CZ2006789A3 - Zpusob detekce exprese prasecí telomerázy - Google Patents
Zpusob detekce exprese prasecí telomerázy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2006789A3 CZ2006789A3 CZ20060789A CZ2006789A CZ2006789A3 CZ 2006789 A3 CZ2006789 A3 CZ 2006789A3 CZ 20060789 A CZ20060789 A CZ 20060789A CZ 2006789 A CZ2006789 A CZ 2006789A CZ 2006789 A3 CZ2006789 A3 CZ 2006789A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- telomerase
- porcine
- probe
- swine
- detection method
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Rešení se týká zpusobu detekce exprese prasecí telomerázy. Merení koncentrace mRNA pro prasecí telomerázovou reverzní transkriptázu se provádí novýmiprimery a sondou Forward Primer TGCCTCCACGCCTTCCT Reverse Primer AGCGGCCCCAGAAGACA TagMan MGB sonda CTCAAGCTGGTTCGTCA.
Description
Způsob detekce exprese prasečí telomerázy
Oblast techniky
Vynález se týká detekce exprese prasečí telomerázy - telomerázové reverzní transkriptázy pomocí metody real-time PCR s použitím hybridizační sondy.
e t
€ o
Dosavadní stav techniky • · • © β o · ·
Telomery jsou specializované nukleoproteinové struktury na koncích ··.
• o · eukarjpntních chromozomů, které chrání chromozóm před poškozením a v případě nefunkčnosti iniciují apoptotický proces. Telomerická DNA je vysoce *;α f
I · konzervativní s vysokým počtem repetitivních sekvencí bohatých na guanin.
Délka telomer je regulována jedním nebo více mechanizmy projevujícími se dvěma výsledky: zkracováním, které je způsobeno problémem s koncovou replikací a exonukleázovou aktivitou a prodlužováním, nejčastěji zajišťovaným telomerázou. Telomeráza je ribonukleoprotein (komplex bílkoviny a RNA), který přidává telomerové repetitivní motivy na konce telomer. Aktivita telomerázy byla detekována v embryonálních, kmenových a rakovinových buňkách, ale obvykle není detekována v somatických buňkách. Detekce aktivity telomerázy je obvykle založena na TRAPezové analýze, kdy telomerázové produkty jsou množeny pomocí PCR a foreticky separovány.
Druhá možnost je stanovení mediátorové RNA pro komponenty telomerázy například telomerázové reverzní transkriptázy. Tato RNA se obvykle stanovuje pomocí reverzní reál time PCR. Tyto metody již byly vypracovány pro člověka a laboratorní hlodavce, ale nikoli pro prase. Prase se však stává častým modelovým organizmem pro rozdílné studie související nejčastěji s využitím kmenových buněk či xenotransplantací, proto by bylo třeba uvedené způsoby stanovování vypracovat i pro prasata.
• · · < l
-2 —
Podstata vynálezu
Zmiňované nedostatky odstraňuje způsob detekce exprese prasečí telomerázy podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že měření koncentrace mRNA pro prasečí telomerázovou reverzní transkriptázu se provádí novými primery a sondou
Forward Primer Reverse Primer TagMan MGB sonda
TGCCTCCACGCCTTCCT
AGCGGCCCCAGAAGACA
CTCAAGCTGGTTCGTCA.
Způsob podle vynálezu se provádí pomocí reverzní reál time PCR a původci navrženými novými primery a TagMan MGB sondou, které původci navrhli podle publikované sekvence TERT. Nový způsob stanovení nulové alely je jednoznačný, rychlý a oproti dosud používaným způsobům má vyšší citlivost stanovení. Původci navržené primery umožňují rychlé, specifické a přesné stanovení mediátorové RNA pro telomerázovou reverzní transkriptázu -TERT u prasat, což je velmi důležité.
Polymerázová řetězová reakce je připravována v prostředí kompletní cDNA (RNA reverzně přepsané na DNA), polymerázy Taq DNA s exonukleázovou aktivitou, primerů a sondy, chloridu hořečnatého a pufru. Amplifikace probíhá v přístroji pro reál time PCR - 7500 Fast reál time systém (Applied Biosystems), kdy dochází ke střídání denaturace (95 ’C) a anelace+ elongace (60 °C) za současného měření fluorescenčního signálu značené sondy. Koncentrace RNA se odečte po vynesení bodu, kdy protne fluorescenční signál stanovenou hranici (viz Obr. 1) na sestavenou kalibrační křivku (viz Obr. 2).
-3 —
Na přiložených výkresech je na Obr. 1 zobrazen graf, který slouží pro odečítání koncentrace RNA podle fluorescenčního signálu a na Obr. 2 je znázorněna kalibrační křivka.
Následující příklady provedení způsob podle vynálezu pouze dokládají, aniž by ho jakkoliv omezovaly.
