CZ280690B6 - Nové analogy karboxyterminálního oktapeptidu (B23-B30) B-řetězce lidského insulinu - Google Patents
Nové analogy karboxyterminálního oktapeptidu (B23-B30) B-řetězce lidského insulinu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ280690B6 CZ280690B6 CS92604A CS60492A CZ280690B6 CZ 280690 B6 CZ280690 B6 CZ 280690B6 CS 92604 A CS92604 A CS 92604A CS 60492 A CS60492 A CS 60492A CZ 280690 B6 CZ280690 B6 CZ 280690B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- group
- chain
- thr
- amino
- pac
- Prior art date
Links
- 101500025354 Homo sapiens Insulin B chain Proteins 0.000 title claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 22
- -1 phenyl acetyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 21
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 10
- DQLHSFUMICQIMB-SECBINFHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-(4-methylphenyl)propanoate Chemical compound CC1=CC=C(C[C@@H](N)C(O)=O)C=C1 DQLHSFUMICQIMB-SECBINFHSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims abstract description 5
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229930182832 D-phenylalanine Natural products 0.000 claims abstract description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 19
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 8
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 5
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 2
- GFRIEEKFXOVPIR-RHYQMDGZSA-N Thr-Pro-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O GFRIEEKFXOVPIR-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 7
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 abstract description 5
- AWKDBHFQJATNBQ-SNVBAGLBSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-(4-ethylphenyl)propanoate Chemical compound CCC1=CC=C(C[C@@H](N)C(O)=O)C=C1 AWKDBHFQJATNBQ-SNVBAGLBSA-N 0.000 abstract description 4
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 abstract description 3
- 230000004075 alteration Effects 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 11
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 9
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical class N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZYJPUMXJBDHSIF-LLVKDONJSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZYJPUMXJBDHSIF-LLVKDONJSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCC(O)=O VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical class OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 125000002435 L-phenylalanyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SCIFESDRCALIIM-VIFPVBQESA-N N-methyl-L-phenylalanine Chemical compound C[NH2+][C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 SCIFESDRCALIIM-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- NROKBHXJSPEDAR-UHFFFAOYSA-M potassium fluoride Chemical compound [F-].[K+] NROKBHXJSPEDAR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- WGJUFIXHTBAMBX-BYPYZUCNSA-N (2s)-2,6,6-triaminohexanoic acid Chemical compound NC(N)CCC[C@H](N)C(O)=O WGJUFIXHTBAMBX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ZYJPUMXJBDHSIF-NSHDSACASA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZYJPUMXJBDHSIF-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- QKEWQOJCHPFEAF-YFKPBYRVSA-N (3S)-3,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCCC[C@H](N)CC(O)=O QKEWQOJCHPFEAF-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWKDBHFQJATNBQ-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-3-(4-ethylphenyl)propanoate Chemical compound CCC1=CC=C(CC(N)C(O)=O)C=C1 AWKDBHFQJATNBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DQLHSFUMICQIMB-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-3-(4-methylphenyl)propanoate Chemical compound CC1=CC=C(CC(N)C(O)=O)C=C1 DQLHSFUMICQIMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JYRWNPUFECDJCX-UHFFFAOYSA-N 3-(4-methylphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC1=CC=C(CC(NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 JYRWNPUFECDJCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 125000006251 butylcarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- NFLWUMRGJYTJIN-UHFFFAOYSA-N n-[1-[(2-amino-2-oxoethyl)amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]-1-[7-(2-amino-2-oxoethyl)-10-(3-amino-3-oxopropyl)-13-benzyl-16-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carbonyl]pyrrolidi Chemical compound N1C(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)CCSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(=O)N)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 NFLWUMRGJYTJIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 235000003270 potassium fluoride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011698 potassium fluoride Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Analogy obecného vzorce Gly -X - Y - Tyr- Thr- Pro -Lys(Pac) -Thr 23 24 25 26 27 28 29 30 kde X, Y = L či D-fenylalanin, L či D-p-methyl- fenylalanin, L či D-p-ethylfenylalanin. Pac je fenylacetylová skupina, se připraví synthesou v pevné fázi při použití Boc/Bzl chránící strategie N--primárních NH.sub.2.n.-skupin z hydroxy- benztriazolových esterů jednotlivých aminokyselin. Postranní funkční skupiny jsou chráněny dalšími chránícími skupinami, a to hydroxyl tyrosinu skupinou 2,5-dichlorbenzyloxy- karbonylovou, hydroxyl threninu skupinou benzylovou a .SIGMA.-aminoskupina lysinu skupinou fenylacetylovou. Syntetisované peptidy se uvolní z nosiče kapalným fluorovodíkem v přítomnosti anisolu, kdy dojde též k odštěpení chránících skupin z hydroxylu ryrosinu a threoninu. Peptidy jsou dále čištěny a isolovány vysoko účinnou kapalinovou chromatografií.ŕ
Description
(57) Anotace:
Analogy karboxyterminálního oktapeptidu (B23, B-30) B řetězce lidského Insulinu s alternací aminokyselin v posici B-24 a/nebo B-25 řetězce a s ε-aminoskupinou lysinu v posici B-29 řetězce chráněnou enzymově odštěpitelnou fenylacetylovou skupinou obecného vzorce I
Gly - X - Y - Tyr - Thr - Pro - Lys(Pac) - Thr
24 25 26 27 28 29 30 (I) kde X a Y Jsou zbytky aminokyselin ze skupiny zahrnující L a D-fenylalanin, L a D-p-methylfenylalanin, L a D-p-ethylfenylalanin a Pac je fenylacetylová skupina, a způsob Jejich přípravy.
Analogy karboxyterminálního oktapeptidu (B23-B30) B-řetězce lidského inzulínu
Oblast techniky
Předmětem řešení jsou nové analogy karboxyterminální sekvence B-řetězce lidského inzulínu.
Dosavadní stav techniky
Pro přípravu nových analogů lidského inzulínu je kromě organické syntézy peptidů stále více využívána metoda enzymové semisyntézy. Semisyntetická metoda aplikovaná na analogy inzulínu je podmíněna vhodností primární sekvence dané peptidové oblasti. V případě inzulínu je to karboxyterminální oblast B-řetězce inzulínu, která předurčuje trypsin a jemu podobné enzymy k modifikaci, a to jak karboxyterminální aminokyseliny nacházející se za lysinem v pozici 29, tak k inzerci modifikovaného peptidů nacházejícího se v pozicích 23 až 30 za argininem B-22. Syntéza peptidové vazby mezi desoktapeptidinzulinem a požadovaným peptidem obsahujícím chráněný lysin je katalyzována trypsinem, vyžaduje však chránění e-aminoskupiny lysinu vhodnou skupinou, tak, aby nedocházelo k tvorbě peptidové vazby mezi desoktapeptidinzulinem a požadovaným oktapeptidem via e-aminoskupinou lysinu namísto s primární skupinou glycinu v poloze B-23.
K chránění e-aminoskupiny lysinu byla fenylacetylová skupina použita při přípravě /8-L-lysin/ deaminovasopresinu ( čs. autorské osvědčení č. 218 777). Výhodnost použití této skupiny je dáno mírnými podmínkami její eliminace penicilinamidohydrolázou.
Charakter aminokyselin v pozicích B-24 a B-25 je určující pro biologickou aktivitu v analozích lidského inzulínu, a to především u nezkráceného inzulínu.
(H. Kobayashi et al. BBRC 107, 329 až 336, 1982 a R. G. Mirmira et al., J. Biol. Chem. 266, 1428 až 1436, 1991).
