CZ291165B6 - Způsob stereoselektivní glykosylace - Google Patents
Způsob stereoselektivní glykosylace Download PDFInfo
- Publication number
- CZ291165B6 CZ291165B6 CZ19931233A CZ123393A CZ291165B6 CZ 291165 B6 CZ291165 B6 CZ 291165B6 CZ 19931233 A CZ19931233 A CZ 19931233A CZ 123393 A CZ123393 A CZ 123393A CZ 291165 B6 CZ291165 B6 CZ 291165B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- group
- alkyl
- deoxy
- alkoxy
- difluoro
- Prior art date
Links
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Zp sob stereoselektivn glykosylace pro p° pravu .beta. anomerem obohacen² fluornukleosid cestou S.sub.N.n.2 p°esunu anomern sulfonyloxyskupiny .alfa.-anomerem obohacen ho fluorsacharidu s nukleob z .\
Description
Způsob stereoselektivní glykosylace
Oblast techniky
Tento vynález se týká způsobu stereoselektivní glykosylace pro přípravu β-anomerem obohaceného nukleotidu.
Dosavadní stav techniky
Trvající zájem o syntézu 2'-deoxyfluomukleosidů a jejich analogů je přisuzován jejich úspěšnému použití jakož terapeutických prostředků pro ošetřování virových a rakovinových onemocnění. Sloučeninou zvláštního významu je gemcitabin, viz EP 211 354 a US 4 526 988. Protože tyto sloučeniny jsou β-nukleotidy, je potřeba připravovat takové sloučeniny ve vysokých výtěžcích.
Kritickým krokem v syntéze 2'-deoxyfluomukleosidů je kondenzace neboli glykosylace nukleobáze a sacharidu za vzniku N-glykosidové vazby. Avšak způsoby pro syntézu 2'-deoxyfluornukleosidů jsou obvykle nestereoselektivní a vedou ke vzniku směsí a a β nukleosidů. Například US 4 526 988 neumožňuje stereselektivní produkci 2-deoxy-2,2-difluor-p-nukleosidů, ale místo toho se produkuje a k β anomemí poměr 4:1 2-deoxy-2,2-difluomukleosidu. Rovněž optimalizace chránících skupin nezvyšuje poměr a k β za 1:1, jak uvádí US 4 965 374, podle kterého se používá benzoylových chránících skupin na sacharidu.
Podstata vynálezu
Předmětem tohoto vynálezu proto je způsob stereoselektivní glykosylace pro přípravu β anomerem obohaceného nukleosidu obecného vzorce I
(D, ve kterém
T znamená atom vodíku nebo fluoru a
R znamená zbytek nukleobáze ze souboru zahrnujícího
-1 CZ 291165 B6
-2CZ 291165 B6 kde
Ri znamená atom vodíku, Ci-C7 alkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň jednou vybranou ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, toluoylovou skupinu, nitroskupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, C]-C7 alkylovou skupinu a di(C 1-C7 alkyl)aminoskupinu; nebo znamená atom halogenu;
R? znamená hydroxyskupinu, atom halogenu, azidoskupinu, C]-C7 alkylaminoskupinu nebo di(Cj-C7 alkyl aminoskupinu;
R3 znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
Rt, R5 a Ré, znamenají na sobě nezávisle atom vodíku, hydroxyskupinu, aminoskupinu nebo skupinu N(Ci-C7 alkyl)W, kde W znamená skupinu chránící aminoskupinu; atom halogenu, C1-C7 alkoxyskupinu nebo thio(Ci-C7)alkylovou skupinu;
R7 znamená atom vodíku, atom halogenu, kyanoskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, (Cj-C7 alkoxyjkarbonylovou skupinu, thio(Ci~C7 alkyl)ovou skupinu, thiokarboxamidoskupinu nebo karboxamidoskupinu;
Q znamená skupinu CH, CRg nebo atom dusíku, kde R8 znamená atom halogenu, karboxamidoskupinu, thiokarboxamidoskupinu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu nebo kyanoskupinu, jehož podstata spočívá v tom, že se provádí SN2 nukleofilní přesun sulfonyloxyskupiny symbolu Y z a anomerem obohaceného sacharidu obecného vzorce II
(Π), ve kterém
X znamená na sobě nezávisle skupinu chránící hydroxyskupinu a
T má shora uvedený význam, tak, že se na a anomerem obohacený sacharid obecného vzorce II, popřípadě ve vhodném rozpouštědle, působí alespoň jedním molámím ekvivalentem nukleobáze R“ zvolené ze souboru zahrnujícího
-3CZ 291165 B6
-4CZ 291165 B6
OZ
NHW OZ
ve kterýchžto vzorcích
Ri až R7 a Q mají shora uvedený význam;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu;
W znamená skupinu chránící aminoskupinu; a
M+ znamená kation alkalického kovu;
načež se chránící skupiny odstraní.
-5CZ 291165 B6
Výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá vtom, že se nukleobáze R“ zvolí ze souboru zahrnujícího
ve kterýchžto vzorcích
Rt znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň jednou skupinou zvolenou ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, toluoylovou skupinu, nitroskupinu, C]-C7 alkoxyskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu a di(Ci-C7 alkyl)aminoskupinu;
R3 znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu;
W znamená skupinu chránící aminoskupinu; a
-6CZ 291165 B6
Y znamená C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, substituovanou C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, substituovanou arylsulfonyloxyskupinu, kde substituující částí je alespoň jeden atom halogenu nebo nitroskupina;
přičemž reakce se provádí v roztoku o koncentraci sacharidu nad 20 % hmotnostních na jednotku objemu rozpouštědla a ve vysokovroucím inertním rozpouštědle.
Podle jiného výhodného provedení tohoto vynálezu se nukleobáze R“ zvolí ze souboru zahrnujícího
v kterýchžto vzorcích
Ri znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň jednou skupinou zvolenou ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, toluoylovou skupinu, nitroskupinu, Ci-C7 alkoxyskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu a di(C1-C7)alkylaminoskupinu; nebo znamená atom halogenu;
R2 znamená hydroxyskupinu, atom halogenu, azidoskupinu, C1-C7 alkylaminoskupinu nebo di(Ci-C7 alkyl)aminoskupinu;
R3 znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu;
W znamená skupinu chránící aminoskupinu; a
Y znamená trifluormethansulfonyloxyskupinu, trifluorethansulfonyloxyskupinu, oktalfuorbutansulfonyloxyskupinu nebo nonafluorbutansulfonyloxyskupinu;
přičemž se reakce provádí při teplotě od -120 do 25 °C a v inertním rozpouštědle s nízkou teplotou tání.
Podle ještě dalšího výhodného provedení tohoto vynálezu se nukleobáze R“ zvolí ze souboru zahrnujícího
OZ
v kterýchžto vzorcích
Ri znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň jednou zvolenou ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, toluoylovou skupinu, nitroskupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu a di(Ci-C7 alkyl)aminoskupinu;
R3 znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu,
W znamená skupinu chránící aminoskupinu; a
-8CZ 291165 B6
Y znamená C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, substituovanou C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, substituovanou arylsulfonyloxyskupinu, kde substituující částí je alespoň jeden atom halogenu nebo nitroskupina;
přičemž reakce se provádí v přítomnosti katalyzátoru. Přitom je účelné, pokud se katalyzátor zvolí ze souboru zahrnujícího vysoce ionizované soli, které jsou rozpustné vreakčním rozpouštědle a obsahují nenukleofilní anion. Při popsaném způsobu i jeho účelném provedení je výhodné, pokud rozpouštědlem je polární nenukleofilní rozpouštědlo.
Výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá vtom, že se nukleobáze R“ zvolí ze souboru zahrnujícího
v kterýchžto vzorcích
R2 znamená hydroxyskupinu, atom halogenu, azidoskupinu, C]-C7 alkylaminoskupinu nebo di(Ci—C7 alkyljaminoskupinu;
R3 znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
R4, R5 a R« znamenají na sobě nezávisle atom vodíku, hydroxyskupinu, aminoskupinu, skupinu vzorce N(Ci-C7 alkyl)W, kde W znamená skupinu chránící aminoskupinu; nebo znamená atom halogenu, Ci-C7alkoxyskupinu nebo thio(C]-C7alkyl)ovou skupinu;
R7 znamená atom vodíku, atom halogenu, kyanoskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, C]-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, thio(C]-C7 alkyl)ovou skupinu, thiokarboxamidoskupinu nebo karboxamidoskupinu;
-9CZ 291165 B6
Q znamená skupinu CH, CRS nebo atom dusíku, kde Rj znamená atom halogenu, karboxamidoskupinu, thiokarboxamidoskupinu, (C]-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu nebo kyanoskupinu;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu;
W znamená skupinu chránící aminoskupinu;
M+ znamená kation alkalického kovu; a
Y znamená trifluormethansulfonyloxyskupinu, trifluorethansulfonyloxyskupinu, oktafluorbutansulfonyloxyskupinu nebo nonafluorbutansulfonyloxyskupinu;
přičemž se reakce provádí v inertním rozpouštědle s nízkou teplotou tání.
Podle jiného výhodného provedení tohoto vynálezu se nukleobáze R“ zvolí ze souboru zahrnujícího
OZ
- 10CZ 291165 B6 v kterýchžto vzorcích
Ri znamená atom vodíku, C]-C7 alkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň jednou skupinou zvolenou ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, toluoylovou skupinu nitroskupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu a di(C]-C7 alkyl)aminoskupinu; nebo znamená atom halogenu;
R3 znamená atom vodíku, C]-C7alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu;
W znamená skupinu chránící aminoskupinu; a
Y znamená C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, substituovanou C]-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, substituovanou arylsulfonyloxyskupinu, kde substituující částí je alespoň jeden atom halogenu nebo nitroskupina;
přičemž reakce se provádí v nepřítomnosti rozpouštědla. Účelně se přitom reakce provádí při teplotě od 100 do 160 °C.
Podle dalšího výhodného provedení tohoto vynálezu se nukleobáze R“ zvolí ze souboru zahrnujícího
-11 CZ 291165 B6
- 12CZ 291165 B6 v kterýchžto vzorcích
Rj znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň jednou skupinou zvolenou ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, toluoylovou skupinu, nitroskupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu a di(Ci~C7 alkyl)aminoskupinu; nebo znamená atom halogenu;
R2 znamená hydroxyskupinu, atom halogenu, azidoskupinu, C|-C7 alkylaminoskupinu nebo di(Ci~C7 alkyl)aminoskupinu;
R3 znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
R4, R5 a Ré znamenají na sobě nezávisle atom vodíku, hydroxyskupinu, aminoskupinu, skupinu vzorce N(Ci~C7 alkyl)W, kde W znamená skupinu chránící aminoskupinu;
nebo znamená atom halogenu, C1-C7 alkoxyskupinu nebo thio(C]-C7 alkyl)ovou skupinu;
R7 znamená atom vodíku, atom halogenu, kyanoskupinu, C|-C7 alkylovou skupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, thio(Ci-C7 alkyl)ovou skupinu, thiokarboxamidoskupinu nebo karboxamidoskupinu;
Q znamená skupinu CH, CRg nebo atom dusíku;
kde Rg znamená atom halogenu, karboxamidoskupinu, thiokarboxamidoskupinu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu nebo kyanoskupinu;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu;
W znamená skupinu chránící aminoskupinu;
M+ znamená kation alkalického kovu; a
Y znamená C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, substituovanou C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, substituovanou arylsulfonyloxyskupinu, přičemž substituující částí je alespoň jeden atom halogenu nebo nitroskupina;
a reakce se provádí v nepřítomnosti rozpouštědla.
Podle tohoto vynálezu, jeho výhodných a účelných provedení je zvláště výhodné, pokud se za použití odpovídajících výchozích látek připravuje sloučenina vzorce
HO
-13CZ 291165 B6
Přitom je také zvláště výhodné, pokud chránící skupinou X ve sloučenině obecného vzorce II je benzoylová skupina, methansulfonyloxyskupina nebo trifluomethansulfonyloxyskupina.
Předmětný vynález je dále popsán podrobněji a v širších souvislostech.
Jak již bylo uvedeno, předmětem tohoto vynálezu je způsob stereoselektivní glykosylace pro přípravu β anomerem obohaceného nukleosidu svrchu uvedeného obecného vzorce I, který se provádí Sn2 nukleofílním přesunem sulfonyloxyskupiny symbolu Y z a anomerem obohaceného sacharidu svrchu uvedeného obecného vzorce II, popřípadě ve vhodném rozpouštědle, působí alespoň jedním molámím ekvivalentem nukleobáze R“, načež se chránící skupiny odstraní.
V dále uvedeném popisu jsou sacharidy označovány též starším názvem uhlohydráty. Oba výrazy mají ekvivalentní význam a jsou navzájem zaměnitelné.
Při svrchu uvedených výhodných provedeních předmětného vynálezu se reakce provádí v „inertním rozpouštědle s nízkou teplotou tání“. Tímto výrazem se rozumí inertní rozpouštědlo, které je odolné vůči vymražení při nízké teplotě a které v následujícím popisu může být také označováno jako nízkovroucí inertní rozpouštědlo.
Teploty se zde vždy uvádějí ve °C, všechny podíly a procenta jsou míněny hmotnostně a všechny směsi jsou uváděny v objemových jednotkách, pokud nejí jinak uvedeno. Anomemí směsi jsou charakterizovány jakožto poměr hmotnost/hmotnost nebo procentově.
Výrazem „laktol“ samotným nebo ve směsi se zde vždy míní 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranóza nebo 2-deoxy-2-fluor-D-ribofuranóza. Výrazem „xyleny“ samotným nebo v kombinaci se míní všechny izomery xylenu a jejich směsi. Výrazem „uhlohydrát“ samotným nebo v kombinaci se míní aktivovaný laktol, jehož hydroxyskupina v poloze C-l je nahrazena žádoucí uvolňovanou skupinou. Výrazem „atom halogenu“ samotným nebo v kombinaci se míní atom chloru, jodu, fluoru nebo bromu. Výrazem „alkyl“ samotným nebo v kombinaci se míní alifatická uhlovodíková skupina s přímým, s cyklickým nebo s rozvětveným řetězcem s 1 až 7 atomy uhlíku a s výhodou až se 4 atomy uhlíku, jako je například skupina methylová, ethylová, npropylová, izopropylová, n-butylová, terc.-butylová, n-pentylová, n-hexylová, 3-methylpentylová a podobné skupiny nebo substituovaná uhlovodíková skupina s přímým, s cyklickým nebo s rozvětveným řetězcem, jako je například skupina chlorethylová a 1,2-dichlorethylová skupina. Výrazem „alkoxy“ samotným nebo v kombinaci se míní skupiny obecným nebo v kombinaci se míní karbocyklické nebo heterocyklické skupiny, jako je například skupina fenylová, nafitylová, thienylová a jejich substituované deriváty. Výrazem „thioalkyl“ samotným nebo v kombinaci se míní skupiny obecného vzorce EOOC, kde znamená E alkylovou skupinu nebo arylovou skupinu. Výrazem „aromatický“ samotným nebo v kombinaci se míní benzenovité struktury obsahující (4n+2) delokalizovaných π elektronů. Výrazem „sulfonát“ nebo „sulfonyloxy“ samotným nebo v kombinaci se míní sloučeniny obecného vzorce BSO3, kde znamená B alkylovou, substituovanou alkylovou, arylovou nebo substituovanou arylovou skupinu. Výrazem „substituovaný“ samotným nebo v kombinaci se míní substituce jednou nebo několika skupinami ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, karboalkoxyskupinu, toluoylovou skupinu, nitroskupinu, alkoxyskupinu, alkylovou skupinu a dialkylskupinu.
Výrazem „obohacený anomerem“ samotným nebo v kombinaci se míní anomemí směs, kde poměr specifikovaného anomeru je větší než 1:1a zahrnuje také v podstatě čistý anomer. Výrazem „koncentrovaný“ samotným nebo v kombinaci se míní roztok, kde hmotnost uhlohydrátu, rozpuštěného v rozpouštědle, je větší než hmotnostně 20 % na jednotku objemu rozpouštědla. Například rozpuštění 100 g uhlohydrátu ve 200 ml rozpouštědla by vytvořilo 50% uhlohydrátový roztok. Výrazem „konjugátový aniont“ se míní aniont obecného vzorce BSO3, kde má B shora uvedený význam. Výrazem „anomerizace“ samotným nebo v kombinaci se míní epimerizace v poloze C-l ribofuranosylového derivátu.
- 14CZ 291165 B6
Při způsobu glykosylace podle vynálezu se β anomerem obohacené 2'-deoxy-2',2'-difluornukleosidy a 2'-deoxy-2'-fluomuk!eosidy obecného vzorce I připravují reakcí a anomerem obohaceného uhlohydrátu obecného vzorce II s alespoň jedním molámím ekvivalentem nukleobáze (R“) a odstraněním chránící skupiny ze získaného nukleosidu, jak je dále znázorněno („D“ znamená odstranění chránící skupiny):
kde Y, X, R, a R mají shora uvedený význam. Zdá se, že glykosylační reakce postupuje přes Sn2 přesun. Proto β anomerem obohacené nukleosidové produkty podle vynálezu jsou stereoselektivně odvozeny z reakce nukleobáze s uhlohydrátem obohaceným a anomerem.
Laktolové výchozí látky, vhodné pro použití při přípravě a anomerem obohaceného uhlohydrátu obecného vzorce II pro glykosylační způsob podle vynálezu jsou o sobě známy a snadno se připravují o sobě známými způsoby, běžně pracovníky v oboru používanými. Například se v US 4 526 988 popisuje způsob přípravy 2,2-difluor-2-deoxy-D-rubofuranosových meziproduktů obecného vzorce III
OH (III), kde znamená X skupinu, chránící hydroxyskupinu. Kromě toho Reichman a kol., Carbohydr.
Res., 42, str. 233, 1975 popisuje způsob přípravy 2-deoxy-2-fluor-D-ribofuranosových meziproduktů obecného vzorce IV
(IV), kde znamená X skupinu, chránící hydroxyskupinu. Podle výhodného provedení vynálezu se používá aanomerem obohacených 2,2-difluor-2-deoxy-D-ribofuranoso-3,5-dibenzoátových meziproduktů obecného vzorce III.
-15CZ 291165 B6
Klíčovou charakteristikou způsobu podle vynálezu je objev, že se nový, a anomerem obohacený uhlohydrátový meziprodukt obecného vzorce III nebo IV může nechávat reagovat za podmínek nukleofilního přesunu, které podporují inverzi (například Sn2) za získání β anomerem obohacených nukleosidů obecného vzorce I.
K dosažení účinné reakce mezi nukleobází a a anomerem obohaceným uhlohydrátem obecného vzorce II se musí stereoselektivně vázat vhodná uvolňovaná skupina (Y) na laktol k aktivaci laktolu a ke generaci a anomerem obohaceného uhlohydrátu obecného vzorce II. Volba uvolňované skupiny selektivně závisí na volené nukleobázi a na volených podmínkách glykosylační reakce.
