (Seinost G et aí, Infect. Immun. 67,
3518-3524, 1999).
-3CZ 301244 B6
Vnější povrchový antigen A (OspA) je hlavním povrchovým antigenem, který je exprimován, když je Borrelia burgdorferi rezidentní v klíštěti. V okamžiku, kdy klíště začne nasávat krev na savcích, je syntéza tohoto antigenů reprimována a naopak je indukována syntéza antigenů OspC.
Takto se OspC stává hlavním antigenem vnější povrchové membrány v časné fázi infekce, což je popsáno například v „Jnduction of an outer surface protein of Borrelia burgdorferi during tick feeding“ (Schwan TG et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 92, 2909-2913. 1995). I když bylo prokázáno, že OspC má limitovanou povrchovou expozici, je potentním imunogenem. Imunizace OspC je protektivní proti borreliové infekci. Ochrana je však vázána na konkrétní alelu OspC, ío která kontroluje syntézu konkrétního proteinu. Infekce jiným typem borrelie vede u těchto imunizovaných jedinců k onemocnění. To samozřejmě limituje použití tohoto antigenů získaného pouze z jedné genomospecies borrelií pro přípravu univerzální vakcíny.
Otázka úspěšné vakcinace proti Lymeské borrelióze zůstává tedy otevřenou otázkou. V Evropě je navíc komplikována existencí tří různých genomospecies (Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii) a onemocněním Lymeskou borreliózou vedle člověka i různých druhů domácích a hospodářských zvířat. Problematikou onemocnění u psů a koček se věnuje stať „ Canine borreliosis “ (Littman MP, Vet Clin Smáli Anim 33, 2003, 827-862) a u koní „ Equine Abortion Associated with the Borrelia parker i- B. turicatae Tick-Bome Relapsing Fever
Spirochete Group“ (Walker RL et al, Journal of Clinical Microbiology, 2002, 40, 4, 15581562).
O možnost překonat tyto problémy přípravou tzv. „kokteilových vakcín“ se pokusili např. Livey et al., a své výsledky publikovali ve stati „OspC vaccine candidate“ (Abstract of the Symposium on the Pathogenesis and Management of Tick-borne Diseases. 1998 Sept. 28-30. Vienna,
Austria. 1998).
Se stávajícími problémy s diagnostikou a léčbou Lymeské borreliózy a vzhledem k nemožnosti účinně kontrolovat a snižovat rozšíření vektorů borrelií, naléhavě vyvstala potřeba vakcíny schopné účinně imunizovat vnímavé druhy domácích a hospodářských zvířat i lidí proti infekci
Borrelia burgdorferi sensu lato. Byly vyvinuty vakcíny na bázi celobuněčného bakterinu Borrelia burgdorferi pro použití u domácích zvířat, popsané např. v patentech US 4 721617, US 6 316 005. Byly vyvinuty i vakcíny založené na obsahu proteinu OspA, OspC či dalších povrchových (outer surface proteins) imunogenních proteinů, izolovaných z kultivovaných kultur borrelií, exprimovaných jako rekombinantní proteiny v různých hostitelích (E. coli), nebo připra35 vených synteticky, z nichž jako příklady je možno uvést spisy WO 94/25596, WO 96/05313, WO 97/49812, US 6 716 574, US 2004067517, US 6 676 942, WO 02/16422, US 5 53 103, US 6 486 130, US 6 464 985, EP 633 028).
Tyto celobuněčné nebo subjednotkové vakcíny však nezahrnují ochranu proti celé šíři patogen40 nich borrelií všech genomospecies, tedy zejména Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia garinii a Borrelia afzelii a případně dalších. Jsou odvozeny vždy pouze z jedné genomospecies, a to Borrelia burgdorferi sensu stricto.
Úkolem vynálezu je představit novou univerzální vakcínu pro humánní a veterinární použití, která obsahuje současně oba hlavní imunogenní proteiny vnější membrány OspA a OspC tří nejpatogennějších genomospecies borrelií, a to Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia garinii a Borrelia afzelii, a případně dalších, a může být úspěšně aplikovatelná bez teritoriálního omezení.
Podstata vynálezu
Uvedeného cíle je dosaženo vynálezem, kterým je univerzální vakcína k léčbě a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití, jejíž podstata spočívá v tom, že je vytvořena na bázi celobuněěných bakterinů nebo bakteriálních lyzátů nebo purifikátů tri nejpatogen-4CZ 301244 B6 nějších genomospecies borrelií - Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii, a případně dalších, a obsahuje současně oba imunogenní projektivní proteiny vnější membrány OspA a OspC, popřípadě obsahuje i další imunogenní projektivní proteiny vnější membrány.
Dále je podstatou vynálezu, že imunogenní protektivní proteiny vnější membrány OspA a OspC jsou ve vakcíně obsaženy s výhodou v poměru 1 : 1, že je vytvořena v lyofilizované či tekuté formě, je aplikována vpufrovaném fyziologickém roztoku nebo s minerálním či olejovým imunitním adjuvans, případně dalšími ímunomodulátory, a že pH vakcíny se pohybuje v rozmezí io hodnot 4 až 9.