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou analogy karboxyterminální sekvence B-řetězce lidského inzulínu s alternací aminokyselin v pozici B-24 a/nebo B-25 řetězce a s e-aminoskupinou lysinu v pozici B-29 řetězce chráněnou enzymově odštěpitelnou fenylacetylovou skupinou obecného vzorce I
Gly - X - Y - Tyr - Thr - Pro - Lys(Pac) - Thr
24 25 26 27 28 29 30 (I) kde, X a Y jsou zbytky aminokyselin ze skupiny zahrnující L a D-fenylalanin, L a D-p-methylfenylalanin, L a D-p-ethylfenylalanin a Pac je fenylacetylová skupina.
Peptidy se připraví syntézou v pevné fázi při použití terč, butylkarbonyl/benzyl (Boc/Bzl) chránící strategie N-a-primárních NH2~skupin z hydroxybenztrirazolových esterů jednotlivých amino
-1CZ 280690 B6 kyselin. Postranní funkční skupiny jsou chráněny dalšími chránícími skupinami, a to hydroxyl tyrosinu skupinou 2,5-dichlorbenzylkarbonylovou, hydroxyl threoninu skupinou benzylovou a e-aminoskupina lysinu skupinou fenylacetylovou. Syntetizované peptidy se uvolní z nosiče kapalným fluorovodíkem v přítomnosti anisolu, kdy dojde také k odštěpení chránících skupiny z hydroxylu tyrosinu a threoninu. Peptidy jsou dále čištěny a izolovány vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií.
Pro přípravu jednotlivých látek bylo použito obecné schéma, jež se pro připojení jednotlivých aminokyselinových zbytků opakuje.
Schéma syntetického postupu
Cyklus připojení chráněné aminokyseliny k peptidickému řetězci na nosiči lze popsat tímto schématem:
1. Odštěpení Boc skupiny 20 ml kyseliny trifluoroctové (TFA) po dobu 2 min, opakované po 10 min.
2. Promytí dichlormethanem (2x20 ml, 1 promytí 20 sekund).
3. Neutralizace 10% diisopropylethylaminu (20 ml) v dichlormethanu (2x1 min).
4. Promytí dimethylformamidem (DMF) (2x20 ml, cyklus 20 sekund)
5. Přidání hydroxybenztriazolového esteru chráněné aminokyseliny v DMF do negativního ninhydrinového testu.
6. Promytí 50% ethanolem (EtOH) (2x20 ml, cyklus 20 sekund) v dichlormethanu.
Při přípravě diastereoizomerních směsí analogů s D,L-p-ethylfenylalaninem a D,L-p-methylfenylalaninem byl použit pouze 1.1 molární přebytek terč.butyloxykarbonyl-D,L-p-methylfenylalaninu· V ostatních případech byl použit 3 molární přebytek.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Příprava Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro-L-Lys(Pac)-L-Thr
Látka byla připravena v pevné fázi na chlormethylovaném polystyrénovém nosiči síťovaném 1% divinylbenzenu (0,96 mmol Cl/g). Karboxykoncový threonin byl připojen kaliumfluoridovou metodou (Horiki, K. a spol. Chem. Letters 1979, 165). Obsah navázané kyseliny byl stanoven aminokyselinovou analýzou a činil 0,56 mmol/g. K syntéze bylo použito 0,54 g (0,3 mmol) esterífikovaného nosiče.
Hydroxybenztriazolové estery Boc-chráněných aminokyselin byly připraveny před kopulační reakcí mícháním směsi 0,9 mmol chráněné aminokyseliny, 0,9 mmol hydroxybenztriazolu (HOBt.H2O)
-2CZ 280690 B6 a 0,9 mmol dicyklobenzylkarbodiimidu (DCC) v dichlormethanu (CH2C12). Po 20 minutách při 20 C byla odsáta vzniklá dicyklohexylmočovina a roztok v chladu za vakua zahuštěn na cca 3 ml a doplněn na 10 ml DMF. Jednotlivé aminokyseliny byly připojeny podle sledu peptidového řetězce způsobem podle shora uvedeného postupu. Z důvodů urychlení reakce bylo v některých případech přidáno 50 mg 4-dimethylaminopyridinu. Po 5 minutách byla reakční směs odsáta, promyta 50 % EtOH a testována Kaiserovým testem (Kaiser, E. a spol., Anal. Biochem. 34, 595, 1970). Po připojení aminokoncového glycinu byla jeho Boc skupina odštěpena TFA a reakce dovedena do kroku 4 syntetického postupu. Po promytí EtOH a pečlivém vysušení bylo odštěpení peptidu od pryskyřice provedeno kapalným fluorovodíkem (HF) s přídavkem 10% anisolu (20 ml HF, 1 h, 0 °C) v teflonové aparatuře. Po vyfoukání HF a promytí pryskyřice etherem byl vzniklý peptid rozpuštěn v 100 ml 20% kyseliny octové a lyofilizován.