Způsob přípravy a anomerem obohaceného uhlohydrátového meziproduktu obecného vzorce II je popsána například v US 5 401 861 a 5 256 798.
US 5 401 861 popisuje stereoselektivní způsob přípravy a anomerem obohaceného meziproduktu obecného vzorce II, kde znamená T atom fluoru, reakcí laktolu obecného vzorce III s aminovou bází, mající hodnotu pak 8 až 20 v inertním rozpouštědle s nízkou teplotou tuhnutí, nastavením teploty reakční směsi na přibližně -40 °C až přibližně -120 °C a přidáním sulfonačního činidla.
Aminová zásada se s výhodou volí ze souboru zahrnujícího trimethylamin, triethylamin, tributylamin, dibutylamin, diethylmethylamin, dimethylethylamin, benzylmethylamin, N-methylmorfolin, tripropylamin, dipropylethylamin, Ν,Ν-dimethylbenzylamin, diizopropylethylamin, diethylamin, l,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-en a l,5-diazabicyklo[4.3.0]non-5-en. Množství používané zásady je s výhodou přibližně 1 molámí ekvivalent až přibližně 2 molámí ekvivalenty a především přibližně 1,2 molárních ekvivalentů až přibližně 1,5 molámích ekvivalentů.
Reakce se provádí v inertním rozpouštědle o teplotě tuhnutí s výhodou pod -78 °C. Jakožto taková výhodná rozpouštědla se příkladně uvádějí dichlormethan, 1,2-dichlorethan, dichlorfluormethan, aceton, toluen, anisol, chlorbenzen a jejich směsi.
Teplota rozpouštědlové směsi je s výhodou pod přibližně -78 °C. Například se sloučenina obecného vzorce III, kde znamená X benzoylovou skupinu přidává do dichlormethanu a triethylaminu při teplotě místnosti v průběhu 30 minut. Pak se teplota reakční směsi sníží. 19F NMR se snímá za různých teplot a dokládá, že ke vzrůstu a ku β anomemího poměru ionizovaného laktonu dochází při snižující se teplotě:
Teplota (°C)
-3 -23
Poměr α/β
2,0: 1,0 2,3 : 1,0
2.5 : 1,0
3,0 : 1,0
3.6 : 1,0 4,4: 1,0
Ionizovaný laktol se pak strhává v roztoku při nižší teplotě a při vyšším a anomemím poměru přidáním sulfonačního činidla za vzniku aanomerem obohaceného uhlohydrátu obecného vzorce
II. Tak je možno shodnou volbou teploty měnit poměr a ku β uhlohydrátové meziproduktové výchozí látky.
Uvolňovaná skupina (Y) se váže na laktol sulfonací. Sulfonační reakční činidla se s výhodou volí ze souboru zahrnujícího substituované a nesubstituované alkylsulfonační halogenidy, substituované a nesubstituované arylsulfonační halogenidy, anhydridy alkylsulfonové kyseliny aanhydridy arylsulfonové kyseliny, jako jsou například methansulfonylhalogenid, ethansulfonylhalogenid, 2-chlor-l-ethansulfonylhalogenid, p-nitrobenzensulfonylhalogenid, 2,4—di-16CZ 291165 B6 nitrobenzensulfonylhalogenid, brombenzensulfonylhalogenid, dibrombenzensulfonylhalogenid, brombenzensulfonylhalogenid, dibrombenzensulfonylhalogenid, anhydrid benzensulfonové kyseliny, anhydrid p-brombenzensulfonové kyseliny a anhydrid methansulfonové kyseliny a substituované a nesubstituované fluoralkylsulfonační halogenidy, substituované a nesubstituované anhydridy fluoralkylsulfonové kyseliny, substituované a nesubstituované anhydridy fluorarylsulfonové kyseliny, jako jsou například trifluormethansulfonylanhydrid, trifluormethansulfonylhalogenid, 1,1,1 -trifluorethansulfonylhalogenid, 1,1,1 -trifluorethansulfonylanhydrid, halogenid oktaflové kyseliny, anhydrid oktaflové kyseliny, halogenid nanoflové kyseliny, anhydrid oktanové kyseliny, halogenid nanoflové kyseliny, anhydrid nanoflalové kyseliny, halogenid nonaflové kyseliny, anhydrid nanoflalové kyseliny v závislosti na uvolňované skupině. Jakožto nejvýhodnější se uvádí methansulfonylhalogenid. a Anomerem obohacený uhlohydrátový meziprodukt, připravený z ionizovaných laktolů, zvláště uhlohydrát obsahující trifluormethansulfonyloxyskupinu, je nestálý při teplotě místnosti, a proto se s výhodou reakce provádí s nukleobází in šitu. Také v důsledku reaktivity sulfonačních reakčních činidel může být žádoucí provádět glykosylační reakci po dávkách nebo kontinuálně ve velkoprovozním měřítku.
a Anomerem obohacený uhlohydrátový meziprodukt obecného vzorce II, kde znamená T atom vodíku, se může připravovat podobným způsobem stou výjimkou, že se používá laktolu obecného vzorce IV jakožto výchozí látky.
US 5 256 798 popisuje druhý stereoselektivní způsob přípravy a anomerem obohacených uhlohydrátových meziproduktů obecného vzorce II, kde znamená T atom fluoru, zpracováním β anomerního ribofuranosylsulfonátu obecného vzorce V
kde znamená Y sulfonátovou skupinu a X vždy na sobě nezávisle skupinu volenou ze souboru zahrnujícího skupinu chránící hydroxyskupinu, se zdrojem konjugátového aniontu sulfonové kyseliny při zvýšené teplotě a v inertním rozpouštědle.
Konjugátový aniont sulfonové kyseliny může být odvozen od četných zdrojů, známých pracovníkům v oboru. Příkladně se uvádějí:
(a) neutralizace alkylsulfonové nebo arylsulfonové kyseliny, jako je například kyselina 1-methansulfonová, p-methylbenzensulfonová, ethansulfonová, p-toluensulfonová, benzensulfonová, p-brombenzensulfonová a kafrsulfonová kyselina, zásadou alkalického kovu, jako je například hydroxid sodný, hydrid sodný, hydroxid draselný, terc.-butoxid draselný a methoxid sodný;
(b) neutralizace alkylsulfonové nebo arylsulfonové kyseliny, shora specifikované, aminovou zásadou jako je například triethylamin, trimethylamin, Ν,Ν-dimethylbenzylamin nebo N-methylmorfolin nebo aromatickou dusíkatou zásadou, jako je například pyridin. Jakožto příklady konjugátových aniontů kyseliny sulfonové připravené tímto způsobem, se uvádějí triethylamoniummethansulfonát, trimethylamoniummethansulfonát, N,N-dimethylbenzylamoniummethansulfonát, pyridiniummethansulfonát, triethylamonium(p-brombenzen)sulfonát, tetraethylamonium(p-brombenzen)sulfonát, tetraethylamonium(p-toluen)sulfonát, pyridinium(p
-17CZ 291165 B6 toluen)sulfonát a pyridinium-3-nitrobenzensulfonát, přičemž nejvýhodnějším je triethylamoniummethansulfonát; a konečně (c) konjugátový aniont kyseliny sulfonové se může generovat in šitu reakcí 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranózy s anhydridem sulfonové kyseliny jako je například anhydrid benzensulfonové kyseliny, anhydrid p-brombenzensulfonové kyseliny, anhydrid methansulfonové kyseliny, v zásadě, jako je například triethylamin. Jakožto takové reakční produkty se příkladně uvádějí 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-di-0-benzoyl-l-methansulfonát a triethylamoniummethansulfonát.
β Anomemí ribofuranosylsulfonát a konjugát aniontu sulfonové kyseliny se zahříváním udržují na teplotě přibližně 50 °C až přibližně 130 °C a především na teplotě zpětného toku použité směsi rozpouštědel.
Rozpouštědla, použitá při anomerizačním procesu, musí být inertní za reakčních podmínek. Jakožto výhodná rozpouštědla se uvádějí acetonitril, 1,2-dichlorethan, 1,1,2-trichlorethan, chlorbenzen, brombenzen, dichlormethan, anisol, glyme, diglyme, methylterc.-butylether, tetrahydrofuan, dioxan, ethylacetát, toluen, xyleny, pyridin, N-methylpyrrolidinon, N,N-dimethylformamid, l,3dimethyl-2-imidazolidinon, N,N-<limethylacetamid a jejich směsi. Nejvýhodnějšími rozpouštědly jsou anisol, toluen, glyme, acetonitril a jejich směsi.
Mohou se přidávat činidla ze souboru zahrnujícího korunové ethery („crown ethers”) nebo katalyzátory přenosu fáze ke zvýšení rozpustnosti a nukleofilicity kovových solí, používaných jakožto zdroj konjugátového aniontu kyseliny sulfonové. Výhodné katalyzátory jsou voleny ze souboru zahrnujícího korunové ethery 18-Crown-6, 15-Crown-5 a 12-Crown—4 a tri s[2(2-methoxyethoxy)ethyl]am in.
Způsob se provádí za podmínek okolí a s výhodou v nepřítomnosti vody a je v podstatě ukončen za přibližně 15 minut až přibližně 24 hodin. Získané a anomerem obohacené uhlohydráty obecného vzorce II, se připravují a anomemím poměru přibližně 2,3 : 1 až 3,0 : 1 α : β a Anomerem obohacené meziprodukty obecného vzorce II, kde znamená symbol T atom vodíku, se mohou připravit podobným způsobem, použije se však laktolu obecného vzorce IV jakožto výchozí látky.
Glykosylační reakce zpravidla vyžaduje chránění hydroxyskupin laktolu před jeho použitím k předcházení reakcí hydroxylových skupin s nukleobází nebo rozkladu o sobě známým způsobem. Skupiny, chránící hydroxyskupiny (X), vhodné pro způsob glykosylace podle vynálezu, jsou nezávisle voleny ze souboru známých chránících skupin, používaných v organické chemii. Chemici zpravidla volí chránící skupiny, které se účinně zavádějí na laktol a po ukončení glykosylační reakce se mohou snadno odstranit. Skupiny, chránící hydroxyskupinu, jsou v oboru známy a jsou popsány například v kapitole 3 publikace „Protective groups in Organic Chemistry“ (Chrániči skupiny v organické chemii), McOmie Ed., Plenům Press, New York, 1973 a v kapitole 2 publikace „Protective groups in Organic Synthesis“ (Chrániči skupiny v organické syntéze), green, John J. Wileay and Sons, New York, 1981. Jakožto výhodné skupiny se uvádějí esterytvorné skupiny, jako je například skupina formylová, acetylová, substituovaná acetyová, propionylová, butinylová, pivalamidoskupina, skupina 2-chloracetylová, benzoylová, substituovaná benzoylová, fenoxykarbonylová a metoxyacetylová skupin; karbonátová deriváty vytvářející skupiny, jako je příklad skupina fenoxykarbonylová, ethoxykarbonylová, terc.-butoxykarbonylová, vinyloxykarbonylová, 2,2,2-trichlorethoxykarbonylová a benzyloxykarbonylová skupina; alkylether vytvářející skupiny, jako jsou například benzylová, difenylmethylová, trifenylmethylová, terc.-butylová, methoxymethylová, tetrahydropyranylová, alkylová, tetrahydrothienylová a 2-methoxyethoxymetylová, alkylová, tetrahydrothienylová a 2-methoxyethoxymetylová skupina; a silylether vytvářející skupiny, jako je například skupina trialkylsilylová, trimethylsilylová, izopropyldialkylsilylová, alkyldiizopropylsilylová, triizo
-18CZ 291165 B6 propylsilylová, terc.-butyldimethylsilylová a 1,1,3,3-tetraizopropyldisiloxanylová skupina; karbamáty vytvářející skupiny, jako je například skupina N-fenylkarbamátová a N-imidazoylkarbamátová. Obzvláště výhodnými jsou však skupina benzoyová, monosubstituovaná benzoylová a disubstituovaná benzoylová skupina, skupina acetylová, pivaloylová a trifenylmethylová, skupiny vytvářející ethery a silylethery, zvláště skupina terc.-butyldimethylsilylová, přičemž nej výhodnější je skupina benzoylová.
Pro vázání chránící skupiny na hydroxylovou skupinu 2-deoxy-2,2-difluoruhlohydrátu se používají charakteristické reakční podmínky a závisející na povaze zvolené chránící skupiny. Vhodné reakční podmínky jsou popsány v US 4 526 988.
Při glykosylačním způsobu podle vynálezu se používá alespoň jednoho ekvimolámího množství nukleobáze (R) se zřetelem na množství použitého uhlohydrátu. Je však mnohem výhodnější používat nadbytku nukleobáze, přibližně 1 molámího ekvivalentu až přibližně 30 molámích ekvivalentů, především přibližně 10 molámích ekvivalentů až přibližně 20 molámích ekvivalentů a nejvýhodněji přibližně 15 molámích ekvivalentů až přibližně 20 molámích ekvivalentů.
Nukleobáze („R“), používané podle vynálezu, jsou pracovníkům v oboru dobře známy a není nutno podrobně vysvětlovat způsob jejich přípravy. Aby však byly výhodné pro způsob glykosylace podle vynálezu, mají nukleobáze nebo jejich tautomemí ekvivalenty, které mají aminoskupiny nebo hydroxyskupiny, obsahovat s výhodou chránící skupiny, například primární aminoskupinu chránící skupinu (W) a/nebo hydroxyskupinu chránící skupinu (Z) v závislosti na povaze nukleobáze. Chrániči skupina předchází tomu, aby se hydroxyskupiny nebo aminoskupiny podílely na konkurenčních reakcích pro a anomerem obohacený uhlohydrát. Chránící skupiny jsou vázány na nukleobázi (R“) před její reakci s a anomerem obohaceným uhlohydrátem obecného vzorce a následně se zní uvolňují. Způsob vázání chránící skupiny na nukleobáze je popsán v US 4 526 988:
Výhodné skupiny W, chránící aminoskupinu, pro pyrimidinukleobáze jsou voleny ze souboru zahrnujícího silylether chránící skupiny, jako jsou například skupina trialkylsilylová, terc.-butyldialkylsilylová a terc.-butyldiarylsilylová skupina; karbamátové chránící skupiny, jako například skupina terc.-butoxykarbonylová, benzyloxykarbonylová, 4-methoxybenzyloxykarbonylová a 4-nitrobenzyloxykarbonylová; karboxylické estery vytvářející skupiny, jako je například skupina formylová, acetylová, benzoylová a pivaloyová skupina; ether vytvářející skupiny, jako jsou například skupina methoxymethylová, terc.-butylová, benzylová, tetrahydropyranylová a allylová skupina. Obzvláště výhodnou je trimethylsilylová skupina. Výhodné skupiny (W), chránící aminoskupinu pro purinové nukleobáze, jsou voleny ze souboru zahrnujícího alkylkarbonyly, halogenalkylkarbonyly a arylkarbonyly, jako jsou skupina pivaloylová, trifluoracetylová, naftoylová, formylová a acetylová. Jinými vhodnými skupinami, chránícími aminoskupinu, jsou skupina 2-trialkylsilylethoxymethylová, 4-methoxybenzylová, 3,4-dimethoxybenzylová, terc.-butylová a ftalimidoskupina, skupina tetrahydropyranylová, tetrahydrofuranylová, methoxymethyletherová, methoxythiomethylová, tritylová, terc.-butyldimethylsilylová, terc.-hexyldimethylsilylová, triizopropylsilylová, trichlorethoxykarbonylová a sulfonylové skupiny, jako skupina alkylsulfonylová a arylsulfonylová. Nejvýhodnější chránící skupinou je skupina pivaloylová. Kromě toho, že pivaloylová skupina chrání aminoskupinu, zvyšuje také rozpustnost notoricky nerozpustných purinových nukleobázi a řídí N-glykosidickou kopulaci purinových zásad na 9 regioizomer jakož protilehlý k 7 regioizomeru.
Výhodné skupiny (Z), chránící hydroxylovou skupinu pyrimidinové nukleobáze, jsou voleny ze souboru zahrnujícího silyletherové chránící skupiny, jako skupinu trialkylsilylovou; karbamátové skupiny, jako skupinu terc.-butoxykarbonylovou, benzyloxykarbonylovou, 4-methoxybenzyloxykarbonylovou a 4-nitrobenzyloxykarbonylovou; karboxylické esterové skupiny, jako skupinu formylovou, acetylovou, benzylovou a pivaloylovou. Výhodnou je trimethylsilylová skupina. Výhodné skupiny (Z), chránící hydroxylovou skupinu pyrimidinové nukleobáze, jsou voleny také ze souboru zahrnujícího ether vytvářející skupiny, jako skupinu terc.-butylovou, tritylovou,
-19CZ 291165 B6 tetra-hydropyranylovou, tetrahydrofuranylovou a methoxymethylovou skupinu, estery vytvářející skupiny, jako je například skupina formylová, acetylpropionylová, pivaloylová skupina, skupina benzoylová a substituovaná benzylová skupina; karbonáty vytvářející skupiny, jako je například karbobenzoxyskupina, skupina terc.-butylkarbonylová, karbethoxyskupina, 5 vinylkarbonylová skupina; karbamáty vytvářející skupiny, jako je například N.N-dialkylkarbamoylová skupina a trialkylsilylethery vytvářející skupiny, jako je například skupina terc.-butyltrimethylsilylová, terc.-hexyldimethylsilylová, triizopropylsilylová, přičemž nej výhodnější skupinou je pivaloylová skupina.
Chránící skupiny nukleobází mohou být samy při způsobu podle vynálezu chráněny. Například N-acetylcytosin může být chráněn skupinou trimethylsilylovou ve formě bis-trimethylsilyl-Nacetylcytosinu.
Kromě toho je často výhodné provádět všechny keto kyslíkové atomy na nukleobázi na enolovou 15 formu. Tím se stávají nukleobáze aromatičtějšími a podporuje se reaktivita nukleobáze s a anomerem obohaceným uhlohydrátem obecného vzorce II. Je nejvýhodnější enolizovat keto kyslíkové atomy a chránit je silylovými skupinami.
Jakkoliv to není rozhodujícího významu, je vhodné, aby se reakce mezi a anomerem 20 obohaceným uhlohydrátem obecného vzorce II a nukleobází prováděla v suchém prostředí, například v suchém vzduchu, v suchém dusíku nebo v suchém argonu. Je to proto, že některé deriváty nukleobází například silylované deriváty nukleobází, jsou citlivé na vlhkost.
Jakékoliv rozpouštědlo použité pro přípravu nukleobáze, se může odstraňovat před glykosylační 25 reakcí nebo se může mísit s reakčním rozpouštědlem za podmínky, že směs je inertní ke glykosylační reakci.
