CZ27193U1 - Sady primerů pro stanovení odrůdové pravosti česneku analýzou mikrosatelitů (SSR) - Google Patents
Sady primerů pro stanovení odrůdové pravosti česneku analýzou mikrosatelitů (SSR) Download PDFInfo
- Publication number
- CZ27193U1 CZ27193U1 CZ2014-29050U CZ201429050U CZ27193U1 CZ 27193 U1 CZ27193 U1 CZ 27193U1 CZ 201429050 U CZ201429050 U CZ 201429050U CZ 27193 U1 CZ27193 U1 CZ 27193U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- microliters
- dna
- garlic
- pcr
- analysis
- Prior art date
Links
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 title claims description 20
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims description 14
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 title claims description 9
- 244000245420 ail Species 0.000 title 1
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 claims description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 11
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 8
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 8
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 8
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 6
- XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-DICHLOROPHENYL)-1,1-DIMETHYLUREA Chemical compound CN(C)C(=O)NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 claims description 4
- 244000291564 Allium cepa Species 0.000 claims description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000012925 biological evaluation Methods 0.000 claims description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims 3
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 claims 3
- 241000234282 Allium Species 0.000 claims 2
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000123646 Allioideae Species 0.000 claims 1
- 235000005255 Allium cepa Nutrition 0.000 claims 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 102100035593 POU domain, class 2, transcription factor 1 Human genes 0.000 claims 1
- 101710084414 POU domain, class 2, transcription factor 1 Proteins 0.000 claims 1
- 244000223014 Syzygium aromaticum Species 0.000 claims 1
- 235000016639 Syzygium aromaticum Nutrition 0.000 claims 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000005 chromosome aberration Toxicity 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Sady primerů pro stanovení odrůdové pravosti česneku analýzou mikrosatelitů (SSR)
Oblast techniky
Vynález se zabývá analýzou délkové variability mikrosatelitů pro charakterizaci odrůd česneku Allium sativum L. a dalších rostlinných materiálů. Podstatou je amplifikace úseků genomu obsahující daný mikrosatelitní lokus pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR) se specifickými primery a následná analýza produktů a ztotožnění profilu DNA s deklarovanou odrůdou. Dosavadní stav techniky
Charakterizace odrůd česneku pro kontrolu trhu je obecným problémem. S objevem polymerázové řetězové reakce (PCR) a jejím zavedením jako rutinní metody v laboratořích molekulární biologie se však značně zrychlil vývoj metod pro studium genetické variability, a tudíž se i problém charakterizace odrůd stal řešitelným. V současné době již existuje mnoho metod, které jsou vhodné pro detekci genetické variability. Jednou z metod, která se rutinně používá, je analýza mikrosatelitů. Mikrosatelity jsou úseky DNA s opakujícím se motivem nejčastěji dvou nukleotidů. Počet opakování daného motivu je dán mnoha faktory a je nutno ho chápat z fylogenetického hlediska. Vlastní příčinou je chromosomální dynamika: chromosomální aberace, nerovnoměrný crossing-over, amplifikace a neúplná replikace určitých segmentů chromosomální DNA (Ondřej, 1992). Mikrosatelity se tudíž vyznačují vysokou mírou variability v počtu opakování jejich motivů, která se ve vlastní analýze projeví jako vysoká míra délkového polymorfismu amplifikovaných fragmentů DNA daného mikrosatelitního lokusu. Výhodou analýzy mikrosatelitů je hypervariabilita, kodominance alel, hojný výskyt v genomech eukaryot, potřeba pouze malého množství DNA, vysoká reproducibilita, možnost provádět analýzy jako multiplex, tj. v jedné reakci analyzovat více SSR lokusů, což výrazně zlevňuje cenu analýz (de Vienne et al., 1998).
Z mnoha komparativních studií (Russel et al. 1997; Nagaoka and Ogihara, 1997) se analýza mikrosatelitů ukazuje jako nej vhodnější metoda pro analýzy genetické variability v rámci druhu tato metoda nejlépe detekuje rozdíly mezi odrůdami téhož rostlinného druhu.