Surový peptid byl vyčištěn na vysoceúčinné kapalinové chromatografii (HPLC) (Separon C-18) v systému H2O (0,5% TFA), methanol (MeOH) s gradientem MeOH 1% - min. počínaje 30% MeOH. Produkt byl izolován a lyofilizován. Výtěžek 149 mg (46 %). Aminokyselinová analýza: Gly 1,09, Phe 1,99, Tyr 0,98, Thr, 2,02, Pro 0,87, Lys 1,04.
Příklad 2
Příprava Gly-D-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro-L-Lys(Pac)-L-Thr
Na pryskyřici s navázaným hexapeptidem byl připojen podle obecného schématu 1,1 ekvivalent Boc-D-phenylalaninu po 24 h, a dále jeden ekvivalent chráněné aminokyseliny v přítomnosti dimethylaminopyridinu po 30 min. Po navázání celého oktapeptidu na pryskyřici bylo další zpracování analogické příkladu 1. Surový peptid byl vyčištěn na HPLC (Separon C-18) v systému H2P (0,05% TFA/MeOH) s gradientem MeOH 1% - min. počínaje 30% MeOH. Produkt byl isolován a lyofilisován. Výtěžek 187,2 mg. Aminokyselinová analýza: Gly 0,48, Phe 2,10, Tyr 0,94, Thr 2,11, Lys 1,07, Pro 0,80.
Příklad 3
Příprava Gly-L-Phe-D-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro-L-Lys(Pac)-L-Thr
Na pryskyřici s navázaným pentapeptidem byl připojen Boc-D-fenylalanin podle schéma v 1,1 ekvivalentu a reagoval 24 h. Potom reagoval ještě s jedním ekvivalentem v přítomnosti dimethylaminopyridinu po 30 min. Boc-fenylalanin a Boc-glycin byly připojeny podle obecného schéma. Po navázání celého oktapeptidu na pryskyřici bylo provedeno odštěpení a čištění peptidu podle příkladu 1. Výtěžek 65 mg. Aminokyselinová analýza: Gly 1,05, Phe 1,78, Tyr 1,17, Thr 1,95, Pro 0,90, Lys 1,10.
-3CZ 280690 B6
Příklad 4
Příprava Gly-D-Phe-D-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro-L-Lys(Pac)-L-Thr
Na pryskyřici s navázaným pentapeptidem byl připojen Boc-D-fenylalanin, podle obecného schéma a postupu uvedeného v příkladě 3. Další Boc-D-fenylalanin a Boc-glycin byly připojeny podobně jako v příkladu 3. Výtěžek peptidů byl 158 mg. Aminokyselinová analýza: Gly 1,00, Phe 2,09, Tyr 1,01, Thr 1,88, Pro 0,99, Lys 1,01.