Konečně je podstatou vynálezu způsob výroby univerzální vakcíny k léčbě a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití, při jehož realizaci se každý z výrobních kmenů borrelií kultivuje, inaktivuje a testuje až do stavu smísení samostatně, přičemž při kultivaci is kmenů za účelem exprese antigenu OspA probíhá pomnožování a produkce kultuiy při teplotě 26 až 35 °C s dobou 6 až 18 dnů u každého kroku a při kultivaci kmenů za účelem exprese antigenu OspC probíhá pomnožování a produkce kultury při teplotě 36 až 38 °C s dobou 6 až dnů u každého kroku.
Předkládaným vynálezem se dosahuje nového účinku v tom, že po aplikaci dochází u vakcinovaných zvířat či člověka k tvorbě specifických OspA a OspC protilátek, které zabraňují přestupu patogenních borrelií z klíštěte do vakcinovaného organismu (OspA protilátky) a napomáhají jejích destrukci krátce po případném přestupu patogenních borrelií do vakcinovaného organismu (OspC protilátky) a případně k tvorbě dalších blíže nedefinovaných postvakcinačních protektiv25 nich protilátek a stimulaci imunitních mechanismů. Dalším přínosem je, že kromě běžných dospělých jedinců je vakcínu možno aplikovat mláďatům domácích zvířat (přednostně psi a kočky) a mláďatům hospodářských zvířat (přednostně koně) od 3 týdnů jejich věku k navození aktivní protektivní imunity proti Lymeské borrelióze. Rovněž je možno vakcínu současně aplikovat sjinými přípravky, léčivy a vakcínami proti virovým, bakteriálním, mykotickým a jiným onemocněním psů, koček, koní a jiných druhů zvířat, pro které je vakcína určena.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Tento příklad provedení demonstruje ověření protektivity univerzální vakcíny po imunizaci pokusných koček, psů a koní vůči čelenži virulentními kmeny Borrelia burgdorferi sensu lato, v žádném případě však neomezuje patentová práva vztahující se k tomuto patentu.
Příprava pokusného vzorku vakcíny a výsledku testací:
A) Kultivace výrobních kmenů borrelií za účelem exprese antigenu OspA:
Při kultivaci výrobních kmenů borrelií za účelem exprese antigenu OspA, byla jako výchozí surovina použita jedna z položek
- Médium BSK -H + králičí sérum
- Médium BSK - H complete a výrobní kmeny Borrelia afzelii, Borrelia garinii a Borrelia burgdorferi sensu stricto podle 50 následně znázorněného schématického výrobního postupu:
-5CZ 301244 B6
Kontrola růstu a čistoty
Inaktivace jednotlivých kmenů
| Plnění, adjustace, výstupní kontrola 1
Kontrola růstu a Čistoty Stanovení počtu Stanovení přítomností OspA
Zkouška inaktivace
Stanovení nepřítomnosti séra
Kontrola sterility, stanovení a úprava pH
Kontrola sterility, stanovení pH
Poznámka: Každý kmen borrelií (Borrelia afzelii, garinii a burgdorferi sensu stricto) se kultivuje, kontroluje, inaktivuje a testuje zvlášť až do stavu smísení všech kmenů (včetně kmenů s expresí antigenů OspC).
Vlastní kultivace se prováděla v plastových nebo skleněných Roux láhvích určených ke kultivaci kultur borrelií, když kultivační médium BSK se před vlastní kultivací obohatí 6% sterilního králičího séra vhodného pro kultivaci borrelií, popř. lze použít přímo kompletní BSK-H médium s obsahem 6% králičího séra. Matečné i pracovní výrobní kmeny jsou udržovány v zamraženém stavu pří teplotě -196 °C v tekutém dusíku.
Při oživování kultury se ampule s kulturou vyjme z tekutého dusíku a rozmrazí se při teplotě cca 30 °C. Ihned po rozpuštění se inokuíuje do zkumavky s živným médiem vytemperovaným na teplotu cca 28 °C v poměru 1 + 9 (1 díl kultury + 9 dílů média). Každý kmen se kultivuje samostatně inkubace probíhá při teplotě 26 až 35 °C po dobu 6 až 18 dní.
Pri pomnožování kultury se dobře narostlá, životaschopná kultura (mění barvu kultivačního média z červené na žlutou) po mikroskopické kontrole za aseptických podmínek inokuíuje do živného média v poměru 1 díl kultury + 9 dílů média. Kultivace probíhá 6 až 10 dnů při teplotě
26 až 35 °C. Další subpasáže dobře narostlých borrelií se provádí v poměru 1 díl násady : 10 až
100 dílům kultivačního média. Počet dalších subpasází je závislý na požadovaném objemu borrelií pro přípravu vakcíny,
Při produkci kultury pro výrobu vakcíny se narostlé kultury z předchozích kultivací za aseptic25 kých podmínek použijí jako inokulum do živné půdy v 1000 ml lahvích v poměru 1 díl násady :
lOaž 100 dílům kultivačního média. Kultivace probíháóaž lOdnů při teplotě 26až35 °C.
