CZ201615A3 - Konjugáty na bázi takrinu a tryptofanu, způsob jejich přípravy a jejich použití - Google Patents

Abstract

Předkládané řešení poskytuje nové konjugáty na bázi takrinu a tryptofanu obecného vzorce I, a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s kyselinami, kde n je 2 až 8, R.sup.1.n.je O(C.sub.1.n.-C.sub.4.n.)alkyl nebo H a R.sup.2.n.je H, Cl nebo Br, přičemž platí, že pokud je R.sup.1.n.OCH.sub.3.n., R.sup.3.n.současně nemůže být Cl. Dále poskytuje způsob jejich přípravy a jejich léčebné použití.

Description

Konjugáty na bázi takrinu a tryptofanu, způsob jejich přípravy a jejich použití Oblast techniky

Vynález se týká nových konjugátů na bázi takrinu a tryptofanu, způsobu jejich přípravy a jejich léčebného použití.

Dosavadní stav techniky

Alzheimerova nemoc (AD) je nejčastější běžnou formou demence a je charakterizována jako progresivní neurodegenerativní onemocnění s mnohostrannou patogenezí. Symptomy AD zahrnují vážné poruchy paměti, progresivní zhoršené kognitivní schopnosti, zhoršený úsudek, změny osobnosti, dezorientace, zhoršení denních aktivit a ztrátu jazykových schopností. Molekulární etiologie AD není v současné době zcela prozkoumána. Histopatologie onemocnění se projevuje akumulací intracelulámích nerozpustných usazenin zejména amyloidu β (A/?) s následnou tvorbou neuritických plaků jakož i přítomností neurofibrilámích spletenců, složených z hyperfosforylovaného τ-proteinu v některých oblastech mozku asociovaných s učením a pamětí, včetně hippocampu. Αβ je produktem proteolytického zpracování svého prekurzoru (APP), které je výsledkem následného štěpení pomocí β- a y-- sekretasy.

Multifaktoriální charakter AD podnítil výzkum v oblasti ligandů s multifunkčním charakterem (MTDL) jako derivátů pro léčbu tohoto onemocnění. MTDL jsou sloučeniny, které jsou účinné při léčbě komplexních onemocnění díky své schopnosti interakce s různými cíli podezřelými z patogeneze onemocnění. Myšlenka, že multifaktoriální léčiva budou účinnější než léčiva určená pro jediný cíl vzešla ze snahy o porozumění působení různých léčiv, např. antipsychotických. Strategie MTDL vedla nedávno k objevu několika potenciálních léčiv tohoto onemocnění a pravděpodobně reprezentuje lepší farmakologický nástroj k potlačení multifaktoriální povahy AD a ke zpomalení postupu onemocnění.

Nejužívanější koncept vývoje léčiv pro AD je cholinergní hypotéza. Další teorie patogeneze AD zahrnují hypotézu amyloidní kaskády nebo oxidativního stresu spojeného s tvorbou volných kyslíkových radikálů, které vykreslují mnohem více spletitý scénář. Pacienti s AD vykazují některé zvláštnosti, jako například sníženou aktivitu cholinacetyltransferasy (ChAT, E. C. 2.3.1.6). Tento enzym zodpovídá za syntézu acetylcholinu (ACh). Současně je zejména vraných stádiích onemocnění zvýšena aktivita acetylcholinesterasy (AChE, E.C. 3.1.1.7) a butyrylcholinesterasy (BChE, E.C. 3.1.1.8). Tyto enzymy jsou naopak zodpovědné za rozklad neuromediátoru ACh. Inhibitory cholinesteras představují dodnes nejčastější strategii léčby AD, nepřímo zvyšují nabídku ACh na synapsích neuronů a tím přispívají k cholinergní transmisi, což se navenek projevuje zlepšením kognitivních funkcí. Principem jejich účinkuje vazba do aktivní části enzymu, v případě AChE se mohou vázat na katalytické aktivní (CAS) nebo periferní anionické (PAS) místo nebo na obě místa enzymu současně, v takovém případě hovoříme o duálním účinku. Jako první neselektivní inhibitor cholinesteras byl v roce 1993 schválen takrin (THA, Obrázek 1) pro léčbu AD, ale od jeho použití bylo později upuštěno pro jeho gastrointestinální vedlejší účinky a hepatotoxicitu (Dejmek, L., Drug. Future. 1990, 15, 126). Jeho 7-methoxy derivát (7-MEOTA, Obrázek 1) se také projevil jako aktivní inhibitor ChE, ale s podstatně menšími nežádoucími účinky ve srovnání s takrinem (Watkins, P.B.; Zimmerman, H.J.; Knapp, M.J.; Gracon, S.I.; Lewis, K.W., JAMA -J. Am. Med. Assoc. 1994, 271, 992-998; Patočka, J.; Jun, D.; Kuca, K., Curr. Drug. Metab. 2008, 9, 332-335; Korabecny, J.; Musilek, K.; Zemek, F.; Horova, A.; Holas, O.; Nepovimova, E.; Opletalova, V.; Hroudova, J.; Fisar, Z.; Jung, Y.S.; Kuca, K., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2011, 21, 6563- —6566; Korabecny, J.; Musilek, K.; Holas, O.; Nepovimova, E.; Jun, D.; Zemek, F.; Opletalova, V.; Patočka, J.; Dohnal, V.; Nachon, F.; Hroudova, J.; Fisar, Z.; Kuca, K., Molecules. 2010, 15, 8804-8812; Korabecny, J.; Musilek, K.; Holas, O.; Binder, J.; Zemek, F. ; Marek, J.; Pohanka, M.; Opletalova, V.; Dohnal, V.; Kuca, K., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2010, 20, 6093-6095; Korabecny, J.; Holas, O.; Musilek, K.; Pohanka, M.; Opletalova, V.; Dohnal, V.; Kuca, K., Lett. Org. Chem. 2010, 7, 327-331). Toxicita 6-chlorotakrinu (Obrázek 1) je s takrinem srovnatelná, nicméně tato sloučenina dosahuje podstatně vyšší inhibiční účinnosti než takrin (Galdeano, C.; Viayna, E.; Sóla, I.; Formosa, X.; Camps, P.; Badia, A.; Clos, Μ. V.; Relat, J.; Ratia, M.; Bartolini, M.; Mancini, F.; Andrisano, V.; Salmona, M.; Minguillon, C.; Gonzalez-Munoz, G. C.; Rodriguez-Franco, Μ. I.; Bidon-Chanal, A.; Luque, F. J.; Munoz-Torrero, D., J Med Chem 2012, 55, 661-669). V současné době jsou schváleny ještě další tři inhibitory AChE pro léčbu AD - donepezil, galantamin a rivastigmin (Polinsky, R., Clin. Ther. 1998, 20, 634-647; Bryson, H.M.; Benfield, P., Drugs. Aging. 1997,10, 234— — 239; Scott, L.J.; Goa, K.L., Drugs. 2000, 60, 1095-1122). Tyto inhibitory AChE se používají pro mírná až střední stádia AD. Dále byl pro léčbu AD schválen memantin, nekompetitivní antagonista působící na iV-methyl-D-aspartátových receptorech, který zabraňuje glutamátergní excitotoxicitě při patogenezi AD (Parsons, C. G.; Danysz, W.; Quack, G., Neuropharmacology. 1999, 38, 735-767).

Obrázek 1: Takrinové inhibitory cholinesteras. L-Tryptofan (TRP) je esenciální aminokyselina, která vystupuje jako prekurzor 5-- hydroxytryptaminu (5-HT), Syntéza 5-HT a jeho dostupnost v organismu je tedy dána příjmem TRP. Je známo, že hippocampus hraje důležitou roli při krátkodobé paměti a prostorové paměti. Bylo zjištěno, že u pacientů s AD způsobuje snížený přísun TRP další zhoršení kognitivních funkcí. Výzkumníci zjistili, že zvýšený příjem TRP snižuje intraneuronální akumulaci Αβ v hippocampusu u transgenního modelu myší s AD (Noristari, H.N.; Verkhratsky, A.; Rodriguez, J.J., Aging. Cell. 2012, 11, 810-822). Kromě schopnosti TRP zvýšit inhibiční aktivitu prostřednictvím interakce s PAS AChE, disponuje tento indolový derivát silným anti-amyloidním potenciálem. Toto zjištění bylo popsané skupinou vědeckých pracovníků pod vedením Dr. Scherzer-Attali v roce 2012 (Scherzer-Attali, R.; Schaltiel-Karyo, R.; Adalist, Y.H.; Segal, D.; Gazit, E., Proteins. 2012, 80, 1962-1973). Tato skupina rovněž připravila sérii naftochinon-tryptofanovových hybridů se schopností inhibovat fibrilizaci a oligomerizaci amyloidu Αβ in vitro a in vivo.

Dosud však nejsou na trhu léčiva na bázi takrinových duálních inhibitorů cholinesteras pro léčbu AD, která by byla schopná působit nejen inhibici AChE a nepřímo tím zlepšovat kognitivní projevy u pacientů sAD, ale i inhibovat agregaci Αβ přímou interakcí s tímto amyloidním proteinem a/nebo inhibici AChE-indukované agregace Αβ.