V případě, že se glykosylační reakce provádí v reakčním rozpouštědle, musí být rozpouštědlo inertní ke glykosylační reakci. Jak však shora uvedeno, závisí volba reakčního rozpouštědla na 30 podmínkách glykosylační reakce (jako jsou například reakční teplota, použité rozpouštědlo), na uvolňované skupině a na použité nukleobázi.
Glykosylační reakce se může provádět za teploty přibližně 170 až přibližně -120 °C za podmínek okolí a zpravidla je v podstatě ukončena za přibližně 5 minut až přibližně 20 hodin.
Postup reakce se může sledovat o sobě známými způsoby pracovníkům v oboru, jako jsou vysokotlaká kapalinová chromatografie (HPLC) nebo chromatografie v tenké vrstvě (TLC), kterých se může používat pro zjišťování nukleosidového produktu.
Pokud se reakce provádí v roztoku, je výhodné, aby se používalo vysokovroucího inertního rozpouštědla a aby koncentrace uhlohydrátu v roztoku byla alespoň 20 %. Koncentrace uhlohydrátu je s výhodou přibližně 20% až přibližně 70%, výhodněji přibližně 30% až přibližně 70 % a nejvýhodněji přibližně 30 % až přibližně 50 %. Výhodnou je reakční teplota přibližně 70 až 170 °C.
Vysokovroucí rozpouštědlo má s výhodou teplotu varu nad přibližně 70 °C a je voleno ze souboru zahrnujícího nenukleofilní, aromatická, halogenalkylová, alkoxyskupinou a atomem halogenu substituovaná aromatická rozpouštědla a jejich směsi. Jakožto výhodná rozpouštědla se uvádějí 1,2-dichlorethan, 1,1,2-trichlorethan, glym, diglym, toluen, xyleny, anisol, dichlorbrom50 methan, chlorbenzen, dibromchlormethan, tribrommethan, dibrommethan, acetonitril, propionitril, dioxan a jejich směsi. Zvlášť výhodným rozpouštědlem je anisol.
a Anomerem obohacený uhlohydrát obecného vzorce II, používaný s vysoko vroucím rozpouštědlem obsahuje sulfonyloxyskupinu, volenou ze souboru zahrnujícího alkylsulfonyloxyskupinu, 55 arylsulfonyloxyskupinu, substituovanou alkylsulfonyloxyskupinu a substituovanou arylsulfonyl
-20CZ 291165 B6 oxyskupinu, jako jsou například methansulfonyloxyskupina, 2-chlor-l-ethansulfonyloxyskupina, toluensulfonyloxyskupina, p-nitrobenzensulfonyloxyskupina a p-brombenzensulfonyloxyskupina.
Nukleobáze (R“), výhodné pro použití s vysokovroucím rozpouštědlem jsou voleny ze souboru zahrnujícího
kde Ri, R3, Z a W mají shora uvedený význam.
Jestliže a anomerem obohacený uhlohydrát obecného vzorce II obsahuje fluorsulfonyloxyskupinu, je nestálý při teplotě nad teplotou místnosti. Proto se glykosylační reakce, používají těchto sulfonyloxyskupin, musí provádět za teploty nebo pod teplotou místnosti. Jestliže se glykosylační reakce provádí za těchto podmínek, musí mít rozpouštědlo nízkou teplotu tání. Výhodné jsou reakční teploty přibližně 25 až přibližně -120 °C. V takovém případě jsou výhodná rozpouštědla volena ze souboru zahrnujícího dichlormethan, 1,2-dichlorethan, dichlorfluormethan, aceton, toluen, anisol, chlorbenzen a jejich směsi. Výhodnějším rozpouštědlem je dichlormethan. Optimální glykosylační reakční teplota při nízkoteplotní reakci závisí na uvolňované skupině (Y). Například jestliže je uvolňovanou skupinou trifluormethansulfonyloxyskupina, je výhodnou reakční teplota přibližně -50 až přibližně +25 °C, přičemž ještě výhodnější je teplota přibližně -20 až přibližně +25 °C. Jestliže je však uvolňovanou skupinou 1,1,1trifluorethansulfonyloxyskupina, oktalfluorbutansulfonyloxyskupina, nebo nonafluorbutan
-21 CZ 291165 B6 sulfonyloxyskupina, je výhodnou reakční teplotou přibližně -20 až přibližně +25 °C, přičemž ještě výhodnější je teplota přibližně -20 až přibližně +25 °C.
Nukleobáze (R“), výhodné pro použití za nízké teploty, jsou voleny ze souboru zahrnujícího
> ZO
kde Ri, R2, R3 Z a W mají shora uvedený význam.
Nukleobáze (R“) se popřípadě mohou převádět na sůl s kovovým kationtem k podpoře nukleofilní reaktivity s a anomerem obohaceného uhlohydrátu obecného vzorce II (například aniontovou glykosylací). Takové nukleobázové soli s kationtem se připravují vnesením zásady do nukleobáze v rozpouštědle. Zásada se může volit ze souboru zahrnujícího terc.-butoxid sodný, hydrid sodný, methoxid sodný, ethoxid sodný, lithiumhydrid, hydrid draselný, hydroxid draselný, methoxid draselný, ethoxid draselný, a terc.-botoxid draselný, nebo může být zásadou trialkylamin nebo tetraalkylamonium. Vhodné inertní rozpouštědla pro tuto reakci se mohou volit ze souboru zahrnujícího acetonitril, dimethylformamid, dimethylacetamid, l,3-dimethyl-2-imidazolidinon, tetrahydrofuran, sulfolan, N-methylpyrrolidon, dimethylsulfoxid a jejich směsi. Rozpouštědlo se může odstranit před glykosylační reakcí nebo se může smísit s rozpouštědlem, používaným při glykosylační reakci. Vhodnou reakční teplotou je v tomto případě přibližně 23 až přibližně 130 °C.
Nukleobáze (R“) se s výhodou volí ze souboru zahrnujícího
-22CZ 291165 B6
-23CZ 291165 B6 kde Ri až R7, Q, Z. W a M” mají shora uvedený význam.
a Anomerem obohacený uhlohydrát obecného vzorce II obsahuje za těchto podmínek sulfonyloxyskupinu volenou ze souboru zahrnujícího alkylsulfoxyskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, substituovanou alkylsulfonyloxyskupinu a substituovanou arylsulfonyloxyskupinu, fluoralkylsulfonyloxyskupinu a fluorarylsulfonyloxyskupinu, jako jsou například trifluormethansulfonyloxyskupina, 1,1.1 -trifluorethansulfonyloxyskupina, oktafluorbutansulfonyloxyskupina, nonafluorbutansulfonyloxyskupina, methansulfonyloxyskupina, 2-chlor-l-ethansulfonyloxyskupina, toluensulfonyloxyskupina, p-nirobenzensulfonyloxyskupina a p-brombenzensulfonyloxyskupina.
Jak shora uvedeno, mají fluorsulfonyloxyskupiny ve sloučenině obecného vzorce II sklon k nestabilitě za vyšších teplot a shora uvedená reakce s nukleobázovou solí s kovovým kationtem se má provádět za použití rozpouštědla s nízkou teplotou tání, inertního se zřetelem na takové skupiny. Výhodnou reakční teplotou je v tomto případě přibližně 25 až přibližně -120 °C.
Glykosylační reakce se také může provádět v nepřítomnosti rozpouštědla (například tavnou glykosylací). V takovém případě musí být reakční teplota dostatečná k převedení a anomerem obohaceného uhlohydrátového meziproduktu obecného vzorce II a nukleobáze do roztaveného stavu. Výhodnou je reakční teplota přibližně 100 až přibližně 160 °C, přičemž ještě výhodnější je teplota přibližně 110 až přibližně 150 °C a nejvýhodnější je teplota přibližně 130 až přibližně 150 °C.
a Anomerem obohacený uhlohydrát obecného vzorce II za podmínek tavení obsahuje sulfonyloxyskupinu volenou ze souboru zahrnujícího alkylsulfonyloxyskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, substituovanou alkylsulfonyloxyskupinu a substituovanou arylsulfonyloxyskupinu, jako je například methansulfonyloxyskupina, 2-chlor-l-ethansulfonyloxyskupina, toluensulfonyloxyskupina, p-nitrobenzensulfonyloxyskupina a p-brombenzensulfonyloxy skupin.
-24CZ 291165 B6
Nukleobáze (R“), vhodná pro použití za podmínek tavení, se s výhodou volí ze souboru zahrnujícího
kde R|,R3,Za W mají shora uvedený význam.
Způsob podle vynálezu se také může podporovat použitím katalyzátoru. Jestliže se použije katalyzátoru, snižuje se podstatně množství nutné nukleobáze, zvyšuje se stereoselektivita, snižuje se výrobní náklady, zvyšuje se výtěžek, zjednodušuje se oddělení produktu a snižuje se nutná reakční teplota, čímž se umožňuje použít méně tepelně stálých uhlohydrátů. proto je při způsobu podle vynálezu žádoucí používat katalyzátoru, kterým je sůl obsahující nenukleofilní aniont. Jakožto výhodné se uvádějí soli skupiny 1A, skupiny IIA nebo kvartémí amoniové soli. Katalyzátor má být rozpustný v reakčním rozpouštědle a má být vysoce ionizovaný. Výhodnými jsou katalyzátorové soli volené ze souboru zahrnujícího draselné, bamaté, cezné a trialkylamoniové soli kyseliny trifluormethansulfonové, nanofluorbutansulfonové, sírové, chloristé, dusičné atrifluoroctové kyseliny; výhodnější jsou draselné nebo cezné soli kyseliny trifluormethansulfonové. Vhodnou je reakční teplota přibližně 50 až přibližně 100 °C.
Rozpouštědlo se s výhodou volí ze souboru zahrnujícího polární, nenukleofilní rozpouštědla, jako jsou například glym, diglym, anisol, acetonitril, proionitril, dioxa a jejich směsi, přičemž výhodnější rozpouštědlem je acetonitril.
-25CZ 291165 B6 a Anomerem obohacený uhlohydrát obecného vzorce II za podmínek použití katalyzátoru obsahuje s výhodou sulfonyloxyskupinu volenou ze souboru zahrnujícího alkylsulfonyloxyskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, jako je například methansulfonyloxyskupina, 2-chlor-l-ethansulfonyloxyskupina, toluensulfonyloxyskupina, p-nitrobenzensulfonyloxyskupina a p-brom5 benzensulfonyloxyskupina.
Nukleobáze (R“), vhodná pro použití za podmínek použití katalyzátoru, se s výhodou volí ze souboru zahrnujícího
kde Rb R2 R3, Z a W mají shora uvedený význam.
Konečnou fází reakčního sledu je odstranění chránící skupiny, X, Z a/nebo W (například deblokováním) z chráněného nukleosidu obecného vzorce I. Po odstranění chránících skupin se zachová stejný anomemí poměr nukleosidů.
Většina silylových a silylaminochránicích skupin se snadno odštěpí použitím protického rozpouštědla, jako je například voda nebo alkohol. Acylové chránící skupiny, jako je například skupina benzoylová a acylaminochránicí skupiny se odstraní hydrolýzou silnou zásadou při teplotě přibližně 0 až přibližně 100 °C. Silnými nebo mírně silnými zásadami pro tuto reakci jsou 20 zásady, které mají hodnotu pak (při teplotě 25 °C) přibližně 8,5 až přibližně 20,0. Jakožto takové zásady se příkladě uvádějí hydroxidy alkalických kovů, jako jsou hydroxid sodný a hydroxid
-26CZ 291165 B6 draselný; alkoxidy alkalických kovů, jako jsou methoxid sodný a terc.-butoxid draselný; amidy alkalických kovů; aminy, jako jsou například diethylamin, hydroxylamin a amoniak; a jiné běžné zásady, jako je například hydrazin. Pro každou chránící skupinu je zapotřebí alespoň jednoho ekvivalentu zásady.
Acylové chránící skupiny se také mohou odstranit použitím kyselých katalyzátorů, jako jsou kyselina methansulfonová, chlorovodíková, bromovodíková, sírová nebo použitím kyselé ionexové pryskyřice. Je výhodné provádět takovou hydrolýzu při poměrně vysokých teplotách, jako je například teplota zpětného toku směsi, může se však použít i nízkých teplot, jako je například teplota místnosti, když se použije silné kyseliny.
Etherové chránící skupiny se odstraňují o sobě známým způsobem, například použitím ethanthiolu nebo chloridu hlinitého.
Odstranění terc.-butyldimethylsilylové chránící skupiny vyžaduje kyselé podmínky, například styk s plynným chlorovodíkem. Odstraňování chránících skupin se může běžně provádět v alkoholických rozpouštědlech zvláště ve vodném alkanolu, například v methanolu. Reakce odstraňování chránících skupin se však také může provádět v jakémkoliv běžném rozpouštědle, jako jsou například polyoly včetně ethylenglykolu, ethery, jako je například tetrahydrofuran, ketony, jako je aceton a methylethylketon nebo v dimethylsulfoxidu.
Podle výhodného provedení se používá amoniaku k odstranění benzoylové skupiny chránící hydroxylovou skupinu při teplotě přibližně 10 °C. Je však výhodné použití nadbytku zásady při takové reakci, jakkoliv velikost nadbytku není rozhodujícího významu.
Při způsobu podle vynálezu β anomerem obohacené nukleosidy se připravují v anomemím poměru α : β větším než 1 : 1 až přibližně 1:9.
Výsledný β anomerem obohacený nukleosid obecného vzorce I se může extrahovat a/nebo izolovat z reakční směsi způsobem popsaným v US 4 965 374.
Vynález objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s 10 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Připraví se bis-trimethylsilylcytosin smísením 2,44 g cytosinu, 5,15 ml hexamethyldisilazanu a 580 mg síranu amonného s 5 ml xylenů a udržováním této směsi na teplotě zpětného toku 120 °C po dobu jedné hodiny. Přidá se dalších 5 ml hexamethyldisilazanu k vytvoření homogenního roztoku, který se zahříváním udržuje na teplotě zpětného toku po dobu 30 minut. Xyleny a nadbytek hexamethyldisilazanu se odstraní za získání želatinovitého bis-trimethylsilylcytosinu. Rekonstituuje se 5,6 g bis-trimethylsilylcytosinu ve 20 ml xylenů. Xyleny se odstraní a bis-trimethylsilylcytosinu se znova rekonstituuje ve 20 ml xylenů. bis-Trimethylsilylcytosin se odpaří k suchu a rekonstituuje se v 5 ml xylenů. Nechává se reagovat 1 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonátu s roztokem bis-trimethylsilylcytosinu při teplotě 127 °C po dobu 3,5 hodin. Chromatografií HPLC potvrzeno úplné proběhnutí reakce.
K extrakci nukleosidového produktu se reakční směs ochladí na teplotu 60 °C, zředí se 100 ml ethylacetátu a promyje se 200 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Vytvoří se emulze a rozdělí se na
-27CZ 291165 B6 dvě vrstvy. Organická vrstva se promyje postupně 100 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 100 ml nasyceného roztoku chloridu sodného a vysuší se síranem hořečnatým. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC ethylacetátové vrstvy se zjišťuje, že výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu je 50 %. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,2: 1.
Příklad 2
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s 5 ekvivalenty bis-trimethylsilycytosinu.
Do 2,8 g bis-trimethylsilylcytosinu se přidají 3 ml xylenů a roztok se zahříváním udržuje na teplotě 120 °C až do rozpouštění bis-trimethylsilylcytosinu. Zahřeje se 1 g 2-deoxy-2,2-difluorD-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonátu, rozpouštěného ve 2 ml xylenů a nechává se reagovat s bis-trimethylsilylcytosinem při teplotě 130 °C po dobu 16 hodin. Chromatografií HPL potvrzeného úplného proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,1:1.
K extrakci nukleosidového produktu se reakční směs zředí 150 ml ethylacetátu a promyje se 150 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Vytvoří se emulze a rozdělí se na dvě vrstvy. Organická vrstva se promyje postupně 100 ml vody a 100 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a vysuší se síranem hořečnatým. Pro přesnější chromatografickou analýzu HPLC se 1 ml organické vrstvy odpaří k suchu a rekonstituuje se v 1 ml acetonitrilu. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC organické vrstvy v acetonitrilu zjištěno, že výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu je 36 %.
Příklad 3
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onhydrochloridové soli s 15 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Připraví se bis-trimethylsilylcytosin smísením 18,33 g cytosinu a 10 ml anisolu s 64,30 ml N-methyl-N-(trimethylsilyl)-trifluoracetamidu a udržováním roztoku na teplotě 80 °C po dobu 30 minut. Nechává se reagovat 5,0 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-lα-methansulfonátu, rozpouštěného v 10 ml anisolu s bis-trimethylsilylcytosinovým roztokem při teplotě 105 °C po dobu 5 hodin. Chromatografií HPLC potvrzeno úplné proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 5,4 : 1.
K izolaci nukleosidového produktu se reakční směs ochladí na teplotu 60 °C, zředí se 75 ml ethylacetátu a promyje se 200 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Vytvoří se poločirý roztok, obsahující pevné částice. Roztok se zahříváním udržuje na teplotě 60 až 70 °C po dobu 15 minut, zfiltruje se a izolované pevné částice se promyjí postupně 20 ml ethylacetátu a vysuší se ve vakuové pícce při teplotě 40 °C v průběhu 16 hodin. Získají se 4,0 g nukleosidového produktu o teplotě tání 252 až 256 °C. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPL potvrzeno, že produktem je hydrochloridová sůl chráněného β anomemího nukleosidu, jejíž výtěžek je 75 %.
-28CZ 291165 B6
Příklad 4
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2'.2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s 10 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Připraví se bis-trimethylsilylcytosin způsobem podle příkladu 1 s tou výjimkou, že se použije 20,00 g cytosinu, 380 ml hexamethyldisilazanu. 1,18 s síranu amonného a 48 ml xylenů. bis-Trimethylsilylcytosin se rekonstituuje ve 24 ml xylenů. Rozpustí se 9,6 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-toluensulfonátu s poměrem α : β 70 : 30, ve 24 ml cylenů a nechává se reagovat s roztokem bis-trimethylsilylcytosinu po dobu jedné hodiny. Chromatografií HPLC potvrzeno úplné proběhnutí reakce.
K extrakci nukleosidového produktu se reakční směs ochladí na teplotu 65 °C a přidá se 100 ml ethylacetátu. Roztok se udržuje na teplotě 65 °C a promyje se 200 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Vytvoří se emulze a rozdělí se na dvě vrstvy. Organická vrstva se promyje 200 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a vysuší se síranem hořečnatým. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,1 : 1. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC zjištěno, že výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu je 27 %.