Podstata technického řešení
Uvedený nedostatek - nedostupnost - řeší sady primerů, kde vždy jeden příměr z páru a to forvard je fluorescenčně značen (6-fam, víc, ned, pet), specificky rozlišující odrůdy česneku a cibule. Jedná se o primery, s jejichž pomocí lze amplifikovat variabilní oblasti, tzv. mikrosatelity (dále jen SSR). Pro každou kombinaci mikrosatelitů a odrůdy byl charakterizován specifický signál. Tak je možné jednoznačně odrůdu identifikovat. V tomto případě je možné provádět tzv. multiplexové analýzy a analyzovat tak více (obvykle 3-4) mikrosatelity v jedné analýze. Součástí analýzy je velikostní standard a standardy alel. Protože je nutno rozlišit délku produktu PCR reakce pro daný mikrosatelit s přesností na 2 bp, je nutné použít přesnější metodu než je klasická elektroforéza v agarózovém gelu. Tato metodika byla optimalizována pro použití kapilární elektroforézy v přístrojích ABIPRISM 310* a 3130*(Applied Biosystems).
Dále je, podle technického řešení, důležité, využívat dále popsané reakční podmínky dané následující reakční směsí pro každý vzorek, kdy v objemu 15 mikrolitrů reakční směsi je přítomných 6,8 mikrolitrů sterilní deionizované vody (bez DNáz a RNáz), 1,5 mikrolitrů 10X pufru (Biotools Dynex*), 2,0 mikrolitrů MgCl2 o koncentraci 15 milimolámí (Biotools, Dynex*), 1,5 mikrolitrů dNTP o koncentraci 2,5 milimolámí, 1,0 mikrolitrů specifického primerů F o koncentraci 5,0 mikromolámí a 1,0 mikrolitrů specifického primerů R o koncentraci 5,0 mikromolámí. K reakční směsi se poté přidá 1 mikrolitr testované DNA.
PCR (polymerázová řetězová reakce) v reálném čase probíhá v termocykleru při následujícím teplotním profilu: 3 minuty při 95 °C, následuje 35 cyklů skládajících se ze tří kroků (30 sekund při 95 °C 30 sekund při 60 °C a 30 sekund při 72 °C), a nakonec 5 minut při 72 °C.
-1 CZ 27193 Ul
Pro kontrolu lze přítomnost PCR produktu ověřit detekcí na 2 % agarosovém gelu s délkovým standardem.
Produkty amplifikace jsou separovány elektroforeticky metodou kapilární elektroforézy na přístroji ABI PRISM 3130* a nebo ABI PRISM 310* (Applied Biosystems), kde příprava vzorku pro analýzu kapilární elektroforézou je následující:
- 10 μΐ Formamid (Applied Biosystems*), 0,5 μΐ LIZ500 (Applied Biosystems), Vzorky 6- FAM, VIC, NED, PIET a to z každé amplifikační reakce pro daný vzorek 0,4 μΐ pro příměrový pár v sadě A-Sada Multiplex A
- 10 μΐ Formamid (Applied Biosystems*), 0,5 μΐ LIZ500 (Applied Biosystems*), Vzorky 6FAM, VIC, NED, PET a to z každé amplifikační reakce pro daný vzorek 0,4 μΐ pro příměrový pár v sadě B-Sada Multiplex B
- 10 μΐ Formamid (Applied Biosystems*), 0,5 μΐ LIZ500 (Applied Biosystems*), Vzorky 6 FAM, VIC NED, PIET a to z každé amplifikační reakce pro daný vzorek 0,4 μΐ pro příměrový pár v sadě C-Sada Multiplex C
- 10 μΐ Formamid (Applied Biosystems*), 0,5 μΐ LIZ500 (Applied Biosystems*), Vzorky 6FAM, VIC, NED, PET a to z každé amplifikační reakce pro daný vzorek 0,4 μΐ pro příměrový pár v sadě D-Sada Multiplex D
Vyvinuté sady primerů podle technického řešení pro stanovení odrůdové pravosti analýzou mikrosatelitů (SSR) budou využitelné pro molekulámě-biologické hodnocení odrůdové pravosti odrůd česneku Allium sativum L. a dalších rostlinných materiálů ze stejného rodu, např. cibule kuchyňské Allium cepa L.