Podstata vynálezu Předkládaný vynález řeší problémy stavu techniky tím, že předkládá nová multifaktoriální léčiva se schopností interferovat s různými patologickými mechanismy Alzheimerovy choroby (AD) a způsob jejich přípravy. Je všeobecně známo, že inhibitory acetylcholinesterasy (AChE) jsou považovány za účinné u pacientů trpících AD. Způsobují dočasné zlepšení chování, zpomalují zhoršující se kognitivní funkce zvyšováním hladiny acetylcholinu (ACh) v mozku u pacientů s AD. Některé studie naznačují také důležitost enzymu butyrylcholinesterasy (BChE) pro zajištění cholinergní funkce v průběhu AD, kdy hladina AChE klesá, zatímco hladina BChE může být mírně zvýšena. BChE rovněž přebírá roli AChE. Předkládaný vynález se týká tří sérií nových inhibitorů cholinesteras pro výrobu léčiva multifunkčního charakteru pro AD. Hlavními farmakofory jsou takriny (7-methoxytakrin, takrin, 6-chlorotakrin) ve spojení s L-tryptofanem. Připojením L-tryptofanu uhlíkem v poloze 3 indolové skupiny se zvýší inhibiční potenciál těchto derivátů. Kromě schopnosti inhibovat obě cholinesterasy mají nově připravené inhibitory také antioxidační i anti-amyloidní působení. Předmětem tohoto vynálezu jsou nově připravené konjugáty na bázi takrinu a tryptofanu jako duální inhibitory cholinesteras AChE a BChE. Předmětem tohoto vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I,

a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s kyselinami, kde n je 2 až 8, R1 je 0(Ci-C^alkyl nebo H a R2 je H, Cl nebo Br, přičemž 0(Ci-C4)alkylem se rozumí OMe, OEt, OPr, 0'Pr, OBu, OlBu a 0'Bu, s výhodou je 0(Ci-C4)alkylem OMe. Zároveň platí, že pokud je R OCH3, R současně nemůže být Cl.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou s výhodou vybrány ze skupiny uvedené v Tabulce 1.

Tabulka 1

Dále je předmětem vynálezu způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I (Schéma 1), při němž v prvním kroku reagují 9-chlorotakriny za přítomnosti fenolu na příslušné diaminotakriny. Ve druhém kroku reagují tyto diaminotakriny s Boc- chráněným tryptofanem, přičemž vzniknou konjugáty analogů takrinu s tryptofanem mající Boc- chráněnou NH2 skupinu. V posledním kroku dojde k odstranění Boc- chránící skupiny za vzniku látek obecného vzorce I (Schéma 1, kde i) fenol, 120 až 130 °C; ii) Et3N, BOP, DMF, RT; iii) HC1, MeOH, RT).

Schéma 1 Dále jsou předmětem tohoto vynálezu sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 2 až 8, R1 je 0(Ci-C4)alkyl nebo H a R2 je H, Cl nebo Br, přičemž platí, že pokud je R1 OCH3, R2 současně nemůže být Cl, a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s kyselinami, pro použití pro inhibici cholinesteras, zejména AChE a/nebo BChE. Předmětem tohoto vynálezu jsou rovněž sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 2 až 8, R1 je 0(Ci-C4)alkyl nebo H a R2 je H, Cl nebo Br, přičemž platí, že pokud je R1 OCH3, R2 současně nemůže být Cl, a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s kyselinami, pro použití jako antioxidanty a/nebo anti-amyloidní sloučeniny. Předmětem tohoto vynálezu jsou rovněž sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 2 až 8, R1 je 0(Ci-C4)alkyl nebo H a R2 je H, Cl nebo Br, přičemž platí, že pokud je R1 OCH3, R2 současně nemůže být Cl, a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s kyselinami, pro použití jako léčivo. Předmětem vynálezu jsou dále sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 2 až 8, R1 je 0(Ci-- C4)alkyl nebo H a R2 je H, Cl nebo Br, přičemž platí, že pokud je R1 OCH3, R2 současně nemůže být Cl, a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s kyselinami, pro použití při léčení Alzheimerovy nemoci a/nebo demence. Předmětem vynálezu je rovněž farmaceutický přípravek obsahující alespoň jednu sloučeninu obecného vzorce I a alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič. Vhodné nosiče jsou obzvláště plnidla jako cukry, škroby, dále karboxymethylový škrob, zesíťovaný polyvinylpyrrolidin, alginová kyselina a její soli, rozpouštědla, pojivá, atd.

Vynález je popsán v následujících příkladech, které nijak neomezují jeho rozsah.

Obecné chemické metody 7-methoxytakrin (7-MEOTA) byl připraven dle literatury (Bolognesi, M. L.; Minarini, A.; Tumiatti, V.; Melchiorre, C., Mini. Rev. Med. Chem. 2006, 6, 1269-1274). Ostatní reagencie byly získány komerčně od firmy Sigma-Aldrich (Praha, ČR). <xi

Veškeré experimenty probíhaly v ochranné atmosféře dusíku (Schéma 2, kde i) fenol, 125x 130 °C; ii) Et3N, Boc20, MeOH, dusíková atmosféra, laboratorní teplota; iii) Et3N, BOP, DMF, laboratorní teplota; iv) HC1, MeOH, laboratorní teplota). TLC byla prováděna na hliníkových destičkách pokrytých silikagelem 60 F254 (Merck, Praha, ČR).

Sloupcová chromatografie probíhala za atmosferického tlaku na silikagelu 100 (velikost částic 0.063)»-0.200 mm, 70*230 mesh ASTM, Fluka, Praha, ČR).

Pro stanovení hmotnostní spektrometrie byl využitý analytický systém Dionex Ultimate 3000 LC-MS spojený se spektrometrem Orbitrap Q Exactive Plus (Thermo Fisher Scientific,

Brémy, Německo). Systém LC-MS se skládá z binárního čerpadla HHG-3400RS, který je spojený s vakuovým odplyňovačem. Dále z vyhřívaného sloupcového kompartmentu TCC- -3000, autosampleru WTS-3000 a ultrafialového detektoru VWD-3000. Kvadrupolový Λ hmotnostní spektrometr byl vybavený elektron-sprejovým ionizačním zdrojem a data byl^ zaznamenávána v positivním módu s následujícími parametry: sprejové napětí bylo 3.2 kV, kapilární teplota byla 350 °C, teplota plynu byla 300 °C. 'H-NMR a i3C-NMR spektra byla naměřena pomocí Varian S500 spektrometru (500 a 126 MHz) nebo Varian Mercury-Vx BB 300 (300 a 75 MHz) v D2O, methanolu-cTt nebo hexadeuteriodimethylsulfoxidu (DMSO-fik; 2,50 (D), 39,7 (C) ppm) s použitím tetramethylsilanu (TMS) jako interního standardu (= 0 ppm pro obě jádra). Multiplicity spinu jsou označeny jako s (singlet), d (dublet), t (triplet) nebo m (multiplet). Chemické posuny jsou udávané v ppm (parts per milion, δ) vzhledem k TMS. Přiřazení chemických posunů vychází ze standardních NMR experimentů (!H, 13C, ‘Η-'Η COSY, ‘H-^C HSQC, HMBC, DEPT).

Schéma 2 Příklad 1

Postup pro přípravu A'-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-yl)aIkan-l,a>-diaminů (10-16), ./V-(l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-yl)alkan-l,c)-diaminů (17-23) a A-6-chlor-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-yl)alkan-l,co-diaminú (24-30) (Bolognesi, M. L.; Minarini, A.; Tumiatti, V.; Melchiorre, C., Mini. Rev. Med. Chem. 2006, 6, 1269-1274; Hu, Μ. K.; Wu, L. J. ; Hsiao, G.; Yen, Μ. H.; J. Med. Chem. 2002, 45, 2277-2282; Spilovska, K.; Korabecny, J.; Král, J.; Horova, A.; Musilek, K.; Soukup, O.; Drtinová, L.; Gázová, Z.; Siposova, K.; Kuca, K. ; Molecules. 2013,18, 2397-2418)

A Látky byly připraveny podle Schématu 2. Směs fenolu (18 mmol) a látky 7, 8 nebo 9 (2,01 mmol) byla zahřívána na 80 až 90 °C až do vzniku tekuté kapaliny. K reakční směsi byl potom přidán alkylendiamin (12 mmol) a směs byla zahřívána na 125 až 130 °C po dobu 2 až 4 hodin. Po vychladnutí byla reakční směs nalita do 20% NaOH a extrahována dichlormethanem. Organická složka byla promyta solankou a vodou a sušena síranem a" sodným. Po odpaření za sníženého tlaku byl intermediát 10*30 čištěn sloupcovou chromatografií (EtOAc:MeOH:Et3N, 8:1:0,2). Výtěžek: 70,0 až 90,0 %. Příklad 2

Postup pro přípravu chráněného V-[(tert-butoxy)karbonyl]-L-tryptofanu (31) (Franzen, H.; Grehn, L.; Ragnarsson, U., J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1984, 1699-1700)

Sloučenina byla připravena podle Schématu 2. Směs Z-tryptofanu (4.89 mmol), triethylaminu (9,79 mmol) a di-íerí-butyldikarbonátu (B0C2O, 6,36 mmol) byla míchána v methanolu v atmosféře dusíku při laboratorní teplotě po dobu 24 hodin. Po odpaření methanolu za sníženého tlaku byl izolován produkt V-[(férř-butoxy)karbonyl]-Z-tryptofan ve výtěžku 87 %. Příklad 3

Postup pro přípravu tert- butyl l-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9- ylamino)alkylkarbamoyl)-2-(l/Z-indol-3-yl) ethylkarbamátů (32-38), terf-butyl l-(2- -(l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)aIkylkarbamoyI)-2-(l//-indol-3-yl) ethylkarbamátů (39-45) a tert- butyl l-(2-(6-chlor-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9- -ylamino)alkylkarbamoyl)-2-(lZ/-índol-3-yl) ethylkarbamátů (46-52)

Sloučeniny byly připraveny podle Schématu 2. Ke směsi N-[(íerí-butoxy)karbonyl]-Z- -tryptofanu (31, 1,59 mmol) rozpuštěnému v suchém V,V-dimethylformamide (10 ml) byl přidán triethylamin (4,14 mmol) a směs byla míchana při laboratorní teplotě pod dusíkem. Po 30 minutách byl do reakční směsi přidán benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)-fosfonium af hexyfluorofosfát (BOP, 2,06 mmol) a po další hodině meziprodukt (10x30, 1,59 mmol).