Stanoven počtu borrelií se provádí v temném poli mikroskopu pomocí PETROFF HAUSSER COUNTÍNG CHAMBER.
Během procesu se provádějí mezioperační kontroly růstu a čistoty kultury pomocí makroskopického vyšetření, mikroskopického vyšetření a kultivačního vyšetření. Makroskopické vyšetření spočívá ve vizuálním sledování, když vhodná kultura mění barvu kultivačního media z červené
-6CZ 301244 Bó barvy do žluté a v mediu se vyskytuje sediment. Mikroskopické vyšetření v temném poli mikroskopu sleduje, zda jsou Borrelie přiměřeně pohyblivé s malým množstvím detritu, bez známek bakteriální kontaminace. Při kultivačním vyšetření se hodnocená kultura borrelií přenese v množství 0,5 ml na předsušený krevní agar a kultivace probíhá při 35 až 37 °C po dobu 48 hod.
Při posouzení zkoušky se sleduje přítomnost jakéhokoliv bakteriálního nárůstu, kterýje nežádoucí a kultury s bakteriální kontaminací se vyřadí.
Stanovení přítomnosti OspA se provádí pomocí proteinové elektroforézy na SDS PAGE po io obarvení Coomasie Blue nebo imunodetekcí metodou Western Blot s použitím anti OspA séra.
B) Kultivace výrobních kmenů borrelií za účelem exprese antigenu OspC:
Při přípravě kultivace se použijí stejné suroviny a stejné výrobní kmeny a postupuje se dle stejného schématického výrobního postupu jako u exprese antigenu OspA popsaného ad A).
Rovněž vlastní kultivace probíhá ve stejném procesu s tím rozdílem, že při oživování kultury se ampule s kulturou po rozpuštění inokuluje do zkumavky s živným médiem vytemperovaným na teplotu cca 37 °C v poměru 1 + 9 (1 díl kultury + 9 dílů média) a inkubace probíhá při teplotě 36 až 38 °C po dobu 6 až 18 dní. Rovněž pomnožování kultury probíhá analogicky s tím rozdílem, že kultivace probíhá 6 až 10 dnů při teplotě 36 až 38 °C. Identicky s popisem v ad A) se provádí produkce kultury pro výrobu vakcíny, stanovení počtu borrelií, mezioperační kontroly, kontrola růstu a čistoty kultury a stanovení přítomnosti OspC.
C) Vlastní příprava finální podoby vakcíny:
Koncentrované, purifíkované, stabilizované a inaktivované bakteriální kmeny Borrelia burgdorferi senzi stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii s prokázanou expresí povrchového proteinu OspA a koncentrované, purifíkované, stabilizované a inaktivované bakteriální kmeny Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii s prokázanou expresí povrchového proteinu OspC se smíchají tak, aby povrchové OspA a OspC jednotlivých genomospecies
Borrelií byly ve shodném poměru. Poté se Borreliová složka (90% objemových) smíchá s Aluminiumhydroxid gelem (10 % objemových). Po dokonalé homogenizaci se provede kontrola a úprava pH na hodnotu 7,5 až 8,0. Vakcína se rozplní do zásobních lahví a provede se zkouška sterility. Poté je vakcína rozplněna do finálního expedičního balení, adjustována a předána do výstupní kontroly.
D) Výsledky testací
a) zkouška účinnosti na kočkách:
Provedla se vakcinace a revakcinace 6 koček pokusným vzorkem vakcíny a za 90 dní čelenž prostřednictvím přirozeně infikovaných klíšťat obecných (Ixodes ricinus) genomospeciemi borrelií Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii, včetně infekce 3 koček nevakcinovaných, kontrolních.
Vakcinace byla provedena dávkou t ml vakcíny subkutánně (s. c.) a za 3 týdny byla shodným způsobem provedena revakcinace. Před vakcinací a před revakcinací byl proveden odběr krve.
Další odběry krve byly provedeny za 1 měsíc pro revakcinaci. Za 3 měsíce po revakcinací byla provedena čelenž prostřednictvím klíšťat obecných (Ixodes ricinus) z přírodního sběru, která byla přirozeně infikována všemi třemi nejpatogennějšími genomospecies - Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii. Stupeň infekce klíšťat byl ověřen před zahájením čelenžního experimentu.
Po infekci byla všechna pokusná zvířata (kočky vakcinované i kočky nevakcinované - kontrolní) denně klinicky hodnocena a byl zaznamenáván jejich zdravotní stav, včetně měření tělesné teploty. Po infekci byly provedeny probatomí odběiy krve ode všech pokusných zvířat 14. den,
-7CZ 301244 B6
28. den, 42. den a 60. den. Krev byla odebrána i v den čelenže, těsně před infekcí prostřednictvím klíšťat 7., 28. a 60. den po čelenži byly provedeny biopsie kůže v místě přisátí klíšťat s cílem reizolace borrelií z těchto vzorků. 60 den po čelenži byla všechna pokusná zvířata utracena a byla provedena patologicko - anatomická pitva s odběrem vzorků ze svalu, kloubní synovie, mízní uzliny, kůže a ledviny, s cílem reizolace borrelií z těchto predilekčních míst.
