CZ2011232A3

CZ2011232A3 - Zpusob ovlivnení rozpustnosti alaptidu, ovlivnení jeho prostupu pres membrány a jeho farmaceutické kompozice pro humánní a veterinární aplikace

Info

Publication number: CZ2011232A3
Application number: CZ20110232A
Authority: CZ
Inventors: Jampílek@Josef; Opatrilová@Radka; Rezácová@Anna; Oktábec@Zbynek; Pávek@Petr; Král@Vladimír; Dohnal@Jirí
Original assignee: Veterinární a farmaceutická univerzita Brno,
Priority date: 2011-04-20
Filing date: 2011-04-20
Publication date: 2012-10-31

Abstract

Vynález se týká farmaceutické kompozice s modifikovaným vstrebáváním pres pokožku pro humánní a veterinární aplikace, která obsahuje alaptid ve forme komplexu a/nebo smesi s excipienty s amfifilními vlastnostmi, pricemž uvedeným alaptidem muže být nanoalaptid nebo mikronizovaný alaptid.

Description

Alaptid, (S)-8-methyl-6,9-diazaspiro[4.5]dekan-7,10-dion, viz obr. 1, patří mezi látky inhibující uvolňování hormonu, který stimuluje mclanocyty (MIF), tj. /.-prolyl-Lleucylglycinamidu. Použití samotného MIF jako terapeutického agens je limitováno jeho snadnou enzymatickou hydrolýzou. Série spiroderivátů MIF byla připravena především proto, aby byla tato nevýhoda eliminována {Kasafirek E. et al. Cs. pat. 231 227, 1986', US pat. 5,318,973, 1994', Čs. pat. 260 899, 1989). Jako nejlepší analog jak z hlediska enzymatické stability tak vzhledem k jeho farmakodynamickému profilu, byl vybrán alaptid. Kromě jiných efektů, byl u alaptidu prokázán významný hojivý účinek na experimentálních zvířecích modelech {Kasaftrek E. et al. Cs. pat. 276 270, 1992).

(SFS-methyl-e.g-diazaspiroD.SJdekan-y.lO-dion (S)-alaptid

Obrázek 1. Strukturní vzorec alaptidu.

Alaptid pravděpodobně působí negativně na inhibici uvolňování hormonu stimulujícího melanocyty, a tím zvyšuje koncentraci melanocytů v epidermu. Melanocyty významně ovlivňují tvorbu a funkci keratinocytů prostřednictvím organel známých jako melanosomy. {McGrath J.A., Eady R.A., Pope F.M. Rook's textbook of dermatology, 7th ed. Blackwell Publishing, 2004, pp.3—7’, James W., Berger T. Elston D. Andreu diseases of the skin: Climcal dermatologv, lOth ed. Saunders, 2005, pp. 5-6). Keratinocyty migrují zc stratům basale přes stratům spinosum a stratum granulosum do stratům corneum, kde podporují obnovu epidermu, {Watt F.M. The epidermal keratinocyte. BioEssays 1988, 8, 163-167).

Alaptid byl testován na diploidní linii buněk lidských embryonálních plic LEP-19 s koncentrací 5, 10 a 100 pg/ml média, kde vykázal stimulační účinek na růst a množení buněk bez transformačních změn jejich morfologie. V in vitro testech bylo rovněž prokázáno, že alaptid zvyšuje prolifcraci buněk a oba zmíněné efekty mohou významně přispět k hojivému účinku alaptidu. Byla provedena řada pokusů vyhodnocujících vliv alaptidu na epidermální regeneraci. Pokusy byly provedeny na domácích prasatech, jimž byl alaptid aplikován na experimentální poranění, při čemž rychlejší kožní regenerace byla pozorována po aplikaci alaptidu. Obdobně, alaptid urychloval hojení experimentálních kožních poranění u potkanů. Alaptid prokázal velmi nízkou akutní toxicitu u potkana a myši; u samic potkanů dávka 1 g/1 kg způsobila pouze 20% úmrtnost. Baterie testů pro hodnocení genotoxického účinku prokázala, že i desetinásobek předpokládané denní dávky lze považovat za bezpečný. Teratogenní a embryotoxický účinek alaptidu nebyl pozorován. Hodnocení subchronickc a chronické toxicity bylo provedeno na dvou živočišných druzích, potkanech a psech, v dávkách 0,1; 1,0 a 20 mg/ml u potkanů; 0,1; 1,0 a 10 mg/ml u psú - žádné toxické efekty nebyly zaznamenány. Metabolická studie u potkana prokázala, žc sc alaptid vylučuje nezměněn, a to převážně (z 90 %) močí; obdobný metabolický profil byl zjištěn i u člověka.

Byla rovněž sledována toxicita obou (/?)- a (5)-enantiomerů alaptidu na primárních lidských hepatocytových kulturách (šarže HEP220492 a HEP 220465). Hepatocyty byly získány a atestovány firmou Biopredic Intemational (Rennes, France). Byla použita koncentrace Hepatocyty byly kultivovány 24 hodin za předepsaných podmínek v přítomnosti (/?)a (5)-enantiomerů alaptidu v koncentraci 20 μΜ. Metabolická studie prokázala, že ani z jeden .: .1

... .··· · • ... ······ · · ······ · a ······ .· a ····«· z enantiomerů alaptidu neindukuje bio transformační enzymy CYP1A1, CYP1A2 a CYP1B1 v hepatocytech, viz obr. 2. Všechny tři tyto bio transformační enzymy jsou kritické v bioaktivaci pro-kancerogeny. Jejich aktivita je také indukována expozicí kůže vlivem UVB záření. Na základě této studie tak může být konstatováno, že alaptid jak v enantiomemě čistých formách tak v racemátu může být bezpečně použit pro lokální aplikace.

Upregulation of CYP1A1, CYP1A2 and CYP1B1 genes by model AhRligand methylcholantrene (MC) and alaptide enantiomers

300,00 -

DMSO

MC 5μΜ * R-ALAPTID 20μΜ « S-ALAPT1D 20μΜ

CYP1B1

Obrázek 2. Ovlivnění biotransformačních enzymů CYP1A1, CYP1A2 a CYP1B1 v hepatocytech.