Reakční směs byla míchána za laboratorní teploty po dobu 48 h. Následně byla reakční směs extrahována ve směsi ethylacetát:voda (1:1). Surový produkt byl odpařen dosucha a přečištěn ατ sloupcovou chromatografií s mobilní fází CHC^MeOH (50:1). Výtěžek sloučenin 32x52 byl 15,0 až 91,0%.

Analogickým postupem byly připraveny následující deriváty, jejichž charakterizace je uvedena: tert-butyl l-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridÍn-9-ylamino)ethylkarbamoyl)-2-(lfř-dndol-3-yl) ethylkarbamát (32) Výtěžek: 44,2 %. Žlutý olej. 'H NMR (500 MHz, DMSO-c/6) δ 10,77 (m, 1H), 8,08 (t, J= 5,7 Hz, 1H), 7,64 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 7,53 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,40 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,22 (dd, 9,1, 2,7 Hz, 1H), 7,09 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 6,98 (m, 2H), 6,73 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,13 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,29 (m, 2H), 2,98 (m, 1H), 2,87 (m, 3H), 2,71 (m, 2H), 2,49 (m, 2H), 1,98 (m, 2H), 1,80 (m, 2H), 1,28 (s, 9H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-fik) δ 172,82, 170,52, 155,75, 155,34, 155,17, 149,94, 136,20, 129,10, 127,49,123,75, 120,97, 120,88, 120,55, 118,60, 118,29, 116,73, 111,40, 110,33, 101,83, 78,16, 59,94, 55,62, 55,41, 47,50, 32,89, 29,17, 28,29, 27,95, 25,23, 22,88, 22,49, 20,94; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro CszH^NsO/ (m/z): 558,3075; nalezeno: 558,3078 /er/-butyl l-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)propylkarbamoyl)-2- - (l//-indol-3-yl) ethylkarbamát (33) y <λ ϋ Výtěžek: 15,0 %. Žlutý prášek, fe.t.: 83,3 * 87,6 °C. lH NMR (500 MHz, Methanol-í/4) δ 7,66 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 7,53 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,26 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,98 (m, 2H), 4,27 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,42 (m, 2H), 3,30 (m, 3H), 3,19 (m, 3H), 2,95 (m, 2H), 2,73 (m, 2H), 1,89 (m, 2H), 1,67 (m, 2H), 1,34 (s, 9H). 13C NMR (126 MHz, Methanol-d*) δ 176,36, 175,37, 158,12, 157,55, 154,47, 154,05, 137,97, 128,76, 126.34, 124,55, 123,41, 122,38, 121,08, 119,73, 119,37, 112,23, 111,38, 110,96, 103,27, 80,64, 61,53, 57,33, 56,35, 45,44, 37,36, 31,75, 29,20, 28,61, 26,22, 23,76, 22,11, 22,07, 20,86; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C33H42N5O/ (m/z): 572,3232; nalezeno: 572,3225 ferf-butyl l-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-yIamino)butylkarbamoyl)-2-(l//- - indol-3-yl) ethylkarbamát (34) Výtěžek: 79,4 %. Hnědý olej. ‘H NMR (500 MHz, Methanol-ť/4) δ 7,66 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 7,7 Hz, 1H), 7,34 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 7,27 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,23 (dd, J= 9,2, 2,7 Hz, 1H), 7,05 (s, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,96 (m, 1H), 4,25 (t, 7,1 Hz, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,38 (m, 2H), 3,13 (m, 2H), 3,00 (m, 2H), 2,92 (t, J= 6,1 Hz, 2H), 2,70 (t, J= 6,0 Hz, 2H), 1,93 (s, 9H), 1,87 (m, 4H), 1,45 (m, 2H), 1,18 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, Methanol-af4) δ 176.34, 174,69, 172,96, 157,68, 156,20, 152,70, 142,54, 137,97, 128,69, 124,55, 123,26, 121,30, 119,57, 117,66, 112,19, 110,98, 102,99, 80,59, 61,51, 57,18, 56,13, 48,48, 39,97, 33,40, 29,37, 28,62, 27,63, 26,17, 24,00, 23,53, 22,06, 20,85; HRMS (ESf): [M+H]+: vypočítáno pro C34H44N504+ (m/z): 586,3388; nalezeno: 586,3380 te/7-butyl l-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)pentylkarbamoyl)-2- - (li/-indol-3-yl) ethylkarbamát (35) r Výtěžek: 28,0 %. Žlutý prášek. fc.t.: 72,7 v 75,4 °C. 'H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10,77 (m, 1H), 7,83 (t, J= 5,7 Hz, 1H), 7,63 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 7,55 (d, /= 7,9 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 7,30 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,18 (dd, J= 9,1, 2,7 Hz, 1H), 6,99 (m, 2H), 6,66 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 4,12 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,00 (m, 2H), 2,86 (t, J= 6,4 Hz, 3H), 2,71 (t, J= 6,2 Hz, 2H), 2,50 (m, 3H), 1,80 (m, 2H), 1,75 (m, 4H), 1,49 (m, 2H), 1,40 (m, 2H), 1,28 (s, 9H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 171,68, 170,53, 155,74, 155,60, 149,61, 142,76, 136,21, 129,93, 127,54, 123,75, 121,39, 120,96, 120,10, 118,67, 118,28, 117,22, 111,40, 110,44, 101,72, 78,10, 59,95, 55,58, 55,36, 47,44, 38,35, 33,37, 28,31, 28,14, 26,76, 25,46, 23,00, 22,71, 22,69, 22,28, 20,95; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C35H46N5O/ (m/z): 600,3545; nalezeno: 600,3546 terí-butyl l-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)hexylkarbamoyl)-2-(l//- - indol-3-yl) ethylkarbamát (36) Výtěžek: 73,9 %. Žlutý olej. 'H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10,79 (m, 1H), 7,78 (t, J= 5,7 Hz, 1H), 7,63 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 7,55 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,41 (d, J= 2,8 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,18 (dd, 9,1, 2,7 Hz, 1H), 7,10 (d, J= 2,0 Hz, 1H), 6,98 (m, 2H), 6,69 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 4,12 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,31 (m, 6H), 3,01 (m, 3H), 2,87 (m, 3H), 2,71 (m, 2H), 2,49 (m, 2H), 1,78 (m, 6H), 1,28 (s, 9H). I3C NMR (126 MHz, DMSO-í/6) δ 171,87, 155,76, 155,56, 149,61, 142,86, 136,19, 130,02, 127,52, 126,11, 124,37, 123,73, 121,47, 120,94, 118,64, 117,27, 111,38, 110,42, 101,68, 78,05, 59,93, 55,53, 47,70, 38,57, 33,42, 32,46, 30,81, 30,78, 29,18, 28,29, 26,36, 25,50, 25,11, 23,00, 22,75, 20,93; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro Csó^sNsO/ (m/z): 614,3701; nalezeno: 614,3692 tert- butyl l-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)heptylkarbamoyI)-2- (l/ř-indol-3-yl) ethylkarbamát (37) Výtěžek: 85,9 %. Žlutý olej. *H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10,79 (s, 1H), 7,77 (t, J= 5,7 Hz, 1H), 7,63 (dd, J= 9,1, 1,6 Hz, 1H), 7,56 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,41 (d, J= 2,6 Hz, 1H), 7,30 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,18 (m, 1H), 7,10 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 6,99 (m, 2H), 6,68 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 4,13 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,31 (m, 8H), 3,00 (m, 4H), 2,87 (m, 2H), 2,71 (m, 2H), 2,49 (m, 2H), 1,79 (m, 6H), 1,29 (s, 9H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-cfe) δ 171,83, 170,50, 155,70, 149,69, 142,77, 136,19, 129,94, 127,53, 123,72, 121,40, 121,37, 120,93, 120,06, 118,64, 118,26, 117,19, 111,38, 110,42, 101,73, 78,05, 59,93, 55,53, 55,34, 47,73, 38,62, 33,37, 30,81, 29,07, 28,76, 28,30, 28,10, 26,57, 26,42, 25,46, 22,98, 22,73, 20,94; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C37H50N5O/ (m/z): 628,3858; nalezeno: 628,3846 tert-butyl l-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)oktylkarbamoy 1)-2-(1//-indoI-3-yl) ethylkarbamát (38) Výtěžek: 40,0 %. Hnědý olej. *H NMR (500 MHz, Methanol-</4) δ 7,65 (dd, J= 9,2, 1,1 Hz, 1H), 7,60 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 7,52 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,28 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 7,01 (d, J= 7,7 Hz, 1H), 6,94 (t, J= 7,5 Hz, 1H), 4,25 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,87 (m, 2H), 3,14 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 1,93 (s, 16H), 1,78 (m, 2H), 1,35 (s, 9H). I3C NMR (126 MHz, Methanol-í/4) δ 176,37, 174,61, 158,47, 157,15, 150,50, 137,94, 134,50, 128,72, 125,38, 124,51, 122,31, 121,70, 119,68, 119,32, 118,51, 112,87, 112,22, 110,94, 104,96, 80,62, 57,16, 56,47, 49,28, 48,74, 40,80, 40,26, 31,80, 30,06, 30,00, 29,39, 29,14, 28,60, 27,55, 27,23, 25,28, 23,04, 22,06, 21,79; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C38H52N5O/ (m/z): 642,4014; nalezeno: 642,4010 tert· butyl 1-(2-(1,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)ethylkarbamoyl)-2-(l//-indol-3-yl) ethylkarbamát (39) Výtěžek: 27,6 %. Žlutý olej. [H NMR (500 MHz, Methanol-</4) δ 8,04 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 7,73 (m, 1H), 7,57 (m, 1H), 7,52 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,37 (m, 1H), 7,24 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 6,95 (m, 2H), 4,28 (m, 1H), 3,51 (m, 2H), 3,30 (m, 2H), 2,93 (t, J= 6,1 Hz, 2H), 2,62 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 1,87 (m, 4H), 1,34 (s, 9H), 1,17 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, MethanoW4) δ 176,35, 175,80, 157,82, 157,52, 153,59, 137,95, 130,41, 128,75, 126,57, 125,07, 124,72, 124,54, 122,37, 120,45,119,75, 119,33,116,33,112,21, 110,83, 80,67, 57,20, 49,51, 41,16, 33,35, 29,20, 28,62, 25,85, 23,87, 23,33, 22,06, 20,85; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C3iH38Ns03+ (m/z): 528,2970; nalezeno: 528,2972 fórí-butyl 1-(2-(1,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)propylkarbamoyl)-2-(l//-indol-3-yl) ethylkarbamát (40) - I oo, Výtěžek: 23,0 %. Žlutý prášek. Jj.t.: 88,3 N 92,7 °C. ‘H NMR (500 MHz, Methanol-í/4) δ 8,05 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,74 (m, 1H), 7,54 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,26 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,98 (m, 2H), 4,28 (m, 1H), 3,16 (m, 2H), 2,95 (t, 6,0 Hz, 2H), 2,69 (t, 5,9 Hz, 2H), 1,92 (m, 4H), 1,88 (m, 2H), 1,60 (m, 2H), 1,34 (s, 9H), 1,18 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, Methanol-í/4) δ 175,18, 172,95, 158,45, 157,52, 153,39, 147,02, 137,97, 130,11, 128,77, 127,18, 125,02, 124,55, 122,38, 120,96, 119,74, 119,41, 116,74, 112,22, 110,96, 80,62, 61,51, 57,28, 46,10, 37,52, 33,71, 31,62, 28,61, 26,12, 23,97, 23,49, 22,06, 20,85; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro (^H^NsCh* (m/z): 542,3126; nalezeno: 542,3134 tert- butyl 1-(2-(1,2,3,4-tetrahydroakridm-9-ylamino)butylkarbamoyl)-2-(l//-indol-3-yl) ethylkarbamát (41) Výtěžek: 42,0 %. Žlutý olej. 'H NMR (500 MHz, Methanol-í/4) δ 8,02 (d, J - 8,5 Hz, 1H), 7,74 (dd, J = 8,5, 1,2 Hz, 1H), 7,52 (m, 2H), 7,33 (m, 1H), 7,26 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,98 (m, 2H), 4,26 (m, 1H), 3,38 (m, 2H), 3,14 (m, 2H), 2,94 (t, J= 6,1 Hz, 2H), 2,67 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 1,86 (m, 4H), 1,33 (m, 13H), 1,18 (s, 2H). I3C NMR (126 MHz, Methanol-d4) δ 174,65, 172,94, 159,10, 157,46, 153,03, 147,90, 137,98, 129,70, 128,82,127,94,124,73, 124,37, 122,37, 121,27, 119,74, 119,46, 116,80, 112,20, 110,98, 80,58, 61,51, 57,18, 39,95, 34,17, 29,39, 28,63, 28,32, 27,54, 26,10, 24,07, 23,66, 22,06, 20,85; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C33H42N5CV (m/z): 556,3283; nalezeno: 556,3275 fe/7-butyl 1-(2-(1,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamíno)pentylkarbamoyl)-2-(l//-Índol-3-yI) ethylkarbamát (42) „