Příklad 5
Příprava Gly-D,L-p-ethyl-Phe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro-L-Lys(Pac)-L-Thr
Na pryskyřici s navázaným hexapeptidem bylo připojováno podle schéma 1,1 ekvivalentu Boc-L,D-p-ethylfenylalaninu po 24 hodin a potom ještě jeden ekvivalent v přítomnosti dimethylaminopyridinu po 30 min. Po navázání celého oktapeptidu na pryskyřici bylo další zpracování analogické příkladu 1. Lyofilizaci bylo získáno 58 mg produktu. Získaný peptid je racemát a byl proto rozdělen pomocí kapalinové chromatografie na L- a D-formu. Byla použita modulární sestava firmy Knauer (SRN). Kolona byla naplněna Sepharonem SG-X-C18 (10 μιη, 250x16 mm). Peptid byl nastřikován v množství 5 mg a vymýván koncentračním gradientem MeOH (start 40% MeOH, 1%/1 min). Pohyblivost L-formy (11,24 min), D-formy (12,52) min). L-formy bylo získáno 15 mg, D-formy 11 mg.
Aminokyselinová analýza: L-forma Gly, 0,98, EtPhe 0,80, Phe 1,07, Tyr 0,98, Thr 2,01, Pro 1,08, Lys 1,15
D-forma Gly 1,05, EtPhe 0,86, Phe 1,12, Tyr 0,96, Thr 1,99, Pro 1,04, Lys 0,96.
Přiklad 6
Příprava Gly-L,D-p-MePhe-L-Phe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro-L-Lys(Pac)-L-Thr
Na pryskyřici s navázaným hexapeptidem byl Boc-L,D-p-methyl-fenylalanin připojen analogicky příkladu 2. Také další zpracování peptidů bylo obdobné. Pohyblivost L-formy byla větší (13,42 min) než D-formy (15,42 min) L-derivátu bylo získáno 8,2 mg a D-derivátu 7,1 mg. Aminokyselinová analýza: L-forma Gly 0,92, MePhe 0,88, Phe 1,09, Tyr 0,89, Thr 2,05, Pro 1,12, Lys 1,02.
Příklad 7
Příprava Gly-L-Phe-L,D-p-MePhe-L-Tyr-L-Thr-L-Pro-L-Lys(Pac)-L-Thr
Na pryskyřici s navázaným pentapeptidem byl Boc-L,D-p-methyl-fenylalanin připojen analogicky příkladu 2. Také další zpracování peptidů bylo obdobné. Pohyblivost L-formy byla větší (14,20 min) než D-formy (16,28 min). L-derivátu bylo získáno 7,1 mg a D-derivátu 5,6 mg. Aminokyselinová analýza: L-forma Gly 0,98, MePhe 0,91, Phe 1,13, Tyr 0,91, Thr 2,13, Pro 0,94, Lys 0,89.
Claims (2)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Analogy karboxyterminálního oktapeptidu (B-23, B-30) B řetězce lidského inzulínu s alternací aminokyselin v pozici B-24 a/nebo B-25 řetězce a s e-aminoskupinou lysinu v pozici B-29 řetězce chráněnou enzymově odštěpitelnou fenylacetylovou skupinou obecného vzorce IGly - X - Y - Tyr23 24 25 26ThrPro - Lys(Pac) - Thr28 29 30 (I) aminokyselin ze skupiny azbytkyL a D-p-methylfenylalanin, L kde X a Y jsouL a D-fenylalanin, fenylalanin a Pac je fenylacetylové skupina.zahrnující D-p-ethylsyntézou na N-terminální jednotlivých
- 2. Způsob přípravy analogů vzorce I podle nároku 1 pevném nosiči, vyznačený tím, že se aminové skupiny z hydroxybenztriazolových esterů aminokyselin chrání pomocí kombinace Boc/Bzl chránících skupin, přičemž aminokyseliny s postranními funkčními skupinami se chrání dalšími chránícími skupinami, a to hydroxyl tyrosinu skupinou 2,5-dichlorbenzyloxykarbonylovou, hydroxyl threoninu skupinou benzylovou a e-aminoskupina lysinu skupinou fenylacetylovou, potom se hotové analogy po výstavbě v pevné fázi uvolní kapalným fluorovodíkem za přítomnosti anisolu, a peptidy se dále čistí a izolují, zejména vysoce účinnou kapalinovou chromatograf ií.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS92604A CZ280690B6 (cs) | 1992-02-28 | 1992-02-28 | Nové analogy karboxyterminálního oktapeptidu (B23-B30) B-řetězce lidského insulinu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS92604A CZ280690B6 (cs) | 1992-02-28 | 1992-02-28 | Nové analogy karboxyterminálního oktapeptidu (B23-B30) B-řetězce lidského insulinu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ60492A3 CZ60492A3 (en) | 1993-12-15 |