Při přípravě tekutých forem obsahujících jako účinnou substanci alaptid představuje jeho nízká rozpustnost v lipofílním i hydrofilním mediu značnou nevýhodu, která může vést až k částečnému vyloučení alaptidu v oblasti hojení. Nízká rozpustnost alaptidu může být příčinou i jeho snížené absorpce do spodní vrstvy epidermu.

K dosažení farmakologické aktivity API (farmaceuticky účinné látky) je třeba, aby byla účinná látka dobře rozpustná ve fyziologických tekutinách a byla tak dostupná v místě absorpce. Rozpustnost látky v různých rozpouštědlech je charakteristickou vlastností danc látky. Rozpustnost látky vc vodč do značné míry koreluje s rozpustností ve fyziologických tekutinách a je prvním limitujicím faktorem pro dobrou absorpci a tím biodistribuci. Za bezproblémové, z hlediska farmaceutické formulace, sc považují látky s rozpustností vévodě vyšší než 1%. Pokud tato podmínka není splněna, hledá se řešení, jak rozpustnost zvýšit. Nejen rozpustnost je důležitým faktorem, ale také rychlost rozpouštění, tj. rychlost přechodu rozpouštěné látky do roztoku. Je to fyzikálně-chemická vlastnost, která sc dá ovlivnit tvarem krystalů (morfologie, polymorfíe), velikostí částic, vlastnostmi povrchu látky apod.

Rozpustnost léčiva lze principiálně ovlivnit dvěma způsoby - chemicky (tvorbou solí, pokud je molekula ionizovatelná; po případě jinou modifikací molekuly pro zvýšení hydrofility; přípravou tzv. proléčiv), nebo na fyzikálně-chemickém základě (přídavkem pomocných látek, resp. přípravou nanočástic). Existuje více způsobů jak zvýšit rozpustnost API na fyzikálním *

základě - tvorba molekulových komplexů sc solubilizéry (např. benzoát sodný s kofeinem), avšak nej používanějším jsou inkluzní komplexy s přírodními nebo synteticky upravenými cyklodextriny. Asociace API s cyklodextrinem závisí na velikosti kavity cyklodextrinu, na efektivních rozměrech komplexované látky a v neposlední řadě na nevazebných interakcích API a cyklodextrinu. Jistou nevýhodou tohoto způsobu zvýšení rozpustnosti je ale malá selektivita komplexace a také fakt, že ani samotné cyklodextriny nejsou biologicky zcela inertní. Rozpustné soli organických vícesytných kyselin a hydroxykyselin mají do jisté míry také charakter molekulových komplexů. Dalším způsobem je použití kosolventů - nejčastěji alkoholů - zpravidla ethanolu, glycerolu, propylenglykolu nebo polyethylenglykolů. Rozpustnost lze také zvýšit přidáním povrchově aktivních látek surfaktantú/tenzidů. Ty vytvářejí ve vodném prostředí micely. Hydrofilní části molekuly surfaktantu jsou orientovány do vnějšího vodného prostředí, naopak lipofilní části molekuly jsou orientovány dovnitř micely. Do této kavity je možno uzavřít málo rozpustnou API. Velmi užívaným způsobem zvýšení rozpustnosti je také komplexace API především do polysacharidových matric (nativních nebo chemicky upravených), např. pektinů, glukanů, chitosanů, celulóz, alginátů apod. (Chalabala M. et al. Technologie léků, 2. vydáni. Galén, Praha 2001).

Další možností jak obecně zvýšit rozpustnost API, tedy i alaptidu je příprava nanočástic. Způsoby přípravy nanočástic shrnují monografie, resp. přehledné články (Nalwa H.S. (Ed.) Encyclopedia of nanoscience and nanotechnology. Američan Scientific Publisher 2004; Bhushan B. (Ed.) Handbook of nanotechnology. Springer-Verlag Berlin-Heidelberg, 2004; Rao C., Můller A., Cheetham A.K. The chemistry of nanomaterials, synthesis, properties and applications. IVilev-TCH Weinheim, 2005; Mihranyan A., Stromme M. Solubility of fractal nanoparticles. Surface Science 2007, 601 (2): 315-319; Sahoo N.G., Abbas A., Li C.M. Micro/Nanoparticles design and fabrication for pharmaceutical drug preparation and delivery applications. Curr. Drug Ther. 2008 3 (2):78-97).

Nanočástice lze připravit buď procesem dispergace, což předpokládá rozbití větších mikrometrových částic do nanočástic, nebo procesem precipitace, tedy srážením.

Dispergační procesy

a) Mokré mletí

Při mokrém mletí je nejprve léčivo dispergováno ve vodném roztoku modifikátoru povrchu. Takto vzniklá suspenze sc mele pomocí kuličkového mlýna v přítomnosti mlecího media.

b) Vysokotlaká homogenizace

Tento proces je založen na principu kavitace. což je postupné utváření, růst a implosivní zhroucení bublin páry v kapalině. Hlavní výhodou vysokotlaké homogenizace je, že může být použita jak při laboratorní přípravě tak pro velkoprodukci, neboť vysokotlaké homogenizátory sc vyrábějí v různých velikostech. Kromě toho během tohoto procesu dochází k minimální kontaminaci nanočástic. což je jedním z hlavních cílů výroby.

c) Emulsifikační technologie

Léčivo v organickém solventu je dispergováno ve vodné fázi obsahující surfaktant. Následně je při sníženém tlaku organický solvent odpařen, vzniká suspenze nanočástic, kteráje stabilizovaná přidaným surfaktantem.