Příklady provedení
Příklad 1
Reverzní reál time PCR pro detekci exprese prasečí TERT byla připravována původci vynálezu za následujících podmínek:
μΙ reakční směsi obsahovalo 1 až 100 ng cDNA 1x koncentrovaný TagMan PCR fast universal PCR Master Mix (Applied Biosystems) primery o koncentraci 900 nM a proby (sondy) o koncentraci 250 nM, voda byla přidána na doplnění objemu do 10 μΙ. Detekce probíhala v přístroji na reál time PCR 7500 fast reál time PCR systém (Applied Biosystems) za následujícího programu: úvodní denaturace 95 ’C po 20 sekund, následovalo 40 cyklů 95 ’C po 3 sekundy a 60 °C po 30 sekund. V průběhu programu byla měřena intenzita fluorescenčního signálu, z které se vyhodnocuje koncentrace RNA.
Průmyslová využitelnost
Řešení se týká rychlého, citlivého a přesného stanovení koncentrace mRNA pro prasečí telomerázovou reverzní transkriptázu. Toto má velký význam v dalším výzkumu zejména regulace buněčného dělení a kmenových buněk u prasete jako modelového organizmu.
Claims (1)
1. Způsob detekce exprese prasečí telomerázy, vyznačující se tím, že měření koncentrace mRNA pro prasečí telomerázovou reverzní transkriptázu se provádí novými primery a sondou
Forward Primer Reverse Primer TagMan MGB sonda
TGCCTCCACGCCTTCCT
AGCGGCCCCAGAAGACA
CTCAAGCTGGTTCGTCA.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20060789A CZ299220B6 (cs) | 2006-12-11 | 2006-12-11 | Zpusob detekce exprese prasecí telomerázy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20060789A CZ299220B6 (cs) | 2006-12-11 | 2006-12-11 | Zpusob detekce exprese prasecí telomerázy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2006789A3 true CZ2006789A3 (cs) | 2008-05-21 |
| CZ299220B6 CZ299220B6 (cs) | 2008-05-21 |
Family
ID=39399195
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20060789A CZ299220B6 (cs) | 2006-12-11 | 2006-12-11 | Zpusob detekce exprese prasecí telomerázy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ299220B6 (cs) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7294708B2 (en) * | 2002-05-31 | 2007-11-13 | Beijing Institute Of Biotechnology | Telomerase reverse transcriptase fragments and uses thereof |
| CA2513747C (en) * | 2003-01-24 | 2017-03-07 | University Of Utah | Methods of predicting mortality risk by determining telomere length |
-
2006
- 2006-12-11 CZ CZ20060789A patent/CZ299220B6/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ299220B6 (cs) | 2008-05-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kadri | Polymerase chain reaction (PCR): Principle and applications | |
| US9624542B2 (en) | Telomere length measurement in formalin-fixed, paraffin embedded (FFPE) samples by quantitative PCR | |
| Straub et al. | Estimated copy number of Bacillus anthracis plasmids pXO1 and pXO2 using digital PCR | |
| Jackson et al. | qPCR-based mitochondrial DNA quantification: influence of template DNA fragmentation on accuracy | |
| JP2022189882A (ja) | ｍｉｎｏｒ ＢＣＲ－ＡＢＬ１遺伝子を検出する方法 | |
| CN102559898A (zh) | 检测人α防御素1/3基因拷贝数的试剂盒及方法 | |
| JP2008136404A (ja) | Ｄｎａメチル化検出における非メチル化シトシン変換処理後のｄｎａ量の確認方法 | |
| Li et al. | Pyrosequencing of a short fragment of the amelogenin gene for gender identification | |
| CZ2006789A3 (cs) | Zpusob detekce exprese prasecí telomerázy | |
| Cochrane et al. | Polymerase chain reaction as a tool for developing stress protein probes | |
| Soejima et al. | Selective quantification of human DNA by real-time PCR of FOXP2 | |
| Hou et al. | Biomass estimation of the terrestrial ecotoxicological species Folsomia candida (Collembola) using a real-time polymerase chain reaction | |
| Eini et al. | Chimeric external control to quantify cell free DNA in plasma samples by real time PCR | |
| Neduvat et al. | Use of coagulation factor XIII (F13) gene as an internal control for normalization of genomic DNA’s for HLA typing | |
| Bhattacharya | Application of genomics tools in meat quality evaluation | |
| CN104611462A (zh) | 一种基于g-四链体荧光特性的猪瘟病毒检测方法及试剂盒 | |
| Abellaneda et al. | Validation of a quantitative polymerase chain reaction method for human alu gene detection in microchimeric pigs used as donors for xenotransplantation | |
| Jabbar et al. | Detection of Copy Number of Mitochondrial DNA in Iraq Population. | |
| Wang et al. | One-step and highly sensitive quantification of fusion genes with isothermal amplification initiated by a fusion-site anchored stem-loop primer | |
| Criado-Fornelio et al. | Identification of feline polycystic kidney disease mutation using fret probes and melting curve analysis | |
| CZ23221U1 (cs) | Hybridizační sonda a primery pro detekci exprese prasečí 3- merkaptopyruvát-sulfurtransferázy | |
| CZ23223U1 (cs) | HybridizaČní sonda a primery pro detekci exprese prasečí cystathioningama-lyázy | |
| CZ303778B6 (cs) | Kombinace pro detekci exprese prasecí 3-merkaptopyruvát-sulfurtransferázy | |
| JP2005176767A (ja) | ホットスタートリアルタイムｐｃｒ方法 | |
| ES2352782B1 (es) | Método y kit para la detección molecular de tropheryma whipplei. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20141211 |