Sady primerů pro stanovení odrůdové pravosti byly navrženy původci a jejich kombinace příměrových párů pro genovou expresi byla optimalizována pro dané podmínky ve Výzkumném ústavu rostlinné výroby, v.v.i., Praha, CZ, kde probíhalo i statistické hodnocení vhodnosti použití různých příměrových kombinací. Následující příklady provedení vynález pouze dokládají, aniž by ho jakkoliv omezovaly.
| Název markéru (příměrový pár-F a R) | Forward primer | Reverse primer |
| ASM035-6FAM | 6FAM-TTG GAC TGA ATT CTG AAT ACCT | GGG TGT GTG GTT CAA GGA |
| ASM040-VIC | VIC-CAC AGC AAC ATG CAC CAT | TGC CGG AAC TCG ΑΤΑ TT |
| ASM053-NED | NED-ACA AGG TCG ACA TCG TTT G | GGG CTT CAC CTG AAC ACA |
| ASM059-PET | PET-CTT GCC GGA ACT CGA TAT T | CAC AGC AAC ATG CAC CAT |
| Sada - Multiplex A | ||
| ASM072-6FAM | 6FAM-CAC GCG AAT CTT TCT TGG | TGC AAA GCA ATA TGG CAG |
| ASM078-V1C | VIC-TGT TCC AAC CAG ATT TAA TGC | AAG TGG CGG TTG TGT CTG |
| ASM080-NED | NED-AAT CTC CCT CCA AAG TCC C | CCT GTA TTT TGT GTA AAG CAT CA |
| ASM109-PET | PET-GGT CTC CTC ATC CAC CGT | GTG TGG GGC ATG ATT GAC |
| Sada - Multiplex B | ||
| INTRON 1 | 6FAM-AAGATCCAAGGTTGCTCTGC | CAGCAGCATTTCCCACTACC |
| INTRON 3 | HEX-ACTCGTCATCTCTCTTTCACC | TGTAATGAGGCCAGTAGTAAACC |
| ASA07-NED | NED-CTC GGA ACC AAC CAG CAT A | CCC AAA CAA GGT AGG TCA GC |
| ASA08-PET | PET-TGA TTG AAA CGA ATC CCA CA | GGG GGT TAC CTG AAC CTG TTA |
| Sada - Multiplex C | ||
| ASA10-6FAM | 6FAM-TTG TTG TTC TGC CAT TTT | GAT CTA AGC CGA GAG AAA |
| ASA14-VIC | VIC-TCT ATC TCG CTT CTC AGG GG | GCT GAC AGA AGT AGT CTT TCC |
| ASA16-NED | NED-CAC GAC TTT TCC TCC CAT TT | GCT AAT GTT CAT GTC CCC AGT |
| ASA17-PET | PET-TCC ACG ACA CAC ACA CAC AC | ATG CAG AGA ATT TGG CAT CC |
| Sada - Multiplex D |
*) název přístroje nebo dodavatele činidla je dán jen pro orientaci, lze využít jakýkoliv odpovídající přístroj nebo činidlo, které poskytne shodné výsledky.