Precipitační procesy

a) Sprejové vymrazování v kapalině (SFL)

Vodný, organický, vodně-organický roztok, emulze či suspenze léčiva je atomizován v kryogenní kapalině, jako je dusík. Výsledkem této procedury jsou zmražené nanočástice, které jsou následně lyofilizovány.

b) Odpařovací precipitace do vodného roztoku (EPAS)

Roztok léčiva je v organickém rozpouštědle o nízké teplotě varu zahříván při takovém tlaku, aby bylo dosaženo teploty vyšší, než je bod varu tohoto rozpouštědla za normálních podmínek. Atomizace se provádí horkým vodným roztokem obsahujícím vhodný stabilizující surfaktant.

c) Rychlá expanze z roztoku kapalného plynu (RESS)

Nejprve je vytvořen tuhý roztok z disperze nebo roztoku fosfolipidů či jiného vhodného surfaktantu. Následně je vyvolána rychlá nukleace v tuhém roztoku za přítomnosti vhodného surfaktantu, který zabraňuje dalšímu růstu vzniklých částic.

d) Precipitace se stlačeným plynným antisolventem (PCA)

Kapalný oxid uhličitý je smísen s organickým roztokem obsahujícím léčivo. Postupně dojde k průniku roztoku s léčivem do roztoku oxidu uhličitého, čímž vzroste koncentrace rozpuštěné látky. Po vzniku přesyceného roztoku nastává precipitace nebo krystalizace 7. roztoku.

Zvýše uvedeného textu vyplývá, že pokud se použijí komplcxační látky, resp. látky s povrchovou aktivitou nebo se využijí nanočástice, může dojít, na základě modifikace povrchových vlastností API, i ke změně absorpce, resp. penetrace přes membrány, což bylo experimentálně potvrzeno komplexací alaptidu s různými solubilizéry, resp. komplexačními sloučeninami.

Využití alaptidu v lékových formách (mastech, krémech a hydrogelech) lze v návaznosti na výše zmíněné vlastnosti očekávat. V současnosti je na trhu veterinární mast Alaptid^xspolečnosti Biovcta a.s., Česká republika (složení masfového základu: Polysorbatum 60, Alcohol cetylstearylicus, Paraffínum liquidum, Propylenglycolum, Methylparabenum, Propylparabenum, Aqua pro iniectione). Také je k dispozici alaptid jako součást kosmetických přípravků řady CytovitaF' společnosti Energy Group a.s., Česká republika (složení: voda, bylinný extrakt, cetylstearylový alkohol, máslovníkové máslo, fruktóza, hydroxid sodný, bílá vazelína, cyklopentadimethylsiloxan, alkylester kyseliny benzoové, kyselina octová, konopný olej, lněný olej, sojový olej, vitamin E acetát, ethoxylovaný ricinový olej, makový olej, alkohol benzylnatý, carbopol, kyselina azelaová, parfém, palmitylester vitaminu C, acetylester vitaminu A, alaptid, kyselina dehydrooctová, BHT, kyselina jantarová, vermesin, helixin, cnerginy, octan zinečnatý).

Vzhledem široké škále různých složení formulací, které mohou obsahovat výše zmíněné modifikátory fyzikálních vlastností, lze využít a aplikovat jak suspenzní přípravky tak přípravky, kde je alaptid rozpuštěn v masťových, krémových nebo gelových základech. Je předpoklad, že přípravky s alaptidem budou mít blahodárný vliv na regeneraci poškozených míst kůže.

• · ···· ·· v · · ·

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je nová farmaceutická kompozice s modifikovaným vstřebáváním přes pokožku pro humánní a veterinární aplikace vyznačující se tím, že alaptid se použije formě komplexu a/nebo směsi s excipienty s amfifilními a/nebo komplexačními vlastnostmi. Jako amfifilní látky se použijí např. Tween 20 , Tween 80, Makrogol 300,nebo Makrogol 4000 Makrogol 6000, lauryl síran sodný; Cremophor EL, Poloxamer, propylenglykol, Arlaton 970, β-glukan nebo jeho polysyntetickými modifikace, α-, β- nebo γ-cyklodextrin nebo hydroxypropyl^-cyklodextrin nebo jejich polysyntetická modifikace, methylcelulosa a její deriváty nebo karboxymethylcelulosa a její deriváty, resp. její sodné sole, nesodná sůl karboxymethyldextranu, pektin nebo s jejich sole nebo s jejich polosyntetické deriváty.

Podrobný popis vynálezu

Vynález se týká nové farmaceutická kompozice s modifikovaným vstřebáváním přes pokožku pro humánní a veterinární aplikace vyznačující se tím, že alaptid se použije formě komplexu a/nebo směsi s excipienty s amfifilními a/nebo komplexačními vlastnostmi. Jako amfifilní látky se použijí např. Tween 20 , Tween 80, Makrogol 300,nebo Makrogol 4000 Makrogol 6000, lauryl síran sodný; Cremophor EL, Poloxamer, propylenglykol, Arlaton 970, β-glukan nebo jeho polysyntetickými modifikace, α-, β- nebo γ-cyklodextrin nebo hydroxypropyl-βcyklodextrin nebo jejich polysyntetická modifikace, methylcelulosa a její deriváty nebo karboxymethylcelulosa a její deriváty, resp. její sodné sole, nesodná sůl karboxymethyldextranu, pektin nebo s jejich sole nebo s jejich polosyntetické deriváty.

Kompozice podle tohoto vynálezu se připraví ve formě hydrofóbní oleomasti, hydromasti, oleokrému, hydrokrému nebo hydrogelu s obsahem alaptidu koncentraci 0,1 až 5 % (w/w). Alaptid se výhodně použije v mikrokrystalické formě nebo ve formě formě namo částic. Velikost částic mikrokrystalického alaptidu je v rozmezí 80 % částic do 10 MaxFeret. Střední velikost částic nanoalaptidu je cca 700 nm.

Formulaci podle tohoto vynálezu lze použít v kombinaci s antimikrobiálními a/nebo antifungálními a/nebo antivirotickými a/nebo protizánětlivými (nesteroidními i steroidními) a/nebo analgetickými a/nebo antihemorhagickými o koncentraci 0,001 až 30 % (w/w). Jak bylo výše uvedeno alaptid přítomný v diskutovaných formulacích bude podporovat/způsobovat mnohem rychlejší regeneraci a hojení pokožky než kdyby bylo ve formulaci přítomno pouze některé z léčiv z výše uvedených terapeutických skupin.