I Výtěžek: 25,0 %. Žlutý prášek. JJ.t.: 73,3 * 76,8 °C. 'H NMR (300 MHz, MethanoW4) δ 8,04 (m, 1H), 7,75 (m, 1H), 7,52 (m, 2H), 7,33 (m, 1H), 7,24 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 6,97 (m, 3H), 4,25 (m, 1H), 3,39 (m, 2H), 3,11 (m, 2H), 2,94 (m, 4H), 2,69 (m, 2H), 1,95 (m, 2H), 1,87 (m, 6H), 1,50 (m, 2H), 1,34 (s, 9H). 13C NMR (75 MHz, Methano\-d4) δ 174,58, 172,92, 159,07, 157,44, 153,17, 147,91, 137,96, 129,71, 128,79, 127,93, 124,70, 124,42, 122,35, 121,30, 119,71, 119,42, 116,78, 112,18, 110,96, 80,55, 61,50, 57,14, 40,14, 34,16, 31,91, 29,83, 29,42, 28,63, 26,09, 25,01, 24,07, 23,68, 22,06, 20,85; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C34H44Ns03+ (m/z): 570,3439; nalezeno: 570,3434 te/7-butyl 1-(2-(1,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)hexylkarbamoyl)-2-(l//-indol-3-yl) ethylkarbamát (43) Výtěžek: 25,3 %. Hnědý olej. ‘H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10,77 (s, 1H), 8,13 (d,J = 8,6 Hz, 1H), 7,75 (m, 1H), 7,70 (dd, J= 8,5,1,2 Hz, 1H), 7,54 (m, 1H), 7,35 (m, 1H), 7,29 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,09 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 6,99 (m, 1H), 6,66 (d, J = 5,4 Hz, 6H), 4,11 (m, 1H), 3,43 (m, 2H), 3,00 (m, 2H), 2,89 (t, J= 6,2 Hz, 2H), 2,68 (t, J= 6,0 Hz, 2H), 2,49 (m, 2H), 1,79 (m, 4H), 1,75 (m, 6H), 1,53 (m, 2H), 1,28 (s, 9H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-</6) 6 171,61, 170,49, 156,68, 155,25, 151,29, 136,19, 128,71, 127,52, 127,09, 123,71, 123,62, 123,50, 120,93, 119,74, 118,62, 118,26, 115,32, 111,37, 110,41, 78,06, 59,92, 55,35, 48,03, 38,56, 32,87, 30,67, 29,10, 28,29, 26,21, 26,16, 25,07, 22,67, 22,32, 20,92; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro (m/z): 584,3596; nalezeno: 584,3593 terř-butyl 1-(2-(1,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)heptylkarbamoyl)-2-(l//-indol-3-yl) ethylkarbamát (44) Výtěžek: 52,0 %. Hnědý olej. lH NMR (500 MHz, Methanol-^) δ 8,08 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,75 (m, 1H), 7,54 (m, 2H), 7,35 (m, 1H), 7,28 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,00 (m, 3H), 4,26 (m, 1H), 3,51 (t,J= 7,2 Hz, 2H), 3,10 (m, 2H), 2,96 (m, 2H), 2,72 (m, 2H), 1,89 (m, 4H), 1,60 (m, 2H), 1,36 (s, 9H), 1,27 (m, 10H). 13C NMR (126 MHz, Methanol-c/4) δ 174,55, 172,96, 158,90, 157,48, 153,40, 147,71, 138,01, 129,85, 128,82, 127,74, 124,73, 124,47, 122,36, 121,20, 119,73, 119,42, 116,66, 112,21, 111,00, 80,59, 61,52, 57,13, 40,27, 34,05, 33,06, 32,22, 30,74, 29,97, 29,46, 28,64, 27,80, 27,59, 26,10, 24,07, 23,66, 20,85; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C36H48Ns03+ (m/z): 598,3752; nalezeno: 598,3749 tert-butyl 1-(2-(1,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)oktylkarbamoyl)-2-(l//-indol-3-yl) ethylkarbamát (45) Výtěžek: 82,6 %. Žlutý olej. 'h NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10,78 (s, 1H), 8,33 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,78 (m, 2H), 7,53 (m, 2H), 7,43 (d, J= 7,1 Hz, 1H), 7,29 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,09 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 6,98 (m, 1H), 6,68 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 4,12 (m, 1H), 3,77 (m, 2H), 3,03 (m, 2H), 2,95 (m, 2H), 2,64 (m, 2H), 2,52 (m, 6H), 1,82 (m, 6H), 1,69 (m, 2H), 1,29 (s, 9H), 1,17 (m, 4H). ,3C NMR (126 MHz, DMSO-í/6) δ 171,85, 155,26, 151,50, 139,03, 136,19, 132,37, 127,51, 125,00, 124,25, 123,71, 120,92, 120,31, 118,60, 118,24, 116,18, 111,99, 111,87, 111,38, 110,41, 78,06, 55,36, 47,56, 45,92, 38,63, 36,64, 36,61, 30,05, 29,11, 28,75, 28,72, 28,30, 28,09, 26,29, 26,20, 24,16, 21,73, 20,73; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C37H5oN503+ (m/z): 612,3903; nalezeno: 612,3901 tert- butyl l-(2-(6-chlor-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)ethylkarbamoyl)-2-(l//- indol-3-yl) ethylkarbamát (46) Výtěžek: 90,5 %. Žlutý olej. lH NMR (500 MHz, Methanol-^) 6 8,13 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7.66 (d, .7=2,2 Hz, 1H), 7,47 (dt, J= 7,7, 1,1 Hz, 1H), 7,39 (dd, J= 9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,84 (m, 2H), 4,29 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 3,68 (m, 2H), 3,45 (m, 2H), 2,88 (m, 2H), 2,46 (s, 2H), 1,93 (s, 9H), 1,35 (s, 6H). I3C NMR (126 MHz, Methanol-</4) δ 176,36, 172,99, 157,20, 155,73, 143,20, 138,22, 137,76, 128,71, 127,99, 125,99, 124,56, 122,25, 121,79, 119,67, 119,17, 116,84, 114,67, 112,11, 110,60, 80,73, 61,52, 57,09, 40,62, 31,12, 29,02, 28,61, 25,02, 23,19, 22,34, 22,06, 20,85; HRMS (ESI*): [M+H]+: vypočítáno pro C3iH37ClN5C>3+ (m/z): 562,2580; nalezeno: 562,2573 ter*-butyl l-(2-(6-chlor-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)propyIkarbamoyl)-2-(l//- indol-3-yl) ethylkarbamát (47) Výtěžek: 82,6 %. Žlutý olej. 'H NMR (300 MHz, Methanokfc) δ 8,04 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,68 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 7,53 (m, 1H), 7,32 (dd, J= 9,1, 2,2 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,97 (m, 2H), 4,26 (t, J= 7,0 Hz, 1H), 3,37 (m, 1H), 3,16 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 1,92 (s, 9H), 1,88 (m, 3H), 1,34 (m, 6H). 13C NMR (75 MHz, Methanol--d4) δ 175,32,172,96, 157,53, 154,11,146,30,137,95, 136,49, 128,74, 126,82,125,56,124,82, 124,57, 122,36, 119,73, 119,38, 118,55, 116,23, 112,21, 110,92, 80,62, 61,52, 57,32, 46,01, 37,35, 33,10, 31,49, 29,23, 28,60, 25,78, 23,69, 23,11, 22,06; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C32H39C1N503+ (m/z): 576,2736; nalezeno: 576,2728 tert- butyl l-(2-(6-chlor-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)butylkarbamoyl)-2-(l//- indol-3-yl) ethylkarbamát (48) Výtěžek: 91,0 %. Hnědý olej. ]H NMR (500 MHz, Methanol-^) δ 8,13 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7.66 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 7,47 (dt, J= 7,7, 1,1 Hz, 1H), 7,39 (dd, J= 9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,15 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,84 (m, 2H), 4,29 (t,J= 6,9 Hz, 1H), 3,68 (m, 2H), 3,45 (m, 2H), 2,88 (m, 2H), 2,46 (s, 2H), 1,93 (s, 9H), 1,35 (s, 6H). 13C NMR (126 MHz, Methanol-d») δ 171,98 , 170,49, 157,15, 155,28, 151,59, 136,19, 133,52, 127,51, 126,02, 125,13, 123,93, 123,75, 120,94, 118,63, 118,25, 117,86, 115,23, 111,38, 110,41, 78,07, 59,92, 55,37, 47,66, 38,33, 32,61, 28,29, 28,10, 27,87, 24,94, 22,68, 22,51, 22,04, 20,93; HRMS (ESI"): [M+H]+: vypočítáno pro C33H4iC1N503+ (m/z): 590,2893; nalezeno: 590,2889 terí-butyl l-(2-(6-chlor-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)pentylkarbamoyl)-2-(l/f-- indol-3-yl) ethylkarbamát (49) Výtěžek: 45,7 %. Žlutý olej. 'H NMR (500 MHz, DMSO-ťfc) δ 10,76 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,20 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 7,79 (t, J= 5,7 Hz, 1H), 7,71 (dd, J= 2,3, 0,9 Hz, 1H), 7,53 (d, J- 7,9 Hz, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,29 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,09 (d, 2,3 Hz, 1H), 6,97 (m, 2H), 6,67 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 4,11 (m, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,01 (m, 3H), 2,87 (m, 3H), 2,65 (m, 2H), 1,78 (m, 4H), 1,75 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,34 (m, 2H), 1,28 (s, 9H). l3C NMR (126 MHz, DMSO-cfe) δ 171,92, 171,63, 155,28, 152,36, 136,20, 134,19, 127,51, 126,37, 124,18, 124,02, 123,93, 123,75, 120,94, 118,62, 118,26, 117,24, 114,68, 111,39, 110,40, 78,08, 59,93, 55,38, 47,98, 38,50, 30,13, 28,85, 28,30, 28,09, 24,74, 23,65, 22,68, 22,32, 21,77, 20,93; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C34H43C1N503+ (m/z): 604,3049; nalezeno: 604,3045 terř-butyl 1-(2-(6-chlor-1,2,3,4-tetrahyd roakridin-9-y lamí no)hexy lkarbamoy 1)-2-( 1/7- " indoI-3-yl) ethylkarbamát (50) JCAn .t.: 77,5 5s 81,9 °C. 'H NMR (300 MHz, Chloroform-t/) δ 8,72 (m, 1H), 7,87 (m, 2H), 7,63 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 7,26 (m, 1H), 7,11 (m, 2H), 7,01 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 4,38 (m, 1H), 3,44 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 3,07 (m, 6H), 2,65 (m, 3H), 1,89 (m, 5H), 1,55 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,21 (m, 4H). 13C NMR (75 MHz, Chloroform-^) δ 171,57, 158,81, 155,41, 151,11, 147,32, 136,21, 134,30, 127,33, 126,65, 124,73, 124,28, 123,16, 122,07, 119,54, 118,81, 117,97, 115,38, 111,19, 110,50, 80,01, 55,28, 49,23, 39,11, 33,47, 31,41, 29,05, 28,53, 28,25, 26,31, 26,21, 24,42, 22,74, 22,41; HRMS (ESf): [M+H]+: vypočítáno pro C35H45C1N503+ (m/z): 618,3206; nalezeno: 618,3209 tert- butyl l-(2-(6-chlor-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)heptyIkarbamoyl)-2-(l//- “ indol-3-y!) ethylkarbamát (51) Výtěžek: 73,6 %. Žlutý olej. ‘H NMR (500 MHz, Methanol-c/4) δ 8,08 (d,J= 9,1 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,53 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,31 (dd, J- 9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,99 (m, 3H), 4,26 (m, 1H), 3,56 (m, 2H), 3,30 (m, 2H), 3,12 (m, 2H), 2,93 (m, 3H), 2,65 (m, 2H), 1,87 (m, 4H), 1,62 (m, 2H), 1,35 (s, 9H), 1,27 (m, 5H), 1,11 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, MethanoW4) δ 174,57, 158,82, 157,46, 154,03, 147,18, 137,98, 136,22, 128,78, 126,90, 125,31, 125,24, 124,50, 122,33, 119,70, 119,38, 118,71, 116,06, 112,20, 110,97, 80,59, 61,52, 57,13, 40,23, 33,40, 32,02, 29,95, 29,89, 29,44, 28,63, 27,71, 27,53, 25,70, 23,74, 23,23, 22,05, 20,85; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C36H47C1N503+ (m/z): 632,3362; nalezeno; 632,3359 tert- butyl l-(2-(6-chlor-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)oktylkarbamoyl)-2-(li/- - indol-3-yl) ethylkarbamát (52) Výtěžek: 42,6 %. Hnědý olej. *H NMR (500 MHz, Methanol-c/4) δ 8,14 (d, J~ 9,1 Hz, 1H), 7,69 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 7,53 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,35 (dd, J= 9,1, 2,2 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7,00 (m, 3H), 4,26 (m, 1H), 3,63 (m, 2H), 3,13 (m, 2H), 2,93 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 1,93 (m, 10H), 1,89 (m, 4H), 1,67 (m, 2H), 1,35 (s, 9H), 1,10 (m, 2H). ,3C NMR (126 MHz, Methanol-í/4) 5174,58, 172,98, 157,66,154,69,146,01, 137,98, 136,89, 128,78, 127,21, 125,50,124,50,124,23, 122,33, 119,70,119,37,118,17,115,64, 112,21, 110,98, 80,58,61,52, 57,14, 40,28, 32,69, 31,91, 30,14, 30,09, 29,43, 28,63, 28,32, 27,70, 27,55, 25,53, 23,59, 22,98, 22,06, 20,85; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C37H49C1N503+ (m/z): 646,3519; nalezeno: 646,3510 Příklad 4 OJt