Dosažené výsledky jsou názorně prezentovány v přehledných tabulkách č. 1, 2, 3 a 4. Z dosažených výsledků jednoznačně vyplývá, že vakcína proti borelióze připravená z výrobních kmenů BorTelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii exprimuj ících povrchové io proteiny OspA a OspC je pro kočky neškodná a vyvolává u nich protektivní imunitu vůči přirozené infekci prostřednictvím infikovaných klíšťat obecných všemi třemi nejpatogennějšími genomospecies Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii a z důvodu principu křížové imunity případně i vůči dalším známým genomospecies Borrelií.
Tabulka č. 1 - Schéma Čelenžního pokusu - kočky
| Kočka č. | Vakcinace | Revakci nace | Celenž | Odběry biologického materiálu po čelenži/ dny | Poznámka | |||||||
| 7 | 14 | 28 | 35 | 42 | 49 | 56 | 60 | |||||
| IV | + | + | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně |
| 2V | + | + | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně |
| 3V | + | + | + | B | K | BK | K | - | - | BKP | Klinika- denně | |
| 4V | + | + | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně |
| 5V | + | + | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně |
| 6V | + | + | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně |
| 7KO | - | - | + | B | K | BK | - | K | - | BKP | Klinika- denně | |
| 8KO | - | - | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně |
| 9KO | - | - | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně |
Vysvětlivky:
V - vakcinace B-biopsie kůže
KO- bez vakcinace (kontrola) K-odbér krve +- proveden úkon P-patologicko-anatomická pitva
- - neproveden úkon
Tabulka č. 2 - Klinické hodnocení po čelenži
| Kočka č. | Klinické změny po i | Selenži- | dny | Poznámka | ||||||
| 7 | 14 | 21 | 28 | 35 | 42 | 49 | 56 | 60 | ||
| IV | - | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně | |
| 2V | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně | ||
| 3V | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně | ||
| 4V | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně | ||
| 5V | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně | ||
| 6V | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně | ||
| 7KO | - | - | - | - | + | Ί- | + | Klinika- sledována denně | ||
| 8KO | - | - | - | - | - | 4- | + | Klinika- sledována denně | ||
| 9KO | - | - | - | - | - | - | + | Klinika- sledována denně |
Vysvětlivky:
+ - klinické příznaky — bez klinických příznaků
-8CZ 301244 B6
Tabulka č. 3 - Nález borrelií v bioptátech kůže po čelenži
| Kočka č. | Termín odběru bioptátů kůže- dny | Poznámka | ||
| 7 | 28 | 60 | ||
| IV | - | - | ||
| 2V | - | - | ||
| 3V | - | - | ||
| 4V | - | - | ||
| 5V | - | - | ||
| 6V | - | |||
| 7KO | + | - | ||
| 8KO | + | - | ||
| 9KO | + | + | - |
Vysvětlivky:
+ - pozitivní záchyt
- - negativní záchyt
Tabulka č.4- Nález borrelií v orgánech
| Kočka č. | Predilekční orgány (60 den- pitva). | Poznámka | ||||
| sval | kůže | mízní uzlina | kloubní synovie | ledvina | ||
| IV | - | - | - | - | - | PA- neg. |
| 2V | - | - | - | - | - | PA- neg. |
| 3V | - | - | - | - | - | PA- neg. |
| 4V | - | - | - | - | - | PA- neg. |
| 5V | - | - | - | - | - | PA- neg. |
| 6V | - | - | - | - | - | PA- neg. |
| 7KO | - | - | + | + | - | PA- poz. |
| 8KO | + | - | + | + | - | PA- poz. |
| 9KO | + | - | + | + | - | PA- poz. |
Vysvětlivky:
+ - pozitivní záchyt - - negativní záchyt PA- patologicko-anatomická pitva
b) zkouška účinnosti na psech:
Provedla se vakcinace a revakcinace 6 psů pokusným vzorkem vakcíny a za 90 dní čelenž prostřednictvím přirozeně infikovaných klíšťat obecných (Ixodes ricinus) genomospeciemi borrelií, a to Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii, včetně infekce 3 psů nevakcinovaných, kontrolních. Vakcinace, revakcinace, odběry krve, klinické hodnocení, probatomí odběry a další úkony byly prováděny shodně jako u zkoušky na kočkách.
Dosažené výsledky jsou názorně prezentovány v přehledných tabulkách č. 5, 6, 7 a 8, Z dosažených výsledků jednoznačně vyplývá, že vakcína proti borelióze připravená z výrobních kmenů
Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii exprimujících povrchové proteiny OspA a OspC je pro psy neškodná a vyvolává u nich protektivní imunitu vůči přirozené infekci prostřednictvím infikovaných klíšťat obecných všemi třemi nej patogennějším i genomospecies Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii a z důvodu principu křížové imunity případně i vůči dalším známým genomospecies Borrelií.
-9CZ 301244 B6
Tabulka č. 5- Schéma čelenžního pokusu - psi
| Pesč. | Vakcinace | Revak c i nace | Čelcnž | Odběry biologického materiálu po čelenži/ dny | ||||||||
| 7 | 14 | 28 | 35 | 42 | 49 | 56 | 60 | |||||
| IV | + | + | B | K | BK | K | BKP | Klinika- denně | ||||
| 2V | + | + | + | B | K | BK | K | BKP | Klinika- denně | |||
| 3V | + | + | + | B | K | BK | K | - | - | BKP | Klinika- denně | |
| 4V | + | + | + | B | K | BK | K | BKP | Klinika- denně | |||
| 5V | + | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně | |
| 6V | + | + | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně |
| 7KO | - | - | + | B | K | BK | - | K | - | BKP | Klinika- denně | |
| 8KO | - | - | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně |
| 9KO | - | - | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně |
Vysvětlivky:
V- vakcinace B-biopsie kůže
KO- bez vakcinace (kontrola) K-odběr krve +- proveden úkon P-patologicko-anatomická pitva
- - neproveden úkon
Tabulka č. 6 - Klinické hodnocení po čelenži
| Pes C. | Klinické změny po čelenži- dny | Poznámka | ||||||||
| 7 | 14 | 21 | 28 | 35 | 42 | 49 | 56 | 60 | ||
| IV | - | - | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně |
| 2V | Klinika- sledována denně - sledována denně | |||||||||
| 3V | - | - | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně |
| 4V | - | - | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně |
| 5V | - | - | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně |
| 6V | - | - | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně |
| 7KO | - | - | - | - | - | - | - | + | + | Klinika- sledována denně |
| 8KO | - | - | - | - | - | - | - | + | + | Klinika- sledována denně |
| 9KO | - | - | - | - | - | - | - | + | 4- | Klinika- sledována denně |
Vysvětlivky:
+ - klinické příznaky --bezklinických příznaků
Tabulka č. 7 - Nález borrelií v bioptátech kůže po čelenži
| Pesč. | Termín odběru bioptátů kůže- dny | Poznámka | ||
| 7 | 28 | 60 | ||
| Iv | - | - | - | |
| 2V | - | - | - | |
| 3V | - | - | - | |
| 4V | - | - | - | |
| 5V | - | - | ||
| 6V | - | - | - | |
| 7KO | + | - | - | |
| 8KO | + | + | - | |
| 9KO | + | + | - |
Vysvětlivky:
+ - pozitivní záchyt - - negativní záchyt
-10CZ 301244 B6
Tabulka č. 8 - Nález borrelií v orgánech
| Pes č. | Predilekční orgány (601 | en- pitva). | Poznámka | |||
| sval | kůže | mízní uzlina | kloubní synovie | ledvina | ||
| IV | - | - | - | - | PA- neg. | |
| 2V | - | - | - | - | PA- neg. | |
| 3V | - | - | PA- neg. | |||
| 4V | - | - | - | - | PA- neg. | |
| 5V | - | - | - | - | PA- neg. | |
| 6V | - | - | - | - | PA- neg. | |
| 7KO | + | + | - | - | PA- poz. | |
| 8KO | + | + | + | - | PA- poz. | |
| 9KO | + | + | + | - | PA- poz. |
Vysvětlivky:
+ - pozitivní záchyt ’ - negativní záchyt PA- patologicko-anatomická pitva
c) zkouška účinnosti na koních:
ío Provedla se vakcinace a revakcinace 6 koní pokusným vzorkem vakcíny a za 90 dní čelenž prostřednictvím přirozeně infikovaných klíšťat obecných (íxodes ricinus) genomospeciemi borrelií, a to Borrelía burgdorferi sensu stricto, BorTelia afzelii a Borrelia garinii, včetně infekce 3 koní nevakcinovaných, kontrolních.
Vakcinace, revakcinace, odběry krve, klinické hodnocení, probatomí odběry a další úkony byly prováděny shodně jako u zkoušky na kočkách nebo na psech.
Dosažené výsledky jsou názorně prezentovány v přehledných tabulkách 9, 10, 11 a 12. Z dosažených výsledků jednoznačně vyplývá, že vakcína proti boreíióze připravená z výrobních kmenů
Borrelia burgdorferi sensu stricto, BorTelia afzelii a Borrelia garinii exprimujících povrchové proteiny OspA a OspC je pro koně neškodná a vyvolává u nich protektivní imunitu vůči přirozené infekci prostřednictvím infikovaných klíšťat obecných všemi třemi nepatogennějšími genomospecies Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii a z důvodu principu křížové imunity případně i vůči dalším známým genomospecies Borrelií.
Tabulka č. 9- Schéma Čelenžního pokusu - koně
| Kůň č. | Vakcinace | Revakci nace | ele nž | Odběry biologického matená | u po Celenži/ dny | Poznámka | ||||||
| 7 | 14 | 28 | 35 | 42 | 49 | 56 | 60 | |||||
| IV | + | + | + | B | K | BK | K | - | BKP | klinika - denně | ||
| 2V | + | + | + | B | K | BK | - | K | - | BKP | Klinika- denně | |
| 3V | + | + | + | B | K | BK | - | K | BKP | Klinika- denně | ||
| 4V | + | + | + | B | K | BK | K | - | BKP | Klinika- denně | ||
| 5V | + | + | + | B | K | BK | K | BKP | Klinika- denně | |||
| 6V | + | + | B | K | BK | - | K | - | BKP | Klinika- denně | ||
| 7KO | - | - | + | B | K | BK | K | - | - | BKP | Klinika- denně | |
| 8KO | - | - | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně |
| 9KO | - | - | + | B | K | BK | - | K | - | - | BKP | Klinika- denně |
Vysvětlivky:
V- vakcinace
KO - bez vakcinace (kontrola) B- biopsie kůže +- proveden úkon K- odběr krve — neproveden úkon P- patologicko-anatomická pitva
-11 CZ 301244 B6
Tabulka ě. 10 - Klinické hodnocení po čelenži
| Kůň č. | Klinické změny po Čelenži- dny | Poznámka | ||||||||
| 7 | 14 | 21 | 28 | 35 | 42 | 49 | 56 | 60 | ||
| IV | - | - | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně |
| 2V | Klinika- sledována denně - sledována denně | |||||||||
| 3V | - | - | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně |
| 4V | - | - | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně |
| 5V | - | - | - | - | - | - | - | - | - | Klinika- sledována denně |
| 6V | - | - | - | - | - | - | * | - | - | Klinika- sledována denně |
| 7KO | - | - | - | - | - | - | - | - | + | Klinika- sledována denně |
| 8KO | - | - | - | - | - | - | - | + | + | Klinika- sledována denně |
| 9KO | - | - | - | - | - | - | - | - | + | Klinika- sledována denně |
Vysvětlivky:
+ -klinické příznaky --bez klinických příznaků io Tabulka č. 11 - Nález borrelií v bioptátech kůže po čelenži
| Kůň č. | Termín odběru bioptátů kůže- dny | Poznámka | ||
| 7 | 28 | 60 | ||
| IV | - | - | ||
| 2V | - | - | - | |
| 3V | - | - | - | |
| 4V | - | - | - | |
| 5V | - | - | - | |
| 6V | - | - | - | |
| 7KO | + | - | - | |
| 8KO | + | - | - | |
| 9KO | + | - | - |
Vysvětlivky:
+ - pozitivní záchyt - - negativní záchyt
-12CZ 301244 Bó
Tabulka č. 12 - nález borrelií v orgánech
| Kočka č. | PredilekČní orgány (60 den- pitva | Poznámka | ||||
| sval | kůže | mízní uzlina | kloubní synovie | ledvina | ||
| IV | - | - | - | - | PA- neg. | |
| 2V | - | - | - | - | PA- neg. | |
| 3V | - | - | PA- neg. | |||
| 4V | - | - | PA- neg. | |||
| 5V | - | - | - | PA- neg. | ||
| ÓV | - | - | - | PA- neg. | ||
| 7KO | - | + | PA- poz. | |||
| 8KO | - | + | + | PA- poz. | ||
| 9KO | + | - | + | + | PA- poz. |
Vysvětlivky:
+ - pozitivní záchyt
- - negativní záchyt
PA- patologicko-anatomická pitva
Popsané příklady přípravy vakcíny nejsou jedinými možnými provedeními podle vynálezu, ale bez vlivu na jeho podstatu mohou být celobuněčné bakteriny nebo bakteriální lyzáty nebo io purifikáty s obsahem imunogenních protektivních proteinů aplikovány v pufrovaném fyziologickém roztoku nebo s minerálním či olejovým imunitním adjuvans, popřípadě s imunitními komplexy (ISCOM), liposomy a dalšími přírodními či syntetickými imunitními adjuvanty.
Průmyslová využitelnost
Univerzální vakcínu k léčbě a prevenci Lymeské borreliózy je možno použít ve veterinární i humánní medicíně a je možno ji úspěšně aplikovat vnitrosvalovč (intramuskulámě), podkožně (subkutánně), vnitrokožně (intradermálně) nebo bezjehelně (transkutánně).
Claims (5)
1. Univerzální vakcína k léčbě a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití, vyznačující se tím, že je vytvořená na bázi celobuněčných bakterinů nebo bakteriálních lyzátů nebo purifikátů tří nejpatogennějších genomospecies borrelií - BorTelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii a Borrelia garinii, a případně dalších, přičemž každá
30 z použitých genomospecies borrelií obsahuje současně oba imunogenní protektivní proteiny vnější membrány OspA a OspC, popřípadě obsahuje i další imunogenní protektivní proteiny vnější membrány.
2. Univerzální vakcína podle nároku 1, vyznačující se tím, že imunogenní protekti35 vní proteiny vnější membrány OspA a OspC jsou ve vakcíně obsaženy s výhodou v poměru 1:1.
3. Univerzální vakcína podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že je vytvořena v lyofilizované či tekuté formě, je aplikována v pufrovaném fyziologickém roztoku nebo s minerálním či olejovým imunitním adjuvans, případně dalšími imunomodulátory.
4. Univerzální vakcína podle některého z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že její pH se pohybuje v rozmezí hodnot 4 až 9.
13CZ 301244 B6
5. Způsob výroby univerzální vakcíny k léčbě a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití podle nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že každý z výrobních kmenů borrelií se kultivuje, kontroluje, inaktivuje a testuje až do stavu smísení samostatně, přičemž pří kultivací kmenů za účelem exprese antigenu OspA probíhá pomnožování a produkce
5 kultury při teplotě 26 až 35 °C s dobou 6 až 18 dnů u každého kroku a při kultivaci kmenů za účelem exprese antigenu OspC probíhá pomnožování a produkce kultury při teplotě 36 až 38 °C s dobou 6 až 18 dnů u každého kroku.
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20070791A CZ301244B6 (cs) | 2007-11-14 | 2007-11-14 | Univerzální vakcína k lécbe a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití a zpusob její výroby |
| EP08850812A EP2219670A2 (en) | 2007-11-14 | 2008-10-21 | Universal vaccine for the treatment and prophylaxis of lyme disease for human and veterinary use and method of its manufacture |
| PCT/CZ2008/000130 WO2009062454A2 (en) | 2007-11-14 | 2008-10-21 | Universal vaccine for the treatment and prophylaxis of lyme disease for human and veterinary use and method of its manufacture |
| UAA201007218A UA102081C2 (ru) | 2007-11-14 | 2008-10-21 | Универсальная вакцина для лечения и профилактики болезни лайма для применения в ветеринарии и способ ее производства |
| RU2010123897/15A RU2472525C2 (ru) | 2007-11-14 | 2008-10-21 | Универсальная вакцина для лечения и профилактики болезни лайма для применения у людей и в ветеринарии и способ ее производства |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20070791A CZ301244B6 (cs) | 2007-11-14 | 2007-11-14 | Univerzální vakcína k lécbe a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití a zpusob její výroby |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2007791A3 CZ2007791A3 (cs) | 2009-05-27 |
| CZ301244B6 true CZ301244B6 (cs) | 2009-12-16 |
Family
ID=40600158
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20070791A CZ301244B6 (cs) | 2007-11-14 | 2007-11-14 | Univerzální vakcína k lécbe a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití a zpusob její výroby |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP2219670A2 (cs) |
| CZ (1) | CZ301244B6 (cs) |
| RU (1) | RU2472525C2 (cs) |
| UA (1) | UA102081C2 (cs) |
| WO (1) | WO2009062454A2 (cs) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ301548B6 (cs) * | 2008-08-20 | 2010-04-14 | Bittner@Libor | Univerzální preparát ke zvýšení obranyschopnosti, prevenci, profylaxi a lécbe Lymeské boreliózy pro humánní a veterinární použití, zpusob jeho výroby a použití |
| WO2014065679A1 (en) | 2012-10-22 | 2014-05-01 | Instytut Chemiii Bioorganicznej Pan | Lyme disease vaccine |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ301244B6 (cs) * | 2007-11-14 | 2009-12-16 | Bioveta, A.S. | Univerzální vakcína k lécbe a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití a zpusob její výroby |
| RU2407787C1 (ru) * | 2009-08-13 | 2010-12-27 | Федеральное государственное учреждение науки "Омский научно-исследовательский институт природноочаговых инфекций" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Штамм боррелий генотипа borrelia garinii nt 29, используемый для идентификации боррелий и приготовления диагностических препаратов |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994025596A2 (en) * | 1993-04-29 | 1994-11-10 | Immuno Aktiengesellschaft | IMMUNOGENIC FORMULATION OF OspC ANTIGEN VACCINES FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF LYME DISEASE AND RECOMBINANT METHODS FOR THE PREPARATION OF SUCH ANTIGENS |
| WO1995027504A1 (en) * | 1994-04-11 | 1995-10-19 | Solvay Animal Health, Inc. | Borrelia burgdorferi bacterin |
| WO1997047197A1 (en) * | 1996-06-14 | 1997-12-18 | Pasteur Merieux Serums Et Vaccins | Compositions and methods for administering borrelia dna |
| US7179448B2 (en) * | 1993-11-01 | 2007-02-20 | Research Foundation Of The State Of New York | Recombinant constructs of Borrelia burgdorferi |
| WO2009062454A2 (en) * | 2007-11-14 | 2009-05-22 | Bioveta, A.S. | Universal vaccine for the treatment and prophylaxis of lyme disease for human and veterinary use and method of its manufacture |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6872550B1 (en) * | 1991-07-11 | 2005-03-29 | Baxter Vaccine Ag | Immunogenic formulation of OspC antigen vaccines for the prevention and treatment of lyme disease and recombinant methods for the preparation of such antigens |
| RU2102081C1 (ru) * | 1991-07-11 | 1998-01-20 | Иммуно АГ | Иммуногенная композиция против боррелиоза лайма, способ иммунизации млекопитающего против боррелиоза лайма, способ получения белка pc borrelia burgdorferi, диагностический агент для обнаружения b.burgdorferi и способ обнаружения антител к b.burgdorferi |