Příklad 5
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2'.2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s 20 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Připraví se bis-trimethylsilylcytosin smíšením 30,00 g cytosinu, 175.ml hexamethyldisilazanu, 25,00 mg síranu amonného v prostředí dusíku a udržováním roztoku zahříváním na teplotě 120 °C po dobu dvou hodin. Směs se ochladí na teplotu 80 °C a zředí se 100 ml ethylacetátu. Hexamethyldisilazen a ethylacetát se pak oddestilují za tlaku okolí při teplotě 145 °C. Tento postup se dvakrát opakuje a získaný bis-trimethylsilylcytosin se vnese do 15 ml anisolu a ochladí se na teplotu 110 až 115°C. Míchá se 5,75 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonátu, rozpuštěného v 10 ml anisolu, při teplotě 45 °C tak dlouho, až se vytvoří homogenní roztok a nechává se zreagovat s roztokem bis-trimethylsilylcytosinu při teplotě 115 až 120 °C. V průběhu 7 hodin. Chromatografií HPLC potvrzeno úplného proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 7.3 : 1.
K izolaci nukleosidového produktu se reakční směs ochladí na teplotu 88 °C, zředí se 34 ml ethylacetátu a promyje se 125 ml 4N kyseliny chlorovodíkové. Vytvoří se suspenze obsahující pevné částice a míchá se po dobu jedné a půl hodiny při teplotě 80 °C a vysuší se ve vakuové pícce při teplotě 45 °C. Získá se 4,6 g nukleosidového produktu. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC potvrzeno, že výtěžek je 79,5 %.
Příklad 6
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onhydrochloridové soli s 20 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Připraví se bis-trimethylsilylcytosinu způsobem podle příkladu 5. Roztok se ochladí na teplotu 100 °C. Míchá se 5,75 g 2-deoxy-2,2-difluor-I>-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonátu, rozpuštěného v 10 ml anisolu, při teplotě 45 CC tak dlouho, až se vytvoří homogenní roztok a nechává se zreagovat s roztokem bis-trimethylsilycytosinu při teplotě 110 až 115 °C po dobu 16 hodin. Chromatografií HPLC potvrzeno, že zbývá toliko 3,9 % nezreagovaného
-29CZ 291165 B6
2-deoxy-2,2-difluor-Dribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonátu. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 7,2 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu se reakční směs ochladí a zředí se 69 ml ethylacetátu o teplotě 65 °C. Reakční smě se smísí se 185 ml 4N kyseliny chlorovodíkové. Směs se udržuje na teplotě zpětného toku 78 °C po dobu jedné hodiny za vytvoření suspenze. Suspenze se zfiltruje a pevné podíly se promyjí 60 ml 4N kyseliny chlorovodíkové a vysuší se ve vakuové pícce při teplotě 45 °C. Získá se 3,62 g nukleosidového produktu. Kvantitativní chromatografickou analýzo HPLC potvrzeno, že produktem je hydrochloridová sůl chráněného β anomemího nukleosidu, jejíž výtěžek je 64,2 %.
Příklad 7
Příprava β anomerem obohaceného 9-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-5-aminopurinu s 15 ekvivalenty bistrimethylsilyladeninu
Připraví se bis-trimethylsilyladenin smíšením 7,00 g adeninu a 109 ml hexamethyldisilazanu s 250 mg síranu amonného a udržováním roztoku zahříváním na teplotu 110 až 115 °C po dobu osmi hodin. Roztok se zahříváním udržuje na teplotě zpětného toku po dobu dalších 30 minut a nadbytek hexamethyldisilazanu se následně odstraní a 14,5 g bis-trimethylsilyladeninu se rekonstituuje ve 3 ml anisolu. Nechává se reagovat 1,58 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonátu s bis-trimethylsilyladeninovým roztokem při teplotě 150 až 110°C po dobu 24 hodin. Chromatografií HPLC potvrzeno úplné proběhnutí reakce.
K extrakci nukleosidového produktu se reakční směs ochladí na teplotu 30 °C, zředí se 50 ml ethylacetátu a promyje se 75 ml 4N kyseliny chlorovodíkové. Vytvoří se emulze, organická vrstva se oddělí a promyje se postupně 75 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 75 ml nasyceného roztoku chloridu sodného a vysuší se síranem hořečnatým. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 6 :1.
V následující tabulce se uvádí, jak koncentrace uhlohydrátu a volený uhlohydrát ovlivňují anomemí poměr nukleosidového produktu.
V následující tabulce se ve sloupci I uvádí použité rozpouštědlo, ve sloupci II uhlohydrát, ve sloupci III zásada (R'), ve sloupci IV počet ekvivalentů zásady (R'), ve sloupci V teplota ve °C, ve sloupci VI koncentrace uhlohydrátu v procentech, ve sloupci VII poměr α/β nukleosidu a v posledním sloupci VIII výtěžek.
-30CZ 291165 B6
Tabulka
| I | II | III | IV | V | VI | VII | VIII |
| Xyleny | a-OMs | Cytosin | 1,5 | 127 | 20 | 1,5:1 | 14% β |
| Xyleny | a-OMs | Cytosin | 1,5 | 127 | 50 | 1,5:1 | 15% β |
| Xyleny | a-OMs | Cytosin | 5 | 130 | 20 | 1:1,1 | 36% β |
| Xyleny | a-OMs | Cytosin | 10 | 127 | 50 | 1:2,2 | 50% β |
| Xyleny | a-OMs | Cytosin | 10 | 120 | 20 | 1:1,6 | 32% β |
| Xyleny | 50:50 α/β-OMs | Cytosin | 1,5 | 125 | 50 | 3:1 | 12% β |
| Anisol | a-OMs | Cytosin | 2 | 105 | 20 | 1,3:1 | 18% β |
| Anisol | a-OMs | Cytosin | 3 | 105 | 50 | 1:1,3 | 22% β |
| Anisol | a-OMs | Cytosin | 15 | 105 | 50 | 1.5,4 | 75% β (a) |
| Anisol | a-OMs | 5-F-Cytosin | 10 | 115 | 50 | 1:6 | N/D |
| Anisol | a-OMs | 5-F-Uracil | 5 | 130 | 50 | 1.6 | N/D |
| Xyleny | 70:30 α:β-ΟΤ8 | Cytosin | 3 | 123 | 20 | 1,7:1 | 6% β |
| Xyleny | 70:30 αίβ-OTs | Cytosin | 5 | 125 | 20 | 1,7:1 | N/D |
| Xyleny | 70:30 α:β-ΟΤ5 | Cytosin | 10 | 125 | 20 | 1,1:1 | 27% β |
| Xyleny | 70:30 α:β-ΟΤ8 | Cytosin | 10 | 125 | 20 | 1,3:1 | 23% β |
| Xyleny | 85:15 α:β-ΟΒ8 | N-AcetylCytosin | 5 | 110 | 20 | 1:1 | N/D |
| Anisol | a-OMs | Cytosin | 20 | 115 | 25 | 1:7,3 | 79,5% β (a) |
| Anisol | a-OMs | Adenin | 15 | 110 | 50 | 1:6 | N/D |
| Anisol | a-OMs | Cytosin | 20 | 115 | 25 | 1:7,2 | 64% β |
Výrazem „N/D“ se míní, že odpovídající hodnota nebyla stanovena.
Výrazem uhlohydráty (sloupec II) se míní uhlohydráty s chráněnými hydroxyskupinami a tento výraz zahrnuje α-OMs nebo β-OMs, což je a- nebo |3-2,2-difluor-2-deoxy-D-ribofuranosyl-
3,5-dibenzoyl-l-methansulfonát; β-OTs nebo a-OTs, což je β-nebo a-2,2-difluor-2-deoxyD-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-toluensulfonát; β-OBs nebo a-OBs, což je β-nebo a-2,2difluor-2-deoxy-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-brombenzensulfonát. 70 : 30 a:β-OTs uhlohydráty se získají anomerizací β-OTs se solí p-toluensulfonové kyseliny. Výtěžky jsou založeny na množství uhlohydrátu a vypočtou se z kvantitativní reverzní fázové HPLC chromatografie, přičemž odpovídající pík rozpuštěného produktu se porovnává se standardem, s l-{2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-β-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2oněm s výjimkou (a), což je výtěžek izolovaného produktu. (*) Koncentrací uhlohydrátu (sloupec VI) jsou procentové jednotky uhlohydrátu vyjádřené hmotnostně (g) na jednotku objemu rozpouštědla (ml). Chrániči skupinou nukleobáze v každém případě je trimethylsilylová skupina.
Příklad 8
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s 20 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu.
Do 5,78 g cytosinu se vnese 112 ml hexamethyldisilazanu a 100 mg síranu amonného. Roztok se zahříváním udržuje na teplotě 115 až 120 °C po dobu jedné a půl hodiny za míchání a nadbytek hexamethyldisilazanu se následně odstraní. Směs se ochladí na teplotu 60 °C a rekonstituuje se ve 40 ml 1,2-dichlormethanu za získání homogenního roztoku bis-trimethylsilylcytosinu.
Do 1 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribufuranosyl-3,5-dibenzoátu se přidá 10 ml dichlormethanu a 0,54 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 30 minut, ochladí se na
-31 CZ 291165 B6 teplotu -78 °C a nechává se reagovat s 0,57 ml trifluormethansulfonylanhydridu v 0,50 ml dichlormethanu, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-
3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový meziprodukt v roztoku. Věnuje se pozornost tomu, aby se udržela teplota reakční směsi pod -65 °C. Analýza 1 °F nukleární magnetickou rezonancí (NRM) a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-ltrifluormethansulfonátového meziproduktu při teplotě 65 °C poskytuje následující hodnoty.
°F NMR (300 MHz, CDC13), 6-77 (s, 3F, CF8SO2), -111 (d. J=257 Hz, 1F, a-anomer), -122 (d, J=242 Hz, 1F, β-anomer), -124 (d, J = 257 Hz, 1F, a-anomer), -126 ppm (dd, J=242 Hz, 1F, β-anomer).
Připomíná se, že všechny 1 °F NMR pikové posuny jsou vztaženy na hexafluorbenzen, který je označen frekvencí -162,9 ppm. 19F NMR Spektrum také udává fluor - protonovou kopulaci avšak povaha této kopulace není stanovena.
Nechává se reagovat a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový roztok s bis-trimethylsilylojtosinovým roztokem při teplotě -65 °C a reakční teplota se nechá stoupnout na 23 °C, za získání žádaného chráněného nukleosidu, což se potvrzuje chromatografickou NHPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,9: 1.
K extrakci nukleosidového produktu se do reakční směsi vnese 100 ml dichlormethanu a 200 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Organická vrstva se oddělí a promyje se 20 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se opět oddělí a promyje se 200 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, β Anomerem obohacený 9-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-Obenzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-yl s 20 ekvivalent)· bis-trimethylsilylcytosinu se vysráží z organické vrstvy. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC potvrzen výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu 42 %.
‘H NMR (DMSO): δ 4,74 (4Ή), 4,79 (5Ή), 5,84 (5H). 5,88 (3Ή), 6,44 (1Ή), 7,56 (NH2), 7,68 (6H).
18C NMR (DMSO): δ 63,46 (5'C), 71,80 (3'C), 75,71 (4'C), 84,64 (TC), 95,12 (5C), 121,86 (2'C), 141,93 (6C), 154,48 (2C), 165,87 (4C).
Příklad 9
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyridin-2-onu s 20 ekvivalenty bis-trimethylsilyloytosinu
Připraví se bis-trimethylsilyloytosinový roztok suspendováním 5,78 g cytoxinu v 75 ml dichlormethanu a přidáním 20,57 ml N-methyl-N-trimethylsilyltrifluoracetamidu a ochlazením získaného roztoku na teplotu -30 °C.
Do 1 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se přidá 10 ml dichlormethanu a 0,55 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 30 minut, ochladí se na teplotu -78 °C a nechává se reagovat s 0,57 ml trifluormethansulfonylanhydridu v 1,00 ml dichlormethanu, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-
3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový meziprodukt v roztoku. Věnuje se pozornost tomu, aby se udržela teplota reakční směsi pod -65 °C.
Nechává se reagovat a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový roztok s bis-trimethylsilylcytosinový roztok při teplotě
-32CZ 291165 B6
-30 °C za získání žádaného chráněného nukleosidu, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,3 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu se do reakční směsi vnese 200 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Organická vrstva se oddělí a promyje se 5% roztokem uhličitanu sodného. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC potvrzen výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu 45 %.
Příklad 10
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D~ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s 20 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Připraví se bis-trimethylsilylcytosinový roztok způsobem podle příkladu 8 a ochladí se na teplotu -15 °C.
Do 1 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se přidá 10 ml dichlormethanu a 0,54 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 30 minut, ochladí se na teplotu -78 °C a nechává se reagovat s 0,57 ml triflurmethansulfonylanhydridu v 0,50 ml dichlormethanu, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-
3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový meziprodukt v roztoku. Věnuje se pozornost tomu, aby se udržela teplota reakční směsi pod -65 °C.
Nechává se reagovat a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-triflourmethansulfonátový roztok s bis-trimethylsilylcytosinovým roztokem při teplotě -15 °C za získání žádaného chráněného nukleosidu, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,3 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se dichlormethan odstraní a získaný zbytek se rekonstituuje ve 21 ml anisolu a 40 ml vody a zahřeje se na teplotu 90 °C. Vytvořená pevná látka se z roztoku odstraní. Organická a vodná vrstva se oddělí a organická vrstva se následně promyje přídavnými 10 ml vody. Z organické vrstvy se vysráží β anomerem obohacený nuklesidový produkt. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC potvrzen výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu 58 %.
Příklad 11
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s 20 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Připraví se bis-trimethylsilylcytosinový roztok suspendováním 5,78 g cytosinu v 20 ml dichlormethanu a přidáním 20,57 ml N-methyl-N-trimethylsilyltrifluoracetamidu v 10 ml dichlormethanu a ochlazením získaného roztoku na teplotu 0 °C.
Do 1 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se přidá 10 ml dichlormethanu a 0,55 g triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 30 minut, ochladí se na teplotu -78 °C a nechává se reagovat s 0,57 ml trifluormethansulfonylanhydridu v 1,00 ml dichlormethanu, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-
3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový meziprodukt v roztoku. Věnuje se pozornost tomu, aby se udržela teplota reakční směsi pod -65 °C.
-33CZ 291165 B6
Nechává se reagovat a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový roztok s bis-trimethylsilylcytosinovým roztokem při teplotě 0 °C za získání žádaného chráněného nukleosidu, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,5 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu se do reakční směsi vnese 250 ml 1N kyseliny chlorovodíkové. Organická vrstva se oddělí a promyje se 200 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Kvantitativní chromatografickou analýzo HPLC potvrzen výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu 49 %.
Příklad 12
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-acetamidopyrimidin-2-onu s 10 ekvivalenty bis-trimethylsilyl-N-acetylcytosinu
Do 4 g N-acetylcytosinu se přidá 56 ml hexamethyldisilazanu a 698 mg síranu amonného. Tento roztok se zahříváním udržuje na teplotě 115 až 120 °C po dobu čtyř hodin za míchání a nadbytek hexamethyldisilazanu se následně odstraní. Směs se ochladí na teplotu 50 °C a konstruuje se v 50 ml 1,2-dichlorethanu. Odstraní se 1,2-dichlorethan a získaný pevný zbytek se rekonstituuje v 50 ml 1,2-dichlorethanu. Opět se odstraní 1,2-dichlorethan a získá se olejový zbytek. Olejovitý zbytek se vnese do 2,5 ml 1,2-dichlorethanu, čímž se získá homogenní bis-trimethylsilyl-Nacetylcytosinový roztok.
Do 1 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se přidá 2 ml suchého dichlormethanu. Tento roztok se ochladí na teplotu -78 °C a nechává se reagovat s 0,55 ml triethylaminu a 0,58 ml trifluormethansulfonylanhydridu, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonát v roztoku. Věnuje se pozornost tomu, aby se udržela teplota reakční směsi pod -65 °C.
Nechává se reagovat a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový roztok s bis-trimethylsilyl-N-acetylcytosinovým roztokem při teplotě 23 °C. Reakční směs se míchá při teplotě -60 °C po dobu jeden a půl hodiny za vytvoření žádaného chráněného nukleosidu, což je potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2:1.
Extrakci nulkeosidového produktu se do reakční směsi vnese 50 ml dichlormethanu. Organická vrstva se oddělí a promyje se postupně 50 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 50 ml 1N kyseliny chlorovodíkové a 50 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC potvrzen výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu 15 %.
Příklad 13
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s 20 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Do 5,78 g cytosinu se přidá 112 ml hexamethyldisilazanu a 50 mg síranu amonného. Tento roztok se zahříváním udržuje na teplotě 115 až 120 °C po dobu tří hodin za míchání a nadbytek hexamethylidisilazanu se následně odstraní. Roztok se ochladí na teplotu 27 °C a získaný pevný zbytek se rekonstituuje v 35 ml dichlormethanu, čímž se získá homogenní bis-trimethylsilylcytosinový roztok.
-34CZ 291165 B6
Do lg 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se přidá 10 ml dichlormethanu a 0,54 ml triethylaminu. Tento roztok se ochladí na teplotu -78 °C a nechává se reagovat s 0,57 ml trifluormethansulfonylanhydridu v 0,50 ml dichlormethanu, čímž se získá β anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonát v roztoku. Věnuje se pozornost tomu, aby se udržela teplota reakční směsi pod -65 °C.
Nechává se reagovat a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-diflour-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový roztok s bis-trimethylsilylcytosinovým roztokem při teplotě 27 °C za vytvoření žádaného chráněného nukleosidu, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Chromatografií HPLC také zajištěno, že zbývá toliko 11 % nezreagovaného a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátu. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,2 : 1. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPL potvrzen výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu 54 %.
Příklad 14
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s 20 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Do 5,78 g cytosinu se přidá 112 ml hexamethyldisilazanu a 50 mg síranu amonného. Tento roztok se zahříváním udržuje na teplotě 115 až 120 °C po dobu dvou hodin za míchání a zbytek hexamethyldisilazanu se následně odstraní. Získaný olej se ochladí na teplotu 23 °C a získaný pevný zbytek se rekonstituuje v 35 ml dichlormethanu, čímž se získá homogenní bis-trimethylsilylcytosinový roztok a ochladí se na teplotu 0 °C.
Do 1 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se přidá 9 ml dichlormethanu a 0,54 ml triethylaminu. Tento roztok se ochladí na teplotu -78 °C a nechává se reagovat s 0,57 ml trifluormethansulfonylhydridu v 0,50 ml dichlormethanu, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenoyl-l-trifluormethansulfonát v roztoku. Věnuje se pozornost tomu, aby se udržela teplota reakční směsi pod -65 °C.
Nechává se reagovat a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluromethansulfonátový roztok s bis-trimethylsilylcytosinovým roztokem při teplotě 23 °C za vytvoření žádaného chráněného nukleosidu, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,2 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se reakční směs promyje dvakrát 150 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Organická vrstva se oddělí a promyje se 150 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a znova se promyje 150 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC potvrzen výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu 49 %.