| CZ280690B6 true CZ280690B6 (cs) | 1996-04-17 |
Family
ID=5338429
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS92604A CZ280690B6 (cs) | 1992-02-28 | 1992-02-28 | Nové analogy karboxyterminálního oktapeptidu (B23-B30) B-řetězce lidského insulinu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ280690B6 (cs) |
-
1992
- 1992-02-28 CZ CS92604A patent/CZ280690B6/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ60492A3 (en) | 1993-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4786684A (en) | Benzylthioether-linked solid support-bound thiol compounds and method for peptide synthesis | |
| JP2679786B2 (ja) | 非ペプチド結合を有するペプチド合成方法 | |
| US5856440A (en) | Solid phase process for synthesizing thymosin α1 | |
| Nakagawa et al. | Synthesis of protected peptide segments and their assembly on a polymer-bound oxime: application to the synthesis of a peptide model for plasma apolipoprotein AI | |
| Hojo et al. | The first synthesis of peptide thioester carrying N-linked core pentasaccharide through modified Fmoc thioester preparation: synthesis of an N-glycosylated Ig domain of emmprin | |
| Maerki et al. | Total solid-phase synthesis of porcine gut gastrin releasing peptide (GRP), a mammalian bombesin | |
| FI79860C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av humaninsulin des-pheb1-humaninsulin eller derivat daerav ur svininsulin, des-pheb1-svininsulin eller derivat daerav. | |
| US4866039A (en) | Peptides containing the 18 to 23 residues of vasoactive intestinal peptide, and analogues | |
| EP0082568B1 (en) | Retro-inverso analogues of c-terminal penta and hexapeptides of substance p. | |
| US4965343A (en) | Method of peptide synthesis | |
| Wang et al. | SOLID PHASE SYNTHESIS OF BOVINE PITUITARY GROWTH HORMONE‐(123–131) NONAPEPTIDE | |
| Žáková et al. | The use of Fmoc‐Lys (Pac)‐OH and penicillin G acylase in the preparation of novel semisynthetic insulin analogs | |
| US4397842A (en) | Peptides having thymopoietin-like activity | |
| Atherton et al. | Peptide synthesis. Part 6. Protection of the sulphydryl group of cysteine in solid-phase synthesis using N α-fluorenylmethoxycarbonylamino acids. Linear oxytocin derivatives | |
| EP0185320B1 (en) | Partially modified, retro-inverso neurotensin analogs | |
| WO1994018233A1 (en) | Thymosin alpha-1 derivatives | |
| Hemmasi et al. | Coupling of Glutamine by the Carbodiimide Method in the Solid-Phase Synthesis of two C-Terminal Peptides of Secretin | |
| US6448031B1 (en) | Process for producing LH-RH derivatives | |
| CZ280690B6 (cs) | Nové analogy karboxyterminálního oktapeptidu (B23-B30) B-řetězce lidského insulinu | |
| RU2010799C1 (ru) | Производные пентапептидов | |
| AU607212B2 (en) | Analogs of (1,7-DI-Alanine, des-19-leucine) | |
| SE446866B (sv) | Sett att framstella en aktiv polypeptid med formaga att inducera differentiering av bade t-lymfocyter och komplementreceptor (cr?72+) b-lymfocyter | |
| US4258152A (en) | Pentapeptide modified resin | |
| CZ280695B6 (cs) | Analogy karboxyterminálního oktapeptidu B-23-B-30 B-řetězce lidského insulinu s modifikací v poloze B-24 a B-25 | |
| Uchida et al. | Substance P analogs containing homoglutamine at position 5 and 6 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20020228 |