Postup pro přípravu sloučenin obecného vzorce I (53a73).

Sloučeniny byly připraveny podle 5$chématu 2. Meziprodukty 32*52 (2,46 mmol) byly rozpuštěny v methanolu (20 ml) a k roztoku byla přidána HC1 (35% vodný roztok, 20 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 24 hodin při laboratorní teplotě. Výsledný surový produkt byl přefiltrován a sušen za sníženého tlaku. Byly získány konjugáty takrinu a (TL· tryptofanu 53^73 jako dihydrochloridy ve středním až vysokém výtěžku (38,1 až 98,5 %).

Analogickým postupem byly připraveny následující deriváty, jejichž charakterizace je uvedena; yV-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)ethyl-2-amino-3-(l//-indol-3-yI) propylamid dihydrochlorid (53). Výtěžek: 98,5 %. Žlutý prášek. J.t.: 97,11*99,2 °C. 'H NMR (500 MHz, DMSO-í/6) δ 11,05 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 9,29 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 8,38 (d, J= 5,5 Hz, 3H), 7,96 (d,J= 9,2 Hz, 1H), 7,82 (d, 2,6 Hz, 1H), 7,62 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,49 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7,20 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 6,94 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,37 (m, 2H), 3,11 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 2,71 (m, 2H), 2,49 (m, 2H), 1,77 (m, 5H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 169,39, 156,85, 154,96, 150,05, 136,33, 132,63, 127,22, 124,91, 124,18, 121,16, 118,63, 118,47, 117,77, 111,51, 111,30, 107,09, 103,74, 56,53, 53,07, 45,97, 34,20, 28,08, 27,17, 25,10, 21,98, 20,41, 18,76; HRMS (ESf): [M+H]+: vypočítáno pro C27H32N502+ (m/z): 458,2551; nalezeno: 458,2549 /V-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)propyl-2-amino-3-(17/-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (54). - 5 0\J 1 .t.: 97,2 A 101,4 °C. *H NMR (500 MHz, DMSO-í/6) δ 11,08 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 9,06 (m, 1H), 8,35 (d, J= 5,2 Hz, 3H), 7,98 (d, J= 9,2 Hz, 2H), 7,84 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 7,66 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,49 (dd, J= 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,31 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,97 (m, 2H), 3,93 (m, 4H), 3,76 (m, 2H), 3,15 (m, 4H), 3,00 (m, 2H), 2,71 (m, 2H), 1,75 (m, 6H). I3C NMR (126 MHz, DMSO-í/6) δ 168,87, 157,11, 155,12, 150,21, 136,62, 132,87, 127,53, 125,19, 124,36, 121,42, 121,25, 119,01, 118,74, 117,95, 111,78, 111,50, 107,50, 103,88, 56,76, 43,77, 36,05, 30,40, 28,32, 27,61, 25,33, 23,06, 22,21, 20,70; HRMS (ESf): [M+H]+: vypočítáno pro (m/z): 472,2708; nalezeno: 472,2702 /V-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)butyl-2-amino-3-(l//-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (55). Výtěžek: 98,5 %. Šedý olej. 'H NMR (500 MHz, Methanol-í/4) 5 7,75 (dd, J = 9,2, 1,7 Hz, 1H), 7,65 (t, / = 2,2 Hz, 1H), 7,60 (dt, J = 7,3, 1,2 Hz, 1H), 7,49 (dt, J= 4,7, 2,0 Hz, 2H), 7,21 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 7,00 (m, 2H), 4,08 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,81 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 3,20 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 2,73 (m, 2H), 1,92 (m, 6H), 1,61 (m, 2H), 1,40 (m, 2H).13C NMR (126 MHz, Methanol-í/4) δ 170,01, 158,64, 157,04, 150,75, 138,06, 134,40, 128,41, 125,63, 125,40, 122,67, 121,79, 120,09, 119,34, 118,73, 112,90, 112,46, 108,12, 104,95, 56,78, 55,25, 48,06, 40,01, 29,26, 29,10, 28,81, 27,14, 25,77, 23,18, 21,84; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro (m/z): 486,2864; nalezeno: 486,2682 /V-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)pentyl-2-amino-3-(l//-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (56). Výtěžek: 73,0 %. Šedý prášek. 5.t.: 155,0 1157,7 °C. 'H NMR (500 MHz, DMS(M) δ 11,13 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,75 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 8,32 (d, J = 5,5 Hz, 3H), 7,97 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,84 (d, J= 2,6 Hz, 1H), 7,64 (d,J= 7,9 Hz, 1H), 7,51 (s, 2H), 7,30 (d, J= 2,7 Hz, 3Η), 7,20 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 6,97 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,75 (m, 2H), 3,10 (m, 3H), 2,99 (m, 3H), 2,70 (m, 2H), 2,49 (m, 3H), 1,78 (m, 4H), 1,60 (m, 2H), 1,35 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-í/6) 6 169,39, 156,85, 154,96, 150,05, 136,33, 132,63, 127,22, 124,91, 124,18, 121,16, 118,63, 118,47, 117,77, 111,51, 111,30, 107,09, 103,74, 56,53, 56,21, 53,07, 45,97, 40,20, 39,20, 34,20, 28,08, 27,17, 25,10, 21,98, 20,41, 18,76; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro CsoHagNsC^ (m/z): 500,3021; nalezeno: 500,3021 iV-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)hexyI-2-amino-3-(l//-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (57). _ Výtěžek: 98,5 %. Hnědý prášek. J.t.: 132,4 £ 135,6 °C. 'H NMR (500 MHz, Methanol-d,) δ 7,73 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 7,64 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 7,59 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 7,47 (dd, J= 9,1, 2,3 Hz, 1H), 7,32 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,01 (m, 2H), 4,07 (t, J= 7,3 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,87 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 3,30 (m, 2H), 3,18 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 2,73 (m, 2H), 1,91 (m, 4H), 1,74 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 1,31 (m, 4H), 1,17 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, MethanoW4) δ 169,87, 158,54, 157,06, 150,60, 138,05, 134,41, 128,36, 125,51, 122,67, 121,76, 120,08, 119,23, 118,60, 112,78, 112,48, 108,09, 104,93, 56,68, 55,20, 53,83, 40,44, 31,81, 29,73, 29,23, 28,82, 27,38, 27,31, 25,67, 23,15, 21,85, 21,66; HRMS (ESf): [M+H]+: vypočítáno pro CaitLwNsC^ (m/z): 514,3177; nalezeno: 514,3176 Ař-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)heptyl-2-amino-3-(l//-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (58). ^ Výtěžek: 85 %. Žlutý prášek. J.t.: 125,1 4 128,9 °C. 