Popsaná formulace využívá způsob zvýšení rozpustnosti a penetrace alaptidu pomocí solubilizačních a komplexujících látek, resp. vytvořením nanočástic. Komplexy se připraví mícháním vodných roztoků solubilizačních nebo komplexujících látek s alaptidenr. Po ukončení míchání se komplex použije pro přípravu lékové formy nebo se rozpouštědlo odpaří a v získaném pevném podílu se spektrálními technikami ověří přítomnost komplexu mezi alaptidem a použitou solubílizační, resp. kompletující látkou. Tento produkt komplexace lze následně použít na přípravu lékové formy.

Nanočástice alaptidu se připraví mletím alaptidu s emuígátory a dalšími stabilizátory.

Dále jsou předmětem vynálezu originální farmaceutické kompozice pro humánní a veterinární aplikace vyznačující se použitím excipientů, resp. kombinací excipientů, které modifikují rozpustnost alaptidu v základu masťovém, hydrogelovém nebo krémovém a současně modifikují permeabilitu alaptidu kůží, resp. působí jako vhodný transportní systém.

* • · · · · · · · · · • · · · · · ·· · _z ······ ···· · aa

Π · · · a a ·aa ···· ·· ·· a a·····

Tyto přípravky jsou vhodné pro léčbu kožních a slizničních lézí, např. popálenin, odřenin, dekubitů, bércových a žilních vředů. Terapie těchto kožních poškození je velmi svízelná, dlouhotrvající a ne vždy zcela úspěšná, proto je vhodné mít k dispozici co nej širší paletu účinných terapeutik. Přípravky obsahující alaptid lze použít jak pro formulaci alaptidu samotného tak i pro kombinaci alaptidu s jinými léčivy.

Těmito modifikacemi alaptidu dochází zároveň k ovlivnění penetrace přes membrány včetně kůže. Vyšší rozpustnost ve vodě a modifikace permeace má velký význam pro použití těchto látek ve farmacii.

Předmětem vynálezu je způsob zvýšení rozpustnosti a modifikace penetrace alaptidu a dále originální farmaceutické kompozice pro humánní a veterinární aplikace vyznačující se použitím excipientů, rcsp. kombinací excipientů, které modifikují rozpustnost alaptidu v základu masťovém, hydrogelovém nebo krémovém a současně modifikují permeabilitu alaptidu kůží, resp. působí jako vhodný transportní systém.

Alaptid se vyznačuje velmi nízkou rozpustností; jeho rozpustnost ve vodě je 0,1104 g/100 ml, v ethanolu 0,1011 g/100 ml; ve směsi voda:ethanol 1:1 je 0,3601 g/100 ml a v hexanu je 0,0024 g/100 ml; jeho log Pw/Ocije 1,39.

Alaptid je možno velmi účinně rozpustit ve vodných roztocích obsahujících povrchově aktivní látky jako např. Tween 20, Tween 80, Makrogol 4000, Makrogol 6000, laurylsíran sodný, Poloxamer (Pluronic), polyethylenether bobřího oleje (Cremophor EL) nebo různé PEG-deriváty (PEG-stearáty, PEG-estery mastných kyselin, PEG-deriváty glyceridů mastných kyselin, PEG-D-a-tokoferol), případně látky komplexující, jako jsou cyklodextriny a jejich deriváty, dcxtrany a jejich deriváty, pektiny a jejich soli a deriváty, glukany a jejich deriváty, chitosan a jeho deriváty, methyl celulosy a jejich soli a deriváty.

Vytvoření takovýchto komplexů vede ke zvýšení rozpustnosti alaptidu ve vodě. Použití těchto komplexů se jeví jako velmi výhodné pro přípravu farmaceutické kompozice pro aplikaci. Komplexy se připraví mícháním vodných roztoků solubilizačních nebo komplexujících látek s alaptidem. Po ukončení míchání se komplex použije pro přípravu lékové formy nebo se rozpouštědlo odpaří a v získaném pevném podílu se spektrálními technikami ověří přítomnost komplexu mezi alaptidem a použitou solubilizační, resp. kompletující látkou. Tento produkt komplexace lze následně použít na přípravu lékové formy.

Nanočástice alaptidu se připraví mletím alaptidu s emulgátory a dalšími stabilizátory. Nanočástice alaptidu byly připravovány procesem dispergace technikou mokrého mletí ve vodném roztoku modifikátoru povrchu. Takto vzniklá suspenze se mele pomocí kuličkového mlýna v přítomnosti mlecího media, což umožňuje rozbití větších mikrometrových částic do nanočástic. Jako smáčedla mohou být použity např. deoxycholát sodný, laurylsíran sodný, Poloxamer, povidon, Makrogol 6000. Mlecí kuličky mohou být polystyrénové, keramické nebo skleněné.

Výše uvedenými postupy byl získán modifikovaný alaptid, který vykázal výrazně vyšší rozpustnost ve vodě a rovněž modifikovanou penetraci přes membrány. Po odpaření vody z roztoku komplexů jc možné získat pevný povrchově modifikovaný alaptid. který je možné použít do farmaceutických kompozic určených pro humánní a veterinární aplikace buď jako samostatná léčivá látka nebo v kombinaci s dalšími léčivy (antimikrobiálními, antifungálními, antivirotickými, protizánětlivými, analgetickými, antihcmorhagickými).

Podle základů polotuhých přípravků se obecně rozlišují oleomasti/hydromasti, oleokrémy/hydrokrémy a hydrogely. Alaptid jak povrchově neupravovaný tak povrchově ·· ·· ·· > ♦ · • · · ♦ · · · · · · • · · · · · * · · • · · · · *·««·« v « ···*·« · · ···♦ <· ·· · «·· ··· modifikovaný i ve formě nanočástic byl aplikován do základu masťového, krémového í gelového v množství od 0,1 do 5 % celkového složení přípravku.

Jako pomocné látky v hydrofobnich oleomastech mohou být použity:

• směs bílé nebo žluté vazelíny a hydratovaný vosk z ovčí vlny, • směs bílé nebo žluté vazelíny, tekutého parafínu a vosku, resp. hydratovaný vosk z ovčí vlny, • směs slunečnicového oleje a stabilizovaného vepřového sádla a hydratovaný vosk z ovčí vlny, • směs cetylalkoholu, bílého vosku, vepřového sádla a hydratovaný vosk z ovčí vlny, • směs dimetikonů (polydimethylsiloxany), hydratovaného vosku z ovčí vlny nebo cetylalkoholu nebo glycerolmonostearátu a isopropylmyristátu ve vazelíně (bílé nebo žluté), tekutém parafinu nebo rostlinných olejích.

Jako pomocné látky v hydromastech mohou být použity směsi nízko a vysokomolekulámích makrogolů, např. 300 a 1500 (1:1).

Jako pomocné látky v oleokrémech mohou být použity:

• směs bílé nebo žluté vazelíny, tekutého parafínu, pevného parafínu, vosku z ovčí vlny, včelího vosku, stabilizovaného vepřového sádla (např. komerčně dostupný základ Synderman).

• směs bílé nebo žluté vazelíny, tekutého parafínu, pevného parafínu, vosku z ovčí vlny, stearátu hlinitého (např. komerčně dostupný základ Pontin^H), • směs včelího vosku, tekutého parafínu, pevného parafínu, vosku z ovčí vlny, stearátu zinečnatého, stearátu hlinitého, vody čištěné, methylparabenu, propylparabenu, tetraboritanu sodného a Arlacelu 481 (sorbitan oleát, hydrogenovaný castor oil, včelí vosk, kyselina stearová), (např. komerčně dostupný základ Culilarť ).

Jako pomocné látky v hydro krémech mohou být použity:

• směs bílé nebo žluté vazelíny, tekutého parafínu, cetylstcaryl alkoholu (Aniontová mast emulguj ící, dle CL 2009) a vody čištěné, methylparabenu, propylparabenu (Aniontový krém, dle ČL 2009), • směs bílé nebo žluté vazelíny, tekutého parafínu a cetylstearyl alkoholu a Polysorbátu 60 (Neiontová mast emulgující, dle ČL 2009) a propylenglykolu a vody čištěné, methylparabenu, propylparabenu (Neiontový krém, dle ČL 2009), • směs monoglyccridů nebo diglyceridů mastných kyselin a etoxylovaných mastných alkoholů nebo etoxylovaných esterů mastných kyselin nebo etoxylovaných esterů mastných kyselin a sorbitanu a směs antimikrobiálních látek (např. komerčně dostupný základ Nco-Aquasorb ).

Jako pomocné látky v hydrogelech mohou být použity:

• směs methylcelulosy, glycerolu 85%, vody čištěné (Sliz z mcthylcclulosy, dle ČL 2009) a methylparabenu a propylparabenu, • směs sodné soli karboxymethylcelulosy, glycerolu nebo sorbitolu nebo propylenglykolu, vody čištěné a methylparabenu a propylparabenu, • směs tekutého parafínu, pevného parafínu, stearyl alkoholu, propylenglykolu, Slovasolu 2430, polyakrylátů (Carbomery), trolaminu, vody čištěné, methylparabenu a propylparabenu (např. komerčně dostupný základ Ambiderman*).

Příklad složení masti s 1 % alaplidu muže být následující: alaptid 1 g, cera lanae hydrosa 75 g, vaše línům flavum 20 g, paraffinum liq. do 100 g.

Příklad složení krému s 1 % alaptidu muže být následující: alaptid 1 g, Cremor NeoAquasorbi 95 g, propylenglykol do 100 g.

Příklad složení hydrogelu s 1 % alaptidu může být následující: alaptid 1 g, Ung. carboxymethylcellulosi (cerboxymethylcel. na triům 5 g, makrogol 300 lOg₎ propylenglykol 2,5g, methylparabel 0,2 g, propylparabel 0,2 g, aqua 87,3g) do 100 g.

Tento přístup je podrobně popsán v následujících příkladech.

Výše uvedený způsob přípravy komplexů je podrobně popsán v následujících příkladech. Všechny příklady obsahují detekovaný (spektrálními technikami charakterizovaný) komplex matice a alaptidu. Charakterizace vzniklých komplexů byla prováděna metodou infračervené spektroskopie v blízké oblasti NIR. Výsledky analýz (charakterizované komplexy) vybraných komplexů jsou uvedeny na připojených obrázcích.

Porovnáním se spektry jednotlivých výchozích látek byly pozorovány v NIR spektrech všech uváděných vzorků změny. Na základě přiložených rozdílových spekter komplexu a výchozího excipientů a jejich odlišnost se spektry výchozího alaptidu lze usuzovat na interakce mezi jednotlivými složkami, tedy že prezentované spektrum komplexu není pouhé součtové spektrum obou výchozích látek.

Nanočástice alaptidu byly připraveny pomocí nanomlýnu Netzsch. Velikost částic byla měřena mikroskopem NIKON Optiphot 2 s digitální kamerou VDS CCD-1300F, resp. pomocí přístroje Nanophox. In vitro experimenty penetrace alaptidu/modifíkovaného alaptidu byly prováděny pomocí PAMPA experimentů, resp. za použití Franzovy difúzní cely a jako modelová membrána byla použita prasečí kůže získaná z vnější části ucha (Sus serofa /’ domestica).

NIR spektroskopie: Uváděné záznamy byly získány pomocí nástavce Smart Ncar-IR UpDrift™ a FT-IR spektrometru Nicolet™ 6700, Thermo Scientifíc, U.SA.; akumulace 128 skenů s rozlišením 4 cm'¹.

Velikost částic mikronizovaného alaptidu byla měřena mikroskopem NIKON Optiphot 2 a digitální kamerou VDS CCD-1300F.

Nanočástice alaptidu byly připravovány v nanomlýnu NETZSCH (Německo) s použitím skleněných kuliček.

Velikost částic mikronizovaného i nanonizovaného alaptidu byla měřena pomocí přístroje NANOPHOX (0138 P) Sympatec, Německo.

PAMPA experimenty (Parallel Artificial Membrane Permeability Assay) byly prováděny na komerčně dostupných BD Gentest™ Pre-Coated PAMPA Plate Systém. Jedná se o lipofílní membránu, na jejímž povrchu jsou adsorbovány fosfolipidy, které simulují střevní stěnu.

Penetrační in vitro experimenty přes kůži byly prováděny pomocí Franzovy difúzní cely (donorová část o objemu 1 ml, povrch 63,585 mrrT; receptorová část 5,2 ml), SES-Analyscsystcme, Německo.

·· ·· «· · · ·*· · ·» «· · · *·* · » · · · · '* · · · · ··«·«· « · ···«*· · * ··· ·· ·· · ··· ···

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1: Záznam měření velikosti částic mikronizovaného alaptidu.

Obr. 2: Záznam měření velikosti částic nano-alaptidu přístrojem Nanophox.

Obr. 3: NIR spektra komplexu alaptid-tween 20 (uprostřed nahoře) ve srovnání se vstupními látkami alaptidem (zcela nahoře) a Tweenem 20 (uprostřed dole) a odečteným spektrem výchozího Tweenu 20 od výsledného komplexu (zcela dole).

Obr. 4: NIR spektra komplexu alaptid-tween 80 (uprostřed nahoře) ve srovnání se vstupními látkami alaptidem (zcela nahoře) a Tweenem 80 (uprostřed dole) a odečteným spektrem výchozího Tweenu 80 od výsledného komplexu (zcela dole).

Obr. 5: NIR spektra komplexu alaptid-makrogol 6000 (uprostřed nahoře) ve srovnání se vstupními látkami alaptidem (zcela nahoře) a makrogolem 6000 (uprostřed dole) a odečteným spektrem výchozího makrogolu 6000 od výsledného komplexu (zcela dole).

Obr. 6: NIR spektra komplexu alaptid-laurylsíran sodný (uprostřed nahoře) ve srovnání se vstupními látkami alaptidem (zcela nahoře) a laurylsíranem sodným (uprostřed dole) a odečteným spektrem výchozího laurylsíranu sodného od výsledného komplexu (zcela dole).

Obr. 7: NIR spektra komplexu alaptid-poloxamer (uprostřed nahoře) ve srovnání se vstupními látkami alaptidem (zcela nahoře) a poloxamerem (uprostřed dole) a odečteným spektrem výchozího poloxameru od výsledného komplexu (zcela dole).

Obr. 8: NIR spektra komplexu alaptid-karboxymethylcellulosa sodná sůl (uprostřed nahoře) ve srovnání se vstupními látkami alaptidem (zcela nahoře) a karboxymcthylccllulosou sodnou solí (uprostřed dole) a odečteným spektrem výchozího karboxymethylcellulosy sodné sole od výsledného komplexu (zcela dole).

Obr. 9: NIR spektra komplexu alaptid-karboxymethyldextran sodná sůl (uprostřed nahoře) ve srovnání se vstupními látkami alaptidem (zcela nahoře) a karboxymethyldextranem sodnou solí (uprostřed dole) a odečteným spektrem výchozího karboxymethyldextranu sodné sole od výsledného komplexu (zcela dole).

Obr. 10: NIR spektra komplexu alaptid-pektinan draselný (uprostřed nahoře) ve srovnání se vstupními látkami alaptidem (zcela nahoře) a pektinanem draselným (uprostřed dole) a odečteným spektrem výchozího pektinanu draselného od výsledného komplexu (zcela dole).

Obr. 11: NIR spektra komplexu alaptid-dibutylamid pektanu (uprostřed nahoře) ve srovnání se vstupními látkami alaptidem (zcela nahoře) a dibutylamid pektanem (uprostřed dole) a odečteným spektrem výchozího dibutylamid pektanu sodné sole od výsledného komplexu (zcela dole).

Obr. 12: In vitro testování prostupu alaptidu mikronizovaného přes kůži v závislosti na čase z různých médií.

Obr. 13: In vitro testování prostupu nano-alaptidu přes kůži v závislosti na čase z různých médií.

Obr. 14: In vitro testování prostupu komplexů alaptidu s excipienty přes kůži v závislosti na čase z různých médií.

Příklady provedení vynálezu:

Příklad 1

Alaptid mikronizovaný byl suspendován v 10 ml vody (2 mg/ml) a míchán 8 h při laboratorní teplotě. Po analýze odebraného vzorku (HPLC-DAD) nebyl alaptid ve vodném roztoku detekován. K suspenzím alaptidu (2 mg/ml) bylo přidáváno hmotnostní procento povrchově aktivních nebo komplcxujících látek a zjišťován jejich vliv na rozpouštění alaptidu. Mezi jednotlivými přídavky byly vždy směsi míchány 4 h za laboratorní teploty. Po vymizení částic alaptidu ze směsi, byl roztok analyzován a detekována koncentrace cca 2 mg/ml (veškerý alaptid byl rozpuštěn), viz tabulka 1.

Pak byla kapalina odpařena a vysušený produkt, dle charakterizace infračervenou spektrometrií v blízké oblasti (NIR), poskytl žádaný komplex.

Tabulka 1: Koncentrace jednotlivých excipientů způsobujících rozpuštění alaptidu ve vodě.

Excipient	Přidané množství excipientů dostačující ke vzniku roztoku o koncentraci alaptidu 2 mg/ml [% (w/w)l
Tween 80	1
Makrogol 300	1
Makrogol 4000	1
Laurylsíran sodný	1
Poloxamer	1
Makrogol 6000	2
Cremophor EL	2
Tween 20	3
Propylenglykol	3
Arlaton 970	3
β-GIukan	4
β-Cyklodextrin	4
Hydroxypropyl^-cyklodextrin	4
Karboxymethyl celulosa sodná sůl	4
Karboxymethyl dextran sodná sůl	4
Pektinan draselný, DE 64 %, D-galakturonan 87 %	4
Pcktinan draselný, DE 26 %, D-galakturonan 85 %	4
Benzylestcr pektanu, DE 7 %, D-galakturonan 85 %	4
Dibutylamid pektanu, DE 78 %, DA 14 %	4

Příklad 2

Suspenze alaptidu mikronizovaného (30 g), PVP (30 g) a čištěné vody (240 ml, v průběhu mleti bylo naředěno přídavkem dalších 150 ml) byla nejprve míchána 12 h za laboratorní teploty (0,51 baňka, KPG míchadlo) a pak byla přefiltrována přes sítko mlýna, aby byla zajištěna její průchodnost celým systémem. Vlastní mletí prováděno na nanomlýnu Nctsch s použitím skleněných kuliček (0,3 mm), otáčky rotoru nastaveny na 986 rpm, otáčky

·* · • *· • · ·* • · ······ • *· ·♦ » čerpadla 30 rpm, teplota v mlecí komoře udržována v rozmezí 17-20 °C. Po 6 h mletí byla rychlost rotoru zvýšena na 1500 rpm. Celková doba mletí byla 57,5 h. Obsah alaptidu v suspenzi byl 38,76 g/1 (HPLC), velikost částic x₉₀ = 917 nm (Nanophox).

Příklad 3

In vitro experiment - PAMPA (Pcirallel Artificial Mem brčme Permeability Assay) pokusy.

Parallel Artificial Membrane Permeability Assay (PAMPA) se stal široce uznávaným nástrojem pro primární sereening absorbce léčiv. Experiment byl prováděn na komerčně dostupných BD Gentest™ Pre-Coated PAMPA Plate Systém. Jedná se o lipofilní membránu, na jejímž povrchu jsou adsorbovány fosfolipidy, které simulují střevní stěnu.

Bylo naváženo takové množství substance, případně nanosuspenze, aby její obsah odpovídal 10 mg. Dále bylo přidáno 40 ml 0,0IM HC1, po 15 minutách byl přidán do 100 ml bikarbonátový pufr a pH bylo upraveno na hodnotu 6. Tato suspenze/nanosuspenze byla nanášena na PAMPA destičku, jako donorový roztok. Jako akceptorový roztok byl použitý fyziologický roztok o pH 7,4. Po 5 hodinách inkubace za laboratorní teploty byly vzorky odebrány a změřeny na HPLC-DAD. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 2.

Tabulka 2: Dosažená penetrace alaptidu a jeho modifikací pomocí PAMPA experimentu.

	Prostupnost [%]
Alaptid (x₉o < 40 pm)	3,0
nanoAlaptid (x₉₀ = 917 nm)	5,5
Alaptid + Laurylsíran (1.1,5)	40,7
Alaptid +Poloxamer (1:1,5)	4,1
Alaptid +Tween 20 (1J ,5)	4,0

Příklad 4

Bylo připraveno 100 g hydrofobní oleomasti s obsahem 0,1 % až 5 % (w/w) alaptidu mikronizovaného, resp. nanosuspenze alaptidu, resp. komplexu alaptidu s laurylsíranem sodným nebo Poloxamcrem nebo Tweenem 20, resp. dalšími excipienty z tabulky 1, kde množství alaptidu odpovídá výše uvedené procentuální koncentraci.

Příklad 5

Bylo připraveno 100 g hydromasti s obsahem 0,1 % až 5 % (w/w) alaptidu mikronizovaného, resp. nanosuspenze alaptidu, resp. komplexu alaptidu s laurylsíranem sodným nebo Poloxamerem nebo Tweenem 20, resp. dalšími excipienty z tabulky 1, kde množství alaptidu odpovídá výše uvedené procentuální koncentraci.

Příklad 6

Bylo připraveno 100 g oleokrému s obsahem OJ % až 5 % (w/w) alaptidu mikronizovaného, resp. nanosuspenze alaptidu, resp. komplexu alaptidu s laurylsíranem sodným nebo Poloxamerem nebo Tweenem 20, resp. dalšími excipienty z tabulky 1. kde množství alaptidu odpovídá výše uvedené procentuální koncentraci.

Příklad 7

Bylo připraveno 100 g hydrokrému s obsahem OJ % až 5 % (w/w) alaptidu mikronizovaného, resp. nanosuspenze alaptidu, resp. komplexu alaptidu s laurylsíranem sodným nebo • ·

Poloxamerem nebo Tweencm 20, resp. dalšími excipienty z tabulky 1, kde množství alaptidu odpovídá výše uvedené procentuální koncentraci.

Příklad 8

Bylo připraveno 100 g hydrogelu s obsahem 0.1 % až 5 % (w/w) alaptidu mikronizovaného, resp. nanosuspenze alaptidu, resp. komplexu alaptidu s laurylsíranem sodným nebo Poloxamerem nebo Tweenem 20, resp. dalšími excipienty z tabulky 1, kde množství alaptidu odpovídá výše uvedené procentuální koncentraci.

Příklad 9

In vitro permeační experiment prováděné za použití Franzovy difúzní cely.

Do donorové části o objemu 1 ml, povrchu 63,585 mm² byl aplikován studovaný vzorek ve formě roztoku, suspenze, emulze, gelu, krému či masti. Receptorová část o objemu 5,2 ml obsahující fosfátový pufr pH 7,4 byla temperována na teplotu 37 ± 0,5 °C za použití cirkulační vodní lázně a byla neustále míchána za použití magnetické míchačky (800 rpm). Jako modelová membrána byla použita prasečí kůže získaná z vnější části ucha, která byla uchovávána při teplotě -18 °C a před každým experimentem byla pozvolna rozmražena. Kůže a receptorová fáze byly ponechány v kontaktu 0,5 hodiny před použitím. Poté byly na kůži naneseny roztoky, popřípadě suspenze látek a donorová část byla překryta Parafílmem tak, aby se předešlo nežádoucímu vypařování rozpouštědla. V časových intervalech byly odebírány vzorky z reccptorové fáze. Stejné množství čistého pufru bylo přidáno tak, aby zůstal zachován stálý objem receptorové fáze.

Byl sledován přechod samotného alaptidu mikronizovaného (1 ml suspenze o koncentraci 1 %) a nano-alaptidu (v množství odpovídající 1% koncentraci alaptidu mikronizovaného) a dále obou forem alaptidu zapracovaného do masti, krému a gelu. Dále byl sledován přechod alaptidu ve vybraných komplexech uvedených v tabulce 1. Koncentrace prošlého alaptidu byla zjišťována pomocí HPLC-DAD metody. Výsledky prostupu alaptidu jsou shrnuty v níže uvedených tabulkách 3 a 4 a 5.

Tabulka 3: Dosažená penetrace mikronizovaného alaptidu samotného a v různých masfových základech pomocí experimentů prováděných za použití Franzovy difúzní cely.

Čas [min]	Prostupnost [%[
mikro-alaptid	+ olcomast	+ hydromast	+ oleokrém	+ hydrokrém	+ hydrogel
30	0,00004	0,00020	0,00029	0,00042	0,00057	0,00141
60	0,00012			0,00089	0,00119	0,00228
120	0,00039			0,00217	0,00297	0,00325
240	0,00098			0,00583	0,00663	0,00694
360	0,00252			0,00968	0,01073	0,00819
1440	0,00761	0,00051	0,00070	0,03863	0,04066	0,05279

• ·

Tabulka 4: Dosažená penetrace nano-alaptidu samotného a v různých masťových základech pomocí experimentů prováděných za použití Franzovy difúzní cely.

Čas [min]	Prostupnost [%]
nano-alaptid	+ oleomast	+ hydromast	+ oleokrém	+ hydrokrém	+ hydrogel
30	0,00001	0,00037	0,00020	0,00157	0,00168	0,00067
60	0,00004			0,00261	0,00281	0,00096
120	0,00026			0,00321	0,00352	0,00196
240	0,00054			0,00411	0,00431	0,00482
360	0,00146			0,00769	0,00792	0,00787
1440	0,00278	0,00040	0,00051	0,03267	0,03278	0,03748

Tabulka 5: Dosažená penetrace alaptidu z komplexů s excipienty pomocí experimentů prováděných za použití Franzovy difúzní cely.

alaptid	v Cas [min]
30	60	120	240	360	1440
+ Lauryl síran.Na	0,0026	0,0202	0,0438	0,0608	0,0641	0,2540
+ Tween20	0,0155	0,0144	0,0169	0,0178	0,1463	0,2015	ns
+ TweenSO	0,0207	0,0585	0,0949	0,1092	0,3127	0,4451	“1 o
+ MakrogolóOOO	0,0030	0,0089	0,0254	0,0505	0,0934	0,3237	c
+ Poloxamer	0,0023	0,0052	0,0193	0,0272	0,1061	0,1318	s
+ KM celulosa.Na	0,0148	0,0176	0,0198	0,0252	0,1330	0,2741	o
+ KM dextran.Na	0,0040	0,0091	0,0104	0,0161	0,1218	0,2339
+ Pcktinan.K	0,0107	0,0167	0,0196	0,0293	0,1077	0,1710
+ Cremophor EL	0,0028	0,0030	0,0092	0,0255	0,1017	0,1265

• ·

Claims

1. Farmaceutická kompozice s modifikovaným vstřebáváním přes pokožku pro humánní a veterinární aplikace vyznačující se tím, že alaptid se použije formě komplexu a/nebo směsi s excipicnty s amfifilními vlastnostmi.

2. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že excipient s amfifilními vlastnosti je Tween 20 nebo Tween 80.

3. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že excipient s amfifilními vlastnosti je Makrogol 300 nebo Makrogol 4000 nebo Makrogol 6000.

4. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že excipient s amfifilními vlastnosti je laurylsíran sodným.

5. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že excipient s amfifilními vlastnosti je Poloxamer.

6. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že excipient s amfifilními vlastnosti je Crcmophor EL.

7. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že excipient s amfifilními vlastnosti je propylenglykol.

8. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že excipient s amfifilními vlastnosti je Arlaton 970.

9. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že excipient s amfifilními vlastnosti je β-glukan nebo jeho polysyntetickými modifikace.

10. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že excipient s amfifilními vlastnosti je s α-, β- nebo γ-cyklodextrin nebo hydroxypropyl^-cyklodextrin nebo jejich polysyntetická modifikace.

11. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že excipient s amfifilními vlastnosti je methylcelulosa a její deriváty nebo karboxymethylcelulosa a její deriváty, resp. její sodné sole.

12. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že excipient s amfifilními vlastnosti nesodná sůl karboxymethyldextranu.

13. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že excipient s amfifilními vlastnosti je pektin nebo s jejich sole nebo s jejich polosyntetické deriváty.

14. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že komposice je ve formě hydro fóbní oleomasti, hydro mast i, oleokrému, hydro krému nebo hydrogelu.

15. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 nebo 14 vyznačující se tím, žc obsahuje alaptid o koncentraci 0,1 až 5 % (w/w).

16. Farmaceutická kompozice podle nároku 1, 14 a 15 vyznačující se tím,žc obsahuje nanoalaptid nebo mikronizovaný alaptid .

17. Farmaceutická kompozice podle nároku 1, 14 a 15 vyznačující se tím, že obsahuje kombinaci s antimikrobiálními a/nebo antifungálními a/nebo antivirotickými a/nebo protizánětlivými (nesteroidními i steroidními) a/nebo analgetickými a/nebo antihemorhagickými o koncentraci 0,001 až 30 % (w/w).