-2CZ 27193 Ul
Příklady provedení
Příklad 1
Claims (6)
- Pro analýzu byl použit česnek (Allium sativum L.), u kterého bylo nutné zjistit pravost. Bylo analyzováno 10 ks cibulí. DNA byla izolována ze stroužků pomocí CTAB a po kontrole kvality izolované DNA a změření její koncentrace byly vzorky DNA naředěny sterilní vodou na pracovní koncentraci 100 ng/μΐ a přidány k reakční směsi. Reakční směs pro jeden vzorek se skládala z 6,8 mikrolitrů sterilní deionizované vody (bez DNáz a RNáz), 1,5 mikrolitrů 10X pufru (Biotools, Dynex*),
- 2,0 mikrolitrů MgCl2 o koncentraci 15 milimolámí (Biotools, Dynex*),1,5 mikrolitrů dNTP o koncentraci 2,5 milimolámí, 1,0 mikrolitrů specifického příměru F o koncentraci 5 mikromolámí a 1,0 mikrolitrů specifického primem R o koncentraci 5 mikromolámí. Nejprve byl připraven mastermix (reakční směs bez templátové DNA) pro každý pár primerů do zvláštní zkumavky, ten rozpipetován do PCR zkumavek nebo PCR destičky a k němu nakonec přidán po 1 μΐ roztoku vzorku DNA.Reakce probíhala v termocykleru (Eppendorf *) při následujícím teplotním profilu:
- 3 minuty při 95 °C, následuje 35 cyklů skládajících se ze tří kroků (30 sekund při 95 °C, 30 sekund při 60 °C a 30 sekund při 72 °C), a nakonec 5 minut při 72 °C.Na 2% agarosovém gelu byla rozlišena délka získaného produktu pomocí délkového standardu 100 bp DNA Ladder (Fermentas, Kanada*) a byl detekován PCR produkt.Produkty amplifikace byly naředěny dle tabulky ředění pro daný PCR produkt, rozpipetovány v objemu 0,
- 4 mikrolitrů do PCR destičky spolu s 10 mikrolitry Formamidu (Applied Biosystems*) a 0,
- 5 mikrolitrů velikostního standardu LIZ500 (Applied Biosystems*) a inkubovány 7 minut při teplotě 95 °C a následně rychle ochlazeny na teplotu 4 °C v cyklem a krátce centrifugovány. Vzorky jsou poté separovány elektroforeticky metodou kapilární elektroforézy na přístroji ABIPRISM 3130 (Applied Biosystems*).Uvedený příklad provedení technického řešení pouze dokládá možností použití, aniž by jakkoliv omezoval další aplikace.Průmyslová využitelnostTyto sady primerů lze využít pro molekulámě-biologické hodnocení odrůdové pravosti odrůd česneku Allium sativum L. a dalších rostlinných materiálů ze stejného rodu Allium, např. cibule kuchyňské Allium cepa L.Vysvětlivky zkratek použitých v textu:PCR - The Polymerase Chain ReactionSSR - mikrosatelit (Simple Sequence Repeat)NED - typ fluorescenční značkyVIC - typ fluorescenční značky
- 6-FAM - 6- karboxyfluorescein, typ fluorescenční značkyPoužitá literatura:ABI PRISM 3130 Reference Manual (http:// www3.apliedbiosystems.com/cms/groups/mcb suport/documents/generaldocuments/cms 041469.pdf.)ABI PRISM 3130 - Avant Manual http:// www. Lifetechnologies.com/l/l/4326-abi-prism-3100avant-genetic-analyzer-user-guide.html-3CZ 27193 U1Cunha CPI, Hoogerheide ES, Zucchi MI, Monteiro M, Pinheiro JB: New microsatellite markers for garlic, Allium sativum (Alliaceaé), American Jounnal Of Botany, Volume: 99 Issue: 1 Pages: E17- E19 DOI: 10.3732/ajb. 1100278 Published: JAN 2012ČSN EN ISO 21571 Potraviny - Metody pro detekci geneticky modifikovaných organismů a odvozených produktů - Extrakce nukleové kyseliny (2007)De Vienne D., Santoni s. (1998): Les principales sources de marqueur moléculaires. In: de Vienne et al.: Les marqueur moléculaire en génétique et biotechnologies végétales. INRA, Paris, 1998:15-47.Definition of Minimum Performance Requirements for Analytical Methods of GMO Testing european Network of GMO Laboratories (ENGL) (CRL 2008.Korir, N. K., Han, J., Shangguan, L. Wang, Ch., Kayesh E, E, Zhang, E., Fang, J.: Plant variety and cultivar identification: advances and prospects CRITICAL REVIEWS IN BIOTECHNOLOGY Volume: 33 Issue: 2 Pages: 111-125 DOI: 10.3109/07388551.2012. 675314 Published: JUN 2013Ma, Kyung-Ho; Kwag, Jae-Gyun; Zhao, Weiguo: Isolation and characteristics of eight novel polymorphic microsatellite loci from the genome of garlic (Allium sativum L.) SCIENTIA HORTICULTURAE Volume: 122 Issue: 3 Pages: 355-361 DOI: 10.1016/j. scienta.2009.06.010 Published: OCT 1 2009Nagaoka T., Ogihara Y. (1997): Applicability o inter-simple sequence repeat polymorpisms in