| JP5177824B2 (ja) * | 2006-11-03 | 2013-04-10 | シェーリング−プラウ・リミテッド | イヌのライム病のワクチン |
-
2007
- 2007-11-14 CZ CZ20070791A patent/CZ301244B6/cs unknown
-
2008
- 2008-10-21 WO PCT/CZ2008/000130 patent/WO2009062454A2/en not_active Ceased
- 2008-10-21 EP EP08850812A patent/EP2219670A2/en not_active Ceased
- 2008-10-21 UA UAA201007218A patent/UA102081C2/ru unknown
- 2008-10-21 RU RU2010123897/15A patent/RU2472525C2/ru active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994025596A2 (en) * | 1993-04-29 | 1994-11-10 | Immuno Aktiengesellschaft | IMMUNOGENIC FORMULATION OF OspC ANTIGEN VACCINES FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF LYME DISEASE AND RECOMBINANT METHODS FOR THE PREPARATION OF SUCH ANTIGENS |
| US7179448B2 (en) * | 1993-11-01 | 2007-02-20 | Research Foundation Of The State Of New York | Recombinant constructs of Borrelia burgdorferi |
| WO1995027504A1 (en) * | 1994-04-11 | 1995-10-19 | Solvay Animal Health, Inc. | Borrelia burgdorferi bacterin |
| WO1997047197A1 (en) * | 1996-06-14 | 1997-12-18 | Pasteur Merieux Serums Et Vaccins | Compositions and methods for administering borrelia dna |
| WO2009062454A2 (en) * | 2007-11-14 | 2009-05-22 | Bioveta, A.S. | Universal vaccine for the treatment and prophylaxis of lyme disease for human and veterinary use and method of its manufacture |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| Gern a kol. (1997) Vaccine 15 (14), 1551-1557 * |
| Probert a LeFebvre (1994) Infect. Immun. 62 (5), 1920-1926 * |
| Schwan a kol. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 2909-2913 * |
| Sigal a kol. (1998) N. Engl. J. Med. 339, 216-22 * |
| Tuhackova a kol. (2005) Biomed. Pap. 149 (2), 297-302, viz abstrakt * |
| Wilske a kol. (1996) Med. Microbiol. Immunol. 184, 195-201 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ301548B6 (cs) * | 2008-08-20 | 2010-04-14 | Bittner@Libor | Univerzální preparát ke zvýšení obranyschopnosti, prevenci, profylaxi a lécbe Lymeské boreliózy pro humánní a veterinární použití, zpusob jeho výroby a použití |
| WO2014065679A1 (en) | 2012-10-22 | 2014-05-01 | Instytut Chemiii Bioorganicznej Pan | Lyme disease vaccine |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2007791A3 (cs) | 2009-05-27 |
| RU2472525C2 (ru) | 2013-01-20 |
| WO2009062454A3 (en) | 2009-07-16 |
| RU2010123897A (ru) | 2011-12-20 |
| WO2009062454A2 (en) | 2009-05-22 |
| UA102081C2 (ru) | 2013-06-10 |
| EP2219670A2 (en) | 2010-08-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US12195501B2 (en) | Mutant fragments of OspA and methods and uses relating thereto | |
| US20230322869A1 (en) | Mutant fragments of ospa and methods and uses relating thereto | |
| JP4301415B2 (ja) | ライム病組み合せ組成物とその使用 | |
| US20250101069A1 (en) | Multivalent ospa polypeptides and methods and uses relating thereto | |
| Brown et al. | Multicomponent Lyme vaccine: three is not a crowd | |
| Fikrig et al. | Evasion of protective immunity by Borrelia burgdorferi by truncation of outer surface protein B. | |
| JP6073594B2 (ja) | イヌのライム病のワクチン | |
| CZ301244B6 (cs) | Univerzální vakcína k lécbe a prevenci Lymeské borreliózy pro humánní a veterinární použití a zpusob její výroby | |
| Telford III et al. | Efficacy of human Lyme disease vaccine formulations in a mouse model | |
| KR20130125771A (ko) | 다가 키메라 ospc 백시노겐 및 진단 항원 | |
| Tunheim et al. | Preclinical immunogenicity and functional activity studies of an A+ W meningococcal outer membrane vesicle (OMV) vaccine and comparisons with existing meningococcal conjugate-and polysaccharide vaccines | |
| Krajacich et al. | Vaccination with the variable tick protein of the relapsing fever spirochete Borrelia hermsii protects mice from infection by tick-bite | |
| CZ301548B6 (cs) | Univerzální preparát ke zvýšení obranyschopnosti, prevenci, profylaxi a lécbe Lymeské boreliózy pro humánní a veterinární použití, zpusob jeho výroby a použití | |
| US7094391B1 (en) | Compositions and methods for administering Borrelia burgdorferi antigens | |
| Simon et al. | Spirochetes: vaccines, animal models and diagnostics | |
| Krupka et al. | Prevention of lyme disease: promising research or sisyphean task? | |
| CZ18920U1 (cs) | Univerzální preparát ke zvýšení obranyschopnosti, prevenci, profylaxi a léčbě Uymeské boreliózy pro humánní a veterinární použití | |
| Nepereny et al. | Antibody response of dogs after immunisation with chimeric vaccine against borreliosis | |
| Marconi | Lyme disease: optimizing prevention through vaccination. | |
| MXPA99008146A (en) | Lyme combination compositions and uses |