'H NMR (500 MHz, DMSO-ífc) δ 11,11 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 8,61 (s, 1H), 8,30 (d, J= 5,3 Hz, 3H), 7,98 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,63 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,50 (dd, J= 9,2, 2,5 Hz, 1H), 7,33 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,20 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 6,99 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,78 (m, 2H), 3,18 (m, 2H), 3,01 (m, 3H), 2,69 (m, 3H), 1,78 (m, 5H), 1,67 (m, 2H), 1,22 (m, 6H), 1,12 (m, 2H). I3C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 168,24, 156,66, 154,92, 149,78, 136,35, 132,74, 127,31, 124,85, 123,95, 121,14, 120,98, 118,70, 118,46, 117,46, 111,54, 110,97, 107,25, 103,90, 56,31, 53,05, 46,63, 38,84, 30,50, 28,69, 28,47, 28,01, 27,43, 26,32, 26,17, 24,95, 21,92, 20,47; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C32H42N5CV (m/z): 528,3334; nalezeno: 528,3335 yV-(2-(7-methoxy-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)oktyl-2-amino-3-(l//-índol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (59). Výtěžek: 79,2 %. Žlutý prášek. J.t.: 163,5 * 166,2 °C. ’H NMR (500 MHz, Methanol-d,) δ 7,75 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 7,65 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 7,60 (d, 7,9 Hz, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,33 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,03 (m, 2H), 4,06 (t, J= 7,5 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,89 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,18 (m, 2H), 3,00 (m, 4H), 2,73 (m, 2H), 1,92 (m, 4H), 1,79 (m, 2H), 1,39 (m, 2H), 1,25 (m, 8H). ,3C NMR (126 MHz, MethanoW4) δ 169,85, 158,55, 157,14, 150,61, 138,08, 134,47, 128,37, 125,52, 125,37, 122,71, 121,79, 120,14, 119,21, 118,61, 112,83, 112,51, 108,10, 104,98, 58,31, 56,64, 55,23, 40,62, 31,94, 30,14, 30,11, 29,82, 29,24, 28,84, 27,67, 25,62, 23,15, 21,87, 21,35; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro QbH^NsíV (m/z): 542,3490; nalezeno: 542,3483 /V-(2-(l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-yIamino)ethyI-2-amino-3-(l//-indol-3-yI) propylamid dihydrochlorid (60). Výtěžek: 86,7 %. Žlutý prášek. J.t: 192,4 ^ 195,3 °C. ‘H NMR (300 MHz, DMSO-<4) δ 14,25 (s, 1H), 11,06 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 9,36 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 8,44 (d, 9,2 Hz, 2H), 8,02 (dd, J = 8,6, 1,2 Hz, 1H), 7,83 (m, 2H), 7,55 (m, 2H), 7,23 (m, 2H), 6,90 (m, 2H), 4,26 (m, 2H), 3,99 (m, 1H), 3,85 (m, 2H), 3,13 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 2,59 (m, 2H), 1,78 (m, 4H). 13C NMR (75 MHz, DMS(M) δ 169,65, 155,74, 150,68, 138,05, 136,28, 132,65, 127,22, 125,42, 125,20, 124,92, 121,12, 119,26, 118,60, 118,46, 115,64, 111,48, 111,42, 107,05, 56,19, 53,04, 46,96, 34,17, 28,07, 27,14, 24,09, 21,66; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C26H3oN50+ (m/z): 428,2445; nalezeno: 428,2442 7V-(2-(l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamíno)propyl-2-amino-3-(l/f-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (61). ^ Výtěžek: 92,1 %. Žlutý prášek. Ž.t.: 148,8 * 152,0 °C. 'H NMR (500 MHz, MethanoW4) δ 8,28 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 7,81 (d, J= 4,0 Hz, 2H), 7,54 (m, 2H), 7,23 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,94 (m, 2H), 4,28 (m, 1H), 3,18 (m, 2H), 3,02 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 1,94 (m, 8H), 1,80 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, Methanol-d4) δ 175,48, 157,91, 151,69, 139,64, 137,92, 133,98, 128,76, 126,44, 126,36, 124,68, 122,30, 120,12, 119,69, 119,40, 117,05, 112,95, 112,26, 110,85, 57,42, 45,69, 37,07, 31,27, 29,36, 28,64, 25,02, 23,01, 21,83; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C27H32N50+ (m/z): 442,2602; nalezeno: 442,2597 ^-(2-(1,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)butyl-2-aiiiino-3-(l/ř-mdol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (62). 7* Výtěžek: 52,6 %. Žlutý prášek. $.t.: 76,3 ^81,0 °C. *H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10,78 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 8,10 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,83 (t, J= 5,7 Hz, 1H), 7,69 (dd, J = 8,3, 1,2 Hz, 1H), 7,55 (d, J- 7,9 Hz, 1H), 7,50 (ddd, J= 8,2, 6,7,1,2 Hz, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,10 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,99 (m, 2H), 6,67 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 4,12 (m, 1H), 3,02 (m, 2H), 2,88 (m, 2H), 2,70 (m, 2H), 1,79 (m, 4H), 1,50 (m, 2H), 1,38 (m, 2H), 1,29 (m, 4H). ,3C NMR (126 MHz, DMSO-í/6) δ 171,92, 157,91, 155,26, 150,51, 146,89, 136,19, 128,25, 127,52, 123,74, 123,40, 123,23, 120,93, 120,31, 118,65, 118,25, 115,87, 111,37, 110,42, 78,05, 55,34,47,83, 38,43, 33,57, 28,30, 26,64, 25,22, 22,90, 22,57; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C28H34NsO+ (m/z): 456,2758; nalezeno: 456,2747 ^-(2-(1,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)pentyl-2-amino-3-(l//-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (63). Výtěžek: 83,0 %. Hnědý prášek, fc.t.: 118,5 £ 121.1 °C. 'H NMR (300 MHz, D20) δ (ppm) 7,73 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,27 (m, 2H), 7,14 (m, 1H), 7,04 (m, 2H), 6,69 (m, 2H), 4,08 (m, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,37 (m, 2H), 3,03 (m, 2H), 2,44 (m, 2H), 2,22 (m, 4H), 1,65 (m, 4H), 1,41 (m, 2H), 0,95 (m, 2H). 13C NMR (75 MHz, D20) 5 168,82, 154,52, 148,87, 136,93, 135,46, 132,25, 126,23, 124,58, 124,51, 124,38, 121,14, 118,60, 118,18, 117,53, 114,21, 111,05, 110,34, 105,77, 57,28, 53,42, 46,97, 39,06, 30,10, 29,26, 27,11, 26,77, 22,93, 20,92, 19,80; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C29H36N50+ (m/z): 470,2915; nalezeno: 470,2910 ;V-(2-(l ,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)hexyl-2-amino-3-(l//-indoI-3-yI) propylamid dihydrochlorid (64). Výtěžek: 62,7 %. Hnědý olej. *H NMR (300 MHz, Methanol-í/4) δ 8,36 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,80 (m, 2H), 7,58 (m, 2H), 7,32 (m, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,00 (m, 2H), 4,09 (m, 1H), 3,90 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,30 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,16 (m, 4H), 1,93 (m, 4H), 1,76 (m, 2H), 1,31 (m, 4H). ,3C NMR (75 MHz, Methanol-d4) δ 169,86, 157,77, 151,51, 139,63, 138,02, 133,97, 128,37, 126,48, 126,30, 125,53, 122,64, 120,09, 120,06, 119,27, 116,94, 112,71, 112,47, 108,08, 58,30, 55,18, 40,40, 31,33, 29,69, 27,28, 27,23, 24,97, 22,95, 21,80, 20,82, 20,79; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C3oH38NsO+ (m/z): 484,3071; nalezeno: 484,3066 yV-(2-(l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)heptyl-2-amino-3-(l//-mdol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (65). Výtěžek: 38,1 %. Bíložlutý prášek. J.t.: 148,7 £ 150,8 °C. !H NMR (500 MHz, D20) δ 7,78 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,24 (m, 2H), 7,11 (m, 2H), 6,94 (m, 1H), 6,76 (m, 2H), 3,96 (m, 1H), 3.50 (m, 2H), 2,95 (m, 2H), 2,49 (m, 2H), 2,11 (m, 2H), 1,63 (m, 4H), 1,55 (m, 2H), 1,19 (m, 2H), 1,08 (m, 8H). 13C NMR (126 MHz, D20) δ 169,03, 157,77, 155,03, 149,12, 137,35, 135,75, 132,42, 126,25, 124,69, 124,54, 121,57, 118,93, 118,48, 117,55, 114,48, 111,41, 110,68, 105,89, 57,40, 53,55, 47,31, 39,30, 29,45, 27,56, 27,45, 27,04, 25,43, 25,40, 22,79, 21,11,20,04; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C3iH4oN50+ (m/z): 498,3228; nalezeno: 498,3225 iV-(2-(l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)octyl-2-aniino-3-(l//-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (66). Výtěžek: 83,3 %. Žlutý olej. 'H NMR (500 MHz, DMSO-</6) δ 14,20 (s, 1H), 11,09 (s, 1H), 8,43 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 8,03 (d, 8,4 Hz, 1H), 7,83 (m, 1H), 7,58 (m, 2H), 7,32 (d, J= 8,1

Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,99 (m, 2H), 3,94 (m, 1H), 3,83 (m, 2H), 3,17 (m, 2H), 3,02 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 1,81 (m, 4H), 1,70 (m, 2H), 1,20 (m, 10H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-<4) δ 168,23, 155,80, 150,76, 138,06, 136,35, 132,69, 127,33, 125,25, 125,17, 124,86, 121,14, 119,30, 118,69, 118,47, 115,73, 111,54, 111,21, 107,26, 53,06, 52,57, 47,30, 36,65, 34,22, 29,99, 28,78, 28,72, 28,67, 28,07, 27,42, 26,36, 24,25, 21,67; HRMS (ESf): [M+H]+: vypočítáno pro C32H42N50+ (m/z): 512,3384; nalezeno: 512,3378 yV-(2-(6-chlor-l,2,3,4-tctrahydroakridin-9-ylamino)ethyl-2-amino-3-(l//-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (67). v "I £λ3 Výtěžek: 56,2 %. Žlutý prášek. K.t.: 65,1 ^ 68,5 °C. *H NMR (300 MHz, D20) δ 7,63 (d,J = 9,4 Hz, 1H), 7,35 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 7,14 (m, 3H), 6,72 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 6,26 (m, 1H), 3.51 (m, 2H), 3,29 (m, 2H), 2,67 (dt, J= 7,9, 4,1 Hz, 2H), 2,01 (m, 6H), 1,67 (m, 2H). 13C NMR (75 MHz, D20) δ 171,34, 154,92, 150,15, 138,59, 138,43, 135,68, 127,25, 126,83, 125,54, 121,66, 119,30, 117,90, 117,77, 113,93, 111,98, 111,28, 105,97, 53,73,39,50, 30,83, 30,20, 28,23, 26,55, 23,06, 21,77; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C26H29C1N50+ (m/z): 462,2056; nalezeno: 462,2052 yV-(2-(6-chlor-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)propyl-2-ainino-3-(l//-indol-3'yI) propylamid dihydrochlorid (68). τ' Výtěžek: 53,0 %. Žlutohnědý prášek. J.t.: 82,2 ^>85,3 °C. ‘Η NMR (500 MHz, D20) 6 7,56 (d, J= 9,3 Hz, 1H), 7,32 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 7,18 (m, 3H), 6,83 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 6,62 (m, 2H), 4,13 (m, 1H), 3,17 (m, 2H), 3,11 (m, 2H), 2,74 (m, 2H), 2,22 (m, 4H), 1,81 (m, 4H), 1,41 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, D20) 6 169,05, 154,72, 149,89, 137,89, 135,32, 126,42, 124,95, 124,50, 124,46, 121,18, 121,06, 118,62, 117,57, 117,30, 112,87, 111,51, 110,91, 106,10, 53,90,44,63, 36,37, 30,23, 28,68, 27,66, 26,53,22,85,21,02; HRMS (ESf): [M+H]+: vypočítáno pro C27H3iClN50+ (m/z): 476,2212; nalezeno: 476,2210

Ar-(2-(6-chIor-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)butyl-2-amino-3-(l/7-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (69). - Λ1 Výtěžek: 82,8 %. Hnědý prášek. J}.t.: 88,5 *91,7 °C. ‘H NMR (500 MHz, DMSO-í/6) δ 11,09 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,75 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 8,44 (d, J= 9,3 Hz, 1H), 8,30 (d, J= 5,5 Hz, 3H), 8,11 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,63 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,56 (dd, J= 9,3, 2,2 Hz, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,21 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 7,01 (dd, J= 8,2, 6,9 Hz, 1H), 6,93 (m, 1H), 3,94 (m, 1H), 3,77 (m, 2H), 3,12 (m, 3H), 3,00 (m, 1H), 2,98 (m, 2H), 2,49 (m, 2H), 1,79 (m, 4H), 1,62 (m, 2H), 1,37 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 168,38, 155,55, 151,21, 138,80, 137,09, 136,33, 127,84, 127,26, 125,38, 124,87, 121,13, 118,69, 118,46, 118,03, 114,30, 111,70, 111,50, 107,23, 53,06, 46,89, 38,32, 34,19, 28,07, 27,43, 25,88, 24,21, 22,67, 21,54; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C28H33C1N50+ (m/z): 490,2369; nalezeno: 490,2367 yV-(2-(6-chlor-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)pentyl-2-amino-3-(l//-indoI-3-yl) propylamid dihydrochlorid (70).