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-29050U CZ27193U1 (cs) | 2014-01-09 | 2014-01-09 | Sady primerů pro stanovení odrůdové pravosti česneku analýzou mikrosatelitů (SSR) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-29050U CZ27193U1 (cs) | 2014-01-09 | 2014-01-09 | Sady primerů pro stanovení odrůdové pravosti česneku analýzou mikrosatelitů (SSR) |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ27193U1 true CZ27193U1 (cs) | 2014-07-21 |
Family
ID=51264384
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2014-29050U CZ27193U1 (cs) | 2014-01-09 | 2014-01-09 | Sady primerů pro stanovení odrůdové pravosti česneku analýzou mikrosatelitů (SSR) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ27193U1 (cs) |
-
2014
- 2014-01-09 CZ CZ2014-29050U patent/CZ27193U1/cs not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ng et al. | Inter-simple sequence repeat (ISSR) markers: are we doing it right | |
| Zhu et al. | Fingerprinting and Identification of Closely Related Wheat ('Triticum aestivum'L.) Cultivars Using ISSR and Fluorescence-Labeled TP-M13-SSR Markers | |
| Caramante et al. | Simple sequence repeats are able to trace tomato cultivars in tomato food chains | |
| WO2008056325B1 (en) | Process for animal species identification in samples with genetic material based on mitochondrial dna size variation | |
| Fulbright et al. | Molecular diagnostics for monitoring contaminants in algal cultivation | |
| CN102337345A (zh) | 基于20个三等位基因snp遗传标记的法医学复合检测试剂盒 | |
| Rassin et al. | Molecular Identification of Aspergillus fumigatus Using ISSR and RAPD Markers | |
| US11414714B2 (en) | Methods and kits for the detection of powdery mildew | |
| Villalobos-Arámbula et al. | Cross-species transferability of eastern white pine (Pinus strobus) nuclear microsatellite markers to five Mexican white pines | |
| RU2573937C1 (ru) | НАБОР СИНТЕТИЧЕСКИХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИДОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ВОЛОДУШКИ МНОГОЖИЛЬЧАТОЙ (Bupleurum multinerve DC.) | |
| Balážová et al. | Genetic diversity of triticale cultivars based on microsatellite and retrotransposon-based markers. | |
| CZ27193U1 (cs) | Sady primerů pro stanovení odrůdové pravosti česneku analýzou mikrosatelitů (SSR) | |
| Hoque et al. | Molecular diversity analysis of lentil (Lens culinaris Medik.) through RAPD Markers | |
| Boutigny et al. | Optimization of a real-time PCR assay for the detection of the quarantine pathogen Melampsora medusae f. sp. deltoidae | |
| Mitra et al. | Genetic diversity analysis in date palm (Phoenix dactylifera L.): a comparative assessment using ISSR and RAPD marker assays | |
| Muraseva et al. | ISSR primer screening for analysis of genetic diversity among Scutellaria tuvensis (Lamiaceae) populations | |
| CZ28452U1 (cs) | Sady primeru pro stanovení odrůdové pravosti cibule analýzou mikrosatelitů (SSR) | |
| Yuskianti et al. | Sequence characterized amplified region (SCAR) markers in Sengon (Paraseriathes falcataria (L.) Nielsen | |
| Zhu et al. | High resolution melting curve analysis: an efficient method for fingerprinting of hybrid rice cultivars and their parental lines | |
| CN104946637B (zh) | 一种向日葵黄萎病的两种轮枝病菌的多重dpo‑pcr检测试剂盒及其应用 | |
| CN105695575A (zh) | 55个snp位点多色荧光复合检测的方法及试剂盒 | |
| CN103757110A (zh) | 一种霍乱弧菌分析分型试剂盒 | |
| Zander et al. | New application for haplotype-specific extraction: separation of mitochondrial DNA mixtures | |
| Fajardo et al. | Real-time RT-PCR high-resolution melting curve analysis to detect and differentiate Brazilian variants of grapevine viruses | |
| CZ30692U1 (cs) | Sady primerů pro skupinově specifickou diagnostiku rýže typu Basmati analýzou polymorfismu DNA |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG1K | Utility model registered |
Effective date: 20140721 |
|
| MK1K | Utility model expired |
Effective date: 20180109 |