Příklad 15
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu se 30 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Do 5,90 g cytosinu s přidá 112 ml hexamethyldisilazanu a 25 ml síranu amonného. Tento roztok se zahříváním udržuje na teplotě 120 až 125 °C po dobu tří hodin za míchání a nadbytek hexamethyldisilazinu se následně odstraní. Získaný pevný zbytek se rekonstituuje ve 35 ml dichlormethanu, ochladí na teplotu 10 °C, čímž se získá homogenní bis-trimethylsilylcytosinový roztok.
-35CZ 291165 B6
Do 655 mg 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se přidá 0,55 ml dichlormethanu a 0,36 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 30 minut, ochladí se na teplotu -78 °C a nechává se reagovat s 0,35 ml trifluormethansulfonylanhydridu v 0,50 ml dichlormethanu, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonát v roztoku. Věnuje se pozornost tomu, aby se udržela teplota reakční směsi pod -65 °C.
Nechává se reagovat a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový roztok s bis-trimethylsilylcytosinovým roztokem při teplotě 10 °C za vytvoření žádaného chráněného nukleosidu, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β :α chráněného nukleosidu je 2,7 : 1. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC potvrzen výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu 60 %.
Příklad 16
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s 20 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Do 5,78 g cytosinu se přidá 112 ml hexamethyldisilazanu a 50 mg síranu amonného. Tento roztok se zahříváním udržuje na teplotě 115 až 120 °C po dobu jedné a půl hodiny za míchání a nadbytek hexamethyldisilazanu se následně odstraní. Získaný pevný zbytek se rekonstituuje ve 40 ml 1,2-dichlormethanu při teplotě 23 °C, čímž se získá homogenní bis-trimethylsilylcytosinový roztok.
Do 1 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se přidá 10,00 ml dichlormethanu a 1,20 ml triethylaminu. Tento roztok se ochladí na teplotu -78 °C a nechává se reagovat s 0,57 ml trifluormethansulfonylanhydridu v 0,50 ml dichlormethanu, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonát v roztoku. Věnuje se pozornost tomu, aby se udržela teplota reakční směsi pod -65 °C.
Nechává se reagovat a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový roztok s bis-trimethylsilylcytosinovým roztokem při teplotě 23 °C za vytvoření žádaného chráněného nukleosidu, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,8 : 1. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC potvrzen výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu 50 %.
Příklad 17
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s 20 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Do 5,78 g cytosinu se přidá 112 ml hexamethyldisilazanu a 50 mg síranu amonného. Tento roztok se zahříváním udržuje na teplotě 115 °C až 120 °C po dobu jedné a půl hodiny za míchání a nadbytek hexamethyldisilazanu se následně odstraní. Získaný pevný zbytek se rekonstituuje ve 40 ml dichlormethanu při teplotě 23 °C, čímž se získá homogenní bis-trimethylsilylcytosinový roztok.
Do 1 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se přidá 10,00 ml dichlormethanu a 0,54 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 30 minut a ochladí se
-36CZ 291165 B6 na teplotu -78 °C a nechává se reagovat s 0,57 ml trifluormethansulfonylanhydridu v 0,50 ml dichlormethanu, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofiiranosyl-
3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonát v roztoku. Věnuje se pozornost tomu, aby se udržela teplota reakční směsi pod -65 °C.
Nechává se reagovat a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový roztok s bis-trimethylsilylcytosinovým roztokem při teplotě 23 °C za vytvoření žádaného chráněného nukleosidu, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,5 : 1. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC potvrzen výtěžek chráněného β anomemího nukleosidu 68 %.
Příklad 18
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)—4-aminopyrimidin-2-onu s 20 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Do 5,78 g cytosinu se přidá 5 ml dichlormethanu, 20,6 ml N-methyl-N-trimethyldisiltrifluoracetamidu a 5 ml dichlormethanu, čímž se získá homogenní bis-trimethylsilylcytosinový roztok.
Do 1 g 2 deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoát se přidá 3,00 ml dichlormethanu a 0,55 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 30 minut a ochladí se na teplotu -78 °C a nechává se reagovat s 0,57 ml trifluormethansulfonylanhydridu v 1,00 ml dichlormethanu, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-
3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonát v roztoku. Věnuje se pozornost tomu, aby se udržela teplota reakční směsi pod -65 °C.
Nechává se reagovat a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátový roztok s bis-trimethylsilylcytosinovým roztokem při teplotě 23 °C za vytvoření žádaného chráněného nukleosidu, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,5 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se do reakční směsi přidá 250 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Organická vrstva se oddělí a promyje se 250 ml 5% roztoku uhličitanu sodného. Kvantitativní chromatografickou analýzou HPLC organické vrstvy potvrzen 50% výtěžek chráněného β anomemího glukosidu.
Následující tabulka dokládá vliv rozpouštědla a počtu molámích ekvivalentů derivátů pyrimidinového nukleosidu na anomemí poměr a výtěžek nukleosidového produktu.
V následující tabulce se ve sloupci I uvádí použití rozpouštědlo, ve sloupci II zásada (R'), ve sloupci III počet ekvivalentů zásady (R'), ve sloupci IV teplota ve °C, ve sloupci V poměr α/β nukleosidu a v posledním sloupci VI výtěžek β anomeru.
-37CZ 291165 B6
Tabulka
I II III IV V VI
| Dichlormethan | Cytosin | 20 | -25 °C | 1:2,5 | 44% |
| Dichlormethan | Cytosin | 20 | -30 °C | 1:2,3 | 45% |
| Dichlormethan | Cytosin | 20 | 0°C | 1:2,5 | 49% |
| Dichlormethan | Cytosin | 20 | 23 °C | 1:2,2 | 49% |
| Dichlormethan & 1,2 Dichlor- | Cytosin | 20 | 23 | 1:1,8 | 31% |
| ethan | |||||
| Dichlormethan & 1,2 Dichlor- | Cytosin | 20 | 23 °C | 1:1,9 | 42% |
| ethan | |||||
| Dichlormethan & 1,2 Dichlor- | Cytosin | 20 | 23 °C | 1,2,5 | 50% |
| ethan | |||||
| Dichlormethan | Cytosin | 20 | 23 °C | 1:2,5 | 68% |
| Dichlormethan | Cytosin | 20 | -15 °C | 1:2,3 | 58% |
| Dichlormethan | Cytosin | 20 | 27 °C | 1:2,2 | 54% |
| Dichlormethan | Cytosin | 20 | 23 °C | 1:2,2 | 49% |
| Dichlormethan | Cytosin | 30 | 10 °C | 1:2,7 | 60% |
| Dichlormethan | Cytosin | 1,5 | 23 °C | 1:1 | 17% |
| Dichlormethan & 1,2 Dichlor- | Cytosin | 3 | 23 °C | 1:1,3 | 6% |
| ethan | |||||
| Dichlormethan & 1,2 Dichlor- | Cytosin | 2 | -20 °C | 1:1 | N/D |
| ethan | |||||
| Dichlormethan | Cytosin | 3,5 | -78 °C | 1,3:1 | 10% |
| Dichlormethan & 1,2 Dichlor- | N-Acetyl-Cytosin | 10 | -60 °C | 1:2 | 15% |
| ethan | |||||
| 1,2 Dichlorethan | Cytosin | 10 | -78 °C | 1:3 | 28% |
| Dichlormethan | Cytosin | 10 | 0°C | 1:2,5 | 32% |
| Dichlormethan | 5-F-Urecil | 15 | 23 °C | 1:1 | N/D |
Výrazem „N/D“ se míní, že odpovídající hodnota nebyla stanovena. Uhlohydrátem, používaným pro přípravu chráněných nukleosidů podle tabulky, je a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-2-deoxy-D-ribufuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonát. Výtěžek se vztahuje na množství uhlohydrátu a vypočtou se z kvantitativní reverzní fázové HPLC chromatografie, přičemž odpovídající pík rozpuštěného produktu se porovnává se standardem. Chrániči skupinou nukleobáze v každém případě je trimethylsilylová skupina.
Příklad 19 příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu
Cytosin (12,0 g), hexamethyldisilazan (60 ml) a síran amonný (10 mg) se udržují zahříváním na teplotě zpětného toku 125 °C po dobu 30 minut, čímž se získá homogenní roztok. Hexamethyldisilazan se odstraní destilací, čímž se získá bis-trimethylsilylcytosin. Nechává se reagovat 2-deoxy-2',2'-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-niethansulfonát (1,15 g) sbis-trimethylsilylcytosinem (6,89 g, 10 ekvivalentů) vanisolu (2 ml) a acetonitrilu (3 ml) při teplotě 80 °C v přítomnosti draselné soli monofluor-l-butansulfonové kyseliny (0,5 g) po dobu 16 hodin.
Chromatografická analýza HPLC potvrzuje úplné proběhnutí reakce a 33% výtěžek. Anomerní poměr β : a chráněného nukleosidu je 3:1.
-38CZ 291165 B6
Příklad 20
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu se síranem draselným
Nechává se reagovat 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonát (1,15 g) s bis-trimethylsilylcytosinem (6,89 g, 10 ekvivalentů), připraveným způsobem podle příkladu 19, v acetonitrilu (2 ml) při teplotě 80 °C v přítomnosti síranu draselného (0,5 g) po dobu 72 hodin. Chromatografícká analýza HPLC potvrzuje úplné proběhnutí reakce a in šitu 65% výtěžek. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosiduje 4,7 : 1.
Příklad 21
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s tetrabutylamoniovou solí kyseliny trifluormethansulfonové
Nechává se reagovat 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonát (0,29 g) s bis-trimethylsilylcytosinem (6,89 g, 10 ekvivalentů), připraveným způsobem podle příkladu 19, v acetonitrilu (3 ml) při teplotě 80 °C v přítomnosti tetrabutylamoniové soli kyseliny trifluormethansulfonové (1,5 mmol) připravené in šitu zpracováním tetrabutylamoniumhydroxidu (1,5 ml 1 molámí roztok v methanolu) kyselinou trifluormethansulfonovou (0,13 ml) a destilací k odstranění methanolu) po dobu 4 hodin. Chromatografícká analýza HPLC potvrzuje úplné proběhnutí reakce a in šitu 45% výtěžek. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosiduje 7,1 : 1.
Příklad 22
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu se síranem bamatým
Nechává se reagovat 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonát (1,15 g) s bis-trimethylsilylcytosinem (6,89 g, 10 ekvivalentů), připraveným způsobem podle příkladu 19, v acetonitrilu (3 ml) při teplotě 75 °C v přítomnosti síranu bamatého (1,0 g) po dobu 20,5 hodin. Chromatografícká analýza HPLC potvrzuje in šitu 36% výtěžek. Anomemí poměru β : a chráněného nukleosidu je 11,2 : 1.
Příklad 23
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyridin-2-onu se síranem cezným
Nechává se reagovat 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfbnát (1,15 g) s bis-trimethylsilylcytosinem (6,89 g, 10 ekvivalentů), připraveným způsobem podle příkladu 19, v acetonitrilu (3 ml) při teplotě 75 °C v přítomnosti síranu cezného (1,0 g) po dobu 21 hodin. Chromatografícká analýza HPLC potvrzuje in šitu 24% výtěžek. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 14,9 : 1.
-39CZ 291165 B6
Příklad 24
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s ceznou solí trifluormethansulfonové kyseliny
Nechává se reagovat 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribifuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonát (1,15 g) s bis-trimethylsilylcytosinem (6,89 g, 10 ekvivalentů), připraveným způsobem podle příkladu 19, v acetonitrilu (3 ml) při teplotě 75 °C v přítomnosti cezné soli kyseliny trifluormethansulfonové (připravené in šitu zpracováním 0,13 ml kyseliny trifluormethansulfonové nadbytkem uhličitanu cezného) po dobu 20,5 hodin. Chromatografícká analýza HPLC potvrzuje úplné proběhnutí reakce a in šitu 65% výtěžek. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 7,2 : 1.
Příklad 25
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s bamatou solí trifluormethansulfonové kyseliny
Nechává se reagovat 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonát (1,15 g) s bis-trimethylsilylcytosinem (6,89 g, 10 ekvivalentů), připravených způsobem podle příkladu 19, v acetonitrilu (3 ml) při teplotě 75 °C v přítomnosti bamaté soli kyseliny trifluormthansulfonové (připravené in šitu zpracováním 0,13 ml kyseliny trifluormethansulfonové nadbytkem uhličitanu bamatého) po dobu 20,5 hodin. Chromatografícká analýza HPLC potvrzuje in šitu 25% výtěžek. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 14,4 : 1.
Příklad 26
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s draselnou solí trifluormethansulfonové kyseliny
Nechává se reagovat 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonát (2,30 g, 12,6 ekvivalentů)) s bistrimethylsilylcytosinem (16,10 g), připraveným způsobem podle příkladu 19, v acetonitrilu (8 ml) při teplotě 75 °C v přítomnosti draselné soli kyseliny trifluormethansulfonové (připravené in šitu zpracováním 0,26 ml kyseliny trifluormethansulfonové uhličitanem draselným (1,0 g)) po dobu 45 hodin. Chromatografícká analýza HPLC potvrzuje in sítu 69,8% výtěžek. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 7,2 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu se reakční směs ochladí na teplotu 70 až 80 °C a smíchá se se 40 ml 4N kyseliny chlorovodíkové. Produkt se vysráží, odfiltruje se a vysuší se. Kvantitativní chromatografícká analýza HPLC potvrzuje 62,4% výtěžek izolovaného produktu.
Příklad 27
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s draselnou solí trifluormethansulfonové kyseliny.
Nechává se reagovat 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonát (2,30 g) s bis-trimethylsilcytosinem (16,10 g, 12,6 ekvivalentů), připraveným způsobem podle příkladu 19, v propionitrilu (8 ml) při teplotě 90 °C. V přítomnosti draselné soli kyseliny trifluormethansulfonové (připravené in šitu zpracováním kyseliny trifluormethansulfonové (0,26 ml)
-40CZ 291165 B6 uhličitanem draselným (1,0 g)) po dobu 21 hodin. Chromatografická analýza HPLC potvrzuje úplné proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 6,7 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu se reakční směs ochladí na teplotu 70 až 80 °C a smíchá se se 40 ml 4N kyseliny chlorovodíkové. Produkt se vysráží, odfiltruje se a vysuší se. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC potvrzuje 59,3% výtěžek izolovaného produktu.
Srovnávací příkladu 28
Příprava Panomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu v nepřítomnosti katalyzátoru.
Nechává se reagovat 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonát (1,15 g) s bis-trimethylsilylcytosinem (6,09 g, 10 ekvivalentů), připraveným způsobem podle příkladu 19, vanisolu (4 ml) při teplotě 110°C po dobu 20 hodin. Chromatografická analýza HPLC potvrzuje úplné proběhnutí reakce a in šitu 77,0% výtěžek. Anomemí poměr β :α chráněného nukleosidu je 3,4 : 1.
Srovnávací příklad 29
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosj l)-4-aminopyrimidin-2-onu v nepřítomnosti katalyzátoru
Nechává se reagovat 2 deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonát (1,15 g) s bis-triomethylsilylcytosinem (6,09 g, 10 ekvivalentů), připraveným způsobem podle příkladu 19, v propionitrilu (4 ml) při teplotě 85 °C v přítomnosti cezné soli kyseliny trifluormethansulfonové (připravené in šitu zpracováním 0,13 ml kyseliny trifluormethansulfonové nadbytkem uhličitanu cezného) po dobu 20 hodin. Chromatografická analýza HPLC potvrzuje úplné proběhnutí reakce a in šitu 70,0% výtěžek. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 6,7: 1.
Příklad 30
Příprava β anomerem obohaceného 9-[l-(2'-deoxy-2',2'-diflour-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)]-2,6-dipivaloylaminopurinu se 2 ekvivalenty 2,6-dipivalamidoaminopurindraselné soli
Do 100 mg 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 1 ml dichlormethanu a 0,036 ml triethylaminu. Roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15 minut, ochladí se na -40 °C a nechává se reagovat s 0,045 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonát v roztoku.
Připraví se 185 mg suspenze 2,6-dipivalamidoaminopurinu v 1,5 ml acetonitrilu a udržuje se v bezvodých podmínkách v prostředí dusíku. Přidá se 65 mg terc.-butoxidu draselného do suspenze a získaná směs se míchá při teplotě 23 °C po dobu 10 minut za získání 2,6-dipivalamidoaminopurindraselné soli. Sůl se ochladí na teplotu 0 °C a nechává se reagovat s roztokem a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátu, míchá se po dobu jedné hodiny a ohřeje se na teplotu 22 °C, čímž se získá žádaný chráněný nukleosid, což se potvrzuje chromatografíckou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2:1.
-41 CZ 291165 B6
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 25 ml ethylacetátu, 1 ml vody, 1 ml IN kyseliny chlorovodíkové a 2 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje se 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 5 ml solanky a vysuší se síranem hořečnatým. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC potvrzuje společný výtěžek chráněného β-anomemího a α-anomemího nukleosidu 42 %.
Příklad 31
Příprava β anomerem obohaceného 9-[l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)]-2,6-dipivalamidoaminopurinu se 2 ekvivalenty 2,6-dipivalamidoaminopurindraselné soli
Do 1 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 0,55 ml triethylaminu a 8,33 ml dichlormethanu při teplotě 23 °C. Směs se ochladí na -78 °C a nechává se reagovat s 0,53 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové v 0,50 ml dichlormethanu, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonát v roztoku. Věnuje se pozornost tomu, aby se udržela teplota reakční směsi pod 65 °C.
Připraví se 1,85 g suspenze 2,6-dipivalamidoaminopurinu v 30 ml acetonitrilu a udržuje se v bezvodých podmínkách v prostředí dusíku. Přidá se 651 mg terc.-butoxidu draselného do suspenze a získaná směs se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15 minut, za získání 2,6-dipivalamidoaminopurindraselné soli. Sůl se ochladí na teplotu 0 °C a nechává se reagovat s roztokem a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátu, míchá se po dobu jedné hodiny a ohřeje se na teplotu 23 °C, čímž se získá žádaný chráněný nukleosid, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2:1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 50 ml ethylacetátu a 50 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Organická vrstva se oddělí, promyje se 50 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se oddělí a promyje se 50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného a vysuší se síranem hořečnatým.
Příklad 32
Příprava β anomerem obohaceného 9-[l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranoxyl)]-6-chlorpurinu se 2 ekvivalenty 6-chlorpurindraselné soli
Do 1,4 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 14 ml dichlormethanu a 0,515 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15 minut, ochladí se na teplotu -40 °C a nechává se reagovat s 0,621 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-ltrifluormethansulfonát v roztoku.
Připraví se 155 mg suspenze 6-chlorpurinu v 3 ml acetonitrilu a udržuje se v bezvodých podmínkách v prostředí dusíku. Přidá se 130 mg terc.-butoxidu draselného do suspenze a získaná směs se míchá při teplotě 23 °C po dobu 10 minut, za získání 6-chlorpurindraselné soli. Suspenze soli se ochladí na teplotu 0 °C a nechává se reagovat s 2 ml roztoku a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátu, míchá se po dobu jedné hodiny a ohřeje se na teplotu 22 °C, čímž se získá žádaný chráněný
-42CZ 291165 B6 nukleosid, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomerní poměr β : a chráněného nukleosidu je 2:1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 25 ml ethylacetátu, 1 ml vody, 1 ml IN kyseliny chlorovodíkové a 2 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje se 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 5 ml solanky a vy suší se síranem hořečnatým. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC potvrzuje výtěžek chráněného β-anomemího nukleosidu 27 %.
Příklad 33
Příprava β anomerem obohaceného 9-[l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyI-D-ribofuranosyl)]-2,6-dichlor-3-deazapurinu se 2 ekvivalenty 2,6-dichlor-3-deazapurindraselné soli
Do 1,4 g 2-deoxy-2,2-difiuor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 14 ml dichlormethanu a 0.515 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15 minut, ochladí se na teplotu -40 °C a nechává se reagovat s 0,621 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-ltrifluormethansulfonát v roztoku.
Připraví se 82 ml suspenze 2.6-dichlor-3-deazapurinu v 1,5 ml acetonitrilu a udržuje se v bezvodých podmínkách v prostředí dusíku. Přidá se 49 mg terc.-butoxidu draselného do suspenze a získaná směs se míchá při teplotě 23 °C po dobu 10 minut za získání 2,6-dichlor-3deazapurindraselné soli. Suspenze soli se ochladí na teplotu 0 °C a nechává se reagovat s 2 ml roztoku a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátu, míchá se po dobu jedné hodiny a ohřeje se na teplotu 20 °C, čímž se získá žádaná chráněný nukleosid, což se potvrzuje chromatograflckou HPLC analýzou. Anomerní poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,5 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směs se přidá 25 ml ethylacetátu, 1 ml vody, 1 ml IN kyseliny chlorovodíkové a 2 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje se 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 5 ml solanky a vysuší se síranem hořečnatým. Kvantitativní chromatografícká analýza HPLC potvrzuje výtěžek chráněného β-anomerního nukleosidu 21 %. Teplota tání produktu je 127 až 129 °C.
Příklad 34
Příprava β anomerem obohaceného 9-[l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)]-2,6-dichlorpurinu se 2 ekvivalenty 2,6-dichglorpurindraselné soli
Do 1,4 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 14 ml dichlormethanu a 0,515 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15 minut, ochladí se na teplotu -40 °C a nechává se reagovat s 0,621 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-ltrifluormethansulfonát v roztoku.
Připraví se 220 mg suspenze 2,6-dichlorpurinu v 3,0 ml acetonitrilu a udržuje se v bezvodých podmínkách v prostředí dusíku. Přidá se 130 mg terc.-butoxidu draselného do suspenze a získaná směs se míchá při teplotě 23 CC po dobu 10 minut, za získání 2,6-dichlorpurindraselné soli. Suspenze soli se ochladí na teplotu 0 °C a nechává se reagovat s 2 ml roztoku a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluorethansulfbnátu,
-43CZ 291165 B6 míchá se po dobu jedné hodiny a ohřeje se na teplotu 22 °C, čímž se získá žádaný chráněný nukleosid. což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β: a chráněného nukleosidu je 2,5 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 25 ml ethylacetátu, 1 ml vody, 1 ml IN kyseliny chlorovodíkové a 2 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje se 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 5 ml solanky a vysuší se síranem hořečnatým. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC potvrzuje výtěžek chráněného β-anomemího nukleosidu 22 %.
Příklad 35
Příprava β anomerem obohaceného l-[l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)]-3-karboethoxy-l,2,4-triazolu se 2 ekvivalenty 3-karboethoxy-l,2,4-triazoldraselné soli
Do 1,4 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 14 ml dichlormethanu a 0,515 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15minut, ochladí se na teplotu —40 °C a nechává se reagovat s 0,621 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-ltrifluormethansulfonát v roztoku.
Připraví se 164 mg suspenze triazolesteru v 3,0 ml acetonitrilu a udržuje se vbezvodých podmínkách v prostředí dusíku.
Přidá se 131 mg terc.-butoxidu draselného do suspenze a získaná směs se míchá při teplotě 23 °C po dobu 10 minut za získání 3-karboethoxy-l,2,4-tríazoldraselné soli. Suspenze soli se ochladí na teplotu 0 °C a nechává se reagovat s 2 ml roztoku a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátu, míchá se po dobu 40 minut a ohřeje se na teplotu 15 °C, čímž se získá žádaný chráněný nukleosid, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,5 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 25 ml ethylacetátu, 1 ml vody, 1 ml IN kyseliny chlorovodíkové a 2 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje se 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 5 ml solanky a vysuší se síranem hořečnatým. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC potvrzuje výtěžek chráněného β-anomemího nukleosidu 14 %.
Příklad 36
Příprava β anomerem obohaceného 9-[l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)]-2-amino-6-chlorpurinu se 2 ekvivalenty 2-amino-6-chlorpurindraselné soli
Do 1,4 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 14 ml dichlormethanu a 0,151 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15 minut, ochladí se na teplotu -40 °C a nechává se reagovat s 0,621 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-rkbofuranosyl-3,5-dibenzoyl-ltrifluormethansulfonát v roztoku.
Připraví se 197 ml suspenze 2-amino-6-chlorpurinu v 3,0 ml acetonitrilu a udržuje se vbezvodých podmínkách v prostředí dusíku. Přidá se 130 mg terc.butoxidu draselného do suspenze a získaná směs se míchá při teplotě 23 °C po dobu 10 minut, za získání 2-amino-6
-44CZ 291165 B6 chlorpurindraselné soli. Suspenze soli se ochladí na teplotu 0°C a nechává se reagovat s 2 ml roztoku a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátu, míchá se po dobu jedné hodiny a ohřeje se na teplotu 22 °C, čímž se získá žádaný chráněný nukleosid, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 100 ml ethylacetátu a 10 ml vody a vytvoří se sraženina. Sraženina se odfiltruje, promyje se 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 5 ml solanky a vysuší se síranem hořečnatým. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC potvrzuje výtěžek chráněného β-anomemího nukleosidu 14 %.
Příklad 37
Příprava β anomerem obohaceného 9-[l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)]-2,6-dipivalamidoaminopurinu se 2 ekvivalenty 2,6-dipivalamidoaminopurindraselné soli
Do 3,78 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 30 ml dichlormethanu a 1,39 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15 minut, ochladí se na teplotu -40 °C a nechává se reagovat s 1,68 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové v 0,50 ml dichlormethanu, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonát v roztoku.
Připraví se 6,99 g suspenze 2,6-dipivalamidoaminopurinu ve 100 ml acetonitrilu a udržuje se v bezvodých podmínkách v prostředí dusíku. Přidá se 2,46 g terc.-butoxidu draselného do suspenze a získaná směs se míchá při teplotě 23 °C po dobu 10 minut a vysuší se do konstantní hmotnosti ve vakuu při teplotě 40 °C za získání 2,6-dipivalamidoaminopurindraselné soli. Suspenze soli se vnese do 100 ml dichlormethanu, ochladí na teplotu 0 °C a nechává se reagovat s roztokem a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-ltrifluormethansulfonátu, míchá se po dobu jedné hodiny a ohřeje se na teplotu 22 °C, čímž se získá žádaný chráněný nukleosid, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 500 ml ethylacetátu, 20 ml ledu, 20 ml 1N kyseliny chlorovodíkové a 35 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje se 25 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 25 ml solanky a vysuší se síranem hořečnatým. Anomemí poměr β: a chráněného nukleosidu je 1,8: 1. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC potvrzuje výtěžek chráněného β-anomemího nukleosidu 28 %. Teplota tání produktu je 238 až 239 °C.
Příklad 38
Příprava β anomerem obohaceného 9-[l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)]-6-pipavalamidoaminopurinu se 2 ekvivalenty 6-pivalamidoaminopurindraselné soli
Do 1,40 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 14 ml dichlormethanu a 0,515 triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15 minut, ochladí se na teplotu -40 °C a nechává se reagovat s 0,621 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové, čímž se získá aanomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-ltrifluormethansulfonát v roztoku.
Připraví se 255 mg suspenze 6-pipvalamidoaminopurinu ve 3 ml acetonitrilu a udržuje se v bezvodých podmínkách v prostředí dusíku. Přidá se 131 mg terc.-butoxidu draselného do
-45CZ 291165 B6 suspenze a získaná směs se míchá při teplotě 23 °C po dobu 10 minut za získání 6-pivalamidoaminopurindraselné soli. Suspenze se ochladí na teplotu 0 °C a nechává se reagovat s roztokem a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátu, míchá se po dobu jedné hodiny a ohřeje se na teplotu 22 °C, čímž se získá žádaný chráněný nukleosid, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 25 ml ethylacetátu, 1 ml vodu, 1 ml IN kyseliny chlorovodíkové a 2 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje se 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 5 ml solanky a vysuší se síranem hořečnatým. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC potvrzuje výtěžek chráněného β a anomemího nukleosidu 28 %.
Příklad 39
Příprava β anomerem obohaceného 9-[l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)]-8-brom-7-kyano-7-deaza-6-pivalamidopurinu se 2 ekvivalenty 8-brom-7-kyano7-deaza-6-pivalamidopurindraselné soli
Do 1,40 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 14 ml dichlormethanu a 0,515 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15 minut, ochladí se na teplotu -40 °C a nechává se reagovat s 0,62 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-ltrifluormethansulfonát v roztoku.
Připraví se 187 mg suspenze 8-brom-7-kyano-7-deaza-6-pivalamidopurinu ve 3 ml acetonitrilu a udržuje se v bezvodých podmínkách v prostředí dusíku. Přidá se 65 mg terc.-butoxidu draselného a získaná směs se míchá při teplotě 23 °C po dobu 10 minut za získání 8-brom-7kyano-7-deaza-6-pivaloylaminodopurindraselné soli. Suspenze se ochladí na teplotu 0 °C a nechává se reagovat s 1 ml roztoku a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátu, míchá se po dobu jedné hodiny a ohřeje se na teplotu 20 °C, čímž se získá žádaný chráněný nukleosid, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2:1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 25 ml ethylacetátu, 1 ml vody, 1 ml IN kyseliny chlorovodíkové a 2 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje se 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 5 ml solanky a vysuší se síranem hořečnatým. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC potvrzuje výtěžek chráněného β-anomemího nukleosidu 24 %.
Příklad 40
Příprava β anomerem obohaceného 9-[(l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)]-2,6-dipivalamidoaminopurinu se 2 ekvivalenty 2,6-dipivalamidoaminopurindraselné soli v různých reakčních rozpouštědlech
Do 1,00 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 10 ml dichlormethanu a 0,36 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15 minut, ochladí se na teplotu -40 °C a nechává se reagovat s 0,45 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-di-benzoyl-l-trifluormethansulfonát v roztoku.
-46CZ 291165 B6
Připraví se 1,85 g suspenze 2,6-dipivalamidoaminopurinu ve 30 ml acetonitrilu a udržuje se v bezvodých podmínkách v prostředí dusíku. Přidá se 0,65 g terc.-butoxidu draselného a získaná směs se míchá při teplotě 25 °C po dobu 10 minut za získání 2,6-dipivalamidoaminopuridraselné soli. Suspenze soli se vysuší ve vakuu při teplotě 40 °C k vytvoření bílé pevné látky o konstantní hmotnosti. Suspenduje se 207 mg purinové soli v 1,5 ml rozpouštědla uvedeného ve zkoušce A až F v níže uvedené tabulce, v prostředí dusíku při teplotě 0 °C a nechává se reagovat s 1 ml roztoku a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-diflour-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-triflurmethansulfonátu, míchá se po dobu jedné hodiny a ohřeje se na teplotu 0 °C, čímž se získá žádaný chráněný nukleosid, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je uveden níže.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 25 ml ethylacetátu, 1 ml vody, 1 ml IN kyseliny chlorovodíkové a 2 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje se 2 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 5 ml solanky a vysuší se síranem hořečnatým. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC potvrzuje výtěžek chráněného β anomerního nukleosidu uvedený v následující tabulce:
Tabulka
Zkouška Rozpouštědlo Poměr β/α nukleosidu Výtěžek (%)
| A | tetrahydrofuran | 1,3:1 | 45 |
| B | toluen | 1,8 : 1 | 49 |
| C | ethylacetát | 1,6 : 1 | 47 |
| D | dichlorethan | 2,1 : 1 | 55 |
| E | terc.-butylalkohol | 3,5: 1 | 53 |
| F | acetonitril | 1,6 : 1 | 40 |
Příklad 41
Příprava β anomerem obohaceného 9-[l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)]-2-acetamido-6-difenylkarbamoyloxypurinu se dvěma ekvivalenty 2-acetamido-6difenylkarbamoyloxypurindraselné soli
Do 1,4 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 14 ml dichlormethanu a 0,515 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15 minut, ochladí se na teplotu —40 °C a nechává se reagovat s 0,621 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-ltrifluormethansulfonát v roztoku.
Připraví se roztok 2,56 g 2-acetamido-6-difenylkarbamoyloxypurinu v 50 ml horkého dimethylformamidu a udržuje se v bezvodých podmínkách v prostředí dusíku. Roztok se ochladí na teplotu 25 °C a přidá se 0,74 g terc.-butoxidu draselného. Získaná směs se míchá při teplotě 23 °C po dobu 10 minut a odpaří se za vzniku oleje, který se trituruje s etherem, oddělí se na filtru a vysuší se ve vakuu při teplotě 40 °C za získání 2-acetamido-6-dienylkarbamoyloxypurindraselné soli. 496 mg purinové soli se suspenduje ve 3 ml dichlormethanu, ochladí se na teplotu 5 °C a nechává se reagovat s roztokem a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluorD-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluomethansulfonátu, míchá se po dobu jedné hodiny a ohřeje se na teplotu 25 °, čímž se získá žádaný chráněný nukleosid, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,8 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 25 ml ethylacetátu, 1 ml vody, 1 ml IN kyseliny chlorovodíkové a 2 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Organická
-47CZ 291165 B6 vrstva se oddělí, promyje se 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 5 ml solanky a vysuší se síranem hořečnatým. Výtěžek chráněného β-anomerního nukleosidu je 5,8 %.
Příklad 42
Příprava β anomerem obohaceného 9-[l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)]-2,6-dipivalamidoaminopurinu se 7 ekvivalenty 2,6-dipivalamidoaminopurindraselné soli
Do 100 mg 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu se vnese 3 ml dichlormethanu a 0,036 ml triethylaminu. Tento roztok se míchá při teplotě 23 °C po dobu 15 minut, ochladí se na teplotu -78 °C a nechává se reagovat s 0,045 ml anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové, čímž se získá a anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-ltrifluormethansulfonát v roztoku.
Připraví se 1,85 g suspenze 2,6-dipivalamidoaminopurinu ve 30 ml acetonitrilu a udržuje se v bezvodých podmínkách v prostředí dusíku. Přidá se 0,65 g terc.-butoxidu draselného do suspenze a získaná směs se míchá při teplotě 23 °C po dubu 10 minut a vysuší se do konstantní hmotnosti ve vakuu při teplotě 40 °C za získání 2,6-dipivalamidoaminopurindraselné soli, která se ochladí na teplotu -78 °C. Purinová sůl se nechává reagovat s roztokem a anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-trifluormethansulfonátu, míchá se při teplotě 23 °C po dobu jedné a půl hodiny a ohřeje se na teplotu 22 °C, čímž se získá žádaný chráněný nukleosid, což se potvrzuje chromatografickou HPLC analýzou.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 25 ml ethylacetátu, 1 ml IN kyseliny chlorovodíkové a 2 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje se 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 5 ml solanky a vysuší se síranem hořečnatým. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,7 : 1.
Příklad 43
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopurimidin-2-onu se 3 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Připraví se bis-trimethylsilylcytosin smícháním 292 mg cytosinu s 2 ml hexamethyldisilazanu, 11 mg síranu amonného a 5 ml xylenů a udržováním roztoku zahříváním na teplotě zpětného toku po dobu jedné hodiny za vzniku homogenního roztoku. Nadbytek xylenů a hexamethyldisilazanu se odstraní, čímž se získá roztavený zbytek bis-trimethylsilylcytosinů. Přidá se 400 mg 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonát, rozpuštěného ve 2 ml xylenů do roztaveného bis-trimethylsilylcytosinu a xylenu se odstraní. Teplota reakční směsi se udržuje na 160 °C po dobu 15 minut. Chromatografícká HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,3 : 1.
K. extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se reakční směs ochladí, zředí se 50 ml ethylacetátu a promyje se 50 ml IN kyseliny chlorovodíkové.
-48CZ 291165 B6
Příklad 44
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-ketopyrimidin-2-onu se 3 ekvivalenty bis-trimethylsilyluracilu
Připraví se bis-trimethylsilyluracil smícháním 295 mg uracilu s 5 ml hexamethyldisilazanu,l 1 mg síranu amonného a 10 ml 1,2-dichlorethanu. Roztok se zahříváním udržuje na teplotě 110 °C po dobu jedné hodiny za vzniku homogenního roztoku. Nadbytek xylenů a hexanů a hexamethyldisilazanu se odstraní, čímž se získá roztavený zbytek bis-trimethylsilyluracilu. Přidá se 200 mg 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3.5-dibenzoyl-l-a-methansulfonátu do roztaveného bis-trimethylsilyluracilu. Teplota reakční směsi se udržuje na 150 °C po dobu dvou hodin. Chromatografická HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,8 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se reakční směs ochladí, zředí se 50 ml ethylacetátu a promyje se 50 ml IN kyseliny chlorovodíkové.
Příklad 45
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu s 10 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Do 1,12 g roztaveného bis-trimethylsilylcytosinu se vnese 200 mg 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonátu. Teplota reakční směsi se udržuje na 130 °C po dobu jedné hodiny. Chromatografická HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β:α chráněného nukleosidu je 1,7 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se reakční směs ochladí, zředí se 100 ml ethylacetátu a promyje se 100 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC organické vrstvy potvrzuje výtěžek chráněného β-anomerního nukleosidu 50 %.
Příklad 46
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2’-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-acetamidopyrimidin-2-onu se 3 ekvivalent} bis-trimethylsilyl-N-acetylcytosinu
Do 500 mg bis-trimethylsilyl-N-acetylcytosinu se vnese 980 mg 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonátu. Teplota reakční směsi se udržuje na 108 °C po dobu tří hodin. Chromatografická HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,4 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se reakční směs ochladí, zředí se 25 ml ethylacetátu a promyje se 25 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Vodná vrstva se promyje 30 ml ethylacetátu. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC ethylacetátové vrstvy potvrzuje výtěžek chráněného β-anomemího nukleosidu 34 %.
-49CZ 291165 B6
Příklad 47
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-acetamidopirimidin-2-onu se 3 ekvivalenty bis-trimethylsilyl-N-acetylcytosinu
Do 393 mg roztaveného bis-trimethylsilyl-N-acetylcytosinu se vnese 200 mg 2-deoxv-2.2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonátu. Teplota reakční směsi se udržuje na 110 °C po dobu jedné hodiny. Anomemí poměr β:α chráněného nukleosidu je 2.3 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se reakční směs zředí 40 ml ethylacetátu a promyje se 25 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC organické vrstvy potvrzuje výtěžek chráněného β-anomemího nukleosidu 27 %.
Příklad 48
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin-2-onu se 20 ekvivalenty bis-trimethylsilylcytosinu
Připraví se bis-trimethylsilylcytosin smícháním 4,9 g cytosinu s 90 ml hexamethyldisilazanu, 581 mg síranu amonného a 2 ml xylenů a zahříváním roztoku po dobu dvou hodin za vzniku homogenního roztoku. Nadbytek hexamethyldisilazanu se odstraní, čímž se získá bílý zbytek. Přidá se 1 g 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-methansulfonátu, rozpouštěného v 5 ml acetonitrilu do bis-trimethylsilylcytosinového roztoku a acetonitril se odstraní. Teplota reakční směsi se udržuje na 130 °C za vakua po dobu jedné hodiny. Chromatografická HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 3,9 : 1.
K extrakci nukleosidového produktu z reakční směsi se přidá 100 ml dichlormethanu a promyje se postupně 100 ml IN kyseliny chlorovodíkové, 200 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu a 200 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje se a odpaří se, čímž se získá 1,03 g žluté pevné látky. Kvantitativní chromatografická analýza HPLC potvrzuje výtěžek chráněného β-anomemího nukleosidu 43 %.
V následující tabulce se uvádí, jak volba uhlohydrátu, reakční teplota a počet molámích ekvivalentů nukleobáze ovlivňují výtěžek a anomemí poměr nukleosidového produktu.
V následující tabulce se ve sloupci I uvádí použití uhlohydrát, ve sloupci II zásada (R'), ve sloupci III počet ekvivalentů zásady (R'), ve sloupci IV teplota ve °C, ve sloupci V poměr α/β nukleosidu a v posledním sloupci VI výtěžek.
Tabulka
I II III IV V VI
| 1:1 αιβ-ΟΜβ | Cytosin | 1,5 | 130°C | 3:1,0 | N/D |
| α-OMs | Cytosin | 3,0 | 160 °C | 1:1,3 | N/D |
| α-OMs | Cytosin | 10,0 | 130 °C | 1:1,7 | 50% β |
| α-OMs | Uráčil | 3,0 | 150°C | 1:1,8 | N/d |
| α-OMs | N-Acetyl-Cytosin | 3,0 | 115 °C | 1:1,4 | 34% β |
| α-OMs | N-Acetyl-Cytosin | 3,0 | 110°C | 1:2,3 | 27% β |
| α-OMs | Cytosin | 20,0 | 130 °C | 1:4,0 | 43% β |
-50CZ 291165 B6
Výrazem „N/D“ se míní, že odpovídající hodnota nebyla stanovena. Výrazem uhlohydráty (sloupec I) se míní uhlohydráty s chráněnými hydroxyskupinami a tento výraz zahrnuje a-OMs nebo β-OMs, což je a-2,2-difluor-2-deoxy-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-methansulfonát nebo [3-2,2-difluor-2-deoxy-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-methansulfonát; β-OTs nebo α-OTs, což je p-2,2-difluor-2-deoxy-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-toluensulfonát nebo a-2,2-difluor-2-deoxy-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-toluensulfonát. Výtěžky se vztahují na celkové množství uhlohydrátu a vypočtou se z kvantitativních reverzní fázové HPLC chromatografie, přičemž odpovídající pík rozpuštěného produktu se porovnává se standardem, který je l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-[3-D-ribofuranosyl)-4-aminopyrimidin2-on. Chrániči skupinou nukleobáze v každém případě je trimethylsilylová skupina.
Příklad 49
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-pivalamidopyrimid-2-onu v acetonitrilu
N-pivalamidocytosin (1,0 g, 5,5 mmol) se suspenduje v acetonitrilu (15 ml), zpracovává se terc.-butoxidem draselným (0,062 g, 5,5 mmol) a míchá se v prostředí dusíku při teplotě 25 °C za vytvoření draselné soli N-pivaloylcytosinu.
Do shora uvedené soli se přidá 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-(pbrombenzen)sulfonát (2,99 g, 5,0 mmol) v acetonitrilu (10,0 ml) a směs se nechává reagovat po dobu 5,5 hodin při teplotě 65 °C za získání chráněného nukleosidu. Chromatografická HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 3,9: 1.
K izolaci nukleosidového produktu se reakční směs rozdělí mezi ethylacetát a vodu a organická vrstva se promyje hydrogenuhličitanem sodným a vysuší se síranem hořečnatým. Sloupcovou chromatografii (silikagel, systém toluen/ethylacetát v poměru 6 : 4) se získá 0,700 g (20 % teorie) β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4piva!amidopyrimid-2-onu o teplotě tání 191 až 193 °C.
Příklad 50
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-(N-pivalamido)aminopyrimid-2-onu v acetonitrilu
N-pivalamidocytosin (0,098 g, 0,5 mmol) se suspenduje v acetonitrilu (1,5 ml), zpracovává se terc.-butoxidem draselným (0,062 g, 5,5 mmol) a míchá se v prostředí dusíku při teplotě 25 °C za vytvoření draselné soli N-pivaloylcytosinu.
Do shora uvedené soli se přidá 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-jodid (0,244 g, 0,5 mmol) v acetonitrilu (10,0 ml) a směs se nechává reagovat po dobu 24 hodin při teplotě 60 °C za získání chráněného nukleosidu. Chromatografická HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,13 : 1.
-51 CZ 291165 B6
Příklad 51
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-I>-ribofuranosyl)-l,2,4-triazol-3-karbonitrilu v acetonitrilu l,2,4-Triazol-3-karbonitril (0,101 g, 1,03 mmol) se suspenduje v acetonitrilu (10 ml), zpracovává hydridem sodným (0,0445 g, 1,12 mmol) a míchá se v prostředí dusíku při teplotě 25 °C za vytvoření draselné soli N-pipvaloylcytosinu.
Do shora uvedené soli se přidá 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-jodid (0,244 g, 0,5 mmol) v acetonitrilu (10,0 ml) a směs se nechává reagovat po dobu 24 hodin při teplotě 60 °C za získání chráněného nukleosidu. Chromatografická HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,13 : 1.
Příklad 51
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-l,2,4-triazol-3-karbonitrilu v acetonitrilu l,2,4-Triazol-3-karbonitril (0,101 g, 1,03 mmol) se suspenduje v acetonitrilu (10 ml), zpracovává hydridem sodným (0,0445 g, 1,12 mmol) a míchá se v prostředí dusíku při teplotě 25 °C za vytvoření odpovídající sodné soli triazolu.
Do shora uvedené soli se přidá 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-abromid (0,451 g, 1,02 mmol) v acetonitrilu (10,0 ml) a směs se nechává reagovat po dobu 78 hodin při teplotě 82 °C za získání chráněného nukleosidu. Chromatografická HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,2 : 1.
K izolaci nukleosidového produktu se reakční směs odpaří za vzniku olejovité pevné látky, zředí se ethylacetátem, promyje se hydrogenuhličitanem sodným, vysuší se síranem hořečnatým a zkoncentruje se. Zbytek se překrystaluje z ethanolu, čímž se získá 30 mg (6% teorie) β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-l,2,4-triazol-3-karbonitrilu o teplotě tání 225 až 226 °C.
MS (FD) M/Z 455 (M+l).
| Analýza pro C22H16F2N4O5. | ||
| vypočteno: | C 58,15; H3,55; | N 12,33; |
| nalezeno: | C 58,36; H 3,79; | N 12,10. |
| Příklad 52 | ||
| Příprava β anomerem obohaceného | l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribo- |
furanosyl)-l,2,4-triazol-3-karbonitrilu v acetonitrilu l,2,4-Triazol-3-karbonitril (0,272 g, 2,89 mmol) se suspenduje v acetonitrilu (20 ml), zpracovává hydridem sodným (0,094 g, 2,70 mmol) a míchá se v prostředí dusíku při teplotě 25 °C za vytvoření odpovídající sodné soli triazolu.
Do shora uvedené soli se přidá 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-jodid (0,941 g, 1,9 mmol) v acetonitrilu (20,0 ml) a směs se nechává reagovat po dobu 48 hodin při
-52CZ 291165 B6 teplotě 82 °C za získání chráněného nukleosidu. Chromatografícká HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 3,5 : 1.
K izolaci nukleosidového produktu se reakční směs odpaří za vzniku olejovité pevné látky, zředí se ethylacetátem, promyje se hydrogenuhličitanem sodným, vysuší se síranem hořečnatým a zkoncentruje se. Zbytek se překrystaluje zethanolu, čímž se získá 0,421 g (48% teorie) β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-l,-
2,4-triazol-3-karbonitrilu o teplotě tání 225 až 226 °C.
MS (FD) M/Z 455 (M+l).
Analýza pro C22H16F2N4O5:
vypočteno: C 58,15; H 3,55; N 12,33;
nalezeno: C 58,35; H3,65; N 12,33.
Příklad 53
Příprava (9)regioizomer-β-anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-6-kyanopurinu v N,N-dimethylacetamidu
6-Kyanopurin (0,92 g, 6,35 mmol) se suspenduje v N,N-dimethylacetamidu (12 ml), zpracovává hydridem sodným (0,396 g, 8,25 mmol) a míchá se v prostředí dusíku při teplotě 25 °C za vytvoření odpovídající sodné soli 6-kyanopurinu.
Do shora uvedené soli se přidá 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-jodid (3,09 g, 6,35 mmol) v N,N-dimethylacetamidu (4,0 ml) a směs se nechává reagovat po dobu 5 hodin při teplotě 70 °C za získání chráněného nukleosidu. Chromatografícká HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,2 : 1.
K izolaci nukleosidového produktu se reakční směs ochladí, rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v ethylacetátu, promyje se 0,2M roztokem chloridu lithného, vysuší se síranem hořečnatým a zkoncentruje se. Sloupcovou chromatografií (silikagel, systém toluen/ethylacetát v poměru 9: 1) se získá 0,21 g (6,5% teorie) (9)regioizomer-^ anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-6-kyanopurinu.
MS (FD) M/Z 506 (M+l).
Analýza pro C25H17F2N5O5:
vypočteno: C 59,41; H 3,39; N 13,86;
nalezeno: C 59,85; H 3,49; N 13,48.
Příklad 54
Příprava (9)regioizomer^ anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-2,6-(dipivalamido)diaminopurinu v N,N-dimethylacetamidu
2,6-(Dipivalamido)diaminopurin (0,159 g, 0,5 mmol) se suspenduje v N,N-dimethylacetamidu (1,0 ml), zpracovává terc.-butoxidem draselným (0,062 g, 0,55 mmol) a míchá se v prostředí dusíku při teplotě 25 °C za vytvoření odpovídající draselné soli 2,6-(dipivalamido)diaminopurinu.
-53CZ 291165 B6
Do shora uvedené soli s přidá 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-P-(pbrombenzen)sulfonát (0,299 g, 0,5 mmol) v N,N-dimethylacetamidu (0,5 ml) a směs se nechává reagovat po dobu 6 hodin při teplotě 60 °C za získání chráněného nukleosidu. Chromatografícká 5 HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,9 : 1.
K izolaci nukleosidového produktu se reakční směs ochladí, rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, zb\tek se rozpustí v ethylacetátu, promyje se 0,2M roztokem chloridu lithného, vysuší se síranem io hořečnatým a zkoncentruje se za získání oleje. Sloupcovou chromatografií (silikagel, systém toluen/ethylacetát v poměru 1 : 1) se získá 0,141 g (28 % teorie) a a β nukleosidového produktu.
MS(FD)M/Z679 (M+l).
Příklad 55
Příprava (9) regioizomer-β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-Obenzoyl-D-ribofuranosyl)-2,6-(dipivalamido)diaminopurinu v acetonitrilu.
2,6-(Dipivalamido)diaminopurin (0,159 g, 0,5 mmol) se suspenduje v acetonitrilu (1,5 ml), pracovává terc.-butoxidem draselným (0,062 g, 0,55 mmol) a míchá se v prostředí dusíku při teplotě 25 °C za vytvoření odpovídající draselné soli 2,6-(dipivalamido)diaminopurinu.
Do shora uvedené soli se přidá 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-jodid (0,244 g, 0,5 mmol) v acetonitrilu (1,5 ml) a směs se nechává reagovat po dobu 16 hodin při teplotě 60 °C za získání chráněného nukleosidu. Chromatografícká HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 2,2 : 1.
K izolaci nukleosidového produktu se reakční směs zředí ethylacetátem, organická vrstva se promyje hydrogenuhličitanem sodným, vysuší se síranem hořečnatým, oddělí se a zkoncentruje se za získání oleje. Sloupcovou chromatografií (silikagel, systém toluen/ethylacetát v poměru 1 : 1) se získá 0,085 g (25 % teorie) (9)regioizomer^ anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'difluor-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)-2,6-(dipivalamido)-diaminopurinu.
MS(FD) M/Z 679 (M+l).
Příklad 56
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-(benzylamino)pyrimid-2-onu v N,N-dimethylacetamidu
N-Benzylcytosin (0,099 g, 0,493 mmol) se suspenduje v N,N-di-methylacetamidu (2,0 ml), 45 zpracovává hydridem sodným (0,0256 g, 0,534 mmol) a míchá se v prostředí dusíku při teplotě °C za vytvoření odpovídající sodné soli N-benzylcytosinu.
Do shora uvedené soli se přidá 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-jodid (0,201 g, 0,411 mmol) v N,N-dimethylacetamidu (1,5 ml) a směs se nechává reagovat po dobu 50 5 hodin při teplotě 23 °C za získání chráněného nukleosidu. Chromatografícká HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosidu je 1,9 : 1.
K izolaci nukleosidového produktu se reakční rozpouštědla odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu, promyje se hydrogenuhličitanem sodným, vysuší se síranem hořečnatým
-54CZ 291165 B6 a zkoncentruje se za získání oleje. Sloupcovou chromatografií (silikagel, systém toluen/ethylacetát v poměru 9 : 1) se získá 0,0515 g (6,5 % teorie) β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-4-(benzylamino)pyrimid-2-onu.
MS (FD) M/Z 562 (M+l).
Příklad 57
Příprava β anomerem obohaceného l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofuranosyl)-l,2,4-triazol-3-karboxylátu v N,N-dimethylacetamidu
Ethyl-l,2.4-triazol-3-karboxylát (0,723 g, 5,13 mmol) se suspenduje v N,N-dimethylacetamidu (2.50 ml), zpracovává se hydridem sodným (0,123 g, 5,13 mmol) a míchá se v prostředí dusíku při teplotě 25 °C za vytvoření odpovídající sodné soli triazolu.
Do shora uvedené soli se přidá 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-l-a-jodid (2.00 g, 4,11 mmol) v N,N-dimethylacetamidu (2,50 ml) a směs se nechává reagovat po dobu 24 hodin při teplotě 23 °C za získání chráněného nukleosidu. Chromatografícká HPLC analýza potvrzuje dokonalé proběhnutí reakce. Anomemí poměr β : a chráněného nukleosiduje 3:1.
Surová reakční směs se čistí za odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku a za použití sloupcové chromatografie (silikagel, systém toluen/ethylacetát v poměru 9:1). Teoretický výtěžek spojený a a β regioizomerů (A a B) chráněných nukleosidů je 67 %.
A. Ethyl-l-(2'-deoxy-2',2'-difluor-3',5'-di-C)-benzoyl-β-D-ribofuranosyl)-l,2,4-triazol·-3karboxylát (436 mg, 21,2 % teorie).
C6H5CO F
II o
Překrystalováním produktu „A“ z ethylacetátizooktanu se získá 267 mg čistého β-izomeru v 13% výtěžku.
-55 CZ 291165 B6
B. Ethyl-l-(2'-deoxy-2',2'-<iifluor-3',5'-di-0-benzoyl-^D-ribofuranosyl}-l,2,4-triazol-5karboxylát (855 mg, 41,5 % teorie).
Příklad 58
Příprava β anomerem obohaceného l-(2-deoxy-2,2-difluor-3',5'-di-0-benzoyl-D-ribofurano$γ1)-β-(2-3ηιΐηο-6-ο1ι1οι·ριιπηπ) v dimethylacetamidu
2-Amino-6-chlorupurin (82,6 mmol, 14,0 g) se suspenduje v dimethylacetamidu (900 ml) a při teplotě 0 °C v prostředí dusíku se přidá práškovitý hydroxid draselný (99,12 mmol, 5,55 g). Směs se míchá po dobu 30 minut za vytvoření roztoku.
Do shora uvedeného roztoku se přidá 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-la-jodid (82,6 mol, 40,31 g) v dimethylacetamidu (450 ml) a směs se nechává ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc v prostředí dusíku.
Produkt se extrahuje přidáním ethylacetátu a solanky, organická vrstva se promyje postupně IN kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a solankou. Organická vrstva se pak vysuší síranem sodným a odpaří se ve vakuu.
Surový produkt se čistí silikagelovou chromatografií, čímž se získá l-(2-deoxy-2,2-difluor-3',5'^ϊ-0-6βηζογ1-Ι>-π6οΛΐΓ3ηο5γ1)-β-(2-3ΠΗηο-6-ο1ι1θΓρυπη) s anomemím poměrem β:α3 : 1.
*H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 4,68 (m, 2H, 4'-H, 5' a-H), 4,90 (m, 1H, 5'b-H), 6,02 (m, 1H, 3'-H), 6,29 (m, 1H, 1Ή), 7,53 (m, 6H, Bz), 7,92 (s, 1H, 8'-H), 8,05 (m, 4H, Bz).
Z dibenzoylového meziproduktu (0,49 mmol, 260 mg) se odstraní chránící skupiny suspendováním v methanolu o teplotě 0 °C a nasycením směsi bezvodým amoniakem. Získaný roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Roztok se pak propláchne dusíkem a odpaří se. Získaný β anomerem obohacený l-(2-deoxy-2,2-diflour-3',5'-di-Oδεηζογ1-0-ΓώοήΐΓ3ηοχγ1)-β-(2-ηιηΐηο-6-ο1ιΙοι·ρυΓΪη) se dále čistí promytím nepolárním rozpouštědlem, jako je například methylenchlorid k odstranění benzoátového vedlejšího produktu. Anomer β se oddělí reverzní fázovou chromatografií HPLC.
’H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 3,90 (m, 3H, 4'-H, 5'-H), 4,58 (m, 1H, 3'-H), 6,27 (dd, 1H, Γ-Η), 8,31 (s, 1H, 8-H).
-56CZ 291165 B6
Příprava 1 a Anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-di-0-benzoyl-l-methansulfonát
Do roztoku 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzátu (40 mg) v CD2C12 (0,5 ml) se přidá triethylamin (0,25 ml). Míchá se při teplotě místnosti po dobu 30 minut, směs se ochladí na teplotu -78 °C a přidá se methansulfonylchlorid (0,01 ml). Reakční teplota se udržuje -78 °C až -80 °C po dobu 30 minut a nechá se ohřát na teplotu místnosti. Chromatografická analýza HPLC potvrzuje, že reakce dokonale proběhla. Anomemí poměr se stanovuje 19F NMR analýzou jako α : β 4 : 1.
Příprava 2 a Anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-diflouor-D-ribofuranosyl-3,5-di-0-benzoyl-l-methansulfonát
Do roztoku 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoátu (60 g, o čistotě 95 %)) v dichlormethanu (600 ml) se přidá triethylamin (31,5 ml, 1 ekvivalent). Míchá se při teplotě místnosti po dobu 30 minut, směs se ochladí na teplotu -78 °C. Po 5 minutách se přidá do směsi methansulfonylchlorid (14,0 ml, 1,2 ekvivalenty) v dichlormethanu (140 ml). Reakční teplota se udržuje -78 až -80 °C v prostředí dusíku po dobu jedné hodiny. Chromatografícká analýza HPLC potvrzuje, že reakce dokonale proběhla. Anomemí poměr α : β podle chromatografícká HPLC analýza je 3,53 : 1.
K izolaci α anomerem obohaceného 2-deoxy-2,2-difluor-D-dibofuranosyl-3,5-di-0-benzoyl1-methansulfonátu se reakční směs promyje vodou, IN roztokem chlorovodíkové kyseliny a 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (vždy 300 ml). Organická vrstva se oddělí a vysuší se bezvodým síranem hořečnatým. α Anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-diflour-D-ribofuranosyl-3,5-di-0-benzoyl-l-methansulfonát (31,5 g) se získá ve výtěžku 46 %. Teplota tání je 88 až 89 °C.
[a]D (c 1,01, Chloroform) + 84,2°.
[«1365^+302,0°.
Elementární analýza pro C2oHi808SF2:
vypočteno: C 52,63; H3,98; R8,33; S 7,02 (456,4);
nalezeno: C 52,92; H3,82; F 8,33; S 7,30.
’H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 3,17 (CH3), 4,66 a 4,76 (C-5H), 4,84 (C-4H), 5,57 (C-3H), 6,3 (C-1H).
13C NMR (300 MHz, CD3OD) δ 40,22 (CH3), 62,51 (C-5H), 71,03 (C-3H), Jc,f = 18,3, 38,5 HZ), 82,75 (C-4H), 99,59 (C-1H, Jc,f = 25,5,48,3 Hz), 122,24 (C-2H, Jc,f = 259,286 Hz).
Příprava 3 α Anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-di-0-benzoyl-l-methansulfonát
-57CZ 291165 B6
Do anomerní směsi 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-di-0-benzoyl-l-methansulfonátu (1 g, 97% β anomer) v acetonitrilu (10 ml) se přidá N,N-dimethylbenzylamoniummethansulfonát (100 mg). Směs se míchá a zahříváním se udržuje na teplotě zpětného toku. Chromatografické analýzy HPLC se používá ke stanovení poměru α : β. Zjištěny následující hodnoty:
Doba (hodiny) Poměr α : β
1,0:32,0
1,0:1,4
2,3 : 1,0
Příprava 4 α Anomerem obohacený 2-deoxy-2,2-diflour-D-ribofuranosyl-3,5-di-O-benzoyl-l-methansulfonát
Anomemí směs 2-deoxy-2,2-difluor-D-ribofuranosyl-3,5-di-0-benzoy-l-methansulfonátu (29,1 g, 50% β anomer) v dichlormethanu a n-propylacetátu se zahříváním udržuje na teplotě 90 °C k odstranění dichlormethanu. Směs se pak ochladí na teplotu 50 až 60 °C a přidá se směs triethylaminu (5,33 ml, 0,55 ekvivalentu) a methansulfonové kyseliny (2,04 ml, 0,55 ekvivalentu) v n-propylacetátu (2 ml). Získaná směs se zahřeje na teplotu 95 až 97 °C a míchá se. Směs obsahuje 23,2 g 2-deoxy-2,2-difluour-D-ribofuranosyl-3,5-di-0-benzoyl-l-methansulfonátu. Chromatografické analýzy HPLC se používá ke stanovení poměru α: β. Zjištěny následující hodnoty.
Doba (hodiny)___________Poměr α : β
Průmyslová využitelnost
Způsob stereoselektivní glykosylace pro přípravy β anomeru fluomukleosidů cestou SN2 přesunu anomemí sulfonyloxyskupiny α anomerem obohaceného fluoruhlohydrátu s nukleobází.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (13)
1. Způsob stereoselektivní glykosylace pro přípravu ^ anomerem obohaceného nukleosidu obecného vzorce I
HO,
HO ve kterém
T znamená atom vodíku nebo fluoru a (I)
-58CZ 291165 B6
R znamená zbytek nukleobáze ze souboru zahrnujícího i
-59CZ 291165 B6 kde
R] znamená atom vodíku, Q-C7 alkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň jednou skupinou vybranou ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, toluoylovou skupinu, nitroskupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, C!-C7 alkylovou skupinu a di(Ci-C7alkyl)aminoskupinu; nebo znamená atom halogenu;
R2 znamená hydroxyskupinu, atom halogenu, azidoskupinu, Q-C7 alkylaminoskupinu nebo di(C]-C7 alkyl)aminoskupinu;
R3 znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
Rj, R5 a Ré, znamenají na sobě nezávisle atom vodíku, hydroxyskupinu, aminoskupinu, nebo skupinu N(Ci-C7alkyl)W, kde W znamená skupinu chránící aminoskupinu; atom halogenu, C1-C7 alkoxyskupinu nebo thio(Ci-C7)alkylovou skupinu;
R7 znamená atom vodíku, atom halogenu, kyanoskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu, Ci-Calkoxyskupinu (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, thio(Ci-C7 alkyl)ovou skupinu, thiokarboxamidoskupinu nebo karboxamidoskupinu;
Q znamená skupinu Ch, CRg nebo atom dusíku, kde R8 znamená atom halogenu, karboxamidoskupinu, thiokarboxamidoskupinu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu nebo kyanoskupinu, vyznačující se tím, že se provádí SN2 nukleofilní přesun sulfonyloxyskupiny symbolu Y z a anomerem obohaceného sacharidu obecného vzorce II (II), ve kterém
X znamená na sobě nezávisle skupinu chránící hydroxyskupinu a
T má shora uvedený význam, tak, že se na a anomerem obohacený sacharid obecného vzorce II, popřípadě ve vhodném rozpouštědle, působí alespoň jedním molámím ekvivalentem nukleobáze R“ zvolené ze souboru zahrnujícího
-60CZ 291165 B6
-61 CZ 291165 B6
5 v kterýchžto vzorcích
Ri až R7 a Q mají shora uvedený význam;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu;
W znamená skupinu chránící aminoskupinu; a
M+ znamená kation alkalického kovu;
15 načež se chránící skupiny odstraní.
-62CZ 291165 B6
2. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že se nukleobáze R“ zvolí ze souboru zahrnujícího v kterýchžto vzorcích
Ri znamená atom vodíku, C]-C7 alkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň jednou skupinou zvolenou ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, toluoylovou skupinu, nitroskupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu a di(Ci-C7 alkyl)aminoskupinu;
R3 znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu;
15 W znamená skupinu chránící aminoskupinu; a
-63CZ 291165 B6
Y znamená C]-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, substituovanou C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, substituovanou arylsulfonyloxyskupinu, kde substituující částí je alespoň jeden atom halogenu nebo nitroskupina;
přičemž reakce se provádí v roztoku o koncentraci sacharidu nad 20 % hmotnostních na jednotku objemu rozpouštědla a ve vysokovroucím inertním rozpouštědle.
3. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že se nukleobáze R“ zvolí ze souboru zahrnujícího v kterýchžto vzorcích
Rj znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň jednou skupinou zvolenou ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, toluoylovou skupinu, nitroskupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu a di(Ci-C7)alkylaminoskupinu; nebo znamená atom halogenu;
R2 znamená hydroxyskupinu, atom halogenu, azidoskupinu, C1-C7 alkylaminoskupinu nebo di(Ci-C7 alkyl)aminoskupinu;
R3 znamená atom vodíku, Ci-C7alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu;
W znamená skupinu chránící aminoskupinu; a
Y znamená trifluormethansulfonyloxyskupinu, trifluorethansulfonyloxyskupinu, oktafluorbutansulfonyloxyskupinu nebo nonafluorbutansulfonyloxyskupinu;
-64CZ 291165 B6 přičemž se reakce provádí při teplotě od -120 do 25 °C a v inertním rozpouštědle s nízkou teploto tání.
5 4. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se nukleobáze R zvolí ze souboru zahrnujícího v kterýchžto vzorcích
10 Ri znamená atom vodíku, C]-C7 alkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň jednou skupinou zvolenou ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, toluoylovou skupinu, nitroskupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu a di(C]-C7 alkyl)aminoskupinu;
15 R3 znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu,
-65CZ 291165 B6
W znamená skupinu chránící aminoskupinu; a
Y znamená C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, substituovanou C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, substituovanou arylsulfonyloxyskupinu, kde substituující částí je 5 alespoň jeden atom halogenu nebo nitroskupina;
přičemž reakce se provádí v přítomnosti katalyzátoru.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že katalyzátor se zvolí ze souboru 10 zahrnujícího vysoce ionizované soli, které jsou rozpustné v reakčním rozpouštědle a obsahující nenukleofílní anion.
6. Způsob podle nároku 4 nebo 5, vyznačující se tím, že rozpouštědlem je polární nenukleofílní rozpouštědlo.
7. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se nukleobáze R“ zvolí ze souboru zahrnujícího v kterýchžto vzorcích
R2 znamená hydroxyskupinu, atom halogenu, azidoskupinu, C1-C7 alkylaminoskupinu nebo di(Ci—C7 alkyl)aminoskupinu;
R3 znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
R4, R5 a Ré znamenají na sobě nezávisle atom vodíku, hydroxyskupinu, aminoskupinu, skupinu vzorce N(C]-C7 alkyl)W,
-66CZ 291165 B6 kde W znamená skupinu chránící aminoskupinu;
nebo znamená atom halogenu, Cj-C7alkoxyskupinu nebo thio(Ci-C7 alkyl)ovou skupinu;
R.7 znamená atom vodíku, atom halogenu, kyanoskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, thio(C1-C7 alkyl)ovou skupinu, thiokarboxamidoskupinu nebo karboxamidoskupinu;
Q znamená skupinu CH, CRg nebo atom dusíku, kde Rg znamená atom halogenu, karboxamidoskupinu, thiokarboxamidoskupinu, (C|—C7 alkoxy)karbonylovou skupinu nebo kyanoskupinu;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu;
W znamená skupinu chránící aminoskupinu;
M+ znamená kation alkalického kovu; a
Y znamená trifluormethansulfonyloxyskupinu, trifluorethansulfonyloxyskupinu, oktafluorbutansulfonyloxyskupinu nebo nonafluorbutansulfonyloxyskupinu;
přičemž se reakce provádí v inertním rozpouštědle s nízkou teplotu tání.
8. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že se nukleobáze R“ zvolí ze souboru zahrnujícího v kterýchžto vzorcích
Ri znamená atom vodíku, Ci-C7 alkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň jednou skupinou zvolenou ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, toluoylovou skupinu nitroskupinu, C]-C7 alkoxyskupinu, Ci-C7 alkylovou skupinu a di(C]-C7 alkyl)aminoskupinu; nebo znamená atom halogenu;
R3 znamená atom vodíku, Ci-C7 alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu;
15 W znamená skupinu chránící aminoskupinu; a
-68CZ 291165 B6
Y znamená C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, substituovanou C|-C7 alkylsulfonyloxyskupinu. substituovanou arylsulfonyloxyskupinu, kde substituující částí je alespoň jeden atom halogenu nebo nitroskupina;
5 přičemž reakce se provádí v nepřítomnosti rozpouštědla.
9. Způsob podle nároku 8, v v z n a č u j í c í se t í m , že se reakce provádí při teplotě od 100 do 160 °C.
10 10. Způsob podle nároku 1, v y z n a č u j í c í se tím, že se nukleobáze R“ zvolí ze souboru zahrnujícího
-69CZ 291165 B6
a.
mP v kterýchžto vzorcích
Ri znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu, popřípadě substituovanou alespoň jednou skupinou zvolenou ze souboru zahrnujícího kyanoskupinu, atom halogenu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu, toluoylovou skupinu, nitroskupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu a di(Ci-C7 alkyl)aminoskupinu; nebo znamená atom halogenu;
R2 znamená hydroxyskupinu, atom halogenu, azidoskupinu, C1-C7 alkylaminoskupinu nebo di(C]-C7 alkyl)aminoskupinu;
R3 znamená atom vodíku, C1-C7 alkylovou skupinu nebo atom halogenu;
R4, R5 a Ra znamenají na sobě nezávisle atom vodíku, hvdroxyskupinu, aminoskupinu, skupinu vzorce N(C]-C7 alkyl)W, kde W znamená skupinu chránící aminoskupinu;
nebo znamená atom halogenu, C1-C7 alkoxyskupinu nebo thio(Ci-C7 alkyl)ovou supinu;
R7 znamená atom vodíku, atom halogenu, kyanoskupinu, C1-C7 alkylovou skupinu, C1-C7 alkoxyskupinu, (Cj-C? alkoxy)karbonylovou skupinu, thio(Ci-C7 alkyl)ovou skupinu, thiokarboxamidoskupinu nebo karboxamidoskupinu;
Q znamená skupinu CH, CRg nebo atom dusíku;
kde Rg znamená atom halogenu, karboxamidoskupinu, thiokarboxamidoskupinu, (C1-C7 alkoxy)karbonylovou skupinu nebo kyanoskupinu;
Z znamená skupinu chránící hydroxyskupinu;
W znamená skupinu chránící aminoskupinu;
M+ znamená kation alkalického kovu; a
Y znamená C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, substituovanou C1-C7 alkylsulfonyloxyskupinu, substituovanou aiylsulfonyloxyskupinu, přičemž substituující částí je alespoň jeden atom halogenu nebo nitroskupina;
a reakce se provádí v nepřítomnosti rozpouštědla.
-70CZ 291165 B6
11. Způsob podle některého z nároků 1 až 10, vyznačuj ící se tím, že odpovídajících výchozích látek připravuje sloučenina vzorce se za použití
5
12. Způsob podle některého z nároku 1 až 11, vyznačující se tím, skupinou X ve sloučenině obecného vzorce II je benzoylová skupina.
13. Způsob podle některého z nároků 1 až 12, vyznačující se tím, skupinou X ve sloučenině obecného vzorce II je methansulfonyloxyskupina.
14. Způsob podle některého z nároků 1 až 13, vyznačující se tím. skupinou X ve sloučenině obecného vzorce lije trifluormethansulfonyloxyskupina.
že chránící že chránící že chránící
Konec dokumentu
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US90231392A | 1992-06-22 | 1992-06-22 | |
| US90230292A | 1992-06-22 | 1992-06-22 | |
| US07/902,312 US5371210A (en) | 1992-06-22 | 1992-06-22 | Stereoselective fusion glycosylation process for preparing 2'-deoxy-2',2'-difluoronucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoronucleosides |
| US08/044,996 US5821357A (en) | 1992-06-22 | 1993-04-07 | Stereoselective glycosylation process for preparing 2'-deoxy-2',2'-difluoropurine and triazole nucleosides |
| US08/044,343 US5401838A (en) | 1992-06-22 | 1993-04-07 | Stereoselective fusion glycosylation process for preparing 2'-deoxy-2',2'-difluoronucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoronucleosides |
| US08/044,345 US5594124A (en) | 1992-06-22 | 1993-04-07 | Stereoselective glycosylation process for preparing 2'-Deoxy-2',2'-difluoropyrimidine nucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoropyrimidine nucleosides and intermediates thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ123393A3 CZ123393A3 (en) | 1994-02-16 |
| CZ291165B6 true CZ291165B6 (cs) | 2003-01-15 |
Family
ID=27556468
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19931233A CZ291165B6 (cs) | 1992-06-22 | 1993-06-21 | Způsob stereoselektivní glykosylace |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ291165B6 (cs) |
-
1993
- 1993-06-21 CZ CZ19931233A patent/CZ291165B6/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ123393A3 (en) | 1994-02-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2098881C (en) | Stereoselective glycosylation process | |
| US6403566B1 (en) | Nucleosides having bicyclic sugar moiety | |
| EP0577304B1 (en) | Stereoselective anion glycosylation process | |
| US5821357A (en) | Stereoselective glycosylation process for preparing 2'-deoxy-2',2'-difluoropurine and triazole nucleosides | |
| JP2008531680A (ja) | βアノマーが富化された２１−デオキシ−２１，２１−ジフルオロ−Ｄ−リボフラノシルヌクレオシドの調製のための中間体と方法 | |
| AU2010291893B2 (en) | Synthesis of decitabine | |
| AU2002303187B2 (en) | Process for the preparation of 2'-HALO-Beta-L-arabinofuranosyl nucleosides | |
| EP0640614B1 (en) | Stereoselective process for preparing beta-anomer enriched 2-deoxy-2, 2-difluoro-d-ribofuranosyl-3, 5-hydroxy protected-1-alkyl and aryl sulfonate intermediates | |
| JPH09328497A (ja) | ４’−フルオロメチルヌクレオシド | |
| KR20200100033A (ko) | 변형된 뉴클레오시드 포스포르아미다이트 | |
| CZ291165B6 (cs) | Způsob stereoselektivní glykosylace | |
| Olsen et al. | Synthesis and evaluation of anti-HIV-1 activity of 3′-azido-3′-deoxy-2′-O, 4′-C-methylene-linked bicyclic thymine nucleosides | |
| RU2131880C1 (ru) | Способ получения обогащенных бета-аномером нуклеозидов | |
| AU659009B2 (en) | Stereoselective glycosylation process | |
| AU659008B2 (en) | Stereoselective anion glycosylation process | |
| JPH11217396A (ja) | ヌクレオシド誘導体の製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20130621 |