Í<% Z .t.: 83,474 87,8 °C. ‘H NMR (500 MHz, DMSO-4) δ 11,12 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 8,69 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 8,45 (d, J= 9,3 Hz, 1H), 8,31 (d, J= 5,5 Hz, 3H), 8,12 (d, /= 2,2 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,63 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,56 (dd, J = 9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,44 (m, 1H), 7,30 (m, 2H), 7,20 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 6,97 (m, 2H), 3,94 (m, 1H), 3,78 (m, 2H), 3,13 (m, 3H), 2,98 (m, 3H), 2,63 (m, 2H), 1,78 (m, 4H), 1,67 (m, 2H), 1,33 (m, 2H), 1,22 (m, 2H). I3C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 168,31, 155,53, 151,40, 138,86, 137,10, 136,36, 127,89, 127,30, 125,39, 124,87, 121,15, 118,73, 118,49, 118,05, 114,27, 111,67, 111,55, 107,26, 56,21, 53,06, 47,26, 34,21, 29,54, 28,36, 28,07, 27,46, 23,54, 21,54, 20,35; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro Cz^ClNsC/ (m/z): 504,2525; nalezeno: 504,2524 /V-(2-(6-chlor-l,2,3,4-tetrahydroakridÍn-9-ylamino)hexyl-2-amino-3-(l//-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (71). 7 ΛΤ- Výtěžek: 75,0 %. Šedý prášek. R.t.: 141,1 * 143,5 °C. 'H NMR (500 MHz, DMSO-<4) δ 11,12 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 8,65 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 8,46 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 8,32 (d, J = 5,5 Hz, 3H), 8,15 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,55 (dd, J = 9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,97 (m, 2H), 3,95 (m, 1H), 3,80 (m, 2H), 3,17 (t, J= 6,3 Hz, 2H), 2,99 (m, 4H), 2,63 (m, 2H), 1,79 (m, 4H), 1,66 (m, 2H), 1,22 (m, 6H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-ťfc) δ 168,23, 155,49, 151,17, 138,82, 137,04, 136,32, 127,80, 127,29, 125,33, 124,79, 121,09, 118,68, 118,43, 118,02, 114,29, 111,62, 111,50, 107,24, 56,16, 53,03, 47,16, 29,78, 28,63, 28,05, 27,38, 25,97, 25,87, 24,20, 22,66, 21,53, 20,34; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C3oH37C1N50+ (m/z): 518,2682; nalezeno: 518,2681

Ar-(2-(6-chlor-l, 2,3,'4-tetrahydroakridin-9-ylamino)heptyl-2-amino-3-(l//-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (72). - X <x*> Výtěžek: 84,0 %. Hnědý prášek. R.t.: 121,8 * 125,9 °C. *H NMR (500 MHz, DMSO-ťfc) δ 10,82 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,39 (d, J= 9,3 Hz, 1H), 8,01 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,82 (t, J= 5,7 Hz, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,29 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,08 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 6,97 (m, 2H), 6,68 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 4,12 (m, 1H), 3,81 (m, 2H), 3,67 (m, 2H), 3,00 (m, 4H), 2,60 (m, 2H), 1,79 (m, 4H), 1,70 (m, 2H), 1,28 (s, 8H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 171,87, 155,58, 155,25, 151,10, 138,80, 137,18, 136,17, 127,74, 125,34, 123,70, 120,88, 118,58, 118,20, 114,20, 111,66, 111,37, 110,36, 78,04, 55,39, 48,75, 47,43, 29,81, 29,02, 28,44, 26,24, 26,17, 23,97, 22,66, 21,46, 20,34; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C3iH39ClN50+ (m/z): 532,2838; nalezeno: 532,2829 yV-(2-(6-chlor-l,2,3,4-tetrahydroakridin-9-ylamino)octyl-2-amino-3-(l//-indol-3-yl) propylamid dihydrochlorid (73). ^ Výtěžek: 76,0 %. Hnědý prášek. $.t.: 151,9 N 154,3 °C. 'Η NMR (500 MHz, Methanol-t/4) δ 8,36 (d= 9,2 Hz, 1H), 7,82 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 7,59 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,51 (m, 2H), 7,32 (m, 1H), 7,01 (m, 2H), 4,08 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 3,91 (t, J= 7,3 Hz, 2H), 3,18 (m, 2H), 2,99 (m, 3H), 2,66 (m, 3H), 1,93 (m, 4H), 1,81 (m, 2H), 1,40 (m, 2H), 1,27 (m, 6H), 1,14 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, Methanokfc) δ 168,28, 155,62,151,21, 138,89, 137,15, 136,39, 127,84, 127,34, 125,38, 124,89, 121,20, 118,72, 118,51, 118,10, 114,34, 111,71, 111,57, 107,28, 67,19, 53,10, 47,41, 34,36, 31,52, 29,88, 28,76, 28,11, 27,48, 27,06, 24,17, 22,46, 21,57, 20,40; HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C32H4iClN50+ (m/z): 546,2995; nalezeno: 546,2991 Příklad 5

Testování in vitro: inhibice AAChE a /íBChE látkami 53 až 73 a referenčními sloučeninami THA, 7-MEOTA a 6-CI-THA Tři série připravených nových konjugátů na bázi takrinu a tryptofanu, 7-MEOTA a tryptofanu

a/nebo 6-chlorotakrinu a tryptofanu byly zkoumány pro svůj inhibiční potenciál vůči AAChE k a ůBChE. Výsledky testů jsou uvedeny v Xabulce 2 a pro porovnání jsou uvedeny i referenční sloučeniny Z-tryptofan, takrin, 7-MEOTA a 6-chlorotakrin.

In vitro aktivita konjugátů 7-MEOTA-tryptofan (53-59), THA-tryptofan (60-66) a 6-CI-THA tryptofan (67-73) byla stanovena na modelu lidské rekombinantní AChE a BChE z lidské plazmy za použití Ellmanovy metody (Ellman, G. L.; Courtney, K.D.; Andres, V.; Feather-Stone, R.M., Biochem, Pharmacol. 1961, 7, 88-95; Pohanka, M.; Jun, D.; Kuca, K., Talanta. 2008, 77, 451-454).

Tabulka 2

a Uvedené výsledky jsou průměrnou hodnotou alespoň tří experimentů. b Index selektivity (SI) pro /?AChE vyjadřuje poměr ňBChE ICso/ňAChE IC50. cn.a. = Látka v testovaném koncentračním rozmezí neinhibuje.

Jednotlivé takrin-tryptofanové deriváty se liší v délce spojovacího řetězce, což je důležitý faktor při inhibici obou enzymů cholinesterasy. Deriváty s více metylenovými skupinami ve spojovacím řetězci mají lepší inhibiční aktivitu vůči AAChE a /zBChE. Optimální délka řetězce byla 5 až 8 uhlíkových atomů, s optimem 5 až 6 methylenových můstků. Všechny nové deriváty jsou účinnými inhibitory vůči /zBChE s hodnotami IC50 v mikromolámích až nanomolámích koncentracích hodnot IC50. Všech 21 nově připravených derivátů vykazovalo vyšší inhibiční účinnost v porovnání se standardy 7-MEOTA a 6-—chlorotakrin. Heterodimery 57, 64 a 71 byly nej lepšími inhibitory /zBChE z celé skupiny nových konjugátů. Sloučenina 64 jako jediná ze série vykazovala inhibiční aktivitu vůči /zBChE v nanomolámích hodnotách (IC50 = 3,94 nM). Jedná se tedy o inhibitor, který je 55,2 x silnějším inhibitorem vůči úBChE ve srovnání se standardem THA. Všechny nové konjugáty byly v porovnání s referenčním standardem 7-MEOTA také zároveň lepšími inhibitory /zAChE, s hodnotami IC50 v mikromolámích až sub-mikromolámích koncentracích, s výjimkou derivátu 55. Většina sloučenin s konjugovaným THA (hybridy 63 až 66) byly lepšími inhibitory /zAChE než samotný THA a derivát 71 obsahující 6-chlorotakrinovou část měl lepší inhibiční aktivitu vůči /zAChE než referenční standard 6-chlorotakrin (1,5 χ vyšší účinnost). Nejlepším inhibitorem ze série obsahující 7-methoxytakrin byl heterodimer 56, který měl pět metylenových skupin v spojovacím řetezci a vykazoval 16 * vyšší inhibiční aktivitu vůči /zAChE než referenční standard 7-MEOTA. Z takrinových derivátů byl nejlepším inhibitorem hybrid 66 s osmiuhlíkatým řetězcem a měl 4 χ vyšší inhibiční potenciál vůči /zAChE ve srovnání se standardem THA. Nejlepší 6-chlorotakrinový derivát 71 s šestiuhlíkatým řetězcem vykazoval lepší inhibiční aktivitu vůči /zAChE než standard 6-C1-THA a derivát 72 se sedmi uhlíky v řetězci měl inhibiční aktivitu vůči /zAChE srovnatelnou se standardem 6-C1-THA. Většina z připravených derivátů se chovala jako více selektivní inhibitory vůči BChE (SI < 1,0). Vyšší preferenci pro AChE vykazují konjugáty na bázi 6-chlorotakrinu.

Claims (7)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Konjugáty na bázi takrinu a tryptofanu obecného vzorce I,

   kde n je 2 až 8, R1 je 0(C]-C4)alkyl nebo H a R2 je H, Cl nebo Br, přičemž platí, že pokud je R1 OCH3, R2 současně nemůže být Cl, a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s kyselinami.
2. 2. Způsob přípravy konjugátů na bázi takrinu a tryptofanu obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačený tím, že v prvním kroku se podrobí reakci 9-chlortakriny za přítomnosti fenolu na příslušné diaminotakriny, ve druhém kroku se tyto diaminotakriny podrobí reakci s Boc- chráněným tryptofanem za vzniku konjugátů s chráněnou NH2 skupinou a v posledním kroku se odstraní Boc- chránící skupina za vzniku látek obecného vzorce I.
3. 3. Konjugáty na bázi takrinu a tryptofanu obecného vzorce I podle nároku 1 a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s kyselinami, pro použití pro inhibici cholinesteras.
4. 4. Konjugáty na bázi takrinu a tryptofanu obecného vzorce I podle nároku 1 a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s kyselinami, pro použití jako antioxidanty a/nebo antí-amyloidní sloučeniny.
5. 5. Konjugáty na bázi takrinu a tryptofanu obecného vzorce I podle nároku 1 a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s kyselinami, pro použití jako léčivo.
6. 6. Konjugáty na bázi takrinu a tryptofanu obecného vzorce I podle nároku 1 a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s kyselinami pro použití při léčení Alzheimerovy nemoci a/nebo demence.
7. 7. Farmaceutický přípravek, vyznačený tím, že obsahuje alespoň jeden konjugát na bázi takrinu a tryptofanu obecného vzorce I definovaného v nároku 1 a alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič.